JPH0436294A - 牛乳由来の新規なガングリオシド及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、牛乳及び乳製品中に含まれる新規な９−０−
アセチル−ＧＤ３あるいはその組成物及びその製造方法
に関する。

〔従来の技術〕

ガングリオシドＧＤ３の特殊な誘導体である９０−アセ
チル−ＧＤ３は、ガングリオシドＧＤ３の末端シアル酸
の９番目炭素の水酸基が酢酸エステルとなっているもの
である。人の黒色皮膚癌であるメラノーマやラットの神
経組織等に現れることが知られており、機能や代謝に関
する様々な研究が行われることが期待されている。

ガングリオシドを含めてスフィンゴ糖脂質は、糖鎖部分
とセラミドと呼ばれる脂質部分によって構成され、さら
にセラミド部分は長鎖塩基と脂肪酸により構成されてい
る。一般にスフィンゴ糖脂質はその糖鎖部分により分類
されているが、同じ糖脂質に分類され同じ糖鎖を持ちな
がらセラミド部分は多様性を有していることが知られて
いる。

つまり、同じ組織由来の同じ糖脂質はＩ！鎖は同じであ
りながら種々の長鎖塩基と脂肪酸により構成されている
わけである。この多様性はスフィンゴ糖脂質の含まれる
臓器や組織によって特徴があることも知られている。

また、スフィンゴ糖脂質の生理機能がＩＩ鎖部分によっ
て担われていることが知られているが、方セラミドの部
分の構造が生理機能発現に大きく関わっていることも抗
ストレス潰瘍活性セレブロシド等の例により知られると
ころである。つまり、スフィンゴ糖脂質は糖鎖構造ばか
りではなくセラミドの部分の構造によっても生理機能の
発現が影響を受けるわけである。

９−○−アセチルーＧＤ３は、特に癌特異抗原として知
られ注目されているが、人メラノーマ細胞由来の９−Ｏ
−アセチル−Ｇ［１３の分子量や構造にライては、長鎖
塩基はスフィンゴシン（ｓｐｈ　ｉｎｇｏｓ　１ｎｅｄ
１８：１）、脂肪酸はパルミチン酸（Ｃ１６：０）とテ
トラオセン酸（Ｃ２４：１）が主要構成物質であること
のみが知られている［Ｊ、Ｂｉｌ、Ｃｈｅｍ。

２６０（１９８５）、　１４５５６−１４５６３）　、
一方、牛の正常な生体成分である牛乳より調製されたバ
ターミルクに９−０−アセチル−ＧＤ３が存在すること
が最近知られた［Ｌｉｐｉｄｓ　２４　（１９８９）、
６８０−６８４）　、これは９０−アセチル−ＧＤ３に
特異的なモノクローナル抗体により検出したもので、分
光学的もしくは化学的に物質の構造解析を行った結果に
よるものではない。この様に、大メラノーマ細胞由来の
９−０−アセチル−ＧＤ３は物質としての構造解析がな
されているものの十分であるとは言い難く、また牛乳よ
り調製されたバターミルクの９−０−アセチル−ＧＤ３
については構造解析が行われていない。

このことは、組織や体液中の９−〇−アセチルＧＤ３の
含有量が極微量であり、そのため分離精製された９−０
−アセチル−ＧＤ３の量が非常に少量微量であるためで
ある。物質としての９−０−アセチル−ＧＤ３を化学的
に捉えるために、また生理機能を研究する上にも大量に
９−０−アセチル−ＧＤ３を分離精製する必要がある。

〔発明が解決しようとする課題〕

本発明者は牛乳もしくは乳製品を出発物質として牛乳由
来の９−０−アセチル−Ｇ［１３を、従来にない規模で
大量に単離精製し、ガングリオシドの構造をＩ！鎖、長
鎖塩基、脂肪酸の全てにわたって決定することにより、
人メラノーマ細胞由来の９−Ｏ−アセチル−ＧＤ３との
差異を明らかにし、物質として異なることを証明し、本
発明をなすに至ヮた。したがって、本発明の目的は種々
の医学や住化学の研究、特にヒトメラノーマの研究に利
用可能な牛乳由来の９−０−アセチル−ＧＤ３をｆｆ１
（Ｊ４すること及びそのための１−０−アセチル−Ｇ［
１３の製造方法を提供することにある。

〔課題を解決するための手段〕

本発明の特徴は、牛乳もしくは乳製品を原料として得ら
れる次の一般式（１）を表される９−０アセチル−ＧＤ
３ガングリオシドにある。

Ｎｅｕ５　　、　９Ａｃ２ａ２　　→　８Ｎｅｕ５八ｃ
ｃｙ２　−＋３Ｇａ２β１−＋　４Ｇ２ｃβ１−ＩＣｅ
ｒ　　（１）（ただし、式中、Ｎｅｕはノイラミン酸残
基を、Ａｃはアセチル基を、Ｇａ２はガラクトース残基
を、Ｇ２ｃはグルコース残基を、Ｃｅｒはセラミド残基
をそれぞれ示す。） さらに、具体的には、次の一般式（Ｕ）で表される９−
０−アセチル−ＧＤ３ガングリオシドに関する。

ＣＯＨ Ｃ０Ｈ （ＩＩ　）　　　　　　　　ＨｚＣＯＣＯＣＨ３（た！
し、式中、Ｒ，はＣＨ３（ＣＨ２）Ｌ−基またはＣＨｓ
（ＣＨｚ）−ＣＨ＝ＣＨ−基を、またＲ２はＣＨ３（Ｃ
Ｈ２）　−基、またはＣＨｉ（ＣＨｚ）ｐＣＨ＝ＣＨ−
（ＣＨｚ）を−基をそれぞれ示す。これらの基中のｌは
１３〜１５の整数を、ｍは１１〜１３の整数を、ｎは１
６〜２２の整数を、ｐは７〜１３の整数をそれぞれ示す
。）また、本発明では上記式（ＩＩ）の−〇〇〇〇Ｍは
塩を形成することもある。このような塩としてナトリウ
ム、カリウム等のアルカリ金属塩、アンモニウム塩等を
例示することができる。さらに塩はアルギニン、リジン
等の塩基性アミノ酸、アミン類等塩基性物質との付加塩
になることもある。

本発明の９−Ｏ−アセチル−ＧＤ３ガングリオシドには
このような塩をも包含する。

これらのガングリオシドとして次の化合物を具体的に挙
げることができる。

化合物　　　ＲＩ　　　　　　　　　　　　　Ｒ２（ｍ
　）　　　　ＣＨ３（ＣＨｚ）　（Ｋ１１２＝１３〜１
５ ＣＨ３（ＣＨｚ）　− ｎ　＝　１６．２０．２１または２２ （ＩＶ）　　　　ＣＨ３（ＣＩ（、）（ロ）２−１３〜
１５ ＣＨ：＋（ＣＨｚ）ｐ　ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨｚ）。

ｐ＝７．ｌＬ１２または１３ （Ｖ）　　　ＣＩ（３（ＣＨ２）、　　−ＣＦＩ＝ＣＦ
Ｉｍ−１１〜１３ ＣＨ３（ＣＩり。

ｎ　＝　１６．２０．２１または２２ （ＶＩ）　　　ＣＩ（ｚ（ＣＨｚ）−−ＣＨ＝ＣＨ−一
−１１〜１３ ＣＨｘ（ＣＨｚ）−ＣＨ＝ＣＦｌ（ＣＨ２）？ｐ＝７．
１１．１２または１３ すなわちセラミドの主要構成成分が、長鎖塩素ｄ１６：
Ｏ）、ヘクサデカスフィンゲニル（ｈｅｘｓａｄｅｃａ
ｓｐｈｉｎｇｅｎｉｎｅ＋ｄ　　１６　：　１　）、ス
フィンガニン（ｓｐｈｉｎｇａｎｉｎｅ、　ｄ　　１８
　：　Ｏ）　、スフィンゴシン（ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎ
ｅ、　ｄ　　１８　：　１　）であり、脂肪酸はオクタ
デカツイン酸（ｏｃｔａｄｅｃａｎｏｉｃ　ａｃｉｄ、
　Ｃ１８：０）、オクタデカツイン酸（ｏｃｔａｄｅｃ
ｅｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　　Ｃ１８：１）、トコサン酸（
ｄｏｃｏｓａｎｏｉｃ　ａｃｉｄ、　Ｃ２２：０）、ト
リコサン酸（ｔｒｉｃｏｓａｎｏｉｃ　ａｃｉｄ、　Ｃ
２３：０）、テトラコサン酸（ｔｅｔｒａｃｏｓａｎｏ
ｉｃ　ａｃｉｄ、Ｃ２４：０）であることを特徴とする
９−〇−アセチルＧＤ３で化合物（ＩＩ［）、　（ＴＶ
）、　（Ｖ）、　（Ｖｌ）で示される化合物あるいはそ
れらの組成物である。

はヘクサデカスフィンガニン（ｈｅｘｓａｄｅｃａｓｐ
ｈｉｎｇａｎｉｎｅＯＨＮ）ｌ Ｃ＝０ （ＣＨＩ）。

ＣＨｌ ｍ　＝１，１１＋　１２．１３ ｎ＝１３．１５ （ＴＶ） ｍ＝１６．２０２１．２２ ｎ＝１３１５ （ＩＩ［） ＣＯＨ Ｃ０ＩＩ ＨｚＣＯＣＯＣＨｚ ＯＨＮＨ Ｃ＝０ （ＣＨｚ）− ＯＨ３ ｍ＝１６．２０，２１．２２ ｎ＝１１．１３ （Ｖ） ＣＩ（ｓ（ＣＨｚ）、１Ｃ１（ミＣＨ−ＣＨ−ＣＨ−Ｏ
ＯＨＮＨ Ｃ二〇 上記糖鎖 （ＣＨｚ）。

本発明の９−Ｏ−アセチル−ＧＤ３は、−ａ的には次の
方法で製造される。

出発物質としては、牛乳または牛乳から得られるバター
ミルク、ホエー、脱脂乳等の乳製品が用いられる。これ
らの出発物質は、種々の成分、例えば蛋白質、乳糖、脂
肪や中性糖脂質、９−０アセチル−ＧＤ３以外のガング
リオシド等を含有している。本発明者らは先に牛乳ガン
グリオシドを効率的に濃縮する方法（ｖｆ開昭６３−２
６９９９２号公報）を擢案したが、この方法によるガン
グリオシド濃縮物中には９−０−アセチル−ＧＤ３も当
然のことなから高度に濃縮されている。本発明では、こ
のような方法を適用し、得られる濃縮物をさらに濃縮乾
固し、クロロホルム−メタノール混液でガングリオシド
を含む脂質を抽出したのち、アセトンで乾固物を洗浄す
ることにより脂肪やコレステロールを除く。またクロロ
ホルム−メタノール−水温液もガングリオシドを含む脂
質の抽出に同様に用いられる。この残香は糖脂質やリン
脂質が主な複合脂質画分であるが、これをさらにイオン
交換クロマトグラフィ、続いてシリカゲルクロマトグラ
フィを行うこと番こより９−Ｏ−アセチル−ＧＤ３を得
る。この様にすると９−０−アセチル−ＧＤ３は白色粉
末で化合物（ＩＩ［）ない（ＶＩ）の組成物が純度９０
％以上で得ることができる。

さらに、本発明では逆相カラムクロマトグラフィー等を
用いてこれらの化合物を単離することもできる。

次に、本発明の上記の方法によって得られたガングリオ
シドの構造解析について説明する。

■　弱アルカリ氷解法 単離した９−０−アセチル−ＧＤ３に０．２Ｎメタノー
ル性水酸化ナトリウムを加え、室温で２時間反応させた
後濃縮脱塩を行い、薄層クロマトグラフィに供した。氷
解を行わない９−０−アセチルＧＤ３は薄層クロマトグ
ラフ上の移動度がアセチル基のないＧＤ３より大きいが
、氷解を行うことによりＧＤ３と完全に一致した。この
ことは、精製したガングリオシドがアルカリに不安定な
ことと、ＧＤ３の誘導体であることを意味している。

■　プロトン核磁気共鳴スペクトル 既知の方法に従って、約３■の牛乳由来の９０−アセチ
ル−ＧＤ３を重水置換した後、ジメチルスルフオキシド
−重水（９８１、容量比）に溶かし、９０″Ｃでプロト
ン核磁気共鳴スペクトルを測定した。その結果を第１図
に示す。このスペクトルをヒトメラノーマ細胞より精製
された９−０アセチル−ＧＤ３のスペクトル（第２図）
と比較すると、糖鎖部分のスペクトルはほぼ一致し、分
光学的に本発明のガングリオシドの糖鎖構造が式（Ｉ）
の通りであることが確認された。

■　アセチル化ＧＤ３のアセチル基の結合位の決定賀佐
らの方法（複合糖脂質研究法■、８７ページ）によりア
セタール化、メチル化、メタツリシス、トリメチルシリ
ル（ＴＭＳ）化を行い、アセチル基の結合している水酸
基にはメチル基を、遊離の水酸基にはトリメチルシリル
基を導入し、ＧＬＣ／ＭＳで分析した（ＧＬＣＯカラム
はＤＢ−１、ＭＳのイオン化電圧は７０ｅＶ）。その結
果、第３図に示すように、Ｎ−メチル−Ｎ−アセチル−
９−０−メチル−４，７，８−トリー〇−Ｔ門Ｓ−ノイ
ラミニルメチルケトシドメチルエステル（Ｎ−Ｍｅｔｈ
ｙｌ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−９−Ｏｍｅｔｈｙｌ−４＋　
７＋　８＋　−ｔｒｉ−０−ＴＭＳ−ｎｅｕｒａｍｉｎ
ｙｌｍｅｔｈｙｌｋｅｔｏｓｉｄｅ　ｍｅｔｈｙｌ　ｅ
ｓｔｅｒ）の質量スペクトルを確認した。これは、ＧＤ
３の末端シアル酸の９番目炭素の水酸基にアセチル基が
結合していることを意味している。

■　メチル化分析によるシアル酸の結合位の決定約１■
の９−０−アセチル−ＧＤ３を箱守の方法で完全メチル
化しその半量を、０．５ｄの０．３Ｎ塩酸メタノールで
７５°Ｃ１Ｂ時間メタツリシスする。

溶媒を留去後乾燥して６０℃２０分でトリメチルシリル
化した。このＴＭＳ誘導体をＧＬＣ／ＭＳで分析した（
ＧＬＣＯカラムはＤＢ−１、ＭＳのイオン化電圧は７０
ｅＶ）。その結果、第４図及び第５図に示すように、８
−０−Ｔ８−０−Ｔメチル−４，７，９−）リー〇−メ
チルーＮ−アセチルーノイラミニルメチルケトシドメチ
ルエステル（８−０−ＴＭＳ−Ｎ−Ｍｅｔｈｙｌ−４゜
７＋　９−　ｔｒｉ−０−ｓｅｔｈｙｌ−Ｎ−ａｃｅｔ
ｙｌ−ｎｅｕｒａｍｉｎｙｌ＋ｇｅｔｈｙｌｋｅｔｏｓ
ｉｄｅ　ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ）とＮ−メチル−４
，７，８，９テトラ−Ｏ−メチル−Ｎ−アセチルーノイ
ラミニルメチルケトシドメチルエステル（Ｎ−Ｍｅｔｈ
ｙｌ−４，７，８，９ｔｅ　ｔｒａ−０−ｓｅ　ｔｈｙ
ｌ−Ｎ−ａｃｅｔｙ　ｌ−ｎｅｕｒａａ＋１ｎｙｌｓｅ
ｔｈｙｌｋｅｔｏｓ　ｉｄｅ■ｅＬｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ
）の質量スペクトルを確認した。

■　メチル化分析による糖鎖の結合位の決定■の完全メ
チル化９−０−アセチル−ＧＤ３の半量用い、既報に従
い、部分メチル化アルジトールアセテート誘導体を調製
した。ＧＬＣ／ＭＳ分析（ＧＬＣＯカラムはＤＢ−１、
ＭＳのイオン化電圧は７０ｅＶ）した結果、１，３．５
−　トリーアセチル−２，４，６−トリーメチル−ガラ
クチトール（１＋３＋５−ｔｒｉ−ａｃｅｔｙ１２＋　
４＋　６−　ｔｒｉ−ｍｅｔｈｌｙ−ｇａｒａｃｔｉ　
ｔｏｌ）と１４．５−　）リアセチル−２，３，６−ト
リーメチル−グルクチトール（Ｌ４．５−ｔｒｉ−ａｃ
ｅｔｙｌ−２＋３．６−ｔｒｌ−ｍｅｔｈｌｙ−ｇｌｕ
ｃｔｉｔｏｌ）を確認した。

■　構成脂肪酸 約１■のガングリオシドをテフロンシール付ネジロ試験
管にとり、１ｍの含水メタノール性ＩＮ塩酸を加え、７
５°Ｃ１８時間加熱する。放冷後、２ｄのヘキサンで３
回抽出して脂肪酸メチルニスチルを得る。さらにハイド
ロキシ酸をアセチル化するため、溶媒を窒素エバポレー
ターで除き、よく乾燥させて、０．１　ｄのピリジン−
無水酢酸（１：１、容量比）を加え８０°Ｃ３０分加熱
する。得られた誘導体をＧＬＣ／ＭＳ（ＤＢ　−１）で
分析した。結果は、第１表の通りである。

第１表 ３Ｇａ２β１　−＋４Ｇ２ｃβ１→ＩＣｅｒであると同
定された。

第２表 ”構成比は％で表示。

■　構成長鎖塩素 ■のヘキサン抽出後のメタノール溶液を窒素エバポレー
ターで乾燥させ、トリメチルシリル化剤を加え６０°Ｃ
２０分加熱する。得られた誘導体をＧＬＣ／ＭＳで分析
した（ＧＬＣＯカラムはＤＢ−１、ＭＳのイオン化電圧
は７０ｅＶ）、結果は、第２表の通りである。

上記■ないし■に示した性質から、本発明に係わるガン
グリオシドは式（ＩＩＩ）、　（ＩＶ）、　（Ｖ）、　
（Ｖｌ）を有する Ｎｅｕ５，９Ａｃ２α２−＊　８Ｎｅｕ５Ａｃα２　→
一般にガングリオシドが生理的に重要な意義を有するの
で、本発明の９−０−アセチル−ＧＤ３ガングリオシド
も生理的に重要な意義をもち、医学もしくは生化学の研
究、特にメラノーマの研究における試薬として有用に利
用することができる。

次に、実施例を示して、本発明のガングリオシドの製造
法を具体的に説明する。

実施例１ ホエー粉３ｋｇを温湯３０２に溶解し、そこにメタノー
ル８０１を加え室温で３０分間撹拌し、さらにクロロホ
ルム４０ｆを加え同様に室温で３０分間撹拌して、ガン
グリオシドを抽出した。

次に、抽出液を濾過し濃縮乾固した後、クロロホルム−
メタノール混液（２：ｌ、容量比）を５００ｄ加え、室
温で３０分間撹拌して濾過した。

濾液にアセトン２０ｆｆｉを加え４°Ｃで一晩静置し、
濾過して白色沈澱を得た。

白色沈澱をクロロホルム−メタノール−水温液（３０：
６０：８、容量比）に溶解し、イオン交換樹脂（口ＥＡ
Ｅ−ｓｅｐｈａｄｅｘＡ−２５）カラム（３，０Ｘ４０
Ｃ！ｌ）に流し、ガングリオシドを吸着させた。さらに
クロロホルム−メタノール−水混液（３０：６０：８、
容量比）　１５００ｄ、ｊり）−）Ｌ、３００１ｄＴ：
中性糖脂質を溶出し、ついで０．２　Ｍ酢酸ナトリウム
メタノール溶液３００ｍでガングリオシドを溶出させた
。

ガングリオシド溶出液を透析し酢酸ナトリウムを除いた
後、エバポレーターで蒸発乾固し、１．２ｇの白色粉末
ガングリオシドを得た。この粉末は１．２ｇ中ニ２４ｍ
ｇ（７）９−０−７セチルーＧＯ３を含んでいる９−０
−アセチル−ＧＤ３の組成物であった。

この粉末をクロロホルム−メタノールへ水温液（７０：
３０：３、容量比）で溶解し、シリカゲルカラム（３，
ＯＸ　１００ｃｍ）に流し、ガングリオシドを吸着させ
た後、クロロホルム−メタノール水混液（７０：３０：
３、容量比）１．５ｆｆで非ガングリオシドを溶出した
。ついで、クロロホルム−メタノール−水混液Ｃ６５：
３５：３．５、容量比）５Ｉ！、で分画しながら９〜０
−アセチル−ＧＤ３を溶出させた。薄層クロマトグラフ
ィーで９０−アセチル−ＧＤ３を含む画分を確認し、９
−０アセチル−ＧＤ３を集め、エバポレーターで蒸発乾
固し、薄層クロマトグラフィーで９５％以上の純度を持
つ９−０−アセチル−ＧＤ３を７．５■得た。

実施例２ バターミルク粉４０ｋｇを水４００！に熔解した溶液に
１ｋｇの枯草菌プロテアーゼを添加し、ｐｔｌ　７．６
、温度４０℃で１５時間反応させ、蛋白質を分解した後
、９０℃で１０分間加熱し、酵素を失活させた。

次いで、この溶液を、ＧＲ−５１（ＤＤＳ社製）の膜面
積０．３６　ｒｙｆの濾過膜を装着した限外濾過装置（
ＬＡＢ−２０型モジユール、ＤＤＳ社製）にて、温度４
０°Ｃ１流量１５１／分、平均圧力０．６　ＭＰａで濾
過し、ガングリオシドを濃縮した。濃縮終了後、濃縮槽
より濃縮液を回収し、凍結乾燥を行って、粉末３０００
ｇを得た。

さらにこの粉末にクロロホルム−メタノール混液（２：
１、容量比）を５１加え、室温で３０分間撹拌して濾過
した。濾液を濃縮した後アセトン４０！を加え４°Ｃで
一晩静置し、濾過して白色沈澱を得た。

白色沈澱をクロロホルム−メタノール−水混液（３０：
６０：８、容量比）に溶解し、イオン交換樹脂（ＤＥＡ
Ｅ−ｓｅｐｈａｄｅｘＡ　−２５）カラム（１０Ｘ６０
ｃｍ）に流し、ガングリオシドを吸着させた。

さらにクロロホルム−メタノール−水混液（３０：６０
：８、容量比）　１５４２、メタノール５１で中性糖脂
質を溶出し、ついで０．２　Ｍ酢酸ナトリウムメタノー
ル溶液２５１でガングリオシドを溶出させた。

ガングリオシド溶出液を透析し酢酸ナトリウムヲ除いた
後、エバポレーターで蒸発乾固し、１．２ｇの白色粉末
ガングリオシドを得た。この粉末は５．４ｇ中に１００
■の９−０−アセチル−ＧＤ３を含んでいる９−０−ア
セチル−ＧＤ３の組成物である。

この粉末をクロロホルム−メタノール−水混液（７０：
３０：３、容量比）で溶解し、シリカゲルカラム（３，
３Ｘ１２０ｃｍ）に流し、ガングリオシドを吸着させた
後、クロロホルム−メタノール水温液（７０：３０：３
、容量比）２．５ｊｌ！で非ガングリオシドを溶出した
。ついで、クロロホルム−メタノール−水混液（６５：
３５：３．５、容量比）５ｆで分画しなから９−０−ア
セチル−ＧＤ３を溶出させた。薄層クロマトグラフィー
で９−〇アセチルーＧＤ３を含む百分を確認し、９−０
アセチル−ＧＤ３を集め、エバポレーターで萎発乾固し
、薄層クロマトグラフィーで９５％以上の純度を持つ９
−０−アセチル−ＧＤ３を１００■得た。

〔発明の効果〕

本発明のガングリオシドは、牛乳由来の９−０アセチル
−ＧＤ３であり、セラミドの部分が人メラノーマ由来の
９−０−アセチル−ＧＤ３とは構造が異なる新規なガン
グリオシドである。本発明により医学及び生化学の研究
、特にメラノーマの研究に有用な試験の提供が可能とな
り、更には多くの医学や診断薬の開発が可能となる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の９−０−アセチル−Ｇ［１３のプロ
トン核磁気共鳴スペクトルを、第２図はヒトメラノーマ
細胞より得られた９−０−アセチルＧＤ３の核磁気共鳴
スペクトルをそれぞれ示す。 第３図は、本発明のＮ−メチル−Ｎ−アセチル９−０−
メチル−４，７，８−）ジー０−フペクトルを、第４図
は、８−０８−０−Ｔ　Ｎ−メチル−４．７．９−トリ
ーＯーメチルーＮーアセチルノイラミニルメチルケトシ
ドメチルエステルの質量スペクトルを、また第５図は、
Ｎ−メチル−４、７，８．９−テトラ−０−メチル−Ｎ
−アセチルノイラミニルメチルケトシドメチルエステル
の質量スペクトルをそれぞれ示す。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）牛乳もしくは乳製品に由来し、次の一般式（１）
   で表される９−Ｏ−アセチル−ＧＤ３ガングリオシド Ｎｅｕ５，９Ａｃ２α２→８Ｎｅｕ５Ａｃα２→３Ｇａ
   ２β１→４Ｇ２ｃβ１→１Ｃｅｒ（ I ）（たゞし、式
   中、Ｎｅｕはノイラミン酸残基を、Ａｃはアセチル基を
   、Ｇａ２はガラクトース残基を、Ｇｌｃはグルコース残
   基を、Ｃｅｒはセラミド残基をそれぞれ示す。）
2. （２）ガングリオシドが次の一般式（II）で表される化
   合物あるいはその組成物である請求項（１）記載の９−
   Ｏ−アセチル−ＧＤ３ガングリオシド▲数式、化学式、
   表等があります▼（II） （たゞし、式中、Ｒ＿１はＣＨ＿３（ＣＨ＿２）（ｉｖ
   ）−基またはＣＨ＿３（ＣＨ＿２）＿ｍ−ＣＨ＝ＣＨ−
   基を、またＲ＿２はＣＨ＿３（ＣＨ＿２）＿ｎ−基、ま
   たはＣＨ＿３（ＣＨ＿２）＿ｐＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ＿２
   ）＿７−基をそれぞれ示す。これらの基中のｌは１３〜
   １５の整数を、ｍは１１〜１３の整数を、ｎは１６〜２
   ２の整数を、ｐは７〜１３の整数をそれぞれ示す。）
3. （３）牛乳もしくは乳製品を、クロロホルム−メタノー
   ル混液またはクロロホルム−メタノール−水混液によっ
   てガングリオシドを抽出し、抽出液をアセトンで洗滌し
   、イオン交換クロマトグラフィー、シリカゲルクロマト
   グラフィー処理することによって請求項（１）または（
   ２）記載の９−Ｏ−アセチル−ＧＤ３を得ることを特徴
   とするガングリオシドの製造法