JPH04356191A - リン脂質の製造法 - Google Patents
リン脂質の製造法Info
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- JPH04356191A JPH04356191A JP19482991A JP19482991A JPH04356191A JP H04356191 A JPH04356191 A JP H04356191A JP 19482991 A JP19482991 A JP 19482991A JP 19482991 A JP19482991 A JP 19482991A JP H04356191 A JPH04356191 A JP H04356191A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はリン脂質の製造法に関し
、更に詳しくは、微生物乾燥菌体により脂肪酸構造が変
換もしくは加水分解されたリン脂質を製造する方法に関
する。リン脂質は、単に乳化剤や界面活性剤に用い得る
のみならずリポソームの基材として薬剤運搬体、人工血
液、人工細胞、あるいは免疫診断等への応用が近年注目
されており、また、それ自体生理活性・薬理活性を持つ
ものとして、医学・薬学・工学分野等において様々な用
途が考えられている。このような多様な要求に対応する
ために、種々の用途に応じた構造を有するリン脂質を効
率良く製造する方法を開発することは、産業上非常に意
義あることである。 【０００２】 【従来の技術】従来、このようなリン脂質を製造する方
法としては、膵臓由来あるいは微生物由来の精製リパー
ゼや、キャベツ由来、膵臓由来、あるいは微生物由来の
種々の精製ホスホリパーゼ酵素を直接あるいは固定化等
を行って反応させる方法が提案されている（特開昭６３
−４２６９１、同６３−４４８９３、特開平１−１５３
０９０、同２−３５０９３、同２−４９５９３）。 【０００３】しかし乍ら、このような菌体外酵素を使用
する場合、酵素精製プロセスに要するコストが高く、リ
ン脂質製造プロセスの工業化に際して、どうしても酵素
コストが割高になってしまい、経済的に大きな課題とな
っている。更に、酵素をセライト等の担体に固定化する
方法は反応物質が担体上の酵素まで拡散しにくく、特に
担体の細孔内に吸着された酵素は反応には実質的に関与
せず、有効に働く酵素が減少する等の問題があり、企業
化を企てる上で大きな障害となっている。また、ゲル化
剤等による包括固定化法は固定化の操作が複雑で、しか
も拡散律速による反応速度の低下等の不都合な点が多く
、改善が望まれている。 【０００４】 【発明が解決しようとする課題】本発明は、脂質分解酵
素を有する乾燥菌体を直接反応に供することにより、こ
れらの欠点を改善し、高収率で目的物が得られるリン脂
質内脂肪酸の、エステル交換反応又は加水分解反応法を
提供することを目的とする。 【０００５】 【課題を解決するための手段】即ち、本発明は、エステ
ル結合している脂肪酸構造が変換又は加水分解されたリ
ン脂質を製造するにあたり、変換反応の場合は原料リン
脂質と受容体とを、加水分解反応の場合は原料リン脂質
を、脂質分解酵素を有する微生物乾燥菌体に接触させて
反応を行うことを特徴とするリン脂質の製造法を内容と
するものである。 【０００６】本発明において用いられる原料リン脂質と
しては、脂質分解酵素の基質となり得るものであれば、
天然から抽出したもの、又は抽出後精製したもの、ある
いは合成したものの如何を問わず使用できる。また、市
販のもの、あるいは公知の方法で調製したものを使用し
てもよい。例えば、脱脂大豆レシチン、卵黄レシチン、
ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミ
ン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロー
ル等、又はそれらの混合物等が挙げられる。本発明の効
果を最大に発揮するためには、原料リン脂質として精製
したもの、ないしは組成の単純なものを用いた方が純粋
な反応生成物が得られる面で都合が良い。また、原料コ
ストと入手の容易さ及び酵素に対する反応性の面から、
特にホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノール
アミンまたはホスファチジルセリンが工業的に好ましい
。 【０００７】本発明のエステル交換反応における受容体
は、目的によって任意に選択でき、特定の構造のアシル
基を有するリン脂質を得る場合は、それに応じた脂肪酸
もしくは脂肪酸低級アルコールエステルを使用する。こ
こで脂肪酸の低級アルコールエステルとは、脂肪酸と炭
素数１−６の直鎖飽和一価アルコールのエステル化合物
をいう。例えば生理活性の高いホスファチジルコリンを
得るにはリノール酸、リノレン酸、エイコサペンタエン
酸、ドコサヘキサエン酸、アラキドン酸等の高度不飽和
脂肪酸やそれらの脂肪酸エステルが使用できる。また重
合性を有するホスファチジルコリンを得るためには１０
，１２−オクタデカジエン酸等の重合性を有する脂肪酸
を使用する。その他アルコール類、例えばメタノール、
エタノール、プロパノール等の低級アルコール類やオク
チルアルコール、ドデシルアルコール、テトラデシルア
ルコール、ヘキサデシルアルコール、オクタデシルアル
コール、オレイルアルコール等の高級アルコール類、あ
るいはメチルアミン、ジメチルアミン、エチルアミン、
エタノールアミン、アニリン等のアミン類についても使
用できる。これらは単独又は２種以上組み合わせて用い
られる。 【０００８】反応は、原料リン脂質を溶解又は懸濁する
有機溶媒の存在下で行うことが好ましく、微生物酵素を
失活させることの少ない溶媒系であればいずれも使用で
きる。例えば、石油エーテル、ジエチルエーテル、メチ
ルエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、クロロホ
ルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、ジクロロエタン、
ｎ−ヘキサン、シクロヘキサン、ｎ−オクタン、イソオ
クタン、酢酸エチル、ジオキサン、ベンゼン等の溶媒、
又はこれらの混合溶媒系、又はこれらにアセトン、アセ
トニトリル等の極性溶媒を混合した混合溶媒系が挙げら
れる。ただし、前述のごとくアルコール類は目的反応の
基質となるため、基質として添加する以外に用いること
はあまり好ましくない。 【０００９】本発明において用いられる微生物としては
、リパーゼ及び／又はＡ１ ，Ａ２ ，Ｂ等のホスホリ
パーゼを生成するものであれば全て用いることができる
が、代表的なものとしてリゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）
属、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属、
シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、ムコー
ル（Ｍｕｃｏｒ）属、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）
属、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、クロ
モバクテリウム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属
、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）
属、ストレプトバーチシリウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒ
ｔｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、ミクロモノスポラ（Ｍｉｃｒ
ｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ） 属、ノカルディア（Ｎｏｃａ
ｒｄｉａ） 属、ノカルディオプシス（Ｎｏｃａｒｄｉ
ｏｐｓｉｓ） 属、アクチノマヂューラ（Ａｃｔｉｎｏ
ｍａｄｕｒａ） 属等に属する微生物を挙げることがで
きる。より具体的には、リゾプス・ジャパニカス（Ｒｈ
ｉｚｏｐｕｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ， ＩＦＯ ４７５
８） 、リゾプス・デレマー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｄｅ
ｌｅｍａｒ， ＩＦＯ ４６９７） 、アスペルギルス
・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ，ＩＦ
Ｏ ４０６６）、シュードモナス・フルオレッセンス（
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ，
ＩＦＯ ３０８１）、ムコール・ミーハイ（Ｍｕｃｏｒ
ｍｉｅｈｅｉ， ＡＴＣＣ １６４５７） 、キャン
ディダ・ルゴサ（Ｃａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ， Ａ
ＴＣＣ １０５７１） 、ペニシリウム・サイクロピウ
ム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｙｃｌｏｐｉｕｍ，
ＩＦＯ ５８４７）、クロモバクテリウム・ビスコサム
（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ
， ＡＴＣＣ ６９１８）、ストレプトマイセス・メデ
ィオシディカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｍｅｄｉ
ｏｃｉｄｉｃｕｓ， ＩＦＯ１３２０２） 、ストレプ
トバーチシリウム・シンナモネウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｖ
ｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｉｎｎａｍｏｎｅｕｍ ｓ
ｕｂｓｐ． ｃｉｎｎａｍｏｎｅｕｍ， ＩＦＯ １２
８５２）、ストレプトバーチシリウム・ハチジョーエン
セ（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｈａｃ
ｈｉｊｏｅｎｓｅ， ＩＦＯ １２７８２） 、ミクロ
モノスポラ・チャルセア（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒ
ａ ｃｈａｌｃｅａ， ＡＴＣＣ １２４５２） 、ノ
カルディア・メディテラーネイ（Ｎｏｃａｒｄｉａ ｍ
ｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｉ， ＩＦＯ １３１４２） 、
ノカルディオプシス・ダソンビレイ（Ｎｏｃａｒｄｉｏ
ｐｓｉｓ ｄａｓｓｏｎｖｉｌｌｅｉ， ＩＦＯ１３９
０８） 、アクチノマジューラ・リバノチカ（Ａｃｔｉ
ｎｏｍａｄｕｒａ ｌｉｂａｎｏｔｉｃａ， ＩＦＯ
１４０９５） 等が挙げられ、これらは単独又は２種以
上組み合わせて用いられ、更にこれらの他にも公知の微
生物が適用される。 【００１０】上記微生物を反応の触媒として効率良く作
用させるには、微生物内に脂質分解酵素を多量に含有さ
せる培養方法、及び菌体内脂質分解酵素を受容体と接触
し易く、しかも活性をできるだけ低下させない乾燥条件
が重要となる。 【００１１】培養に用いる培地としては、微生物の培養
に通常用いられるものが広く使用され得る。炭素源とし
ては同化可能な炭素化合物、例えばブドウ糖、ショ糖、
乳糖、麦芽糖、でんぷん、デキストリン、糖蜜、グリセ
リン等や炭化水素類が単独又は２種以上組み合わせて使
用される。窒素源としては利用可能な窒素化合物であれ
ばよく、特にコーンスチープリカー、大豆粉、小麦グル
テン、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、麦芽エキス、
カゼイン加水分解物等の有機化合物が好ましく、これら
は単独又は２種以上組み合わせて用いられる。その他、
リン酸塩、マグネシウム、カルシウム、カリウム、鉄、
マンガン、亜鉛等の塩類が必要に応じて単独又は２種以
上組み合わせて使用される。 【００１２】培養温度は、菌が発育し脂質分解酵素を生
産する範囲内で適宜採用し得るが、通常１５−４０℃が
好適である。培養時間は条件によって異なり、菌体内脂
質分解酵素活性が最大となる時点で培養を終了すればよ
く、通常は１−６日程度である。 【００１３】また、本発明においては、多孔質体からな
る微生物保持体と共に培養を行い、該保持体に微生物を
付着・増殖させ、得られた菌体を使用することができる
。このような方法においては、保持体の材料表層付近に
生物膜状菌体が形成され、これにより、本発明者らの検
討結果によれば、固定化された菌体内の脂質分解活性及
び安定性は、固定化しないものに比べて上昇する。しか
も、このような微生物保持体に固定化された微生物を用
いれば、連続生産や繰り返し回分生産などの反応システ
ムの構築が容易であり、生産性を大幅に向上させること
ができ、工業的に極めて好都合である。 【００１４】上記微生物保持体としては、微生物の持つ
粘着力、吸着力により微生物の吸着増殖を可能ならしめ
る任意の材料が適用できる。例えば、高分子多孔質材料
としては、ポリエチレン、ポリプロピレンなどのポリオ
レフィン系；ブタジエンまたはイソプレンなどのジエン
系；ポリ塩化ビニル、ポリビニルアルコール、アクリル
アミドまたはポリスチレンなどのビニル系重合体；ポリ
エーテル、ポリエステル、ポリカーボネートまたはポリ
アミド等の縮合系；ポリウレタン、シリコン及びフッ素
系樹脂などの材料、また無機材料としては、セラミック
ス、ガラス、活性炭、及び多孔質金属や金属加工材料；
有機材料としてはセルロース、あるいはセルロースに化
学処理を施したメチルセルロース、エチルセルロース、
ハイドロプロピルセルロース等が適用できる。いずれの
材料においても該保持体に微生物を良好に固定化させる
ため、空隙率が６０−９９％、孔の径が２−２０００μ
ｍの範囲にある多孔質材料や、空隙率が６０−９９％で
ある金属加工材料等を使用するのが好ましい。 【００１５】このような種々の保持体は、微生物の種類
及び培養条件等によって適宜選択でき、形状については
、例えば球状、ブロック状あるいはシート状等に加工し
て使用することができる。寸法については、微生物の種
類、培養条件、反応器の種類等によって適宜決定される
が、球状であれば直径が概ね１−１００ｍｍ、ブロック
状のものであれば一辺が概ね１−１００ｍｍのものが使
用される。また、微生物を上記保持体に固定化させるに
は、通常公知の回分、半回分、連続培養法等を用いて容
易に達成される。 【００１６】上記の如く得られた菌体から水分を除去す
る方法としては、原則的には酵素が失活しない温度で乾
燥すればよいが、乾燥速度からは４０−６０℃が好まし
い。ここで単に水分を蒸発させる方法では細胞組織の収
縮が起こり非常に堅くなり、組織内の脂質分解酵素と外
界との接触が断たれ活性を発現することが困難となる。 従って、菌体を乾燥させるには細胞組織の収縮を伴わな
い方法を採用するのが好ましい。このため、水溶性溶媒
、例えばアセトン又はメタノール、エタノール、イソプ
ロパノール等の低級アルコール類中に菌体を浸して組織
内を溶媒に置換した後、溶媒を蒸発させる方法により、
細胞組織の収縮を抑えて乾燥菌体を得ることができる。 この場合、乾燥方法としては真空乾燥、凍結乾燥、低温
乾燥等の公知の乾燥法が使用できる。更に、菌体を溶媒
に浸す前に５重量％以下のグルタールアルデヒド水溶液
に浸して細胞組織を固定化することにより、細胞組織の
収縮を効果的により抑えることができる。このような方
法にて得られた菌体の水分は、通常１−２０重量％の水
分含量に調製される。 【００１７】このようにして調製された乾燥菌体を反応
物質、即ち、原料リン脂質又は原料リン脂質と受容体の
混合物中に懸濁させ反応させるが、交換反応の場合は反
応混合物中の水分濃度を低濃度にするのが好ましく、水
分量は好ましくは５重量％以下、より好ましくは１重量
％以下に制御される。加水分解の場合は、特に低濃度に
保つ必要なく、好ましくは５重量％以上であればよい。 【００１８】反応温度は用いる菌体内酵素の至適温度付
近が好ましく、通常２０−６０℃の範囲である。ただし
、用いる溶媒が低沸点のものである場合等は、この限り
ではない。反応時間については回分法の場合は概ね０．
５−４０時間、半回分法や連続法においても、この反応
条件に見合った反応時間を設定することにより、目的と
する反応を行わせることができる。また反応様式として
は、容器に入れた溶媒中に微生物菌体を分散、懸濁し接
触反応させればよく、回転攪拌や超音波による攪拌方法
、カラム等に充填する方法、気泡塔型反応器等によって
流動させる方法等のあらゆる形式の反応様式が適用でき
る。 【００１９】 【本発明の効果】叙上の如く、乾燥菌体を調製すること
によって、初めてリン脂質のエステル交換反応、もしく
は加水分解反応に使用することができ、このような菌体
内酵素によってリン脂質のエステル交換反応、又はリン
脂質のアシル基の加水分解反応を成功させたのは本発明
が最初である。本発明は、培養された微生物の菌体内酵
素を効率良く利用するものであり、従って従来法の課題
である酵素の抽出や精製工程を省略し、直接リン脂質の
製造反応に応用するものである。従って、本発明によれ
ば、反応に使用する酵素のコストが大幅に低減でき、高
収率で所望のリン脂質を得ることができる。更に、多孔
質の微生物保持体に固定化された乾燥菌体を使用すれば
、菌体内の脂質分解酵素がより効果的に安定化され、し
かも連続あるいは繰り返し回分反応方法が適用できるの
で生産性が著しく向上する。 【００２０】 【実施例】以下、実施例に基づいて本発明を具体的に説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。 尚、実施例１，２，５，６においてはリン脂質の組成分
析、純度検定は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ
）にて行った。固定相には、シリカゲルにアミノプロピ
ル基を化学結合させたカラムを、また、移動相溶媒とし
ては、アセトニトリル：メタノール：１０ｍＭリン酸二
水素アンモニウム＝６１２：２８９：１００の混合溶媒
系をそれぞれ用い、２０５ｎｍにおける吸収を測定する
ことにより定量を行った。また、実施例３，４，７にお
いては逆相ＨＰＬＣによってリン脂質のアシル基の構造
の決定及び定量を行った。 【００２１】実施例１ リゾプス・デレマー ＩＦＯ ４６９７ を、グルコー
ス ０．５％（重量％、以下同じ）肉エキス １．
５％、ペプトン ０．７５％、ＮａＣｌ ０．３％
、ＭｇＳＯ４ ０．１％を含む培地（ｐＨ５．６）で、
温度３０℃、約２日間振盪培養した。得られた菌体を２
回水洗し、次いでアセトンに浸漬した後濾過し、次いで
常温にて真空乾燥した。かくして得られた乾燥菌体の水
分含量は約４％であった。密栓した試験管に、ホスファ
チジルコリン（和光純薬製）２０ｍｇ、ジエチルエーテ
ル５ｍｌ、０．１Ｍトリス−塩酸バッファー（ｐＨ８．
０）５ｍｌ、乾燥菌体５０ｍｇを加え３０℃にて５時間
加水分解反応させた。反応終了後、反応液をＨＰＬＣに
て分析し、各リン脂質量を決定した。分析の結果、リゾ
ホスファチジルコリンのリゾ化率（全リン脂質中のリゾ
リン脂質の割合、即ち原料ホスファチジルコリン量に対
する生成したリゾホスファチジルコリン量の百分率）は
９２％であった。 【００２２】実施例２ 実施例１で使用した微生物の代わりに、ストレプトマイ
セス・メディオシディカス ＩＦＯ １３２０２、スト
レプトバーチシリウム・シンナモネウム ＩＦＯ １２
８５２、ミクロモノスポラ・チャルセア ＡＴＣＣ １
２４５２ 、ノカルディア・メディテラーネイ ＩＦＯ
１３１４２、ノカルディオプシス・ダソンビレイ ＩＦ
Ｏ １３９０８、アクチノマジューラ・リバノチカ Ｉ
ＦＯ １４０９５を使用し、培地をグルコース １．
０％、肉エキス ０．７５％、ペプトン ０．７５
％、ＮａＣｌ ０．３％、ＭｇＳＯ４ ０．１％（ｐ
Ｈ７．０）を含む培地とした以外は、実施例１と全く同
様に行った。分析の結果、ホスファチジルコリンのリゾ
化率はそれぞれ７０％、７８％、２３％、４８％、３７
％、１５％であった。 【００２３】実施例３ リゾプス・デレマー ＩＦＯ ４６９７ を使用して、
実施例１の培地からグルコースを除き、オレイン酸２％
を加えて培養し、他は実施例１と全く同様の方法により
乾燥菌体を得た。密栓した試験管にリン脂質２０ｍｇ、
脂肪酸４０ｍｇ、ジエチルエーテル１０ｍｌ、乾燥菌体
５０ｍｇを加え、３０℃にて５時間エステル交換反応さ
せた。ここで、リン脂質としては２種類のホスファジル
コリン（和光純薬製、旭化成製）を用いた。また脂肪酸
としてはミリスチン酸、オレイン酸、γ−リノレン酸及
びオレイン酸メチルを用いた。それぞれの反応の分析の
結果を表１に示す。表中のエステル交換率とは、原料リ
ン脂質量に対する、アシル基がエステル交換された生成
リン脂質量の百分率である。 【００２４】 【表１】 【００２５】第１表から、いかなる原料リ
ン脂質と受容体との組み合わせでも、エステル交換反応
がおこることがわかる。 【００２６】実施例４ 実施例１で使用した微生物の代わりに、アスペルギルス
・ニガー ＩＦＯ ４０６６ 、シュードモナス・フル
オレッセンス ＩＦＯ ３０８１ 、ムコール・ミーハ
イ ＡＴＣＣ １６４５７ 、キャンディダ・ルゴサ
ＡＴＣＣ １０５７１ 、ペニシリウム・サイクロピウ
ム ＩＦＯ ５８４７ 、クロモバクテリウム・ビスコ
サム ＡＴＣＣ ６９１８を使用し、培地をオリーブオ
イル ２．０％、肉エキス ０．７５％、ペプトン
０．７５％、ＮａＣｌ ０．３％、ＭｇＳＯ４
０．１％（ｐＨ６．５）を含む培地とした以外は、実施
例１と全く同様に行ない、それぞれの乾燥菌体を得た。 密栓した試験管にホスファチジルコリン（旭化成製）２
０ｍｇ、オレイン酸４０ｍｇ、ヘキサン１０ｍｌ、乾燥
菌体５０ｍｇを加え、３７℃にて５時間エステル交換反
応させた。それぞれの反応の分析の結果を表２に示す。 【００２７】 【表２】 【００２８】実施例５ リゾプス・デレマー ＩＦＯ ４６９７ を実施例３と
同様の培地に、一辺６ｍｍのブロック状のポリウレタン
フォームからなる微生物保持体（ブリジストン社製、エ
バーライトＨＲ−５０ ）を１５０個／１００ｍｌ培地
となるように加えて培養し、微生物保持体に菌体を固定
化させた。固定化された菌体は実施例１と同様に乾燥さ
せ乾燥菌体を調製した。微生物保持体中の乾燥菌体量は
概ね５ｍｇ／個であった。なお微生物保持体中の乾燥菌
体量は、公知の方法〔Ｊ． Ｆｅｒｍｅｎｔ． Ｔｅｃ
ｈｎｏｌ．， ｖｏｌ． ６６， ４４１（１９８８）
〕で測定した。容量１００ｍｌのサンプル管に乾燥菌体
が固定化された微生物保持体５０個を添加し、ホスファ
チジルコリン（旭化成製）１００ｍｇ、酢酸エチル２５
ｍｌ、０．１Ｍトリス−塩酸バッファー（ｐＨ８．０）
２５ｍｌを加え、３７℃にて５時間加水分解反応させた
のち、反応液を分析した。分析の結果、ホスファチジル
コリンのリゾ化率は６８％であった。 【００２９】実施例６ 実施例５で使用した微生物の代わりにストレプトマイセ
ス・メディオシディカス ＩＦＯ １３２０２及びスト
レプトバーチシリウム・シンナモネウム ＩＦＯ １２
８５２を使用し、実施例２と同様の培地を使用した以外
は、実施例５と全く同様に行った。このときの微生物保
持体中の乾燥菌体量は概ね４ｍｇ／個であった。反応後
の反応液を分析した結果、ホスファチジルコリンのリゾ
化率はそれぞれ２８％、３５％であった。 【００３０】実施例７ リゾプス・デレマー ＩＦＯ ４６９７ を使用して、
実施例５と全く同様の方法により乾燥菌体を得た。容量
１００ｍｌのサンプル管に乾燥菌体が固定化された微生
物保持体５０個を添加し、ホスファチジルコリン（旭化
成製）１００ｍｇ、オレイン酸２００ｍｇ、酢酸エチル
５０ｍｌを加え、３７℃にて５時間エステル交換反応さ
せた。反応終了後、反応液を全て抜き出し、再び新しい
反応液を添加して同様の反応を繰り返した。このような
繰り返し反応を３回行った。それぞれの反応で得られた
反応液を分析した結果を表３に示す。 【００３１】 【表３】 【００３２】表３から、微生物保持体に固
定化された乾燥菌体の酵素活性は安定で、繰り返し使用
が可能であることがわかる。
、更に詳しくは、微生物乾燥菌体により脂肪酸構造が変
換もしくは加水分解されたリン脂質を製造する方法に関
する。リン脂質は、単に乳化剤や界面活性剤に用い得る
のみならずリポソームの基材として薬剤運搬体、人工血
液、人工細胞、あるいは免疫診断等への応用が近年注目
されており、また、それ自体生理活性・薬理活性を持つ
ものとして、医学・薬学・工学分野等において様々な用
途が考えられている。このような多様な要求に対応する
ために、種々の用途に応じた構造を有するリン脂質を効
率良く製造する方法を開発することは、産業上非常に意
義あることである。 【０００２】 【従来の技術】従来、このようなリン脂質を製造する方
法としては、膵臓由来あるいは微生物由来の精製リパー
ゼや、キャベツ由来、膵臓由来、あるいは微生物由来の
種々の精製ホスホリパーゼ酵素を直接あるいは固定化等
を行って反応させる方法が提案されている（特開昭６３
−４２６９１、同６３−４４８９３、特開平１−１５３
０９０、同２−３５０９３、同２−４９５９３）。 【０００３】しかし乍ら、このような菌体外酵素を使用
する場合、酵素精製プロセスに要するコストが高く、リ
ン脂質製造プロセスの工業化に際して、どうしても酵素
コストが割高になってしまい、経済的に大きな課題とな
っている。更に、酵素をセライト等の担体に固定化する
方法は反応物質が担体上の酵素まで拡散しにくく、特に
担体の細孔内に吸着された酵素は反応には実質的に関与
せず、有効に働く酵素が減少する等の問題があり、企業
化を企てる上で大きな障害となっている。また、ゲル化
剤等による包括固定化法は固定化の操作が複雑で、しか
も拡散律速による反応速度の低下等の不都合な点が多く
、改善が望まれている。 【０００４】 【発明が解決しようとする課題】本発明は、脂質分解酵
素を有する乾燥菌体を直接反応に供することにより、こ
れらの欠点を改善し、高収率で目的物が得られるリン脂
質内脂肪酸の、エステル交換反応又は加水分解反応法を
提供することを目的とする。 【０００５】 【課題を解決するための手段】即ち、本発明は、エステ
ル結合している脂肪酸構造が変換又は加水分解されたリ
ン脂質を製造するにあたり、変換反応の場合は原料リン
脂質と受容体とを、加水分解反応の場合は原料リン脂質
を、脂質分解酵素を有する微生物乾燥菌体に接触させて
反応を行うことを特徴とするリン脂質の製造法を内容と
するものである。 【０００６】本発明において用いられる原料リン脂質と
しては、脂質分解酵素の基質となり得るものであれば、
天然から抽出したもの、又は抽出後精製したもの、ある
いは合成したものの如何を問わず使用できる。また、市
販のもの、あるいは公知の方法で調製したものを使用し
てもよい。例えば、脱脂大豆レシチン、卵黄レシチン、
ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミ
ン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロー
ル等、又はそれらの混合物等が挙げられる。本発明の効
果を最大に発揮するためには、原料リン脂質として精製
したもの、ないしは組成の単純なものを用いた方が純粋
な反応生成物が得られる面で都合が良い。また、原料コ
ストと入手の容易さ及び酵素に対する反応性の面から、
特にホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノール
アミンまたはホスファチジルセリンが工業的に好ましい
。 【０００７】本発明のエステル交換反応における受容体
は、目的によって任意に選択でき、特定の構造のアシル
基を有するリン脂質を得る場合は、それに応じた脂肪酸
もしくは脂肪酸低級アルコールエステルを使用する。こ
こで脂肪酸の低級アルコールエステルとは、脂肪酸と炭
素数１−６の直鎖飽和一価アルコールのエステル化合物
をいう。例えば生理活性の高いホスファチジルコリンを
得るにはリノール酸、リノレン酸、エイコサペンタエン
酸、ドコサヘキサエン酸、アラキドン酸等の高度不飽和
脂肪酸やそれらの脂肪酸エステルが使用できる。また重
合性を有するホスファチジルコリンを得るためには１０
，１２−オクタデカジエン酸等の重合性を有する脂肪酸
を使用する。その他アルコール類、例えばメタノール、
エタノール、プロパノール等の低級アルコール類やオク
チルアルコール、ドデシルアルコール、テトラデシルア
ルコール、ヘキサデシルアルコール、オクタデシルアル
コール、オレイルアルコール等の高級アルコール類、あ
るいはメチルアミン、ジメチルアミン、エチルアミン、
エタノールアミン、アニリン等のアミン類についても使
用できる。これらは単独又は２種以上組み合わせて用い
られる。 【０００８】反応は、原料リン脂質を溶解又は懸濁する
有機溶媒の存在下で行うことが好ましく、微生物酵素を
失活させることの少ない溶媒系であればいずれも使用で
きる。例えば、石油エーテル、ジエチルエーテル、メチ
ルエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、クロロホ
ルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、ジクロロエタン、
ｎ−ヘキサン、シクロヘキサン、ｎ−オクタン、イソオ
クタン、酢酸エチル、ジオキサン、ベンゼン等の溶媒、
又はこれらの混合溶媒系、又はこれらにアセトン、アセ
トニトリル等の極性溶媒を混合した混合溶媒系が挙げら
れる。ただし、前述のごとくアルコール類は目的反応の
基質となるため、基質として添加する以外に用いること
はあまり好ましくない。 【０００９】本発明において用いられる微生物としては
、リパーゼ及び／又はＡ１ ，Ａ２ ，Ｂ等のホスホリ
パーゼを生成するものであれば全て用いることができる
が、代表的なものとしてリゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）
属、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属、
シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、ムコー
ル（Ｍｕｃｏｒ）属、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）
属、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、クロ
モバクテリウム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属
、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）
属、ストレプトバーチシリウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒ
ｔｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、ミクロモノスポラ（Ｍｉｃｒ
ｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ） 属、ノカルディア（Ｎｏｃａ
ｒｄｉａ） 属、ノカルディオプシス（Ｎｏｃａｒｄｉ
ｏｐｓｉｓ） 属、アクチノマヂューラ（Ａｃｔｉｎｏ
ｍａｄｕｒａ） 属等に属する微生物を挙げることがで
きる。より具体的には、リゾプス・ジャパニカス（Ｒｈ
ｉｚｏｐｕｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ， ＩＦＯ ４７５
８） 、リゾプス・デレマー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｄｅ
ｌｅｍａｒ， ＩＦＯ ４６９７） 、アスペルギルス
・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ，ＩＦ
Ｏ ４０６６）、シュードモナス・フルオレッセンス（
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ，
ＩＦＯ ３０８１）、ムコール・ミーハイ（Ｍｕｃｏｒ
ｍｉｅｈｅｉ， ＡＴＣＣ １６４５７） 、キャン
ディダ・ルゴサ（Ｃａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ， Ａ
ＴＣＣ １０５７１） 、ペニシリウム・サイクロピウ
ム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｙｃｌｏｐｉｕｍ，
ＩＦＯ ５８４７）、クロモバクテリウム・ビスコサム
（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ
， ＡＴＣＣ ６９１８）、ストレプトマイセス・メデ
ィオシディカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｍｅｄｉ
ｏｃｉｄｉｃｕｓ， ＩＦＯ１３２０２） 、ストレプ
トバーチシリウム・シンナモネウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｖ
ｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｉｎｎａｍｏｎｅｕｍ ｓ
ｕｂｓｐ． ｃｉｎｎａｍｏｎｅｕｍ， ＩＦＯ １２
８５２）、ストレプトバーチシリウム・ハチジョーエン
セ（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｈａｃ
ｈｉｊｏｅｎｓｅ， ＩＦＯ １２７８２） 、ミクロ
モノスポラ・チャルセア（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒ
ａ ｃｈａｌｃｅａ， ＡＴＣＣ １２４５２） 、ノ
カルディア・メディテラーネイ（Ｎｏｃａｒｄｉａ ｍ
ｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｉ， ＩＦＯ １３１４２） 、
ノカルディオプシス・ダソンビレイ（Ｎｏｃａｒｄｉｏ
ｐｓｉｓ ｄａｓｓｏｎｖｉｌｌｅｉ， ＩＦＯ１３９
０８） 、アクチノマジューラ・リバノチカ（Ａｃｔｉ
ｎｏｍａｄｕｒａ ｌｉｂａｎｏｔｉｃａ， ＩＦＯ
１４０９５） 等が挙げられ、これらは単独又は２種以
上組み合わせて用いられ、更にこれらの他にも公知の微
生物が適用される。 【００１０】上記微生物を反応の触媒として効率良く作
用させるには、微生物内に脂質分解酵素を多量に含有さ
せる培養方法、及び菌体内脂質分解酵素を受容体と接触
し易く、しかも活性をできるだけ低下させない乾燥条件
が重要となる。 【００１１】培養に用いる培地としては、微生物の培養
に通常用いられるものが広く使用され得る。炭素源とし
ては同化可能な炭素化合物、例えばブドウ糖、ショ糖、
乳糖、麦芽糖、でんぷん、デキストリン、糖蜜、グリセ
リン等や炭化水素類が単独又は２種以上組み合わせて使
用される。窒素源としては利用可能な窒素化合物であれ
ばよく、特にコーンスチープリカー、大豆粉、小麦グル
テン、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、麦芽エキス、
カゼイン加水分解物等の有機化合物が好ましく、これら
は単独又は２種以上組み合わせて用いられる。その他、
リン酸塩、マグネシウム、カルシウム、カリウム、鉄、
マンガン、亜鉛等の塩類が必要に応じて単独又は２種以
上組み合わせて使用される。 【００１２】培養温度は、菌が発育し脂質分解酵素を生
産する範囲内で適宜採用し得るが、通常１５−４０℃が
好適である。培養時間は条件によって異なり、菌体内脂
質分解酵素活性が最大となる時点で培養を終了すればよ
く、通常は１−６日程度である。 【００１３】また、本発明においては、多孔質体からな
る微生物保持体と共に培養を行い、該保持体に微生物を
付着・増殖させ、得られた菌体を使用することができる
。このような方法においては、保持体の材料表層付近に
生物膜状菌体が形成され、これにより、本発明者らの検
討結果によれば、固定化された菌体内の脂質分解活性及
び安定性は、固定化しないものに比べて上昇する。しか
も、このような微生物保持体に固定化された微生物を用
いれば、連続生産や繰り返し回分生産などの反応システ
ムの構築が容易であり、生産性を大幅に向上させること
ができ、工業的に極めて好都合である。 【００１４】上記微生物保持体としては、微生物の持つ
粘着力、吸着力により微生物の吸着増殖を可能ならしめ
る任意の材料が適用できる。例えば、高分子多孔質材料
としては、ポリエチレン、ポリプロピレンなどのポリオ
レフィン系；ブタジエンまたはイソプレンなどのジエン
系；ポリ塩化ビニル、ポリビニルアルコール、アクリル
アミドまたはポリスチレンなどのビニル系重合体；ポリ
エーテル、ポリエステル、ポリカーボネートまたはポリ
アミド等の縮合系；ポリウレタン、シリコン及びフッ素
系樹脂などの材料、また無機材料としては、セラミック
ス、ガラス、活性炭、及び多孔質金属や金属加工材料；
有機材料としてはセルロース、あるいはセルロースに化
学処理を施したメチルセルロース、エチルセルロース、
ハイドロプロピルセルロース等が適用できる。いずれの
材料においても該保持体に微生物を良好に固定化させる
ため、空隙率が６０−９９％、孔の径が２−２０００μ
ｍの範囲にある多孔質材料や、空隙率が６０−９９％で
ある金属加工材料等を使用するのが好ましい。 【００１５】このような種々の保持体は、微生物の種類
及び培養条件等によって適宜選択でき、形状については
、例えば球状、ブロック状あるいはシート状等に加工し
て使用することができる。寸法については、微生物の種
類、培養条件、反応器の種類等によって適宜決定される
が、球状であれば直径が概ね１−１００ｍｍ、ブロック
状のものであれば一辺が概ね１−１００ｍｍのものが使
用される。また、微生物を上記保持体に固定化させるに
は、通常公知の回分、半回分、連続培養法等を用いて容
易に達成される。 【００１６】上記の如く得られた菌体から水分を除去す
る方法としては、原則的には酵素が失活しない温度で乾
燥すればよいが、乾燥速度からは４０−６０℃が好まし
い。ここで単に水分を蒸発させる方法では細胞組織の収
縮が起こり非常に堅くなり、組織内の脂質分解酵素と外
界との接触が断たれ活性を発現することが困難となる。 従って、菌体を乾燥させるには細胞組織の収縮を伴わな
い方法を採用するのが好ましい。このため、水溶性溶媒
、例えばアセトン又はメタノール、エタノール、イソプ
ロパノール等の低級アルコール類中に菌体を浸して組織
内を溶媒に置換した後、溶媒を蒸発させる方法により、
細胞組織の収縮を抑えて乾燥菌体を得ることができる。 この場合、乾燥方法としては真空乾燥、凍結乾燥、低温
乾燥等の公知の乾燥法が使用できる。更に、菌体を溶媒
に浸す前に５重量％以下のグルタールアルデヒド水溶液
に浸して細胞組織を固定化することにより、細胞組織の
収縮を効果的により抑えることができる。このような方
法にて得られた菌体の水分は、通常１−２０重量％の水
分含量に調製される。 【００１７】このようにして調製された乾燥菌体を反応
物質、即ち、原料リン脂質又は原料リン脂質と受容体の
混合物中に懸濁させ反応させるが、交換反応の場合は反
応混合物中の水分濃度を低濃度にするのが好ましく、水
分量は好ましくは５重量％以下、より好ましくは１重量
％以下に制御される。加水分解の場合は、特に低濃度に
保つ必要なく、好ましくは５重量％以上であればよい。 【００１８】反応温度は用いる菌体内酵素の至適温度付
近が好ましく、通常２０−６０℃の範囲である。ただし
、用いる溶媒が低沸点のものである場合等は、この限り
ではない。反応時間については回分法の場合は概ね０．
５−４０時間、半回分法や連続法においても、この反応
条件に見合った反応時間を設定することにより、目的と
する反応を行わせることができる。また反応様式として
は、容器に入れた溶媒中に微生物菌体を分散、懸濁し接
触反応させればよく、回転攪拌や超音波による攪拌方法
、カラム等に充填する方法、気泡塔型反応器等によって
流動させる方法等のあらゆる形式の反応様式が適用でき
る。 【００１９】 【本発明の効果】叙上の如く、乾燥菌体を調製すること
によって、初めてリン脂質のエステル交換反応、もしく
は加水分解反応に使用することができ、このような菌体
内酵素によってリン脂質のエステル交換反応、又はリン
脂質のアシル基の加水分解反応を成功させたのは本発明
が最初である。本発明は、培養された微生物の菌体内酵
素を効率良く利用するものであり、従って従来法の課題
である酵素の抽出や精製工程を省略し、直接リン脂質の
製造反応に応用するものである。従って、本発明によれ
ば、反応に使用する酵素のコストが大幅に低減でき、高
収率で所望のリン脂質を得ることができる。更に、多孔
質の微生物保持体に固定化された乾燥菌体を使用すれば
、菌体内の脂質分解酵素がより効果的に安定化され、し
かも連続あるいは繰り返し回分反応方法が適用できるの
で生産性が著しく向上する。 【００２０】 【実施例】以下、実施例に基づいて本発明を具体的に説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。 尚、実施例１，２，５，６においてはリン脂質の組成分
析、純度検定は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ
）にて行った。固定相には、シリカゲルにアミノプロピ
ル基を化学結合させたカラムを、また、移動相溶媒とし
ては、アセトニトリル：メタノール：１０ｍＭリン酸二
水素アンモニウム＝６１２：２８９：１００の混合溶媒
系をそれぞれ用い、２０５ｎｍにおける吸収を測定する
ことにより定量を行った。また、実施例３，４，７にお
いては逆相ＨＰＬＣによってリン脂質のアシル基の構造
の決定及び定量を行った。 【００２１】実施例１ リゾプス・デレマー ＩＦＯ ４６９７ を、グルコー
ス ０．５％（重量％、以下同じ）肉エキス １．
５％、ペプトン ０．７５％、ＮａＣｌ ０．３％
、ＭｇＳＯ４ ０．１％を含む培地（ｐＨ５．６）で、
温度３０℃、約２日間振盪培養した。得られた菌体を２
回水洗し、次いでアセトンに浸漬した後濾過し、次いで
常温にて真空乾燥した。かくして得られた乾燥菌体の水
分含量は約４％であった。密栓した試験管に、ホスファ
チジルコリン（和光純薬製）２０ｍｇ、ジエチルエーテ
ル５ｍｌ、０．１Ｍトリス−塩酸バッファー（ｐＨ８．
０）５ｍｌ、乾燥菌体５０ｍｇを加え３０℃にて５時間
加水分解反応させた。反応終了後、反応液をＨＰＬＣに
て分析し、各リン脂質量を決定した。分析の結果、リゾ
ホスファチジルコリンのリゾ化率（全リン脂質中のリゾ
リン脂質の割合、即ち原料ホスファチジルコリン量に対
する生成したリゾホスファチジルコリン量の百分率）は
９２％であった。 【００２２】実施例２ 実施例１で使用した微生物の代わりに、ストレプトマイ
セス・メディオシディカス ＩＦＯ １３２０２、スト
レプトバーチシリウム・シンナモネウム ＩＦＯ １２
８５２、ミクロモノスポラ・チャルセア ＡＴＣＣ １
２４５２ 、ノカルディア・メディテラーネイ ＩＦＯ
１３１４２、ノカルディオプシス・ダソンビレイ ＩＦ
Ｏ １３９０８、アクチノマジューラ・リバノチカ Ｉ
ＦＯ １４０９５を使用し、培地をグルコース １．
０％、肉エキス ０．７５％、ペプトン ０．７５
％、ＮａＣｌ ０．３％、ＭｇＳＯ４ ０．１％（ｐ
Ｈ７．０）を含む培地とした以外は、実施例１と全く同
様に行った。分析の結果、ホスファチジルコリンのリゾ
化率はそれぞれ７０％、７８％、２３％、４８％、３７
％、１５％であった。 【００２３】実施例３ リゾプス・デレマー ＩＦＯ ４６９７ を使用して、
実施例１の培地からグルコースを除き、オレイン酸２％
を加えて培養し、他は実施例１と全く同様の方法により
乾燥菌体を得た。密栓した試験管にリン脂質２０ｍｇ、
脂肪酸４０ｍｇ、ジエチルエーテル１０ｍｌ、乾燥菌体
５０ｍｇを加え、３０℃にて５時間エステル交換反応さ
せた。ここで、リン脂質としては２種類のホスファジル
コリン（和光純薬製、旭化成製）を用いた。また脂肪酸
としてはミリスチン酸、オレイン酸、γ−リノレン酸及
びオレイン酸メチルを用いた。それぞれの反応の分析の
結果を表１に示す。表中のエステル交換率とは、原料リ
ン脂質量に対する、アシル基がエステル交換された生成
リン脂質量の百分率である。 【００２４】 【表１】 【００２５】第１表から、いかなる原料リ
ン脂質と受容体との組み合わせでも、エステル交換反応
がおこることがわかる。 【００２６】実施例４ 実施例１で使用した微生物の代わりに、アスペルギルス
・ニガー ＩＦＯ ４０６６ 、シュードモナス・フル
オレッセンス ＩＦＯ ３０８１ 、ムコール・ミーハ
イ ＡＴＣＣ １６４５７ 、キャンディダ・ルゴサ
ＡＴＣＣ １０５７１ 、ペニシリウム・サイクロピウ
ム ＩＦＯ ５８４７ 、クロモバクテリウム・ビスコ
サム ＡＴＣＣ ６９１８を使用し、培地をオリーブオ
イル ２．０％、肉エキス ０．７５％、ペプトン
０．７５％、ＮａＣｌ ０．３％、ＭｇＳＯ４
０．１％（ｐＨ６．５）を含む培地とした以外は、実施
例１と全く同様に行ない、それぞれの乾燥菌体を得た。 密栓した試験管にホスファチジルコリン（旭化成製）２
０ｍｇ、オレイン酸４０ｍｇ、ヘキサン１０ｍｌ、乾燥
菌体５０ｍｇを加え、３７℃にて５時間エステル交換反
応させた。それぞれの反応の分析の結果を表２に示す。 【００２７】 【表２】 【００２８】実施例５ リゾプス・デレマー ＩＦＯ ４６９７ を実施例３と
同様の培地に、一辺６ｍｍのブロック状のポリウレタン
フォームからなる微生物保持体（ブリジストン社製、エ
バーライトＨＲ−５０ ）を１５０個／１００ｍｌ培地
となるように加えて培養し、微生物保持体に菌体を固定
化させた。固定化された菌体は実施例１と同様に乾燥さ
せ乾燥菌体を調製した。微生物保持体中の乾燥菌体量は
概ね５ｍｇ／個であった。なお微生物保持体中の乾燥菌
体量は、公知の方法〔Ｊ． Ｆｅｒｍｅｎｔ． Ｔｅｃ
ｈｎｏｌ．， ｖｏｌ． ６６， ４４１（１９８８）
〕で測定した。容量１００ｍｌのサンプル管に乾燥菌体
が固定化された微生物保持体５０個を添加し、ホスファ
チジルコリン（旭化成製）１００ｍｇ、酢酸エチル２５
ｍｌ、０．１Ｍトリス−塩酸バッファー（ｐＨ８．０）
２５ｍｌを加え、３７℃にて５時間加水分解反応させた
のち、反応液を分析した。分析の結果、ホスファチジル
コリンのリゾ化率は６８％であった。 【００２９】実施例６ 実施例５で使用した微生物の代わりにストレプトマイセ
ス・メディオシディカス ＩＦＯ １３２０２及びスト
レプトバーチシリウム・シンナモネウム ＩＦＯ １２
８５２を使用し、実施例２と同様の培地を使用した以外
は、実施例５と全く同様に行った。このときの微生物保
持体中の乾燥菌体量は概ね４ｍｇ／個であった。反応後
の反応液を分析した結果、ホスファチジルコリンのリゾ
化率はそれぞれ２８％、３５％であった。 【００３０】実施例７ リゾプス・デレマー ＩＦＯ ４６９７ を使用して、
実施例５と全く同様の方法により乾燥菌体を得た。容量
１００ｍｌのサンプル管に乾燥菌体が固定化された微生
物保持体５０個を添加し、ホスファチジルコリン（旭化
成製）１００ｍｇ、オレイン酸２００ｍｇ、酢酸エチル
５０ｍｌを加え、３７℃にて５時間エステル交換反応さ
せた。反応終了後、反応液を全て抜き出し、再び新しい
反応液を添加して同様の反応を繰り返した。このような
繰り返し反応を３回行った。それぞれの反応で得られた
反応液を分析した結果を表３に示す。 【００３１】 【表３】 【００３２】表３から、微生物保持体に固
定化された乾燥菌体の酵素活性は安定で、繰り返し使用
が可能であることがわかる。
Claims (5)
- 【請求項１】 エステル結合している脂肪酸構造が変
換又は加水分解されたリン脂質を製造するにあたり、変
換反応の場合は原料リン脂質と受容体とを、加水分解反
応の場合は原料リン脂質を、脂質分解酵素を有する微生
物乾燥菌体に接触させて反応を行うことを特徴とするリ
ン脂質の製造法。 - 【請求項２】 脂質分解酵素がリパーゼ及び／又はホ
スホリパーゼである請求項１記載の製造法。 - 【請求項３】 多孔質の微生物保持体に微生物が固定
化された乾燥菌体を用いる請求項１又は２記載の製造法
。 - 【請求項４】 微生物が、リゾプス属、アスペルギル
ス属、シュードモナス属、ムコール属、キャンディダ属
、ペニシリウム属、クロモバクテリウム属、ストレプト
マイセス属、ストレプトバーチシリウム属、ミクロモノ
スポラ属、ノカルディア属、ノカルディオプシス属及び
アクチノマヂューラ属から選択される少なくとも１種で
ある請求項１、２又は３記載の製造法。 - 【請求項５】 乾燥菌体が、菌体を水溶性溶媒に浸し
て該菌体組成内を溶媒置換した後、該溶媒を蒸発させて
得られたものである請求項１、２又は３記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19482991A JPH04356191A (ja) | 1990-07-10 | 1991-07-08 | リン脂質の製造法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2-183128 | 1990-07-10 | ||
| JP18312890 | 1990-07-10 | ||
| JP19482991A JPH04356191A (ja) | 1990-07-10 | 1991-07-08 | リン脂質の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04356191A true JPH04356191A (ja) | 1992-12-09 |
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ID=26501675
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19482991A Withdrawn JPH04356191A (ja) | 1990-07-10 | 1991-07-08 | リン脂質の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04356191A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997005219A1 (de) * | 1995-07-26 | 1997-02-13 | Röhm Gmbh | Enzymatisches verfahren zur entschleimung von pflanzlichen ölen mit aspergillus-phospholipase |
-
1991
- 1991-07-08 JP JP19482991A patent/JPH04356191A/ja not_active Withdrawn
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997005219A1 (de) * | 1995-07-26 | 1997-02-13 | Röhm Gmbh | Enzymatisches verfahren zur entschleimung von pflanzlichen ölen mit aspergillus-phospholipase |
| US6001640A (en) * | 1995-07-26 | 1999-12-14 | Roehm Gmbh | Vegetable oil enzymatic degumming process by means of aspergillus phospholipase |
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