JPH043193B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、細胞懸濁液を製造し、それを継続し
た操作に移行させる方法に関するものである。

この種の方法は、細胞懸濁液、例えば酵母、細
菌、培養組織、微生物等の懸濁液を原細胞集落か
ら製造するためのものである。細胞懸濁液は、変
異株を分離するため、ごく一般的に述べるならば
細胞の形質を研究するため、載物板又は合成増殖
倍地を有する培養器に移される。

細胞を移す方法として、アメリカのレーダーバ
ーグが1952年に開発し、その後一般に普及するに
至つたレプリカ法が知られている。そこでは多数
の原細胞集落を培養器に培養し、次にこれをビロ
ードに押しつけ、そこからさらに別の平板に模写
される。この方法では、第２平板上の培地の成分
を変えるかまたは第２平板上の細胞を物理的もし
くは科学的に処理して、第１平板上の細胞の性質
を第２平板上の細胞の性質と対比させながら調べ
ることができる。

しかし、今日世界中で利用されているこの方法
では、第１平板から得られる細胞集落の大きさが
しばしば多様であるため第２平板上の細胞集落の
数がきわめてまちまちとなるのが欠点である。さ
らに、第２平板上の細胞膜の厚さも非常にまちま
ちとなることがあり、これが細胞特性の物理試
験、例えば紫外線照射や化学試験を困難にすると
ともに、例えば光透過率がまちまちであるため測
定結果を不正確なものにしてしまう。この方法で
は特性を調査し細胞を処理するうえで時には無条
件に必要となる細胞懸濁液を作ることができない
ことにも欠点を見ることができる。

本発明の目的は、個々の細胞集落上に細胞懸濁
液を確実に作ることのできる方法を提供すること
である。この目的は、 −増殖培地を入れた培養器において原細胞集落を
培養し、 −互いに平行に伸びた複数個の刃を有する刃形輸
送装置により細胞を原細胞集落から培養器に線
状に模写し（オン・ラインズ・スタンピング）、 −所定の培養期間の後、刃形輸送装置を第１模写
細胞に交差して略養器に押しつけ、→培養期間
に所定の間隔で成長した列状細胞集落から細胞
を取り出して別の培養器に模写し（オン・ポイ
ンツ・・スタクピング）、 −所定の培養期間の後、刃形輸送装置の刃の間隔
に対応する間隔で可動ピンを有するピン輸送装
置により、培養期間に成長した個々の細胞集落
から細胞を取り出し、多数の凹部を有する多試
料支持体にそれを移し、そのさい凹部に事前に
溶媒を入れておき、 −支持体を振盪し、 −この振盪で支持体内に生じた細胞懸濁液を、多
数の丸頭ピンを有する丸頭輸送装置により処理
培養器に移す。

以上の工程によつて達成される。これらの措置
により、まず個々の細胞集落を培養しそしてこの
個別細胞集落から継続処理のため細胞懸濁液を作
ることのできる方法が得られる。

この方法の変形態様では、 −ほぼ芝状の細胞集落（細胞芝）を培養し、 −多数の微細な可動ピンを有する細ピン輸送装置
により、細胞芝から細胞を取り出し、多試料支
持体の液状増殖培地を入れた凹部にそれを移
し、そのさい多試料支持体の凹部には培養に必
要な細胞と同量の液状増殖培地を入れておき、 −所定の培養期間の後多試料支持体の凹部内に生
じた細胞懸濁液を、多数の可動丸頭ピンを有す
る丸頭輸送装置により多試料支持体の凹部から
取り出し、継続した操作に移行させるため処理
培養器に移す、 以上の工程を予定している。この方法では刃形
輸送装置に代えて細ピン輸送装置が使用される。
この細ピン輸送装置は直径0.01〜0.1mmの微細な
ピンを有する。ピンの直径がこのように小さいこ
とにより細胞は原細胞集落から確実に取り出され
る。

この実施態様を構成するため、細胞添加後細胞
の成長を促進するため、多試料支持体を振盪し、
処理培養器に移す前に細胞懸濁液を緩衝液で希釈
することを予定している。従つてこの方法で製造
した細胞懸濁液は多資料支持体の凹部のなかに直
接得られ、増殖培地は培養期間終了後それが使い
尽くされるような量にしてある。代謝産物、およ
びその都度懸濁すべき細胞が消化できない栄養物
は、そのまま溶液に残る。一般にこれらの不純物
は障害とはならず、また障害となる場合でも緩衝
液でそれらを中和することができる。

本発明はさらに、限定量の細胞または細胞懸濁
液を輸送することのできる装置を提供することを
目的とする。この目的は、穴のなかで支持ピンを
可動支承した支持板によつて達成される。この実
施態様を構成するため、穴は支持板平面に対しほ
ぼ直角に延ばされ、支持ピンは穴のなかで自由に
動くことができ、またその自重により保持カラー
で支持板に保持される。移すべき細胞集落の厚さ
が種々異なつても常に同じ侵入深さを確保するた
め、保持カラーの外寸は穴の内寸より大きく、支
持板内の支持ピンの質量を個々に調整するため保
持カラーの大きさは個々に可変である。これらの
措置により、支持ピンは常に同じ深さだけ細胞集
落内に侵入し、そこからほぼ等量の細胞を取り出
すことになる。

細胞懸濁液を継続処理のため培養器に移すべ
く、支持ピンは支持板とは離れた側の端に丸頭を
有し、丸頭の外寸は支持ピンの丸頭を有する軸部
より大きい。これらの措置により、継続処理に必
要な量の細胞懸濁液を多試料支持体の凹部から取
り出して培養器に移すのに十分な大きな表面を有
する輸送装置が得られる。支持ピン間の間隔、ま
たは丸頭ピン間の間隔は、多試料支持体の凹部間
の間隔に合わせてある。

丸頭ピンの侵入深さを均一にするため、支持ピ
ンは軸部の丸頭とは反対側の端に載置した保持環
により保持され、そのさい支持ピンの保持環が着
脱自在なプラスチツク環であると有利である。こ
れらの装置により、丸頭ピンは支持板内で容易か
つ自由に移動可能に弾性保持される。

限定数の微生物細胞を細胞集落から培養器に移
しそして次にこれを個々の細胞集落に配分するに
あたつて、スペーサーにより互いにほぼ平行に離
間保持された複数個の刃から成る装置が使われ
る。そのため、刃はスペーサーにより互いに等間
隔に保持され、この間隔は支持板内の支持ピン相
互の間隔に等しい。隣接した細胞集落が相互に影
響し合つたり境界面で交錯する危険を低下させる
ため、刃はスペーサーの軸線に対しほぼ直角に延
ばして設けてある。

上述の方法を本発明により使用するため、この
方法は細胞懸濁液の製造に、またこの細胞懸濁液
は変異株の分離に使用される。上述の装置を本発
明により使用するため、この装置は細胞懸濁液の
製造に、またこの細胞懸濁液は変異株の分離に使
用される。

本発明を図面にあらわし、以下詳述する。

第１図に示したピン輸送装置１０は主に支持板
１１から成り、支持板には穴１３が特定間隔３４
で設けてある。この穴１３に支持ピン１２を差込
んで保持する。支持ピン１２は遊びを有して動き
易く、だが傾かないよう案内してある。支持板１
１の表面３０で支持ピン１２が保持カラー１４に
より保持され、その自重により穴１３内で自由に
ぶら下つている。支持ピン１２を穴１３に容易に
差込めるようにするため、支持ピンは突出部１５
を有する。突出部１５および保持カラー１４は支
持ピンの質量調整に利用することができる。

この種のピン輸送装置１０により、厚さが種々
異なる原細胞集落からでも限定量の細胞を取り出
すことができる。支持ピン１２はその質量が等し
いため細胞集落の成長高さが種々異なる場合でも
細胞集落に侵入する深さが均一となる。取り出し
た細胞は、第２図にあらわしたような試料支持体
１６に引き渡される。試料支持体１６はその平面
寸法が支持板１１とほぼ等しく、支持ピン１２の
位置に対応する位置に凹部１７を有する。

第３図にあらわした実施態様では、支持ピン１
２が支持板１１から離れた方の先端にリベツト状
の丸頭１８を有する。この丸頭はピン軸部２９に
対しアンダーカツト３１を有する。この支持ピン
１２を保持環１９が保持する。保持環は支持板１
１の丸頭１８とは反対の側で支持ピンの自由端に
嵌めてある。保持環１９は弾性材料、例えばプラ
スチツクから作られ、頑丈な受座で固定してあ
る。

第４図および第５図は多数の互いに平行な刃２
１から成る刃形輸送装置２０である。刃２１はス
ペーサー２２により均一間隔３４で保持され、保
持手段２３、例えばリベツトまたはナツトで結合
される。

この種の刃形輸送装置２０により、移すべき細
胞の縦に延びた模写刃形２５を培養器に模写する
ことができる。培養器２４に各種の増殖培地を塗
布し、縦に延びた細胞集落２７を発生させること
ができる。変異株を分離し、または点状細胞集落
を得るには、刃形輸送装置２０はいま一度列状細
胞集落２７に交差して押しつけられ、第７図に示
したような横に延びた模写刃形２６が別の培地支
持体に模写される。

この培養器３２も増殖培地を有するので、列状
細胞集落２７と交差するとき刃形輸送装置２０に
よつて持ち去られた細胞が新たな点状細胞集落２
８を発生させることができる。この点状細胞集落
２８が変異株を分離するのに役立ち、変異株をピ
ン輸送装置１０により受容して試料支持体１６に
移すことができる。点状細胞集落２８はしばしば
不規則に成長するが、これは増殖培地が種々異な
ることからひき起こされることがある。模写刃形
２５と２６との交差点のうち占拠されていない交
差点３３はここに押しつけられた細胞が、培養器
３２に塗布された増殖培地または試験培地に対し
特定の性質を有していることを示す。検査のた
め、この横に延びた模写刃形２６を、列状細胞集
落２７のために培養器と同一の増殖培地を有する
別の培養器２４にも押しつけることができる。

以上説明した装置を別の図示省略した装置のな
かで同形に構成し、操作の簡素化のため用意する
ことができる。

本提案方法により、そして本提案装置を使つ
て、個々の細胞集落を所定の相互間隔に配列し、
そこから細胞懸濁液を作ることは簡単にかつ確実
に行うことができる。細胞集落はその周囲に近接
して別の集落がないときには一層早く成長すると
いう細胞集落の性質が、最適な結果を得るために
利用できるようになる。

【図面の簡単な説明】

第１図は支持板とそれに差込んだ支持ピンの断
面図。第２図は第１図の装置で運ばれた細胞を受
容する多試料支持体の断面図。第３図は細胞懸濁
液を第２図の試料支持体に引渡すための丸頭輸送
装置の断面図。第４図は刃形輸送装置の正面図。
第５図は第４図の装置の平面図。第６図は第４図
の装置を培養器に模写した第１模写刃形およびそ
のうえに成長した列状細胞集落。第７図は第６図
の培養器に模写した模写刃形に交差して第４図の
装置を模写した第２模写刃形とそのうえに成長し
た点状細胞集落。 １０……輸送装置、１１……支持板、１２……
支持ピン、１３……穴、１４……保持カラー、１
５……突出部、１６……試料支持体、１７……凹
部、１８……丸頭、１９……保持環、２０……刃
形輸送装置、２１……刃、２２……スペーサー、
２３……保持手段、２４……培養器、２５……列
状模写刃形、２６……横方向模写刃形、２７……
列状細胞集落、２８……点状細胞集落、２９……
ピン軸部、３０……上面、３１……アンダーカツ
ト、３２……培養器、３３……占拠されていない
交差点、３４……間隔。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 細胞懸濁液を製造し、そしてそれを継続した
   操作に移行させる方法において、 増殖培地を入れた培養器に原細胞集落を培養
   し、互いに平行に延びた複数個の刃を有する刃形
   輸送装置により細胞を原細胞集落から培養器に線
   状に模写し（オン・ラインズ・スタンピング）、 所定の培養期間の後、刃形輸送装置を第１模写
   細胞に交差して培養器に模写し、培養期間に所定
   の間隔で成長した線状細胞集落から細胞を取り出
   して別の培養器に模写し（オン・ポインツ・スタ
   ンピング）、 所定の培養期間の後、刃形輸送装置の刃の間隔
   に対応する間隔で可動ピンを有するピン輸送装置
   により、培養期間に成長した個別細胞集落から細
   胞を取り出し、多数の凹部を有する多試料支持体
   にそれを移し、そのさい凹部に事前に溶媒を入れ
   ておき、 試料支持体を振盪し、 この振盪で支持体内に生じた細胞懸濁液を、多
   数の丸頭ピンを有する丸頭輸送装置により処理培
   養器に移す、 以上の工程を特徴とする細胞を限定輸送する方
   法。 ２ 丸頭輸送装置により細胞懸濁液を移す処理培
   養器は、載物板又は合成増殖培地を有する培養器
   とする特許請求の範囲第１項記載の細胞を限定輸
   送する方法。 ３ 細胞懸濁液を製造し継続した操作に移行させ
   る方法において、 ほぼ芝状の細胞集落（細胞芝）を培養し、 多数の微細な可動ピンを有するピン輸送装置に
   より、細胞芝から細胞を取り出し、多試料支持体
   の液状増殖培地を有する凹部にそれを移し、その
   さい多試料支持体の凹部に、培養に必要な細胞と
   同量の液状増殖培地を入れておき、 所定の培養期間の後多試料支持体の凹部内に生
   じた細胞懸濁液を、多数の可動丸頭ピンを有する
   丸頭輸送装置により多試料支持体の凹部から取り
   出し、継続した操作に移行させるため培養器に移
   す、 以上の工程を特徴とする細胞を限定輸送する方
   法。 ４ 細胞添加後細胞の成長を促進するため多試料
   支持体を振盪することを特徴とする特許請求の範
   囲第３項記載の細胞を限定輸送する方法。 ５ 培養器に移す前に細胞懸濁液を緩衝液で希釈
   することを特徴とする特許請求の範囲第３項又は
   第４項記載の細胞を限定輸送する方法。 ６ 丸頭輸送装置により細胞懸濁液を移す培養器
   は、載物板又は合成増殖培地を有する培養器とす
   る特許請求の範囲第３項記載の細胞を限定輸送す
   る方法。 ７ 細胞集落から細胞を取り出す為の細胞を輸送
   する装置であつて、支持板１１に穴１３が形成し
   てあり、穴１３のなかで支持ピン１２が、支持ピ
   ン１２の長手方向で移動可能に支持してあること
   を特徴とする細胞を限定輸送する装置。 ８ 穴１３を支持板平面に対しほぼ直角に延ばす
   ことを特徴とする特許請求の範囲第７項記載の細
   胞を限定輸送する装置。 ９ 支持ピン１２が穴１３のなかで自由に動くこ
   とができ、またその自重により保持カラー１４で
   支持板１１に保持されることを特徴とする特許請
   求の範囲第７項又は第８項記載の細胞を限定輸送
   する装置。 １０ 保持カラー１４の外寸が穴１３の内寸より
   大きく、支持板１１内の支持ピン１２の質量を
   個々に調整するため保持カラーの大きさが個々に
   可変であることを特徴とする特許請求の範囲第７
   項乃至第９項のいずれかに記載の細胞を限定輸送
   する装置。 １１ 支持ピン１２が支持板１１とは離れた側に
   丸頭１８を有することを特徴とする特許請求の範
   囲第７項乃至第１０項のいずれかに記載の細胞を
   限定輸送する装置。 １２ 丸頭の外寸が支持ピン１２の丸頭を有する
   軸部２９より大きいことを特徴とする特許請求の
   範囲第１１項記載の細胞を限定輸送する装置。 １３ 軸部２９の丸頭１８とは反対側の端に載置
   した保持環１９により支持ピン１２を保持するこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第１１項又は第１
   ２項記載の細胞を限定輸送する装置。 １４ 支持ピン１２の保持環１９が着脱自在なプ
   ラスチツク環であることを特徴とする特許請求の
   範囲第１３項記載の細胞を限定輸送する装置。 １５ スペーサー２２により互いにほぼ平行に離
   間保持された複数の刃２１を有する刃形輸送装置
   と、支持板１１に穴１３が形成してあり、穴１３
   のなかで支持ピン１２が、支持ピン１２の長手方
   向で移動可能に支持してあるピン輸送装置とで構
   成したことを特徴とする細胞を限定輸送する装
   置。 １６ スペーサー２２により刃２１を互いに等間
   隔３４に保持し、この間隔３４が相並んだ支持ピ
   ン１２の間隔に一致することを特徴とする特許請
   求の範囲第１５項記載の細胞を限定輸送する装
   置。 １７ 刃２１をスペーサー２２の軸線に対し、ほ
   ぼ直角に延ばして設けることを特徴とする特許請
   求の範囲第１５項又は第１６項に記載の細胞を限
   定輸送する装置。