JPH04334325A - 血液凝固阻止剤 - Google Patents
血液凝固阻止剤Info
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- JPH04334325A JPH04334325A JP3105809A JP10580991A JPH04334325A JP H04334325 A JPH04334325 A JP H04334325A JP 3105809 A JP3105809 A JP 3105809A JP 10580991 A JP10580991 A JP 10580991A JP H04334325 A JPH04334325 A JP H04334325A
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- JP
- Japan
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- amino acid
- polypeptide
- acid sequence
- slpi
- cathepsin
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- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は配列番号：１で表わされ
るポリペプチドを有効成分として含有する血液凝固阻止
剤に関する。
るポリペプチドを有効成分として含有する血液凝固阻止
剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】血管が損傷を受けた場合に、２つの機構
が働いて止血されることは周知の通りである。その１つ
は血小板による止血栓（１次止血）であり、他は線維素
が赤血球を取りこんで作る血餅（２次止血）である。１
次止血では血管損傷で露出したコラーゲンなどに血小板
が粘着し、次いで変形して強固な血栓を作り止血する。 このとき血小板からセロトニンが放出され血管を収縮さ
せる。また、血液が速く流れる血管の血栓は主に小量の
線維素と血小板から成ることが知られている。
が働いて止血されることは周知の通りである。その１つ
は血小板による止血栓（１次止血）であり、他は線維素
が赤血球を取りこんで作る血餅（２次止血）である。１
次止血では血管損傷で露出したコラーゲンなどに血小板
が粘着し、次いで変形して強固な血栓を作り止血する。 このとき血小板からセロトニンが放出され血管を収縮さ
せる。また、血液が速く流れる血管の血栓は主に小量の
線維素と血小板から成ることが知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】この一連の血小板の活
性化を誘起する物質の１つとしてカテプシンＧが知られ
ている（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔ
ｉｏｎ， ６２， ４０９， １９９０）。 即ち、活性化好中球が放出するカテプシンＧは血小板凝
集およびセロトニン放出を引き起こす。従って、カテプ
シンＧを阻害する薬物は、血小板凝集およびセロトニン
放出を抑制し、血栓症を阻止すると考えられるため、抗
血小板剤または抗血栓剤として期待される。
性化を誘起する物質の１つとしてカテプシンＧが知られ
ている（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔ
ｉｏｎ， ６２， ４０９， １９９０）。 即ち、活性化好中球が放出するカテプシンＧは血小板凝
集およびセロトニン放出を引き起こす。従って、カテプ
シンＧを阻害する薬物は、血小板凝集およびセロトニン
放出を抑制し、血栓症を阻止すると考えられるため、抗
血小板剤または抗血栓剤として期待される。
【０００４】一方、ヒト多形核白血球エラスターゼ阻害
蛋白 （Ｓｅｃｒｅｔａｒｙ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｐ
ｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）（以下、ＳＬＰ
Ｉという）は人間の唾液中や精液中に存在し、すでに構
造決定されている（Ｒ．Ｃ． Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ら、
Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄ Ｒｅｓ． １４， ７８８３〜
７８９６，１９８６；特表昭６２−５０１２６２号公報
参照） 。
蛋白 （Ｓｅｃｒｅｔａｒｙ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｐ
ｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）（以下、ＳＬＰ
Ｉという）は人間の唾液中や精液中に存在し、すでに構
造決定されている（Ｒ．Ｃ． Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ら、
Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄ Ｒｅｓ． １４， ７８８３〜
７８９６，１９８６；特表昭６２−５０１２６２号公報
参照） 。
【０００５】このＳＬＰＩは、白血球エラスターゼ、カ
テプシンＧなどのキモトリプシン様酵素に対する阻害活
性を有しているが、同時に生理的に重要なトリプシン様
酵素、例えばトリプシンに対する阻害活性をあわせ有し
ている。このために、従ってＳＬＰＩは、エラスターゼ
阻害剤、カテプシンＧ阻害剤につながる優れた阻害活性
を有しているにも拘らず、ヒト疾患治療薬として用いる
ことが難しい。
テプシンＧなどのキモトリプシン様酵素に対する阻害活
性を有しているが、同時に生理的に重要なトリプシン様
酵素、例えばトリプシンに対する阻害活性をあわせ有し
ている。このために、従ってＳＬＰＩは、エラスターゼ
阻害剤、カテプシンＧ阻害剤につながる優れた阻害活性
を有しているにも拘らず、ヒト疾患治療薬として用いる
ことが難しい。
【０００６】この理由から、遺伝子工学的手法によりＳ
ＬＰＩ（１位のＳｅｒ− １０７位のＡｌａ）から前半
のドメイン（１位のＡｌａ −５４位のＰｒｏ）を除去
し、後半ドメイン（５５位のＡｓｎ − １０７位のＡ
ｌａ ；以下 （Ａｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰ
Ｉという） が調製され、この（Ａｓｎ５５−Ａｌａ１
０７） ＳＬＰＩは、ＳＬＰＩのエラスターゼ阻害活性
を維持しながらＳＬＰＩのトリプシン様酵素阻害活性を
実質的に有さないことがすでに確認されている （ＷＯ
８９／０６２３９ 号明細書）。しかし、このようなＳ
ＬＰＩ後半ドメインが、ＳＬＰＩが有するカテプシンＧ
阻害活性を維持しているか否かについては、これまで明
らかでなかった。
ＬＰＩ（１位のＳｅｒ− １０７位のＡｌａ）から前半
のドメイン（１位のＡｌａ −５４位のＰｒｏ）を除去
し、後半ドメイン（５５位のＡｓｎ − １０７位のＡ
ｌａ ；以下 （Ａｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰ
Ｉという） が調製され、この（Ａｓｎ５５−Ａｌａ１
０７） ＳＬＰＩは、ＳＬＰＩのエラスターゼ阻害活性
を維持しながらＳＬＰＩのトリプシン様酵素阻害活性を
実質的に有さないことがすでに確認されている （ＷＯ
８９／０６２３９ 号明細書）。しかし、このようなＳ
ＬＰＩ後半ドメインが、ＳＬＰＩが有するカテプシンＧ
阻害活性を維持しているか否かについては、これまで明
らかでなかった。
【０００７】然るに、本発明者らは、ＳＬＰＩ後半ドメ
インはカテプシンＧ阻害活性を有すること、しかもＳＬ
ＰＩ後半ドメインはカテプシンＧを介する血小板凝集お
よびセロトニン放出を強力に阻害することを知見し、本
発明に到達したものである。
インはカテプシンＧ阻害活性を有すること、しかもＳＬ
ＰＩ後半ドメインはカテプシンＧを介する血小板凝集お
よびセロトニン放出を強力に阻害することを知見し、本
発明に到達したものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】即ち、本発明に従えば、
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を有するポリペ
プチドもしくはそのアミノ酸配列を含有するポリペプチ
ドまたはそれらと生物学的に同等のアミノ酸配列を有す
るポリペプチドを有効成分として含む血液凝固阻止剤が
提供される。
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を有するポリペ
プチドもしくはそのアミノ酸配列を含有するポリペプチ
ドまたはそれらと生物学的に同等のアミノ酸配列を有す
るポリペプチドを有効成分として含む血液凝固阻止剤が
提供される。
【０００９】本発明において配列番号：１で表わされる
アミノ酸配列を有するポリペプチドとは、配列番号：１
で表わされる５３個のアミノ酸からなるポリペプチドを
いい、そのアミノ酸配列を含有するポリペプチドとは、
前記５３個のアミノ酸を有し、さらにそのＮ端側および
／またはＣ端側に配列番号：１で表わされるアミノ酸配
列と同一またはその他の異なるアミノ酸配列を有するポ
リペプチドをいう。
アミノ酸配列を有するポリペプチドとは、配列番号：１
で表わされる５３個のアミノ酸からなるポリペプチドを
いい、そのアミノ酸配列を含有するポリペプチドとは、
前記５３個のアミノ酸を有し、さらにそのＮ端側および
／またはＣ端側に配列番号：１で表わされるアミノ酸配
列と同一またはその他の異なるアミノ酸配列を有するポ
リペプチドをいう。
【００１０】また、これらと生物学的に同等のアミノ酸
配列を有するポリペプチドとは、配列番号：１で表わさ
れるアミノ酸配列を有するポリペプチドまたはそのアミ
ノ酸配列を含有するポリペプチドの一部分あるいは該ア
ミノ酸配列から１個または複数個のアミノ酸が欠失し、
該アミノ酸配列に１個または複数個のアミノ酸が付加さ
れ、そして／または該アミノ酸配列中の１個または複数
個のアミノ酸が他のアミノ酸により置き換えられている
アミノ酸配列を有するポリペプチドで、本発明の血液凝
固阻止剤としての生物学的性質を有するものをいう。
配列を有するポリペプチドとは、配列番号：１で表わさ
れるアミノ酸配列を有するポリペプチドまたはそのアミ
ノ酸配列を含有するポリペプチドの一部分あるいは該ア
ミノ酸配列から１個または複数個のアミノ酸が欠失し、
該アミノ酸配列に１個または複数個のアミノ酸が付加さ
れ、そして／または該アミノ酸配列中の１個または複数
個のアミノ酸が他のアミノ酸により置き換えられている
アミノ酸配列を有するポリペプチドで、本発明の血液凝
固阻止剤としての生物学的性質を有するものをいう。
【００１１】そのようなポリペプチドとしては、例えば
配列番号：１で表わされるＳＬＰＩの５５位のＡｓｎ
から １０７位のＡｌａ までのアミノ酸配列を有する
（Ａｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩを挙げるこ
とができる。かかるポリペプチドは、例えば気道分泌液
、唾液、鼻汁、性液、子宮粘液などに存在する天然のＳ
ＬＰＩを単離・精製して、蛋白分解酵素処理することに
よって、あるいは、該ポリペプチドのアミノ酸配列をコ
ードする発現可能なＤＮＡ配列を単独あるいは融合蛋白
として遺伝子発現し、必要であればヒドロキシルアミン
またはトロンビン処理して、目的とするポリペプチドを
得ることができる。なかでも、例えば （Ａｓｎ５５−
Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩはＷＯ８９／０６２３９ 号
明細書に記載されているような遺伝子工学的手法によっ
て得られるものが好ましい。
配列番号：１で表わされるＳＬＰＩの５５位のＡｓｎ
から １０７位のＡｌａ までのアミノ酸配列を有する
（Ａｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩを挙げるこ
とができる。かかるポリペプチドは、例えば気道分泌液
、唾液、鼻汁、性液、子宮粘液などに存在する天然のＳ
ＬＰＩを単離・精製して、蛋白分解酵素処理することに
よって、あるいは、該ポリペプチドのアミノ酸配列をコ
ードする発現可能なＤＮＡ配列を単独あるいは融合蛋白
として遺伝子発現し、必要であればヒドロキシルアミン
またはトロンビン処理して、目的とするポリペプチドを
得ることができる。なかでも、例えば （Ａｓｎ５５−
Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩはＷＯ８９／０６２３９ 号
明細書に記載されているような遺伝子工学的手法によっ
て得られるものが好ましい。
【００１２】本発明の血液凝固阻止剤は経口的に、ある
いは静脈内、皮下、筋肉内、経皮、直腸内等の非経口的
に投与することができる。経口投与の剤型としては、例
えば錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、懸濁剤、カプセル剤な
どが挙げられる。
いは静脈内、皮下、筋肉内、経皮、直腸内等の非経口的
に投与することができる。経口投与の剤型としては、例
えば錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、懸濁剤、カプセル剤な
どが挙げられる。
【００１３】錠剤の形態にするには、例えば乳糖、デン
プン、結晶セルロースなどの賦形剤；カルボキシメチル
セルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン
などの結合剤；アルギン酸ナトリウム、炭酸水素ナトリ
ウム、ラウリル硫酸ナトリウムなどの崩壊剤等を用いて
通常の方法により成形することができる。丸剤、散剤、
顆粒剤も同様に上記の賦形剤等を用いて通常の方法によ
って成形することができる。
プン、結晶セルロースなどの賦形剤；カルボキシメチル
セルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン
などの結合剤；アルギン酸ナトリウム、炭酸水素ナトリ
ウム、ラウリル硫酸ナトリウムなどの崩壊剤等を用いて
通常の方法により成形することができる。丸剤、散剤、
顆粒剤も同様に上記の賦形剤等を用いて通常の方法によ
って成形することができる。
【００１４】液剤、懸濁剤は、例えばトリカプリリン、
トリアセチンなどのグリセリンエステル類、エタノール
等のアルコール類などを用いて通常の方法によって成形
することができる。カプセル剤は顆粒剤、散剤または液
剤などをゼラチンなどのカプセルに充填することによっ
て成形することができる。
トリアセチンなどのグリセリンエステル類、エタノール
等のアルコール類などを用いて通常の方法によって成形
することができる。カプセル剤は顆粒剤、散剤または液
剤などをゼラチンなどのカプセルに充填することによっ
て成形することができる。
【００１５】皮下、筋肉内、静脈内投与の剤型としては
、水性または非水性溶液剤などの形態にある注射剤が知
られている。水性溶液剤としては生理食塩水などが用い
られる。非水溶性溶液剤は、例えばプロピレングリコー
ル、ポリエチレングリコール、オリーブ油、オレイン酸
エチルなどが用いられ、これらに必要に応じて防腐剤、
安定剤などが添加される。注射剤はバクテリア保留フィ
ルターを通す濾過、殺菌剤の配合等の処理を適宜行うこ
とによって無菌化される。
、水性または非水性溶液剤などの形態にある注射剤が知
られている。水性溶液剤としては生理食塩水などが用い
られる。非水溶性溶液剤は、例えばプロピレングリコー
ル、ポリエチレングリコール、オリーブ油、オレイン酸
エチルなどが用いられ、これらに必要に応じて防腐剤、
安定剤などが添加される。注射剤はバクテリア保留フィ
ルターを通す濾過、殺菌剤の配合等の処理を適宜行うこ
とによって無菌化される。
【００１６】経皮投与の剤型としては、例えば軟膏剤、
クリーム剤などが挙げられ、軟膏剤はヒマシ油、オリー
ブ油などの脂肪油；ワセリン等を用いて、クリーム剤は
脂肪油；ジエチレングリコール、ソルビタンモノ脂肪酸
エステルなどの乳化剤等を用いて通常の方法によって成
形することができる。直腸投与のためには、ゼラチンソ
フトカプセルなどの通常の坐剤が用いられる。
クリーム剤などが挙げられ、軟膏剤はヒマシ油、オリー
ブ油などの脂肪油；ワセリン等を用いて、クリーム剤は
脂肪油；ジエチレングリコール、ソルビタンモノ脂肪酸
エステルなどの乳化剤等を用いて通常の方法によって成
形することができる。直腸投与のためには、ゼラチンソ
フトカプセルなどの通常の坐剤が用いられる。
【００１７】本発明のポリペプチドの投与量は、投与経
路、患者の年令、性別、疾患の程度によって異なるが、
通常１〜１０００ｍｇ／回程度であり、投与回数は通常
１〜３回／日であり、このような条件を満足するように
製剤を調整するのが好ましい。本発明の血液凝固阻止剤
は既存の薬剤と併用することも可能である。
路、患者の年令、性別、疾患の程度によって異なるが、
通常１〜１０００ｍｇ／回程度であり、投与回数は通常
１〜３回／日であり、このような条件を満足するように
製剤を調整するのが好ましい。本発明の血液凝固阻止剤
は既存の薬剤と併用することも可能である。
【００１８】
【実施例】以下、実施例により本発明をより具体的に説
明するが、本発明をこれらの実施例に限定するものでな
いことはいうまでもない。
明するが、本発明をこれらの実施例に限定するものでな
いことはいうまでもない。
【００１９】参考例１
（Ａｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩの製造ＷＯ８
９／０６２３９ 号明細書の実施例に従って（Ａｓｎ５
５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩを製造した。配列表１で
表わされる（Ａｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩを
コードするＤＮＡフラグメントを適当なコドンを用いて
Ｅ． ｃｏｌｉ中で化学合成した。ヒト成長ホルモン
遺伝子をトロンビンで切断し得るＬｅｕ−Ｖａｌ−Ｐｒ
ｏ−Ａｒｇ をコードするＤＮＡ配列を介して（Ａｓｎ
５５−Ａｌａ１０７） に融合した。このようにして得
られた発現ベクター（プラスミドｐＧＨ−ＴＥ） をＥ
． ｃｏｌｉ ＨＢ １０１に導入した。形質転換され
た細胞（大腸菌ＨＢ １０１株 （ｐＧＨ−ＴＥ） を
培養して、包合体を得、トロンビン処理及びＳ−Ｓ再構
成さらにクロマトグラフィーで精製し、目的とする（Ａ
ｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩを得た。なお、上
記大腸菌ＨＢ １０１株 （ｐＧＨ−ＴＥ） は、微工
研条寄２１６８号 （ＦＥＲＭ ＢＰ−２１６８）とし
て、工業技術院微生物工業研究所に１９８８年１２月１
日付で国際寄託されているものである。
９／０６２３９ 号明細書の実施例に従って（Ａｓｎ５
５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩを製造した。配列表１で
表わされる（Ａｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩを
コードするＤＮＡフラグメントを適当なコドンを用いて
Ｅ． ｃｏｌｉ中で化学合成した。ヒト成長ホルモン
遺伝子をトロンビンで切断し得るＬｅｕ−Ｖａｌ−Ｐｒ
ｏ−Ａｒｇ をコードするＤＮＡ配列を介して（Ａｓｎ
５５−Ａｌａ１０７） に融合した。このようにして得
られた発現ベクター（プラスミドｐＧＨ−ＴＥ） をＥ
． ｃｏｌｉ ＨＢ １０１に導入した。形質転換され
た細胞（大腸菌ＨＢ １０１株 （ｐＧＨ−ＴＥ） を
培養して、包合体を得、トロンビン処理及びＳ−Ｓ再構
成さらにクロマトグラフィーで精製し、目的とする（Ａ
ｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩを得た。なお、上
記大腸菌ＨＢ １０１株 （ｐＧＨ−ＴＥ） は、微工
研条寄２１６８号 （ＦＥＲＭ ＢＰ−２１６８）とし
て、工業技術院微生物工業研究所に１９８８年１２月１
日付で国際寄託されているものである。
【００２０】実施例１
ヒト好中球エラスターゼおよびカテプシンＧに対する（
Ａｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩの阻害活性を、
合成基質法により測定した。測定溶液中のヒト好中球エ
ラスターゼおよびカテプシンＧの酵素濃度は ０．２μ
Ｍとし、合成基質はそれぞれＮ−ｓｕｃｃｉｎｙｌ−ａ
ｌａ−ａｌａ−ａｌａ−ｐ−ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｄｅ
， Ｎ−ｓｕｃｃｉｎｙｌ−ａｌａ−ａｌａ−ｐｒｏ−
ｐｈｅ−ｐ−ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｄｅを使用し、測定
結果を図１（ヒト好中球エラスターゼ活性％）および図
２（カテプシンＧ活性％）に示した。図中、★印は有意
差（ｐ＜０．０５）を示す。図１および図２から明らか
なように（Ａｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩは両
酵素を濃度依存的に阻害した。さらに、５０％の阻害濃
度を示すポリペプチドの濃度（ＩＣ５０値） を求め、
その結果を表１に示した。
Ａｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩの阻害活性を、
合成基質法により測定した。測定溶液中のヒト好中球エ
ラスターゼおよびカテプシンＧの酵素濃度は ０．２μ
Ｍとし、合成基質はそれぞれＮ−ｓｕｃｃｉｎｙｌ−ａ
ｌａ−ａｌａ−ａｌａ−ｐ−ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｄｅ
， Ｎ−ｓｕｃｃｉｎｙｌ−ａｌａ−ａｌａ−ｐｒｏ−
ｐｈｅ−ｐ−ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｄｅを使用し、測定
結果を図１（ヒト好中球エラスターゼ活性％）および図
２（カテプシンＧ活性％）に示した。図中、★印は有意
差（ｐ＜０．０５）を示す。図１および図２から明らか
なように（Ａｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩは両
酵素を濃度依存的に阻害した。さらに、５０％の阻害濃
度を示すポリペプチドの濃度（ＩＣ５０値） を求め、
その結果を表１に示した。
【００２１】
【表１】
【００２２】実施例２
カテプシンＧにより誘発されるヒト血小板の活性化、即
ち、ヒト血小板凝集およびセロトニン放出に対する（Ａ
ｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩの阻害活性を、カ
テプシンＧ濃度を ０．２μＭとして（Ａｓｎ５５−Ａ
ｌａ１０７） ＳＬＰＩ濃度を変化させて測定し、その
測定結果を図３（血小板凝集率％）および図４（セロト
ニン放出率％）に示した。図中、★印は有意差（ｐ＜０
．０５）を示す。
ち、ヒト血小板凝集およびセロトニン放出に対する（Ａ
ｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩの阻害活性を、カ
テプシンＧ濃度を ０．２μＭとして（Ａｓｎ５５−Ａ
ｌａ１０７） ＳＬＰＩ濃度を変化させて測定し、その
測定結果を図３（血小板凝集率％）および図４（セロト
ニン放出率％）に示した。図中、★印は有意差（ｐ＜０
．０５）を示す。
【００２３】図３および図４から明らかなように、（Ａ
ｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩ は血小板凝集お
よびセロトニン放出を濃度依存的に阻害した。さらに、
５０％の阻害濃度を示すポリペプチドの濃度（ＩＣ５０
値） を求め、その結果を表２に示した。
ｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩ は血小板凝集お
よびセロトニン放出を濃度依存的に阻害した。さらに、
５０％の阻害濃度を示すポリペプチドの濃度（ＩＣ５０
値） を求め、その結果を表２に示した。
【００２４】
【表２】
【００２５】実施例３
好中球が放出するカテプシンＧによるヒト血小板凝集に
対する（Ａｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩの阻害
活性を、好中球とヒト血小板が共存する系で測定した。 好中球とヒト血小板が同時に存在する試験管に、図５お
よび図６に示したように０〜 ２．５μＭの範囲で濃度
を変化させた（Ａｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩ
を加え、さらに１分後に好中球刺激剤 ｆｏｒｍｙｌ−
Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ （ＦＭＬＰ） ０．５μＭを
加えた後、血小板凝集とセロトニン放出を測定した。そ
の結果を図５（血小板凝集率％）および図６（セロトニ
ン放出率％）に示した。図中、★印は有意差（ｐ＜０．
０５）を示す。
対する（Ａｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩの阻害
活性を、好中球とヒト血小板が共存する系で測定した。 好中球とヒト血小板が同時に存在する試験管に、図５お
よび図６に示したように０〜 ２．５μＭの範囲で濃度
を変化させた（Ａｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩ
を加え、さらに１分後に好中球刺激剤 ｆｏｒｍｙｌ−
Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ （ＦＭＬＰ） ０．５μＭを
加えた後、血小板凝集とセロトニン放出を測定した。そ
の結果を図５（血小板凝集率％）および図６（セロトニ
ン放出率％）に示した。図中、★印は有意差（ｐ＜０．
０５）を示す。
【００２６】図５および図６から明らかなように、（Ａ
ｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩ は血小板凝集お
よびセロトニン放出を濃度依存的に阻害し、有意（ｐ＜
０．０５）な最小阻害濃度はそれぞれ １．０μＭ、０
．７５μＭであった。さらに、５０％の阻害濃度を示す
ポリペプチドの濃度（ＩＣ５０値） を求め、その結果
を表３に示した。
ｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩ は血小板凝集お
よびセロトニン放出を濃度依存的に阻害し、有意（ｐ＜
０．０５）な最小阻害濃度はそれぞれ １．０μＭ、０
．７５μＭであった。さらに、５０％の阻害濃度を示す
ポリペプチドの濃度（ＩＣ５０値） を求め、その結果
を表３に示した。
【００２７】
【表３】
【００２８】一方、ＦＭＬＰ刺激による好中球からのβ
−ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ放出は（Ａｓｎ５５−Ａ
ｌａ１０７） ＳＬＰＩ添加により変化しなかった。従
って、（Ａｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩ の血
小板凝集阻害活性は好中球に対する直接作用ではなく、
ＦＭＬＰ刺激により好中球が放出するカテプシンＧを阻
害することによると理解された。
−ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ放出は（Ａｓｎ５５−Ａ
ｌａ１０７） ＳＬＰＩ添加により変化しなかった。従
って、（Ａｓｎ５５−Ａｌａ１０７） ＳＬＰＩ の血
小板凝集阻害活性は好中球に対する直接作用ではなく、
ＦＭＬＰ刺激により好中球が放出するカテプシンＧを阻
害することによると理解された。
【００２９】配列番号：１
配列の長さ：５３
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直線状
配列の種類：タンパク質
フラグメント型：Ｃ末端フラグメント
配列：
Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｐ
ｒｏ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｔｈ
ｒ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｇｌｎ １
５
１０ １５ Ｃ
ｙｓ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｐｒ
ｏ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ａｓｐ
Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｃｙｓ
２０ ２５
３０ Ｌｙｓ Ａｒ
ｇ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｍｅｔ
Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｓｅｒ
Ｃｙｓ Ｖａｌ ３５
４０
４５ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｌｙｓ
Ａｌａ ５０
ｒｏ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｔｈ
ｒ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｇｌｎ １
５
１０ １５ Ｃ
ｙｓ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｐｒ
ｏ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ａｓｐ
Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｃｙｓ
２０ ２５
３０ Ｌｙｓ Ａｒ
ｇ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｍｅｔ
Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｓｅｒ
Ｃｙｓ Ｖａｌ ３５
４０
４５ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｌｙｓ
Ａｌａ ５０
【図１】実施例１におけるポリペプチドのエステラーゼ
阻害活性を示すグラフ図である。
阻害活性を示すグラフ図である。
【図２】実施例１におけるポリペプチドのカテプシンＧ
阻害活性を示すグラフ図である。
阻害活性を示すグラフ図である。
【図３】実施例２におけるポリペプチドの血小板凝集阻
害活性を示すグラフ図である。
害活性を示すグラフ図である。
【図４】実施例２におけるポリペプチドのセロトニン放
出阻害活性を示すグラフ図である。
出阻害活性を示すグラフ図である。
【図５】実施例３におけるポリペプチドの血小板凝集阻
害活性を示すグラフ図である。
害活性を示すグラフ図である。
【図６】実施例３におけるポリペプチドのセロトニン放
出阻害活性を示すグラフ図である。
出阻害活性を示すグラフ図である。
Claims (4)
- 【請求項１】 配列番号：１で表わされるアミノ酸配
列を有するポリペプチドもしくはそのアミノ酸配列を含
有するポリペプチドまたはそれらと生物学的に同等のア
ミノ酸配列を有するポリペプチドを有効成分として含む
血液凝固阻止剤。 - 【請求項２】 抗血小板凝集病疾患剤である請求項１
記載の血液凝固阻止剤。 - 【請求項３】 抗血栓病疾患剤である請求項１記載の
血液凝固阻止剤。 - 【請求項４】 該ポリペプチドが、遺伝子工学的手法
によって得られたポリペプチドである請求項１記載の血
液凝固阻止剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3105809A JP2768564B2 (ja) | 1991-05-10 | 1991-05-10 | 血液凝固阻止剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3105809A JP2768564B2 (ja) | 1991-05-10 | 1991-05-10 | 血液凝固阻止剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04334325A true JPH04334325A (ja) | 1992-11-20 |
| JP2768564B2 JP2768564B2 (ja) | 1998-06-25 |
Family
ID=14417434
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3105809A Expired - Fee Related JP2768564B2 (ja) | 1991-05-10 | 1991-05-10 | 血液凝固阻止剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2768564B2 (ja) |
-
1991
- 1991-05-10 JP JP3105809A patent/JP2768564B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2768564B2 (ja) | 1998-06-25 |
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