JPH04324355A - アミノ酸分析法 - Google Patents
アミノ酸分析法Info
- Publication number
- JPH04324355A JPH04324355A JP9396791A JP9396791A JPH04324355A JP H04324355 A JPH04324355 A JP H04324355A JP 9396791 A JP9396791 A JP 9396791A JP 9396791 A JP9396791 A JP 9396791A JP H04324355 A JPH04324355 A JP H04324355A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- proline
- amino acid
- naclo
- concentration
- acid
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- Pending
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】アミノ酸分析においてプレラベル
法が最近用いられるようになってきた。これにはプレラ
ベル化を行うにあたり前処理機能付きオートサンプラの
製品化にある。これを利用してアミノ酸をオルトフタル
アルデヒド（以下ＯＰＡと略す）にてプレラベル，分離
、そして螢光検出器にて検出しているが、反応試薬濃度
によっては、プロリンが検出されない。反応試薬の一つ
である次亜塩素酸ナトリウムの濃度を変更することによ
りプロリンの検出を可能とし併せて、シスチン，アンモ
ニヤの検出を可能とした。
法が最近用いられるようになってきた。これにはプレラ
ベル化を行うにあたり前処理機能付きオートサンプラの
製品化にある。これを利用してアミノ酸をオルトフタル
アルデヒド（以下ＯＰＡと略す）にてプレラベル，分離
、そして螢光検出器にて検出しているが、反応試薬濃度
によっては、プロリンが検出されない。反応試薬の一つ
である次亜塩素酸ナトリウムの濃度を変更することによ
りプロリンの検出を可能とし併せて、シスチン，アンモ
ニヤの検出を可能とした。
【０００２】
【従来の技術】アミノ酸分析プレラベル法は、Ｇ．Ａｌ
ｉｑｕｒｅｓｈｉ， Ｓ．Ｖａｎ ｄｅｎ ｂｅｒｇ
らが Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．２７９ ８３〜８
９（１９８４）に、用手法によるアミノ酸分析を紹介し
ている。但し、この時はアミノ酸の中でも特定成分のヒ
スチジン（Ｈｉｓ），３−メチルヒスチジン（３−Ｍ−
Ｈｉｓ），チロシン（Ｔｙｒ），フェニールアラニン（
Ｐｈｅ）の４成分であった。
ｉｑｕｒｅｓｈｉ， Ｓ．Ｖａｎ ｄｅｎ ｂｅｒｇ
らが Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．２７９ ８３〜８
９（１９８４）に、用手法によるアミノ酸分析を紹介し
ている。但し、この時はアミノ酸の中でも特定成分のヒ
スチジン（Ｈｉｓ），３−メチルヒスチジン（３−Ｍ−
Ｈｉｓ），チロシン（Ｔｙｒ），フェニールアラニン（
Ｐｈｅ）の４成分であった。
【０００３】その後の文献ではプロリンの検出はされて
いなかった。また、試みたが検出できなかった（従来ポ
ストラベルＯＰＡ法では問題無く検出されている）。
いなかった。また、試みたが検出できなかった（従来ポ
ストラベルＯＰＡ法では問題無く検出されている）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】アミノ酸分析は、ポス
トラベルとプレラベル法の二通りがあるのは前述したが
、前処理付きオートサンプラを用いてアミノ酸をラベル
化することができ、且つ迅速分析ができれば装置構成の
簡略化が図れ蛋白質やペプチド構成のアミノ酸配列を決
定する上で強力な装置となる。
トラベルとプレラベル法の二通りがあるのは前述したが
、前処理付きオートサンプラを用いてアミノ酸をラベル
化することができ、且つ迅速分析ができれば装置構成の
簡略化が図れ蛋白質やペプチド構成のアミノ酸配列を決
定する上で強力な装置となる。
【０００５】特にアミノ酸構成成分の一つであるプロリ
ンの検出は重要な要素である。プロリンは二級アミンの
ため次亜塩素酸ナトリウムを用いて一級アミンに酸化し
ＯＰＡと反応して検出するが、従来法のポストラベル法
の試薬（１．水酸化ナトリウム、２．次亜塩素酸ナトリ
ウム、３．ＯＰＡ）をそのまま引用したのでは、プロリ
ンの検出は全くできない。
ンの検出は重要な要素である。プロリンは二級アミンの
ため次亜塩素酸ナトリウムを用いて一級アミンに酸化し
ＯＰＡと反応して検出するが、従来法のポストラベル法
の試薬（１．水酸化ナトリウム、２．次亜塩素酸ナトリ
ウム、３．ＯＰＡ）をそのまま引用したのでは、プロリ
ンの検出は全くできない。
【０００６】ここでは、次亜塩素酸ナトリウム濃度を反
応ビンの中で最適な量にしプロリンの検出を可能にする
分析法の提供を目的とした。
応ビンの中で最適な量にしプロリンの検出を可能にする
分析法の提供を目的とした。
【０００７】
【課題を解決するための手段】前処理機能付オートサン
プラを用いて、試料のプレラベル化を行うとき、各反応
試薬、試料（１．水酸化ナトリウム試薬、２．次亜塩素
酸ナトリウム試薬、３．試料、４．ＯＰＡ試薬、５．１
，２，３，４混合液のｐＨ調整液）の検討を行い、次亜
塩素酸ナトリウム濃度の低いことが判明した。
プラを用いて、試料のプレラベル化を行うとき、各反応
試薬、試料（１．水酸化ナトリウム試薬、２．次亜塩素
酸ナトリウム試薬、３．試料、４．ＯＰＡ試薬、５．１
，２，３，４混合液のｐＨ調整液）の検討を行い、次亜
塩素酸ナトリウム濃度の低いことが判明した。
【０００８】ポストラベル法に比較し４０〜１２０倍に
することで解決した。
することで解決した。
【０００９】
【作用】プロリンを次亜塩素酸ナトリウムで二級アミン
から一級アミンに変換する。
から一級アミンに変換する。
【００１０】反応式は
【００１１】
【化１】
【００１２】となる。
【００１３】ポストラベル法の場合は連続的に反応試薬
を送液し続けるため溶出したアミノ酸に対し最適な量と
なっている。
を送液し続けるため溶出したアミノ酸に対し最適な量と
なっている。
【００１４】本法では、反応ビン（バッチ法）の中で行
うため反応試薬の濃度を調整する必要が有り、ポストラ
ベル法に比較し、約４０〜１２０倍加えることで二級ア
ミンから一級アミンに（酸化）変換することができた。
うため反応試薬の濃度を調整する必要が有り、ポストラ
ベル法に比較し、約４０〜１２０倍加えることで二級ア
ミンから一級アミンに（酸化）変換することができた。
【００１５】今回、酸化剤として次亜塩素酸ナトリウム
を用いたが、クロラミンＴを用いる方法もある。
を用いたが、クロラミンＴを用いる方法もある。
【００１６】
【実施例】以下、本発明の一実施例を図１〜図４により
説明する。
説明する。
【００１７】図１は、液体クロマトグラフの流路系統図
を示す。１ 溶離液，２ポンプ，３ 前処理付オー
トサンプラ，４ カラムとカラムオーブン，５ 螢
光検出器，６ デ−タ処理装置、となっている。
を示す。１ 溶離液，２ポンプ，３ 前処理付オー
トサンプラ，４ カラムとカラムオーブン，５ 螢
光検出器，６ デ−タ処理装置、となっている。
【００１８】図２は、図１の１の前処理付オートサンプ
ラの外観を示す。８は、反応試薬ラックで４個設置する
ことができる。９は試料ラックで、１０は反応ラックで
ある。
ラの外観を示す。８は、反応試薬ラックで４個設置する
ことができる。９は試料ラックで、１０は反応ラックで
ある。
【００１９】プレラベル化の順序として最初に、反応試
薬である０．６Ｎ水酸化ナトリウム液を３００μｌ、次
に、３ｍｌ／ｌの次亜塩素酸ナトリウム（１０％／水溶
液）溶液３００μｌと混合する。この時の濃度は図３に
示す濃度変化に対するプロリンの感度を参照としている
。
薬である０．６Ｎ水酸化ナトリウム液を３００μｌ、次
に、３ｍｌ／ｌの次亜塩素酸ナトリウム（１０％／水溶
液）溶液３００μｌと混合する。この時の濃度は図３に
示す濃度変化に対するプロリンの感度を参照としている
。
【００２０】次に試料１００μｌ、ホウ酸とブリッジ−
３５の溶液中のＯＰＡを４９０μｌと最終的に分離カラ
ムを保護する目的で０．９６Ｎ 硫酸／水３００μｌを
加え最終ｐＨを酸性側にする。各試薬，試料の混合は全
てエアバブリング法を採用している。分離に関しては、
２５ｍＭりん酸緩衝液とメチルアルコールの混合比をコ
ントロールして行っている。
３５の溶液中のＯＰＡを４９０μｌと最終的に分離カラ
ムを保護する目的で０．９６Ｎ 硫酸／水３００μｌを
加え最終ｐＨを酸性側にする。各試薬，試料の混合は全
てエアバブリング法を採用している。分離に関しては、
２５ｍＭりん酸緩衝液とメチルアルコールの混合比をコ
ントロールして行っている。
【００２１】分離カラムは、シリカゲルＯＤＳを用い、
検出器に螢光光度計を、測定波長は、励起波長３４０ｎ
ｍ，螢光波長４５０ｎｍで行っている。
検出器に螢光光度計を、測定波長は、励起波長３４０ｎ
ｍ，螢光波長４５０ｎｍで行っている。
【００２２】図４に得られたクロマトグラムを示す。分
析成分はシスチン（Ｃｙｓ）からリジン（Ｌｙｓ）まで
１８成分の分離を示す。
析成分はシスチン（Ｃｙｓ）からリジン（Ｌｙｓ）まで
１８成分の分離を示す。
【００２３】
【発明の効果】本発明によれば、アミノ酸分析法の一手
段として新しくプレラベルＯＰＡ法によってもアミノ酸
１８成分の分析が可能となった。且つ、反応試薬の節約
と分析時間の短縮が計れ、従来、蛋白ペプチドの構成ア
ミノ酸分析に長時間要していたものが２０分以内で測定
可能となった。装置構成においても大幅に簡略化される
。
段として新しくプレラベルＯＰＡ法によってもアミノ酸
１８成分の分析が可能となった。且つ、反応試薬の節約
と分析時間の短縮が計れ、従来、蛋白ペプチドの構成ア
ミノ酸分析に長時間要していたものが２０分以内で測定
可能となった。装置構成においても大幅に簡略化される
。
【００２４】分析精度向上においても内部標準物質とし
てグルコサミン酸等を入れることにより向上を計ること
ができる。
てグルコサミン酸等を入れることにより向上を計ること
ができる。
【図１】本発明を利用した分析システムの流路系統図で
ある。
ある。
【図２】前処理機能付オートサンプラの外観図である。
【図３】プロリンの酸化剤である次亜塩素酸ナトリウム
の濃度がプロリンに対してどのように関与するかを示す
図である。
の濃度がプロリンに対してどのように関与するかを示す
図である。
【図４】アミノ酸分析のクロマトグラムを示す図である
。
。
１…容離液、２…ポンプ、３…前処理機能付オートサン
プラ、４…分離部、５…螢光検出器、６…データ処理装
置。
プラ、４…分離部、５…螢光検出器、６…データ処理装
置。
Claims (1)
- 【請求項１】送液系，試料前処理および試料注入系，分
離系，検出系からなる液体クロマトグラフにおいて、試
料前処理および注入系にて、アミノ酸に発螢光剤オルト
フタルアルデヒドを用いて誘導体化後、螢光検出器で検
出する方法で、二級アミンであるプロリンの検出に際し
て、一級アミンに酸化する次亜塩素酸ナトリウム（１０
％水溶液）濃度を０．２５ｍｌ〜１５ｍｌ／ｌの範囲に
することにより検出できることを特徴とするアミノ酸分
析法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9396791A JPH04324355A (ja) | 1991-04-24 | 1991-04-24 | アミノ酸分析法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9396791A JPH04324355A (ja) | 1991-04-24 | 1991-04-24 | アミノ酸分析法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04324355A true JPH04324355A (ja) | 1992-11-13 |
Family
ID=14097176
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9396791A Pending JPH04324355A (ja) | 1991-04-24 | 1991-04-24 | アミノ酸分析法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04324355A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015049218A (ja) * | 2013-09-04 | 2015-03-16 | 株式会社島津製作所 | 液体クロマトグラフによるプレラベルアミノ酸分析法 |
| CN108949896A (zh) * | 2018-08-08 | 2018-12-07 | 北京瑞荧仪器科技有限公司 | 一种空气中微生物的荧光标记方法及其应用 |
| CN110095535A (zh) * | 2019-04-22 | 2019-08-06 | 山东理工职业学院 | 一种复方氨基酸注射液（5%）中胱氨酸的含量测定方法 |
-
1991
- 1991-04-24 JP JP9396791A patent/JPH04324355A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015049218A (ja) * | 2013-09-04 | 2015-03-16 | 株式会社島津製作所 | 液体クロマトグラフによるプレラベルアミノ酸分析法 |
| CN108949896A (zh) * | 2018-08-08 | 2018-12-07 | 北京瑞荧仪器科技有限公司 | 一种空气中微生物的荧光标记方法及其应用 |
| CN108949896B (zh) * | 2018-08-08 | 2021-10-29 | 北京瑞荧仪器科技有限公司 | 一种空气中微生物的荧光标记方法及其应用 |
| CN110095535A (zh) * | 2019-04-22 | 2019-08-06 | 山东理工职业学院 | 一种复方氨基酸注射液（5%）中胱氨酸的含量测定方法 |
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