JPH0429360B2 - - Google Patents
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- JPH0429360B2 JPH0429360B2 JP58194937A JP19493783A JPH0429360B2 JP H0429360 B2 JPH0429360 B2 JP H0429360B2 JP 58194937 A JP58194937 A JP 58194937A JP 19493783 A JP19493783 A JP 19493783A JP H0429360 B2 JPH0429360 B2 JP H0429360B2
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
- C12Q2326/10—Benzidines
- C12Q2326/14—Ortho-Tolidine, i.e. 3,3'-dimethyl-(1,1'-biphenyl-4,4'-diamine)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
- C12Q2326/90—Developer
- C12Q2326/96—4-Amino-antipyrine
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
発明の背景
技術分野
本発明は、ヒドロペルオキシドまたは前反応に
よつて生ずる過酸化水素もしくは他のヒドロペル
オキシドを、ペルオキシダーゼまたはペルオキシ
ダーゼ様反応を用いて測定する試験剤、またはペ
ルオキシダーゼもしくはペルオキシダーゼ作用物
質を検出するための還元性物質による影響を受け
ない試験剤、特に尿および血液中のブドウ糖の検
出用ならびに尿、糞便および液中の血液の検出用
の改良された試験剤に関するものである。 先行技術 最近、迅速診断剤は、医学的プラクテイスおよ
び臨床試験において著しく重要になつており、吸
収性担体をベースとする迅速診断剤は重要であ
る。多くの場合、紙であるこの吸収性担体に検出
反応に必要な薬剤を含浸させ、これを体液中に浸
漬すると、検出すべき物質が存在する場合には呈
色反応を呈する。医学的診断で非常に重要になつ
た迅速診断剤としては、例えば尿および血液中の
ブドウ糖検出用ならびに尿、糞便およびだ液中の
血液検出用迅速診断剤がある。 この試験は、つぎの原理に基いている。すなわ
ち、体液中のブドウ糖を検出する際には、例えば
グルコースはグルコースオキシダーゼ（GOD）
によつてグルコン酸に酸化され、その際に空中酸
素は過酸化水素に還元される。この過酸化水素
は、ペルオキシダーゼまたはペルオキシダーゼ作
用性物質によつて酸化指示薬を相応する色素に酸
化し、その色の濃度が存在するグルコース量の尺
度である。また、血液を検出する際には、ヘモグ
ロビンのペルオキシダーゼ様活性によりあらかじ
め試験紙などに含まれているペルオキシドから酸
素が発生し酸化指示薬を酸化する。 一般に、前記のごとき迅速診断剤の酸化指示薬
は公知であり、かつ特定の化合物群類に属し、特
に有用なのは、ベンジジン系、ヘテロ環式アジン
およびフエノール類、特にグアヤク樹脂の成分で
ある（特開昭53−126996号）。 しかるに、最近の加工食品、清涼飲料等にはビ
タミンＣとして多量のアスコルビン酸が含まれて
おり、また健康管理の点からもビタミン剤等が多
量服用されているので、血液中に多量含まれてい
るだけでなく、余分なビタミン剤は尿中に含有さ
れて体外に排泄されることになる。このため、前
記のごとき診断剤を用いて尿や血液の試験をを行
なう場合、アスコルビン酸は還元性が強いため、
ペルオキシダーゼあるいはペルオキシダーゼ作用
物質により生成した酸素がアスコルビン酸との酸
化還元反応に消費され酸化指示薬の反応が阻害さ
れ、充分な発色が得られないいう問題点が生じて
きた。 発明の目的 したがつて、本発明の目的は、ヒドロペルオキ
シドまたは前反応によつて過酸化水素もしくは他
のヒドロペルオキシドを、ペルオキシダーゼまた
はペルオキシダーゼ様反応を用いて測定する試験
剤、またはペルオキシダーゼもしくはペルオキシ
ダーゼ作用物質を検出するための還元性物質によ
る影響を受けない新規な試験剤を提供することに
ある。本発明の他の目的は、尿および血液中のブ
ドウ糖の検出や尿、糞便およびだ液中の血液の検
出に好適な安定性の優れた試験剤を提供すること
にある。 これらの諸目的はヒドロペルオキシドまたは前
反応によつて生ずる過酸化水素もしくは他のヒド
ロペルオキシドを、ペルオキシダーゼまたはペル
オキシダーゼ様反応を用いて測定する試験剤、ま
たはペルオキシダーゼもしくはオキシダーゼ作用
物質を測定する試験剤において、上記ヒドロペル
オキシド、ペルオキシダーゼおよびペルオキシダ
ーゼ作用物質よりなる群から選ばれた物質の反応
下において酸化されて発色する発色剤と、有効量
の過ヨウ素酸または過ヨウ素酸塩を有することを
特徴とする試験剤により達成される。 また、本発明は、過ヨウ素酸または過ヨウ素酸
塩の有効量が0.3〜1000ミリモル／である試験
剤である。 発明の具体的構成 本発明による試験剤はヒドロペルオキシドまた
は前反応によつて生じる過酸化水素もしくは他の
ヒドロペルオキシドを、ペルオキシダーゼまたは
ペルオキシダーゼ様反応を用いて測定するもの
で、またはペルオキシダーゼもしくはペルオキシ
ダーゼ作用物質を測定するものである。その際に
は、前記還元性物質に影響を与えないために配合
される酸化剤としては、過ヨウ素酸または過ヨウ
素酸塩が使用される。 過ヨウ素酸または過ヨウ素酸塩としては、
HIO4、NaLO4、KIO4等がある。 前記過ヨウ素酸または過ヨウ素酸塩は、試験剤
の保存期間中には酸化指示薬を酸化しないが、試
験に使用するに際しては、被検液体中に存在する
アスコルビン酸等の還元性物質による酸化指示薬
の反応阻害を防止するに有効なだけの量が使用さ
れる。具体的には前記試験剤中に含有されている
酸化指示薬および被検液体中に存在する還元性物
質の量に影響されるが通常0.3〜1000ミリモル／
、好ましくは0.5〜40ミリモル／である。 酸化されて発色する発色剤には、ペルオキシダ
ーゼまたはペルオキシダーゼ様反応によつて生成
した酸素の測定系として酸化縮合物を生成する反
応（フエノール系と４―アミノアンチピリン等）、
メタノールがホルムアルデヒドに酸化され、アセ
チルアセトンと縮合物を生成する反応、ヨウ化カ
リウム等のヨウ化物が酸化されてヨウ素を生成す
る反応等に関与するものである。 発色剤としては、ベンジジン系化合物、ヘテロ
環式アジン類、フエノール類、グアヤク樹脂成分
等公知のものがある。一例を挙げると、例えばｏ
―トリジン、ｍ―トリジン、ベンジジン、３，
3′，５，5′―テトラメチルベンジジンン、ｏ―メ
チルベンジジン、２，７―ジアミノフルオレンま
たはこれらを種々の割合で含む混合物、４，4′―
ジアミノジフエニル、ｏ―フエニレンジアミン、
ｍ―フエニレンジアミン、ｐ−フエニレンジアミ
ン、２，３−トリレンジアミン、２，４―トリレ
ンジアミン、２，５―トリレンジアミン、２，６
―トリレンジアミン等の種々の置換フエニレンジ
アミン類、焦性没食子酸、没食子酸、フロログル
シノール、ヒドロキノン、ロイコインドフエノー
ル等のフエノール類、グアイヤコール、ピリジン
誘導体、置換アジン類、ロイコマライカイグリー
ン等がある。これらの発色剤は、通常２〜250ミ
リモル／、好ましくは９〜50ミリモル／の濃
度で使用される。 本発明で使用されるヒドロペルオキシドとして
は、２，５―ジメチルヘキサン―22，５―ジヒド
ロペルオキシド、クメンヒドロペルオキシド、
２，５―ジメチルヘキサノン―２，５―ジヒドロ
ペルオキシド、ジイソプロピルベンゼンヒドロペ
ルオキシド、ｔ―ブチルヒドロペルオキシド、ｐ
―メンタンヒドロペルオキシド、４―メチルフエ
ニルイソプロピルヒドロペルオキシド等があり、
特に２，５―ジメチルシクロヘキサノン―２，５
―ジヒドロペルオキシドおよびクメンヒドロペル
オキシドが比較的分解率の低い好ましいヒドロペ
ルオキシドである。 本発明による試験剤は、溶液としてあるいは紙
等の基材に含浸させた試験片として使用される。
これらの試験剤には、必要により緩衝剤や潤滑剤
が配合される。例えば試験片を体液中に浸漬した
際のPH値を４〜８、好ましくは５〜７に保つため
の緩衝剤としては、例えばクウン酸―クエン酸ナ
トリウム、酒石酸−酒石酸ナトリウム、リンゴ酸
―ホウ砂、フタル酸水素カリウム―フタル酸ジカ
リウム、コハク酸水素ナトリウム―コハク酸ジナ
トリウム等がある。 また、試験片を体液中に浸漬したとき、該体液
が均一に湿潤するように使用される湿潤剤として
は、ラウリル硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナト
リウム、テトラドデシル硫酸ナトリウム等のアル
キル硫酸塩、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリ
ウム等のアルキルベンゼンスルホン酸塩、ジオク
チルスルホコハク酸ナトリウム、ジヘプチルスル
ホコハク酸ナトリウム等のジアルキルスルホコハ
ク酸塩等の界面活性剤等がある。 また、前記試験剤においては、ヘモグロビンに
おけるペルオキシダーゼ活性等を増強させる薬剤
を配合してもよい。代表的な増強剤としては、キ
ノリンおよびその誘導体、例えばキニーネ、シン
コニン、６―メトキシキノリン、キナルジン、８
―アミノ―６―メトキシキノリン、２―ギノリノ
ール、イソキノリン、ベンゾ〔ｆ〕キノリン、３
―アミノキノリン等がある。これらの増強剤が存
在すると、通常酸化反応速度が促進され、かつ酸
化された色原体の呈色強度が促進され、そして試
験片の感度は高められる。 また、基材に含浸させた試験片として使用する
場合には、該試験片からの薬剤の流出を防止する
ために、粘稠剤を使用してもよい。代表的な粘稠
剤としては、ポリビニルアルコール、ポリビニル
ピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリアク
リル酸塩、ポリアクリルアミド、ポリ（ヒドロキ
シエチルメタクリレート）、ポリ（ヒドロキシエ
チルアクリレート）、カルボキシメチルセルロー
ス等の重合体、ゼラチン、アラビアゴム等があ
る。 前記薬剤は、溶媒、例えばベンゼン、トルエ
ン、キシレン、メタノール、エタノール、イソプ
ロパノール、アセトン、メチルエチルケトン、ク
ロロホルム、四塩化炭素、水等に溶解させて溶液
の形として使用するか、あるいは該溶液を基材に
含浸させて乾燥して得られる試験片の形で使用さ
れる。このような試験片は常法により製造され
る。 基材としては、濾紙、ガラス繊維、プラスチツ
ク素材からなる不織布等があり、含浸液と反応し
たりあるいは含浸液に溶解したりせず、かつ吸収
性を有しているものであればよい。 本発明による試験剤は、下記のように種々の診
断に使用される。 ヒドロペルオキシド又は前反応によつて生ずる
過酸化水素もしくは他のヒドロペルオキシドを、
ペルオキシダーゼ又はペルオキシダーゼ様反応を
用いて測定する試験剤、またはペルオキシダーゼ
もしくはペルオキシダーゼ作用物質を測定する試
験剤の例として、(a)ブドウ糖(b)尿素(c)コレステロ
ール(d)トリグリセリド（中性脂肪）(e)遊離脂肪酸
(f)ヘモグロビン(g)ミオグロビン等がある。 つぎに、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に
説明する。 実施例１〜３および比較例１ ブドウ糖試験紙 Ａ液 クエン酸緩衝液 100ml グルコースオキシダーゼ 300mg ペルオキシダーゼ 50mg 酸化剤（NaIO4） 100mg Ｂ液 オルトトリジン 2.5ｇ ／アセトン100ml 濾紙（東洋濾紙社製）にＡ液を含浸させたの
ち、乾燥し、ついでＢ液を含浸させたのち、乾燥
してブドウ糖試験紙を得た。実施例１として酸化
剤にはNaIO4（100mg）用い、実施例２として
HIO4（100mg）、実施例３としてCuSO4（500mg）を
用いた。比較例１としては酸化剤を用いなかつ
た。 このようにして得られた試験紙をブドウ糖を含
有しない尿および150mg／dlのブドウ糖を含有す
る尿にいずれもアスコルビン酸を50mg／dl含有さ
せた試料中に浸漬して試験したところ、第１表の
結果が得られた。
よつて生ずる過酸化水素もしくは他のヒドロペル
オキシドを、ペルオキシダーゼまたはペルオキシ
ダーゼ様反応を用いて測定する試験剤、またはペ
ルオキシダーゼもしくはペルオキシダーゼ作用物
質を検出するための還元性物質による影響を受け
ない試験剤、特に尿および血液中のブドウ糖の検
出用ならびに尿、糞便および液中の血液の検出用
の改良された試験剤に関するものである。 先行技術 最近、迅速診断剤は、医学的プラクテイスおよ
び臨床試験において著しく重要になつており、吸
収性担体をベースとする迅速診断剤は重要であ
る。多くの場合、紙であるこの吸収性担体に検出
反応に必要な薬剤を含浸させ、これを体液中に浸
漬すると、検出すべき物質が存在する場合には呈
色反応を呈する。医学的診断で非常に重要になつ
た迅速診断剤としては、例えば尿および血液中の
ブドウ糖検出用ならびに尿、糞便およびだ液中の
血液検出用迅速診断剤がある。 この試験は、つぎの原理に基いている。すなわ
ち、体液中のブドウ糖を検出する際には、例えば
グルコースはグルコースオキシダーゼ（GOD）
によつてグルコン酸に酸化され、その際に空中酸
素は過酸化水素に還元される。この過酸化水素
は、ペルオキシダーゼまたはペルオキシダーゼ作
用性物質によつて酸化指示薬を相応する色素に酸
化し、その色の濃度が存在するグルコース量の尺
度である。また、血液を検出する際には、ヘモグ
ロビンのペルオキシダーゼ様活性によりあらかじ
め試験紙などに含まれているペルオキシドから酸
素が発生し酸化指示薬を酸化する。 一般に、前記のごとき迅速診断剤の酸化指示薬
は公知であり、かつ特定の化合物群類に属し、特
に有用なのは、ベンジジン系、ヘテロ環式アジン
およびフエノール類、特にグアヤク樹脂の成分で
ある（特開昭53−126996号）。 しかるに、最近の加工食品、清涼飲料等にはビ
タミンＣとして多量のアスコルビン酸が含まれて
おり、また健康管理の点からもビタミン剤等が多
量服用されているので、血液中に多量含まれてい
るだけでなく、余分なビタミン剤は尿中に含有さ
れて体外に排泄されることになる。このため、前
記のごとき診断剤を用いて尿や血液の試験をを行
なう場合、アスコルビン酸は還元性が強いため、
ペルオキシダーゼあるいはペルオキシダーゼ作用
物質により生成した酸素がアスコルビン酸との酸
化還元反応に消費され酸化指示薬の反応が阻害さ
れ、充分な発色が得られないいう問題点が生じて
きた。 発明の目的 したがつて、本発明の目的は、ヒドロペルオキ
シドまたは前反応によつて過酸化水素もしくは他
のヒドロペルオキシドを、ペルオキシダーゼまた
はペルオキシダーゼ様反応を用いて測定する試験
剤、またはペルオキシダーゼもしくはペルオキシ
ダーゼ作用物質を検出するための還元性物質によ
る影響を受けない新規な試験剤を提供することに
ある。本発明の他の目的は、尿および血液中のブ
ドウ糖の検出や尿、糞便およびだ液中の血液の検
出に好適な安定性の優れた試験剤を提供すること
にある。 これらの諸目的はヒドロペルオキシドまたは前
反応によつて生ずる過酸化水素もしくは他のヒド
ロペルオキシドを、ペルオキシダーゼまたはペル
オキシダーゼ様反応を用いて測定する試験剤、ま
たはペルオキシダーゼもしくはオキシダーゼ作用
物質を測定する試験剤において、上記ヒドロペル
オキシド、ペルオキシダーゼおよびペルオキシダ
ーゼ作用物質よりなる群から選ばれた物質の反応
下において酸化されて発色する発色剤と、有効量
の過ヨウ素酸または過ヨウ素酸塩を有することを
特徴とする試験剤により達成される。 また、本発明は、過ヨウ素酸または過ヨウ素酸
塩の有効量が0.3〜1000ミリモル／である試験
剤である。 発明の具体的構成 本発明による試験剤はヒドロペルオキシドまた
は前反応によつて生じる過酸化水素もしくは他の
ヒドロペルオキシドを、ペルオキシダーゼまたは
ペルオキシダーゼ様反応を用いて測定するもの
で、またはペルオキシダーゼもしくはペルオキシ
ダーゼ作用物質を測定するものである。その際に
は、前記還元性物質に影響を与えないために配合
される酸化剤としては、過ヨウ素酸または過ヨウ
素酸塩が使用される。 過ヨウ素酸または過ヨウ素酸塩としては、
HIO4、NaLO4、KIO4等がある。 前記過ヨウ素酸または過ヨウ素酸塩は、試験剤
の保存期間中には酸化指示薬を酸化しないが、試
験に使用するに際しては、被検液体中に存在する
アスコルビン酸等の還元性物質による酸化指示薬
の反応阻害を防止するに有効なだけの量が使用さ
れる。具体的には前記試験剤中に含有されている
酸化指示薬および被検液体中に存在する還元性物
質の量に影響されるが通常0.3〜1000ミリモル／
、好ましくは0.5〜40ミリモル／である。 酸化されて発色する発色剤には、ペルオキシダ
ーゼまたはペルオキシダーゼ様反応によつて生成
した酸素の測定系として酸化縮合物を生成する反
応（フエノール系と４―アミノアンチピリン等）、
メタノールがホルムアルデヒドに酸化され、アセ
チルアセトンと縮合物を生成する反応、ヨウ化カ
リウム等のヨウ化物が酸化されてヨウ素を生成す
る反応等に関与するものである。 発色剤としては、ベンジジン系化合物、ヘテロ
環式アジン類、フエノール類、グアヤク樹脂成分
等公知のものがある。一例を挙げると、例えばｏ
―トリジン、ｍ―トリジン、ベンジジン、３，
3′，５，5′―テトラメチルベンジジンン、ｏ―メ
チルベンジジン、２，７―ジアミノフルオレンま
たはこれらを種々の割合で含む混合物、４，4′―
ジアミノジフエニル、ｏ―フエニレンジアミン、
ｍ―フエニレンジアミン、ｐ−フエニレンジアミ
ン、２，３−トリレンジアミン、２，４―トリレ
ンジアミン、２，５―トリレンジアミン、２，６
―トリレンジアミン等の種々の置換フエニレンジ
アミン類、焦性没食子酸、没食子酸、フロログル
シノール、ヒドロキノン、ロイコインドフエノー
ル等のフエノール類、グアイヤコール、ピリジン
誘導体、置換アジン類、ロイコマライカイグリー
ン等がある。これらの発色剤は、通常２〜250ミ
リモル／、好ましくは９〜50ミリモル／の濃
度で使用される。 本発明で使用されるヒドロペルオキシドとして
は、２，５―ジメチルヘキサン―22，５―ジヒド
ロペルオキシド、クメンヒドロペルオキシド、
２，５―ジメチルヘキサノン―２，５―ジヒドロ
ペルオキシド、ジイソプロピルベンゼンヒドロペ
ルオキシド、ｔ―ブチルヒドロペルオキシド、ｐ
―メンタンヒドロペルオキシド、４―メチルフエ
ニルイソプロピルヒドロペルオキシド等があり、
特に２，５―ジメチルシクロヘキサノン―２，５
―ジヒドロペルオキシドおよびクメンヒドロペル
オキシドが比較的分解率の低い好ましいヒドロペ
ルオキシドである。 本発明による試験剤は、溶液としてあるいは紙
等の基材に含浸させた試験片として使用される。
これらの試験剤には、必要により緩衝剤や潤滑剤
が配合される。例えば試験片を体液中に浸漬した
際のPH値を４〜８、好ましくは５〜７に保つため
の緩衝剤としては、例えばクウン酸―クエン酸ナ
トリウム、酒石酸−酒石酸ナトリウム、リンゴ酸
―ホウ砂、フタル酸水素カリウム―フタル酸ジカ
リウム、コハク酸水素ナトリウム―コハク酸ジナ
トリウム等がある。 また、試験片を体液中に浸漬したとき、該体液
が均一に湿潤するように使用される湿潤剤として
は、ラウリル硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナト
リウム、テトラドデシル硫酸ナトリウム等のアル
キル硫酸塩、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリ
ウム等のアルキルベンゼンスルホン酸塩、ジオク
チルスルホコハク酸ナトリウム、ジヘプチルスル
ホコハク酸ナトリウム等のジアルキルスルホコハ
ク酸塩等の界面活性剤等がある。 また、前記試験剤においては、ヘモグロビンに
おけるペルオキシダーゼ活性等を増強させる薬剤
を配合してもよい。代表的な増強剤としては、キ
ノリンおよびその誘導体、例えばキニーネ、シン
コニン、６―メトキシキノリン、キナルジン、８
―アミノ―６―メトキシキノリン、２―ギノリノ
ール、イソキノリン、ベンゾ〔ｆ〕キノリン、３
―アミノキノリン等がある。これらの増強剤が存
在すると、通常酸化反応速度が促進され、かつ酸
化された色原体の呈色強度が促進され、そして試
験片の感度は高められる。 また、基材に含浸させた試験片として使用する
場合には、該試験片からの薬剤の流出を防止する
ために、粘稠剤を使用してもよい。代表的な粘稠
剤としては、ポリビニルアルコール、ポリビニル
ピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリアク
リル酸塩、ポリアクリルアミド、ポリ（ヒドロキ
シエチルメタクリレート）、ポリ（ヒドロキシエ
チルアクリレート）、カルボキシメチルセルロー
ス等の重合体、ゼラチン、アラビアゴム等があ
る。 前記薬剤は、溶媒、例えばベンゼン、トルエ
ン、キシレン、メタノール、エタノール、イソプ
ロパノール、アセトン、メチルエチルケトン、ク
ロロホルム、四塩化炭素、水等に溶解させて溶液
の形として使用するか、あるいは該溶液を基材に
含浸させて乾燥して得られる試験片の形で使用さ
れる。このような試験片は常法により製造され
る。 基材としては、濾紙、ガラス繊維、プラスチツ
ク素材からなる不織布等があり、含浸液と反応し
たりあるいは含浸液に溶解したりせず、かつ吸収
性を有しているものであればよい。 本発明による試験剤は、下記のように種々の診
断に使用される。 ヒドロペルオキシド又は前反応によつて生ずる
過酸化水素もしくは他のヒドロペルオキシドを、
ペルオキシダーゼ又はペルオキシダーゼ様反応を
用いて測定する試験剤、またはペルオキシダーゼ
もしくはペルオキシダーゼ作用物質を測定する試
験剤の例として、(a)ブドウ糖(b)尿素(c)コレステロ
ール(d)トリグリセリド（中性脂肪）(e)遊離脂肪酸
(f)ヘモグロビン(g)ミオグロビン等がある。 つぎに、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に
説明する。 実施例１〜３および比較例１ ブドウ糖試験紙 Ａ液 クエン酸緩衝液 100ml グルコースオキシダーゼ 300mg ペルオキシダーゼ 50mg 酸化剤（NaIO4） 100mg Ｂ液 オルトトリジン 2.5ｇ ／アセトン100ml 濾紙（東洋濾紙社製）にＡ液を含浸させたの
ち、乾燥し、ついでＢ液を含浸させたのち、乾燥
してブドウ糖試験紙を得た。実施例１として酸化
剤にはNaIO4（100mg）用い、実施例２として
HIO4（100mg）、実施例３としてCuSO4（500mg）を
用いた。比較例１としては酸化剤を用いなかつ
た。 このようにして得られた試験紙をブドウ糖を含
有しない尿および150mg／dlのブドウ糖を含有す
る尿にいずれもアスコルビン酸を50mg／dl含有さ
せた試料中に浸漬して試験したところ、第１表の
結果が得られた。
【表】
比較例１ なし − −
実施例４および比較例２ ブドウ糖試験液 グルコースオキシダーゼ 3.25U／ml ペルオキシダーゼ 0.3U／ml ４―アミノアンチピリン ５mg／dl フエノール 50mg／dl NaIO4 １mg／ml 上記成分を0.1Mリン酸緩衝液（PH6.9）90mlに
溶解させてブドウ糖試験液を得た。 このようにして得られた試験液３mlを、グルコ
ース75mg／dlおよびアスコルビン酸50mg／dlを含
有するブドウ糖水溶液20μに添加して37℃で20
分間反応させたのち、505nmの吸光度を測定した
ところ、第２表の結果が得られた。
実施例４および比較例２ ブドウ糖試験液 グルコースオキシダーゼ 3.25U／ml ペルオキシダーゼ 0.3U／ml ４―アミノアンチピリン ５mg／dl フエノール 50mg／dl NaIO4 １mg／ml 上記成分を0.1Mリン酸緩衝液（PH6.9）90mlに
溶解させてブドウ糖試験液を得た。 このようにして得られた試験液３mlを、グルコ
ース75mg／dlおよびアスコルビン酸50mg／dlを含
有するブドウ糖水溶液20μに添加して37℃で20
分間反応させたのち、505nmの吸光度を測定した
ところ、第２表の結果が得られた。
【表】
実施例 ５
実施例１で得られたブドウ糖試験紙を用いてブ
ドウ糖を50mg／dl含有する尿中のアスコルビン酸
濃度と発色度との関係を図示すると第１図のとお
りであつた。同図において曲線Ａは実施例１の試
験紙、曲線Ｂは市販のブドウ糖試験紙曲線Ｃは
市販のブドウ糖試験紙の例である。 同様にブドウ糖を150mg／dl、500mg／dlおよび
2000mg／dl含有する尿中のアスコルビン酸濃度と
発色度との関係を図示すると、それぞれ第２〜４
図のとおりであつた。同図において曲線Ｄ，Ｇお
よびＪは実施例１の試験紙、曲線Ｅ，ＨおよびＫ
は市販のブドウ糖試験紙、曲線Ｆ，ＩおよびＬ
は市販のブドウ糖試験紙の例である。 なお、同図において縦軸に記載した±は50mg／
dl＋は150mg／dlは500mg／dl、は2000mg／dl
のブドウ糖濃度を示す。また市販のブドウ糖試験
紙は、試験紙100枚中にクエン酸25mg、クエン
酸ナトリウム146mg、グルコースオキシダーゼ48
mg、ペルオキシダーゼ0.6mg、オルトトリジン６
mgおよびエオシン10.25mgを含有しており、また
市販のブドウ糖試験紙は試験紙100枚中にブド
ウ糖酸化酵素300μ、ペルオキシダーゼ0.9mgお
よびヨウ化カリウム９mgを含有していた。 実施例 ６ 潜血試験紙 Ａ液：２，５―ジメチルヘキサン―２，５―ジヒ
ドロペルオキシド 1.2ｇ エタノール 100ml Ｂ液：クエン酸ナトリウム ９ｇ クエン酸 １ｇ サポニン 100mg NaIO4 200mg 水 100ml Ｃ液：オルトトリジン 1.2ｇ ベンゼン 100ml 濾紙をＡ液に含浸させ乾燥させたのち、Ｂ液に
含浸させ乾燥させる。最後にこの濾紙をＣ液に含
浸・乾燥させて潜血試験紙を製造した。 このようにして製造した潜血試験紙を種々の濃
度のヘモグロビン含有尿に浸漬したところ、ヘモ
グロビン濃度に相応して異なる強さの青色を呈
し、またアルコルビン酸を加えてヘモグロビン含
有尿に浸漬してもアスコルビン酸（200mg／dlま
で）の影響は全く受けなかつた。 実施例 ７ ブドウ糖試験紙 Ａ液 グルコースオキシダーゼ（Ｇ―6125、ジグ
マ社製） 30mg パーオキシダーゼ（Ｐ―8125、ジグマ社
製） ５mg タートラジン 10mg 過ヨウ素酸ナトリウム（NaIO4） 10mg クエン酸緩衝液（PH６） ５ml アルギン酸ナトリウム（５％溶液） ５ml Ｂ液 オルトトリジン １ｇ アセトン 40ml 濾紙（トツパンNo.5250、凸版印刷株式会社製）
に溶液Ａを含浸させたのち、40℃で60分間乾燥
し、ついで溶液Ｂを含浸させたのち、40℃で10分
間乾燥させてグルコース試験紙を調製した。 比較例 ３ 過ヨウ素酸ナトリウムの代りに10mgのヨウ素酸
ナトリウムを使用した以外は、実施例７と同様の
方法でグルコース試験紙を調製した。 実施例 ８ 実施例７および比較例３で調製された試験紙
を、150mg／dlの濃度のグルコースおよび種々の
濃度のアスコルビン酸を含有する尿試料に浸漬し
た。浸漬した試験紙の吸光度を、瞬間マルチ側光
検出器（大塚電子株式会社製、MCPD―200）お
よびコントローラー（大塚電子株式会社製、MC
―850―Ａ）を用いて測定した。その測定条件は
下記の通りであつた。 サンプリング時間 250msec 累積時間 １ 測定時間および間隔 1.5分、0.5秒 波 長 630nm レスポンス １ポイント 解 像 20nm 光減衰器 ４ スリツトセレクター ４ その結果は、第３表のとおりであつた。
ドウ糖を50mg／dl含有する尿中のアスコルビン酸
濃度と発色度との関係を図示すると第１図のとお
りであつた。同図において曲線Ａは実施例１の試
験紙、曲線Ｂは市販のブドウ糖試験紙曲線Ｃは
市販のブドウ糖試験紙の例である。 同様にブドウ糖を150mg／dl、500mg／dlおよび
2000mg／dl含有する尿中のアスコルビン酸濃度と
発色度との関係を図示すると、それぞれ第２〜４
図のとおりであつた。同図において曲線Ｄ，Ｇお
よびＪは実施例１の試験紙、曲線Ｅ，ＨおよびＫ
は市販のブドウ糖試験紙、曲線Ｆ，ＩおよびＬ
は市販のブドウ糖試験紙の例である。 なお、同図において縦軸に記載した±は50mg／
dl＋は150mg／dlは500mg／dl、は2000mg／dl
のブドウ糖濃度を示す。また市販のブドウ糖試験
紙は、試験紙100枚中にクエン酸25mg、クエン
酸ナトリウム146mg、グルコースオキシダーゼ48
mg、ペルオキシダーゼ0.6mg、オルトトリジン６
mgおよびエオシン10.25mgを含有しており、また
市販のブドウ糖試験紙は試験紙100枚中にブド
ウ糖酸化酵素300μ、ペルオキシダーゼ0.9mgお
よびヨウ化カリウム９mgを含有していた。 実施例 ６ 潜血試験紙 Ａ液：２，５―ジメチルヘキサン―２，５―ジヒ
ドロペルオキシド 1.2ｇ エタノール 100ml Ｂ液：クエン酸ナトリウム ９ｇ クエン酸 １ｇ サポニン 100mg NaIO4 200mg 水 100ml Ｃ液：オルトトリジン 1.2ｇ ベンゼン 100ml 濾紙をＡ液に含浸させ乾燥させたのち、Ｂ液に
含浸させ乾燥させる。最後にこの濾紙をＣ液に含
浸・乾燥させて潜血試験紙を製造した。 このようにして製造した潜血試験紙を種々の濃
度のヘモグロビン含有尿に浸漬したところ、ヘモ
グロビン濃度に相応して異なる強さの青色を呈
し、またアルコルビン酸を加えてヘモグロビン含
有尿に浸漬してもアスコルビン酸（200mg／dlま
で）の影響は全く受けなかつた。 実施例 ７ ブドウ糖試験紙 Ａ液 グルコースオキシダーゼ（Ｇ―6125、ジグ
マ社製） 30mg パーオキシダーゼ（Ｐ―8125、ジグマ社
製） ５mg タートラジン 10mg 過ヨウ素酸ナトリウム（NaIO4） 10mg クエン酸緩衝液（PH６） ５ml アルギン酸ナトリウム（５％溶液） ５ml Ｂ液 オルトトリジン １ｇ アセトン 40ml 濾紙（トツパンNo.5250、凸版印刷株式会社製）
に溶液Ａを含浸させたのち、40℃で60分間乾燥
し、ついで溶液Ｂを含浸させたのち、40℃で10分
間乾燥させてグルコース試験紙を調製した。 比較例 ３ 過ヨウ素酸ナトリウムの代りに10mgのヨウ素酸
ナトリウムを使用した以外は、実施例７と同様の
方法でグルコース試験紙を調製した。 実施例 ８ 実施例７および比較例３で調製された試験紙
を、150mg／dlの濃度のグルコースおよび種々の
濃度のアスコルビン酸を含有する尿試料に浸漬し
た。浸漬した試験紙の吸光度を、瞬間マルチ側光
検出器（大塚電子株式会社製、MCPD―200）お
よびコントローラー（大塚電子株式会社製、MC
―850―Ａ）を用いて測定した。その測定条件は
下記の通りであつた。 サンプリング時間 250msec 累積時間 １ 測定時間および間隔 1.5分、0.5秒 波 長 630nm レスポンス １ポイント 解 像 20nm 光減衰器 ４ スリツトセレクター ４ その結果は、第３表のとおりであつた。
【表】
【表】
発明の具体的効果
以上述べたように、本発明による試験剤は、ヒ
ドロペルオキシドまたは前反応によつて生ずる過
酸化水素もしくは他のヒドロペルオキシドを、ペ
ルオキシダーゼまたはペルオキシダーゼ様反応を
用いて測定する試験剤、またはペルオキシダーゼ
もしくはペルオキシダーゼ作用物質を測定する試
験剤において、上記ヒドロペルオキシド、ペルオ
キシダーゼおよびペルオキシダーゼ作用物質より
なる群から選ばれた物質の反応下において酸化さ
れた発色する発色剤と、有効量の過ヨウ素酸また
は過ヨウ素酸塩を有してなるものであるから、尿
や血液等の被検液体中にアスコルビン酸、ゲンチ
ジン酸等の還元性物質が存在していても、該還元
性物質は前記酸化剤により酸化されるので、ペル
オキシダーゼまたは他のペルオキシダーゼ様反応
が阻害さることはない、しも、前記過ヨウ素酸ま
たは過ヨウ素酸塩を予め試験剤中に共存させてお
いてもペルオキシダーゼ又は他のペルオキシダー
ゼ様反応が進むことはない。また、酸化剤を0.3
〜1000ミリモル／使用した場合には、特に優れ
た効果を発揮する。
ドロペルオキシドまたは前反応によつて生ずる過
酸化水素もしくは他のヒドロペルオキシドを、ペ
ルオキシダーゼまたはペルオキシダーゼ様反応を
用いて測定する試験剤、またはペルオキシダーゼ
もしくはペルオキシダーゼ作用物質を測定する試
験剤において、上記ヒドロペルオキシド、ペルオ
キシダーゼおよびペルオキシダーゼ作用物質より
なる群から選ばれた物質の反応下において酸化さ
れた発色する発色剤と、有効量の過ヨウ素酸また
は過ヨウ素酸塩を有してなるものであるから、尿
や血液等の被検液体中にアスコルビン酸、ゲンチ
ジン酸等の還元性物質が存在していても、該還元
性物質は前記酸化剤により酸化されるので、ペル
オキシダーゼまたは他のペルオキシダーゼ様反応
が阻害さることはない、しも、前記過ヨウ素酸ま
たは過ヨウ素酸塩を予め試験剤中に共存させてお
いてもペルオキシダーゼ又は他のペルオキシダー
ゼ様反応が進むことはない。また、酸化剤を0.3
〜1000ミリモル／使用した場合には、特に優れ
た効果を発揮する。
第１〜４図は、本発明および従来のブドウ糖試
験紙の尿中のアスコルビン酸濃度と発色度との関
係を示すグラフである。 Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｊ…本発明品、Ｂ，Ｅ，Ｈ，Ｋ…
市販品、Ｃ，Ｆ，Ｉ，Ｌ…市販品。
験紙の尿中のアスコルビン酸濃度と発色度との関
係を示すグラフである。 Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｊ…本発明品、Ｂ，Ｅ，Ｈ，Ｋ…
市販品、Ｃ，Ｆ，Ｉ，Ｌ…市販品。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ ヒドロペルオキシドまたは前反応によつて生
ずる過酸化水素もしくは他のヒドロペルオキシド
を、ペルオキシダーゼまたはペルオキシダーゼ様
反応を用いて測定する試験剤、またはペルオキシ
ダーゼもしくはペルオキシダーゼ作用物質を測定
する試験剤において、上記ヒドロペルオキシド、 ペルオキシダーゼおよびペルオキシダーゼ作用
物質よりなる群から選ばれた物質の反応下におい
て酸化されて発色する発色剤と、有効量の過ヨウ
素酸または過ヨウ素酸塩を有することを特徴とす
る試験剤。 ２ 過ヨウ素酸または過ヨウ素酸塩の有効量が
0.3〜1000ミリモル／である特許請求の範囲第
１項に記載の試験剤。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58194937A JPS6086467A (ja) | 1983-10-18 | 1983-10-18 | 試験剤 |
| EP84111426A EP0141244B1 (en) | 1983-10-18 | 1984-09-25 | Testing agent for detecting a subtance in a body fluid |
| DE8484111426T DE3475534D1 (en) | 1983-10-18 | 1984-09-25 | Testing agent for detecting a subtance in a body fluid |
| BE0/213797A BE900774A (fr) | 1983-10-18 | 1984-10-08 | Agent d'epreuve pour la detection d'une substance dans un liquide corporel. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58194937A JPS6086467A (ja) | 1983-10-18 | 1983-10-18 | 試験剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6086467A JPS6086467A (ja) | 1985-05-16 |
| JPH0429360B2 true JPH0429360B2 (ja) | 1992-05-18 |
Family
ID=16332815
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58194937A Granted JPS6086467A (ja) | 1983-10-18 | 1983-10-18 | 試験剤 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0141244B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6086467A (ja) |
| BE (1) | BE900774A (ja) |
| DE (1) | DE3475534D1 (ja) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6350753A (ja) * | 1986-08-20 | 1988-03-03 | Tanaka Tekkosho:Kk | 原綿におけるホネデユ量の推定方法 |
| JPS6374500A (ja) * | 1986-09-17 | 1988-04-04 | Toyo Roshi Kk | 体液中のしゆう酸塩を検出するための試験片 |
| DE68925387T2 (de) * | 1988-06-22 | 1996-08-14 | Hygeia Sciences Ltd | Verfahren zur Behandlung von Immunotest-Proben, die Schleim enthalten |
| JPH07119752B2 (ja) * | 1990-10-08 | 1995-12-20 | 株式会社京都第一科学 | レドックス反応検出用試薬組成物 |
| JPH05209878A (ja) * | 1992-01-30 | 1993-08-20 | Eiken Chem Co Ltd | 過酸化活性物質測定用組成物及びそれを用いた試験片 |
| DE19506262A1 (de) * | 1995-02-23 | 1996-08-29 | Behringwerke Ag | Störungsvermindertes Redox-Nachweissystem |
| US5702955A (en) * | 1995-05-22 | 1997-12-30 | Bayer Corporation | Ascorbate resistant detection of hydrogen peroxide |
| RU2485515C1 (ru) * | 2011-10-31 | 2013-06-20 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Амурская государственная медицинская академия" Минздравсоцразвития Российской Федерации | Способ создания реагента для определения сахаров в присутствии редуцирующих веществ |
| CN113176253B (zh) * | 2021-04-21 | 2023-05-23 | 上海麦可信生物科技有限公司 | 动物排泄物隐血指示剂及其应用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3411887A (en) * | 1964-06-15 | 1968-11-19 | Miles Lab | Diagnostic composition |
| DE3012368C2 (de) * | 1980-03-29 | 1982-04-15 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und diagnostische Mittel zum Nachweis von Redox-Reaktionen |
| US4310626A (en) * | 1980-06-02 | 1982-01-12 | Miles Laboratories, Inc. | Interference-resistant composition, device and method for determining a peroxidatively active substance in a test sample |
| US4444880A (en) * | 1982-07-27 | 1984-04-24 | Syva Company | Periodate removal of ascorbate interference in dipsticks for immunoassays |
-
1983
- 1983-10-18 JP JP58194937A patent/JPS6086467A/ja active Granted
-
1984
- 1984-09-25 EP EP84111426A patent/EP0141244B1/en not_active Expired
- 1984-09-25 DE DE8484111426T patent/DE3475534D1/de not_active Expired
- 1984-10-08 BE BE0/213797A patent/BE900774A/fr not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0141244B1 (en) | 1988-12-07 |
| JPS6086467A (ja) | 1985-05-16 |
| DE3475534D1 (en) | 1989-01-12 |
| BE900774A (fr) | 1985-02-01 |
| EP0141244A1 (en) | 1985-05-15 |
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