JPH0440654B2 - - Google Patents

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JPH0440654B2
JPH0440654B2 JP59038311A JP3831184A JPH0440654B2 JP H0440654 B2 JPH0440654 B2 JP H0440654B2 JP 59038311 A JP59038311 A JP 59038311A JP 3831184 A JP3831184 A JP 3831184A JP H0440654 B2 JPH0440654 B2 JP H0440654B2
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methane
fluorescence
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methane bacteria
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    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/06Quantitative determination
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02EREDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
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  • Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)
  • Treatment Of Sludge (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の技術分野〕 この発明は、メタン菌を有する被検体における
メタン菌の菌数またはメタン生成活性を測定する
方法に関し、特に下水処理システムのメタン醗酵
槽内等における、多数の微生物群および消化汚泥
等の異物の中に存在するメタン菌の菌数またはメ
タン生成活性の測定にも適用できる方法に関す
る。
〔従来技術〕
従来、この種の測定方法としては第1図に示す
ものがあつた。図において、1は微生物を有する
被検体、2は光源、3はこの光源2に電圧を印加
する電源、4は光電子増倍管、5はこの光電子増
倍管4に電圧を印加する電源、6は光電子増倍管
4の光電流を測定する検出部である。
次に、実際の測定方法について説明する。光源
2から発する光は微生物を有する被検体1を透過
して、この透過光が光電子増倍管4により受光さ
れ、その強度が光電子増倍管4の光電流値として
検出部6により測定される。このようにして得ら
れる、可視光を光源として用いた場合の吸光度と
上記被検体1に存在する微生物濃度との間には一
定の関係が成り立つため、吸光度を測定すること
により微生物濃度が評価でき、その結果あるいは
それに関連して菌数または微生物の活性が評価で
きる。
また、微生物の活性を測定する他の方法とし
て、微生物に含まれるATP(Adenosine
Triphosphate)あるいはNAD(P)H
(Nicotinamide Adenine Dinucleotide
(phosphate))というエネルギー代謝に係わる生
体物質の量を光学的に測定する方法があつた。
従来の微生物の菌数または活性の測定方法は以
上のように被検体1の吸光度を測定する方法であ
るため、被検体1が一種類の微生物により構成さ
れ、かつ汚泥等の異物が含まれていない場合には
有効であるが、被検体1が多種類の微生物により
構成され、かつ異物が含まれている場合、その中
から測定したい特定種類の微生物の菌数または活
性を選択的に計測することは不可能であつた。ま
たATPやNAD(P)Hはすべての微生物に存在
する生体物質であるため、メタン菌のみの菌数ま
たはメタン生成活性の測定には不適当である。
〔発明の概要〕
この発明は上記のような従来のものの欠点を除
去するためになされたもので、メタン菌を有する
被検体をアルカリ性にして特定波長範囲あるいは
波長範囲380nm〜440nmの励起光を照射すること
により、上記被検体が放射する波長範囲450nm〜
490nmの蛍光の強度を測定して、上記メタン菌の
菌数またはメタン生成活性を計測しようとするも
ので、特に、メタン醗酵槽内のような消化汚泥等
の異物を含む微生物混合系の中からでも、上記メ
タン菌の菌数またはメタン生成活性を計測可能な
らしめようとするものである。
〔発明の実施例〕
以下、この発明の一実施例を図をもとに説明す
る。第2図において、8は被検体を有するメタン
醗酵槽内部、9はメタン醗酵槽内部8へ光を導入
および導出するための光フアイバ、14は電源、
13は電源14に接線された光源、12は光源1
3からの光の波長を限定する光フイルタ、11は
光源13の光強度を調節するセレクタ、10は光
源から発する光を光フアイバ9に集光する集光
器、15は光フアイバ9より発する光を集光する
集光器、16は受光側の光の波長を限定する光フ
イルタ、17は光電子増倍管、18は光電子増倍
管用電源、19は光電子増倍管17の光電流を測
定する検出部である。
次にこの発明の原理および作用について説明す
る。メタン菌は通常の微生物と異なる生理的性質
を持ち、メタン菌のエネルギー代謝に関与してい
る電子伝達系に関してはまだその全容は不明であ
るが、メタン菌に固有なものであることが知られ
ている。このメタン菌のエネルギー代謝系に存在
する電子伝達系の中にはF420という物質が電子キ
ヤリアとして機能していることが知られており、
これはメタン菌に固有の物質であり、他の生物系
には存在していない。そこで、このF420を中心と
するメタン菌の電子伝達系に関与する物質が、消
化汚泥等の被検出体中のメタン菌以外の微生物群
および異物と異なる特異的かつ計測可能な物理化
学的性質を持ち、またそれが被検出体中の生菌
(生きた状態の菌)の状態で計測可能なものであ
るならば、メタン菌の菌数またはメタン生成活性
の測定における計測パラメータとして使用でき
る。特に、F420を中心とするメタン菌の電子伝達
系に関与する物質は、その生理的機能において直
接メタン生成機構と関連しているため、メタン生
成活性測定においては有効な計測対象となり得
る。
上記考察に基づき鋭意研究を行なつた結果、メ
タン菌のF420に起因すると考えられる蛍光特性が
消化汚泥中のメタン菌以外の微生物および異物に
起因する蛍光特性と生菌状態において異なる挙動
をとることが解明されたのでこの発明を創作し
た。
第3図に栄養培地(トリプトン10g/l、塩化
ナトリウム10g/l、酵母エキス5g/l)に懸濁
した大腸菌の蛍光励起スペクトルおよび蛍光スペ
クトルを示す。蛍光励起スペクトルは励起波長の
変化に対する波長470nmの蛍光の強度を示したも
ので、蛍光スペクトルは励起波長380nmにおける
蛍光スペクトルを示している。生体物質のうちで
蛍光を発する物質としては、トリプトフアン、チ
ロシン、およびフエニルアラニン等のアミノ酸が
代表的であるが、ここで用いた被検体試料はこれ
らの蛍光物質が混在したものであり、メタン菌以
外の生体試料系のモデルとみなすことができる。
第4図は、最少培地(有機物炭素源を含まない
培地)に懸濁したメタン菌(ここではメタノザル
チナバルケリ(Methanosarcina barkeri))の蛍
光励起スペクトルおよび蛍光スペクトルを示す。
比較のために最少培地に懸濁した大腸菌の蛍光励
起スペクトルおよび蛍光スペクトルを示す。ただ
し、メタン菌の蛍光励起スペクトルは励起波長の
変化に対する波長470nmの蛍光の強度を示したも
ので、蛍光スペクトルは励起波長400nmにおける
蛍光スペクトルを示している。また、大腸菌の蛍
光励起スペクトルは励起波長の変化に対する波長
470nmの蛍光の強度を示したもので、蛍光スペク
トルは励起波長400nmにおける蛍光スペクトルを
示している。ここでは最少培地を用いているた
め、第4図に示す蛍光特性は微生物体にのみ由来
し、メタン菌の蛍光特性は大腸菌の蛍光特性と大
きく異なる挙動をとることがわかる。また、第3
図と比較することにより、メタン菌の蛍光特性は
メタン菌以外の微生物および異物のモデル試料の
蛍光特性とは異なる挙動をとることがわかる。
第5図にメタン醗酵槽から採取した消化汚泥の
蛍光励起スペクトルおよび蛍光スペクトルを示
す。ただし、蛍光励起スペクトルは励起波長の変
化に対する波長470nmの蛍光の強度を示し、蛍光
スペクトルは励起波長420nmにおける蛍光スペク
トルを示している。第4図と第5図を比較すると
380nm〜440nmの波長範囲の励起スペクトル及び
450nm〜490nmの波長範囲の蛍光スペクトルにお
いて良く一致した挙動を示し、上記波長範囲にお
ける消化汚泥の蛍光特性はメタン菌に起因してい
ることがわかる。
第6図に栄養培地中のメタン菌および大腸菌の
各PHにおける蛍光励起スペクトルを示す。ただ
し、励起波長の変化に対する波長470nmの蛍光の
強度を示している。図より、大腸菌ではPH7から
PH11の範囲で励起スペクトルはほとんど変化しな
いが、メタン菌では蛍光励起ピーク波長および強
度がPHにより変化し、PH7に対しPH11ではピーク
波長が長波長側に約20mmシフトし、ピーク強度も
約3倍に増大している。このように、水酸化ナト
リウムや水酸化カリウムや水酸化アンモニウムな
どの塩基性溶液や塩基性固体を添加することによ
り被検体をPH7〜PH14の範囲でアルカリ性にし、
メタン菌に由来する蛍光強度信号の信号強度を高
め、かつ蛍光励起波長域を0〜30nmの範囲で長
波長側にシフトせしめ、メタン菌以外の成分に由
来するバツクグラウンド蛍光に対するS/N比を
高めることが可能である。特に、第4図〜第6図
から明らかなように、励起光として波長範囲
410nm〜430nmの光を、蛍光として波長範囲
460nm〜480nmの光を用いると、励起および蛍光
スペクトルのピーク近傍で測定することができ
る。
また、被検体中の固体および液体成分のうち液
体成分を、遠心操作またはろ過操作などを用い
て、励起波長範囲で測定波長範囲の蛍光を発しな
い溶液、例えば水などで置換する、あるいは被検
体を励起波長範囲で測定波長範囲の蛍光を発しな
い溶液、例えば水などで希釈することによつて
も、メタン菌に由来する蛍光強度信号のS/N比
を高めることができる。さらにこの時、励起波長
範囲で測定波長範囲の蛍光を発しない溶液として
例えば水酸化ナトリウムや水酸化カリウムなどの
塩基性溶液を用いれば、上記のアルカリ性による
効果も加わる。
以上の研究結果より、メタン醗酵槽内などにお
ける多数の微生物群および消化汚泥などの異物の
中に存在するメタン菌の菌数またはメタン生成活
性を測定するには、以下の方法によればよいこと
がわかつた。
(1) 蛍光励起光として波長範囲380nm〜440nmの
光を用い、その励起スペクトル強度とメタン菌
の菌数またはメタン生成活性との相関により、
メタン菌の菌数またはメタン生成活性を同定す
る。
(2) 蛍光として波長範囲450nm〜490nmの光を用
い、蛍光スペクトル強度とメタン菌の菌数また
はメタン生成活性との相関により、メタン菌の
菌数またはメタン生成活性を同定する。
(3) メタン菌以外の成分に由来するバツクグラウ
ンド蛍光に対するメタン菌に由来する蛍光の
S/N比を高める方法として次の3つの方法を
用いる。
(イ) 被検体をアルカリ性にする (ロ) 被検体の液体成分を他の溶液で置換する (ハ) 被検体を季釈する 蛍光励起スペクトルおよび蛍光スペクトル強度
と菌数またはメタン生成活性との相関は、M.バ
ルケリ(M.barkeri)等の消化汚泥から単離され
たメタン菌を標準試料として求めることができ
る。その一例として、第7図、第8図にそれぞれ
菌数と励起スペクトル強度およびメタン発生量と
励起スペクトル強度との相関を示す。
この測定方法によると、メタン醗酵槽の運転時
に、実時間でメタン菌の菌数またはメタン生成活
性を測定することも可能であるので、メタン醗酵
槽の運転制御に大きな効果が期待できる。
なお、第2図は次のように構成すると便利であ
る。すなわち、システムコントローラを備え、検
出部19や光フイルタ12、16等に配線すると
蛍光励起強度または光電子増倍管17に対する印
加電圧を光電子増倍管17に導入される光強度に
応じて変化せしめ、光電子増倍管17に流れる光
電流値をその光電子増倍管17に適した範囲内に
保つと共に、各蛍光励起強度または各印加電圧に
対する光電流値を一定蛍光励起強度または一定印
加電圧に対する光電流値に換算するという動作
を、システムコントローラにより自動的に行なえ
る。
また、上記実施例ではメタン醗酵槽内部8へ直
接光フアイバ9を導入して測定する方法について
説明したが、メタン醗酵槽から被検体を採取して
メタン醗酵槽外部で測定することも可能であり、
被検体をアルカリ処理や希釈、あるいは被検体の
液体成分を他の溶液で置換する場合には、被検体
を採取した方が処理しやすい。
また、固定化担体にメタン菌が固定化されてい
る場合には、光フアイバ9により固定化メタン菌
の位置で測定することも可能である。
なお、上旧説明では主に、メタン醗酵槽内にお
ける多数の微生物群および消化汚泥等の異物の中
に存在するメタン菌の菌数またはメタン生成活性
の測定について述べたが、被検体はこれに限られ
るものではない。
〔発明の効果〕
以上のように、この発明によれば、メタン菌を
有する被検体をアルカリ性にすることによりメタ
ン菌に由来する蛍光強度信号の信号強度を高め、
かつ蛍光励起波長域を長波長側にシフトせしめ、
メタン菌以外の成分に由来するバツクグラウンド
蛍光に対するS/N比を飛躍的に向上することが
でき、特にメタン醗酵槽内のような消化汚泥など
の異物を含む微生物混合系の中からでも、上記メ
タン菌の菌数またはメタン生成活性を正確に測定
できる効果がある。
【図面の簡単な説明】
第1図は従来の微生物数測定方法を説明するブ
ロツク図、第2図はこの発明の一実施例によるメ
タン菌の菌数またはメタン生成活性の測定方法を
説明するブロツク図、第3図は消化汚泥のうちの
メタン菌以外の成分モデルの蛍光特性を示す特性
図、第4図はメタン菌の蛍光特性を示す特性図、
第5図はメタン菌を含む消化汚泥の蛍光特性を示
す特性図、第6図はメタン菌および大腸菌の蛍光
特性のPHによる変化を示す特性図、第7図、第8
図はそれぞれメタン菌数と蛍光励起スペクトル強
度およびメタン発生量と蛍光励起スペクトル強度
との相関を示す特性図である。 図において、1,8は被検体、2,13は光
源、3,5,14,18は電源、4,17は光電
子増倍管、6,19は検出部、9は光フアイバ、
10,15は集光器、11はセレクタ、12,1
6は光フイルタである。なお、図中同一符号は同
一または相当部分を示すものとする。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1 メタン菌を有する被検体をアルカリ性にして
    特定波長範囲の励起光を照射することにより、上
    記被検体が放射する波長範囲450nm〜490nmの蛍
    光の強度を測定して、上記メタン菌の菌数または
    メタン生成活性を得るようにしたメタン菌の菌数
    またはメタン生成活性の測定方法。 2 被検体に波長範囲380nm〜440nmの励起光を
    照射するようにした特許請求の範囲第1項記載の
    メタン菌の菌数またはメタン生成活性の測定方
    法。 3 被検体の液体成分を励起波長範囲で測定波長
    範囲の蛍光を発しない溶液で置換することを特徴
    とする特許請求の範囲第1項または第2項記載の
    メタン菌の菌数またはメタン生成活性の測定方
    法。 4 被検体を励起波長範囲で測定波長範囲の蛍光
    を発しない溶液で希釈することを特徴とする特許
    請求の範囲第1項または第2項記載のメタン菌の
    菌数またはメタン生成活性の測定方法。
JP59038311A 1983-05-09 1984-02-28 メタン菌の菌数またはメタン生成活性の測定方法 Granted JPS60181637A (ja)

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FR858502843A FR2560214B1 (fr) 1984-02-28 1985-02-27 Procede de mesure du nombre de cellules de methanogenes ou de leur activite de production de methane

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