JPH02259467A - 不安定型糖化ヘモグロビン解離剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、血液中の糖化ヘモグロビン（ヘモグロビンＡ
１）、特にヘモグロビン八ｌｃの測定において用いられ
る不安定型糖化ヘモグロビンＡｔｅの解離剤に関する。

（従来の技術） 糖尿病の指標のひとつとして血液中の糖化ヘモグロビン
（ヘモグロビンＡ、）　、特にヘモグロビンＡｉｃが知
られ、その測定が行われている。ヘモグロビンＡｔｅは
、下記式に示されるように、ヘモグロビン（以下、ヘモ
グロビンをｌｌｂで示す）のβ鎖Ｎ末端に存在するバリ
ンのアミノ基にグルコース１分子が非酵素的に結合した
複合体である。１］ｂの上記アミノ基にグルコースが結
合すると、まず。

下記式に示すようなシッフ塩基である不安定型ヘモグロ
ビン＾１ｃ（Ｉ）が形成される：）１ｃ＝Ｄ ＨＣＤＨ ＨＣ＝Ｎ−βＡ Ｃ０Ｈ ＣＨ２−ＮＨ，”−βＡ Ｃ＝０ ＨＣＯＨＨＣＯＨＨＣＯＨ ＣＩＩ２０ＨＣ１１２０１１ＣＨ２０Ｈグルコース　　
　　　　（Ｉ）　　　　　　　　　　　（ｎ）上記式（
１）において、β−Ａ−Ｎ）＋２はＨｂを示し。

そのなかのＮＨ，は、該）１ｂのβ鎖Ｎ末端のバリンの
アミノ基を示す。

この不安定型Ｈｂ＾１ｃ（Ｉ）の生成反応は可逆反応で
あり、グルコース濃度に応じて平衡が不安定型１１ｂＡ
、ｃ（■）の生成方向もしくは解離方向に傾く。

（Ｉ）は、さらにアマトリ転位を経て、不可逆的に安定
型ＨｂＡ、ｃ（ｎ）に変化する。

）１ｂＡ＋ｃは１例えば、高速液体クロマトグラフィー
によりＨｂを各）１ｂ成分に分離し、そのＯＤを測定す
ることにより定量され得るが、上記安定型ＨｂＡ　、ｃ
（Ｓ−ＨｂＡ、ｃ）および不安定型ＨｂＡ＋ｃ（Ｌ−Ｈ
ｂＡＩＣ）を分離して測定することができない”。その
ためＨｂＡｌｃを安定した値で得られない。なぜなら、
　Ｌ−ＨｂＡ、ｃは、グルコース（つまり血糖）量によ
り、その量が変化し、該血糖値は１食事や運動により急
激かつ大幅に変化するためである。

上記欠点を解消するため、血液検体からＬ−ＨｂＡ　、
Ｃを除去し、　Ｓ−１１ｂＡｌｃのみを測定する試みが
なされている。例えば、　Ｄａｖｉｄ　Ｍ、Ｎａｔｈａ
ｎら、　Ｃ１１ｎｉｃａｌＣｈｅｎ＋１ｓｔｒｙ、２８
５１２〜５１５（１９８２）には、セミカルバジドおよ
びアニリンをＬ−ＨｂＡ　、ｃの除去剤として用い、　
ｐ）Ｉ　５．０．３８℃にて３０分間血液検体を処理す
ることが開示されている。セミカルバジドは、グルコー
スを捕捉し、かつ求核試薬として作用し、　Ｈｂのアミ
ノ基と競合する。アニリンは触媒として作用する。その
結果、　Ｌ−ＨｂＡ、ｃは実質的に除去される。しかし
、　Ｌ−ＨｂＡ、ｃの除去反応が酸性側（ｐ８５．０）
にて、かつ比較的高温（３８℃）でなされるため。

Ｈｂの変性（例えば脱ヘム）が生じる。例えば、イオン
交換クロマトグラフィーによる溶出パターンを観察する
と、脱ヘムによる退色に起因するピーク強度の低下やＨ
ｂＡ　、、とＨｂＡ＋ｂとに起因するピークの増大が観
察される。

特開昭５８−２１００２４号公報には、ジヒドロキシボ
リル化合物（ホウ酸化合物）がＬ−ＨｂＡ　ｌｃの除去
剤として開示されている。このジヒドロキシボリル化合
物はグルコースのＤＨ基をエステル化するためグルコー
スが系内から除去され、その結果、　Ｌ−ＨｂＡ、ｃの
解離が進行する。しかし、　Ｌ−ＨｂＡＩＣを除去する
ためには、高濃度のジヒドロキシボリル化合物を必要と
する。例えば、溶血させた血液を含む試料液中で約０．
１〜ｌ、　ＯＬ　該ジヒドロキシボリル化合物を含む溶
離液を用いて、溶血物を溶出させる場合には、該溶離液
中に０．０１〜０．１５Ｍの割合で含有されることが必
要である。このように高濃度のジヒドロキシボリル化合
物が含有されると、イオン交換クロマトグラフィーにか
ける場合にそのイオン強度が通常の場合とは異なり、そ
の結果９分離条件が変わり、測定が困難となったり測定
条件の補正が必要となる。さらに、最適ｐＨが約４．５
〜６．５゜好ましくは５．０〜６．０であるため、　Ｈ
ｂの変性が生じるおそれがある。

Ｌ−ＨｂＡｌｃのその他の除去方法としては、血液検体
を希釈してグルコース濃度を下げ、　Ｌ−ＨｂＡ、ｃの
解離を促進させる方法が知られている。これを実施する
には１例えば、赤血球を大過剰の生理食塩水でインキュ
ベートしたり、溶血物を透析する方法が採用される。し
かし、これらの方法はいずれも長時間を必要とするため
、臨床検査のための方法としては適切ではない。

（発明が解決しようとする問題点） 本発明は上記従来の欠点を解決するものであり。

その目的とするところは、血液検体中の安定型ヘモグロ
ビン＾１ｃのみを、精度良（簡便に、かつヘモグロビン
を変性させることなく測定しつる。不安定型ヘモグロビ
ンＡ１ｃの除去剤もしくは解離剤。

およびヘモグロビンＡ１ｃの測定方法を提供することに
ある。

（問題点を解決するための手段および作用）本発明の不
安定型糖化ヘモグロビン解離剤は。

血液中のヘモグロビンＡ１の測定に用いられ、該解離削
が、フィチン酸および／またはフィチン酸の塩を主成分
とし、不安定型ヘモグロビンＡｌｃをヘモグロビンとグ
ルコースとに解離する機能を有し。

そのことにより上記目的が達成される。

本発明の糖化ヘモグロビンの測定法は、血液中の少なく
とも赤血球および／またはヘモグロビンを含む試料を、
フィチン酸および／またはフィチン酸の塩を含む解離用
媒質と接触させて、該赤血球および／またはヘモグロビ
ンに含まれる不安定型ヘモグロビンＡＩＣをヘモグロビ
ンとグルコースとに解離させる工程、および、該解離後
の試料中のヘモグロビンをイオン交換クロマトグラフィ
ーで各ヘモグロビン成分に分離し、該試料中に存在する
安定型ヘモグロビンＡＩＣを測定する工程を包含し、そ
のことにより上記目的が達成される。

本発明におけるフィチン酸とは１次のような構造式で表
わされる。

（以下余白） フィチン酸は、その塩であっても同等の効果が得られる
。塩の種類は特に限定されないが、例えばアルカリ金属
やアルカリ土類金属の塩が挙げられ、　Ｎａ塩、　Ｋ塩
などが好適である。

本発明のＬ−ＨｂＡ、、解離剤の使用量は、用いられる
化合物の種類や測定時の条件（血液の溶血などの前処理
の条件、　ｐＨなど）によって異なるが　通常、血液（
全血）１ｍｆあたり１〜１５００ｍｇの割合である。例
えば、血液検体３μｌを４５０μｍの溶血剤溶液にて溶
血させた試料溶液中にフィチン酸が約０．００１〜１．
０Ｗ／Ｖ％（１’ｌ／Ｖ％ｌ；！単位容！［アタリ（７
１）重量を示す）、好ましくは０．０１〜０．２１１／
Ｖ％の割合で添加される。過少であるとＬ−ＨｂＡ、。

の解離・除去効果が得られず、過剰であるとクロマトグ
ラフィー分離時における分離が困難となる。

血液中のＨｂを測定するときには、　［Ｈｂは赤血球中
に存在するため９通常、血液をあらかじめ溶血させてお
く場合が多い。溶血剤としては、界面活性剤が好適に用
いられる。溶血剤としては、高級脂肪族アルコール、ア
ルキルアリールポリエーテルアルコール、スルホネート
化合物のポリオキシエチレンエーテル、サルフェート化
合物のポリオキシエチレンエーテル、ソルビット脂肪酸
エステルのポリオキシエチｌ／ン付加体などがある。溶
血剤の使用量は、その種類などによっても異なるが。

通常、血液１ｒｎｌあたり１０〜２０００ｍｇである。

例えば。

溶血剤を０ｏ０１〜２容１％の割合で含有する溶血用処
理液を血液１−あたり２〜４００ｒｎｆ！の割合で添加
してインキュベートすることにより溶血させることがで
きる。溶血剤が過剰であるとクロマトグラフィーによる
Ｈｂの分離が困難となる。

本発明により糖化ｔｌｂの測定を行うには、まず。

血液検体を必要に応じて溶血剤で前処理して溶血させ、
少なくとも赤血球および／またはＨｂを含む試料を調製
する。この試料を９本発明の上記解離剤を含む解離用媒
質と接触させる。この解離剤は。

試料が後述のクロマトグラフィーのカラム中でイオン交
換により分離されて溶出される以前に赤血球＄よび／ま
たはＨｂと接触すればよい。従って。

解離剤は、血液検体を適当な濃度に希釈するための希釈
液、溶血剤を含む溶血剤溶液、クロマトグラフィーに用
いられる溶離液などに含まれていてもよく、このような
溶液や溶離液もまた。上記解離用媒質と考えられる。そ
の他、解離剤は９例えば試料の赤血球分散液、その溶血
物、　Ｈｂ溶液に固体のまま添加されてもよい。この解
離剤は速やかに溶解し、試料中のＨｂは解離用媒質と接
触すると解離される。

本発明の解離剤を用いた糖化１１ｂの測定方法のうち、
試料を該解離剤で解離させた後、クロマトグラフィーに
かけて分離・測定する方法について。

次に説明する。試料と解離剤（解離用媒質）との接触時
のｐＨは酸性側であるほど、　Ｌ−ＨｂＡ、ｃの解離速
度は上昇するが、ｐＨが低すぎるとｌｌｂの変性が生じ
る。さらに、極端に高いか低いＰＨ条件下ではクロマト
グラフィーによるＨｂの分離が困難になる。

従って９通常、試料および解離剤を含む混合液のｐＨが
４．６〜７．Ｏ１好ましくは５．３〜６．５となるよう
に調整される。試料と解離剤との接触時間は解離剤の種
類や濃度、　ｐＨ条件などにより異なるが。

通常、室温においては１０分以上、好ましくは１０〜３
０分である。温度を上げることによる接触時間の短縮も
可能であり１例えば３７℃にて約３〜７分。

５０℃にて約１〜３分間インキコベートすることもでき
る。このように処理された試料は、イオン交換クロマト
グラフィー（例えば高速液体クロマトグラフィー）にか
けられ、　Ｈｂの各成分が分離されて溶出され、測定さ
れる。

試料溶液を直接イオン交換クロマトグラフィーにかけ上
記解離剤が含有される溶ｍ１＆を用いて溶出させる場合
には、該溶離液のｐＨは、　Ｈｂを変性させず、かつク
ロマトグラフィーにより容易にＨｂＡｌｃが分離されて
測定され得るような範囲であればよい。通常、　ｐＨ５
，０〜６．５の範囲が選択される。試料がクロマトグラ
フィー〇カラムを通過する間に含有されるＬ−ＨｂＡＩ
Ｃが解離され９次いで各Ｈｂ酸成分分離されて溶出され
、測定される。解離剤は。

上記試料の希釈液や溶血用前処理液などとクロマトグラ
フィー用溶離液との両者に含有させることも可能で、こ
の場合は特に効果的にＬ−ＨｂＡ、ｃの解離がなされる
。

このような本発明解離剤によるＬ−ＨｂＡ　、ｅの解離
・除去作用は、　Ｈｂ上の２．３−ＤＰＧポケットの性
質に起因すると考えられる。２．３−ＤＰＧポケットに
関しては、　　Ｂｅｎｅｓｃｈ　ら、　　（Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ、　　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　　Ｒｅｓ。

Ｃｏｍｍｕｎ、　、　　２６．１６２．１９６７）　　
；　Ｃｈａｎｕｔｉｎら、　　（Ａｒｃｈ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、、１２１：９６．
１９６７）などにより詳しく報告されている。この２．
３−［）ＰＧポケットはＨｂのβ鎖のヒスチジン、リジ
ンなどの塩基性アミノ酸残基、およびＨｂＡＩｃのＨｂ
Ｂ鎮のＮ末端バリンによって形成されており、カチオン
性を帯びていることが知られている。本発明解離剤の主
成分であるフィチン酸およびその塩はアニオン性を有し
かつその分子形状も適切であるため上記２．３−ＤＰＧ
ポケットに対して強力な親和性を有する。そのため、グ
ルコースと競合してＨｂのβ鎖Ｎ末端に結合する。その
結果、　　Ｌ−ＨｂＡ、ｃの解離が促進される。

このようにしてフィチン酸および／またはフィチン酸の
塩のＬ−ＨｂＡ、ｃの解離作用によりＬ−ＨｂＡＩｃが
試料中から除去され、　５−ＨｂＡ、ｃのみが試料中に
残留する。この解離剤は、　Ｈｂのイオン交換クロマト
グラフィーによる溶出パターンに影響を与えない。その
ため上記５−ＨｂＡ、ｃは、従来と同様の方法でイオン
交換クロマトグラフィーにより分離され。

精度よく測定される。

（実施例） 以下に本発明を実施例につき説明する。

測定方法 以下の実施例においてＨｂＡ、の測定は、■京都第−科
学製の旧−Ａｕｔｏ　Ａ＋ｃＨＡ−８１２０を°用い適
切条件を選択して測定した。このＨＡ−８１２０はＨＰ
ＬＣによるＨｂＡ＋測定専用装置であり、陽イオン交換
により各Ｈｂ酸成分４分間で分離して溶出する。溶出用
緩衝液は専用の溶離液（リン酸緩衝液）が用いられる。

この装置を用いたＨｂの溶出パターンは一般に第１図に
示される。第１図において＋　ＰｌおよびＰ２はＨｂＡ
ｌａ＋ｂ成分に起因するピークであり＋Ｐ３およびＰ４
はＬ−ＨｂＡ、ｃおよび５−ＨｂＡ　ｌｃ成分に起因す
るピークである。Ｐ、は他のヘモグロビンに起因するピ
ークである。ここで、　　ＨｂＡ、ｃ（Ｓ型とＬ型との
合計）は次式で算出される。

本実施例においては同一人（健常人）の血液を使用し、
採血後直ちにヘパリンを添加したものを新鮮血液として
用いた。

ｐＨ６，３の０．００５Ｍリン酸緩衝液１００−中に溶
血剤としてＴｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００（和光純薬！Ｉ）
Ｏ，１ｍｌを加えて溶血用試薬を調製した。この溶血用
試薬４５０μｌに新鮮血液３μβを加えて溶血させた後
に、上記方法によりＨｂＡ１ｃ（Ｌ型およびＳ型を含む
）を測定したところ２全Ｈｂ中１（ｂＡ＋ｃは５．０％
の割合で存在することがわかった。この値をブランク値
とした。

次に、新鮮面１０ｒｄを遠心分離して得た血球約５ｍｌ
を８／３２１ｎｃｈセロフアンチユーブ（和光紬薬製）
に入れ、生理食塩水１１を用いて各２回、計５時間３７
℃にてインキュベートした。このようにしてＬ−ＨｂＡ
、ｃを解離させた後、これを約１．５μｌ採取し、上記
溶血試薬４５０μｌを用いて溶血させた。

このサンプルについて１ｌｂＡ、ｃを同様の方法で測定
したところ４．３％であった。この値は、血液中の５−
ＨｂＡ、ｃに相当すると考えられる。

実施例１ ０、００５Ｍリン酸緩衝液１００−中に溶血剤としてＴ
ｒｉｔｏｎＸ−１００（和光紬薬製）Ｏ，ｌｒｎ！！お
よび解離剤としてフィチン酸４０％水溶液（Ａｌｄｒｉ
ｃｈ製）約０−１ｇを溶解させ、塩基を加えてｐＨを６
．３に調整し、溶血剤を含む解離用媒質を得た。この溶
血剤含有解離用媒質４５０μｌに新鮮血液３μｌを添加
し、室温で約１０分間放置して溶血ならびにＬ−ＨｂＡ
、ｃの解離を行った。このサンプルのＨｂＡ１ｃを測定
したところ４．４％であった。別に、フィチン酸（解離
剤）を加えない溶血剤溶液を調製し、同様の方法でＨｂ
Ａ、。の測定を行った。

次に、上記溶血剤含有解離用媒質および溶血剤溶液（解
離剤を含まない）のそれぞれについてρ１］を５．８．
５．３．５．０および４．６に設定し、同様にＨｂＡ、
ｃの測定を行った。溶血剤を含む解離用媒質を用いた場
合、および、溶血剤溶液（解離剤を含まない）を用いた
場合の総Ｈｂ中の１ｌｂＡ　、ｃ含有潰、および総りｂ
量を表１に示す。総りｂ量は、もとの血液中の総りｂ量
を１００％として換算した。

（以下余白） 表１から、　ｐＨ条件が低くなるにつ九で）ｌｂＡ、ｃ
値が低くなり、　　Ｌ−１１ｂＡ、ｃが解離・除去され
ていることが明らかである。しかし、　ｐＨが５．３を
下まわると脱ヘムによる退色が認められ、　ｍＨｂ量が
低下するのがわかる。上記系においては、ｐＨ４，６に
おけるｍＨｂ量はｐＨ６，３の場合の約７５％である。

本発明解離剤を用いて測定する場合・には、Ｉ］８６．
３〜５．３の領域において、　Ｈｂが変化することなく
　　Ｌ−ＨｂＡ、ｃが解離・除去されることが明らかで
ある。

実施例２ ０、００５Ｍリン酸緩衝液１００ｍｆ中に溶血剤として
Ｔｒｉｔ、ｏｎＸ−１００（和光紬薬製）０．１−およ
び解離剤としてフィチン酸ナトリウム（Ａｌｄｒｉｃｈ
製）約０．１ｇを溶解させ、塩基を加えてｐＨを６．３
に調整し、溶血剤を含む解離用媒質を得た。この溶血剤
含有解離用媒質４５０μｌに新鮮血液３μｍを添加し、
室温で約１０分間放置して溶血ならびにＬ−ＨｂＡ１ｃ
の解離を行った。このサンプルのＨｂＡ、ｃを測定した
ところ４．３％であった。

実施例３ 実施例２に準じ、フィチン酸ナトリウムの量をそれぞれ
１．０ｇ、　０．２ｇ、　０．０５ｇ、　０．００５ｇ
および０．００１ｇ含有する溶血剤含有解離用媒質くい
ずれもｐｕ約６．０）を調製した。これを用いて実施例
１と同様の方法でＨｂＡｌｃの含有量を測定した。その
結果を表２に示す。

表２ 実施例２に準じ、　ｐＨを６．０に調整°した溶血剤含
有解離用媒質を調製した。これを用い、温度条件を３７
℃、５０℃および６０℃に設定して、それぞれ所定時間
インキュベートした後にＨｂＡ　、ｃの測定を行った。

その結果を表３に示す。

表３ 表２から、フィチン酸ナトリウムが０．００５ｇ　（０
，００５Ｗ／Ｖ％程度）の低濃度であってもＬ−ＨｂＡ
、ｃの除去効果が得られることがわかる。フィチン酸ナ
トリウムが１．０／ｇ　（１，０Ｗ／Ｖ％程度）　（７
）場合１ｔ、　り０７　）ダラムのパターンがブロード
に変化するため、濃度をやや低くすることが望ましい。

実施例４ 表３から反応温度を上げるにつれてより迅速にＬ−Ｈｂ
Ａ　、ｃが除去されることがわかる。しかし、６０℃で
３．５分間インキュベートするとＨｂの変性が認められ
、総りｂ量が約９０％に低下した。そのため。

高温で長時間インキュベートすることは好ましくないと
考えられる。

実施例５ リン酸緩衝液からなるＨｔｌＡ＋ｃ測定用専用測定用専
用溶槽水化学工業■製）にフィチン酸ナトリウムを０．
００５％になるように添加し、解離剤含有溶離液を得た
（ｐＨ６，０）。別に、実施例１と同様の溶血剤溶液（
解離剤を含有しない）を調製し、これを用いて、新鮮血
液を実施例１と同様に溶血させた。この試料をすみやか
に上記溶離液を用いてクロマトグラフィーにかけて５分
離・測定したところ、溶出パターンは、実施例１の解離
用媒質を用いた場合と、はぼ同様であり、　ＨｂＡ＋ｃ
含量は４．４％であった。本発明の解離剤を含有する溶
離液を用いると充分にＬ−ＨｂＡ、Ｃが除去されること
がわかる。

比較例１ 実施例１と同様の溶血剤（実施例１と同濃度）。

セミカルバジド塩酸塩（和光紬薬製）０．０１Ｍ、アニ
リン（和光紬薬製）　０．００４Ｍを含むｐＨ５，３の
０．００５Ｍリン酸緩衝液からなる溶血剤含有Ｌ−１１
ｂＡＩｅ除去剤溶液を調製した。これを用いて新鮮血を
実施例１と同様に溶血させ、溶血物を６０℃にて２分間
インキュベートした。これを測定したどころＨｂＡ、ｃ
含量は４．７％であった。しかし７分画パターンはかな
りブロードになり、Ｈｂピーク総面積は当初の約７０％
であった。

比較例２ 実施例１と同様の溶血剤（実施例１と同濃度）およびホ
ウ酸１．０％を含有するｐｆ１５．３の０．００５Ｍ　
リン酸緩衝液からなる溶血剤含有Ｌ−ＨｂＡ、ｃ除去剤
溶液を調製した。これを用いて新鮮血を実施例１と同様
に溶血させ溶血物を６０℃にて２分インキユベートシた
。これを測定したところ、　　ＨｂＡ、ｃ含量は４．４
％であった。しかし、ホウ酸濃度を０．１％としｐＨを
６．０に調整して同様の測定を行ったところ。

ＨｂＡ、ｃ含量は４．８％となった。このように、ホウ
酸が低濃度である場合には、充分にＬ−１１ｂＡ、Ｃを
除去することができない。

（発明の効果） 本発明によれば、このように、血液中のＨｂＡｌｃのう
ちＬ−ＨｂＡ、ｃが除去され、　５−ＨｂＡ、ｅのみが
精度良く簡便にかつヘモグロビンを変性させることなく
短時間のうちに測定される。

５−ＨｂＡ、、、は、−時的な血糖の上昇もしくは降下
に左右されずに比較的安定して血液中に存在するため、
この測定値はより信頼度の高い糖尿病の指標とされ得る
。測定系を自動化することにより、さらに効果的な臨床
検査が可能となる。

【図面の簡単な説明】

第１図は血液中のＨｂをイオン交換クロマトグラフィー
により分離して測定したときの溶出パターンを示すチャ
ートである。 以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、血液中の糖化ヘモグロビンの測定に用いられる不安
   定型糖化ヘモグロビンの解離剤であって、該解離剤が、
   フィチン酸および／またはフィチン酸の塩を主成分とし
   、不安定型ヘモグロビンＡ＿１＿ｃをヘモグロビンとグ
   ルコースとに解離しうる、不安定型糖化ヘモグロビン解
   離剤。 ２、血液中の少なくとも赤血球および／またはヘモグロ
   ビンを含む試料を、フィチン酸および／またはフィチン
   酸の塩を含む解離用媒質と接触させて、該赤血球および
   ／またはヘモグロビンに含まれる不安定型ヘモグロビン
   Ａ＿１＿ｃをヘモグロビンとグルコースとに解離させる
   工程、および 該解離後の試料中のヘモグロビンをイオン交換クロマト
   グラフィーで各ヘモグロビン成分に分離し、該試料中に
   存在する安定型ヘモグロビンＡ＿１＿ｃを測定する工程
   、 を包含する糖化ヘモグロビンの測定法。