JPH04500371A - 不可逆性ボンベシン拮抗薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 不可逆性ボンベシン拮抗薬 本発明は、ペプチド誘導体及び該誘導体を含有する医薬組成物、それらの製造方 法及び治療薬としての使用に係る。

本明細書では、ペプチド化学で常用の記号及び略号を使用した（Ｅｕｒ、　Ｊ、 　Ｂｉｏｅｈｅｍ、　（１９８４）　１３旦、９〜３７参照）、従って、３文字 アミノ酸記号はキラルアミノ酸のし配置（Ｌｅｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ）を示 す、Ｄ−アミノ酸は小文字で示す０例えばａｌｉ＝　Ｄ−＾１１である。使用し たその他の記号及び略号は以下の通りである；＾＾＝アミノ酸；＾ｅＯＥｔ＝エ チルアセテ−ト；ＢＢＳ＝ボンベシン；Ｂｏｃ＝ｔ−ブトキシカルボニル；Ｂｕ ＯＨ＝１−ブチルアルコール、ＢＯＰ＝ベンゾトリアゾリル−オキシ−トリス［ ジメチルアミノコホスホニウムへキサフルオロホスフェート、ＤＣＣ＝　Ｎ、Ｎ ’−ジシクロへキシルカルボジイミド；ＤＮＦ　＝ジメチルホルムアミド；ＤＮ ＳＯ＝ジメチルスルホキシド；Ｄｎｐ＝　２．４−ジニトロフェニル、ＥＧＦ＝ 上皮成長因子；ＥｔＯ［１＝エチルアルコール、ＦＡＢ（またはＦＤ）−ＮＳ＝ 高速原子衝撃（またはフィールド脱着）質量分析、ＥＣＣ＝エチルクロロカーボ ネート；Ｅｔ、０＝ジエチルエーテル、ＧＩｐ＝　Ｌ−ピログルタミン酸、ｈ− １；ＲＰ（またはｐ−にＲＰ）　＝ヒト（またはブタ）ガストリン放出ペプチド ；ＨＯＢｔ＝１−ヒドロキシベンゾトリアゾール；１．Ｄ、＝内径；ＭｅＯＨ＝ メチルアルコール；１１．ｐ、＝融点；ｎ、ｄ、＝測定不能；Ｎ１ｅ＝　Ｌ−ノ ルロイシン、ＮＭＭ＝Ｎ−メチルモルフォリン；ＮＮＲ＝核磁気共鳴；０５ｕ＝ Ｎ−ヒドロキシスクシニミジル、ＰＥ＝石油エーテル４０°〜７０’　、ＲＰ− ■ＰＬＣ＝逆相高性能液体クロマトグラフィー；５ＣＬＣ＝肺の小細胞癌、ＴＦ ＾＝トリフルオロ酢酸、ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン；ＴＬＣ＝薄層クロマトグ ラフィー　；Ｔｏｓ＝　ｐ−）ルエンスルフオニル。

本発明は式Ｉ： ＲＡ−Ｂ−Ｃ−Ｔｒｐ−＾Ｉａ−Ｖａｌ−Ｘ−Ｙ−Ｔ−Ｗ　（１）〔式中、 Ｒは、４　（ＣＺＣｔ１２ＣＨｚ）Ｊ　Ｃ５Ｈ−Ｃ０−１３（ＣＩＣＨｚＣｆｌ ｚ）Ｊ−Ｃｕ２　Ｃｏ−１ＣｆｆｉＣＨｚＣＨＪＨＣＯ−１ＣＩＣｆｌ＝　ＣＨ −Ｃ０−１ＢｒＣＨ＝　Ｃｌ−Ｃ０−１ＣＨ，＝ＣＣｌＣ０−１ＣＨｔ＝ＣＢｒ ＣＯ−（ｅｉｓまたは７性体）、 ＣＲｆＣ−ＣＯ−１ＣＩＣＨ，ＣＩ（２Ｎ（ＮＯ）ＣＯ−１またはＣＩＣＨｊＣ Ｏ−ＣＨ（Ｒ，）ＮＨＣＯ（ＣＨ２ｈＣＯ−のグループから選択され、 Ａは、原子価結合、またはＧｌｙ−Ｌｅｕ−にＩＦ、＾ｒｇ　−Ｌｅｕ　−Ｇｌ ｙ、Ｇｌｎ−＾ｒ１１−　Ｌｅｕ　−Ｇｌｙ残基を示し、Ｂは、原子価結合また は＾ｓｎもしくはＴｈｒ残基を示し、Ｃは、ＧｌｎまたはＨｉｓ残基を示し、Ｘ は、Ｇｌｙまたはａｌａ残基を示し、Ｙは、原子価結合またはＨｉｓ（Ｒｚ）、 ｈｉｓ（Ｒ２）、Ｐｈｅ、　ｐｈｅ、　Ｓｅｒ、ｓｅｒ、＾１ａまたはａｌａ残 基を示し、Ｔは、原子価結合またはＬｅｕ、Ｉｅｕ、　Ｐｈｅまたはｐｂｅ残基 を示し、 Ｗは、式ＯＲ，ＮＨ，、ＮＨ（ＣＬ）、Ｃｌ１３、Ｎｏ（ＣＨｔ）２ｃｓＨｓ、 　Ｍｅｔ　Ｒ２、Ｌｅｕ−Ｒ，、ｌ１ｅ−Ｒ，または旧ｅ−Ｒ２を示し、Ｒ１は 、水素原子、炭素原子数１〜１１の直鎖状もしくは分校状の脂肪族鎖、ベンジル またはフェニル基を示し、Ｒ７は、水素原子またはＴｏｓ、　ＤｎｐまたはＢｚ ｌ基を示し、Ｒ１は、アミノ、ヒドロキシ、メトキシまたはヒドラジノ基を示す ］で示されるペプチドを提供する。

医薬として許容される酸を付加したこれらのペプチドの塩は本発明の範囲に包含 される。かかる酸付加塩は、無機及び有機の種々の酸、例えば硫酸、リン酸、塩 酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、スルファミン酸、クエン酸、乳酸、ピル ビン酸、シュウ酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、ケイ皮酸、酢酸、トリフル オロ酢酸、安息香酸、サリチル酸、グルコン酸、アスコルビン酸などの酸から誘 導される。

Ｒ１が示す好ましい脂肪族鎖はメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル 、ｎ−ブチル及びイソ−ブチル基である。

本発明のべ１千ドは従来の溶液法で合成され得る。この合成方法では、適当な保 護アミノ酸またはペプチドを順次縮合させる。得られるペプチドが所望のアミノ 酸残基の配列を有するように縮合を行なう、ペプチド化学で公知の方法で縮合さ れ得るアミノ酸及びペプチドは、酸らしくはアルカリ処理または水素化分解によ って除去され得る適当な保護基によってブロックされペプチド結合の形成には参 加しないアミノ基及びカルボキシル基を有する。

アミン基を保護するために使用され得る保護基の例は、ベンジルオキシカルボニ ル、ｔ−ブトキシカルボニル、トリチル、ホルミル、トリフルオロアセチル、０ −ニトロフェニルスルフェニル、４−メチルオキシベンジルオキシカルボニル５ ９−フルオレニルメトキシカルボニル、３．５−ジメトキシ−α−α′−ジメチ ルベンジルオキシカルボニルまたはメチルスルボニルエトキシカルボニルである 。

カルボキシル基を保護するために使用され得る保護基の例は、メチル、エチル、 ｔ−ブチル、ベンジル、ｐ−ニトロベンジルまたはフルオレニルメチル、アミド 、ヒドラジド、ｔ−ブトキシカフレボニルヒドラジドまたはベンジルオキシカル ボニルヒドラジドである。

ヒドロキシアミノ酸のヒドロキシ官能基及びヒスチジンのイミノ官能基は、（合 成中を通じてまたは少数段階中だけ）適当な保護基によって保護されてもよく、 または保護されなくてもよい。ヒドロキシ官能基を保護するために使用され得る 保護基の例は、ｔ−ブチル、ベンジル、アセチルである。イミダゾールイミノ官 能基を保護するために使用され得る保護基の例は、２，４−ジニトロフェニル、 トシル、ベンジルである。脱保護反応はペプチド化学で公知の方法で行なう。

ペプチド結合を形成するための１つの分子のアミノ基と別の分子のカルボキシル 基との縮合は、混合無水物、アジドまたは活性エステルのような活性アシル誘導 体を用いて行なわれてもよく、あるいは、ジシクロへキシルカルボジイミドのよ うな縮合剤を単独で存在させるか才たはＮ−ヒドロキシスクシンイミドもしくは ｌ−ヒドロキシベンゾトリアゾールのようなラセミ化阻止剤と共に存在させるか または４−ジメチルアミノピリジンのような活性化剤と共に存在させ、遊離アミ ノ基と遊離カルボキシル基とを直接縮合させてもよい、ジメチルホルムアミド、 ジメチルアセトアミド、ピリジン、アセトニトリル、テトラヒドロフランまたは Ｎ−メチル−２−ピロリドンのごとき溶媒中で縮合させてもよい。

反応温度は一り０℃〜室温の範囲でよい０反応時間は通常１〜１２０時間である 。

合成スキーム、保護基及び縮合剤はラセミ化が生じないように選択される。

ｒ１益１ ボンベシンは、平滑筋系を収縮させる、脳内に存在して動物の行動に変化を与え る、細胞分裂を誘起する（ｍｉｔｏｇｅ−ｎｅｓｉｓ）などの作用を示すが、本 発明のペプチドは、ボンベシンによって誘発されるこれらのｒｉｎｖｉｔｒｏ」 及びｒｉｎｖｉｖｏ」作用に対して有力な拮抗作用を有する。

ボンベシン（ＢＢＳ）は、カエルの皮膚から最初に単離された式Ｇ１ｐ−Ｇ１ｎ −＾ｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−＾５ｎ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｃｌｙ −Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＮＨｚのテトラデカペプチドである。その生物活性 は、分子のＣ末端部に存在する。ＢＢＳのノナペプチド（６〜１４）は層化合物 と同様に活性である。ヒトに存在するボンベシンの対応物質は、ガストリン放出 ペプチド（ｈ−にＲＰ）として知られており２７個のアミノ酸から成る。ボンベ シン及びボンベシン様ペプチドは多くの生物活性を有する（Ｊ、ｌ、ｌ１ｌａｌ ｓｈ（１９８３）　’Ｂｒａｉｎ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、　Ｄ、　Ｔ、　Ｋｒｉ ｅｇｅｒ、　Ｍ、　Ｊ、　Ｂｒｏｗｎ−ｓｔｅｉｎ　＆　Ｊ、　Ｂ、　Ｈａｒｔ ｉｎ（ｅｄｓ）、　Ｎｉ１ｅｙ　Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｏｃｅ　Ｐｕｂｌ、。

ｐｐ、９４１〜９６０）　、生物活性の例として、ヒトの肺小細胞筋（ＳＣＬＣ ）に対する自己分泌（ａｕｔｏｃｒｉｎｅ）増殖促進作用（Ｆ。

Ｃｕｔｔｉｔｔａ他　（１９８５）　Ｃａｎｃｅｒ　５ｕｒｖｅｙ、　４．７０ ７〜７２フ）、ヒト前立腺癌に対する自己分泌及び／または傍分泌（ｐａｒａｃ ｒｉｎｅ）増殖刺激作用（Ｍ、　Ｂｏｌｏｇｎａ他、　Ｃａｎｃｅｒ、印刷中） 、またはＥＧＦレセプターの変調作用（１，Ｚａｅｈａｒｙ　＆　Ｅ、　Ｒｏｚ ｅｎｇｕｒｔ（１９８５）Ｃａｎｃｅｒ　５ｕｒｖｅｙｓ、　４．７２９−７６ ５）がある。

ボンベシン拮抗薬は、（１つまたは複数の）レセプターに対して天然リガンドと 競合することによって、異常細胞の増殖を招く多段事象の開始を阻害する。

いくつかの研究グループがこの方面を異なる角度から追究した。アミノ酸の欠失 、反転または置換を特徴とするボンベシンのＣ末端の一連のノナ−及びデカペプ チドは、本願の出願人による先行特許出願（欧州特許出願第８９１０２２８３゜ ２号）の対象となっている。しかしながらこれらのペプチドはその他のＢＢＳ拮 抗薬と同様に、ＤＢＳレセプターに対する親和性が通常は顕著でない。

アルキル化部分（ａｌｋｙｌａｔｉｎｇ　ｍｏｉｅｔｙ）を有する本発明の化合 物は、ボンベシンと同時に投与された場合にもボンベシン投与の２４時間前に投 与された場合にもレセプター拮抗薬として作用する。

先１］ｕ１級１− ボンベシンレセプターに対する本発明化合物の結合親和性を５ｗ１ｓｓマウス３ Ｔ３線維芽細胞で測定した（１．　Ｚａｅｈａｒｙ　＆Ｅ、　Ｒｏｚｅｎｇｕｒ ｔ　（１９８５）　Ｐｒｏｅ、　Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、眩 。

７６１６−７６２０）　（表１）。

無血清培地に維持した静止期の集密５ｗ１ｓｓ　３Ｔ３細胞中で細胞分裂誘起に 対する効果を測定した（＾、Ｎ、Ｃｏｒｐｓ他（１９８５）　Ｂｉｏｃｈｅｍ　 Ｊ、　２３１．７８１〜７８５）、第１組の実験では、類似体を単独で与えるか またはボンベシンと共に与えた。

第２組の実験では、細胞をアルキル化ペプチドで前処理し、洗浄し、３７℃に２ ４時間靜１し、次いでボンベシンを投与した。いずれの場合にも、ＤＮＡ合成を ［Ｈ３］チミジン取り込みとして測定した（表２）。

また、ボンベシン及びその類似体の細胞分裂誘起に対する効果を、ボンベシンレ セプター複合体に結合した１１５ＫＤタンパク質（ｐＨ５）をホスホリル化する タンパク質チロシンキナーゼの活性として測定した（Ｄ、　Ｃ１ｒｉｌｌｏ他（ １９８６）　Ｎｏｉ。

Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、　６．４６４１〜４６４９）（表３）。

更に、０．１〜５０μＨの範囲のこれらのペプチドに接触させると、５ＣＬＣ細 胞系（例えばＮＣ１Ｈ３４５、ＮＣｌ−８５９２、ＭＣｌ−［１２Ｂ）及び前立 腺癌細胞系（例えばＤＵ１４５及びＰＣ３）の増殖がかなり鈍化した。

薬用量ＩＢ／ｋｙ〜１００ｉ＋ｙ／ｋｙでこれらのペプチドをヌードマウスに非 経口投与すると、上記のごとく移植されたヒト５ＣＬＣ及び前立腺癌細胞系の増 殖がかなり鈍化した。

宍」− マウス５ｗ１ｓｓ　３Ｔ３線維芽細胞に対するボンベシンアルキル化類似体の結 合親和性 化合物　１０．。（ｎＭ） １　１３６３±２６６ ■　４３８±１１１ １　１８１５±３３０ ■０．７±０．２ Ｖ　１３３６±１９９ ■６４８±２９０ 参照ペプチド： ＤＢＳ　１２．６±３．８ スパンチド（Ｓｐａｎｔｉｄｅ）　１１１０Ｇ［ｐｒｏ”］スパンチド　１４０ ００ ［Ｌｅｕ”φ（Ｃｕｔ−ＮＨ）Ｌｅｕ”　］ＢＢＳ　２１４±３０紅 マウス５ｗ１ｓｓ　３Ｔ３線維芽細胞内の［Ｈ３］チミジン取込み化合物　基底 値に対する倍率　２５μＭのＢＢＳの存在下の阻害％Ａ　Ｂ ５μＭ　５０ｎＮ　Ｏ，５μ８５μＭ　Ｏ，５／１Ｍ　５μＭ　Ｏ，５μＭ　５ μＭＩ　Ｎ、Ｄ、Ｎ、Ｄ、０．６　０．６　９±６１２±３０１［Ｎ、Ｄ、Ｎ、 Ｄ、１．０　１．０　０　５０±１００１［［Ｎ、Ｄ、　Ｎ、Ｄ、　２．３　３ ．４　０　０　５１±１１　５３＋８１％’　Ｎ、Ｄ、Ｎ、Ｄ、３．２　２．２ 　１３±８３２±９０２０±１２Ｖ　Ｎ、Ｄ、１．８　１．８　２．５　０　０ 　０　０Ｗ　Ｎ、Ｄ、１．０　１．０　１．０　０　０　３９±１４２９±１０ 参照ペプチド： ＢＢＳ　３．０±１ ［Ｌｅｕ”φ（ＣＨｘ−ＮＯ）ＬｅｕＩ４］ＢＢＳ　１　１　２９ｔ１０５６ｔ ４　０　０Ａ＝類似体をＤＢＳと同時に投与。

Ｂ＝細胞を類似体で前処理し、洗浄し、３７℃に２４時間維持してからＤＢＳを 投与人」し ボンベシンレセプターに会合したｐ１１５タンパク質のホスホ化合物　最小活性 用量（ｎＨ＞ １　＞　４０００ ｎ　＞　１０００ Ｉｌｌ　５００ ■５００ Ｖ　＞　２０００ Ｖｌ　＞１０００ 参照ペプチド： ＢＢＳ　３ スバンチド　＞　１００００ ［ｐｒｏ２］スバンチド　＞　１００００［Ｌｅｕ１３φ（ＣＨｚ−ＮＨ）Ｌｅ ｕＩ４１８ＢＳ　＞　２００従って式１のペプチドは、ＧＲＰ類のペプチドによ って直接にまたは別の成長因子の共同作用によってその増殖及び進行が変調され るヒト新生物の治療に使用できる。

更に、これらのアルキル化類似体は、これらの疾患に関連し且つＣＲＰ様ペジペ プチド剰分泌に起因する臨床症状の処置に使用できる。

本発明化合物は、常用の経路で例えば非経口的に投与でき、静注もしくは注入に よって投与されてもよく、または筋肉内投与、皮下投与、洞内投与及び鼻孔内投 与されてもよい。

薬用量は、患者の年令、体重、症状及び投与経路に基づいて決定される。

「マウス」の’　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ」及びｒ　ｉｎ　ｖｉｖｏ」データによれば 、ヒト治療の薬用量は、１日量１ｎｇ／ｋｙ　〜１００ｚｙ／ｋｇの範囲であり 、これを１〜６回で投与する。

本発明はまた、医薬として許容される１種以上の賦形剤と共に有効成分として式 （１）の化合物を含む医薬組成物を提供する。

本発明の医薬組成物は通常、従来の方法で調製され医薬として適当な形態で投与 される。

例えば、静注または注入用の溶液剤は、担体として滅菌水を含んでもよく、また は好ましくは滅菌した等張の生理的食塩水溶液の形態でもよい、筋肉的注射用の 懸濁液剤または溶液剤は、活性化合物と共に、医薬として許容される担体、例え ば、滅菌水、オリーブ油、オレイン酸エチル、グリコール類（例えばプロピレン グリコール）を含有し、また所望の場合には適量の塩酸リドカインを含む。

本発明は更に、神経内分泌新生物（例えば肺の小細胞癌及び前立腺癌）またはこ れらの疾患に関連した臨床症状を治療するために、妾治療患者に本発明組成物を 投与する治療方法を提供する。

化１（ 寡夫 （ａ）ＴＩ、Ｃ−ニジリカゲル８０　Ｆ２％４をプレコートした層厚０．２５ｍ ｍ、長さ２０ｃｍのプレート（Ｎｅｒｅｋ）で以下の溶出液を用いてＴＬＣを実 施した。

系Ａ：ｎ−ブタノール／酢酸／水＝　８００／１５０／１５０（容量比）系Ｂ： クロロホルム／メタノール７３０％Ｎ１１．０）１＝　５００／３４８／１５４ （容量比） 系Ｃ：クロロホルム／メタノール＝　９０７１０（容量比）系Ｄ＝ニジクロロメ タン／ジエチルエーテル　９０／１０（容量比）系Ｅ；アセトニトリル／水／ギ 酸＝　８０／２０／１０゜（ｂ）分」【月」、Ｐ−ｆｌＰＬｃ：Ｉ（ｅｗｌｅｔ ｔ　Ｐａｃｋａｒｄ　Ｎｏｄ、　１０８４装置を用い、粒径５μｍ、２５０Ｘ４ ｍｍ　ＬＤ、のＬｉｅｈｒｏｓｏｒｂ　Ｈｉｂａｒ　ＲＰ−１８カラム（Ｍｅｒ ｃｋ）で分析用ＲＰ−ＨＰＬＣを実施した。以下の溶出液を使用した。

Ａ−にＨ２ＰＯ，２０醜舛、　ｐＨ３，５／アセトニトリル９／１（容量比）Ｂ 　＝　ＫＨｚＰＯ，２０ｅｉＭ、　ｐＨ３，５／アセトニトリル３／７（容量比 ）。

溶出プログラムは、８６０％〜９０％の直線勾配で２０分間（系Ａ）または８３ ０％〜７０％の直線勾配で１５分間（系Ｂ）とし、次いで勾配なしで（ｉｓｏｃ ｒａｔｉｃａｌｌｙ）１５分間とし、流速１１１７分とした。

ペプチドをその保持時間（ＲＴ＞によって特性決定する。

（ｃ）分１Ｅ囲ＲＰ−ＦＩＰＬＣ：Ｄｅｌｔａ　Ｐｒｅｐ　３０００装置（Ｗａ ｔｅｒｓ）を用い。

粒径１０μ、３００ｘ　１９ｍｍ　１．０．のＤｅｌｔａｐａｋカラム（Ｗａｔ ｅｒｓ）で分離用ＲＰ−ＨＰＬＣを実施した。以下の溶出液を使用した。

Ａ＝氷水中０．０５％ＴＦ＾ Ｂ＝ニアセトニトリル水７／３（容量比）中の０．０５％ＴＦ＾流速＝　２４ｘ ｌ１分；検出波長＝　２２０ａｍ。

溶出方法を実施例で示す。

どの場合にも、分析用ＲＰ−ＨＰＬＣで分画をチェックし、純度９８％以上の分 画をプールした。アセト翠トリルの除去後。

溶液を凍結乾燥した。

（ｄ）７：／　：酸加水分解物をアミノ酸分析した（８Ｎの）ＩＣ１＋０．１％ フェノール中で１１０℃で２２時間、または３Ｎのメルカプトエタンスルホン酸 中で１００℃で１６時間、いずれもＮ２下）、天然アミノ酸残基だけを測定した 。　Ｔｒｐだけは、通常の加水分解条件下に部分分解するのでメルカプトエタン スルホン酸による加水分解物中で測定した。

え１此Ｌ ４−　ＣＩＣＩＩ　Ｃ）Ｉ　ＮＣＦＩ　Ｃｏ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｔｒ−＾Ｉｔ− Ｖａｌ−ＣＩ　−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ」１フ℃１つ−の調製 ２５．２ｚｙ（０，０９６ａｓｏｊりの［ｐ−ビス（２−クロロエチル）アミン ］安息香酸を５ｙｌの蒸留ＤＨＦに溶解し、次いで６０ｉ＋ｙ（０，０６４ｍｍ ｏ／）のトＴｈｒ−［；Ｉｎ−Ｔｒｐ−＾ｌａ−Ｖａｔ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｎｅ ｔ−ＭＨｚ　、ＨＣｌ（欧州特許出願第８９１０２２８３．２号）を添加した。

溶液を５℃に冷却し、０．０１７６ｍ１の８８８（０，１６ｍｍｏｆ）及び０． ０４２５ｇのＨＯＰ（０，０９１５＋ｍｏ１）を添加した０反応混合物を室温で １晩攪拌し、次いで５℃の１０％クエン酸溶液１００ｘ１に滴下した。混合物を １０℃以下の温度で１時間攪拌し、次いで濾過し、中性になるまで水洗した。粗 生成物が６６．１ｍｇ（収率９０％）得られた。生成物を分離用ＲＰ−）ＩＰＬ Ｃで精製し、溶出液Ａ中に６０％〜９０％の溶出液Ｂの勾配で３０分間処理した （流速３５Ｍ１７分）、生成物ｒが３３ｘｙ（収率５０％）得られた。ＲｆＡ　 Ｏ，８１、ＲＴＡ８．６６；ＦＡＢ−ＮＳ：ｍ／ｚ１１４７（Ｍｌ”）　；＾＾ 比：Ｔｈｒ　Ｏ，９８（１）、　Ｇｌｕ　１．＾Ｉａ　Ｏ，９７（１）、　Ｖａ ｌＯ，９５（１）、　にＩＦ　１．０４（１）、　Ｌｅｕ　１．０２（１）、　 Ｎｅｔ　０．９０（１）、　（Ｔｒｐｎ、ｄ、）。

え１九Ｌ ４−　ＣＩＣＣＩ　ＮＣＨＣｏ−Ｔｈｒ−Ｇｉｎ−Ｔｒ−＾Ｉｔ−Ｖａｌ−にｌ 　−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−ＮｈｌｌＬｊ−の調製 （本出願人の欧州特許出願第８９１０２２８３．２号に記載のＨ−Ｔｈｒ−Ｇｌ ｎ−Ｔｒｐ−＾Ｉａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＮＨｔ、ＨＣｆの調製 方法に従って調製した）０．２ｙ（０，２１６ｍ５ｉｏｌ）のＨ−Ｔｈｒ−Ｇｌ ｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−ＶｉｌＧｌｙ−Ｌｅｕ−旧ｅ−ＭＨ２，ＨＣｌを、１７１ １の蒸留り肝中の０．０８５ｇ（０，３２４ｍｍｏｆ）の［ｐ−ビス（２−クロ ロエチル）アミン］安息香酸、０．１４３ｇ（０，３２４ｍｍｏ１）のＢＯＰ及 び０．０５９ｍ１（０，５３７ａｓｏｊ）のＮＭＭと、実施例１と同様に反応さ せた。粗生成物を分離用ＲＰ−ＨＰＬＣで精製し、溶出液Ａ中の４５％〜９０％ の溶出液Ｂの勾配で２０分間処理した。生成物■が０．１２２ｙ（収率５０％） 得られた。　ＲｆＡＯ，７５；ＲＴＡ　１０．３９；ＦＡＢ−ＮＳ：ｍ／ｚ　１ １２９（ＭＨ”）：＾＾比：Ｔｈｒ　Ｏ，９フ（１）。

Ｇｌｕ　１．　＾ｌａ　Ｏ，９４（１）、Ｖａｌ　Ｏ，９６（１）、にＩｙ　（ １）、Ｌｅｕ　０．９２（１）。

Ｎｌｅ　Ｏ，８７（１）、（Ｔｒｐ　ｎ、ｄ、）。

火」１脛」− ４−ＣＩＣＨＣＨＮＣＨＣｏ−Ｔｈｒ−にＩｎ−Ｔｒ−＾Ｉａ−Ｖａｌ−Ｇｌ　 −Ｈｌｓ　Ｄｎ−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＮＯの調製 ６３＋＋＋ｙ（０，２４ｇ＋＋ｗｏｌ）の［ｐ−ビス（２−クロロエチル）アミ ン］安息香酸と２００ｉｙ（０，１６ｍ＠ｏｌ）のＨＣｌ、Ｈ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ −Ｔｒｐ−＾１ｍ−Ｖａｔ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ（Ｄｎｐ）−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−８１ ２（（本出願人の欧州特許出願第８９−１０２２８３．２号に記載の）Ｂｏａ− Ｔｈｒ−ＣＩｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＯＲと（Ｆ、＾ｎｇｅｌｕ ｅｅｉ　＆　Ｒ，ｄｅ　Ｃａｓｔｉｇｌｉｏｎｅ（１９７５）　Ｅｘｐｅｒｉｅ ｎｔｉａ。

５０７〜５０８に記載の）ＩＩｃＬＩＩ−旧５（Ｄｎｐ）−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−Ｍ Ｈ２とから同じ欧州特許出願に記載の類似化合物の調製手順で調製〕とを実施例 １と同様に処理すると、粗化合物■が１６１ｕ（収率７０％）得られた。溶出液 Ａ中の溶出液Ｂの６０％〜９０％勾配で２０分溶出させる分離用ＲＰ−ＨＰＬＣ で生成物を精製した。生成物■が６０ｍｇ（収率２６％）得られた。　ＲｆＡｏ 、７０．ＲＴＡ１４．４５゜ＲＴｓ　２４．８２；ＦＡＤ−ＨＳ：ｅ＋／ｚ　１ ４５１（ＮＨ”）；＾＾比：Ｔｈｒ　１．０５（１）、　Ｇｌｕｌ、Ｃｌｙ　１ ．０３（１）、八Ｉｔ　０．９９（１）、　Ｖａｌ　Ｏ，９５（１）、　Ｎｅｔ 　０．９０（１）。

Ｌｓｕ　Ｏ，９フ（１）、（Ｔｒｐ　＆　Ｈｉｓ　ｎ、ｄ、）。

え１」先 ４−　ＣＩＣＨＣＩ　ＮＣｓ１１．ｎＣ０−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｔｒ−＾１ａ−Ｖ ａｌ−Ｇｌ　−Ｈｌｓ−Ｌｅｕ±蛙傷１１］の調製 ６５ｚｙ（０，０５ｇｍｏ１）の化合物（Ｉｆｆ）を３．ｚｌの０．０２Ｍリン 酸バッファｐｕｓに懸濁させ、２−メルカプトエタノールで処理した。得られた 透明溶液を２０分間反応させ、攪拌しながらＢＯＯｚｌのＥｔ、Ｏに注いだ、沈 殿物を濾過し、ＥｔｚＯでよく洗い、次いでＢｕ−ＯＲ及び水に分配した。有機 相を少ない量に濃縮し、＾ｃＯＥｔ／Ｅｔ、０で希釈してペプチドを沈殿させた 。粗化合物（ＩＶ）が５０ｚｆ（収率７１％）得られた。溶出液Ａ中の溶出液Ｂ の４０％〜９０％の勾配で溶出させる分離用ＲＰ−ＨＰＬＣで生成物を精製した 。生成物■が２５ｘｙ（収率３６％）得られた。　ＲｆＡ０．３９；ＲＴＡ９． ２６；ＲＴＢ　１９．４１；ＦＡＢ−ＮＳ：ｍ／ｚ　１２８４（ＭＦＩ◆）；＾ ＾比：Ｔｈｒ　１．０５（１）。

Ｇｌｎ　１．　Ｇｌｙ　１．０３（１）、＾Ｉａ　Ｏ，９９（１）、　Ｖａｌ　 Ｏ，９５（１）、　Ｎｅｔｏ、８８（１）、　Ｈｉｓ　Ｏ，９１（１）、　（Ｔ ｒｐ　ｎ、ｄ、）。

え１九Σ ＣＩＣＨＣＩ　Ｎ　ＮＯＣｏ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｔｒ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌ　 −Ｌｅｕ−旧ｅ−８１αユの調製 ステップＩ ＣＩＣＢ　ＣＯＮＨＣＯ−ＯＳｕ　Ｖａ５．７５ｇ（０，０５論ｏｆ）のＮ−ヒ ドロキシスクシンイミドを１２５ｍｆの＾ｃＯＥｔに溶解し、０℃で順次滴下し た１２．９２ｚｌ（０，０７５ｍ５＋ｏＺ）のＮ−エチル−ジイソプロピルアミ ン及び５．１２ｉ１’（０，０６０＋ｓｏｊ’）の２−クロロエチルイソシアネ ートと反応させた８反応混合物を激しく攪拌しながら４８時間維持［２、次いで 溶媒を蒸発させ、残渣を＾ｅＯＥｔ及び水に分配した。有機相を８１１２ＳＯ， で脱水し、蒸発させて少ない容量にした。低温で静置すると生成物が晶出した。

化合物（Ｖｓ）が７．６８ｇ（収率）０％）得られた。　ｍ、ｐ、１０４〜１０ ７℃；Ｒｆｃ　Ｏ，４３；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ　２２０（Ｍ’ｉ：’）Ｉ−Ｎ ＭＲ（２００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄｓ）　δ　（ｐｐｍ）：８．５７（ｔ、１８ ．　ＣＨ２１ｕＬＣＯ）、３．６４（ｔ、　２Ｈ，ＣＩＣＨ，ＣＨ２）、３．３ ９（ｍ、　２Ｈ，Ｃ１，ＣＨ，ＮＨ）、２．７５（ｓ。

４１１、スクシンイミド）；元素分析（Ｃ，Ｈ，Ｎ、Ｏ，ＣＩ）：Ｃ３８，１０ （３８゜１１）、　Ｈ４，１０（４，１１）、　８１２．６７（１２，７０＞、 　ＣＩ　１６．００（１６，０７＞。

ｑ−匹り堕遂併り似し邦工σ」− １，１００ｇ（０，Ｏ０５ｍｏＮ）（’）化合物（Ｖｂ）を１２ｘｌノＣＨｚＣ １２ニ溶解し、０℃で０．８００ｉ１（０，０１０ｍｏｆ＞のピリジン及びＣＩ ｌ、ＣＺ２中に１４．０ｚＺ（０，０２０ｍｏｔ’）の１．４ＨのＮ０ＣＩと反 応させた０反応混合物を激しく攪拌しながら５時間維持し、冷水で洗浄し、Ｎａ 、ＳＯ，で脱水し、少ない容量に蒸発させた。結晶化は室温で開始し低温で完了 した。化合物（Ｖｂ）が０．８０ｙ（６３％　）得られり＊　”　−ｐ。

１０１〜１０３℃；ｕｒｏｏ、８７；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ　２４９（Ｍ”−） ；’Ｉ（−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｃｌ、）　δ（ｐｐｍ）：４．１ ３（ｔ、２Ｈ，ＣＩＣμｍ２ＣＢ、）、　３．８９（ｔ。

２！Ｉ、　Ｃ１１２ＣＨ２８ＮＯ）、２．８９（ｓ、　４１（、Ｘクシンイミド ）；元素分析（Ｃ，ｌ（、Ｎ、０．ＣＩ）：Ｃ３３，７０（３３，６８＞、　Ｉ Ｉ　３．２５（３，２３）、　８１８．８２（１６，８３）、ＣＩ　１４．８０ （１４，２０）。

（ムリＩ　Ｃ１（Ｎ（Ｎ（υＣＯ二Ｔｈｒ−Ｇ↓に１」−＾Ｉｔ−Ｖａｉ（：Ｉ 　−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−ＮＯ０，１８５ｇ（０，２ｍｍｏｆ＞の）ｌｃｅ、Ｈ−Ｔ ｈｒ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−ＭＨｚ（実 施例２参照）を０．５ｘｌのへキサメチルホスホリルアミドとＯ，’５ｘｌのＮ −メチルピロリドンとの混合物に懸濁させ、室温で０．０２８ｚｉ’（０，２ｍ ｍｏＮ）のトリエチルアミン及び０．１００２（０，４ｍｍｏｌ）の化合物（ｖ ｂ）と厘次反応させた。２時間攪拌後に反応混合物を水で希釈した。粗化合物（ Ｖ）が０．１５０ｇ（収率７３％）得られた。　５０ｚｙのサンプルを、溶出液 Ｂ中に溶出液ＡＩＯ％〜９０％の勾配で３０分間溶出させる分離用ＲＰ−ＨＰＬ Ｃで精製した。　Ｒｆａ　Ｏ，５９；ＲＴＢ　１６．１０；ＦＡＢ−ＭＳ：ａ／ ｚ　１０１０２０（”）；’Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄｉ）　δ 　（ｐｐｍ）　ｉ、ａ、：３．８０（ｔ。

２１（、ＣＩＣ二［１ｉＣＬ）；＾＾比：Ｔｈｒ　Ｏ，９１（１）、Ｇｌｕ　１ ．０７（１）、八ｌａ１．０３（１）、Ｖａｔ　１．　Ｇｌｙ　１．０Ｈ１）、 　Ｌｅｕ　１．０１（１）、　Ｎｌｅ　０ＪＯ（１）。

（Ｔｒｐ　ｎ、ｄ、）。

え１λ支 促惧ｚ　ｓｃＨＣ０ＣＨＣＩ　Ｍｌ（ＣＯＣ１（Ｃｏ−Ｔｈｒ−に１−Ｔｒ−＾ １ａ−ＶａｔＢｏａ−Ｎｌｅ−１ｊｌ＝Ｎ２ｖｉ　ａ４０ｗｌの無水Ｔ肝中の４ ．６０ｇ（０，０２ｓｏ１）のＢｏａ−Ｎｌｅ−ＯＨを一１２℃で２．２０ｍ１ ’（０，０２＋＊ｏＺ＞のＮＭＭ及び２．６２ｍ１（０，０２ｓｏ１）のイソブ チルクロロカーボネートと反応させた。１分後、５０１１のＥｔ２０を添加し、 溶液を一３５℃に冷却して反応を停止させた。塩をｒ別し、Ｖ液を一７０℃に冷 却した。

別の容器で、２０ｚｌの５０％Ｅｔ０１（に溶解した３　、９６９　（０，０６ ｓｏｊりのにＯＨを、１００ｉ１のＥｔ２０と１０１１１のエチレングリコール モノメチルエーテルとにいれた６、４３ｆＩ（０，０３難０１）のＮ−メチフレ ーＮ−ニトロン−１１−トルエンスルホンアミドの溶液に０℃で１０分間で滴下 した。このように形成されたジアゾメタンを、予め形成して冷却した混合無水物 をいれた反応容器に直接蒸留させた９反応混合物を０℃で２０時間攪拌後、減圧 下に溶媒を除去し、残渣を＾ｅＯＥｔ及び０．５ＭのＫＨＣＯ，水溶液に分配し た。

有機相をブラインで中性まで洗浄し、ＮａｚＳＯ＜で脱水し、真空下に蒸発させ 、得られた油状生成物を低温に静置して晶出させると、化合物（■ａ）が２．９ ｇ（収率５）％）得られた。　ｍ、ｐ。

８３〜８５℃、Ｒｆ、０．５１；’Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ、 ）　δ　（ｐｐｍ）ｉ、ａ。

；６．００（ｓ、　ＩＨ，ＣＨ＝Ｎ２）：ＦＤ−ＭＳ；ＩＩ／Ｚ　２５５（１４ ”ｌ：元素分析（Ｃ１ｚ１（、、Ｎ、０３）：Ｃ５６，５０（５６，４５）、１ （８，３０（８，２９）、８１６．４７（１６，４８）。

ステップ２ ＨＣＬ！、Ｈ−Ｎｌｅ−ＣＨｚＣｌｂ）２．４ｇ（０，０１ｓｏ１）のＢｏｃ− 旧ｅ−ＣＩ；Ｎｚ（Ｖｌ　ａ）を、４．４ＮのＩ（Ｃ１を含むジオキサン２０１ １に溶解した。室温で５分間維持後、生成物をＥｔ２０で沈殿させた。化合物（ Ｖｆ　ｂ）が１．５６９（収率７８％）得られた。　ｍ、ｐ、１５３〜１５４℃ ；Ｒｆ、　０．６３；’トＮＮＲ（２００ＭＨｚ、　ＤＭＳＯ−ｄＳ）　δ　（ ｐｐｓ＋＞ｉ、ａ、；４．８４．　４．７４（２ｄ、２８．　ＣＨｚ−Ｃｉ’） ；ＦＤ−ＭＳ；ｍ／ｚ１９９（Ｎ”・）；元素分析（Ｃ，Ｈ，、Ｎ０ｔＪ２）： Ｃ４２，０２（４２，０１＞、　８７．５４（７，５５＞、　８６．９８（６， ９９）、ＣＩ　３５．４２（３５，４３）。

ＨＯＯＣ−ＣＨＣ［１ｚ−ＣＯ−Ｎｌｅ−ＣＨｚＣ／　■ｅ０．６０ｇ（３ｖ＋ ＋ｏ１）のｔｌｃｊ’、Ｈ−Ｎｌｅ−ＣＨ２Ｃ４’（■ｂ）と０．３３ｚｊ！（ ３＋ｕ＋ｏｆりのＮＭＭとを１０１１のＤＭＦに溶解し、１０分間で滴下した５ ｘｅ）ＤＭＦ中のＱ、３０ｙ（３ｍｍｏｌ）の無水コハク酸と０℃で反応させた 。３０分で反応混合物を室温に到達させ、攪拌下に更に４時間維持した。減圧下 に溶媒を蒸発させ、残渣を＾ｅＯＥｔに入れ、不溶物を濾過後に、０．０２Ｈの ｌＩＣ１、ブラインで洗浄し、最後にＮａ２５Ｏ＝で脱水した。溶媒を蒸発させ 、Ｅｔ、０／ＰＥで粉砕すると、化合物（Ｗ　ｃ）が０．３５ｇ（収率４４％） 得られた０ｍ、ｐ、１１４〜１１６℃；Ｒｆｓ　Ｏ，３３；’Ｈ−ＮＮＲ（２０ ０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄａ）　δ　（ｐｐｍ）ｉ、ａ。

；４，５７（ｓ、　２８．　Ｃ１，−Ｃ１）；元素分析（Ｃ，、ｌＩ、、ＮＯ， ＣＺ）：Ｃ４９，７４（５０，１０）、　Ｈ５，３４（５，３１）、　ＣＩ　１ ３．１６（１３，４４）。

ＣＨ３Ｃｌ　３ＣＩＩ　Ｃ０ＣＨＣＩ　ＮＨＣＯＣＨ２ｚｃｏ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ −Ｔｒ−＾Ｉａ−Ｖａｌ−Ｇｌ　−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＮＨｚ　■１００ｉ＋ｙ（ ０，１０６＋ｓｍｏ１）のｆｌｃｌ、Ｈ−Ｔｈｒ−Ｃ：Ｉｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ− Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＮＨｚ（欧州特許出願第８９１０２２８３． ２号）と０．００６ｚ１（０，１０６ｍｍｏ１）のＮＭＭを含む２ｍｌのＤＭＦ を０℃で、３１ｚｆ（０，１２０１ｏ１）のｌ１００Ｃ−（ＣＨ２）２ＣＯ−旧 ｅ−ＣＬＣ１（ＶＴ　ｃ）、１９１１ｇ（０，１４３ｍｍｏ１）のＨＯＯＴ及び ２７Ｂ（０，１３３ｍｍｏｌ）のＤＣＣと反応させた０反応混合物を室温で４日 間攪拌した。減圧下に溶媒を蒸発させ、残渣を温いイソプロピルアルコールで粉 砕し、不溶物をｒ過によって単離した。化合物（Ｖｌ）が５０ｇｇ（収率４０％ ）得られた。

ＲｆＡＯ，４２；ＲＴＢ　１５．１０；ＦＡＢ−ＭＳ：＋ｏ／ｚ　１１４９（Ｍ ｌ”）；＾＾比：Ｔｈｒ０．９５（１）、にＩＬＬ　１．＾Ｉａ　１．０８（１ ）、　Ｖａｔ　Ｏ，９７（１）、　Ｇｌｙ　１．０１［１）。

Ｌｅｕ　１．００（１）、　Ｎｅｔｏ、９３（１）、　（Ｔｒｐ　ｎ、ｄ、）。

国際調査報告 一一一廟−＾−−−ＩｌｌＩＩ＋１・ＰＣＴ／ＥＰ　９０１００９２２　２Ｓ＾ 　３７７６０

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. １．式Ｉ： ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）〔式中、 Ｒは、４−（ＣｌＣＨ２ＣＨ２）２Ｎ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯ−、３−（ＣｌＣＨ２Ｃ Ｈ２）２Ｎ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯ−、ＣｌＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＯ−、ＣｌＣＨ＝ＣＨ −ＣＯ−、ＢｒＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−、ＣＨ２＝ＣＣｌＣＯ−、ＣＨ２＝ＣＢｒＣ Ｏ−（ｃｉｓまたはｔｒａｎｓ異性体）、 ▲数式、化学式、表等があります▼ ＨＣ≡Ｃ−ＣＯ−、ＣｌＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＮＯ）ＣＯ−、または、ＣｌＣ Ｈ２ＣＯ−ＣＨ（Ｒ１）ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯ−のグループから選択された 基を示し、 Ａは、原子価結合、またはＧｌｙ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、 Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ残基を示し、Ｂは、原子価結合またはＡｓｎも しくはＴｈｒ残基を示し、Ｃは、ＧｌｎまたはＨｉｓ残基を示し、Ｘは、Ｇｌｙ またはａｌａ残基を示し、Ｙは、原子価結合またはＨｉｓ（Ｒ２）、ｈｉｓ（Ｒ ２）、Ｐｈｅ、ｐｈｅ、Ｓｅｒ、ｓｅｒ、Ａｌａもしくはａｌａ残基を示し、Ｔ は、原子価結合またはＬｅｕ、ｌｅｕ、Ｐｈｅもしくはｐｈｅ残基を示し、 Ｗは、式ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３、ＮＨ（ＣＨ２）２Ｃ６Ｈ５、 Ｍｅｔ−Ｒ３、Ｌｅｕ−Ｒ３、Ｉｌｅ−Ｒ３またはＮｌｅ−Ｒ３を示し、Ｒ１は 、水素原子、炭素原子数１〜１１の直鎖状もしくは分枝状の脂肪族鎖、ベンジル またはフェニル基を示し、Ｒ２は、水素原子またはＴｏｓ、ＤｎｐもしくはＢｚ ｌ基を示し、Ｒ３は、アミノ、ヒドロキシ、メトキシまたはヒドラジノ基を示す ］で示されるペプチド及び医薬として許容されるその塩。
2. ２．請求項１に記載のペプチドまたは医薬として許容されるその塩を医薬として 許容される賦形剤または担体と共に含む医薬組成物。
3. ３．アミノ酸及び／またはアミノ酸誘導体を所望順に、及び／または前記アミノ 酸またはその誘導体を所望配列で含むペプチドフラグメントを縮合して、末端カ ルボン酸基がペプチド結合用に活性化され残りの基が保護された所望ペプチドを 形成し、得られた化合物を脱保護するか及び／または得られたペプチドを医薬と して許容されるその塩に変検することを特徴とする請求項１に記載のペプチドの 製造方法。
4. ４．ヒト新生物の治療に適した医薬を製造するための請求項１に記載のペプチド の使用。
5. ５．ボンベシンによる誘発作用に対する拮抗薬として使用される医薬を製造する ための請求項１に記載のペプチドの使用。