JPH04311399A - 分析素子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、クレアチン及び／又は
クレアチニンを測定する分析素子に関するものである。

【０００２】

【発明の背景】蛋白質代謝の中間体及び最終生成物の分
析は、臨床化学、特に腎臓機能の診断において重要であ
る。この代謝生成物には、クレアチンやクレアチニンが
含まれる。腎臓機能の診断におけるクレアチニンの酵素
分析は、クレアチニン及びクレアチンに特異的である下
記の反応経路

【０００３】

【化１】

【０００４】を使用して開発されて来た。尚、第一の反
応は、クレアチニンアミドヒドラーゼ（クレアチニナー
ゼ）が触媒作用をなし、第二の反応は、クレアチンアミ
ジノヒドラーゼ（クレアチナーゼ）が触媒作用をしてい
る。しかしながら、クレアチニンの測定において、被験
液中にクレアチナーゼにより触媒されるクレアチン又は
Ｎ−エチルグリシン等が含まれる場合、一体型の分析素
子では正確な測定が行われていない。

【０００５】この問題点を解決する為、例えば酵素クレ
アチニナーゼ２００〜１２００Ｉ．Ｕ．／ｍ２　、酵素
クレアチナーゼ３５０００〜６５０００Ｉ．Ｕ．／ｍ２
　、及び酵素サルコシンオキシダーゼ２０００〜３５０
０Ｉ．Ｕ．／ｍ２　並びに過酸化水素及び過酸化性物質
の存在下に検出し得る染料を生成し得るロイコ染料を含
有する吸収性キャリアー物質を含んでなり、該クレアチ
ナーゼが該ロイコ染料に実質的に不活性であるような状
態で存在し、該クレアチニナーゼが速度限定量で存在し
、前記三種の全ての酵素がｐＨ約６．５ないし６．９で
存在するクレアチニン又はクレアチンの分析素子が提案
（特開昭６３−３０５２５４号公報）されている。その
具体的な例としては、試薬層が二つ設けられ、多孔性展
開層に近い試薬層にクレアチナーゼを、支持体に近い試
薬層にクレアチニナーゼやその他の酵素を含有させたも
のである。

【０００６】しかしながら、この提案のものでは、クレ
アチナーゼが含まれる層が一層である為、主反応と内因
性クレアチンの影響排除の為の反応とを同じ試薬で行わ
せなければならず、分析素子の設計上の自由度が少なく
、さらには主反応と内因性クレアチン除去の反応バラン
スの調整が難しく、再現性や正確性の面で問題が残され
ている。

【０００７】又、特開昭６４−９８９５２号公報に記載
されている層構成によれば、共存物質（クレアチン）の
影響を軽減できるが、高濃度のクレアチンが含まれる検
体を測定する場合には充分でなく、又、感度も低く、同
時再現性が悪い問題点がある。

【０００８】

【発明の開示】本発明の目的は、被験液中の内因性クレ
アチンの悪影響が軽減され、本来の被験物質の測定の再
現性や正確性に優れた分析素子を提供することである。 本発明者の研究によれば、クレアチニナーゼを試薬層に
含有させ、クレアチナーゼを展開層に含有させ、クレア
チニナーゼを含有する試薬層にもクレアチナーゼを含有
させると感度が増加することが判った。

【０００９】さらに、ザルコシンオキシダーゼが展開層
に含有されると、共存物質（クレアチン）の分解が速や
かに行われる為、共存物資の影響を除去する為には好ま
しく、又、試薬層にも含有させるとより感度が増加する
ことも判った。つまり、このような構成にすることによ
って、クレアチニナーゼの反応が開始する前に、内因性
の共存物質を反応させ、色素へと導くことができる。そ
して、共存物質が充分に除去され、色素へと導かれた後
、第一反応であるクレアチニナーゼの反応を行わせて、
多点（２点以上）測定することによって内因性の共存物
質による正誤差を極めて少なくすることができたのであ
る。しかしながら、展開層にのみクレアチナーゼを含有
させると、クレアチニナーゼの作用によってクレアチニ
ンから導かれたクレアチンは、一度、展開層のクレアチ
ナーゼと反応し、ザルコシンとなってから試薬層のザル
コシンオキシダーゼと反応することになる。この為、反
応が試薬層−展開層−試薬層で行われ、スムーズに行わ
れなかったのであるが、試薬層にもクレアチナーゼを含
有させることによって、クレアチニンが色素へと導かれ
る反応がよりスムーズに行われ、感度が増加し、同時再
現性が改善されたのである。

【００１０】このような知見から本発明が達成されたも
のであり、上記本発明の目的は、支持体上に試薬層とそ
の上方に展開層を有する生物学的流体試料中のクレアチ
ン及び／又はクレアチニンを分析する為の分析素子であ
って、クレアチニナーゼが試薬層に含有され、クレアチ
ナーゼが試薬層と展開層とに含有されることを特徴とす
る分析素子によって達成される。

【００１１】又、支持体上に試薬層とその上方に展開層
を有する生物学的流体試料中のクレアチン及び／又はク
レアチニンを分析する為の分析素子であって、クレアチ
ニナーゼが試薬層に含有され、クレアチナーゼが試薬層
と展開層とに含有され、さらにザルコシンオキシダーゼ
が展開層に含有されることを特徴とする分析素子によっ
て達成される。

【００１２】又、支持体上に試薬層とその上方に展開層
を有する生物学的流体試料中のクレアチン及び／又はク
レアチニンを分析する為の分析素子であって、クレアチ
ニナーゼが試薬層に含有され、クレアチナーゼ及びザル
コシンオキシダーゼが前記試薬層及び展開層に含有され
ることを特徴とする分析素子によって達成される。尚、
上記本発明の分析素子においては、クレアチナーゼの含
有量は試薬層よりも展開層において多いことが、特に試
薬層におけるクレアチナーゼの含有量と展開層における
クレアチナーゼの含有量との比が１対１０〜１００であ
ることが好ましく、又、ザルコシンオキシダーゼの含有
量とクレアチナーゼの含有量との比が１対５〜３０であ
ることが好ましい。

【００１３】又、クレアチナーゼの含有量は２５０００
〜２０００００Ｉ．Ｕ．／ｍ２　であることが好ましく
、クレアチニナーゼの含有量はクレアチナーゼの含有量
に対して１／２０００〜１／１５であることが好ましい
。 本発明がクレアチン及び／又はクレアチニン測定用の分
析素子に応用された場合について説明すると、次の通り
である。

【００１４】クレアチン及び／又はクレアチニンの分析
は、下記の一連の反応（１）ないし（４）によって行わ
れる。

【００１５】

【化２】

【００１６】これらの反応は、クレアチニナーゼ、クレ
アチナーゼ、ザルコシンオキシダーゼ及び過酸化性物質
によってそれぞれ触媒される。クレアチニナーゼ及びク
レアチナーゼは、多数の供給源から市場で得られる。種
々の微生物資源から単離された各酵素の若干の種類が文
献に知られている。３７℃で６．５の至適ｐＨを有する
クレアチニナーゼ及び３７℃で７．７の至適ｐＨを有す
るクレアチナーゼ（両者共にフラボバクテリウムの菌株
から得られる）が好ましい。

【００１７】ザルコシンオキシダーゼも多数の供給源か
ら得られる。例えば、特開昭５５−３４００１号公報、
特開昭５６−９２７９０号公報、特開昭６１−１６２１
７４号公報に記載されている。過酸化性物質はペルオキ
シダーゼを含む。本発明に有用なペルオキシダーゼは植
物又は微生物由来のものである。

【００１８】本発明に用いられる色素前駆体は、過酸化
水素及び過酸化性物質の存在で酸化されて検出可能な化
合物群（一種又は二種以上の化合物の組み合わせ）から
選べる。例えば、特開昭５９−４６８５４号公報に記載
されている４−アミノアンチピリンとその誘導体、特開
昭６２−２５７４００号公報に記載されているロイコ色
素、特開昭６３−１２７１５８号公報に記載されている
化合物の組み合わせ等が挙げられる。

【００１９】本発明の分析素子は、製造上又は操作上の
有利性の為に、一般の分析素子に用いられる一種又は二
種以上の他の添加物を含有することができる。このよう
な添加物には、界面活性剤、イオンキレート化剤、緩衝
剤、溶剤、硬化剤、抗酸化剤、カプラー、及び類似物が
含まれる。界面活性剤は非イオン性、イオン性を問わず
に用いられるが、非イオン性界面活性剤は、有機溶媒に
も水にも良く溶解することから有用な塗布助剤であると
共に、生物学的流体試料を多孔性展開層上に垂らした際
の展開速度の向上に有効であるから、特に好ましいもの
である。界面活性剤として有用な具体例としては、トリ
トンＸ−１００（オクチルフェノキシポリエトキシエタ
ノール、ロームアンドハース社製）、サーファクタント
１０Ｇ（ｐ−ノニルフェノキシポリグリシドール、オリ
ーン社製）、アルカノールＸＣ（ジイソプロピルナフチ
ルスルホン酸ナトリウム、デュポン社製）、トリイソプ
ロピルナフタレンスルホン酸ナトリウム、フルオロテン
サイドＦＴ−２４８（パーフルオロオクチルスルホン酸
テトラエチルアンモニウム塩、バイエル社製）、フロラ
ードＦＣ−１７０Ｃ（パーフルオロアルキルポリオキシ
エチレンエタノール、３Ｍ社製）等の非イオン性及びイ
オン性界面活性剤を挙げることができる。特に、多孔性
展開層に含まれる界面活性剤としては非イオン系界面活
性剤が好ましく、次のＲ−Ｏ−（ＣＨ２　−ＣＨ２　−
Ｏ−）ｎ　Ｈ（式中Ｒは炭素数１〜９のアルキル基で置
換されたフェニル基又は炭素数１〜２０のアルキル基を
示し、ｎは１〜７０の整数を示す）で表される非イオン
系界面活性剤を５〜２０ｇ／ｍ２　含んでいるものが好
ましい。

【００２０】緩衝剤としては、日本化学会編「化学便覧
　　基礎編」（東京、丸善株式会社、１９６６年発行）
１３１２〜１３２０頁、Ｒ．Ｍ．Ｃ．Ｄａｗｓｏｎほか
編「Ｄａｔａ　　ｆｏｒ　　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　
　Ｒｅｓｅａｒｃｈ」第２版（オックスフォード　　ア
ット　　ザ　　クレンドン　　プレス、１９６９年発行
）第４７６〜５０８頁、「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」
第５巻、第４６７頁（１９６６年）、「Ａｎａｌｙｔｉ
ｃａｌ　　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」第１０４巻、第
３００〜３１０頁（１９８０年）等に記載のｐＨ緩衝剤
がある。

【００２１】ｐＨ５．５〜９．０の範囲のｐＨ緩衝剤の
具体例として、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ン〔トリス（Ｔｒｉｓ）〕を含む緩衝剤、リン酸塩を含
む緩衝剤、ホウ酸塩を含む緩衝剤、クエン酸又はクエン
酸塩を含む緩衝剤、グリシンを含む緩衝剤、Ｎ，Ｎ−ビ
ス（２−ヒドロキシエチル）グリシン〔ビシン（Ｂｉｃ
ｉｎｅ）〕、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ
’−２−ヒドロキシプロパン−３−スルホン酸（ＨＥＰ
ＰＳ）Ｎａ塩又はＫ塩等、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピ
ペラジン−Ｎ’−３−スルホン酸（ＥＰＰＳ）Ｎａ塩又
はＫ塩等、Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチル〕
−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）Ｎａ塩又
はＫ塩等、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’
−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）Ｎａ塩又はＫ塩
等、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミ
ノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）Ｎａ塩又はＫ塩等、及び
これらのいずれかと必要により組み合わせられる酸、ア
ルカリ又は塩がある。好ましい緩衝剤の具体例として、
リン酸二水素カリウム−リン酸水素二ナトリウム、トリ
ス−ホウ酸ナトリウム、トリスクエン酸、クエン酸−リ
ン酸二水素ナトリウム、ビシン、ＨＥＰＰＳ、ＨＥＰＰ
Ｓナトリウム塩、ＨＥＰＥＳカリウム塩、ＥＰＰＳ、Ｅ
ＰＰＳナトリウム塩、ＴＡＰＳ、ＴＡＰＳナトリウム塩
、ＴＥＳ、ＴＥＳナトリウム塩、ＴＥＳカリウム塩等が
ある。

【００２２】ｐＨ緩衝剤は酵素が含有されている層に存
在するのが好ましいので、酵素を含有する多孔性展開層
又は試薬層にｐＨ緩衝剤を含有させるのが好ましい。低
分子量のｐＨ緩衝剤は、垂らされた水性液体試料の媒体
である水の浸透に従って層間を移動しうるので、酵素と
発色試薬組成物が含まれる全ての層にｐＨ緩衝剤が含有
される必要はなく、例えば親水性層又は吸水層だけにｐ
Ｈ緩衝剤を含有させてもよい。

【００２３】本発明の実施においてクレアチナーゼやザ
ルコシンオキシダーゼを多孔性展開層に含有させること
は多くの方法により達成できる。例えば、多孔性展開層
を形成する方法として塗布を用いる場合は、塗布液の溶
媒に溶解する（溶媒が水の場合等）ことが一般的である
。溶媒に対する試薬の溶解度が適当でない場合は、不溶
のまま溶媒中に分散させても良い。分散に関する種々の
方法については、新実験化学講座、第１８巻、「界面と
コロイド」（丸善株式会社、日本化学会編、昭和５２年
発行）第３４０〜３５５頁に記載されている方法を用い
ることができる。又、溶媒を用いるか否かに係わらず、
前記の多孔性展開層構成材料にあらかじめクレアチナー
ゼやザルコシンオキシダーゼを物理的、化学的に吸着さ
せるか、あるいは多孔性展開層構成材料の一部として単
に混合しておいても良い。好ましくは、ベンゼン、トル
エン、キシレン、エーテル、ヘキサン及びその誘導体等
の常温で液体である有機溶媒に非イオン系界面活性剤、
多孔性展開層構成素材及びクレアチナーゼやザルコシン
オキシダーゼを添加し、サンドスターラー、ホモジナイ
ザー、超音波ホモジナイザー等により分散させ、分散液
を塗布乾燥し、多孔性展開層を形成する方法が良い。酵
素を有機溶媒に浸すことは、一般に酵素活性を低下さる
という事実からすると驚くべきことである。但し、実用
上の点で、酵素が有機溶媒と接触してから塗布乾燥させ
るまでの時間は、有機溶媒の種類により異なるが１０時
間以内であることが好ましい。

【００２４】本発明になる乾式の分析素子の多孔性展開
層は、自己支持性（すなわち、その元の形を維持するに
十分に硬い物質からなる）であるが、好ましくはそれは
別の非孔性支持体の上に置かれている。このような支持
体は適当な寸法安定性であり、好ましくは、非孔性で、
２００ないし９００ｎｍの間の波長の電磁放射線を透過
し得る透明（すなわち放射線透過性）物質である。特定
の分析素子の為の支持体の選択は、検出しようとする態
様（透過又は反射分光測光）に適合させるべきである。 有用な支持体は、紙、金属箔、ポリスチレン、ポリエス
テル（例えば、ポリエチレンテレフタレート）、ポリカ
ーボネート又はセルロースエステル（例えば、セルロー
スアセテート）等である。

【００２５】本発明における多孔性展開層は、米国特許
第４２９２２７２号明細書、米国特許第３９９２１５８
号明細書、米国特許第４２５８００１号明細書、米国特
許第４４３０４３６号明細書及び特開昭５７−１０１７
６０号公報に記載されたような繊維若しくは非繊維性物
質、又はそれら両者の混合物や特公昭６１−６１３４７
号公報に記載されたような織物から調製される。

【００２６】本発明の分析素子には、所望に応じて種々
の機能の層及び層構成をとることができる。例えば、米
国特許第３９９２１５８号明細書記載の試薬層、反射層
、下塗り層、米国特許第４０４２３３５号明細書記載の
放射線ブロッキング層、米国特許第４０６６４０３号明
細書記載のバリヤー層、米国特許第４１４４３０６号明
細書記載のレジストレーション層、米国特許第４１６６
０９３号明細書記載のマイグレーション阻止層、米国特
許第４１２７４９９号明細書記載のシンチレーション層
、特開昭５５−９０８５９号公報記載のスカベンジャー
層及び米国特許第４１１００７９号明細書記載の破壊性
ポッド状部材等を任意に組み合わせて本発明の目的に合
わせた多層分析素子を構成するこが可能である。

【００２７】上記の種々の層は、写真工業において公知
のスライドホッパー塗布法、押し出し塗布法、浸漬塗布
法等を用いることで任意の膜厚の層を構成することが可
能である。又、層構成としては、例えば特開昭５１−４
０１９１号（特公昭５８−１８６２８号）公報、米国特
許第４１１００７９号明細書、特開昭５８−１３１５６
５号公報等に記載されている層構成を選択することが可
能である。

【００２８】このようにして製造された分析素子は、分
析方法に依存して種々の形状にすることが可能である。 例えば、所望の幅のテープ、シート又はプラスチックマ
ウントに装着されたスライドを含む種々の形状にするこ
とができる。以下、本発明を具体的に説明するが、本発
明はこの実施例に限定されない。

【００２９】

【実施例】透明な下塗り済み厚さ約１８０μｍのポリエ
チレンテレフタレート支持体上に、下記表１に示す試薬
層を設け、この試薬層上にビニルピロリドン−酢酸ビニ
ル共重合体（重合比２：８）を１．８ｇ／ｍ２　になる
ように接着層（ａ１）を設け、さらにこの接着層上に表
２で示される展開層を設け、表３に示す本発明の分析素
子−１〜−４及び比較例の分析素子−１，−２を作成し
た。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　表
　　１（試薬層）　　　　Ｒ−１　　　　　　Ｒ−２　
　　　　　Ｒ−３　　　　　　Ｒ−４　　　　　　Ｒ−
５　　　　　　Ｒ−６Ａ　　　　２０　　　　　　　　
　　２０　　　　　　　　　　２０　　　　　　　　　
　２０　　　　　　　　　　２０　　　　　　　　　　
２０　　Ｂ　　　　　０．９　　　　　　　　　０．９
　　　　　　　　　０．９　　　　　　　　　０．９　
　　　　　　　　０．９　　　　　　　　　０．９Ｃ　
　　　　１．８　　　　　　　　　１．８　　　　　　
　　　１．８　　　　　　　　　１．８　　　　　　　
　　１．８　　　　　　　　　１．８Ｄ　　　　　３．
０　　　　　　　　　３．０　　　　　　　　　３．０
　　　　　　　　　３．０　　　　　　　　　３．０　
　　　　　　　　３．０Ｅ　　　　　０．０９　　　　
　　　　０．０９　　　　　　　　０．０９　　　　　
　　　０．０９　　　　　　　　０．０９　　　　　　
　　０．０９　Ｆ　３００００　　　　　　　３０００
０　　　　　　　３００００　　　　　　　３００００
　　　　　　　３００００　　　　　　　３００００Ｇ
　１４０００　　　　　　　１４０００　　　　　　　
１００００　　　　　　　　７０００　　　　　　　１
４０００　　　　　　　　　　−　　Ｈ　　６５００　
　　　　　　　６５００　　　　　　　　６５００　　
　　　　　　６５００　　　　　　　　６５００　　　
　　　　　６５００Ｉ　　１５００　　　　　　　　９
０００　　　　　　　　２０００　　　　　　　　２０
００　　　　　　　　　　−　　　　　　　　　　−Ｊ
　　　　　６．２　　　　　　　　　６．２　　　　　
　　　　６．２　　　　　　　　　６．２　　　　　　
　　　６．２　　　　　　　　　６．２Ｋ　　　　　１
．５　　　　　　　　　１．５　　　　　　　　　１．
５　　　　　　　　　１．５　　　　　　　　　１．５
　　　　　　　　　１．５Ｌ　　　　　６．２　　　　
　　　　　６．２　　　　　　　　　６．２　　　　　
　　　　６．２　　　　　　　　　６．２　　　　　　
　　　６．２尚、表１中、Ａはゼラチン（ｇ／ｍ２　）
、Ｂはトリイソプロピルナフタレンスルホン酸ナトリウ
ム（ｇ／ｍ２　）、Ｃはフタル酸ジブチル（ｇ／ｍ２　
）、Ｄは７−クロロ−３−〔２−（２−ヘキシルデシル
スルホニル）　エチル〕−６−メチル−ピラゾロ−〔３
　，２−ｃ〕−ｓ−トリアゾール（ｇ／ｍ２　）、Ｅは
１，２−ビス（ビニルスルホニル）エタン（ｇ／ｍ２　
）、Ｆはペルオキシダーゼ（Ｉ．Ｕ．／ｍ２　）、Ｇは
ザルコシンオキシダーゼ（Ｉ．Ｕ．／ｍ２　）、Ｈはク
レアチニナーゼ（Ｉ．Ｕ．／ｍ２　）、Ｉはクレアチナ
ーゼ（Ｉ．Ｕ．／ｍ２　）、ＪはＮ−２−ヒドロキシエ
チルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸緩衝剤（
ｇ／ｍ２　）、Ｋは水酸化カリウム（ｇ／ｍ２　）、Ｌ
は牛血清アルブミン（ｇ／ｍ２　）である。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　表
　　２（展開層）　　　　Ｓ−１　　　　　　Ｓ−２　
　　　　　Ｓ−３　　　　　　Ｓ−４　　　　　　Ｓ−
５　　　　　　Ｓ−６Ｍ　　　　１０６　　　　　　　
　　１０６　　　　　　　　　１０６　　　　　　　　
　１０６　　　　　　　　　１０６　　　　　　　　　
１０６　Ｎ　　　　　１１．０　　　　　　　　１１．
０　　　　　　　　１１．０　　　　　　　　１１．０
　　　　　　　　１１．０　　　　　　　　１１．０　
Ｏ　　１２０００　　　　　　　１２０００　　　　　
　　１２０００　　　　　　　１２０００　　　　　　
　１２０００　　　　　　　１２０００　Ｐ　１１２５
００　　　　　　１０５０００　　　　　　１１２００
０　　　　　　１１２０００　　　　　　１１４０００
　　　　　　１１４０００　Ｑ　　　　　１１．８　　
　　　　　　１１．８　　　　　　　　１１．８　　　
　　　　　１１．８　　　　　　　　１１．８　　　　
　　　　１１．８　Ｒ　　　　　　０．２　　　　　　
　　　０．２　　　　　　　　　０．２　　　　　　　
　　０．２　　　　　　　　　０．２　　　　　　　　
　０．２　Ｓ　　　　　　１．７　　　　　　　　　１
．７　　　　　　　　　１．７　　　　　　　　　１．
７　　　　　　　　　１．７　　　　　　　　　１．７
　Ｔ　　　　−　　　　　　　　　　−　　　　　　　
　　４０００　　　　　　　　７０００　　　　　　　
　　−　　　　　　　　１４０００　Ｕ　　　　　　２
．０　　　　　　　　　２．０　　　　　　　　　２．
０　　　　　　　　　２．０　　　　　　　　　２．０
　　　　　　　　　２．０　尚、表２中、Ｍは濾紙原材
料用繊維（ｇ／ｍ２　）、Ｎはスチレン−グリシジルメ
タクリレート共重合体（重合比９：１）（ｇ／ｍ２　）
、Ｏはアスコルビン酸オキシダーゼ（Ｉ．Ｕ．／ｍ２　
）、Ｐはクレアチナーゼ（Ｉ．Ｕ．／ｍ２　）、Ｑはト
リトンＸ−１００（ｇ／ｍ２　）、Ｒは塩酸４−Ｎ，Ｎ
−ジエチルアミノ−２−（２’−メタンスルホンアミド
エチル）　アニリン（ｇ／ｍ２　）、Ｓは５，５−ジメ
チル−１，３−シクロヘキサンジオン（ｇ／ｍ２　）、
Ｔはザルコシンオキシダーゼ（Ｉ．Ｕ．／ｍ２　）、Ｕ
は牛血清アルブミン（ｇ／ｍ２　）である。

【００３０】又、多孔性展開層は、トリトンＸ−１００
、スチレン−グリシジルメタクリレート共重合体をキシ
レン２８０ｇに溶解した後、濾紙原材料用繊維及び酵素
以外の他の試薬を添加、攪拌し、次いで酵素を添加し、
ホモジナイザーで分散して出来上がった分散液を接着層
の上から塗布、乾燥して構成した。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　表
　　３　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　試薬層　　　　　　　　接着層　　　
　　　展開層　　　　本発明の分析素子−１　　　　　
　Ｒ−１　　　　　　　　ａ−１　　　　　　Ｓ−１　
　　　本発明の分析素子−２　　　　　　Ｒ−２　　　
　　　　　ａ−１　　　　　　Ｓ−２　　　　本発明の
分析素子−３　　　　　　Ｒ−３　　　　　　　　ａ−
１　　　　　　Ｓ−３　　　　本発明の分析素子−４　
　　　　　Ｒ−４　　　　　　　　ａ−１　　　　　　
Ｓ−４　　　　比較例の分析素子−１　　　　　　Ｒ−
５　　　　　　　　ａ−１　　　　　　Ｓ−５　　　　
比較例の分析素子−２　　　　　　Ｒ−６　　　　　　
　　ａ−１　　　　　　Ｓ−６上記各例の分析素子に対
して、クレアチニン５．０ｍｇ／ｄｌ及びクレアチン０
．８ｍｇ／ｄｌを含む試料（１）と、クレアチニン５．
０ｍｇ／ｄｌ及びクレアチン６．１ｍｇ／ｄｌを含む試
料（２）とをそれぞれ滴下し、３７℃でインキュベート
した。そして、滴下２１０秒後と４２０秒後の５４６ｎ
ｍにおける反射濃度差を、予め作成しておいた反射濃度
差をクレアチニンに変換する式で変換し、各々の濃度を
求めた。又、滴下２１０秒後の５４０ｎｍにおける反射
濃度差を予め作成しておいた変換式でクレアチン濃度に
変換した。これらの結果を表４に示す。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　表
　　４　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　クレアチニン濃度　　　　　　　　　　クレア
チン濃度　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　（ｍｇ／ｄｌ）　　　　　　　　　　　
　（ｍｇ／ｄｌ）　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　試料（１）　　試料（２）　　試料
（１）　　試料（２）　　　　本発明の分析素子−１　
　５．０　　　　　　５．２　　　　　　　　０．８　
　　　６．１　　　　本発明の分析素子−２　　５．０
　　　　　　５．２　　　　　　　　０．８　　　　６
．１　　　　本発明の分析素子−３　　５．０　　　　
　　５．２　　　　　　　　０．８　　　　６．１　　
　　本発明の分析素子−４　　５．０　　　　　　５．
１　　　　　　　　０．８　　　　６．１　　　　比較
例の分析素子−１　　５．１　　　　　　５．７　　　
　　　　　０．７　　　　５．９　　　　比較例の分析
素子−２　　５．０　　　　　　５．４　　　　　　　
　０．８　　　　６．１この表４から、本発明の分析素
子はクレアチニン測定における被験物質の試料中の内因
性クレアチンの影響が少ないことが窺える。

【００３１】更に、本発明の分析素子−１〜−４及び比
較例の分析素子−１，−２にコントロール血清Ｎ「ロシ
ュ」（エフ・ホフマン・ラ・ロシュ社製）及びクレアチ
ニン１．２６ｍｇ／ｄｌを１０μｌ滴下し、３７℃でイ
ンキュベートし、３分３０秒と７分の反射濃度差を求め
、そして予め種々のクレアチニンを含む人血清を用いて
作成しておいた変換式で濃度値に変換した。これを各素
子についてＮ＝１８で行い、同時再現性を調べたので、
その結果を表５に示す。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　表
　　５（同時再現性）　　　　　　　　本発明の分析素
子−１　　　　　　　　２．１％　　　　　　　　本発
明の分析素子−２　　　　　　　　３．１％　　　　　
　　　本発明の分析素子−３　　　　　　　　２．５％
　　　　　　　　本発明の分析素子−４　　　　　　　
　２．９％　　　　　　　　比較例の分析素子−１　　
　　　　　　６．９％　　　　　　　　比較例の分析素
子−２　　　　　　　　７．５％この表５から、同時再
現性が改善されていることが窺える。

【００３２】

【効果】本発明の分析素子は、内因性クレアチンの影響
が少なく、感度が高く、同時再現性が改善されている。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　支持体上に試薬層とその上方に展開層
   を有する生物学的流体試料中のクレアチン及び／又はク
   レアチニンを分析する為の分析素子であって、クレアチ
   ニナーゼが試薬層に含有され、クレアチナーゼが試薬層
   と展開層とに含有されることを特徴とする分析素子。
2. 【請求項２】　　クレアチナーゼの含有量は試薬層より
   も展開層において多いことを特徴とする請求項１の分析
   素子。
3. 【請求項３】　　試薬層におけるクレアチナーゼの含有
   量と展開層におけるクレアチナーゼの含有量との比が１
   対１０〜１００であることを特徴とする請求項１又は請
   求項２の分析素子。
4. 【請求項４】　　支持体上に試薬層とその上方に展開層
   を有する生物学的流体試料中のクレアチン及び／又はク
   レアチニンを分析する為の分析素子であって、クレアチ
   ニナーゼが試薬層に含有され、クレアチナーゼが試薬層
   と展開層とに含有され、さらにザルコシンオキシダーゼ
   が展開層に含有されることを特徴とする分析素子。
5. 【請求項５】　　支持体上に試薬層とその上方に展開層
   を有する生物学的流体試料中のクレアチン及び／又はク
   レアチニンを分析する為の分析素子であって、クレアチ
   ニナーゼが試薬層に含有され、クレアチナーゼ及びザル
   コシンオキシダーゼが前記試薬層及び展開層に含有され
   ることを特徴とする分析素子。