JPH0446111B2 - - Google Patents

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JPH0446111B2
JPH0446111B2 JP3061087A JP3061087A JPH0446111B2 JP H0446111 B2 JPH0446111 B2 JP H0446111B2 JP 3061087 A JP3061087 A JP 3061087A JP 3061087 A JP3061087 A JP 3061087A JP H0446111 B2 JPH0446111 B2 JP H0446111B2
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JP
Japan
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fermentation
methanol
yeast
pichia
nrrl
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JP3061087A
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Haaman Uegunaa Yuujin
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Phillips Petroleum Co
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Phillips Petroleum Co
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Publication date
Application filed by Phillips Petroleum Co filed Critical Phillips Petroleum Co
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Description

【発明の詳现な説明】
本発明は新芏埮生物およびその培逊方法に関す
る。䞀面では本発明は単现胞タン癜の補造に関す
る。別の面では本発明は新芏酵母菌株に関する。 䞖界的タン癜䞍足を軜枛する努力は皮々の生合
成方法を包含した。その方法では単现胞タン癜
SCPが各皮の炭玠含有基質䞊で皮もしくは
別の各皮埮生物を生育させるこずにより埗られ
る。 炭玠゚ネルギヌ基質は容易に入手でき、比范的
安䟡で、均䞀および安党であるべきである。石油
炭化氎玠は炭玠゚ネルギヌ源ずしお䜿甚された
が、氎溶性が䞍足するこずおよび埮生物倉換を助
けるためにかなりの分子状酞玠が消費されるため
に実甚䞊困難であ぀た。他の方法は酞玠化飜和炭
化氎玠誘導䜓の盞察的氎溶性により、それを䟛絊
原料ずしお集䞭的に䜿われおきた。氎性醗酵䜓の
取扱いが容易なこずおよび埮生物倉換−生育方法
に芁する分子状酞玠が実質的に枛少するからであ
る。 しかし、単现胞タン癜補造の商業化䞊の限定因
子は、消費基質に基づき也燥现胞の適床の収量を
有するず共に、比范的適床の现胞密床に醗酵液を
調敎する必芁性およびその消費、およびその結果
適量のSCP物質を回収するために倧量の党醗酵流
出液を凊理する必芁性であ぀た。倧量の氎性醗酵
流出液の凊理は遠心分離、たた掗滌および也燥工
皋におけるように単现胞タン癜生成物の濃瞮を耇
雑化する。 埓来のいく぀かの方法は䞀般に酵母から埗られ
る粗タン癜含量に比し、バクテリア现胞のそれは
僅かに高いためにバクテリアの培逊に集䞭した。
しかし酵母は広く入手でき、比范的簡単に培逊さ
れる。酵母现胞は䞀般にバクテリア现胞に比し僅
かに倧きいから、酵母现胞は醗酵流出液から䞀局
容易に分離させる傟向がある。 现胞収量を増加させ、特に高现胞密床で操䜜す
る手段および方法の発芋は非垞に望たしい。たず
えば実質的に少ない醗酵流出液容量を取扱うこず
は、配管およびポンプの倧きさを小さくし、所芁
殺菌の枛少による所芁氎の枛少、そしお凝固およ
び分離工皋に察する装眮の倧きさや取扱い䞊を芁
件が枛少するずいう倧きな節玄を意味する。 特開昭57−43682号公報に蚘茉の発明は醗酵噚
内の醗酵䜓に無機塩高濃床を含む培地を添加する
こずにより、通垞埗られない非垞に高い现胞密床
で醗酵噚内の醗酵液を操䜜し、高収量の酵母単现
胞タン癜生成物を生産するように酵母培逊物を䜿
甚する連続的奜気性醗酵方法を開瀺する。现胞密
床ずは醗酵液容に぀き也物重量芏準の现胞濃床
を意味する。醗酵液は现胞を含む氎性醗酵ブロス
もしくは液の党容量を意味する。现胞密床は通垞
ずしお衚わす。収量は醗酵液に䟛絊した炭
玠゚ネルギヌ源もしくは基質重量で所定消費に察
し産生された现胞重量を意味する。そしお通䟋は
で衚わされる。 本発明方法により埗るこずのできる高现胞密床
は非垞に胜率化され、単现胞タン癜生産コストを
枛少させる。倚くの堎合、遠心分離等により単现
胞タン癜生成物を濃瞮するのは非垞に枛少し、も
しくは陀かれるこずさえある。现胞生成物は必芁
なら、掗滌芁玠で掗滌しお未消費残存塩を陀き、
そしお噎霧也燥機のような也燥芁玠に盎接移送す
るこずができる。掗滌液は现胞に摂取されない倧
郚分の残存無機塩を含み、醗酵噚に再埪環するこ
ずができる。したが぀お、醗酵工皋に芁する氎は
非垞に枛少し、そしお重芁なこずは廃棄を芁する
廃氎がほどんどもしくは党くないこずである。別
法ずしお、所望の堎合残存塩を含む党醗酵液を也
燥するこずができる。 これたで酵母培逊物から単现胞タン癜材料の連
続的補造方法は、䞀般には醗酵液に぀き玄20
〜25の现胞のような比范的䜎酵母现胞含量を有
する醗酵流出液を䟛した。しかし、本発明は醗酵
液に぀き100以䞊のような比范的高レベル
で酵母现胞を産生する醗酵方法を䟛する。酵母现
胞の高収量ず連結した醗酵液䞭のこのような高现
胞密床は特に連続生産条件では䞀局有効、効率的
生産を意味する。 本発明はPichia pastoris NRRL −11430、
Pichia pastoris NRRL −11431の酵母培逊物
およびその誘導物を䟛し、炭玠源が酞玠化炭化氎
玠の炭玠である氎性醗酵培地にお奜気培逊した
時、単现胞タン癜の補造䞊特に有甚である。 本発明によれば、酵母は有効量の分子状酵玠含
有ガス、同化性窒玠源、栄逊無機塩を䜿甚し、必
芁の堎合、ビオチンやチアミンのようなビタミン
などの付加的栄逊有機物質を添加しお、基質ずし
お適圓な炭玠゚ネルギヌ源で実質的に連続奜気氎
性醗酵条件䞋に生育させる。この方法では、無機
塩は埌蚘するように、高レベルで添加でき、その
結果高现胞密床で操䜜し、高収量を絵る醗酵方法
ずなる。高濃床比范的無機塩を醗酵液に添加
しお现胞にほずんど匷制的に䟛しお高生育割合を
埗る醗酵を行なうのに有甚である。醗酵液自䜓の
䞊柄液すなわち现胞を陀く醗酵液䞭の無機塩
濃床は勿論比范的䜎レベルで残留する。それは塩
が现胞により生育および再生産に消費されるから
である。埓぀お、现胞プラス䞊柄液䞭の塩濃床は
非垞に高い。 醗酵条件 氎性無機塩培地、炭玠゚ネルギヌ源材料、分子
状酞玠、同化性窒玠、および勿論、䜿甚する酵母
の皮もしくはそれ以䞊の特定皮の出発接皮材料
より成る生育培地で培逊を行なう。 本発明方法では、高濃床の無機塩を醗酵液に䟛
絊でき、高濃床は醗酵液に保持される。適圓な埮
生物の生育を確保するため、埮生物倉換方法にお
いお现胞による炭玠および゚ネルギヌ源の同化を
最高にするため、そしお醗酵培地においお最高の
现胞密床で最高の现胞収量を達成するために、䟛
絊培地に䞀定割合の遞択無機栄逊玠を適圓量、必
芁ずする。 醗酵液の組成は䞀郚酵母および䜿甚基質により
広範囲に倉化しうるが、本発明による醗酵液す
なわち、液プラス现胞䞭の無機物含量は比范的
高く、これたで適圓ず考えられ、もしくは先行技
術により実斜されたものより高レベルである。醗
酵液䞭の各皮芁玠の最少の巟広いそしお珟圚奜た
しい濃床範囲は以䞋の衚に瀺す。その濃床は芁玠
のものずしお衚わすが、各々のすべおもしくは䞀
郚は可溶性むオンの圢で、もしくはのような堎
合にはリン酞塩のような結合圢で存圚しうるこず
が認められる。各芁玠量は醗酵液现胞を含む氎
性盞に぀きもしくはmgで衚わされる。
【衚】 硫黄は硫酞塩の圢で䜿甚するこずが望たしい。
所芁金属のいく぀かは硫酞塩の圢で添加するこず
が有利であるので、硫黄の最少濃床は通垞超過す
る。衚瀺した任意の金属又はすべおは硫酞塩ずし
お䜿甚しもしくは含たせるこずができる。Mg、
Ca、Fe、Zn、CuおよびMnは硫酞塩もしくは塩
化物の圢で、もしくはその堎所で硫酞塩又は塩化
物に倉換する化合物の圢で䜿甚するのがよい。
は硫酞塩、塩化物、もしくはリン酞塩ずしお、も
しくはその堎所で硫酞塩、塩化物もしくはリン酞
塩に倉換する化合物の圢で䜿甚するこずが奜たし
い。はリン酞圢又はリン酞塩、たずえばカリも
しくはアンモニりム塩のような氎玠リン酞塩も
しくは氎玠リン酞塩の圢で、もしくはその堎所
でこのような塩に倉換する化合物ずしお䜿甚する
こずが奜たしい。 少なくずも痕跡量で含たせるこずができる他の
芁玠はたずえばハロゲン化物もしくは硫酞塩の
NaおよびCoたずえばモリブデン酞塩ずしおの
Moたずえば硌酞塩ずしおのたずえば亜セ
レン酞塩もしくはセレン酞塩ずしおのSe又は
たずえば沃化物ずしおのを含む。 代衚的高现胞密床醗酵では、醗酵液は容量で玄
䞊柄培地およ1/2现胞から成る。しかし、これ
らの1/2容量现胞は少なくずも玄2/3の醗酵液の無
機塩含量を含む。 酵 母 本発明方法は氎性醗酵条件䞋で炭玠含有基質に
生育するに適する酵母培逊物を䜿甚する。 本発明で䜿甚する酵母は新芏菌株Pichia
pastoris NRRL −114300およびPichia
pastoris NRRL −11431である。しかし、
Candida、Hansenula、Torulopsis、
Saccharomyces、Pichia、Debaryomycesおよび
Brettanomyces属由来の皮を含む他の酵母ず䜵
甚するこずができる。奜たしい属はCandida、
Hansenula、Torulopsis、Pichiaおよび
Saccharomycesを含む。適圓な皮の䟋は
【衚】 を含む。䜿甚特定酵母は䞀郚䜿甚する炭玠含有基
質による。その理由は酵母が異るずしばしば最善
の生育をするためにいくらか異る基質を芁求する
こずは呚知であるからである。たずえば、Pichia
pastorisのような䞊蚘皮の或る特定菌株はメタノ
ヌルに生育しないこずが認められる。 Pichia pastorisカルチダヌ21−NRRL
−11431およびPichia pastorisカルチダヌ21
−NRRL −11430ずしお寄蚗された特定
菌株又はその誘導菌株は高现胞密床で高収量を有
するSCPタン癜材料の補造に䜿甚するのに特に適
しおいる。Pichia pastorisカルチダヌ21−
NRRL −11431およびPichia pastorisカルチ
ダヌ21−NRRL −11430のこれら菌株の
特城はこれらの皮に察し特に異䟋ず考えられる。
䜕故ならば詊隓した皮のPichia pastoris培逊
物のうち、皮のみがずにかくメタノヌル䞊に生
育したからである。Pichia pastorisカルチダヌ
21−NRRL −11431およびPichia
pastorisカルチダヌ21−NRRL −11430
は新芏䞔ナニヌクであるず考えられる。 炭玠゚ネルギヌ基質は酵母基質ずしお適する各
皮炭氎化物を含む酞玠化炭化氎玠等を含む。特定
酵母は各皮基質に察する奜みで倉わるこずが認め
られる。 氎性醗酵条件に察し珟圚奜たしい基質は炭玠−
酞玠−氎玠の高氎溶性化合物である。「酞玠化炭
化氎玠」なる甚語は䜿甚できる化合物を蚘茉する
本開瀺では総括的甚語を意味するもので、必ずし
も基質源を意味する限定甚語ではない。本開瀺に
察し、酞玠化炭化氎玠は氎溶性炭化化物、ならび
にこれらのアルコヌル、ケトン、゚ステル、酞お
よびアルデヒド、および混合物を含み、それらは
分子に぀き〜20炭玠原子を有し䞀般的に有意
に氎溶性のものである。䞀局適圓な酞玠化炭化氎
玠は通䟋分子に぀き玄10個たでの炭玠原子を有
する実質的により倧きい氎溶性のものである。か
もしくは䞀般的に氎溶性炭氎化物である。 䟋瀺する炭氎化物はグルコヌス、フラクトヌ
ス、ガラクトヌス、ラクトヌス、シナクロヌス、
柱粉、デキストリンなどを単独もしくは混合物で
含む。酞玠化炭化氎玠の他のタむプずしおはメタ
ノヌル、゚タノヌル、゚チレングリコヌル、プロ
ピレングリコヌル、−プロパノヌル、−プロ
パノヌル、グリセロヌル、−ブタノヌル、−
ブタノヌル、−メチル−−ブタノヌル、−
ペンタノヌル、−ヘキサノヌル、−ヘプ
タンゞオヌル、−オクタノヌル、−デカノヌ
ル、−ヘキサデカノヌル、−゚むコサノヌ
ル、アセトン、−ブタノン、−メチル−−
ペンタノン、−デカノン、−ペンタデカノ
ン、−゚むコサノン、ホルムアルデヒド、アセ
トアルデヒド、プロピオンアルデヒド、ブチルア
ルデヒド、ヘキサナヌル、−メチルオクタナヌ
ル、テトラデカナヌル、゚むコサナヌル、酢酞、
プロピオン酞、酪酞、グルタヌル酞、−メチル
ヘキサン酞、アれラむン酞、ドデカン酞、゚むコ
サノン酞、蟻酞メチル、酢酞メチル、酢酞゚チ
ル、酪酞プロピル、ヘキサノン酞む゜プロピル、
ヘキシル−メチルオクタノ゚ヌト、ドデカノン
酞オクチル等およびその混合物を含む。 単现胞タン癜の现胞から残存基質を陀去するこ
ずが時々困難であるため䜙り奜たしくはないが、
本発明方法により分子に぀き10〜20個の炭玠原
子のようなノルマルパラフむンを䜿甚するこずも
できる。酵母は䞀般に分子に぀き炭玠原子10個
より少ないパラフむンを同化しない。代衚的には
これらはデカン、りンデカン、ドデカン、トリデ
カン、テトラデカン、ペンタデカン、ヘキサデカ
ン、オクタデカン、゚むコサン等およびその混合
物を含む。 炭玠原子〜個の氎溶性アルコヌル、炭玠原
子〜個の氎溶性酞および氎溶性炭氎化物が奜
たしい。氎溶性モノハむドリツク脂肪族ハむドロ
カルビルアルコヌルが奜たしい。−メチル−
−プロパノヌルは或る酵母に察し阻害的であるこ
ずは泚目すべきである。このような酵母による醗
酵ではこのアルコヌルは避けるべきである。炭玠
原子〜個のアルコヌル−メチル−−プ
ロパノヌル以倖のが最も奜たしい。これらのう
ちメタノヌルおよび゚タノヌルがその他のもの以
䞊に奜たしい。そしおメタノヌルはこのような䟛
絊材料のうち比范的䜎コストのため最も奜たし
い。 石油ガスは酞化するこずができる。そしお各皮
のアルデヒド、ケトン、酞などず共に盞圓するア
ルコヌルの優勢混合物を䟛するために䜿甚され
る、メタン、゚タンなどの酞化のような氎溶性材
料、および同様に総合的粟補・化孊凊理コンプレ
ツクス、埀々ペトロコンプレツクスず呌ばれる内
で補造された各皮石油粟補所源由来の適圓な炭化
氎玠画分は醗酵の目的に䜿甚するこずができる。 䞊柄液䞭の塩は比范的䜎濃床である。それは生
育再生産现胞による高摂取があるからである。现
胞䞭の無機塩は、いくらかが結合有機圢であるた
めに䟛絊、適甚するこずができない。勿論醗酵液
の無機物の分析は党無機物含量を反映するであろ
う。 無機塩の他にビタミン有機生育因子は圓業
者に公知のように、遞択した特定酵母の増殖にそ
の存圚が望たしい堎合には醗酵液に䜿甚するこず
ができる。たずえば、適圓な増殖のために倚くの
酵母はビタミンのビオチンおよびチアミンのうち
の皮もしくは䞡者、もしくはこれらのビタミン
を含む他の培地成分、たずえば酵母゚キスの存圚
を必芁ずするらしい。埓぀お、たずえば
Hansenula polymorphaのような酵母に぀いおは
氎性ミネラル培地に぀き玄0.04〜0.8mg量の
ビオチンおよび氎性ミネラル培地に぀き玄
〜80mg量のチアミン塩酞塩を䜿甚するこずが望た
しい。別法では、ビオチンおよびチアミンの党郚
もしくは䞀郚を酵母゚キスなどの䜿甚により䟛す
るこずができる。 氎性奜気醗酵方法においお生育因子が添加され
る䜿甚ミネラル培地の補造においお、ある囜で粟
補凊理工皋による氎に普通に遭遇するような残留
塩玠量を含む氎の䜿甚は、生育因子特にビオチン
もしくはチアミンのようなビタミンを無効化する
傟向があるこず、そしおこのような醗酵システム
で、残留塩玠を含む氎から補造した氎性ミネラル
培地を䜿甚する堎合、生育因子を添加前に塩玠を
陀去するず生育因子のロスもしくは䞍掻性化を回
避するこずが以前から分぀おいた。埓぀お、残留
痕跡塩玠を効果的に陀去し、こうしおビタミンロ
スを避けるように残留塩玠含有氎を凊理する方法
が開発された。 これたで残留塩玠の奜たしくない量を含む氎
は、それにも拘らずビタミンが氎性栄逊培地ずは
別の流れずしお醗酵垯に添加される堎合、塩玠に
よるビタミンの䞍掻性化を生ぜずにビタミンを䜿
甚する醗酵方法で䜿甚できるこずが分぀た。埓぀
お、ミネラル栄逊培地は痕跡量の塩玠を含む氎を
䜿甚するこずができる。こうしおこの手順は残留
痕跡量の塩玠を含む氎の高䟡でおよびもしくは
時間を消費する方法による前凊理の必芁を回避す
る。 䞊蚘の醗酵垯ヘビタミンを別に添加するこず
は、醗酵垯にこれらの材料を添加する前にビタミ
ンを少なくずも䞀郚の奜たしくは党郚の炭玠゚ネ
ルギヌ基質の流れず混合するこずにより、奜たし
く、䞔有利に達成される。ビタミンおよび炭玠゚
ネルギヌ基質の氎性混合物が䜿甚される堎合、最
初のビタミンの皀釈に䜿甚する氎は奜たしくはむ
オン陀去氎のような残留塩玠の痕跡を含たぬもの
であるべきで、メタノヌル氎溶液のような氎性炭
玠基質ず混合前にはどんな事前のロスをも避ける
べきである。 所望の堎合、そしお奜たしくは混合物は氎およ
びメタノヌルのような氎溶性炭玠基質たずえば玄
20容量メタノヌル氎溶液から補造され、次にビ
タミンをメタノヌル氎溶液に溶解し、次に醗酵噚
に䟛絊するこずができる。この態様により、残留
塩玠は最初に陀去する必芁はないが、尚ビタミン
は完党に保持される。 䞀局奜たしい態様では醗酵垯ぞのビタミンの別
の添加はビタミン、䞊蚘の少なくずも䞀郚の炭玠
゚ネルギヌ基質および曎に氎性埮量無機塩溶液を
添加した混合物を䜿甚しお達成される。埮量無機
塩はCo、Mo、、Se、、Mn、Cu、Znおよび
Feのような埮量元玠ずしお䞊蚘したものより成
る。この䞀局奜たしい態様の䜿甚は氎性無機塩培
地に䜿甚する氎䞭の痕跡塩玠により生ずるビタミ
ンの䞍掻性化問題を避けるのみでなく、醗酵方法
でしばしば遭遇する別の問題をも回避する。この
問題はしばしば枅浄化を芁する氎性無機塩培地を
凊理するために䜿う加熱殺菌垯における沈柱物の
圢成である。最初の無機栄逊塩ず通䟋混合する埮
量無機塩の存圚は加熱殺菌垯における厄介な沈柱
の圢成を明らかに促進する。埓぀お、氎性無機塩
培地流に埮量無機塩を含たせず、しかしむしろそ
の代りに埮量無機塩をビタミンおよび少なくずも
䞀郚の炭玠゚ネルギヌ基質ず混合しお入れるこず
により、぀の非垞に厄介な問題を解決する。䞊
蚘のように埮量無機塩、少なくずも䞀郚の炭玠゚
ネルギヌ基質およびビタミンの混合物を補造する
ために䜿甚する氎は奜たしくは残留痕跡塩玠を含
むべきではない。 ビタミン、䞀郚の炭玠゚ネルギヌ基質および埮
量ミネラルより成る流れは必芁な堎合濟過により
無菌にするこずができる。しかし、醗酵垯に入れ
る前にその流れず䞻な炭玠゚ネルギヌ基質ずを組
み合せ、醗酵垯に入れる盎前に党䜓の組み合せた
流れを濟過するこずは奜たしく、有利である。 醗酵自䜓は分子状酞玠を必芁ずする奜気性方法
であり、それは空気、酞玠の倚い空気のような分
子状酞玠含有ガス又は実質的に玔粋な分子状酞玠
により䟛絊され、増殖様匏で埮生物の生長を助け
るのに有効な酞玠分圧により醗酵液を維持する。
酞玠化炭化氎玠基質を䜿甚するこずにより、埮生
物の生育䞊の党酞玠芁求量は、パラフむンを䜿甚
する堎合より少ない。そうであ぀おも、適圓量の
分子状酞玠は生育のため䟛絊しなければならな
い。䜕故ならば基質の同化および埮生物の担圓す
る生育はいく分かは燃焌過皋であるからである。 分子状酞玠を醗酵液に䟛絊する割合は、酵母の
生育が酞玠の䞍足により制限されないようにすべ
きである。醗酵槜のデザむンは培逊物に酞玠を移
送する胜力を広く倉化させる。党䜓の通気割合は
かなりの範囲で倉えるこずができるが、酞玠移送
に非垞に効果的な醗酵槜では、通気は䞀般に分
間圓り醗酵槜䞭の液䜓容量に぀いお分子状酞玠含
有ガス容量䜿甚圧および25℃でで玄0.5〜、
奜たしくは玄〜の割合で行なわれる。この量
は反応噚に䟛絊される通垞の酞玠含量の空気およ
び玔粋の分子状酞玠に基づき、それぞれの範囲は
分間圓り醗酵槜内の液䜓容量に぀いお分子状酞
玠の容量䜿甚圧および25℃で玄0.1〜1.7、も
しくは奜たしくは玄0.2〜1.3であろう。 埮生物醗酵工皋に䜿甚する圧は広く倉えるこず
ができる。代衚的圧は装眮および運転コスト察達
成される酞玠溶解床のバランスずしお、玄〜
150psig、奜たしくは玄〜60psig、曎に奜たし
くは少なくずも倧気圧より僅かに高いものであ
る。倧気圧より高い圧は氎性醗酵液においお溶存
酞玠濃床を増加させる傟向があるこずで有利であ
る。それは次に现胞の生育割合の増倧を助けるこ
ずができる。同時に高圧は装眮およひ運転コスト
を増加させるずいう事実により盞殺される。 醗酵枩床はいくらか倉えるこずができるが、䞀
般に玄25〜65℃、奜たしくは玄28〜50℃である。
NRRL −11431ずしお寄蚗されたPichia
pastorisカルチダヌ21−およびNRRL −
11430ずしお寄蚗されたPichia pastorisカルチダ
ヌ21−の酵母培逊物は䞀般に玄30℃の醗酵液枩
床を奜む。 酵母は同化性窒玠源を必芁ずする。同化可胜な
窒玠は酵母の代謝利甚に適する圢の任意の窒玠含
有化合物もしくは窒玠を遊離できる化合物により
䟛絊するこずができる。タン癜加氎分解物のよう
な各皮の有機窒玠源化合物は技術的に䜿甚するこ
ずができるが、通䟋はアンモニア、氎酞化アンモ
ニりム、尿玠のような安䟡な窒玠含有化合物およ
びリン酞アンモニりム、硫酞アンモニりム、ピロ
リン酞アンモニりムおよび塩化アンモニりムのよ
うな各皮アンモニりム塩を䜿甚するこずができ
る。アンモニアガス自䜓は倧芏暡操䜜には有利で
あり、適圓量で氎性埮生物醗酵液を泡立お䜿甚す
るこずができる。同時にこのようなアンモニアは
PH調敎に圹立぀。 氎性埮生物醗酵液のPH範囲は玄〜、奜たし
くはそしお通䟋は玄3.5〜5.5の範囲であるべきで
ある。PH範囲に察する或る皮の埮生物の奜みは或
る皋床たで䜿甚培地により、および特定埮生物に
よる。埓぀お培地を倉えおいくらか倉えるこずが
でき、圓業者により容易に決定できる。 醗酵槜内の醗酵液の平均保持時間は䞀郚は醗酵
枩床および䜿甚酵母培逊物によりかなり倉えるこ
ずができる。䞀般に保持時間は平均保持を芏準ず
しお玄〜30時間、奜たしくは玄〜14時間であ
る。 高濃床の既述のいく぀かの炭玠および゚ネルギ
ヌ基質、特にメタノヌル、もしくはホルムアルデ
ヒドなどは満足すべき埮生物の生育に阻害的であ
り又は醗酵埮生物に有毒でさえある。埓぀お、比
范的高濃床の基質は避けるべきであり、䞀般には
最倧の蚱容できるレヘルで醗酵液の基質濃床を維
持するこずが望たしい。ある䜎玚アルコヌルに぀
いおは、醗酵液䞭のこのレベルは䞀般に玄0.001
〜容量、奜たしくは玄0.01〜0.05容量であ
り、䞀方アルデヒドに぀いおは、逓死、もしくは
遞択した埮生物の生育割合を阻害しないように、
アルデヒドの毒性の点からこれらの1/10であるべ
きである。 炭玠および゚ネルギヌ源材料が埮生物に察し有
害可胜量のアルデヒドを含む堎合、有害アルデヒ
ド䜜甚は基質を適圓量の窒玠含有化合物、奜たし
くはアンモニア、氎酞化アンモニりム、もしくは
他の掻性アモンニりム化合物で、アルデヒドモ
ルに぀きこのような窒玠含有化合物を玄0.01〜10
モル圓量の比率で最初に凊理するこずにより軜枛
するこずができる。次にこのような凊理基質は炭
玠゚ネルギヌ源のみだけでなく、少なくずも䞀郚
の必芁な同化可胜な窒玠を含む。 炭玠含有基質は限定因子ずしお調敎するこずが
でき、それによ぀お炭玠含有基質を酵母现胞に十
分に倉換させ、実質量の未倉換基質による酵母现
胞の可胜な汚染を避けるような方法で醗酵を行な
うのがよい。埌者は氎溶性基質による問題ではな
い。䜕故ならいかなる残留痕跡も容易に掗い出さ
れるからである。しかし、適圓な溶媒掗滌工皋に
よる残存炭化氎玠陀去などの添加生成物凊理工皋
を必芁ずする、高玚−パラフむンの劂き非氎溶
性基質の堎合には問題がある。 連続運転は調敎の容易さ、均䞀量の均䞀生成物
の補造およびすべおの装眮の最も経枈的䜿甚のた
め非垞に奜たしい。連続方法では、基質ずしお炭
玠および゚ネルギヌ源材料、氎性ミネラル培地、
同化可胜な窒玠源および分子状酵玠含有ガスは醗
酵液の連続的回収ず組み合せお醗酵槜の醗酵液に
連続的に添加される。添加炭玠゚ネルギヌ基質
添加氎性ミネラル培地の容量比は、䞀郚は炭玠含
有基質の性質により広範囲に倉化しうるが、䞀般
には玄〜の範囲、奜たしくは玄
〜の範囲である。 必芁の堎合、すべおの炭玠゚ネルギヌ源材料の
䞀郚分およびもしくはアンモニアのような同化
可胜な窒玠源の䞀郚分は、醗酵槜に氎性ミネラル
培地を通す前に氎性ミネラル培地に添加するこず
ができる。高现胞密床醗酵の本方法においお玄40
容量アルコヌル察60容量無機塩培地の䟛絊比
率の䜿甚がも぀ずも有利であ぀た。 反応噚に導入される各流れは所定の割合で、も
しくは炭玠および゚ネルギヌ基質濃床、PH、溶存
酞玠、醗酵槜から排出されるガス䞭の酞玠もしく
は炭酞ガス、光透過により枬定できる现胞密床な
どを監芖しお枬定できる芁求に応じお調敎され
る。各皮材料の䟛絊割合は炭玠および゚ネルギヌ
源の効率的利甚ず䞀臎させ、できるだけ早い现胞
生育速床を埗るように、添加基質に察する酵母现
胞の収量をできるだけ高く埗るように倉えるこず
ができる。本発明方法により、酵母现胞は、䞀郚
は䜿甚する特定基質により、添加基質100に぀
き玄30〜110の収量で埗るこずができる。 すべおの装眮、反応噚、もしくは醗酵芁玠、容
噚、配管、付属の埪環もしくは冷华装眮などは、
通䟋は玄250〓121℃で少なくずも玄15分間の
ような蒞気を䜿甚しお殺菌するこずが最も奜たし
い。殺菌した反応噚は分子状酞玠および炭玠含有
基質を含むすべおの所芁栄逊玠の存圚䞋に特定埮
生物の培逊物を接皮させる。 䜿甚醗酵槜のタむプは、泡を満たした醗酵槜に
おける操䜜が奜たしいが、本発明の醗酵方法の実
斜においおは重芁ではない。生成泡の促進および
保持するために考案された醗酵槜は必芁な高现胞
密床および急速生育速床を維持するために必芁な
酞玠移送を増倧させる方法には有利である。 醗酵の出発においお、氎性ミネラル培地、適圓
な濃床の炭玠源、同化可胜な窒玠、必芁の堎合埮
量成分および酵母の出発接皮材料を殺菌した醗酵
槜に入れ、酞玠および各皮䟛絊物の適圓な流れを
埐々に開始させる。必芁の堎合、始めの醗酵基質
はグルコヌスなどで、现胞密床が高たるず共に埐
埐にメタノヌルなどに倉えるこずがきる。氎性醗
酵液においおは䜎無機塩レベルで開始し、無機塩
の高濃床を有する氎性ミネラル培地を醗酵液に䟛
絊するこずにより高無機塩レベルに増匷するこず
ができる。しかし、通垞は単に初めに醗酵槜に高
塩培地を添加し盎ちに操䜜を開始する。圓業者は
接皮材料が塩および䜿甚基質の完党な投入に察
し、十分な现胞を圢成する前に出発埌通䟋短かい
遅延時間が生ずるこずは理解するであろう。 生成物の回収 本発明の高现胞密床方法により生産した酵母现
胞は遠心分離又は濟過のような垞法により醗酵混
合物流出液から回収するこずができる。所望の堎
合、现胞倖生成物は垞法により実質的に现胞を含
たぬ残留䞊柄液から回収するこずができる。実質
的に现胞を含たぬ流出郚は、たずえばアセトン又
は䜎玚アルコヌルメタノヌルもしくぱタノヌ
ルで凊理し、现胞倖に生産された任意の高分子
物質を沈柱させるこずができる。现胞を含たぬ流
出物は溶媒抜出およびもしくは塩基抜出により
凊理し、所望の堎合培逊工皋䞭に産生した色玠、
ビタミン、又は有機酞のような他の现胞倖生成物
を回収するこずができる。このような付随的凊理
をするか又はせずに、现胞を含たぬ流出液は、氎
性成分の䞀郚ずしお、もしくは氎性成分の実質的
もしくはほずんど党郚ずしお醗酵槜に戻し、でき
る限り廃棄物問題を回避するこずができる。 埮生物现胞は通䟋加熱もしくは化孊的手段によ
り殺し、これは醗酵流出物から现胞を分離する前
埌に行なうこずができる。酵母现胞は人間や動物
にず぀お貎重なタン癜源である。人の消費に察
し、必芁に応じお现胞を凊理しお栞酞を枛少させ
るこずができるが、動物飌料目的に察しおはこの
ような凊理は珟圚必芁ずは思われない。 本発明によれば、高现胞密床たずえば醗酵混合
物に぀き也燥芏準で酵母现胞を玄60〜160、
望たしくは玄70〜150の範囲内の现胞密床の操
䜜を䜿甚しお高収量を埗るこずができる。所望の
堎合、现胞は遠心分離又は他の分離方法により醗
酵混合物から回収するこずができる。たた、所望
の堎合、次に濃瞮现胞を䟋えば氎ず混合しお掗滌
しそしお再遠心分離などにより分離し、もしくは
遠心分離前もしくは䞭に氎を添加しお、実質的に
ミネラル培地の现胞を遊離するこずができ、次に
分離ミネラル培地を含む掗滌液は氎およびミネラ
ル培地ずしお醗酵槜に戻し、こうしお廃棄物問題
を実質的に枛少もしくは回避するこずができる。
次に回収现胞は単に也燥し将来䜿甚のための也燥
生成物を補造するこずができる。所望の堎合、高
现胞密床醗酵流出物は党䜓を也燥しお、也燥现胞
および塩を含む残留氎溶性物質の党也燥生成物を
補造し、そしおこの党也燥生成物は高タン癜高塩
性のきわめお有甚な動物飌料ずしお䜿甚するこず
ができる。 以䞋に本発明による方法を䜿甚する詊隓を蚘茉
する。特定量の材料、特定タむプの䜿甚䟛絊原
料、酵母の特定皮もしくは菌株は䟋ずしお考える
べきで、本発明の限定䟋ずしお考えるべきではな
い。 䟋 連続的奜気醗酵方法条件䞋で行぀た詊隓では、
それぞれ30.15察69.85の容量比のメタノヌルおよ
び氎性無機塩培地をNRRL −11431ずしお寄
蚗した酵母Pichia pstorisカルチダヌ21−を接
皮した醗酵槜に個々に䟛絊した。前調敎培地もし
くは基質は党く䜿甚しなか぀た。醗酵槜は液
容の醗酵槜で、PH、枩床およびレベルの自動
調敎付きであ぀た。撹拌は1000〜1200rpmで回転
する翌で行な぀た。通気速床は十分な酞玠を有
し䟛絊空気を分に぀き醗酵容積圓り〜1.5容
およそ倧気圧および25℃でであり、倧気圧お
よび玄30℃で空気を飜和した醗酵混合物に溶解す
るであろうその玄20量に等しい溶存酞玠量を醗
酵混合物に維持させた。氎性氎酞化アンモニりム
濃氎酞化アンモニりム倍およびむオン陀去氎
郚を醗酵混合物のPHを玄3.5に維持するよう
な割合で添加した。 䜿甚した氎性無機塩倍地は溶液に察し、
12.5mlの85H3PO4、2.5の85KOH、8.5
KCl、7.0MgSO4・7H2O、1.5CaCl2・2H2O、
25mlの埮量ミネラル溶液、25mlの埮量ミネラル
溶液、10mlのビオチン−チアミン塩酞塩溶液、
箄0.08mlの消泡剀Mazu DF−37℃、および十
分なむオン陀去氎を混合しおの溶液を補造し
た。 埮量ミネラル溶液は溶液に察し、4.8
のFeCl3・6H2O、2.0のZnSO4・7H2O、0.02
のH3BO3、0.20のNa2MoO4・2H2O、0.30の
MnSO4・H2O、0.08のKI、0.06のCuSO4・
5H2O、mlの濃H2SO4および十分なむオン陀去
氎を混合しおの溶液を補造した。 埮量ミネラル溶液は溶液に察し、2.0
FeCl3・6H2O、2.0のZnSO4・7H2O、0.3の
MnSO4・H2O、0.6のCuSO4・5H2O、mlの
濃H2SO4、および十分なむオン陀去氎を混合し
おの溶液を補造した。 ビオチン−チアミン塩酞塩溶液はmgのビオチ
ン、200mgのチアミン塩酞塩および50mlのむオン
陀去氎を混合しお補造した。 醗酵は玄30℃およびおよそ倧気圧で、7.0時間
の保持時間で行な぀た。 酵母现胞は遠心分離により醗酵流出液から分離
し、氎サスペンゞペンで掗滌し、再遠心分離し、
100℃で䞀倜也燥し、そしお秀量した。也燥芏準
で酵母现胞は䟛絊メタノヌル100に぀き42.3
の収量で産生した。现胞密床は流出液に぀き
现胞100.7の高レベルであ぀た。 䟋 別の醗酵詊隓を、氎性無機塩倍地の組成をいく
らか倉え、メタノヌル察氎性無機塩倍地の容量化
を40.8察59.2ずし、PH調敎甚氎性氎酞化アンモニ
りムを濃氎酞化アンモニりム郚およびむオン陀
去氎郚により調補し、そしお醗酵保持時間を
8.35時間ずしたこずを陀いお、実質的に䟋蚘茉
の方法を䜿甚し行な぀た。 この詊隓で䜿甚する氎性無機塩培地は、溶
液に察し、20.0mlの85H3PO4、4.0の85
KOH、12.0のKCl、10.4のMgSO4・7H2O、
2.4のCaCl2・2H2O、䟋蚘茉の埮量ミネラル
溶液A40ml、䟋蚘茉の埮量ミネラル溶液B40
ml、䟋蚘茉のビオチン−チアミン塩酞塩溶液16
ml、玄0.08mlの消泡剀、およびの溶液にする
のに十分なむオン陀去氎を混合しお補造した。 酵母现胞を醗酵流出液から分離し、掗滌し、そ
しお䟋のように也燥した。也燥芏準で、酵母现
胞は䟛絊メタノヌル100に぀き41.4の収量で
産生した。现胞密床は流出液に぀き133.3
のきわめお望たしい高レベルであ぀た。 䟋 参考 連続的奜気醗酵を、今回はNRRL −11432
ずしお寄蚗した酵母Hansenula polymorphaカル
チダヌ21−を接皮し、䟋蚘茉のように醗酵槜
䞭で行な぀た。醗酵槜に党溶液に぀き300ml
メタノヌルを含むメタノヌルおよび氎性無機塩培
地混合物を䟛絊した。撹拌醗酵混合物は、十分な
酞玠を有し䟛絊空気を分に぀き醗酵容量圓り
容およそ倧気圧および玄25℃でを醗酵槜に通
すこずによ぀お通気し、醗酵混合物内に、倧気圧
および玄38℃で空気を飜和した醗酵混合物に溶解
するであろうその玄20に等しい溶存酞玠量を維
持させた。 氎性氎酞化アンモニりム倍の濃氎酞化アン
モニりムおよび郚のむオン陀去氎を醗酵混合
物のPHを3.7〜4.1に維持する割合で添加した。 メタノヌルおよび氎性無機塩倍地の混合物は、
溶液に察し300mlのメタノヌル、mlの85
H3PO4、のKCl、4.5のMgSO4・7H2O、
0.6のCaCl2・2H2O、0.3のNaCl、10mlの䟋
蚘茉の埮量ミネラル溶液、10mlの䟋蚘茉の
埮量ミネラル溶液、mlの䟋蚘茉のビオチン
−チアミン塩酞塩溶液、滎の消泡剀および
溶液にするのに十分なむオン陀去氎を混合しお補
造した。 醗酵は玄38℃および玄倧気圧で、5.66時間の保
持時間により行な぀た。 酵母现胞は醗酵流出液から分離し、掗滌しそし
お䟋のように也燥した。也燥芏準で、酵母现胞
は䟛絊メタノヌル100に぀き31.0の収量で産
生した。现胞密床は流出液に぀き73.3の现
胞であ぀た。 䟋 連続的奜気醗酵方法においお、それぞれ36.9察
63.1の容量比でメタノヌルおよび氎性ミネラル培
地を、NRRL −11430ずしお寄蚗した酵母
Pichia pastorisカルチダヌ21−を接皮した醗
酵槜に個々に䟛絊した。醗酵槜は玄600の液䜓
容量、PH、枩床、レベルの自動調補および通颚管
を備えた1500の泡を満たした醗酵槜であ぀た。
撹拌は通颚管の䞋郚の、750rpmで駆動するタヌ
ビンにより行な぀た。通気速床は分に぀き醗酵
槜内の醗酵液容量圓り玄1.6容の空気玄38psig
および玄25℃でであ぀た。無氎アンモニアを醗
酵混合物のPHを玄3.5に維持する割合で添加した。 最初の氎性無機塩培地は、溶液に察し12.2
mlの75H3PO4、6.0のKCl、6.0のMgSO4・
7H2O、0.8のCaCl2・2H2O、2.0の85
KOH、2.0mlの埮量ミネラル溶液、0.8mlのビオ
チン−チアミン塩酞塩溶液および溶液にする
のに十分な飲料氎飲料氎は最初に十分なチオ硫
酞゜ヌダで凊理し、そこに含たれる遊離塩玠ず反
応させるを混合しお補造した。 埮量ミネラル溶液は、溶液に察し65の
FeCl3・6H2O、18のZnSO4・7H2O、5.0の
MnSO4・H2O、6.0のCuSO4・5H2O、2.0mlの
濃H2SO4および溶液にするのに十分なむオ
ン陀去氎を混合しお補造した。 ビオチン−チアミン塩酞塩溶液は0.4ビオチ
ン察40チアミン塩酞塩の割合でのむオン陀
去氎に成分を混合しお補造した。 醗酵は30℃および38psig圧で、12.7時間の保持
時間により行な぀た。 酵母现胞は醗酵流出物から遠心分離により分離
し、氎サスペンゞペンで掗滌し、再遠心分離し、
100℃で䞀倜也燥し、そしお秀量した。也燥芏準
で酵母现胞は䟛絊メタノヌル100に぀き37の
収量で産生した。现胞密床は流出物に぀きき
わめお望たしい110.3の现胞であ぀た。 䟋 連続的奜気醗酵方法においお、それぞれ40察60
の容量比でメタノヌルおよび氎性無機塩培地を、
NRRL −11430ずしお寄蚗した酵母pichia
pastorisカルチダヌ21−を接皮した醗酵槜に
個々に䟛絊した。醗酵槜は玄610の液䜓容量、
PH、枩床およびレベルの自動調補を有する1500
の泡を満たした醗酵槜であ぀た。撹拌1000rpmで
駆動する個の通䟋のパドル−タむプタヌビンに
より行な぀た。通気速床は分に぀き醗酵槜内の
醗酵液郚圓り玄郚の空気玄38psigおよび玄
25℃でであ぀た。無氎アンモニアを醗酵混合物
のPHを玄3.5に維持する割合で添加した。 氎性無機塩培地は、飲料氎に察し、 15.86mlの75H3PO4、9.53のK2SO4、7.8
のMgSO4・7H2O、0.6のCaCl2・2H2O、およ
び2.6の85KOHを混合しお補造した。埮量ミ
ネラル溶液プラスビオチンはメタノヌルに぀
き10mlの割合でメタノヌル流を経お別々に䟛絊し
た。埮量ミネラル溶液プラスビオチンは780mlの
埮量ミネラル溶液、20mlの氎、200mlのメタノ
ヌルおよび0.032mlのビオチンを混合しお補造し
た。 埮量ミネラル溶液は、溶液に察し、65
のFe2SO4・7H2O、20のZnSO4・7H2O、3.0
のMnSO4・H2O、6.0のCuSO4・5H2O、5.0ml
の濃硫酞および溶液を䜜るのに十分なむオン
陀去氎を混合しお補造した。 氎性無機塩培地は時間に぀き31.5の割合
で、メタノヌルは時間に぀き21の割合で䟛絊
した。 醗酵は30℃および玄38psig圧で、11.6時間の保
持時間により行な぀た。 分析目的のために、酵母现胞を醗酵流出物から
遠心分離により分離し、氎性サスペンゞペンで掗
滌し、再遠心分離し、100℃で䞀倜也燥しそしお
秀量した。也燥芏準で酵母现胞は䟛絊メタノヌル
100に぀き40.6の収量で産生した。现胞密床
は流出物に぀ききわめお望たしい128.4の
现胞であ぀た。醗酵液醗酵槜からの流出物の
総固圢含量はに぀き134.7现胞プラス溶
解固圢物であ぀た。醗酵槜からの流出液は酵母
を殺すために殺菌機を通し、それ以䞊の濃瞮もし
くは凊理するこずなく盎接噎霧也燥機に䟛絊し
た。 䟋 参考 連続的奜気醗酵方法においお、それぞれ29察71
の容量比でメナトヌルおよび氎性無機塩培地を、
酵母Hansenula polymorpha NRRL −11170
を接皮した醗酵槜に個々に䟛絊した。醗酵槜は玄
560の液䜓容量、PH、枩床およびレベルの自動
調敎、および通気管を備えた1500の泡を満たし
た醗酵槜であ぀た。撹拌は通気管䞋郚の、
810rpmで駆動するタヌビンにより行な぀た。通
気速床は分に぀き醗酵槜内の醗酵液郚圓り玄
郚の空気玄38psigおよび玄25℃でであ぀
た。無氎アンモニアを醗酵混合物のPHを玄3.5に
維持する割合で添加した。 氎性無機塩溶液は10.38mlの75H3PO4、4.29
のKCl、6.44のMgSO4・7H2O、0.86の
CaCl2・2H2O、0.43のNaCl、3.0mlの埮量ミネ
ラル溶液、および飲料氎飲料氎は最初に十分
なチオ硫酞゜ヌダで凊理し、そこに含たれる遊離
塩玠ず反応させる1000ml䞭のビオチン−チアミ
ン塩酞塩溶液0.64mlを混合しお補造した。 醗酵は39〜40℃および38psig圧で、7.6時間の
保持時間により行な぀た。 分析のために酵母现胞は醗酵流出液から遠心分
離により分離し、氎サスペンゞペンで掗滌し、再
遠心分離し100℃で䞀倜也燥し、そしお秀量した。
也燥芏準で、酵母现胞は䟛絊メタノヌル100に
぀き33.3の収量で産生した。现胞密床は流出液
に぀き望たしい76.2の现胞であ぀た。 急速生育および高生産性の胜力を有する酵母の
発芋は明らかに有利である。 本発明は非垞に望たしく䞔有甚性を有する皮
のきわめお独特の酵母培逊物、すなわちNRRLY
−11431ずしお寄蚗したpichia pastorisカルチ
ダヌ21−およびNRRLY−11430ずしお寄蚗
したPichia pastorisカルチダヌ21−を䟛す
る。これらの独時な培逊物は高無機塩レベルおよ
び现胞密床で特に良く生育する。 これらの皮の独特の酵母培逊物は酞玠を飜和
させたた炭化氎玠、特に䜎玚アルコヌル、も぀ず
も奜たしくはメタノヌルもしくぱタノヌル䞊に
高生産性で効果的に生育する。これは新芏Pichia
pastorisに関し特に泚目すべきである。䜕故なら
çš®pichia pastorsのいく぀かの培逊物はメタノヌ
ルに簡単に生育しないからである。これらの独特
の皮は次のように呜名される
【衚】 NRRL −11431、NRRL −11431および
NRRLY−11430は新芏酵母カルチダヌを公匏保
管者、United States Department of
Agiculture、Agricultural Research Sevice、
Northern Regional Research Laboratory、
Peoria、Illinois 61604に各個の傟斜寒倩カル
チダヌを寄蚗するこずにより出願人らが寄蚗し、
そしお保管者から瀺すような個々にNRRL菌株
番号を受けた。埓぀お、これらの寄蚗からもしく
は寄蚗をなした出願人のカルチダヌからのカルチ
ダヌ詊料は出願人の発芋した皮に由来する菌株を
䟛する。 本発明は氎性奜気培逊条件䞋で埮生物の皮の
新芏カルチダヌもしくは菌株に属する酞玠飜和炭
化氎玠−同化性埮生物现胞の䞀面における培逊方
法を䟛する。これらの菌株を分類した
【衚】 新芏䞔独特の埮生物は曎に以䞋の衚に瀺すよう
な性質で特城づけるこずができる
【衚】 生育因子 ビオチン ビオチン
【衚】
【衚】 勿論すべおの埮生物のように、特城のうちある
ものは培地および特別の条件によりいくらか倉化
を受けるこずができる。 䟋に瀺した培地凊方は本発明の新芏酵母皮を培
逊するために䜿甚するこずができる。しかし、そ
れらはメタノヌル含有基質以倖にも生育するであ
ろう。これらの新芏酵母培逊物は本明现曞に蚘茉
の高塩培地に぀いお䜿甚できるのみでなく次のよ
うな培地を䜿甚する通䟋の醗酵条件で䜿甚するこ
ずもできる 培地 1M−成 分 量 KH2PO4 5.0 MgSO4・7H2O 0.5 CaCl2・2H2O 0.1 KCl 0.5 NH42SO4 3.0 ビオチン 0.04mg チアミン 4.0mg 埮量ミネラル溶液(a) 2.5ml æ°Ž 1000ml 殺菌メタノヌル(b) 0.5〜1.0容量 (a) 䞋蚘の凊方参照 (b) 䜿甚盎前に添加 埮量金属溶液成 分 量 CuSO4・5H2O 0.06 Kl 0.08 MnSO4・H2O 0.3 Na2MoO4・2H2O 0.2 H3BO3 0.02 ZnSO4・7H2O 2.0 FeCl3・6H2O 4.8 蒞溜氎 1000ml H2SO4濃 ml 資料を含む本開瀺は本発明の䟡倀および効果を
䟋瀺する。

Claims (1)

  1. 【特蚱請求の範囲】  メタノヌル䞋で生育胜を有する、Pichia
    pastoris NRRL −11430FRI 5682又は
    Pichia pastoris NRRL −11431FRI 5683。  長期間察数増殖期がなくメタノヌルの代謝胜
    を有しか぀収量のロスなしで高现胞密床にメタノ
    ヌル䞋生育胜を有する、請求項蚘茉のPichia
    pastoris。  メタノヌルに高现胞密床で生育させるため
    に、ビオチン芁求性を有する、請求項蚘茉の
    Pichia pastoris。  生物孊的に玔粋な培逊物の圢である、請求項
    蚘茉のPichia pastoris。  Pichia pastoris NRRL −11430FRI
    5682又はPichia pastoris NRRL −11431
    FRI 5683ず呜名され、もしくは由来する酵母
    菌株を炭玠および゚ネルギヌ基質ずしお酵玠化炭
    化氎玠を䜿甚する氎性培地で奜気醗酵条件䞋に培
    逊するこずを特城ずする、Pichia pastiris −
    11430FRI 5682およびNRRL −11431FRI
    5683の培逊方法。  生成した埮生物现胞を単现胞タン癜材料ずし
    お分解し、回収する、請求項蚘茉の方法。  酵玠化炭化氎玠炭玠および゚ネルギヌ基質は
    皮以䞊の実質的に氎溶性アルコヌル、ケトン、
    ゚ステル、゚ヌテル、酞又は分子に぀き玄10炭
    玠原子たでのアルデヒドより成る、請求項又は
    項蚘茉の方法。  炭酞および゚ネルギヌ基質は氎溶性脂防族の
    䟡炭化氎玠系アルコヌルより成る、請求項蚘
    茉の方法。  アルコヌルはメタノヌルである、請求項蚘
    茉の方法。
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