JPH0434364A - 不安定型糖化ヘモグロビン解離剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、血液中の糖化ヘモグロビン（ヘモグロビンＡ
１）、　　特にヘモグロビンＡ１ｃの測定において用い
られる不安定型糖化ヘモグロビンの解離剤に関する。

（従来の技術） 糖尿病の指標のひとつとして血液中の糖化ヘモグロビン
（ヘモグロビンＡ１）、特にヘモグロビンＡ１ｃ（以下
、　ＨｂＡ＋ｃで示す）が知られ、その測定が行われて
いる。ＨｂＡ　ｒ　ｃ値は全ヘモグロビン中に占めるＨ
ｂＡ、ｃの割合（パーセント）で表される。ＨｂＡ　＋
　ｃは比較的安定であるため、短期的な血糖値の著しい
変化に影響されることなく１約二ケ月前の血糖値を良く
反映している。したがって、糖尿病患者の長期的な血糖
管理において臨床的に重要である。

ＨｂＡ、Ｃは、下記式（１）に示されるように、ヘモグ
ロビンのβ鎖Ｎ末端に存在するバリンのアミノ基にグル
コース１分子が非酵素的に結合した複合体である。ヘモ
グロビンの上記アミノ基にグルコースが結合すると、ま
ず、下記式（１）に示すようなシッフ塩基である不安定
型ＨｂＡ＋ｃ　（Ｉ）が形成される：グルコース　　　
　　　（１）　　　　　　　（ＩＩ）上記式（１）にお
いて、　Ｈｂ−ＮＨｚは、ヘモグロビンを示し、その中
のＮＲｔは、該ヘモグロビンのβ鎖Ｎ末端のバリンのア
ミノ基を示す。

この不安定型ＨｂＡ、Ｃ（１）の生成反応は可逆反応で
あり、グルコース濃度に応じて平行が不安定型ＨｂＡ＋
ｃ　　（Ｉ　）の生成方向もしくは解離方向に傾く。

不安定型ＨｂＡ＋ｃ　　（Ｉ　）は、さらにアマトリ転
移を経て、不可逆的に安定型ＨｂＡ＋ｃ　　（Ｉｆ）に
変化する。

）１ｂＡ　ｒ　ｃは１例えば、高速液体クロマトグラフ
ィー　（ＨＰＬＣ）によりヘモグロビンを各ヘモグロビ
ン成分に分離し、そのＯＤを測定することにより定量さ
れ得るが、上記安定型ＨｂＡ＋ｃ　　（以下５−ＨｂＡ
、ｃで示す）および不安定型ＨｂＡ、Ｃ（以下Ｌ−Ｈｂ
Ａ、Ｃで示す）を分離して測定することができない、そ
のためＨｂＡｌｃを安定した値で得られない、なぜなら
。

Ｌ−ＨｂＡｌｃは、グルコース量（つまり血糖値）によ
り、その量が変化し、該血糖値は１食事や運動により急
激かつ大幅に変化するためである。

上記欠点を解消するため、血液検体からＬ４ｂＡ＋ｃを
除去し、　　５−ＨｂＡｌｃのみを測定する試みがなさ
れている。例えば、　Ｄａｖｉｄ　Ｍ、　Ｎａｔｈａｎ
　ら、　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　２
８．５１２〜５１５．　（１９８２）には、セミカルバ
ジドおよびアニリンをＬ−ＨｂＡｌｃの除去剤として用
い、　ｐＨ５，０，３８°Ｃにて３０分間血液検体を処
理することが開示されている。サミカルバジドは、グル
コースを捕捉し、かつ求核試薬として作用し、ヘモグロ
ビンのアミノ基と競合する。アニリンは触媒として作用
する。その結果、　Ｌ−ＨｂＡ、Ｃは実質的に除去され
る。しかし、　Ｌ−ＨｂＡｌｃの除去反応が酸性側（ｐ
Ｈ５，０）にて、かつ比較的高温（３８℃）でなされる
ため、ヘモグロビンの変性（例えば脱ヘム）が生じる。

例えば、イオン交換クロマトグラフィーによる溶出パタ
ーンを観察すると。

脱ヘムによる退色に起因するピーク強度の低下やＨｂＡ
　、、とＨｂＡｌｂとに起因するピークの増大が観察さ
れる。

特開昭５８−２１００２４号公報には、ジヒドロキシボ
リル化合物（ホウ酸化合物）がＬ−ＨｂＡ、ｅの除去剤
として開示されている。このジヒドロキシボリル化合物
はグルコースのＯＨ基をエステル化するためグルコース
が系内から除去され、その結果、　Ｌ−ＨｂＡ、ｃの解
離が進行する。しかし、　Ｌ−ＨｂＡｌ、を除去するた
めには、高濃度のジヒドロキシボリル化合物を必要とす
る。例えば、このジヒドロキシボリル化合物を溶血させ
た血液を含む試料液中に加える場合には、約０．１〜１
．０Ｍとなるように加える必要があり、該ジヒドロキシ
ボリル化合物を含む溶離液を用いて、溶血物を溶出させ
る場合には、該溶離液中に０．０１〜０．１５Ｍの割合
で含有されることが必要である。このように高濃度のジ
ヒドロキシボリル化合物が含有されると、イオン交換ク
ロマトグラフィーにかける場合にそのイオン強度が通常
の場合とは異なり、その結果１分離条件が変わり。

測定が困難となったり、測定条件の補正が必要となる。

さらに、最適ｐＨが約４．５〜６．５．好ましくは５．
０〜６．０であるため、ヘモグロビンの変性が生じる恐
れがある。

Ｌ−ＨｂＡ、ｃのその他の除去方法としては２血液検体
を希釈してグルコース濃度を下げ、　Ｌ−ＨｂＡ、Ｃの
解離を促進させる方法が知られている。これを実施する
には９例えば、赤血球を大過剰の生理食塩水でインキュ
ベートしたり、溶血物を透析する方法が採用される。し
かし、これらの方法はいずれも長時間を必要とするため
、ＰＡ床検査のための方法としては適切ではない。

特開昭６３−２９には、迅速でかつヘモグロビンの変性
のないＬ−ＨｂＡ、ｃ除去法として縮合リン酸を用いる
方法が報告されている。しかし、リン酸緩衝液中の縮合
リン酸を定量するための簡易な測定法がなく、ＨＰＬＣ
を利用したイオン交換クロマトグラフィー等を用いて定
量する必要があり、操作が煩雑である。

（発明が解決しようとする課ａ） 本発明は上記従来の欠点を解決するものであり。

その目的とするところは、血液検体中の５−ａｂ＾、Ｃ
のみを２精度良く簡便に、かつヘモグロビンを変性させ
ることなく測定しうる。　Ｌ−ＨｂＡＩｃの解離剤を提
供することにある０本発明の他の目的は、解離剤を含有
する解離用媒質の調製および品質管理が容易な、解離剤
を提供することにある。

（課題を解決するための手段および作用）本発明の不安
定型糖化ヘモグロビン解離剤は。

血液中の糖化ヘモグロビンの測定に用いられ、該解離剤
が、ピリドキサールリン酸および／またはその塩、また
は、ヌクレオチドおよび／またはその塩を主成分とし、
不安定型Ｈｂ＾、Ｃをヘモグロビンとグルコースとに解
離し得、そのことにより上記目的が達成される。

（以下余白） 本発明の解離剤に含有されるピリドキサールリン酸とは
１次のような構造式で表される。

八 本発明の解離剤に含有されるヌクレオチドは。

ヌクレオシドの糖部分がリン酸とエステルを形成してい
る化合物であり、エステル化する位置は特に限定されな
い。上記ヌクレオチドとしては１例えばアデニル酸、グ
アニル酸、ウリジル酸、シチジル酸等が挙げられる。ヌ
クレオチドにはリン酸の縮合度の異なるものも含まれる
０例えば、アデニル酸としては、アデノシンニリン酸、
アデノシン三すン酸、グアニル酸としては、グアノシン
ニリン酸、グアノシン三すン酸、シチジル酸としては、
シチジンニリン酸、シチジンニリン酸等がある。Ｌ−Ｈ
ｂＡＩｃの解離能はヌクレオチドに含まれるリン酸の縮
合度が高くなるほど強くなる。

ピリドキサールリン酸およびヌクレオチドは複素環を含
むため紫外部に吸収がある。このため分光光度計を用い
ることによって解離用媒質中の解離剤（ピリドキサール
リン酸、ヌクレオチドまたはそれらの塩）の定量が容易
に行われ得る。

これらのピリドキサールリン酸およびヌクレオチドは、
その塩であっても同等の効果が得られる。

塩の種類は特に限定されないが９例えばアルカリ金属や
アルカリ土類金属の塩が挙げられ、　Ｎａ塩。

Ｋ塩などが好適である。

本発明のＬ−ＨｂＡ＋ｃＭ離剤の使用量は、用いられる
該解離剤の種類や測定時の条件（血液の溶血などの前処
理の条件２ｐＨなど）によって異なる。通常、血液（全
血）１ｉあたり１〜１５００■のピリドキサールリン酸
１ヌクレオチドまたはそれらの塩が使用される０例えば
、血液検体３μｌを４５０μｌの溶血剤溶液で溶血させ
た試料溶液中にピリドキサールリン酸を約０．．００１
〜１．０Ｗ／Ｖ％、好ましくは０．０１〜０．２　Ｗ／
Ｖ％の割合となるように添加する。

過少であるとＬ−ｆｌｂＡ、ｃの解離・除去効果が得ら
れず、過剰であるとクロマトグラフィー分離時における
分離が困難となる。

血液中のヘモグロビンを測定するときには、該ヘモグロ
ビンは赤血球中に存在するため１通常。

血液をあらかじめ溶血させておく場合が多い、溶血剤と
しては、界面活性剤が好適に用いられる。

溶血剤としは、高級脂肪族アルコール、アルキルアリー
ルポリエーテルアルコール、スルホネート化合物のポリ
オキシエチレンエーテル、サルフェート化合物のポリオ
キシエチレンエーテル、ソルビット脂肪酸エステルのポ
リオキシエチレン付加体などがある。溶血剤の使用量は
、その種類などによっても異なるが１通常、血液１ｄあ
たり１０〜２００１１ｇである。例えば、溶血剤を０．
０１〜２重量％の割合で含有する溶血剤溶液を血液１ｄ
あたり２〜４００ｄの割合で添加してインキュベートす
ることにより溶血させることができる。溶血剤が過剰で
あるとクロマトグラフィーによるヘモグロビンの分離が
困難となる。

本発明の解離剤を用いて糖化ヘモグロビンの測定を行う
には、まず、血液検体を必要に応じて溶血荊で前処理し
て溶血させ、少なくとも赤血球および／またはヘモグロ
ビンを含む試料を調製する。

この試料を１本発明の上記解離剤を含む解離用媒質と接
触させる。この解離剤は５試料が後述のクロマトグラフ
ィー〇カラム中でイオン交換により分離されて溶出され
る以前に赤血球および／またはヘモグロビンと接触すれ
ばよい、従って、解離剤は、血液検体を適当な濃度に希
釈するための希釈液、溶血剤を含む溶血剤溶液、クロマ
トグラフィーに用いられる溶離液などに含まれていても
よく、このような溶液もまた。上記解離用媒質と考えら
れる。その他、解離剤は１例えば試料の赤血球分散液、
その溶血物、ヘモグロビン溶液に固体のまま添加されて
もよい。この解離剤は速やかに溶解し、試料中のヘモグ
ロビンは解離用媒質と接触すると解釈される。

本発明の解離剤を用いた糖化ヘモグロビンの測定方法の
うち、試料を該解離剤で解離させた後。

クロマトグラフィーにかけて分離・測定する方法につい
て２次に説明する。試料と解離剤（解離用媒質）との接
触時のｐＨは酸性側であるほど、　Ｌ−１（ｂｈ、の解
離速度は上昇するが、　ｐＨが低すぎるとヘモグロビン
の変性が生じる。さらに、極端にｐＨが高いか低い条件
下ではクロマトグラフィーによるＨｂの分離が困難にな
る。従って１通常、試料および解離剤を含む混合液のｐ
ｉｔが４．６〜７．０．好ましくは５．３〜６．５とな
るように調整される。試料と解離剤との接触時間は解離
剤の種類や濃度、　ｐＨ条件などにより異なるが２通常
、室温においては１０分以上、好ましくは１０〜３０分
である。温度を上げることによる接触時間の短縮も可能
であり１例えば３７°Ｃにて約３〜７分、５０℃にて約
１〜３分間インキュベートすることもできる。このよう
に処理された試料は、イオン交換クロマトグラフィー　
（例えば高速液体クロマトグラフィー、　ＨＰＬＣ）に
かけられ、ヘモグロビンの各成分が分離されて溶出され
、測定される。

試料溶液を直接イオン交換クロマトグラフィーにかけ上
記解離剤が含有される溶離液を用いて溶出させる場合に
は、該溶離液のｐＨは、ヘモグロビンを変性させず、か
つクロマトグラフィーにより容易にＨｂＡ　、　ｃが分
離されて測定され得るような範囲であればよい。通常、
　ｐＨ５，０〜６．５の範囲が選択される。試料がクロ
マトグラフィーのカラムを通過する間に含有されるＬ−
ＨｂＡＩｃが解離され１次いで各ヘモグロビン成分に分
離されて溶出され。

測定される。

解離剤は、上記試料の希釈液や溶血剤を含む溶血剤溶液
などとクロマトグラフィー用溶離液との両者に含有させ
ることも可能で、この場合は特に効果的にＬ−ＨｂＡ、
ｃの解離がなされる。

このような本発明解離剤によるＬ−ＨｂＡ、ｃの解離・
除去作用は、ヘモグロビン上の２．３−ＤＰＧポケット
の性質に起因すると考えられる。２．３−ＤＰＧポケッ
トに関しては、　Ｂｅｎｅｓｃｈ　ら、　Ｂｉｏｃｈｅ
＋ａ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ。

Ｒｅｓ、　　Ｃｏｍ５ｕｎ、、　　２６，１６２．（１
９６７）；　Ｃｈａｎｕｔｉｎら、　　Ａｒｃｈ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、、１２１，９６．
（１９６７）などにより詳しく報告されている。この２
．３−ＤＰＧポケットはヘモグロビンのβ鎖のヒスチジ
ン、リジンなどの塩基性アミノ酸残基、およびＨｂＡ、
ｃのへモグロビンβ鎖のＮ末端バリンによって形成され
ており。

カチオン性を帯びていることが知られている０本発明解
離剤の主成分であるピリドキサールリン酸。

ヌクレオチドおよびそれらの塩は水溶液中でアニオン性
を有しかつその分子形状も適切であるため。

上記２．３−ＤＰＧポケットに対して強力な親和性を有
する。そのため、グルコースと競合してヘモグロビンの
β鎖Ｎ末端に結合する。その結果、　　Ｌ−ＨｂＡ、ｃ
の解離が促進される。

このようにしてピリドキサールリン酸、ヌクレオチドま
たはそれらの塩のＬ−ＨｂＡ　、ｃの解離作用によりＬ
−ＨｂＡＩｃが試料中から除去され、　５−ＨｂＡ、ｃ
のみが試料中に残留する。この解離剤は、ヘモグロビン
のイオン交換クロマトグラフィーによる溶出パターンに
影響を与えない。そのため上記５−ＨｂＡ、ｃは、従来
と同様の方法でイオン交換クロマトグラフィーにより分
離され、精度よく測定される。

（以下余白） （実施例） 以下に本発明を実施例につき説明する。

皿足方悲 以下の実施例において糖化ヘモグロビンの測定は、■京
都第−科学製のＨｉ−Ａｕｔｏ　ＡｉｃＨＡ−８１２０
を用い適切条件を選択して測定した。この日＾−８１２
０はＨＰＬＣによるＨｂＡ　、　Ｃ測定専用装置であり
、陽イオン交換により各ヘモグロビン成分を４分間で分
離して溶出する。溶出用緩衝液は専用の溶離液（リン酸
緩衝液）が用いられる。この装置を用いたヘモグロビン
の溶出パターンは一般に第１図に示される。第１図にお
いて、Ｐ、およびＰ２はＨｂＡ＋−ｂ成分に起因するピ
ークであり、Ｐ、およびＰ、はそれぞれＬ−ＥｌｂＡ、
、および５−ＨｂＡ　、　ｃ成分に起因するピークであ
る。Ｐ、は他のヘモグロビンに起因するピークである。

ＨｂＡ、Ｃ値は、全ヘモグロビン中に占めるＨｂＡ＋ｃ
（Ｌ−ＨｂＡ＋ｃと５−ＨｂＡ、Ｃの合計）の割合（パ
ーセント）であって１次式で算出される。

およびＰｓ）の聡■槓 本実施例においては同一人（Ｗ１常人）の血液を使用し
、採血後直ちにヘパリンを添加したものを新鮮血液とし
て用いた。

リファレンス　の゛ ｐＨ６，３の０．００５Ｍリン酸緩衝液１００１１ｅ中
に溶血剤としてＴｒｉｔｏｎ　Ｘ４００　（和光純薬製
）０．１ａｄ！を加えて溶血剤溶液を調製した。この溶
血剤溶液４５０μｌに新鮮血液３μｉを加えて溶血させ
た後に、上記方法によりＨｂＡ　、ｅ値を測定したとこ
ろ５．０％であることがわかった。この値は血液中の全
ＨｂＡ＋ｃ　（Ｌ−ＨｂＡ　ｒ　ｃ　と５−ｔｌｂＡｔ
ｅの合計）に相当し、これをブランク値とした。

次に、新鮮血液１０Ｉｄを遠心分離して得た血球約５Ｉ
１１を８／３２１ｎｃｈセロフアンチユーブ（和光純薬
製）に入れ、生理食塩水１１．を用いて各２回、計５時
間３７°Ｃにてインキュベートした。このようにしてＬ
−ＨｂＡ、ｃを解離させた後、これを約１．５μ！採取
し、上記溶血剤溶液４５０μｌを用いて溶血させた。こ
のサンプルについてＨｂＡ、ｃ値を同様の方法で測定し
たところ４．３％であった。この値は。

血液中の５−ＨｂＡ、Ｃに相当すると考えられる。

災施■上 ０．００５Ｍリン酸緩衝液１００ｄ中に溶血剤としてＴ
ｒｉｔｏｎＸ−１００（和光純薬製）０．１１ｄおよび
解離剤としてピリドキサールリン酸（Ｓｉｇｍａ製）約
０．１ｇを溶解させ。

塩基を加えてｐＨを６．３に調整し、溶血剤含有解離用
媒質を得た。この溶血剤含有解離用媒質４５０μ！に新
鮮血液３μ！を添加し、室温で約１０分間放置して溶血
ならびにＬ−ＨｂＡ、ｃの解離を行った。このサンプル
のＨｂＡ、ｃ値を測定したところ４．４％であった。別
に、ピリドキサールリン酸（解離剤）を加えない溶血剤
溶液を調製し、同様の方法で）ｌｂＡ。

値の測定を行った。

次に、上記溶血剤含有解離用媒質および溶血剤溶液（解
離剤を含まない）のそれぞれについてｐＨを５．８．５
．３．５．０および４．６に設定し、同様にＨｂＡ　、
　ｃ値の測定を行った。各ｐａｌにおける。溶血剤含有
解離用媒質を用いたときと、溶血剤溶液（解離剤を含ま
ない）を用いたときのＨｂＡ＋ｃ値（％）、および総ヘ
モグロビン量（総りｂ量）とを下表（１）に示す。

総ヘモグロビン量はもとの血液中の総ヘモグロビン量を
１００％として換算した。

（以下余白） 表（１）から、　ｐＨ条件が低くなるにつれてＨｂＡｔ
ｃ値が低くなり、　Ｌ−ＨｂＡ＋ｃが解離・除去されて
いることが明らかである。しかし、　ｐＨが５．３を下
まわると脱ヘムによる退色が認められ、総ヘモグロビン
量が低下するのがわかる。本発明解離側を用いて測定す
る場合には、　ｐＨ６，３〜５．３の領域においてヘモ
グロビンが変化することなく　Ｌ−ＨｂＡ、、が解離・
除去されることが明らかである。

１隻班呈 ０．００５Ｍリン酸緩衝液１００　ｄ中に、溶血剤とし
てＴｒｉｔｏｎχ−１００（和光純薬製）　０．１　ｄ
および解離剤としてピリドキサールリン酸ナトリウム約
０．１ｇを溶解させ、塩基を加えてＰＨ６，３に調整し
、溶血剤含有解離用媒質を得た。この溶血剤含有解離用
媒質を用いて実施例１と同様にして、溶血ならびにＬ−
ＨｂＡ　ｌｃの解離を行い、このサンプルのＨｂＡ　ｒ
　ｃ値を測定した。その結果、　ＨｂＡ＋ｃ値は、４．
４％であった。

１隻■１ ０．００５Ｍリン酸緩衝液１００ｄ中に、溶血剤とじて
Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００（和光純薬製）　０．Ｉ　Ｉ
ｄを加え、解離剤としてアデノシンニリン酸ナトリウム
（Ｓｉｇｗ＋ａ製）。

アデノシンニリン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ製）または
アデニル酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ製）をそれぞれ約０
゜１ｇ溶解させ、塩基を加えてｐＨ６，０に調製し、３
種類の溶血剤含有解離用媒質を得た。この各溶血剤含有
解離用媒質を用いて実施例１と同様にして。

溶血ならびにＬ−１１ｂＡ、ｃの解離を行った。これら
のサンプルのＨｂＡ　ｌｃ値を測定したところ、アデノ
シンニリン酸ナトリウムを加えたもののＨｂＡ＋ｃ値は
４．３％、アデノシンニリン酸ナトリウムを加えたもの
のＨｂＡｔｃ値は４．５％、アデニル酸ナトリウムを加
えたもののＨｂＡ＋ｃ値は４．７％であった。

この結果より各ヌクレオチドはいずれもＬ−ＨｂＡ＋ｃ
解離能を有し、特に、リン酸の縮合度が高いヌクレオチ
ドはどＬ４１ｂＡ＋ｃ解離能が高いことがわかる。

１隻■ニ リン酸緩衝液からなる１（ｂＡ　、　ｅ測定専用溶離液
Ａ液（種水化学工業■製）にピリドキサールリン酸ナト
リウムを０．００５％になるように添加し、解離剤含有
溶離液を得た。別に、実施例１と同様の溶血剤溶液（解
離剤を含有しない）を調製した。この溶血剤溶液を用い
て、実施例１と同様にして新鮮血液を溶血させた。この
・試料を速やかに上記溶離液を用いてクロマトグラフィ
ーにかけて４分離・測定したところ、溶出パターンは、
実施例１の解離用媒質を用いた場合とほぼ同様であり、
　ＨｂＡ、Ｃ値は４．５％であった。本発明の解離剤を
含有する溶離液を用いても充分にＬ−ＨｂＡ＋ｃが除去
されることがわかる。

北較■土 実施例１のピリドキサールリン酸に代えてセミカルバジ
ド塩酸塩（和光純薬製）　０．ＯＩＭを含有しアニリン
（和光純薬製）０．００４Ｍ、　　および実施例１と同
様の溶血剤を含有するＰＨ５，３の０．００５Ｍリン酸
緩衝液からなるＬ−ＦｌｂＡ、Ｃ除去剤溶液を調製した
。

これを用いて新鮮血液を実施例１と同様にして溶血させ
、溶血物を６０°Ｃにて２分間インキユヘーションした
。このサンプルのＨｂＡ　、ｃ値を測定したところ、４
．７％であった。また、得られたクロマトダラムのパタ
ーンはかなりブロードであり、ヘモグロビンビークの総
面積は当初の約７０％であった。

工較五Ｉ ピリドキサールリン酸に代えてホウ酸１．０％を含有し
、実施例１と同様の溶血剤を含有するｐｉ（５，３の０
．００５Ｍリン酸緩衝液からなるＬ−ｔｌｂＡ＋ｃ除去
剤溶液を調製した。これを用いて新鮮血液を実施例１と
同様に溶血させ、溶血物を６０℃にて２分間インキュベ
ーションした。このサンプルのＨｂＡｌｃ値を測定した
ところ、４．４％であった。しかし、ホウ酸濃度を０．
１％としｐＨを６．０に調製して同様の測定を行ったと
ころ、　ＨｂＡｌｃ値は４．８％となった。

このように、ホウ酸が低濃度である場合には、充分にＬ
−ＦｔｂＡ＋ｅを除去することはできない。

（発明の効果） 本発明のＬ−ＨｂＡ＋ｃ解離剤を用いると、このように
、血液中のＨｂＡｌｃのうちＬ−Ｈｂ＾１．が除去され
。

５−ＨｂＡ、、のみが精度良く簡便にかつヘモグロビン
を変性させることなく短時間のうちに測定される。

さらに５本発明の解離剤は、紫外部に吸収を有するので
、吸光度の測定により容易に定量することができる。し
たがってＬ−ＨｂＡ＋ｅ解離剤を含有する解離用媒質の
調製および品質管理が簡便に行える。

Ｓ−１１ｂＡ、ｅは、−時的な血糖の上昇もしくは降下
に左右されずに比較的安定して血液中に存在するため、
この測定値はより信幀度の高い糖尿病の指標とされ得る
。測定系を自動化することにより、さらに効果的な臨床
検査が可能となる。

４　　゛　　の　　　な−゛日 第１図は、血液中のヘモグロビンをイオン交換クロマト
グラフィーにより分離した際の溶出パターンを示す図で
ある。

以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、血液中の糖化ヘモグロビンの測定に用いられる不安
   定型糖化ヘモグロビンの解離剤であって、該解離剤が、
   ピリドキサールリン酸および／またはピリドキサールリ
   ン酸の塩を主成分とし、不安定型ヘモグロビンＡ＿１＿
   ｃをヘモグロビンとグルコースとに解離しうる、 不安定型糖化ヘモグロビン解離剤。 ２、血液中の糖化ヘモグロビンの測定に用いられる不安
   定型糖化ヘモグロビンの解離剤であって、該解離剤が、
   ヌクレオチドおよび／またはヌクレオチドの塩を主成分
   とし、不安定型ヘモグロビンＡ＿１＿ｃをヘモグロビン
   とグルコースとに解離しうる。 不安定型糖化ヘモグロビン解離剤。