JPH04365497A - 抗レンチナン単クローン抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、多糖体レンチナンに対
する単クローン抗体および該単クローン抗体を産生する
融合細胞に関する。

【０００２】現在抗癌剤として上市されているレンチナ
ンは、その抗癌活性をより強く発現させるために、投与
後の体内分布の解析、癌患者個々のレンチナンに対する
感受性の判別、あるいは、レンチナンと結合する細胞の
同定等のより詳細な解析が望まれている。これらのこと
が明らかになれば、癌患者個人個人に応じた、より適切
な投与時期、投与量の選択が容易となる可能性がある。 抗レンチナン抗体は、これらの問題を解決するための有
用な手段となり得、また投与後の効果を予知する方法に
も応用できると考えられる。

【０００３】

【従来の技術】従来、抗原性を有する多糖体はそのもの
自身を免疫源として動物を免疫することにより、また、
レンチナンのようにきわめて抗原性が低い多糖体は蛋白
質と複合体を形成させた上で免疫することにより、それ
ぞれ抗血清を得ていた（第４９回日本癌学会総会記事，
３４５ページ，１９９０年）。しかしながら、レンチナ
ンに対する抗血清では、量的に限りがあり、また、動物
の個体により誘導されてくる抗体の種類、力価等がそれ
ぞれ異なるため、同一条件下での詳しい検討ができない
という問題があった。

【０００４】かかる問題点を解決するために、同一抗体
を安定的にかつ再現性をもって作製する方法として、多
糖体に対する単クローン抗体を産生する融合細胞を得る
ことが考えられる。しかしながら、レンチナンの抗血清
を作製する際に利用されている免疫沈降法を用いた抗体
の検出法では、抗体量が血清量にして数百μｌ必要とな
り、融合細胞培養上清中の単クローン抗体の検出が不可
能であるという問題がある。

【０００５】また、蛋白質の単クローン抗体作製の際に
利用される抗原を固相化した酵素免疫測定法を応用する
ことが考えられるが、レンチナンのような多糖体は、蛋
白質の場合と異なり固相化することが困難であるという
問題があるため、かかる酵素免疫測定法ではレンチナン
に対する抗体の検出が困難である。したがって、レンチ
ナンに対する抗体の高感度検出法を確立しなければ、単
クローン抗体の作製は不可能である。

【０００６】現在抗癌剤として上市されているレンチナ
ンは、その効果を予知するより良い方法の開発が望まれ
ている。例えば、患者個々の血液由来細胞とレンチナン
との反応性の強弱から患者のレンチナンに対する感受性
を判別する方法が考えられる。そのためには、何等かの
方法でレンチナンを検出することが必要となる。現在、
レンチナンを検出する方法としては、リムラステストを
用いた検出法があるが、特異性、試薬のロット差、レン
チナンのロット差による反応性の差等さまざまな問題が
あり、また血清中のレンチナンのみが検出可能で、細胞
あるいは物質レベルでの検出は不可能である。したがっ
て、レンチナンに対する抗体が得られれば、上記の問題
を解決する有効な手段となり得る。

【０００７】それ故、レンチナンに対する抗体を利用し
て患者の診断を行うことは、患者にとって大いに有用と
考えられる。その際、患者個々の診断が同一条件下で行
われることが望ましいが、レンチナンに対する抗血清で
は、抗体の種類、力価等が異なるため困難である。その
ため、レンチナンに対する同一反応性を有する抗体を安
定的にかつ再現性をもって作製することが可能な、抗レ
ンチナン単クローン抗体を産生する融合細胞を得ること
が望まれている。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明が解決しようと
する課題は、レンチナンに対して同一反応性を有する抗
体を安定的にかつ再現性をもって産生する融合細胞を作
製すること、およびこれを達成するために、従来法では
不可能であった、融合細胞培養上清中の抗体をも検出可
能な高感度検出方法を確立し、その方法を利用して、単
クローン抗体を産生する融合細胞をクローニングし、単
クローン抗体を得ることにある。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために鋭意検討を行った結果、レンチナンを
過ヨウ素酸あるいはその塩で酸化開裂し、アルデヒド基
を導入し、そのアルデヒド基に蛋白質（アルブミン、ヘ
モグロビン等）のアミノ基をシッフ塩基の形で結合させ
た後に水素化ホウ酸ナトリウムで還元し、レンチナン・
蛋白質複合体を得た。次いで、レンチナン・蛋白質複合
体をプラスチックプレートに固相化することにより、従
来、抗体の検出に利用されていた免疫沈降法と比較して
１００００倍以上の高感度の抗レンチナン抗体検出法の
確立に成功した。この方法を応用し、レンチナン存在下
での結合競合法との組合せを利用することを特徴とした
抗体検出法を用いて、単クローン抗体産生融合細胞のク
ローニングを行い、抗体産生融合細胞を得ること、およ
び単クローン抗体の作製に成功した。

【００１０】以下、本発明を詳細に説明する。

【００１１】まず、レンチナンに対する抗体を高感度に
検出する方法を確立するため、蛋白質の抗体検出に利用
されている酵素免疫定量法の応用を検討する。レンチナ
ンのような多糖体は蛋白質と異なり、プラスチックプレ
ートへの固相化が不可能なため、レンチナンと蛋白質と
の複合体を形成し、蛋白質のプラスチックプレートへの
結合能を利用し、プラスチックプレートに蛋白質を仲介
した形でレンチナンを固相化する。具体的には多糖体レ
ンチナンをメタ過ヨウ素酸ナトリウムで酸化開裂してア
ルデヒド基を導入し、そのアルデヒド基に蛋白質のアミ
ノ基をシッフ塩基の形で結合させた後に水酸化ホウ酸ナ
トリウムで還元し、レンチナン・蛋白質結合体を得る。 ここで用いられる蛋白質は特に限定されないが、ウシ血
清アルブミン（以下、ＢＳＡと記す）またはヒトヘモグ
ロビン（以下、Ｈｂと記す）が好適である。次いでこの
レンチナン・蛋白質複合体を高速液体クロマトグラフィ
ーにより未反応の原料を除いて精製する。その後このレ
ンチナン・蛋白質複合体をプラスチックプレートに添加
して室温で放置し、プラスチックプレートに固相化する
。

【００１２】次に、固相化されたレンチナン・蛋白質複
合体を利用した高感度抗体検出法の確立について説明す
る。上記の方法で作製したレンチナン・蛋白質複合体で
マウス（どの動物種でも可）を免疫して得た抗レンチナ
ン・蛋白質複合体マウス抗血清をリン酸緩衝生理食塩水
（以下、ＰＢＳと記す）で希釈後、プラスチックプレー
ト上の固相体に添加する。

【００１３】ここで、マウスの免疫源として用いるレン
チナン・蛋白質複合体の蛋白質は、前記プラスチックプ
レートへの固相化に用いられるレンチナン・蛋白質複合
体の蛋白質とは異なるものであるのが好ましく、例えば
、マウス免疫源としてレンチナン・ＢＳＡ複合体を用い
、前記プラスチックプレートへの固相化用にはレンチナ
ン・Ｈｂ複合体を用いるのが好ましい。このように異な
る蛋白質の複合体を用いるのは、このマウス抗血清中に
はＢＳＡに対する抗体も含まれているため、同一蛋白質
（ＢＳＡ）を用いた複合体をプラスチックプレートに固
相化した場合、マウス抗血清の添加によってＢＳＡに対
する抗体も反応すると考えられ、レンチナンの抗体を特
異的に検出することができないためである。マウス抗血
清添加後、ＰＢＳにて希釈した市販の酵素、蛍光あるい
はビオチン標識抗マウス免疫グロブリン抗体をさらに添
加し、レンチナンに結合したマウス由来抗レンチナン抗
体を検出する。その結果、血清レベルで１００００倍希
釈でも抗体の検出が可能であることが判明し、従来から
レンチナンの抗体検出法で、用いられてきた免疫沈降法
と比較して、１００００倍以上の感度で検出することに
成功した。

【００１４】上記の検出方法は多糖体レンチナンに対す
る単クローン抗体作製に十分利用できると考えられるが
、固相化したレンチナンおよび免疫に用いたレンチナン
は、レンチナン・蛋白質複合体を合成する際に、レンチ
ナンをメタ過ヨウ素酸ナトリウム処理にて一部β−（１
→６）結合の枝別れを酸化開裂後還元し、ポリアルコー
ル化しているため、この処理したポリアルコール化部分
を認識している抗体も検出している可能性がある。 そこで、この検出法の過程で、抗体溶液あるいは融合細
胞の培養上清を添加する際に、無処理のレンチナン溶液
を加えることで、固相化されたレンチナン・Ｈｂ複合体
への結合阻害の有無を利用した結合競合阻害法の組合せ
を応用する。これを用いることで、ポリアルコール部分
を認識する抗体が存在するならば、固相化されたレンチ
ナン・Ｈｂ複合体のみに反応し、添加した無処理のレン
チナンには反応しないため結合阻害がかからず、またレ
ンチナン自身に反応する抗体が存在するならば、添加し
た無処理のレンチナンとも反応するため、固相化された
レンチナン・Ｈｂ複合体に結合する抗体量が減少すると
考えられる。

【００１５】上記の検出法を利用し、レンチナンに対す
る単クローン抗体の作製を行う。まず、前述の方法にて
レンチナンにＢＳＡを結合させたレンチナン・ＢＳＡ複
合体でマウスを免疫する。そのマウスの脾臓を摘出して
単細胞浮遊液とし、マウス骨髄腫細胞Ｐ３×６３Ａｇ８
．６５３と細胞融合を行う。融合した細胞を、例えばヒ
ポキサンチン、アミノプテリン、チミジン含有ＲＰＭＩ
−１６４０培地（以下ＨＡＴ培地と記す）にて、９６穴
プラスチックプレート中で培養し、コロニー出現が認め
られた培養液を前述の検出法にて抗体の有無を検討する
。抗体価陽性のコロニーを限界希釈法にて希釈しクロー
ニングを行い、レンチナンに対する単クローン抗体およ
びその抗体産生融合細胞を得る。そして、このようにし
て得た抗体産生融合細胞から単クローン抗体を得る。

【００１６】以下に、本願発明を実施例に基づいて更に
詳細に説明する。もちろん、本発明はこれらの例によっ
て制限されるものではない。

【００１７】

【実施例】

（１）レンチナン・蛋白質複合体の調製レンチナン２ｍ
ｇ／ｍｌを３ｍＭのメタ過ヨウ素酸ナトリウム（種々の
検討の結果この濃度が最適であった。）にて４℃、遮光
下で一昼夜酸化開裂した。過剰のメタ過ヨウ素酸ナトリ
ウムをエチレングリコールを加えて分解し、反応液を蒸
留水にて４℃、一昼夜透析した。透析内液にＢＳＡある
いはＨｂ（１７ｍｇ／ｍｌ）を１／４量加え、水酸化ナ
トリウム溶液でｐＨ＝９．５として、４℃で一昼夜攪拌
し、レンチナンと蛋白質を結合させた。結合反応後、十
分量の水素化ホウ素ナトリウムを加え、４℃で一昼夜攪
拌しながら還元した。その後、過剰の水素化ホウ素ナト
リウムを塩酸で分解して溶液のｐＨを中性とし、さらに
反応液を蒸留水にて４℃、一昼夜透析した。

【００１８】上記反応溶液中の未反応のＢＳＡあるいは
Ｈｂを除去するため、高速液体クロマトグラフィーによ
るゲル濾過を行った。カラムは、ＴＳＫｇｅｌＧ３００
０ＳＷ分析用および分取用カラムを用い、ＰＢＳを溶出
溶媒として行った。検出は分析には示差屈折計および紫
外検出器（波長２８０ｎｍ）を用い、レンチナンは２８
０ｎｍの紫外部吸収（以下、ＵＶ吸収と記す）を持たず
、かつ排除限界に溶出されること、一方、ＢＳＡ，Ｈｂ
はいずれもＵＶ吸収を持ち、なおかつ排除限界には溶出
されず、遅れて溶出されることを確認した。次に反応液
を分析した結果、排除限界に溶出されたピークがＵＶ吸
収を持つことから、レンチナンに蛋白質が結合したと考
えられた。その後遅れて、未反応のＢＳＡあるいはＨｂ
が溶出された。図１は、レンチナン・ＢＳＡ複合体調製
におけるレンチナン・ＢＳＡ反応液、レンチナン溶液お
よびＢＳＡ溶液の高速クロマトグラフィーによるゲル濾
過法でのクロマトグラムを示す。この反応液の排除限界
に溶出される画分を分取用カラムを用いて分取精製した
。これら合成したレンチナン・蛋白質複合体のうち、レ
ンチナン・ＢＳＡ複合体を免疫源として用い、一方、レ
ンチナン・Ｈｂ複合体は後述の抗体の高感度検出法の確
立に利用した。

【００１９】（２）抗レンチナン単クローン抗体および
その抗体産生融合細胞の作製 レンチナン・ＢＳＡ複合体溶液にフロイントの完全アジ
ュバント（ディフコ社製）を加え、混合乳化し、レンチ
ナン量で１ｍｇ／ｋｇ（ＢＳＡ量では２ｍｇ／ｋｇ）と
なるように、マウスに２週間に１回合計２回皮下注射し
免疫した。免疫初日から各週、眼底より採血し血清を得
た。これら血清サンプル中のレンチナンに対する抗体を
、後述の抗体の高感度検出法にて検討し、免疫後４〜５
週目で抗体価の上昇を確認した。図２に、抗体価の上昇
が認められたことを示す。

【００２０】抗体価の上昇したマウスの心臓より全採血
を行って血清を得、以下、抗体検出の際の陽性対照（以
下、マウス抗レンチナン抗血清と記す）として用いた。 さらに、このマウスの脾臓を摘出し、単細胞浮遊液とし
、ポリエチレングリコールを用いる常法に従い、マウス
骨髄腫Ｐ３×６３Ａｇ８．６５３と細胞融合を行った。 この細胞浮遊液をＨＡＴ培地で、９６穴プレートで培養
し、コロニー形成の認められた穴の培養上清を抗体検出
法にて検討した。その結果、抗体陽性であったコロニー
を限界希釈法にて希釈し、ＲＰＭＩ−１６４０培地にて
マウス胸腺細胞をフィーダー細胞とし２次培養を行った
。その後、２次培養後コロニー形成の認められたものの
培養上清を抗体検出法によって抗レンチナン抗体の検出
を行い、抗レンチナン単クローン抗体産生融合細胞を得
た。なお、この抗レンチナン単クローン抗体産生融合細
胞は、工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されてい
る（ＦＥＲＭ　　Ｐ−１２２８４）。図３に高感度抗レ
ンチナン抗体検出法と結合競合阻害試験（後述）の組合
せを利用した方法で抗レンチナン単クローン抗体を検出
した結果を示す。

【００２１】このようにして得られた融合細胞を大量培
養し、ジメチルスルホキサイドを用いる常法に従って凍
結保存した。また、プリスタン（シグマ社製）をあらか
じめ腹腔内に接種したマウスに融合細胞を腹腔内接種し
、その後腹水を採取し、腹水細胞を同様に凍結保存した
。なお、得られた単クローン抗体は、マウスモノクロー
ナル抗体アイソタイピングキット（アマシャム社製）を
用いて検討した結果、免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）であ
ることが判明した。

【００２２】（３）レンチナンのプラスチックプレート
への固相化 上記（２）で記載した抗レンチナン単クローン抗体作製
過程における、融合細胞培養上清中の抗レンチナン抗体
を検出可能な酵素免疫定量法（以下、ＥＬＩＳＡ法と記
す）を確立するため、レンチナンをプラスチックプレー
トに固相化した。（１）で記載したレンチナン・Ｈｂ複
合体溶液を、レンチナン濃度で５μｇ／ｍｌ（Ｈｂ濃度
で１０μｇ／ｍｌ）となるようにＰＢＳにて希釈後、５
０μｌ／穴で９６穴プラスチックプレートに添加し、室
温で２時間以上放置した。その後、１５０μｌ／穴のＰ
ＢＳでプレートを洗浄し、ＰＢＳで４倍希釈したブロッ
クエース（雪印社製）３００μｌ／穴を添加して室温で
１時間放置後、プレートの固相化されていない部分をブ
ロッキングした。レンチナン・Ｈｂ複合体が固相化され
たかどうかの確認は、以下のようにして行った。すなわ
ち（１）で記載した方法で調製したレンチナン・ＢＳＡ
複合体でウサギを免疫して得たウサギ抗レンチナン抗血
清（免疫沈降法にて抗レンチナン抗体が存在することを
確認済みのもの）をＰＢＳで１００〜１０００倍希釈し
、それを５０μｌ／穴で添加して室温で１時間放置後、
０．５％ＢＳＡ含有ＰＢＳでプレートを３回洗浄した。 固相化レンチナン・Ｈｂ複合体に結合したウサギ由来の
抗レンチナン抗体を検出するため、市販のアルカリフォ
スファターゼ標識抗ウサギ免疫グロブリン抗体（ザイメ
ット社製）をＰＢＳで２００倍希釈して５０μｌ／穴で
添加した。室温で１時間放置後、０．５％ＢＳＡ含有Ｐ
ＢＳで３回洗浄後、１ｍｇ／ｍｌになるように、１０ｍ
Ｍ塩化マグネシウム含有０．０５Ｍ炭酸水素ナトリウム
緩衝液、ｐＨ＝９．５（以下、ＰＮＰＰ緩衝液と記す）
で調製した市販のアルカリフォスファターゼ基質（シグ
マ社製）を１００μｌ／穴で添加し、２０〜３０分後黄
色に発色した溶液の４０５ｎｍの吸光度をマイクロプレ
ートリーダーで測定した。抗レンチナン抗体の固相化し
たレンチナン・Ｈｂ複合体のＨｂ部分への非特異的結合
の可能性を除去するため、Ｈｂ（１０μｇ／ｍｌ）のみ
を固相化したプレートでも同様の検討を行った。図４に
レンチナン・Ｈｂ複合体を固相化（ａ）およびＨｂのみ
を固相化（ｂ）して、抗レンチナン抗血清を用いて検討
した結果を示す。

【００２３】図４の結果より、レンチナン・Ｈｂ複合体
を固相化したプレートのみ、抗レンチナン抗体が結合し
ていて、非特異的にＨｂに結合することはないことが判
明した。以上の結果より、レンチナン・Ｈｂ複合体を利
用することによって、Ｈｂを仲介した形でレンチナンを
プラスチックプレートに固相化することに成功した。 （４）固相化レンチナン・Ｈｂ複合体を利用した抗レン
チナン抗体の高感度検出法の確立 （３）に記載した方法で固相化したレンチナン・Ｈｂ複
合体を利用して、抗レンチナン抗体の高感度検出法を確
立した。マウス抗レンチナン抗体の陽性対照として、（
２）で記載した方法で得たマウス抗レンチナン抗血清を
用いた。レンチナン・Ｈｂ複合体を固相化し、ブロック
エースにてブロッキング後、マウス抗レンチナン抗血清
あるいは正常マウス血清をＰＢＳにて５０００倍以上希
釈し、５０μｌ／穴になるように添加した。室温で２時
間放置後、０．５％ＢＳＡ含有ＰＢＳにて３回洗浄し、
ＰＢＳで２００倍希釈した市販のビオチン標識抗マウス
免疫グロブリン抗体（ザイメット社製）を５０μｌ／穴
で添加した。室温で１時間放置後、０．５％ＢＳＡ含有
ＰＢＳで３回洗浄し、ＰＢＳで１０００倍希釈した市販
のストレプトアビジンアルカリフォスファターゼコンジ
ュゲート（アマシャム社製）を５０μｌ／穴添加した。 室温で１時間放置し、０．５％ＢＳＡ含有ＰＢＳで３回
洗浄後、ＰＮＰＰ緩衝液で１ｍｇ／ｍｌになるように調
製した基質溶液（（３）記載のものと同様）を１００μ
ｌ／穴添加し、２０〜３０分後、プレートリーダーにて
吸光度（４０５ｎｍ）を測定した。図５にその結果を示
す。図５には、血清を５０００倍希釈した例を示したが
、１００００倍希釈でも十分検出可能であった。この結
果より、従来から多糖体の抗体の検出に用いられてきた
免疫沈降法においては、血清原液で数百μｌ必要とする
のに対し、この検出法では血清１００００倍希釈で５０
μｌの量ですみ、１００００倍以上検出感度を向上する
ことに成功した。

【００２４】（５）結合競合試験法との組合せを利用し
た抗レンチナン抗体の検出法の確立 （４）で記載した方法によって抗レンチナン抗体の高感
度検出が可能と考えられるが、レンチナンの単クローン
抗体を得るには、レンチナンは極めて抗原性が低いため
、免疫する際にはレンチナン・蛋白質（ＢＳＡ）複合体
として免疫する必要がある。他の抗原性を有する多糖体
の場合は、そのもの自身を免疫源として免疫するため、
それ自身に対する抗体のみが誘導されるであろうが、レ
ンチナン・ＢＳＡ複合体で免疫した場合には、ＢＳＡに
対する抗体と、複合体合成の際にレンチナンの一部を酸
化開裂し還元することによってできるポリアルコール化
された部分に対する抗体とが誘導される可能性がある。 また、（３）で述べたように、検出法に利用するために
固相化したレンチナン・Ｈｂ複合体も、レンチナン・Ｂ
ＳＡ複合体と同様な処理をしているため、レンチナンの
一部がポリアルコール化された部分が存在する。 そのため、レンチナン・ＢＳＡ複合体で免疫することに
よってレンチナンのポリアルコール化された部分に対す
る抗体が誘導された場合には、（４）で示した検出法で
はその抗体が反応する可能性がある。そこで、無処理レ
ンチナンに対する抗体のみを検出する方法として、（４
）の方法において、抗レンチナン抗血清あるいは培養上
清を添加する際に、無処理レンチナン溶液を添加してレ
ンチナンに対する抗体を反応させることによって、固相
化したレンチナン・Ｈｂ複合体への抗体の結合を減少さ
せるという、結合競合阻害試験法を組合せることを見い
だした。この方法を組合せることにより、レンチナンの
一部ポリアルコール化された部分に対する抗体は、無処
理レンチナンとは反応せず、固相化レンチナン・Ｈｂ複
合体への結合は阻害されないため、レンチナン自身に対
する抗体のみが検出可能となる。先にも述べたように、
抗原性を有する多糖体それ自身を免疫した場合には、結
合競合阻害試験法の組合せは、必要ないものと考えられ
る。

【００２５】上記の方法で行った結果を図６に示す。抗
体検出検体としては（２）で記載したマウス抗レンチナ
ン抗血清、（４）で記載した方法で陽性であった培養上
清およびポリアルコール化の程度の著しいレンチナン・
ＢＳＡ複合体を合成し、これでマウスを免疫して得た、
レンチナンのポリアルコール化された分部に対する抗血
清を用いて、無処理レンチナン溶液存在下あるいは非存
在下、ポリアルコール化レンチナン存在下での、固相化
レンチナン・Ｈｂ複合体への結合を調べた。その結果、
抗レンチナン抗血清および（４）の陽性培養上清は、無
処理レンチナンを共存させることによってレンチナン・
Ｈｂ複合体への結合が阻害された。一方、ポリアルコー
ル化部分に対する抗血清は、無処理レンチナンを加えて
もレンチナン・Ｈｂ複合体への結合は阻害されず、ポリ
アルコール化したレンチナンを加えた際にのみその結合
が阻害されることから、この結合競合試験法を組合せた
抗レンチナン抗体の検出法は、レンチナン自身に対する
抗体のみを検出できることが証明された。

【００２６】

【発明の効果】以上詳述したように、レンチナンを蛋白
質を仲介することによりプラスチックに固相化する技術
を利用したレンチナンに対する抗体の高感度検出法、お
よび抗体検出の際に無処理レンチナンを共存させるとい
う結合競合阻害試験法の組合せを利用することによって
、従来法の免疫沈降法と比較して１００００倍以上の高
感度で抗体の検出が可能となった。

【００２７】また、このレンチナンの抗体検出法を利用
することによって、従来法の免疫沈降法を利用すること
では不可能であった単クローン抗体産生融合細胞の培養
上清中の抗体の検出も可能となり、これによって、レン
チナンの単クローン抗体およびそれを産生する融合細胞
が得られた。

【００２８】現在抗癌剤として上市されているレンチナ
ンは、その効果をより強く発現させるため、より詳細な
生体内分布あるいは患者個々の薬剤への感受性を判別し
、その抗癌効果を予知するようなモニタリング方法の開
発が望まれている。そのためには、これまで述べてきた
ように、レンチナンに対する抗体は有効な手段となり得
る可能性がある。しかし従来から作製されてきたレンチ
ナンに対する抗血清では、量的制限があり、また抗血清
それぞれの力価が異なるため、多くの患者の診断を同一
条件下では行えないという問題点がある。本発明により
得られるレンチナンに特異的に反応する単クローン抗体
は、レンチナンのより有効な投与方法の選択、患者のレ
ンチナンに対する感受性の判別への応用等に有益と考え
られる。

【図面の簡単な説明】

【図１】レンチナン・蛋白質（ＢＳＡ）複合体合成後の
原料および反応液のゲル濾過法による高速液体クロマト
グラフィーのクロマトグラムを示すグラフである。

【図２】レンチナン・ＢＳＡ複合体でマウスを免疫後の
抗体価上昇を示すグラフである。

【図３】マウス抗レンチナン単クローン抗体検出結果を
示すグラフである。

【図４】レンチナン・蛋白質（Ｈｂ）複合体のプラスチ
ックプレートへの固相化に関する抗レンチナン抗体の結
合を示すグラフである。

【図５】抗レンチナン抗体の高感度検出方法における、
マウス抗レンチナン抗血清と正常マウス血清を用いた場
合の吸光度を示すグラフである。

【図６】抗体の高感度検出法と結合競合阻害試験法との
組合せによる抗レンチナン抗体の検出法における各抗血
清を用いた場合の吸光度を示すグラフである。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　多糖体レンチナンに対する単クローン
   抗体。
2. 【請求項２】　　請求項１記載の多糖体レンチナンに対
   する単クローン抗体を産生する融合細胞。