JPH04321699A - 新規な利尿ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規な利尿ペプチドに
関し、より詳しくは、サメ心臓あるいは脳から得た利尿
ペプチドに関する。また、本発明はこのペプチドの製造
方法および、このペプチドを有効成分とする薬剤組成物
、特に降圧剤、利尿剤および血管拡張剤にも関する。

【０００２】

【従来の技術】心臓或いは脳が体液バランス調節に重要
な働きを担うホルモンを分泌していることは公知である
。このようなホルモンとしてこれまでに見出された利尿
ペプチドは、いずれもシスティンとシスティン間のジス
ルフィド結合　（Ｓ−Ｓ　結合）　により形成された１
７個のアミノ酸からなる環状構造　（基本骨格）　は高
度に保存されており、基本骨格内のアミノ酸の置換、あ
るいはＮ末端やＣ末端から延びた部分のアミノ酸の数お
よび種類に違いが見られる。現在、利尿ペプチドはその
由来およびアミノ酸配列のホモロジーから４種のタイプ
、即ちＡ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｖ型に分類され、それぞれ生
物学的活性に差異がある。

【０００３】Ａ型の心房性ナトリウム利尿ペプチド（以
下、ＡＮＰと略す）　はヒト、ラット、ブタ、ウナギ等
で構造が決定され、Ｂ型の脳ナトリウム利尿ペプチド（
以下、ＢＮＰと略す）はブタ、ヒト、ラット、ウナギ等
で構造が決定されている。最近、ブタの脳等で見出され
た第２のＢＮＰはＣ型ナトリウム利尿ペプチド（以下、
ＣＮＰと略す）と称され、基本骨格のＣ末端側にペプチ
ド鎖が延びていない点が特徴である。さらにウナギにお
いて、Ｃ末端側に延びる長いペプチドを有するＶ型の心
室ナトリウム利尿ペプチド（ＶＮＰ）の構造が決定され
た。

【０００４】これらのペプチドはいずれも、水・ナトリ
ウム利尿作用、降圧作用および平滑筋弛緩作用を有する
が、ペプチドの種類により各作用の強さに違いがある。 Ｃ型利尿ペプチドは、水・ナトリウム利尿作用について
はＡ型より弱いのに対して、平滑筋弛緩作用および降圧
作用は同等である傾向を示す。従って、Ｃ型のものは特
に降圧剤あるいは血管拡張剤として有用であると期待さ
れる。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、Ａ型
に比較して、水、ナトリウム利尿作用より平滑筋弛緩作
用および降圧作用が優勢な、Ｃ型の薬理活性スペクトル
を増強する利尿ペプチドおよび該ペプチドを含む薬剤を
提供することを目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】サメは体内と外界のナト
リウム濃度差が小さい海水に生息しているため、サメの
利尿ペプチドの主体はＣ型の薬理活性スペクトルをもつ
ことが推測される。本発明者等はこのような推測のもと
に研究を進めた結果、サメの心臓および脳より、強力な
直腸筋弛緩作用を有するペプチドを単離することに成功
し、このペプチドの構造を決定すると共に、このペプチ
ドがナトリウム利尿作用、降圧作用および平滑筋弛緩作
用を有することを見出し、本発明を完成させた。以下、
このペプチドをサメＣＮＰ（Ｃ−ｔｙｐｅ　ｎａｔｒｉ
ｕｒｅｔｉｃ　ｐｅｐｔｉｄｅ）と称する。

【０００７】即ち、本発明は、サメの心室、心房または
脳から得られ、１７個のアミノ酸からなる利尿ペプチド
基本骨格のＣ末端側のシスティンからＣ末端方向にはア
ミノ酸が結合していない、水・ナトリウム利尿作用、降
圧作用および平滑筋弛緩作用を有するペプチドを要旨と
する。

【０００８】このペプチドは、従来のＡＮＰ、ＢＮＰ、
ＣＮＰおよびＶＮＰと同様、降圧作用、利尿作用および
平滑筋弛緩作用を示し、利尿ペプチド基本骨格を有する
点で似ており、特に、基本骨格のＣ末端側にペプチド鎖
をもたない点で、ブタ、ラット、カエルおよびニワトリ
の各ＣＮＰ、ウナギＢＮＰおよびメダカ脳ＡＮＰとの相
同性が高い。しかし、基本骨格のＮ末端側システィンか
らＮ末端方向に４番目のアミノ酸がプロリンであること
、およびＮ末端方向に延びる５個以上の長いペプチド鎖
を有するＣ型の利尿ペプチドである点で従来のものと異
なる。

【０００９】本発明はさらに、次の一般式（１）　で示
されるアミノ酸配列を有するペプチドおよびその塩であ
る。

【００１０】 Ｘ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ
−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−
Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＭｅｔＳｅｒ−Ｇｌ
ｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−ＯＨ　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　…（１）　 （式中、Ｘ基は水素、または、Ｈ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａ
ｒｇ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌ
ｎ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ
−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−
Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌ
ｅｕ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌ
ｕ−Ｍｅｔ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｓｅｒ
−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｌａ−
Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌ
ｅｕ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｓｅ
ｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ
−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−
Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌ
ｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｐｒ
ｏ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ
−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−　で示される全配列、もし
くはこの配列においてＮ末端よりアミノ酸残基が順次１
個ずつ除去された部分配列で表され、Ｘ基のＮ末端の水
素はＴｙｒ−または、放射性アイソトープ標識体もしく
はアビジンと結合しうる官能基で置換されていてもよい
。ペプチド中のシスティン残基は相互にジスルフィド結
合で架橋されていてもよい。）上記一般式（１）　にお
ける下線部分の、システィンからシスティンまでの１７
個のアミノ酸からなるペプチド鎖がここでいう基本骨格
に相当する。また、以下の説明において（１）　式中の
Ｘ基を例えばＸ（１５）などで表すことがあるが、かっ
こ内の数字はＸ基中のアミノ酸残基の数を示すものであ
る。例えばＸ（１）　はＨ−Ｌｙｓ−を、Ｘ（１６）は
次のペプチド鎖を示す。

【００１１】Ｈ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａ
ｓｎ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ａｒ
ｇ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｘ基の
Ｎ末端の水素がＴｙｒ−または放射性アイソトープ標識
体もしくはアビジンと結合しうる官能基で置換されてい
る場合、本発明のペプチドを標識することができ、それ
を用いることにより、本発明のペプチドの血中や組織中
濃度の測定、あるいは半減期や作用部位の測定により本
発明ペプチドの代謝動態の解明や解析に利用できる。本
願明細書および図面で使用するアミノ酸の略号は次の意
味である。

【００１２】三文字表記 Ｇｌｙ　：　グリシン、　　　　　Ｌｅｕ　：　　ロイ
シン、　　　　　Ｉｌｅ　：　イソロイシン、 Ｓｅｒ　：　セリン、　　　　　　　Ｔｈｒ　：　　ト
レオニン、　　　　Ａｓｐ　：　アスパラギン酸、 Ａｓｎ　：　アスパラギン、　Ｌｙｓ　：　　リシン、
　　　　　　　Ａｒｇ　：　アルギニン、 Ｃｙｓ　：　システィン、　　　Ｐｈｅ　：　　フェニ
ルアラニン、Ｍｅｔ　：　メチオニン、　　　Ｔｒｐ　
：　　トリプトファン、Ｔｙｒ：　チロシン Ｇｌｕ　：　グルタミン酸、　Ｈｉｓ　：　　ヒスチジ
ン、　　　　Ａｌａ　：　アラニン、 Ｇｌｎ　：　グルタミン、　　　Ｖａｌ　：　　バリン
　　　　　　　　　　Ｐｒｏ　：　プロリン サメ心房あるいは心室より得られるサメＣＮＰの主体は
、一般式（１）　においてＸがＸ（１６）、Ｘ（１７）
、およびＸ（９３）であるペプチドであり、脳から得ら
れるサメＣＮＰの主体は一般式（１）　においてＸが水
素およびＸ（９３）であるペプチドである。

【００１３】本発明のペプチドは、一般式（１）　にお
いてＸ基を除いたアミノ酸配列をその構造内に含有して
いれば、Ｘ基の９３個のアミノ酸残基からなるペプチド
鎖のいずれの位置で切断されたものであってもよい。即
ち、Ｘ基が水素、またはＸ（１）　〜Ｘ（９３）である
ペプチドを含む。これらのペプチドは後述のように利尿
作用、降圧作用および平滑筋弛緩作用を示し、有用であ
る。

【００１４】本発明の利尿ペプチドの製造方法としては
、該ペプチドを産生する細胞より回収する方法がある。 産生細胞としては、摘出した心房、心室あるいは脳組織
細胞、それらを細胞培養により増殖させた細胞、あるい
は遺伝子組み換え手段によって目的のペプチドを産生す
るようにした細胞がある。また、細胞培養上清から回収
する方法もある。これらの細胞あるいは培養上清より本
発明の利尿ペプチドを単離精製するには、抽出、ゲル濾
過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー
、高速液体クロマトグラフィー、電気泳動、再結晶等の
ペプチドの単離精製に通常用いられる処理を組み合わせ
て行うことができ、特に逆相の高速液体クロマトグラフ
ィーを含む方法が好ましい。

【００１５】あるいは、このように単離精製したサメＣ
ＮＰの分析により判明したアミノ酸配列の情報に基づき
、アミノ酸から化学的に合成することができる。合成法
としては、例えば固相法アミノ酸合成法、液相法アミノ
酸合成法等の慣用のペプチド合成方法が使用できる。 サメＣＮＰの単離精製方法の具体例を次に示す。まず、
多数匹のサメから心臓あるいは脳を摘出する。これはそ
のまま使用してもよいが、心臓組織細胞あるいは脳細胞
を細胞培養により増殖させた培養細胞あるいは培養上清
を用いることも可能である。

【００１６】心室組織を出発材料とした例を次に示す。 摘出した心臓は心房と心室に分け、心室組織のみを蒸留
水中で煮沸し、冷却後、酢酸を添加しホモジナイズして
抽出を行う。得られた抽出液を遠心分離して上清を得、
減圧乾固後、酢酸に溶解し、アセトンを加えて遠心分離
する。沈渣を酢酸に溶解してゲル濾過および脱塩を行う
。ヒヨコ直腸標本弛緩活性のあるフラクションを陽イオ
ン交換クロマトグラフィーに供与し、ピーク１、２およ
び３を得た。次いでヒヨコ直腸標本弛緩活性を目印に逆
相高速液体クロマトグラフィーにより精製する。

【００１７】精製したサメＣＮＰおよびペプチダーゼに
よって限定分解したサメＣＮＰフラグメントを、自動ア
ミノ酸シークエンサーによりアミノ酸配列を決定する。 ピーク１を出発物質としたサメＣＮＰ（１−１１５）の
アミノ酸配列は後記配列表の配列番号１で示す通りであ
る。 これは一般式（１）　においてＸ基が９３個のアミノ酸
残基からなる、即ちＸ（９３）であるペプチドである。 また、得られたペプチドをアミノ酸分析して、次のアミ
ノ酸組成を得た。

【００１８】Ａｓｐ　１２．１（１３）、Ｔｈｒ　１．
１（１）、Ｓｅｒ　１０．７（１２）、Ｇｌｕ　１６．
５（１５）、Ｐｒｏ　７．７（８）、Ｇｌｙ　１１．１
（１０）、Ａｌａ　６．９（７）、ＣＭ−Ｃｙｓ　１．
５（２）　、Ｖａｌ　１．６（２）、Ｍｅｔ　１．６　
（２）　、Ｉｌｅ　１．９　（２）　、Ｌｅｕ　１５．
５（１７）、Ｔｙｒ　１．４（２）、　　Ｐｈｅ　３．
０　（３）　、Ｔｒｐ　−（１）　、Ｈｉｓ　０．４（
１）、Ｌｙｓ　３．６　（４）　、Ａｒｇ　１１．３　
（１３）ただし、括弧内の数字は理論モル比である。分
子量は１２，８８３であった。

【００１９】ピーク２を出発物質としたサメＣＮＰ（７
７−１１５）とサメＣＮＰ（７８−１１５）はそれぞれ
後記配列表の配列番号２および３で示すアミノ酸配列を
有し、サメＣＮＰ（１−１１５）　の構造内に含まれる
ペプチドであった。このペプチドは一般式（１）　にお
いてＸがＸ（１７）およびＸ（１６）の場合である。ま
た、サメ脳より得たサメＣＮＰ（９４−１１５）は、後
記配列表の配列番号４で示すアミノ酸配列を有し、サメ
ＣＮＰ（１−１１５）　、サメＣＮＰ（７７−１１５）
およびサメＣＮＰ（７８−１１５）の構造内に含まれる
ペプチドであった。このペプチドは一般式（１）　にお
いてＸが水素の場合で、２２個のアミノ酸からなる。

【００２０】

【作用】本発明のサメＣＮＰは、水・ナトリウム利尿作
用、降圧作用および平滑筋弛緩作用およびヒヨコ直腸標
本弛緩作用を有する。従って、利尿剤、降圧剤および血
管拡張剤等の治療剤として利用できる。例えば、水分の
過剰停滞が見られるうっ血性心不全に対して利尿剤とし
て、また、血管拡張効果が重要な役割を果たす高血圧症
の治療に有用である。また、治療に用いられるだけでな
く、生体の体液バランス調節機能の解析や循環器系疾患
患者等の病態の解明の手がかりともなり得る。

【００２１】治療剤として投与する場合は、静脈内注射
、筋肉内注射、皮下注射等の非経口的投与、あるいは経
口投与により、または点眼剤等の局所投与により行うこ
とができる。また、直腸、舌下、鼻内などの消化管以外
の粘膜から吸収させる投与方法も可能であり、この場合
例えば座剤、舌下錠、点鼻スプレー剤等の形で投与でき
る。本発明の場合、静脈内注射が好ましい。投与量は、
０．０１ｎ　ｍｏｌ　〜１００ｎ　ｍｏｌ／　ｋｇであ
り、静脈内注射の場合、体重および期待効果に応じた投
与量を通常１〜１０ｍｌの生理的食塩水に溶解して用い
る。

【００２２】本発明のペプチドを薬剤として用いる場合
は、該ペプチドおよび添加剤を含む乳剤、水和剤、錠剤
、水溶液、粉剤、粒剤、カプセル剤、丸剤等の種々の形
態に製剤化して使用できる。上記製剤化に用いる添加剤
には薬理的に許容しうる賦形剤、崩壊剤、潤滑剤、結合
剤、分散剤、可塑剤、充填剤、担体等が使用できる。 賦形剤としては乳糖、ぶどう糖等が、崩壊剤としては澱
粉、寒天末等が、潤滑剤としてはタルク、流動パラフィ
ン等が、結合剤としては単シロップ、エタノール等が、
分散剤としてはメチルセルロース、エチルセルロース等
が、可塑剤としてはグリセリン、澱粉等が例示できる。

【００２３】サメＣＮＰ（１−１１５）　以外に、Ｘ基
のアミノ酸残基がＮ末端より１個ずつ順次欠如したペプ
チド、例えばサメＣＮＰ（７７−１１５）、サメＣＮＰ
（７８−１１５）、サメＣＮＰ（９４−１１５）につい
ても、同様に水・ナトリウム利尿作用、降圧作用および
平滑筋弛緩作用がある。

【００２４】

【実施例】

【００２５】

【実施例１】 サメＣＮＰの単離・精製 サメより心房のみ（７ｇ）、心室のみ（４２ｇ）　およ
び脳　（５３ｇ）　を摘出した。心室を材料とし、７倍
量の蒸留水中で５分間煮沸して冷却後、酢酸を添加して
１Ｍとし、ポリトロンミキサーでホモジナイズすること
により抽出を行った。得られた抽出液を２５０００　×
ｇで３０分間遠心分離し、上清に冷却したアセトンを滴
加して６７％とした後、１６０００　×ｇで３０分間遠
心分離して上清を得た。この上清を減圧乾固し、得られ
た残渣を１Ｍ酢酸で溶解後アセトンを加えて９９％とし
、１６０００×ｇで３０分間遠心分離し沈渣を得た。こ
の沈渣を１Ｍ酢酸に再溶解し、セファデックスＧ２５　
（ファルマシア製、５×８２ｃｍ、溶離液：１Ｍ酢酸、
流速８５ｍｌ／ｈ、フラクションサイズ：７ｍｌ）　で
ゲル濾過および脱塩を行った。

【００２６】ヒヨコ直腸標本弛緩活性のあるフラクショ
ンを集め、陽イオン交換高速液体クロマトグラフィー（
日本分光製、ＩＥＣ−ＣＭ、７．５　×７５ｍｍ、流速
１ｍｌ／　分、フラクションサイズ４ｍｌ　）　に供し
た。１０％アセトニトリルを含む酢酸アンモニウム（ｐ
Ｈ６．８　）の１０ｍＭから１Ｍの直線濃度勾配で溶出
した（８０分間）　。ヒヨコ直腸標本弛緩活性のある画
分　（ピーク１、ピーク２、ピーク３）を得た（図１）
。

【００２７】各ピーク毎に逆相高速液体クロマトグラフ
ィー　（東ソー製、ＯＤＳ−１２０Ｔ、４．６　×２５
０　ｍｍ、流速１ｍｌ／　分）　にかけ、０．１　％ト
リフルオロ酢酸を含むアセトニトリルの１０％から６０
％の直線濃度勾配で溶出した　（４０分間）　。活性の
ある画分を再度、逆相高速液体クロマトグラフィー　（
同上）　にかけ、０．１　％トリフルオロ酢酸を含むア
セトニトリルの３０％から５０％の直線濃度勾配で溶出
した　（４０分間）　。サメ心室を材料としたピーク１
からは８．３ｎｍｏｌ　の純粋なサメＣＮＰ　（１−１
１５）を得た。またピーク２からはサメＣＮＰ（７７−
１１５）、サメＣＮＰ（７８−１１５）を得た。サメ心
房を材料とした場合も心室と同様のサメＣＮＰが得られ
た。また、サメ脳を材料とした場合には、サメＣＮＰ（
１−１１５）　の他に、サメＣＮＰ（９４−１１５）が
得られた。

【００２８】

【実施例２】 サメＣＮＰのアミノ酸配列解析 単離精製した各サメＣＮＰをＳ−カルボキシルメチレー
ト処理して、気相法自動アミノ酸シークエンサー　（ア
プライドバイオシステム社製、４７０Ａ／１２０Ａ　型
）　を用いてアミノ酸配列を解析した。サメＣＮＰ　（
１−１１５）は、一定のアミノ酸配列部分のみ限定的に
分解するペプチダーゼを用いて分解したフラグメントに
ついても自動アミノ酸シークエンサーに供した。その酵
素分解処理は　（１）リジルエンドペプチダーゼを用い
、４Ｍ尿素を含む０．１　Ｍ重炭酸ナトリウム（ｐＨ８
．３）下で４時間、３０℃処理する（ＬＥ）。（２）エ
ンドプロティナーゼＡｓｐ−Ｎを用い、１Ｍ尿素と２０
ｍＭ塩酸メチルアミンを含む５０ｍＭリン酸緩衝液　（
ｐＨ８．０）下で４時間３７℃処理する　（ＤＮ−Ａ）
。（３）　エンドプロティナーゼＧｌｕ−Ｃを用い、１
Ｍ尿素を含む０．１　Ｍ重炭酸アンモニウム　（ｐＨ７
．８）下で３時間３７℃処理する（Ｖ８）。これらの酵
素分解処理を個々に行った後、逆相高速液体クロマトグ
ラフィー（実施例１の条件と同様）にかけ、０．１　％
トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリルの２％から５０
％の直線濃度勾配で分画した　（７５分間）。紫外線吸
収が見られるピークを自動アミノ酸シークエンサーに供
与した。これによって得られたアミノ酸配列を図２に示
す。

【００２９】

【実施例３】 サメＣＮＰの合成 実施例１で得られたサメＣＮＰ　（９４−１１５）　と
同じアミノ酸配列を有するペプチドを化学合成した。ア
プライド・バイオシステムズ社製全自動ペプチド合成機
を用い、エフモック（Ｆｍｏｃ）法によるアミノ酸のカ
ップリングを行った。合成品は逆相高速液体クロマトグ
ラフィー　（Ｗａｔｅｒｓ　ＰｒｅｐＬＣ　Ｓｙｓｅｍ
　５００）によって精製した。さらに、実施例１で用い
た逆相高速液体クロマトグラフィー　（東ソー、ＯＤＳ
−１２０Ｔ）　によって再精製し、この合成ペプチドが
、実施例１で単離精製した天然のサメＣＮＰ　（９４−
１１５）　と同一の溶出位置にあることを確認した。

【００３０】

【実施例４】実施例３で合成したペプチドを生理食塩水
に溶解し、１０−４Ｍの溶液を注射剤とした。この注射
剤を用いて降圧作用、利尿作用、ヒヨコ直腸標本弛緩活
性および平滑筋弛緩活性を検討した。

【００３１】試験法 〔利尿作用〕および〔降圧作用〕ＳＤ系ラットの膀胱に
挿入したカニューレから尿を採取する。同時に大腿動脈
に挿入したカニューレによって血圧を測定する。ｄｅ　
Ｂｏｌｄ　等の方法（Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ．　２８：８９
−９４，　１９８１）　に準じる。 〔血管平滑筋弛緩活性〕Ｃｕｒｒｉｅ等の発見した方法
　（Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２１：５８５−５９２，１９８
４）　によりラット大動脈標本の弛緩活性を測定する。 〔ヒヨコ直腸標本弛緩活性〕Ｃｕｒｒｉｅ等の発見した
方法　（Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２１：５８５−５９２，　
１９８４）により、ヒヨコ直腸標本弛緩活性を測定する
。その結果、利尿作用（図３）、降圧作用（図４）、ヒ
ヨコ直腸標本弛緩活性（図５）、平滑筋弛緩活性が確認
された。

【００３２】

【実施例５】実施例１で得られたペプチドのサメＣＮＰ
（７７−１１５）　とサメＣＮＰ　（７８−１１５）と
同じアミノ酸配列を有するペプチドを実施例３に記載の
方法で化学合成した。

【００３３】

【実施例６】実施例５で合成したペプチドについて、実
施例４と同様の検討を行った。結果は１ｎＭの投与でヒ
ヨコ直腸標本において１００　％の弛緩活性を示し、サ
メＣＮＰ　（９４−１１５）　と同程度の作用を示した
。

【００３４】

【実施例７】実施例１で精製したサメＣＮＰ（１−１１
５）　について、実施例４と同様の検討を行った。ヒヨ
コ直腸標本において弛緩活性を示した。

【００３５】

【発明の効果】以上詳述したように、本発明によれば新
規なペプチドを提供することができる。このペプチドは
降圧作用、利尿作用および平滑筋弛緩作用を示すので、
降圧剤、利尿剤または血管拡張剤等の治療剤として有用
であり、特に平滑筋弛緩作用および降圧作用の強いＣ型
の利尿ペプチドであるので、血管拡張剤あるいは降圧剤
としての利用が期待される。また治療剤としての用途に
加え、体液バランス調節機能や高血圧の原因解明にも重
要な役割を果たすことが期待される。

【００３６】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：１１５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ドチザメ　（Ｓｃｙｌｉｏｒｈｉｎｕｓ　ｃａ
ｎｉｃｕｌａ　、Ｔｒｉａｋｉｓ　ｓｃｙｌｌｉａ） 組織名：心室、心房、脳 配列番号：２ 配列の長さ：３９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ドチザメ　（Ｓｃｙｌｉｏｒｈｉｎｕｓ　ｃａ
ｎｉｃｕｌａ　、Ｔｒｉａｋｉｓ　ｓｃｙｌｌｉａ） 組織名：心室、心房、脳 配列番号：３ 配列の長さ：３８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ドチザメ　（Ｓｃｙｌｉｏｒｈｉｎｕｓ　ｃａ
ｎｉｃｕｌａ　、Ｔｒｉａｋｉｓ　ｓｃｙｌｌｉａ） 組織名：心室、心房、脳 配列番号：４ 配列の長さ：２２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ドチザメ　（Ｓｃｙｌｉｏｒｈｉｎｕｓ　ｃａ
ｎｉｃｕｌａ　、Ｔｒｉａｋｉｓ　ｓｃｙｌｌｉａ） 組織名：脳、心室、心房

【図面の簡単な説明】

【図１】サメ心室組織を出発材料とした場合の陽イオン
交換高速クロマトグラフィーの各分画の紫外吸収度　（
２８０ｎｍ）および、ヒヨコ直腸標本弛緩活性をヒトＡ
ＮＰ　（ｈＡＮＰ）活性に換算した値　（黒抜きバー）
　を示す図である。

【図２】サメＣＮＰ（１−１１５）　のアミノ酸配列の
解析結果を示す図である。

【図３】ラットに注入した種々の濃度のサメＣＮＰ（ｄ
ｆＣＮＰ）　のナトリウム利尿作用をヒトＡＮＰ　（　
ｈＡＮＰ）　と比較した図である。

【図４】ラットに注入した種々の濃度のサメＣＮＰ　（
ｄｆＣＮＰ）の降圧作用をヒトＡＮＰ　（　ｈＡＮＰ）
　と比較した図である。

【図５】種々の濃度のサメＣＮＰ（ｄｆＣＮＰ）　のヒ
ヨコ直腸標本弛緩活性をヒトＡＮＰ（ｈＡＮＰ）と比較
した図である。

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　サメの心房、心室あるいは脳から得ら
   れ、１７個のアミノ酸からなる利尿ペプチド基本骨格の
   Ｃ末端側システィンからＣ末端方向にはアミノ酸が結合
   していない、水・ナトリウム利尿作用、降圧作用および
   平滑筋弛緩作用を有するペプチド。
2. 【請求項２】　　次の一般式で表されるペプチドおよび
   その塩。 Ｘ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ
   −Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−
   Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＭｅｔＳｅｒ−Ｇｌ
   ｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−ＯＨ （式中、Ｘ基は水素、または、Ｈ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａ
   ｒｇ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌ
   ｎ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ
   −Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−
   Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌ
   ｅｕ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌ
   ｕ−Ｍｅｔ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｓｅｒ
   −Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｌａ−
   Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌ
   ｅｕ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｓｅ
   ｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ
   −Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−
   Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌ
   ｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｐｒ
   ｏ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ
   −Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−　で示される全配列、もし
   くはこの配列においてＮ末端よりアミノ酸残基が順次１
   個ずつ除去された部分配列で表され、Ｘ基のＮ末端の水
   素は、Ｔｙｒ−または、放射性アイソトープ標識体もし
   くはアビジンと結合しうる官能基で置換されていてもよ
   い。ペプチド中のシスティン残基は相互にジスルフィド
   結合で架橋されていてもよい。）
3. 【請求項３】　　配列番号１〜４のいずれかのアミノ酸
   配列を有する請求項２記載のペプチドおよびその塩。
4. 【請求項４】　　請求項１または２記載のペプチドを産
   生する細胞より該ペプチドを回収することを特徴とする
   請求項１または２記載のペプチドの製造方法。
5. 【請求項５】回収を高速液体クロマトグラフィーを含む
   方法によって行う請求項４記載の方法。
6. 【請求項６】　　請求項１または２記載のペプチドまた
   はその塩を有効成分とし、薬剤的に許容しうる添加剤を
   含有する薬剤組成物。
7. 【請求項７】　　請求項１または２記載のペプチドまた
   はその塩を有効成分とする降圧剤。
8. 【請求項８】　　請求項１または２記載のペプチドまた
   はその塩を有効成分とする利尿剤。
9. 【請求項９】　　請求項１または２記載のペプチドまた
   はその塩を有効成分とする血管拡張剤。