JPH0449396B2 - - Google Patents
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- JPH0449396B2 JPH0449396B2 JP59154437A JP15443784A JPH0449396B2 JP H0449396 B2 JPH0449396 B2 JP H0449396B2 JP 59154437 A JP59154437 A JP 59154437A JP 15443784 A JP15443784 A JP 15443784A JP H0449396 B2 JPH0449396 B2 JP H0449396B2
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
- C12N1/165—Yeast isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/12—Disaccharides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/18—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic polyhydric
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/88—Torulopsis
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- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
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- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はトルロプシス属に属する新規な微生物
に関する。
に関する。
微生物によるセルラーゼ生産の生産促進物質、
化粧品原料として有用なソホローズは、槐の木
（Sophora japonica L.）の実のさや中のカンフ
エロール配糖体の糖成分として最初に見い出され
たが、自然界では遊離状態の二糖として得られる
ことは稀であつて、わずかにロイヤルゼリー中に
存在することが知られているにすぎない。
化粧品原料として有用なソホローズは、槐の木
（Sophora japonica L.）の実のさや中のカンフ
エロール配糖体の糖成分として最初に見い出され
たが、自然界では遊離状態の二糖として得られる
ことは稀であつて、わずかにロイヤルゼリー中に
存在することが知られているにすぎない。
また、微生物のソホローズ生産については、
Khan等が細菌アセトバクター（Acetobacter）
属に属する微生物によるオリゴ糖生成研究におい
て少量のソホローズ生成を認めた以外に知られて
いない〔A.W.Khan et al.、Nature、183、682
（1959）、T.K.Walker et al.、Arch.Biochem.
Biophys.、83、161（1959）〕。
Khan等が細菌アセトバクター（Acetobacter）
属に属する微生物によるオリゴ糖生成研究におい
て少量のソホローズ生成を認めた以外に知られて
いない〔A.W.Khan et al.、Nature、183、682
（1959）、T.K.Walker et al.、Arch.Biochem.
Biophys.、83、161（1959）〕。
斯かる実状において、ソホローズ生産微生物の
早急な探索が望まれていた。
早急な探索が望まれていた。
本発明者は、ソホローズ生産能を有する微生物
を広く探索した結果、酵母トルロプシス
（Torulopsis）属に属する微生物中に斯様な能力
を有するものがあることを見い出し、本発明を完
成した。
を広く探索した結果、酵母トルロプシス
（Torulopsis）属に属する微生物中に斯様な能力
を有するものがあることを見い出し、本発明を完
成した。
すなわち本発明は、トルロプシス属に属し、ソ
ホローズ生産能を有する新規なトルロプシス・ボ
ンビコーラ（Torulopsis bombicola）KSM−36
（微工研菌寄第7586号）を提供するものである。
ホローズ生産能を有する新規なトルロプシス・ボ
ンビコーラ（Torulopsis bombicola）KSM−36
（微工研菌寄第7586号）を提供するものである。
トルロプシス・ボンビコーラKSM−36は下記
の菌学的性質を有する。
の菌学的性質を有する。
(a) 各培地における生育状態
麦芽汁培地、麦芽汁寒天培地、ポテト−デキ
ストロース寒天培地及びコーンミール寒天培地
上での生育状態は、いずれも楕円乃至長楕円酵
母で、（0.75〜3.0）×（1.5〜5.5）μの大きさを
有し、多極出芽方式で、真性菌糸、偽菌糸の形
成は認められなかつた。
ストロース寒天培地及びコーンミール寒天培地
上での生育状態は、いずれも楕円乃至長楕円酵
母で、（0.75〜3.0）×（1.5〜5.5）μの大きさを
有し、多極出芽方式で、真性菌糸、偽菌糸の形
成は認められなかつた。
(b) 子嚢胞子の形成
麦芽抽出液寒天培地を用いて子嚢胞子形成の
有無を検討した結果、子嚢胞子の形成を認めな
かつた。
有無を検討した結果、子嚢胞子の形成を認めな
かつた。
(c) 射出胞子の形成
麦芽汁寒天培地で培養した射出胞子の有無を
検討した結果、射出胞子の形成を認めなかつ
た。
検討した結果、射出胞子の形成を認めなかつ
た。
(d) 各生理的性質
生育条件 PH ３〜８（最適５〜６）
温度 ７〜38℃（最適25〜34℃）
硝酸塩の同化 −
脂肪の分解 ＋
尿素の分解 −
ゼラチンの液化 −
塩化ナトリウム耐性 ６〜８％（ｗ／ｖ）
カロチノイドの生成 −
カスター培地における有機酸生成 ＋
デンプン様物質の生成 −
ビタミンの要求性 ＋
（ビオチン、チアミン要求性）
(e) 同化性、発酵性の有無
同化性 発酵性
Ｄ−グルコース ＋ ＋
トレハロース − −
Ｄ−ガラクトース − −
ラクトース − −
シユクロース ＋ ＋
ラフイノース − ＋1/3
Ｄ−マンノース − −
Ｄ−キシロース −
α−メチル−Ｄ−グルコシド
− メリビオース − Ｄ−アラビノース − エスクリン − エタノール ＋ イノシツト − マルトース − − メレジトース − グリセリン ＋ セロビオース − イヌリン − Ｄ−マンニツト ＋ 可溶性デンプン − Ｄ−ソルビツト ＋ (f) 採集地 東京都武蔵野市のキヤベツ畑のキヤベツ葉か
ら分離。
− メリビオース − Ｄ−アラビノース − エスクリン − エタノール ＋ イノシツト − マルトース − − メレジトース − グリセリン ＋ セロビオース − イヌリン − Ｄ−マンニツト ＋ 可溶性デンプン − Ｄ−ソルビツト ＋ (f) 採集地 東京都武蔵野市のキヤベツ畑のキヤベツ葉か
ら分離。
以上の菌学的性状から、本KSM−36株はトル
ロプシス属に属すると判断される。更に該株は麦
芽汁培地、YM培地及びグリコース−酵母エキス
−ペプトン培地のいずれにおいて培養しても皮膜
の形成は認められない；YM寒天培地での生育は
良好で、コロニーの形状は周縁において全縁で隆
起して半レンズ状であり、表面は平滑で、光沢は
輝光、性状はバター質、色調はクリーム色であ
る；巨大コロニー培養でのコロニーの型は円型
で、そのほかコロニーの形態、形状はYM寒天培
地でのものと同様である等の特徴を有する。
ロプシス属に属すると判断される。更に該株は麦
芽汁培地、YM培地及びグリコース−酵母エキス
−ペプトン培地のいずれにおいて培養しても皮膜
の形成は認められない；YM寒天培地での生育は
良好で、コロニーの形状は周縁において全縁で隆
起して半レンズ状であり、表面は平滑で、光沢は
輝光、性状はバター質、色調はクリーム色であ
る；巨大コロニー培養でのコロニーの型は円型
で、そのほかコロニーの形態、形状はYM寒天培
地でのものと同様である等の特徴を有する。
かかる菌学的性質を有する菌についてジエイ・
ロダー（J.Lodder）の「ザ イースト」（「The
Yeasts」North−Holland Publishing Co.、
Amsterdam−London、1971）、駒形和男編「微
生物の化学分類実験法」（学会センター、1982）、
飯塚広、後藤昭二著「酵母の分類同定法」（第２
版、東京大学出版会、1977）に基いて検索した結
果、本菌株と類似の菌株としてはトルロプシス・
ボンビコーラATCC22214（GBS6009）が認めら
れた。しかしながら、本発明のトルロプシス・ボ
ンビコーラKSM−36は、ｎ−アルカンを唯一の
炭素源基質とする分離培地によつてキヤベツの葉
から分離された菌株であるのに対し、公知のトル
ロプシス・ボンビコーラ酵母株は高濃度のグルコ
ースを唯一の炭素源基質とする分離培地によつ
て、野花（例えばカナダのアルバータ地方ののげ
し）の花蜜から分離された菌株である。そして、
公知のトルロプシス・ボンビコーラ酵母株とは、
これが尿素資化性、すなわちウレアーゼ活性
「＋」であるのに対し、本発明のトルロプシス・
ボンビコーラKSM−36はウレアーゼ活性「−」
である点で相違する。更に、最も顕著な相違とし
て、トルロプシス・ボンビコーラKSM−36はソ
ホローズ生産性が公知のトルロプシス・ボンビコ
ーラ酵母株に比べ遥かに高いことが挙げられる。
ロダー（J.Lodder）の「ザ イースト」（「The
Yeasts」North−Holland Publishing Co.、
Amsterdam−London、1971）、駒形和男編「微
生物の化学分類実験法」（学会センター、1982）、
飯塚広、後藤昭二著「酵母の分類同定法」（第２
版、東京大学出版会、1977）に基いて検索した結
果、本菌株と類似の菌株としてはトルロプシス・
ボンビコーラATCC22214（GBS6009）が認めら
れた。しかしながら、本発明のトルロプシス・ボ
ンビコーラKSM−36は、ｎ−アルカンを唯一の
炭素源基質とする分離培地によつてキヤベツの葉
から分離された菌株であるのに対し、公知のトル
ロプシス・ボンビコーラ酵母株は高濃度のグルコ
ースを唯一の炭素源基質とする分離培地によつ
て、野花（例えばカナダのアルバータ地方ののげ
し）の花蜜から分離された菌株である。そして、
公知のトルロプシス・ボンビコーラ酵母株とは、
これが尿素資化性、すなわちウレアーゼ活性
「＋」であるのに対し、本発明のトルロプシス・
ボンビコーラKSM−36はウレアーゼ活性「−」
である点で相違する。更に、最も顕著な相違とし
て、トルロプシス・ボンビコーラKSM−36はソ
ホローズ生産性が公知のトルロプシス・ボンビコ
ーラ酵母株に比べ遥かに高いことが挙げられる。
そこで、本発明者はKSM−36株をトルロプシ
ス属に属する新酵母と判断し、トルロプシス・ボ
ンビコーラ（Torulopsis bombicola）KSM−36
と命名し、前記した如く工業技術院微生物工業技
術研究所に寄託した。
ス属に属する新酵母と判断し、トルロプシス・ボ
ンビコーラ（Torulopsis bombicola）KSM−36
と命名し、前記した如く工業技術院微生物工業技
術研究所に寄託した。
このKSM−36株を分離源であるキヤベツの葉
から分離するには、例えば後記実施例に示す如
く、ノルマルパラフインを唯一の炭素源として含
有する培地を用い常法に従つて行えばよい。
から分離するには、例えば後記実施例に示す如
く、ノルマルパラフインを唯一の炭素源として含
有する培地を用い常法に従つて行えばよい。
本発明のKSM−36株を用いてソホローズを製
造するには、KSM−36株が良好に生育し、ソホ
ローズを順調に生産するために必要な炭素源、窒
素源あるいは有機栄養源、無機塩のどを含む培地
中でこれを培養する。
造するには、KSM−36株が良好に生育し、ソホ
ローズを順調に生産するために必要な炭素源、窒
素源あるいは有機栄養源、無機塩のどを含む培地
中でこれを培養する。
炭素源としては、炭水化物（例えば、グルコー
ス、フラクトース、シユクロース、ソルビトール
等）、有機酸（例えば、クエン酸、コハク酸等）、
炭化水素（例えば、ｎ−ドデカン、ｎ−ヘキサデ
カン等）、油脂及びその誘導体（例えば、動植物
油脂、ジグリセライド、モノグリセライド、脂肪
酸、脂肪酸エステル、脂肪族アルコール及びその
エステル等）、アルキル（又はアルケニル）ハラ
イドなど資化されるものならばいずれも使用でき
る。また、窒素源あるいは有機栄養源としては、
例えば硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、
硝酸アモニウム等の無機窒素源化合物類、グルタ
ミン酸等のアミノ酸類、酵母エキス、肉エキス、
ペプトン等の有機窒素源物質類が挙げられる。ま
た、無機塩としては各種リン酸塩、硫酸マグネシ
ウムなどが使用できる。更に、微量の重金属塩類
が使用されるが、天然物を含む培地では必ずしも
添加を必要としない。ビタミンとしてチアミンと
ビオチンを要求するが、やはり天然物を含む培地
では必ずしも添加を必要としない。更にまた、栄
養要求を必要とする変異株を用いる場合には、そ
の栄養要求を満たす物質を培地に添加しなければ
ならない。
ス、フラクトース、シユクロース、ソルビトール
等）、有機酸（例えば、クエン酸、コハク酸等）、
炭化水素（例えば、ｎ−ドデカン、ｎ−ヘキサデ
カン等）、油脂及びその誘導体（例えば、動植物
油脂、ジグリセライド、モノグリセライド、脂肪
酸、脂肪酸エステル、脂肪族アルコール及びその
エステル等）、アルキル（又はアルケニル）ハラ
イドなど資化されるものならばいずれも使用でき
る。また、窒素源あるいは有機栄養源としては、
例えば硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、
硝酸アモニウム等の無機窒素源化合物類、グルタ
ミン酸等のアミノ酸類、酵母エキス、肉エキス、
ペプトン等の有機窒素源物質類が挙げられる。ま
た、無機塩としては各種リン酸塩、硫酸マグネシ
ウムなどが使用できる。更に、微量の重金属塩類
が使用されるが、天然物を含む培地では必ずしも
添加を必要としない。ビタミンとしてチアミンと
ビオチンを要求するが、やはり天然物を含む培地
では必ずしも添加を必要としない。更にまた、栄
養要求を必要とする変異株を用いる場合には、そ
の栄養要求を満たす物質を培地に添加しなければ
ならない。
培養は培地を加熱等により殺菌後、菌を接種
し、20〜35℃で３〜５日振盪又は通気撹拌すれば
よい。PHは初発PHを５〜6.5に調節し、その後は
培養にまかせれば良い結果が得られる。水に難溶
性の炭素源等が使用する場合には、ポリオキシエ
チレンソルビタン等の各種界面活性剤を培地に添
加することも可能である。
し、20〜35℃で３〜５日振盪又は通気撹拌すれば
よい。PHは初発PHを５〜6.5に調節し、その後は
培養にまかせれば良い結果が得られる。水に難溶
性の炭素源等が使用する場合には、ポリオキシエ
チレンソルビタン等の各種界面活性剤を培地に添
加することも可能である。
叙上の如くして得られた培養物は、そのまま酵
母源として用いることができるが、通常の固液分
離手段を用いて培養物から菌体を分離し、得られ
る生菌体又はその処理物（凍結乾燥菌体等）を酵
母源とすることもできる。
母源として用いることができるが、通常の固液分
離手段を用いて培養物から菌体を分離し、得られ
る生菌体又はその処理物（凍結乾燥菌体等）を酵
母源とすることもできる。
更に、培養物中からソホローズを単離するに
は、後記参考例に示す如く、ソホローズの理化学
的性質を利用して、一般の有機化合物の採取およ
び精製の手段に準じて行うことができる。
は、後記参考例に示す如く、ソホローズの理化学
的性質を利用して、一般の有機化合物の採取およ
び精製の手段に準じて行うことができる。
すなわち、例えば培養物を遠心分離、過又は
分相等に付して培養液を分取し、次いでこの培養
液から抽出、イオン交換等の方法により不純物を
取除いたのち、更に活性炭カラム等を用いたカラ
ムクロマトグラフイー等の方法により分別精製す
る。
分相等に付して培養液を分取し、次いでこの培養
液から抽出、イオン交換等の方法により不純物を
取除いたのち、更に活性炭カラム等を用いたカラ
ムクロマトグラフイー等の方法により分別精製す
る。
本発明のトルロプシス・ボンビコーラKSM−
36は、後記参考例に示す如く、ソホローズを生産
する。
36は、後記参考例に示す如く、ソホローズを生産
する。
前述の如く、微生物のソホローズ生産能につい
ては、僅かに１例知られているのみで、しかも単
に少量のソホローズ生成を認めたというに過ぎな
い。これに対し、本発明のトルロプシス・ボンビ
コーラKSM−36は極めて高いソホローズ生産能
を有する。
ては、僅かに１例知られているのみで、しかも単
に少量のソホローズ生成を認めたというに過ぎな
い。これに対し、本発明のトルロプシス・ボンビ
コーラKSM−36は極めて高いソホローズ生産能
を有する。
次に実施例及び参考例を挙げて本発明を説明す
る。
る。
実施例 １
() 東京都武蔵野市郊外のキヤベツ畑のキヤベ
ツ葉10ｇを滅菌水30mlの入つたビーカーに入
れ、10分間マグネチツクスターラで懸濁分散さ
せた。静置後、その上澄液を10ml採取し、これ
を下記組成の分離用液体培地100mlを含有した
500ml容坂口フラスコに接種し、30℃、120スト
ローク／分で７日間振盪培養した。この操作を
繰り返し行い、４回集積培養を行つた。
ツ葉10ｇを滅菌水30mlの入つたビーカーに入
れ、10分間マグネチツクスターラで懸濁分散さ
せた。静置後、その上澄液を10ml採取し、これ
を下記組成の分離用液体培地100mlを含有した
500ml容坂口フラスコに接種し、30℃、120スト
ローク／分で７日間振盪培養した。この操作を
繰り返し行い、４回集積培養を行つた。
（分離用液体培地の組成）
ｎ−ヘキサデカン 100ml
硝酸アンモニウム 25ｇ
リン酸二水素カリウム 10ｇ
硫酸マグネシウム・７水塩 5.0ｇ
塩化カリウム 5.0ｇ
酵母エキス 1.0ｇ
水道水 1000ml
PH4.5
() 次いで、各段階の集積培地液から培養液0.5
ml採取し、これを下記方法で調製された分離用
寒天培地の表面にコンラジー棒で均一に塗布し
たのち、ｎ−ヘキサデカンを含浸させたロ紙で
覆いセロテープで蜜封し、30℃で培養した。
ml採取し、これを下記方法で調製された分離用
寒天培地の表面にコンラジー棒で均一に塗布し
たのち、ｎ−ヘキサデカンを含浸させたロ紙で
覆いセロテープで蜜封し、30℃で培養した。
（分離用寒天培地の調製）
ｎ−ヘキサデカンを除いた上記分離用液体培
地に寒天を液体培地に対し外比で2.5重量％添
加したのち蒸気滅菌した。これを保温下で滅菌
シヤーレに一定量分注し平板寒天培地とした。
地に寒天を液体培地に対し外比で2.5重量％添
加したのち蒸気滅菌した。これを保温下で滅菌
シヤーレに一定量分注し平板寒天培地とした。
() 次いで、上記培養により生育したコロニー
の一白金耳を滅菌水で100倍希釈し、この希釈
液0.1mlを前述の分離用寒天培地と同組成の寒
天培地に再度塗布し、同様にｎ−ヘキサデカン
を含浸させたロ紙で覆うことによりｎ−ヘキサ
デカンを供給しながら30℃で３日間培養した。
生じた複数のコロニーが相互に相異しないこと
を肉眼的及び顕微鏡的に観察することにより確
認した。更に上記コロニーのうち10個のコロニ
ーをそれぞれ分離用寒天培地と同組成の斜面寒
天培地に接種し、ｎ−ヘキサデカンを含浸させ
たロ紙によりｎ−ヘキサデカンを供給しつつ30
℃で３日間培養した。10本の斜面培地上の菌株
が肉眼的及び顕微鏡的に同一菌株であることを
再確認し、また、これら10菌株の各培地上の性
状及び生理学的性質が同一であることを確認し
た。上記菌株の各培地上の性状及び生理学的性
質は前述した通りである。
の一白金耳を滅菌水で100倍希釈し、この希釈
液0.1mlを前述の分離用寒天培地と同組成の寒
天培地に再度塗布し、同様にｎ−ヘキサデカン
を含浸させたロ紙で覆うことによりｎ−ヘキサ
デカンを供給しながら30℃で３日間培養した。
生じた複数のコロニーが相互に相異しないこと
を肉眼的及び顕微鏡的に観察することにより確
認した。更に上記コロニーのうち10個のコロニ
ーをそれぞれ分離用寒天培地と同組成の斜面寒
天培地に接種し、ｎ−ヘキサデカンを含浸させ
たロ紙によりｎ−ヘキサデカンを供給しつつ30
℃で３日間培養した。10本の斜面培地上の菌株
が肉眼的及び顕微鏡的に同一菌株であることを
再確認し、また、これら10菌株の各培地上の性
状及び生理学的性質が同一であることを確認し
た。上記菌株の各培地上の性状及び生理学的性
質は前述した通りである。
上記試験の結果、各10本の培養菌はすべて自
然界より純粋に分離された単一菌株であること
が判る。
然界より純粋に分離された単一菌株であること
が判る。
() 次いで、上記で純粋培養された斜面培地上
の菌株より一白金耳を滅菌した10％グリセリン
水溶液（２ml）の入つた凍結保存用バイアルに
懸濁し、−80℃にて凍結保存する。かくして３
ケ月凍結保存後、迅速に解凍して得られる懸濁
液の一白金耳を普通寒天培地に蘇生後前記と同
条件下に各培地上での性状及び生理学的性質を
調べた結果、凍結前とは変化が認められなかつ
た。
の菌株より一白金耳を滅菌した10％グリセリン
水溶液（２ml）の入つた凍結保存用バイアルに
懸濁し、−80℃にて凍結保存する。かくして３
ケ月凍結保存後、迅速に解凍して得られる懸濁
液の一白金耳を普通寒天培地に蘇生後前記と同
条件下に各培地上での性状及び生理学的性質を
調べた結果、凍結前とは変化が認められなかつ
た。
また、上記凍結及び解凍を１ケ月毎に５度繰
り返した菌株について同様に、各培地上での性
状及び生理学的性質を調べた結果変化は認めら
れなかつた。
り返した菌株について同様に、各培地上での性
状及び生理学的性質を調べた結果変化は認めら
れなかつた。
参考例 １
() 滅菌したグルコース５重量／容量％（以
下、ｗ／ｖ％で示す）−コーンスターチプリツ
カー2w／ｖ％含有する種培地（PH6.2）500ml
を入れた５容培養三角フラスコに、同組成の
培地を入れた500ml容坂口フラスコ中で30℃、
48時間培養して得たトルロプシス・ボンビコー
ラKSM−36培養液を500ml接種し、30℃で48時
間振盪培養した。次いで、この培養液300mlを、
パーム油15w／ｖ％−グルコース10w／ｖ％−
酵母エキス0.5w／ｖ％含有する本培地（PH5.6）
15を入れた30容のジヤーフアーメンターに
接種し、温度：30℃、通気：0.5VVM、内圧：
0.75Kg／cm2、撹拌：350rpmの条件下で５日間
培養した。
下、ｗ／ｖ％で示す）−コーンスターチプリツ
カー2w／ｖ％含有する種培地（PH6.2）500ml
を入れた５容培養三角フラスコに、同組成の
培地を入れた500ml容坂口フラスコ中で30℃、
48時間培養して得たトルロプシス・ボンビコー
ラKSM−36培養液を500ml接種し、30℃で48時
間振盪培養した。次いで、この培養液300mlを、
パーム油15w／ｖ％−グルコース10w／ｖ％−
酵母エキス0.5w／ｖ％含有する本培地（PH5.6）
15を入れた30容のジヤーフアーメンターに
接種し、温度：30℃、通気：0.5VVM、内圧：
0.75Kg／cm2、撹拌：350rpmの条件下で５日間
培養した。
() 培養液約15を内径15cm、長さ100cmの先
端部が円錐状の保温ジヤケツト付分相管に入
れ、下部より空気を噴出させて撹拌しながら約
70℃で30分加温したのち通気を止め、30分間培
養液を放置沈降させた。このとき培養液は４相
に分相する。最下沈降相及びその上の菌体相を
下部ノズルから静かに抜きとつた後、その上相
（分相時の上から第２相）にあたる水相を静か
に採取した。
端部が円錐状の保温ジヤケツト付分相管に入
れ、下部より空気を噴出させて撹拌しながら約
70℃で30分加温したのち通気を止め、30分間培
養液を放置沈降させた。このとき培養液は４相
に分相する。最下沈降相及びその上の菌体相を
下部ノズルから静かに抜きとつた後、その上相
（分相時の上から第２相）にあたる水相を静か
に採取した。
() 次いで、採集水相部１を採り、必要に応
じて分液ロート中でクロロホルム−メタノール
混液（２：１）500mlで抽出操作を行い、水相
中のクロロホルム−メタノール可溶性物質を除
去する。そして、この抽出処理水相部を５℃、
3500rpmで30分間遠心分離を行い上清液を得
た。この上清液をロータリーエバポレーターで
35℃温浴上にて混在するメタノール等を留去す
るとともに減圧濃縮した。更に、得られた濃縮
液約50mlからイオン性物質を除去するために、
これにカチオン交換樹脂とアニオン交換樹脂を
添加し、２時間撹拌したのちイオン交換樹脂を
洗浄除去した。
じて分液ロート中でクロロホルム−メタノール
混液（２：１）500mlで抽出操作を行い、水相
中のクロロホルム−メタノール可溶性物質を除
去する。そして、この抽出処理水相部を５℃、
3500rpmで30分間遠心分離を行い上清液を得
た。この上清液をロータリーエバポレーターで
35℃温浴上にて混在するメタノール等を留去す
るとともに減圧濃縮した。更に、得られた濃縮
液約50mlからイオン性物質を除去するために、
これにカチオン交換樹脂とアニオン交換樹脂を
添加し、２時間撹拌したのちイオン交換樹脂を
洗浄除去した。
() この脱イオン処理水相320ml全量を活性炭
カラムに充填した。なお、活性炭カラムは内径
2.5cm、長さ60cmのガラスカラムに180ml容量の
活性炭〔クロマト用活性炭、和光純薬(株)製〕を
充填したのち、４規定−塩酸水溶液を1000ml流
し、次いで蒸留水4000mlを流して調製したもの
を使用した。この活性炭カラムによる分離操作
は、最初溶離液として蒸留水1000mlを流し、次
に５％エタノール水溶液2500ml、10％エタノー
ル水溶液1000ml、20％エタノール水溶液1000ml
の順序でステツプワイズ（段階的）溶出を行
い、最後に50％エタノール水溶液1000mlを流し
て終了した。溶出液は大型フラクシヨンコレク
ターで100ｇ重量分画／フラクシヨンで分取し
た。分離された各分画部を薄層クロマトグラフ
イー、ガスクロマトグラフイー及びガスクロー
マススペクトロメトリー（GC−MS）などで
分析することによりNo.11〜No.40の画分に分離分
画された物質がソホローズであることが確認さ
れた（第１図）。上記発酵条件で得られたソホ
ローズは発酵液１あたり約30ｇであつた。ま
た、No.１〜No.10の分離画分にはマンニツトール
が存在することを確認した。マンニツトールは
発酵液１あたり約12ｇであつた。
カラムに充填した。なお、活性炭カラムは内径
2.5cm、長さ60cmのガラスカラムに180ml容量の
活性炭〔クロマト用活性炭、和光純薬(株)製〕を
充填したのち、４規定−塩酸水溶液を1000ml流
し、次いで蒸留水4000mlを流して調製したもの
を使用した。この活性炭カラムによる分離操作
は、最初溶離液として蒸留水1000mlを流し、次
に５％エタノール水溶液2500ml、10％エタノー
ル水溶液1000ml、20％エタノール水溶液1000ml
の順序でステツプワイズ（段階的）溶出を行
い、最後に50％エタノール水溶液1000mlを流し
て終了した。溶出液は大型フラクシヨンコレク
ターで100ｇ重量分画／フラクシヨンで分取し
た。分離された各分画部を薄層クロマトグラフ
イー、ガスクロマトグラフイー及びガスクロー
マススペクトロメトリー（GC−MS）などで
分析することによりNo.11〜No.40の画分に分離分
画された物質がソホローズであることが確認さ
れた（第１図）。上記発酵条件で得られたソホ
ローズは発酵液１あたり約30ｇであつた。ま
た、No.１〜No.10の分離画分にはマンニツトール
が存在することを確認した。マンニツトールは
発酵液１あたり約12ｇであつた。
第１図は参考例１におけるカラムクロマトグラ
フイーの結果を示す溶出曲線である。
フイーの結果を示す溶出曲線である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 下記の菌学的性質を有するトルロプシス・ボ
ンビコーラ（Torulopsis bombicola）KSM−36
（微工研菌寄第7586号）。 (a) 各培地における生育状態 麦芽汁培地、麦芽汁寒天培地、ポテト−デキ
ストロース寒天培地及びコーンミール寒天培地
上での生育状態は、いずれも楕円乃至長楕円酵
母で、（0.75〜3.0）×（1.5〜5.5）μの大きさを
有し、多極出芽方式で、真性菌糸、偽菌糸の形
成は認められなかつた。 (b) 子嚢胞子の形成 麦芽抽出液寒天培地を用いて子嚢胞子形成の
有無を検討した結果、子嚢胞子の形成を認めな
かつた (c) 射出胞子の形成 麦芽汁寒天培地で培養して射出胞子の有無を
検討した結果、射出胞子の形成を認めなかつ
た。 (d) 各生理的性質 生育条件 PH ３〜８（最適５〜６） 温度 ７〜38℃（最適25〜34℃） 硝酸塩の同化 − 脂肪の分解 ＋ 尿素の分解 − ゼラチンの液化 − 塩化ナトリウム耐性 ６〜８％（ｗ／ｖ） カロチノイドの生成 − カスター培地における有機酸生成 ＋ デンプン様物質の生成 − ビタミンの要求性 ＋ （ビオチン、チアミン要求性） (e) 同化性、発酵性の有無 同化性 発酵性 Ｄ−グルコース ＋ ＋ トレハロース − − Ｄ−ガラクトース − − ラクトース − − シユクロース ＋ ＋ ラフイノース − ＋1/3 Ｄ−マンノース − − Ｄ−キシロース − α−メチル−Ｄ−グルコシド
− メリビオース − Ｄ−アラビノース − エスクリン − エタノール ＋ イノシツト − マルトース − − メレジトース − グリセリン ＋ セロビオース − イヌリン − Ｄ−マンニツト ＋ 可溶性デンプン − Ｄ−ソルビツト ＋
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15443784A JPS6131084A (ja) | 1984-07-25 | 1984-07-25 | 新規微生物 |
| GB08516702A GB2162536B (en) | 1984-07-25 | 1985-07-02 | Novel microorganism |
| US06/755,092 US4782025A (en) | 1984-07-25 | 1985-07-15 | Novel microorganism |
| DE19853525411 DE3525411A1 (de) | 1984-07-25 | 1985-07-16 | Neuer mikroorganismus |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15443784A JPS6131084A (ja) | 1984-07-25 | 1984-07-25 | 新規微生物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6131084A JPS6131084A (ja) | 1986-02-13 |
| JPH0449396B2 true JPH0449396B2 (ja) | 1992-08-11 |
Family
ID=15584170
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15443784A Granted JPS6131084A (ja) | 1984-07-25 | 1984-07-25 | 新規微生物 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4782025A (ja) |
| JP (1) | JPS6131084A (ja) |
| DE (1) | DE3525411A1 (ja) |
| GB (1) | GB2162536B (ja) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5280204A (en) * | 1992-07-02 | 1994-01-18 | International Business Machines Corporation | ECI compatible CMOS off-chip driver using feedback to set output levels |
| US5750363A (en) * | 1995-09-14 | 1998-05-12 | Infectech, Inc. | Method for determining the antimicrobial agent sensitivity of a nonparaffinophilic microorganism and an associated apparatus |
| US5641645A (en) * | 1995-11-09 | 1997-06-24 | Infectech, Inc. | Method for determining the antimicrobial agent sensitivity of a nonparaffinophilic microorganism using various milieus and an associated apparatus |
| US5639675A (en) * | 1995-11-09 | 1997-06-17 | Infectech, Inc. | Method of identifying a nonparaffinophilic microorganism using various milieus and an associated apparatus |
| WO2000024918A1 (en) * | 1998-10-27 | 2000-05-04 | Cargill, Incorporated | Method for purifying a polyol product stream |
| US6825389B2 (en) | 2002-11-21 | 2004-11-30 | Dupont Dow Elastomers Llc | Process for manufacturing diiodoperfluoroalkanes |
| US9814744B2 (en) | 2009-12-22 | 2017-11-14 | University of Pittsburg—Of the Commonwealth System of Higher Education | Decellularized adipose cell growth scaffold |
| JP6389400B2 (ja) | 2013-11-21 | 2018-09-12 | 花王株式会社 | アセチル化スフィンゴイドの製造方法 |
| SG11202107010QA (en) * | 2018-12-28 | 2021-07-29 | Nippon Suisan Kaisha Ltd | DIHOMO-γ-LINOLENIC ACID-CONTAINING MICROBIAL OIL WITH REDUCED ARACHIDONIC ACID CONTENT |
-
1984
- 1984-07-25 JP JP15443784A patent/JPS6131084A/ja active Granted
-
1985
- 1985-07-02 GB GB08516702A patent/GB2162536B/en not_active Expired
- 1985-07-15 US US06/755,092 patent/US4782025A/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-07-16 DE DE19853525411 patent/DE3525411A1/de active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4782025A (en) | 1988-11-01 |
| GB8516702D0 (en) | 1985-08-07 |
| JPS6131084A (ja) | 1986-02-13 |
| GB2162536A (en) | 1986-02-05 |
| DE3525411A1 (de) | 1986-01-30 |
| DE3525411C2 (ja) | 1993-07-22 |
| GB2162536B (en) | 1987-09-30 |
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