JPH04501257A - 心房性ナトリウム利尿ペプチドクリアランス阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 心　ナトリウム　ペプチドクリアランス畿亙立肛 本発明は、動物被検体における利尿剤、ナトリウム排泄増加剤および／または血 管拡張剤として有用な合成ペプチドに関する。特に、本発明は、心房性ナトリウ ム利尿ペプチドに特異的なりリアランス受容体を阻止し、心房性ナトリウム利尿 ペプチドが基質である、ペプチダーゼを阻害するペプチドに関する。

！１１血 心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）は、心臓の心房において合成され分泌 される、循環ホルモンである。このホルモンは、そのナトリウム排泄増加作用、 利尿作用および血管拡張作用により血圧を制御すると共に、副腎腺からのアルド ステロン分泌の阻害、腎臓からのレニン分泌の阻害、およびレニンアンギオテン シン系の機能的な拮抗作用を調整する。ＡＮＰホルモンは、広範囲にわたって研 究されており、多数のアナログが提案されている。１９８７年１２月２４日およ び１９８８年８月２６日に出願され、同一の譲渡式に譲渡され、本願に参考とし て取り入れた、同時係属中の米国特許出願系１３８．８９３号および第２３７、 ２９９号は、一連の天然ＡＮＰ　（環式ジスルフィドである）の直鎖アナログを 開示している。環式アナログは、１９８８年５月３１日に出願され、同−譲渡式 に譲渡され、本願で参考として取り入れた、同時係属中の特許出願系１７４．７ ３９号において開示されている。これらの同時係属出願は、１９８８年３月１６ 日に出願の米国特許出願系１６８．６６１号（許可）、米国特許出願系９２１． ３６０号（放棄）、米国特許出願系９０４，０９１号（放棄）、米国特許第４、 ７５７．０４８号として現在発行されている米国特許出願系８６８．３１２号お よび米国特許出願系７９５．２２０号（放棄）を含む、シリーズにおいて提出さ れている最新のものである。様々なアナログもまた、他によって提案されている が、ＡＮＰアナログに関連する文献は、現在多岐にわたっている。

血流におけるＡＮＰの半減期は比較的短く、上記の米国特許出願系１３８．８９ ３号において記載されるような、ＡＮＰのアナログの多くは、ＡＮＰのクリアラ ンス受容体を阻止する作用を行うと思われ、それによって、天然と同様に生産さ れたＡＮＰがその効力を発揮する機会を増加させる。大抵のＡＮＰクリアランス に貢献すると思われる、２つの異なる経路が現在確認されている。

第１経路は、受容体によって仲介される代謝的クリアランスに関し、これは、そ の系におけるＡＮＰクリアランス全体の７０〜８０％を説明するのに足りる十分 な親和性と能力とを有する（Ｍａａｅｋ、　Ｔ、ら、　５ｃｉｅｎｃｅ　（１９ ８７）　２３８＋６７５−６７９．　ＥＰＯ公開第２３３．１４３号）。特異的 受容体経路が阻害されるならば、もう１つの経路、すなわち非飽和性のクリアラ ンス経路が機能することが示された、Ａｌｍｅｉｄａ、　Ｆ、Ａ、、　Ａｍｅｒ 　Ｊ　Ｐｈ　５ｉｏｌ　（１９８８）（寄稿）。

様々な起源の付加的な証拠に基づいて、非飽和性のクリアランス経路は、ペプチ ダーゼ、通常、エンドペプチダーゼ２４．１１と呼ばれる中性エンドペプチダー ゼ２４．１１（ＥＣ３，４，２４，１１）の活性化を含んでいると思われる。１ ９８８年４月２６日発行の米国特許第４．７４０．４９９号は、エンドペプチダ ーゼ２４．１１の２つの特異的阻害剤であるチオルファン（ｔｈｉｏｒｐｈａｎ ）またはケラドルファン（ｋｅｌａｔｏｒｐｈａｎ）を用いて心房性ペプチドの 生物活性を長引かせるかまたは高める方法を記載し、そしてクレームしている。

これらの阻害剤は、心房性ペプチドと同時に投与される。１９８８年１月２７日 公開のＥＰＯＦＢ廓公開第２５４，０３２号もまた、一般に、血圧を治療するた めに、エンドペプチダーゼ２４．１１の阻害剤または中性金属ペプチダーゼの阻 害剤の使用を記載し、そしてクレームしている。これらはいずれも単独でまたは ＡＮＰ（またはアンギオテンシンを交換する酵素の阻害剤）と共に使用される。

この開示において、中性金属エンドペプチダーゼの阻害剤には、チオルファンが 含まれるが、さらに米国特許第４．６１０．８１６号に開示されている化合物、 すなわち実質的な一群（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌ　ｃｌａｓｓ）の化合物、およ びＥＰＯ特許出願公開第１１７．４２９号（これも実質的な一群の化合物を含む ）において開示されている化合物を含む。１９８７年３月２７日出願の米国特許 出願系３２，１５３号、米国特許第４．５１３．００９号および欧州特許出願系 ３８．０４６号に開示されている化合物も参考とされる。さらに、多数の文献で は、エンドペプチダーゼ２４．１１がＡＮＰの細胞外不活性化の原因となるとい う結論（５ｔｅｖｅｎｓｏｎ、　Ｓ、　Ｌ、ら、［ｏｃｈｅｍ　Ｊ　（１９８７ ）　２４３：　１ｇ３−１８７：　０Ｈｎｓ、Ｇ、Ｍ、ら、Ｂｉｏｃｈｉｍ　ｂ ｉ逼止ＬＬ入す旦（１９８７）　９０ユニ９７−１００；　Ｋｏｅｈｎ、Ｊ、Ａ 、ら、Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈ肥（１９８７）里：１１６２３−１１６２７）　［こ れは、ヒトプラズマから単離されたＡＮＰの代謝による断片が、エンドペプチダ ーゼ２４．１１で処理されたＡＮＰの開裂主生産物と同一である（　Ｙａｎｄｌ ｅ、　Ｔ、ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏ　ｈ　ｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍｍｕｎ　（１ ９８７）　１４６：　８３２−８３９）という所見を包含する］が支持されてい る。

また、エンドペプチダーゼ２４．１１の阻害剤が、投与されたＡＮＰの生物学的 応答を強化することも観察されている（Ｆｅｎｎｅｌｌ、Ｓ、Ａ、、らＦＡＳＥ Ｂ　Ｊ　（１９８Ｂ）　ｉ：Ａ９３６；　Ｓｅｙｍｏｕｒ、Ａ、Ａ、ら、巴］； 　Ｔｒａｐａｎｉｓ　Ａ、Ｊ、、　ら、匣１１ＨＭｃＭａｒｔｉｎ、Ｃ，、ら、 ［：　Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ、Ｍ、Ｂ、、　ら、ＬＩ　：　Ａ　９３７　”）。

チオルファンの使用に加えて、エンドペプチダーゼ２４．１１を阻害する様々な 方法が開示されている。これらの方法は、芳香族部分から適切な距離にある金属 結合置換基の使用を含む。

Ｒｏｑｕｅｓ、Ｂ、Ｐ、ら、Ｎａｔｕｒｅ　（１９８０）　２８８：　２Ｈ−２ ８８：　Ｇｏｒｄｏｎ、Ｅ。

Ｍ、ら、Ｌｉｆｅ　Ｓｅｔ　（１９８３）　３３　（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ　１ ）：１１３−１１６；Ｍｕｍｆｏｒｄ、Ｒ，Ｍ、ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｔｏ　 ｈ　ｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏ　ｍ　（１９８２）　１（１９：１３０３−１３０９；　 Ｆｏｕｒｎｉｅ−Ｚａｌｕｓｋｉ、Ｍ、Ｃ，ら、Ｊ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｍ　（１９ ８３）２６：６０−６５；　Ｗａｋｓｍａｎ、Ｇ、ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏ 　ｈ　ｓ　Ｒｅｓ　ｃｏｍｍ　（１９８５）　１３ユニ２６２−２６８゜ 特異的受容体の阻害、およびエンドペプチダーゼ２４．１１に基づく非飽和性の クリアランス機構の、適切な阻害剤による阻害の両者は、ＡＮＰの血液中の循環 レベルを著しく高め、その内因性ホルモンの活性を長引かせるはずである。事実 、ＡＮＰクリアランス受容体特異性リガンド、およびエンドペプチダーゼ２４、 １１阻害剤であるチオルファンを組み合わせたもので処理した、意識のあるラッ トは、どちらか一方の経路のみを阻止した場合よりも著しい利尿性およびナトリ ウム排泄増加性を示した（　Ｋｏｅｐｋｅ、Ｊ、、ら、ＦＡＳＥＢ　Ｊｏｕｒ　 （１９８８）　ｉ：Ａ３２７）。しかし、これらの経路に阻害剤を投与すること は、チオルファンが血液と脳の境界を越えることが可能であるため、大脳エンド ペプチダーゼ２４．１１も阻害されるという欠点を有する（Ｂｏｕｒｇｏｉｎ、 　Ｓ、、ら、Ｌシ工１」ユゴ’ｈｅｒ　（１９８６）　２３８：３６０−２６６ ）。この欠点は、ＡＮＰのクリアランス受容体を阻止する単一の薬剤の使用、な らびにもう一方の非飽和性の酵素経路を阻止することによって解決する。

本願に記載される本発明の化合物は、エンドペプチダーゼ２４、１１阻害機能（ すなわちＡＮＰのＣｙｓ１０５−Ｐｈｅ１０６における開裂を阻害する機能）を 、ＡＮＰクリアランス受容体に結合するアナログに取り入れたものである。驚い たことに、開裂阻害をもたらす要因は、これらの化合物のクリアランス受容体結 合能力には干渉しない。

λ丑旦皿丞 本発明は、体内で分泌されるＡＮＰホルモン（これは、高血圧からの防護、およ び体液およびナトリウムが滞在することからの防護を提供する恒常性機構を制御 する）の能力を高める化合物を提供する。従って、本発明の化合物は、ナトリウ ム排泄増加作用、利尿作用および血管拡張作用であるので、高血圧、心臓病、腎 臓疾患および浮腫の治療に有用である。

本発明の合成アナログ化合物のほとんどは、Ｄｚａｕ、　Ｖ、　Ｊ、　、ら、Ｎ 　Ｅｎ　ｌ　Ｊ　Ｍｅｄ　（１９８７）　３１６：１２７９ニよッテ推薦される 、１２６個の残基ｐｒｏＡＮＰペプチドに基づ＜　ＡＮＦ’ペプチドについての 番号骨はシステムを使用して天然ＡＮＰの配列ＡＡｌｉ１９〜ＡＡＩ＋３に、定 められた様式で対応する、アミノ酸残基のコアベシタペプチド配列を保持する。

既知の天然ＡＭＰにおいて、このコア配列は、う・ノドにおいてはＲ［ＤＲＩで あり、そして、ヒトにおいてはＲＭＤＲＩである。この配列のいくつかの定めら れた変換体（ＡＡｓｔａが存在しないものを含む）は、活性を有するが、はとん どは、利尿作用またはナトリウム排泄増加作用を調べるためのインビトロにおけ るモデルシステムでのアッセイでは活性を示さない。

これらのアナログは、これらのペプチドのクリアランス受容体を阻止することに よって内因性ＡＮＰの機能を強化して（＼る。

１つの実施態様において、本発明は、次式の化合物に向けられている： ＺｌＺｚ−ＡＡｌｌｌｅ−ＡＡｔｌｅ−ＡＡ＋ｔｔ−ＡＡ＋＋２−ＡＡ＋１３− Ｚｓ　（１）ここで、各ＡＡｔｌＩ９およびＡＡ目２は、好ましくは、独立して 、塩基性／非環式アミノ酸残基であるが、また、中性／極性／大型／非芳香族の アミノ酸残基であり得、そして、ＡＡｌｌｌｅは、中性／無極性／大型／非芳香 族のアミノ酸残基であり得；ＡＡ＋＋ｔ＋は、ＤまたはＬ型の中性／無極性／大 型／非芳香族アミノ酸残基であり： ＡＡＡｌ１、酸性のアミノ酸残基であり；そして、ＡＡ１１３は、ＤまたはＬ型 の中性／無極性／大型／非芳香族のアミノ酸残基であるか、もしくは共有結合で あり；ここで、ｚｌは、 ここで、ｘｌは、４〜１４Ｃの疎水性環式または非環式残基であり、ｘ２は、式 中の−ＣＨ−から１．５〜７λの範囲（２〜４単結合）１こお（Ａて金属配位原 子を含み、該金属配位原子は、Ｓおよび０力λら選択され、−Ｘａ−は、単結合 −ＣＨ２−１−ＣＯまたは−ＮＨ−であり；ｚ２は、ＡＡｌｌｌｅとＺｌの疎水 性部分との間に約４．５〜１５ハの距離（つまり、連結基においては、３〜９個 の原子を含み、あるＬＸ＋よ、折りたたみにより適当な距離となる）を提供する スペーサー基であり； ｚ３は、（ＯＨ）、ＮＲ２、ＮＨＲ−またはＮＲ”Ｒ”Ｔあり、ここでＲ−また はＲ”は、それぞれ独立して１〜１０個の炭素原子の直鎖また（よ分岐鎖アルキ ルであり、１または２個の炭素力ｆＯ１Ｎまたｌ；！Ｓｌこよって置換され得； あるいはｚ３は１〜２０個のアミノ酸残基のペプチド、あるいはそのアミドまた はアルキルアミドであり、ＡＡＡｓ２共有結合の際には、Ｚ３は、（０）１）、 ＮＲ２まだ（よペプチドであり得ない。

本発明の前記の化合物において、隣接するアミノ酸残基の間の１個またはそれ以 上のアミドバックボーン結合は、必要に応じて−Ｃ１（２ＮＨ−１−Ｃ１１２Ｓ −１−ＣＨ２ＣＨ２−１−ＣＨ＝ＣＨ−（シスおよびトランス）、−ＣＯＣＨ２ −１−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−および−ＣＨ２ＳＯ−からなる群から選択される連 結基によって置換され得る。

本発明のペプチドにおける、１個または２個の残基は、ＡＡＩＩ８およびＡＡＡ ｓ２加えて、またはそれらの代わりに、対応するり異性体によって置換され得る 。

また、本発明の局面に応じて、ナトリウム排泄増加剤、利尿剤、血管拡張剤およ び／またはレニンーアンギオテンシンーアルドステロン系のモジュレータ−とし て宵用な薬剤組成物が提供される。この組成物は、本発明の少なくとも１種の化 合物（そのアミド、エステルおよびその無毒性塩を含む）を薬学的に受容され得 る液体、ゲルまたは固体担体と共に含む。　さらに、本発明の局面は、そのよう な化合物および組成物の製造方法、ならびにそのような化合物および組成物を治 療剤として使用する方法を提供する。

図面の簡単な説明 第１図は、本発明の化合物を規定するアミノ酸の分類を示す。

第２図は、いくつかの好適なｚ１置換基の例示的な実施態様をそれらの略号と共 に示す。

第３図は、Ｚ２の特定の実施態様の付加的な略号を示す。

第４図は、本発明の化合物の例示的な実施態様を示す。

第５図は、動物の全身における、利尿およびナトリウム排泄増加に対する本発明 の化合物の効力を示す。

発Ｂを　するための３゜ このクラスの化合物は、特異的受容体クリアランス系の阻害およびエンドペプチ ダーゼ２４．１１活性の阻害によって、内因性ＡＮＰのクリアランスを損なう能 力を有するため、哺乳類の天然ペプチドがインビボで、ナトリウム排泄増加作用 、利尿作用および／または血管拡張作用を示すかまたはモジュレータすることが できる。

コアペンタペプチドのアミノ酸残基の配列、およびその好ましい態様は、特定の サブクラスの、ある特徴を有するアミノ酸によって定義される。

アミノ酸残基は一般に、以下に述べるとともに第１図に示す４つの主要サブクラ スに分けることができる。

酸性：この残基は生理的ｐｔｌにおいて水素イオンを失うために負の電荷を有し 、その残基は、ペプチドが生理的ｐＨの水性媒体中に存在するとき、この残基が 含有されるペプチドの立体配座の表面位置をめて、水溶液により引きつけられる 。

塩基性：この残基は生理的ｐＥｌにおいて水素イオンと結合するので正の電荷を 有し、その残基は、ペプチドが生理的ｐＨの水性媒体中に存在するとき、この残 基が含有されるペプチドの立体配座の表面位置をめて水溶液に引きつけられる。

中性／無極性：この残基は生理的ｐＨにおいて電荷をもたず。

この残基は、ペプチドが水性媒体中に存在するとき、この残基が含有されるペプ チドの立体配座の内部位置をめて、水溶液に反発される。またこれらの残基は９ 本明細書においては”疎水性”とも呼ばれる。

中性／極性：この残基は生理的ｐＨにおいて電荷をもたないが、この残基は、ペ プチドが水性媒体中に存在するとき、この残基が含有されるペプチドの立体配座 の外部位置をめて水溶液に引きつけられる。

個々の残基分子を統計的に集積してみると、いくつかの分子は電荷を有し、いく つかは電荷をもっていない。従って。

大なり小なり、水性媒体への吸引もしくは反発があることは勿論明らかである。

”電荷を有する”という定義に適合するには、有意の割合（少なくとも約２５％ ）の個々の分子が生理的ｐＨで電荷を持っていることが必要である。極性もしく は無極性として分類するのに必要な吸引もしくは反発の程度は任意的なものであ るから９本発明の特定のアミノ酸は、それぞれ特定して分類されている。特定の 名称がないアミノ酸のほとんどのものは、公知の挙動に基づいて分類することが できる。

アミノ酸残基は、さらに、環式もしくは非環式、および芳香族もしくは非芳香族 、残基の側鎖の置換基についての明らかな分類、ならびに小型もしくは大型とい うサブクラス分類することができる。残基は、カルボ牛シル基の炭素原子を含め て合計４個以下の炭素原子しかない場合、小型とみなしている。小さな残基は、 もちろん常に非芳香族である。

天然に存在するタンパクのアミノ酸について、先のスキームによるサブクラス分 類は次のとおりである（第１図もまた参照のこと）。

酸性：アスパラギン酸およびグルタミン酸；塩基性／非環式：アルギニン、リジ ン；塩基性／環式：ヒスチジン； 中性／極性／小型ニゲリシン、セリンおよびシスティン；中性／極性／大型／非 芳香族：　トレオニン、アスパラギン。

グルタミン； 中性／極性／大型／芳香族：チロシン；中性／無極性／小型：アラニン； 中性／無極性／大型／非芳香族：バリン、インロイシン。

ロイシン、メチオニン； 中性／無極性／大型／芳香族：フェニルアラニンおよびトリプトファン。

遺伝子がコードするアミノ酸のプロリンは、技術的には中性／無極性／大型／環 式および非芳香族の群に含まれるが。

ペプチド鎖の二次立体配座に基づいた公知の影響による特別なケースなので、上 記定義の群には含まれない。

普通に遭遇するいくつかのアミノ酸で、遺伝コードでコードされていないものが あり、それには９例えば次のアミノ酸が含まれる：β−アラニン（β−Ａｌａ） 　、またはその他のω−アミノ酸類〔例えば３−アミノプロピオン酸（３−ａｍ ｉｎｏ　ｐｒｏｐｒｉ。

ｎｊｃ）、４−アミノ酪酸（４−ａｍｉｎｏ　ｂｕｔｙｒｉｃ）など〕、α−ア ミンイソ酪酸（Ａｔｂ）、サルコシン（Ｓａｒ）　＊　オルニチン（Ｏｒｎ）　 ＋　シトルリン（Ｃｉｔ）、ｔ−ブチルアラニン（ｔ−ＢｕＡ）、　ｔ−ブチル グリシン（ｔ−ＢｕＧ）　、Ｎ−メチルイソロイシン（Ｎ−Ｍｅｌｌｅ）　、フ ェニルグリシン（＋’ｈｇ）　、およびシクロへキシルアラニン（Ｃｈａ）　、 ノルロイシン（Ｎｌｅ）　、　システィン酸（Ｃｙａ）　、およびメチオニンス ルホキシド（ＭＳＯ）。これらのアミノ酸は特定の区分に入れるのが便利である 。

上記定義に基づいて。

Ｓａｒおよびβ−ａｌａは中性／無極性／小型；ｔ−ＢｕＡ、　ｔ−ＢｕＧ、　 Ｎ−Ｍｅｌｌｅ、　ＮｌｅおよびＣｈａは中性／無極性／大型／非芳香族； Ｏｒｎは塩基性／非環式； ％式％ Ｃ４ｔ、　ＭＳＯおよび（アセチル）　Ｌｙｓは中性／極性／大型／非芳香族； ならびに Ｐｈｇは中性／無極性／大型／芳香族である　（第１図参照）。

種々のω−アミノ酸は、その大きさによって、中性／無極性／小型アミノ酸とし て（β−アラニンすなわち３−アミノプロピオン酸、４−アミノ酪酸）または大 型アミノ酸として　（残り全部）分類される。

遺伝子内にコードされているその他のアミノ酸置換体も。

この発明の範囲内のペプチド化合物に含まれ、この一般のスキームに分類するこ とができる。

この発明のアナログ化合物を述べるのに用いる命名法は。

アミノ基が、ペプチドの各アミノ酸の左に位置し、カルボキシル基が右に位置す ると仮定するという従来の慣行に従っている。本発明の選択された特定の態様を 示す式においては。

アミ／末端基およびカルボキシ末端基は、具体的に示さない場合が多いが、特に 指示のない限り、生理的ｐＨ値においてとる形態であると理解される。従って、 生理的ｐＨにおけるＮ末端Ｈ′″２とＣ末端０−とは、特定の実施態様もしくは 一般式に必ずしも記載し示してはいないが、存在することが理解される。

しかし、従来のペプチド結合が存在しない場合に、２つの残基を連結する共有さ れているＮは、［Ｎ］として示される。従って、置換されたＮ−アルキルカルボ キシペプチドおよびＮ−アルキルカルボキシヒドロキサム酸ペプチドを命名する 際に、その構造式は、共有される窒素を−［Ｎ］−として示すことによって描か れる。（Ｎ−アルキルカルボキシヒドロキサムペプチドにおけるヒドロキシルア ミ／は、ＨＡとして省略して示される）。

例えば、）１００Ｇ−ＣＤ　（ＣＨ２Ｐｈ）　−ＮＨ−ＣＨ２ＣＯ−Ｇｌｙ−Ａ ｒｇ−＋　１ｅ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−１１６−ＮＨ２（Ｐｈはフェニル）であるア ナログ＃３６４は、Ｆ　［Ｎ］Ｇ−Ｇ−Ｒ−１−Ｄ−Ｒ−１−ＮＨ２として示さ れ、そして、化合物ＨＯＮＨＣＯＣＲ（ＣＨ２Ｐｈ）　−ＮＨ−ＣＩ（２ＣＯ− Ｇｌｙ−Ａｒｇ・−１１，ｅ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−１１ｅ−ＮＨ２であるアナログ ＃７０２は、ＨＡＰ［Ｎ］Ｇ−Ｇ−Ｒ−１−Ｄ−Ｒ−１−ＮＨ２として示される 。

さらに、ペプチド鎖が、通常のαアミノおよびカルボキシル基を介して連結して ペプチド結合で連結した残基を形成しない場合には、以下の記号が使用される： ［γ−Ｌ−Ｇｌｕｌは、Ｌ−Ｇｌｕの側鎖カルボキシル基を介してのペプチド結 合を示し、そして、αカルボキシル基はフリーのカルボン酸側鎖となり、同様に 、記号１７−Ｄ−ＧＬｕｌ、［β−Ｌ−Ａｓｐｌおよび［β−Ｄ−Ａｓｐｌｉよ 、通常ではペプチド結合に含まれないカルボキシル結合を示す。

示されたペプチドにおいて，コードされている各残基は。

それが適当な場合には，以下の従来のリストに従って，アミノ酸の慣用名に対応 する単一文字の名称で示される。

アスパラギン　Ｎ アスパラギン酸　Ｄ グルタミン酸　Ｅ メチオニン　Ｍ セリン　Ｓ トレオニン　Ｔ トリプトフアン　Ｗ 遺伝子でコードされていないアミノ酸は，上記のように短縮して示す。

水出！で示す特定のペプチドにおいて，光学異性体を有するどのアミノ酸残基の Ｌ形も，特にことわりのないかぎり。

別な方法で示す。本発明のペプチドの残基は通常，天然のし光学異性体形である が，１もしくは２個．好ましくは１個のアミノ酸が、ＡＡｌｌｌｌおよび／また はＡＡ１１３に鳳ＬＴ　もしくはその代わりに，光学異性体であるＤ形で置換さ れてもよい（ＡＡ１］θおよびＡＡ】１　３がともにＤ型である態様を含む）。

遊離の官能基（カルボキシル末端もしくはアミノ酸末端が遊離であるものを含む ）は、アミド化，アシル化もしくは他の置換反応により修飾され得，その結果， 例えばその化合物の活性に影響することなしに，化合物の溶解度を変えることが できる。

特に、カルボキシ末端のアミドを修飾したアナログが特に強力なのでこの発明の 好ましい態様であることが発見された。

一般に，アミド基の窒素原子は，カルボニル基の炭素原子と共有結合しており， 　ＮＨ２，　−ＮＨＲ’　もしくはＮＲ’　Ｒ−の形態（式中Ｒ′およびＲ゛は ，直鎖もしくは分枝鎖であり．ＩＣ−１０Ｃ好ましくはＩＣ−６Ｃのアルキルも しくはアルキルアシル基であり。

これら基の１〜２個の炭素原子は窒素、酸素もしくは硫黄原子で置換されている ものを含む）である。このようなアミド基の代表的なものは次の通りである：　 −Ｎｌ（２，−ＮＨＣＨ３，−Ｎ（Ｃ）１３）２．−ＮＨＣＨ２ＣＨ３，−ＮＨ Ｃ６Ｈ５，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２．−ＮＨＣＨ２ＣＨ（Ｃ）［１）ＣＩ ２ＣＨ２，−ＮＨＣ）（２ｃｌ（２０）１．−ＮＨＣ）Ｉ２０ＣＨ２Ｃ１ｈおよ び−Ｎ　（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２５ＣＨ２ＣＨ３゜ 本発明のアミド化された化合物は２例えばＢＯＣ−ＡＡＸ−１）ＭＢＨＡ−樹脂 もしくはＢｏｃＡＡｘ−ＢＨＡ−樹脂（式中ＡＡ８は、以下に詳述する所望のア ナログ化合物からの選択されたカルボ牛シル末端アミノ酸である）を用いて直接 合成することができる。あるいは２本発明の化合物は、当該技術分野に公知の手 段を用いてペプチドを合成した後、化学的もしくは酵素的にアミド化するか、ま たは標準の液相ペプチド合成法によって製造することができる。

伍り旦と豆径 Ａ。コアペンタペプチド 本発明の化合物はすべて、下記式で表されるペンタペプチドのコア配列を有して いる： ＡＡｌｓｏ−ＡＡＩ＋５−ＡＡｔ　ｒ　ｔ−ＡＡＩ＋２−ＡＡＩ　＋ａ・ここで 、ＡＡＩａｅ−およびＡＡＩ２は、独立して。

塩基性／非環式の；または。

中性／極性／大型／非芳香族のアミノ酸残基であり：さらに、ＡＡｔｓｓは、中 性／非極性／大型／非芳香族アミノ酸であり得； ＡＡｓｘａは、ＤもしくはＬ配置の中性／無極性／非芳香族のアミノ酸残基； ＡＡＩＩＩは酸性アミノ酸残基；そして。

ＡＡＩ１３は、ＤもしくはＬ配置の中性／無極性／大型／非芳香族のアミノ酸残 基、または共有結合である。

このコアの最も好ましい配列は、Ｒ（ｔ／Ｍ）ＤＲＩであり、この式中の残基は すべてＬ配置であり、括弧内のアミノ酸残基はどちらかが選択される。次に好ま しいのは、Ｒ（１／Ｍ）ＤＲＩ残基の１つだけが上記定義内の選択された残基で 置換された配列である。好ましい置換基は９次のとおりである；ＡＡＩ　１１９ については、Ｒの代わりにに、（アセチル）　ＫＳＱ、　Ｎ。

ＬまたはＮｌｅ； ＡＡＩ　ｔｓｉ：　ライＴは、１７Ｍ１７）代わりニＶＳＶ↑、Ｌ、　Ｌｔ％　 Ｉｔ、　Ｍｔ、ｔ−ＦｌｕＡ、、ｔ−ＢｕＡＳｔ−ＢｕＧ、　またはＣｈａ；Ａ ＋＋＋については、Ｄの代わりにＥまたはＣｙａ　；Ａ１１２については、Ｒの 代わりに’１．ｓ　０％　８％　Ｑｒｎ、　またはＣｉｔ；Ａ１１３にライては Ｉの代わりニＭ、　Ｍｔ、　ＶＳＶ↑、Ｌ−Ｌｔｓ　ｌ’％　Ｎ−Ｍｅｌｌｅ、 　Ｌ−ＢｕＡ、または共有結合。

（ｔは、Ｄ型を示す）。

特に好ましいのは、この配列が、下記配列でなる群から選択される態様である： ＲＭｔＤＲＩ　Ｒ（１／Ｍ）　ＤＲＬ Ｋ（＋／Ｍ）ＤＲＩ　ＲＬＤＲ’ｌ　Ｒ（＋／Ｍ）ＤＲＭＱ（１／Ｍ）ＤＲＩ　 Ｒ（１／Ｍ）ＥＲＩ　Ｒ（１／Ｍ）ＤＲＭｔＲＶＤＲＩ　Ｒ（＋／Ｍ）ＤＫＩ　 Ｒ（１／Ｍ）ＤＲＩ？ＲＩｔＤＲ］　Ｒ（＋／Ｍ）ＤＱＩ　Ｒ（１／）ＩＩ）Ｄ ＲＶｏここで、ｔは、それがついているアミノ酸力ｒＤ型であることを示す。

天然に存在するＲＩＤＲ＋　もしく（よＲＭＤＩＩ　！配７ｊＩＪ力）らの１つ を越える変化した配列も本発明の範囲１こ含まれる力（、余り好ましくはない。

この群の中で特に好まい１サブセ・ノド（こ（ま、イ也の置換に加えて、グルタ ミン酸残基力’＋　ＡＡ　１１１として、アス／ｆラギン酸残基の代わりに入っ たもの力）、あるＬｌｌｔ’）シンカ’ＡＡＩＩ＋９としてアルギニンの代わり １ご入ったもの力５含まれる。

Ｂ、紅盆皇立里豆 ｚｌは次式を有する： ここで、ｘｌは、４〜１４Ｃの疎水性の環式また１よＪμ環式残基であり； Ｉ２は、式中のＣＨから１．５〜７Ａの範囲１こおｔ）て金属配位原子を含み、 該金属配位原子は、ＳおよびＯ力）ら選択され；そして、−Ｉ３−は、単結合− ＣＨ２−１−ＣＯ＊　タｌ；！　−ＮＨ４１−アル。

エンドペプチダーゼ２４．１１を阻害するために、疎水性残基および金属配位原 子が、互いに近接して提供されなければならない。従って、ｘｌは、疎水性を提 供し、Ｉ２は、金属配位原子を提供する。

中央のＣＨ基は、キラルの中心である。従って、本発明の化合物は、これらを、 ＲおよびＳ配置で、またはその混合物として含む。一般に、好ましい鏡像異性体 は、Ｌ−アミノ酸が模倣されるようなキラル性である場合である。

示されている一Ｘ３−は、２つの主要な特性である、Ｚｌ置換基と該化合物の残 りの部分とを連結させる。

好適な実施態様においては、−Ｘ＋は、ＣＨ２、ＮＨ，ＯまたはＳの少なくとも １つの連結基を介して、示されたＣ旧こ結合する環式または芳香族基を歯台。場 合によっては、この連結基は、２つの要素を含み得るため、−０ＣＨ２−５−Ｃ Ｈ２０−５−ＣＨ２Ｓ−１−Ｓ　ＣＩ２−１−ＣＴ１２Ｃ）＋２−１−ＮＨＣＨ ２−または−Ｃ）１２ＮＨ−を含む。芳香族置換基ハ、フェニル、インドリル、 ビフェニル、ナフチル、ピリジル、イミダゾール等、すなわち、Ｎ、　０および Ｓから選択される１または２個のへテロ原子を含み得るいずれの５〜１２員環系 でもあり得る。さらに、疎水性部分は、非芳香族であり得、例えば、シクロヘキ シルまたは１または２個のＮＳ　Ｓまたは０のへテロ原子を含む、いずれの５か らｔｏ）ｉｉ環の非芳香族環系である。場合によっては、疎水性部分はまた、非 環式でもあり得る。

金属配位原子を含む−ｘ２は、該原子をＣＩを示されているところから適切に離 すために効果がある。この分離は、基本的（こ、２から４個の共有結合、または 約１．５から７只の距離により達成サレル。つマリ、−ｈは、−ＣＨ２ＣＨ２− ＣＨ２ＣＨ２ＳＨ，−ＣＯＯＨ，−ＣＯＮＨＯＨ，−ＣＨ２ＣＯＯＨ，−ＣＨ２ ＣＯＮｔＴＯ’Ｈ，−ＮＨＣＨ２ＣＯＯＨ，−ＮＨＣＨＲＣＯＯＨＩ：　、！、 　ッテ例示すレル。ココテ、Ｒｌｉ、−ＣＨ２Ｐｈまｆ−バーＣＨ２ＣＨ２Ｐｈ 、およびＮＨＰＯ（ＯＲ’　）２であり、各Ｒ゛は、それぞれ独立してＨまたは アルキル（１〜７Ｃ）テある。−Ｘ２が−ＮＨＣＨ２Ｃ００Ｈ１−ＮＨＣ）ＩＲ ＣＯＯ）Ｉまたは−ＮＨＰＯ（ＯＲ’　）２のとき、 付き［Ｎコで示される。

ｚｌの例示的な、好ま；、い実施態様を、（省略記号と共に）第２図に示す。特 に好ましいのは、Ｚｌにおいて、Ｘ３がｃｏでｘ２がＣＨ２ＳＨ，またはＸ３が ＣＯｔ’Ｘ２がＣｏ　Ｎｏ）Ｉ、またはｘ３がＣｏテＸ２が−Ｃ１（２ＣＯＮＨ Ｏ）１．　またはＲがＣＨ２ＰｈまたはＣＨ２ＣＨ２Ｐｈ’ｔ’ある場合に、ｘ ３がＣＯおよびＸ２が［Ｎ］　ＣＨＲＣＯＯＨである、化合物である。

示されているＣＨは、リンカー−Ｘ３−を介して本発明の化合物の残りの部分に 結合する。リンカ−は、Ｚｌとして示されるスペーサーと結合する単結合であり 得るか、または、−ＮＨ−１−〇〇−および−ＣＨ２−から選択され得る。スペ ーサー２２がアミノ酸残基によって終わる場合には、以下に示す構造は、ペプチ ドのＮ末端を形成するＮＨは［Ｎ］、すなわち解読が容易になるように、括弧付 きのＮとして示され得る。

Ｃ０証ユ災皇旦亘 本発明の化合物において、Ｚｌは、ＺｌからＡＡ＋　８９を分離するスペーサー 要素を提供する。リンカ−２２は、通常の延長鎖において３〜９個の原子に対応 する、約４．５と１５Ａの間の距離を、ＡＡｓｓｓと２１との間につくり出すも のでなければならない。もちろん、３次元配置が、このスペース距離を提供する 場合には、より長いリンカ−が使用され得る。

ｚ２の好ましい実施態様は、以下よりなる群から選択される。

（ａ　）　（ＡＡ）ｌ　：　ここで、ＡＡはアミノ酸であり、そして”ａ”は１ または２であり、特に、各ＡＡはＧＳＳ、　Ａ、　Ｄ−ＡｌａＳＳａｒ、Ａ　ｔ ｂ。

Ａｓｐ、　Ｇｌｕ、　Ｄ−Ａｓｐｓ　Ｄ−ＧｌｕＳｂｅｔａ−Ｌ−Ａｓｐ、　り ｅｉａ−Ｄ−Ａｓｐｓ　７−Ｌ−Ｇｌｕ、そして７−Ｄ−Ｇｌｕ　（７−Ｇｌｕ およびβ−Ａｓｐにおいて、結合は側鎖カルボキシルを介する）； （ｂ　）　−（Ｐ）ｎ−（ＣＯ）ｘ−：　ここで、Ｘは０または１で、ｎは１〜 ６で、ＰはＣＨ２であり、Ｎ−Ｎが生じないという条件下において、該−Ｃ１＋ ２−基の１から２個がＮＨによって置換され得る；および（Ｃ）　−（Ｑ）、− ８−（Ｑ）、−（Ｃｏ）Ｘ−：　ここで、Ｘは０または１であり、各ｍはそれぞ れ独立して０から３であるが、両方のｍの合計が５以下であり；−Ｎ−Ｎ−が生 じないという条件下において、ＱはＣ１１２またはＮＨであり、そしてＢは、Ｎ ヘテロ原子を必要に応じて含む、飽和されたまたは不飽和の５〜６員環である。

Ｚｌの特に好ましい実施態様は、第３図に示される。これらは、４−アミノベン ゾイル（４−ＡＢ）、４−アミノフェニルアセチル（４−ＡＰＡ）、４−ピペリ ジンカルボキシル（４−ＰＩＰ）および４−アミノメチルシクロへキソイル（４ −ＡＭＣ）を含む。

Ｄ−ｈ旦皇鬼旦且 ｚ３として好ましいのは、Ｎ）＋２、ＮＨＲ”およびアミドまたは１がら３個の アミノ酸を有するペプチド残基のアルキルアミドである。ペプチド残基である実 施態様の中で、特に好ましいのは、アミノ酸がＧ、　ＡおよびＳから選択される ものである。しかし、特に、ＡＡ＋＋ｓが共有結合である場合には、ｚ３は、ア ルキルアミド型、例えば、Ｒ゛が２〜１ｏｃである一ＮＨＲ”でなければならな い。

Ｅ−Ｌニエｉヱ監立 本発明の一実施態様において、コアペンタペプチド中のアミド結合（−Ｃｏ−Ｎ Ｈ−）、またはｚｌおよび／もしくはＺｌおよびもしくはｚ３内のアミド結合は 、当該技術分野で公知の方法によって、他の種類の結合９例えば−Ｃ）１２ＮＨ −、−ＣＨ２Ｓ−、−〇）１２ｃＨ２−。

−ＣｔｂＣＨ−（シフ、および）　ランス）、　−ＣＯＣＨ２−、−Ｃ（ＯＨ） ＣＨ２−および−ＣＨ２ＳＯ−で置換され得る。下記の文献には、これらの代替 の連結部分を宵するペプチドアナログの調製について記載されている：　５ｐａ ｔｏｌａ、Ａ、Ｆ、、　Ｖｅｇａ　Ｄａｔａ（１９８３年３月）１巻、第３版、 ″ペプチド主鎖の修飾″　（総説）　；　５ｐａｔｏｌａ、Ａ、Ｆ、”アミノ酸 ペプチドとタンパクの化学と生化学”、Ｂ、ＷｅｉｎｓｔｅｉｎらＩｉｉ集、Ｍ ａｒｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ、ニューヨーク、２６７頁（１９８３年）（総説）　 ；　Ｍｏｒｌｅｙ、Ｊ、Ｓ、、Ｔｒｅｎｄｓ　Ｐｈａｒｍ　Ｓｃｉ　（１９８０ 年）、　４６３〜４６８頁（総説）　；　Ｈｕｄｓｏｎ、Ｄ、ら、ＩｎｔＪ」胚 上ヱｒｏｔ　Ｒｅｓ　（１９７９年）　１４巻、１７？−１８５頁（−ＣＨ２Ｎ Ｈ−、−ＣＨ２ＣＨ２−）　；　５ｐａｔｏｌａ、Ａ、Ｆ。

ら、Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ　（１９８６年）、３８巻、１２４３〜１２４９頁（−Ｃ Ｈ２−３）　；　Ｈａｎｎ、Ｍ、Ｍ、、Ｊ　Ｃｈｅｍ　Ｓａｃ　Ｐｅｒｋｉ　Ｔ ｒａｎｓ　Ｉ　（１９８２年）　３ｏフ　〜３１４頁、（−ＣＨ−ＣＨ，シスお よびトランス）　；　Ａｌｍｑｕｉｓｔ、Ｒ，Ｇ、ら。

Ｊ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｍ　（１９８０年）２３巻、１３９２〜１３９８頁（−ＣＯ Ｃ）＋２−）　：　Ｊｅｎｎｉｎｇｓ−Ｗｂｉｔｅ、　Ｃ，ら、Ｔｅｔｒａｈｅ ｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ　（Ｌ９８２年）２３巻、　２５３３頁（−ＣＯＣＨ２−） 　；　５ｚｅｌｋｅ、Ｍ、ら、ヨーロッパ特許出願ＥＰ第４５６６５号ＣＡ：　 ９７：　３９４０５　（１９８２年）　（−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−）；　Ｈｏ１ ｌａｄａｙ、Ｍ、Ｗ、ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ　（１９８３年） ２４巻、４４０１〜４４０４頁（−Ｃ（ＯＨ）ＣＨ２−）　；およびＨｒｕｂｙ 、Ｖ、Ｊ、Ｌｉｆｅ　Ｓｅｔ　（１９８２年）３１巻、１８９−１９９頁（−Ｃ Ｈ２−Ｓ−）。

Ｆ、Ｂのアナログの　な　、。

本発明の好適なアナログを第４図に示す。

図中、化合物１〜８８において、コア配列はＲ−１−Ｄ−Ｒ−１，ＺｓはＮＨ２ 、ＺｌはＡＡ、であり、そして２１はメルカプチル基を含み、ここで、Ｘ２−は −ＣＨ２ＣＨ２である。

化合物８９〜１１０は、ｚ２が−（Ｐ）ｎ−（Ｃｏ）一式で表され、ｎが４〜５ であることを除いて同様である。

化合物１１１〜１５４は、ｚ２が４−ＡＢ、　４−ＡＭＣ，４−ＡＰＡおよび４ −ＰＩＰがら選択されることを除いて同様である。

化合物１５５〜２２０は、それらがコア配列に−１−Ｄ−Ｒ−１を有し、２３が ＮＨ２であることを除いて同様である。

化合物２２１〜２８６は、それらがコア配列Ｒ−１−Ｄ−Ｒ−ＮＨＲ”を有し、 ここで、Ｒ”がＣＨ２Ｃｌ（（Ｃｈ）ＣＨ２ＣＨ３であることを除いて同様であ 化合物２８７〜３６３はまた、Ｒ−［−Ｄ−Ｒｉココアプチドを有する化合物で あり、ｚ３はＮ）＋２であり、モしてｚｌの実施態様は、ｘ２が−ＣＨ２ＣＨ２ ＳＨである。

化合物３６４〜６２４はすべて、ｚ２の様々な好適な実施態様において、Ｎａ２ であるｚ３を有するコア配列Ｒ−１−Ｄ−Ｒ−１を有する。ｚｌは、Ｆ［Ｎ］、 ＢＰ［Ｎ］、Ｎａ１２［Ｎ］、Ｎａ１１［Ｎ］、Ｃｈａ［Ｎ］、Ｗ［Ｎ］、ｈｏ ｍｏＦ［Ｎ］、ｈｏｍｏｃｈａ　［Ｎ］、ｈｏｍｏＮａｌ　２　［Ｎ］、Ｆ［Ｎ ］ＦＳＦ［Ｎ］ＢＦ、　Ｆ［Ｎ］Ｎａ１２、Ｆ［Ｎ］Ｍａｉｌ、Ｆ［Ｎ］Ｃｈａ 、　Ｆ［Ｎ］Ｗ、　Ｆ［Ｎ］ｈｏｍｏＦ、　Ｆ［Ｎ］ｈｏｍｏＣｈａＳＦ［Ｎ］ ｈｏｍｏＮａ１２、およびｈｏｍｏＦ［Ｎ］またはＧ［Ｎ］が、Ｆ［Ｎ］と置換 されるような同様の構造から選択される。従って、これらの実施態様において、 ｚｌは、 ここで、Ｒは、−Ｈｌ−ＣＨ２１’ｈまたは−Ｃ）１２ｃ）１２Ｐｈである。

化合物６２５〜７０１において、ｚｌもまたカルボキシル基を含み、Ｘ２−がＣ ０ＯＨおよび−ｘ３−が−ＣＯ−である実施態様から選択される。

化合物７０２〜７６４において、ｘ２−は、ヒドロキサメートを含み、Ｚｌは、 ココテ、ｘ２−は、−ＣＯＮＨＯＨｔ’ある。

化合物７６５−８４１＋、：おいて、Ｚｌは、ここで、ｘ２は、−ＣＯＮｌｌｌ ＯＨｔ’ある。

化合物８４２〜９１８１．：おいて、Ｚ＋ｉ！、ココテ、ｘ２−は、−Ｃ）［２ ＣＯＮＨＯＨｒある。

化合物９１９〜９８１において、ｚｌは、ここで、Ｘｌは変わり得る基であり、 ｘ２は、示されているようにホスホルアミデートである。これらの実施態様にお いて、芳香族アミノ酸であるＺｌの、第２図に示される様々な置換基は、そのα カルボキシル基を介してｚ２置換基に結合し、αアミノ基の位置においてリン酸 化される。従って、Ｚｌは、第２図の実施態様Ｚ１９〜Ｚ２７として示される構 造を有する。

化合物９８２〜１０５６において、Ｚｌは、次式を有するここで、ｘｌは、変わ り得る基であり、Ｘ２は、−ＣＨ２ＣＯＯｌ（である。

特に好ましいのは、化合物１〜２８６．４３６〜５６１および８４２〜９８１ま でである。

化合物１２２は、特に好適である。

念底 本発明の範囲に含まれる化合物は１例えば固相ペプチド合成法のような当該技術 分野で公知の手段によって化学的に合成することができる。この合成は、α−ア ミン基が保護されたアミノ酸を用いてペプチドのカルボキシル末端から開始され る。ｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢｏＣ）保護基は、他の保護基が適切である 場合でも、全てのアミノ基に対して用いることができる。例えば、Ｂｏｃ−１１ ｅ−ＯＨ，Ｂｏｅ−Ａｒｇ−ＯＨ，Ｂｏａ−Ａｓｐ−ＯＨ、Ｂｏｃ−１１ｅ−Ｏ ＨまたはＢｏａ−Ａｒｇ−ＯＨ（すなわち選択されたＡＮＰアナログのカルボキ シル末端アミノ酸）は、クロロメチル化ポリスチレン樹脂、好ましくはｐ−メチ ルベンズヒドリルアミン（ｐＭＢＨＡ）樹脂の支持体にエステル化することがで きる。ポリスチレン樹脂支持体は、スチレンと約０．５〜２％のジビニルベンゼ ンとのコポリマーが好ましいが、このジビニルベンゼンは、架橋剤であって、ポ リスチレンポリマーをいくつかの有機溶媒に対して完全に不溶性にする（　Ｓｔ ｅｗａｒｔら、′固相ペプチド合成−（１９６９年）　Ｗ、Ｈ，Ｆｒｅｅｍａｎ 　Ｃｏ、、サンフランシスコ；およびＭｅｒｒｉｆｆｅｌｄ、　Ｊ、Ａｍ　Ｃｈ ｅｍ　Ｓａｃ　（１９６３年）Ｕ巻、２１４９−２１５４頁、参照）。これらお よび他のペプチド合成法は。

米国特許第３．８６２．９２５号、第３．８４２．０６７号、第３．９７２．８ ５９号および第４．１０５．６０２号にも例示されている。

上記の合成法は２手動法を用いてもよく、あるいは９例えば、アブライドバイオ システムダ４３０Ａペプチドシンセサイザー　（Ａｐｐｌｉｅｄ　ＢｉｏＳｙｓ ｔｅｍｓ　４３０Ａ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ）　（米国。

カリフォルニア州、フォスター・シティ）またはバイオサーチＳＡＭ１１オート マチックペプチドシンセサイザー（Ｂｊｏｓｅａｒｃｈ　ＳＡＭ　Ｉｌａｕｔｏ ｍａｔｉｃ　ｐｅｐｔｌｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ）　（Ｂｉｏｓｅａｒｃ ｈ、　Ｉｎｃ９．米国、カリフォルニア州、サン・ラフアニル）を用い、メーカ ーが供給する指示マニユアルに提示されている指示に従う自動的方法も利用でき る。

本発明のアナログ化合物を合成する過程で本発明の開示にしたがって構築される 中間体は、それ自体新規で有用な化合物なので本発明の範囲に含まれることは、 ペプチド合成の一般的な技術を有する当業者ならば容易に分かるであろう。

ｌ工り友工塗 本発明の化合物は、健全な補乳動物内でナトリウム排泄増加作用、利尿作用およ び血圧低下作用があることが判明しており、および血管拡張作用を有し、すなわ ちアルデステロンとレニンの放出を阻害する。

したがってこれらの化合物と、これを含有する組成物は。

腎臓の潅流が無効なこと、または糸球体の濾過速度が低下していることが原因の 高血圧と腎不全に加えて２例えば、うっ面心不全、ネフローゼ症候群、肝硬変お よび肺病のような各種の１？腫状態の治療の治療剤としての用途を見出すことが できる。

したがって１本発明は、単独で上記の治療上の利益を与える働きがある１本発明 の化合物（それには、化合物の非毒性付加塩、アミドおよびエステルを包含する ）の有効量を含有する組成物を提供するものである。このような組成物は、生理 学的に許容できる液体、ゲルもしくは固体の希釈剤、アジュバン！・および賦形 剤を含有していてもよい。

これらの化合物と組成物は、家畜に対するような獣医学的用途およびヒトの臨床 用途に、他の治療剤と同様の方式で哺乳類に投与するとかできる。一般に、治療 効果を得るのに必要な投与量は、被験体の体１１１ｋｇ当り約０．０１〜ｂ囲で あり、０．工から１００１００（１がより一般的である。あるいは。

これらの範囲内の投与量は、所望の治療利益が得られるまで。

長期間にわたって、一定の注入量で投与することができる。

典型的には、上記の組成物は、液体溶液もしくは懸濁液の注射可能薬剤として調 製されるが、注射する前に液体中の溶液もしくは懸濁液とするのに適切な固体の 形態としても調製され得る。組成物は乳濁液にしてもよい。活性成分は、生理学 的に許容できる。活性成分と適合する希釈剤もしくは賦形剤と混合することが多 い。適切な希釈剤と賦形剤としては。

例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセリンなど、およびその組合せ がある。さらに、所望により１組成物は。

湿潤剤もしくは乳化剤、安定化剤もしくはｐＨ緩衝剤などの補助剤を少量含有し ていてもよい。

組成物は１通常１例えば皮下もしくは静脈に注射することにより非経口投与され る。他の方式の投与に適切なその池の様式には、串刺、鼻内用エアロゾルおよび ある場合には、経口用製剤がある。串刺用の伝統的な結合剤と賦形剤には１例え ばポリアルキレングリコール類もしくはトリグリセリドがあるが、このような串 刺は、０．５〜１０％、好ましくは１〜２％の範囲の活性成分を含有する混合物 で形成される。経口用製剤は１例えば医薬グレードのマンニトール、ラクト−ん デンプン。ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭 酸マグネシウムなどの通常用いられる賦形剤を含有している。これらの組成物は 、溶液、懸濁液１錠剤、丸剤、カプセル剤、除放性製剤または散剤の形態をとり 、活性成分を１０〜９５％含有し、好ましくは２５−７０％含有している。

ペプチド化合物は、中性もしくは塩の形態で組成物に処方され得る。薬学的に許 容できる非考性塩には、　（遊離のアミ７基で形成された）酸付加塩が含まれ、 これら酸付加塩は。

例えば塩酸もしくはリン酸のような無機酸、または酢酸、シニウ酸、酒石酸、マ ンデル酸などの有機酸で形成される。遊離カルボキシル基で形成された塩は、水 酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウムまた は水酸化第二鉄のような無機塩基、およびイソプロピルアミン、　トリメチルア ミン、２−エチルアミンエタノール、ヒスチジン、プロ力インなどの有機塩基か ら誘導することができる。

ナトリウム排泄増加作用、利尿作用および血管拡張作用を示す本発明の化合物に 加えて９本発明の化合物は、有用な化合物を合成する際の中間体として利用する こともできる。あるいは、適切に選択することによって、活性レベルが減少する か全く消失する本発明の化合物は９例えば他の受容体に結合し、受容体の代謝回 転を刺激し、または分解酵素活性もしくは分解受容体活性を有する別の基質を与 えて、その結果これらの酵素もしくは受容体を阻害することによって９本発明の 範囲以外の化合物を含む他の利尿性、ナトリウム排泄増加性もしくは血管拡張性 化合物の活性を調節するのに利用できる。このような方法で用いる場合、このよ うな化合物は、他の活性化合物との混合物として用いるが、または例えばそれ自 体の担体と混合して別々Ｉこ用いることもできる。

本発明の化合物は、標識をつけた試薬を利用する免疫検定法に用いる抗血清９通 常は抗体、を製造するのに使うこともできる。簡便には、これらのポリペプチド は、必要に応じてジアルデヒド、カルボジイミドにより、もしくは市販のリンカ −を用いて、抗原性を付与する担体に、結合され得る。これらのイと合物と免疫 試薬には９発色団２例えばフルオレセインもしくはローダミンのような螢光体　 ｔ２Ｊ、　３５ｓ、　＋４０．　もしくは３Ｈのような放射性同位元素、または 磁化粒子のような各禮の標識を用いて、当該技術分野で公知の方法で標識しても よい。

これらの標識化合物と試薬、またはそれらを認識し特異的に結合することができ る標識試薬は９例えば２診断薬としての用途がある。生物学的試料由来の試料は ９本発明の化合物によって、共通抗原決定基を有する物質の存在もしくは皿を検 定することができる。さらにモノクローナル抗体を当該技術分野の公知の方法で 製造することができ、この抗体は２例えばインビボでの免疫学的類縁化合物の過 剰産生を中和する治療用途がある。

（以下余白） 大１１舛 以下の実施例は、本発明課題を限定するものではなく、例示のために提供される 。

本発明の化合物は、手作業で行われるかもしくは、製造者の指示に従ってｔ−Ｂ ｏａアミノ酸を用いて、アプライドバイオンステムズ４３０Ａペプチドシンセサ イザー（Ａｐｐｌｉｅｄ　ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ４３０Ａ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ）　（カリフォルニア州フォスターシティ−）もしくはバ イオサーチサムＩＩ自動ペプチドシンセサイザー（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ　Ｓａｗ 　ＩＩ　ａｕｔｏｍａｔｅｄ　ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ）（バ イオサーチ、カリフォルニア州すンラフィアル）で行われる固相技術によって合 成された。

残基Ｚ２−ＡＡ１１１１１−ＡＡ１１３は、通常、従来のｔ−Ｂｏａ化学法によ って、固相支持体上で調製される。利用され得る場合には、ｚ２スペーサーは、 対応するＮ１ｈ−Ｚ２−ＣＯＯＨおよびＢｏａ無水物からうまく調製されたＢＯ Ｃ−２２で保護された中間媒体を使用して、ペプチド鎖に導入される。スペーサ ーは、生成するペプチド鎖上で、ジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）の ような標準カルボキシル活性化剤を使用して、フリーのアミノ基に結合される。

３−メルカプト−２−（置換）−プロピオニルを含むペプチドとしては、例（１ 〜２８６）、または４−メルカプト−２−（置換）−ブチリルアミノ末端、例（ ２８７〜３６３）、対応する保護された３−アセチルチオまたは３−ベゾイルチ オ−２−（置換）−プロピオン酸あるいは４−アセシルチオまたは４−ベンゾイ ルチオ−２−（置換）−酪酸が使用される。Ｐｏｕｒｎｉｅ−Ｚａｌｕｓｋｉら 、Ｅｕｒ　Ｊ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　（１９８４）　１３９：２６７−２７４に記載 されるように、Ｓ−アセチルまたはＳ−ベンゾイル基は、後で、塩基性加水分解 によって除去される。

置換されたマロノイルまたはスクシノイル基を含む例については、例（６２５〜 ９１８）それらをペプチド樹脂に導入するには、一般に、Ｆｏｕｒｎｉｅ−Ｚａ ｌｕｓｋｉら、Ｊ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅ＋ａ　（１９８５）２８：１１５８−１１６ ９に記載の方法が使用され得る。ヒドロキシアミノマロノイルと呼ばれるくＮ− ヒドロキシ）カルボキサミド−２−（置換）−１−オキソ−アセチル基、および ヒドロキシアミノマロノイル基と呼ばれる３−（Ｎ−ヒドロキシ）カルボキサミ ド−２−（置換）−１−オキソプロピル基を含むペプチドについては、これらの 基は、Ｆｏｕｒｎｉｅ−Ｚａｌｕｓｋｉ　（前出）およびフランス特許第８１． ２３．４８８号に記載される方法に従って導入され得る。Ｎ−カルボキシアルキ ルを含むペプチド、例（３６４〜６２４）は、Ｆｏｕｒｎｉｅ−Ｚａｌｕｓｋｉ ら、Ｊ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｗ　（１９８３）　２６：６０−６５、Ｐａｔｃｈｅｔ ｔら、Ｎａｔｕｒｅ（１９８０）　２８８：２８０−２８３、またはＭｕｍｆｏ ｒｄら、Ｂｊｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏ　ｈ　ｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏ＋ｎｍｕｎ　（１９８ ２）　１０９：１３０３−１３０９の方法を使用して調製される。Ｎ−アルキル 化は、対応する置換されたα−ケトカルボン酸またはエステルを用いて、ペプチ ド樹脂上でフリーのアミ７基を還元してアミン化することによるルーチンで実施 される。

Ｎ−ホスホリルペプチド、例（９１９〜９８１）は、Ｋａ＋ｉら、Ｂｉｏｅｈｅ ｍ団ユ（１９７９）　１８：３０３２−３０３８に記載されている方法を使用し て得られる。

主１−Ｎ Ｂｏａ−ＡＡｌ、、、ＡＡ、−１−ＡＡ、、−０−ポリスチレン　の−１グラム の選択されたＢｏａ−ＡＡｎ−０−ポリスチレン樹脂（０，２−０，６ｍｍｏｌ ｅ／ｇ樹脂）（例えば、Ｐｅｎ１ｎｓｕｌａ　Ｌａｂｓ、　Ｉｎｃ、より入手可 能）を、Ｂｏａ−ＡＡｎ−＋−ＯＲの結合のために計画Ａに従って処理する。

計１ １）ジクロロメタン（ＣＨ２Ｃ１２）で３回洗浄；２）　ＴＦＡ　：　ＣＲ２Ｃ １２：エタンジチオール（ＥＩ）Ｔ）　（体積比４Ｓ：Ｓ（１：５）で１分間処 理； ３）　ＴＦＡ：　ＣＨ２Ｃｌ２：　ＥＤＴ（体積比４５：５０：５）で２０分間 処理（体積比４５：５０：５）　； ４）　ＣＨ２Ｃｌ２で３回洗浄； ５）　ＣＨ２Ｃ１ｚ中のジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）１０％（Ｖ ／Ｖ）で１分間処理することを２回繰り返す；６）　ＣＨ２Ｃｌ２で２回洗浄； ７）メタノール（ＭｅＯＨ）で２回洗浄；８）　（５−７）を一度繰り返す； ９）　ＣＨ２Ｃｌ２で３回洗浄； １０）あらかじめ調製した適切に保護されたＢｏＣ−アミノ酸の対称の無水物を ＣＨ２Ｃｌ２もしくはジメチルホルムアミド（ＤＭＰ）／ＣＨ２Ｃｂ（Ｓｏ：Ｓ ｏ体積）、中に溶解した溶液の１〜６当量を添加（Ｂｏａ−Ａｓｎ−ＯＨ，Ｂｏ ａ−Ｇｉｎ−ＯＨおよびＢｏｃ−Ａｒｇ（ＴＯＳ）−ＯＨがＮ−ヒドロキシベン ゾトリアゾールを用いて活性エステルとして結合された）； １１）ＣＨ２Ｃ１２で２回洗浄； １２）　１ｏＳＤＩＰＥＡテ２回洗浄；１３）ＣＨ２Ｃ１２で２回洗浄： １４）ＭｅＯＨで２回洗浄； １５）ＣＨ２Ｃｈテ２回洗浄； １６）工程（１１−１５）を一度繰り返す；１７）Ｘａｉｓｅｒら、Ａｎａｌ、 　Ｂｉｏｃｈｅｔ　３４：５９５　（１９７０＞に従ってニヒドリン反応によっ て試験する。結合反応が不十分な場合には、工程（１０−１６）を繰り返すか、 Ｎ−アセチルイミダゾール（ＤＭＦ中、０．３０Ｍ）、もしくはＣＨ２Ｃｌ２中 で過剰の無水酢酸を用いてキャップ合成する。

主！一旦 Ｂｏｃ−ＡＡ−−メチルベンズヒドリルアミン　の選択され九Ｂｏｗ−ＡＡ、、 −ＯＢを、以下に示す様に、Ｎ、Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミドを介し てｐ−メチルベンズヒドリルアミン（ｐＭＢＨＡ）樹脂に結合させる。

１匹一旦 １）　ｐＭＢＨＡ　ＨＣＩ樹脂を洗浄；２）上記樹脂をＤＩＰＥＡ（Ｄ　Ｃ）１ ２Ｃ１２溶液１０％（Ｖ／Ｖ）テｚ回洗浄；３）　ＣＨ２Ｃｌ２で２回洗浄； ４）　ＭｅＯＨで２回洗浄； ５）　ＣＨ２Ｃｌ２で２回洗浄； ６）反応時間０．５〜２４時間において、ＣＩ（２Ｃ１２中に溶解させた、あら かじめ調製した適切に保護されたＢｏａ−アミノ酸の対称の無水物の１〜６の当 量を添加： 反応しなかったアミン茎は、０．３０／Ｍ　Ｎ−アセチルイミダゾール：ＤＭＦ もしくは無水酢酸：ＣＨ２Ｃｌ２でアセチル化する。

次の実施例は、典型的なアナログ化合物（Ａｎａｌｏｇ　＃として示される）の 化学合成を示しており、本発明のある局面を例示する。

Ｌ１匹上 アナログ＃１の−： ＭＢＰ−Ｇ−Ｇ−Ｒ−１−Ｄ−Ｒ−１−ＮＨＩｇｍのＩ）ＭＢＨＡ樹脂（０，２ ５ｗｅｇ／ｇ、　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｆｏｓｙｓｔｅｍｓ、　Ｆｏｓｔｅｒ　Ｃ １ｔｙ、　ＣＡ）を、必要とされる配列のアミノ酸（Ｂｏａ−１１ｅ−０■。

Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−０Ｈ，Ｂｏａ−Ａｓｐ（０−ｃＨｅｘｙｌ）−０Ｈ ，Ｂｏｃ−［１ｅ−ＯＨ，Ｂ。

ｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−０１１１，ＢｏＣ−Ａｓｐ（０−ｃＨｅｘｙｌ）−０１ （、Ｂｏｃ−１１ｅ−ＯＨ，Ｂｏａ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ＯＲ，Ｂｏａ−Ｇｌｙ −ＯＲの順に導入される）と共に、手順Ａに、次いで手順Ｂによって処理した。

Ｂｏａ基の脱保護を行った後に中和し、ＭＢＰ−Ｇ−基を、（Ｄ、Ｌ）−チオル ファンのカルボキシル活性化型を使用して付加した。これは、（Ｄ、　Ｌ）−チ オルファン（１，００１１１ｇｘ　Ｑ！９　＋ｎｍｏｌ、Ｂａｃｈｅｍ　Ｂｉｏ ｓｃｉｅｎｃｅｓ、　Ｐｈ１ｌａｄｅｌｐｈｉａ、　ＰＡ）を、Ｎ−ヒドロキシ ベンゾトリアゾール（Ｏ４０１１１０１％１当１１）およびＣｈＣ１２中のｌ　 Ｍ　ＤＣＣ（ｌ当量）で処理して、（Ｄ。

Ｌ）−チオルファンの活性化エステルを形成し、これを、ＣＨ２Ｃｌ２／ＤＭＰ 　（５０１５０）中で４時間、脱保護ペプチド樹脂と反応させることによって達 成された。この樹脂をＣ１（２Ｃ１２で３回、ＭｅＯＨで２回洗浄し、真空内で 乾燥した。

このペプチド樹脂を、無水フッ化水素（ＨＦ）を含有する１０％アニソール、２ ％エチルメチルスルフィドで、−１０℃でｓｏ性分間さらに０℃で３０分間処理 した。ＵＰを真空内で取除し、ペプチド／樹脂混合物を、ジエチルエーテルに懸 濁し、次いでクロロホルムおよびエーテルで交互に３回洗浄した。エーテルで最 終洗浄した後、ペプチドを２．０Ｍ酢酸で樹脂から抽出し、蒸留水で希釈し、凍 結乾燥した。

セファデックスＧ−ＺＳＦ（Ｐｈａｒｍａｅｉａ）上で、溶出剤として０．５Ｍ の酢酸を使用することによって脱塩し、次いで、ＣＭ−セファロース（Ｐｈａｒ ｍａｃｉａ）またはＣＭ−セルロース（Ｗｈａｔｍａｎ）を用いたイオン交換ク ロマトグラフィーのＮＨ４０Ａｃのグラディエンド溶出により、粗ペプチドを精 製した。溶出画分を、０．１％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含む１５〜３５ ％のアセトニトリルグラデイエンドによりＶｙｄａｃ　Ｃ１８カラムでの逆相液 体クロマトグラフィーによって分析した。セミ分取用ＨＰＬＣにより、精製ペプ チド＃１を得た。これは、アミノ酸分析によって同定された。

支五匠ｌ アナログ＃４４５の− Ｆ　Ｎ　Ｆ−４−ＡＰＡ−Ｒ−１−ヒ且ヨニ担１１　ｇ＋ａのｐＭＢＨＡ樹脂（ ０，４５＋＊ｅｇ／ｇ、、ｔ１．ｓ、　Ｂｉｏｃｈｅｍｆｃａｌ）を、必要な配 列のアミノ酸（Ｂｏｃ−１１ｅ−ＯＲ，Ｂｏａ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ＯＲ，Ｂｏ ｅ−Ａｓｐ（０−ｃＨｅｘｙｌ）、−ＯＲ，Ｂｏｅ−１１ｅ−ＯＨ，ＢｏＣ−Ａ ｒｇ（Ｔｏｓ）−０１（、Ｂｏｅ−ｐ−アミノフェニル酢酸（Ｂｏａ−４−ＡＰ Ａ−ＯＨ）、　Ｂｏｅ−Ｐｈｅ−ＯＨの順に導入される）と共に手順Ａに従って 、次いで手順Ｂに従って処理した。ＢｏＣ基の脱保護および中和に次いで、フリ ーのアミンの還元的アミン化を次のようにして行った。つまり、ＤＭＦ中、触媒 としての酢酸（１００μｍ）の存在下、フェニルピルビン酸（２４６ｍｇ、　１ ．５　ｍｅｑ、　Ａｌｄｒｉｃｈ）および９５　ｍｇのＮａＣＮＢＨ３を用いて 、室温で１日処理することによって行った。次いで、この樹脂を、ＤＭＦおよび ＣＨ２Ｃｌ２、さらにＭｅＯＨで洗浄し、次いで、真空乾燥した。

無水フッ化水素（ＨＦ）を含有する１０％アニソール、２％エチルメチルスルフ ィド中で一１０℃で３０分間、ざらに０℃で３０分間、処理した。ＨＦを真空内 で除去し、ペプチド／樹脂混合物をジエチルエーテル中に懸濁させ、２０分間攪 拌した。この混合物を、クロロホルムおよびエーテルで交互に３回洗浄した。最 終のエーテル洗浄後、このペプチドを、２．０Ｍ酢酸で樹脂から抽出し、蒸留水 で希釈し、凍結乾燥した。

ＮＨ４０Ａｃのグラディエンド溶出によるＣＭ−セファロース（Ｐｈａｒｍａｃ ｉａ）またはＣＭ−セルロースｆｆｈａｔｉａｎ）のカチオン交換クロマトグラ フィーによって、粗ペプチドを精製した。０．１％のＴＰＡを含む１５〜３５％ のアセトニトリルグラデイエンドを使用したＶＹｄａｃ　Ｃ１８カラムのセミ分 取用ＨＰＬ、Ｃによって、ペプチドの最終精製を行った。アミノ酸分析によって 、ペプチド＃４４５の構造を確認した。

′ｉＪｔ！ｌ！Ｌ３ ＡＮＰ７去二二Ｚス　六　への　ム 使用されるアッセイ系は、５ｃｈｅｎｋ、　Ｄ、Ｂ、、ら、Ｂｉｏｃｈｅ＋＊　 Ｂｉ。

１＞　ｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏ＋ｏｎ＋ｕｎ　（１９８５）１２ユニ４３３−４４２お よびｓｃａｒｂｏｒｏｕｇｈ、　Ｒ。

Ｍ、、　Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｔａ　（１９８６）２６１：１２９６０−１２９ ６４の方法から採用する。

これらのアッセイは、ウシの大動脈平滑筋（ＢＡＳＭ）またはウシの大動脈内皮 （ＢＡＥ）細胞中の受容体を使用する、ＡＮＰとの拮抗によるクリアランス受容 体結合親和性を測定する。また、Ｍａａｃｋ、　Ｔ、ら、５ｃｉｅｎｃｅ　（１ ９８７）２３８：６７５−６７９に記載されている、ラットの潅流され、単離さ れた腎臓において、クリアランス受容体に対する受容体結合親和アッセイが使用 される。

本発明で例示する化合物を、１２６位のチロシンでヨウ素置換した１１２５標識 ｒＡＮＰ　（１０２〜１２６）を用いるＢＡＳＭアッセイでテストンた。標識さ れた標準品がＢＡＳＭ細胞に結合した最大値の５０％が、置換される濃度として 示された結果は、に１（ａｐｐ）と表す。

従って、ＫＮ（ａｐｐ）が低ければ低いほど、アナログの結合がより有効となる 。

表１は、この拮抗結合アッセイの結果を示すものであり、その結果は、ＡＮＰ結 合の最大値の半分を阻害するのに必要とされるアナログの濃度を、Ｋｉ（ａｐｐ ＞　（平価はナノモル／リットル）とし”Ｃ示す。

（以下余白） 紅 ＢＡＳＭレセプター結合アッセイ ｙ＋！！Ｌ　ｉ盗　■ｈ」頭恒紅 ｒＡＮＰ　（１０２−１２６）　７．５１２　ＭＢＰ−Ｄ−Ｇ−Ｒ−［−Ｄ−Ｒ −１−ＮＢ２　２０７．４２３　ＭＢＰ−［Ｄ−Ａｓｐ］−Ｇ−Ｒ−１−Ｄ−Ｒ −１−ＮＢ２　Ｈ５，４７８ＭＢＦ’−［−Ｇｌｕｌ−Ｒ−１−Ｄ−Ｒ−１−Ｎ ｈ　２０１．８１２２　ＭＢＰ−４−ＡＰＡ−Ｒ−１−Ｄ−Ｒ−１−ＮＢ２　１ ０．９３６４　Ｆ−［Ｎ］−Ｇ−Ｇ−Ｒ−１−Ｄ−Ｒ−１−ＮＢ２　６６．９４ ２７　Ｆ−［Ｎ］−［ｂｅｔａ−Ａｌａｌ−Ｇ−Ｒ−１−Ｄ−Ｒ−１−ＮＢ２１ １．５４３６　Ｆ−［Ｎ］−Ｆ−Ｇ−Ｇ−Ｒ−１−Ｄ−Ｒ−１−ＮＢ２　２７． ３４４５　Ｆ−［Ｎ］−Ｆ−４−ＡＰＡ−Ｒ−１−Ｄ−Ｒ−１−ＮＢ２　６．５ ４６３　Ｆ−［Ｎ］−Ｆ−Ｄ−Ｇ−Ｒ−１−Ｄ−Ｒ−１−ＮＢ２　２２５．４５ ４４　ｈｏｍｏＦ−［Ｎ］−Ｆ−［−Ｇｌｕｌ−Ｒ−１−Ｄ−Ｒ−１−ＮＢ２　 ５８．２７０２　ＨＡＦ−［Ｎ］−Ｇ−Ｇ−Ｒ−トＤ−Ｒ−１−Ｎ１１２　４． ６１　ＭＢＰ−Ｇ−Ｇ−Ｒ−１−Ｄ−Ｒ−１−ＮＴ１２　１９．６ラツトの腎臓 レセプター結合アッセイにおいて、天然の、２８残基に標識したＡＮＰを使用し た２１２６位のチロシンと連結した標識を有する、１１２５で標識したｒＡＮＰ （９９−１２６）。このアッセイの結果を、拮抗化合物の有無のそれぞれにおい て、標識されたｒＡＮＰ（９９〜１２６）の結合したものとフリーのものとの割 合として、表２に示す。表２に示すように、アナログ４３６は、レセプターに対 して、標識された化合物とうまく拮抗する。

紅 結合／フリー（１２Ｊ）ｒＡＮＰ（９９−１２６）の割合虫良血　！！衾婆 標識された化合物 （４ｘ　１０”’Ｍ）　５９±１６ 標識された化合物 （４ｘ　１０１０−Ｂ２　０．５６ ｒＡＮＰ（９９−１２６） 標識された化合物 （４ｘ　１０”１２Ｍ） ＋　１．３１ ＃４３６ （Ｌ　ｘ　１０−’Ｍ） 火ｌＩｔ先 エンドペプチダーゼ２４．１１の阻 エンドペプチダーゼ２４．１１は、（ｙｓ１１１５−ｐｈｅ１８６アミド結合に おける開裂によって、ＡＮＩ’を不活性にする。この分解を阻止する、本発明の 化合物の能力を、Ｕｒａ、　Ｎ、、ら、■鉦鼓ユ■（１９８７）　３２：５０７ −５１３の手順の変形によって、基質としてブラジキニンの代わりにｒＡＮＰ（ ９９−１２６）を使用することによって、アッセイした。

簡単にのべると、ラットの尿を収集し、Ｕｒａ　（前出）によって記載されるよ うにセファデックスＧ−２５上で脱塩し、アミノペプチダーゼ阻害剤ベスタチン （ｂｅｓｔａｔｉｎ）　（１０μｇ／ｍｌ）、ジャガイモの塊茎カルボキシペプ チダーゼ阻害剤（１０μｓ／ｍｌ）およびアプロチニン（ｓ、　ｏｏｏカリクレ イン阻害性単位／ｍｌ）を含むｐＨ７，２の、　０．１　Ｍ　Ｔｒｉｓ緩衝溶液 １００μｌ中に４μｍのサンプルと入れたものを、３７０Ｃで１５分間インキュ ベートした。

次いで、最終体積のＯ，Ｓ＋＊１に２−１０ＭｇのｒＡＮＰ（９９〜１２Ｂ＞を 加えることによって、アッセイを開始し、３７’Ｃで１０〜２０分間インキュベ ートした。反応は、沸騰、遠心分離および凍結によって完了した。

エンドペプチダーゼの阻止能力がテストされる化合物を、基質を加える１５分前 のブレインキュベーション混合物に加えた。

阻害剤を用いてまたは用いないでインキュベートした、凍結サンプルを解凍し、 ＨＰＬＣで分析し、出発物質であるｒＡＮＰ　（９９〜１２６）および分解生成 物の濃度を決定した。Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８逆相ＨＰＬＣカラム（４，６ｍｍ　Ｉ Ｄ　ｘ　１２．５　ｃｃ　５　ｔｔＭ、　３００Ａ）において、ＨＰＬＣ分析を 行った。０．１％ＴＦＡを含む、１５〜３５％のアセトニトリルの直線グラディ エンドを、パーキン・ニルマー社製シ！Ｊ−ス４　ａｐｔ、ｃ　シＸ　ｆ　Ａ　 ｌｉ：おいて、１．０　＋ｇｌ／＋ｇｉｎテ行った。２２０ｎ１１および測定さ れたペプチドのピーク高度において、溶出物をモニターした。

テストサンプルにおけるｃ、５ｆｉｌｓ−ｐｈｅＩＩＳの開裂代謝産物のピーク ９割合（パーセント）を、コントロールにおけるこの代謝産物のピーク高度と比 較して、結果を計算した。その結果を表３に示す。

表」工 代謝産物生成の阻止率（％） １０μＭ　９２　９７　９７　９２　２０　０１ｔｔＭ　６７　８０　７２４５ ０　−１００ｎＭ　Ｓ３　３０　２５　２３　＝−２０ｎＭ　１２　０　１２０ −　− 表３に示すように、本発明のアナログ＃１は、阻害剤としてチオルファンはど強 力ではないが、約１μＭのＥＤｓｅで、阻止することが可能である。さらに、ア ナログ＃１３３は、チオルファンよりは強力ではないが、ボスボラミドンに匹敵 する。

案１１ｔｉ インビボでのアッセイ 動物の全身における、アナログ＃１の利尿およびナトリウム排泄増加能力は、以 下のように決定された。イナクチン（体重１００　Ｂ／ｋｇ）で麻酔した、雌の フプラーグードーリーラット（２３０〜２６０　ｇ）を、大腿動脈（Ｂ、　Ｐ、 モニター）、大腿静脈（薬物および塩類の注入）および膀胱（尿の収集）にカニ ユーレを配置することによってカテーテルを挿入した。手術の後、およびテスト 物質の投与前に生理食塩水を、尿の流れを安定させるために、２０μｍ７ｗ１ｎ で４５分間注入した。尿の流れが安定したかどうかは、数１０分間、尿を収集す ることによって決定された。一旦、安定した尿の流れが得られると、１０分間の 収集を３回行い（コントロール）、次いで注入投与を１０回行った後、２０μｌ ／ｓｉｎで１時間、テスト化合物の投与を行った。

試験的な注入期間に次いで、回収期中に２０μｍ／＋ｉｎでさらに２時間、生理 食塩水を注入した。１０分間の収集期間書こ収集された尿の量を、重量測定によ って決定した。尿ナトリウム排泄量ｕＮ＊Ｖを、光度計によって決定した。比較 として、表４には、ｈＡＮＰ　（１０２〜１２６）および化合物＃１の３００　 ｎｇ／ｋｇ／分での注表土 ラットにおけるｈＡＮＰ（１０２〜１２６）および＃４３７の影響の比較１０μ ｇ／　ｋ　ｇ／分　１１．６±２．７　３．７２±１．１化合物を注入したラッ ト（ｎ・７）における、実験およびコントロール期間（平均±ＳＥ）の間の差（ −）。

麻酔をかけたラットのナトリウム排泄増加および利尿に対する化合物の特異的効 果を、第５Ａ図から第５Ｄ図に示す。

ナトリウム排泄増加および利尿の割合（パーセント）および絶対増加±ＳＥを、 これらの図面に示す。１０μｓ／　ｋ　ｇ／分で注入されたアナログ＃ｌは、尿 ナトリウム排泄において、平均１０倍の増加を示し、尿の流量において２から３ 倍の増加を示す。第２または第３の実験的収集期間まで、最大の影響力は観察さ れず、注入の間保持される。ＡＮＰ（１０２〜１２６）による影響と比較して、 アナログ＃１については、基礎となる（ｂａｓｅｌｉｎｅ）尿の流れおよびナト リウム排泄率にゆるやかに戻るのが観察され、このことは、一旦阻止されたクリ アランス機構が、ＡＮＰのクリアランスを完全に行う状態になるまでには、非常 に時間がかかるという概念と一致する。

ＦＩＧ、Ｉ Ｋｌ　：　Ｇｌｕ　（Ｅ）ｚ　Ａｓｐ　（Ｄ）；　シフ？４＞ｆＥ父　（Ｃｙａ ）：ｌｌ：県人：ＬＹｓ（ｘ）ｒＡｒｑ（Ｒ）Ｆノルニ七ン　（Ｏｒｎ）電蓄法 ： 探＆：　Ｈｉｓ　（Ｈ） Ｃｙｓ　（Ｃ）　Ｇｌｎ　（Ｑ）　Ｘ１ｅ　（Ｉ）Ｃｉｔ　、Ｓａｒ　ｔＢｕＡ ＭＳＯＢｅｔａ−Ａｌａ　ｔＢｕＧ　ＰｈｑＬｙｓ　（Ａｃｅｔｙｌｌ　Ａｉｂ 　Ｎ−ＭｅＩｌｅ　Ｎａ１２Ｎｌｅ　Ｎａ１ｌ Ｃｈａ　ＢＦ ＺＩ　Ｆ／よフを二ルアうニル　ｐ　）ＬＡＪ’　（まモの　ヒドコ拌メ一１− ：Ｚ４　Ｎａ１２　＋２　３−（２’−す７如りアラニｔしｔ　）ｌＡＮａＬ　 ２１ｊ　’（のヒトパ口そサメート：ＦＩＧ、　２　Ｃｃｏｎｔｄ、） ２５　Ｎａ１ｌ・＋よ　３−（１’−プ１ｈｒｂ）ア）ｚル；　ＨＡＮＩＩＩ　 Ｉ　Ｌｚ　ｑｅ）ヒドロキーｒｔ−Ｆ：Ｚ６　Ｃｈａ　は　３−（″／フクロ午 シル）アラニル；　ＨＡＣｈａ　はそのヒドロキザメー）：Ｚ７　ｈｏｍｏＦ　 ｌよ　声２ｔフーールアラニ＋Ｌ／　；　）ＩＪＪｈｏｍｏＦ　ｌよ　１ｒｔｖ ヒドロギザメーＦ！ＦＩＧ、　２　Ｃｃｏｎｔｄ、） Ｚ８　ｈｏｍｏＣｈａ　は　３−（うグロヘキ”Ａ＋／メ＋−ル）アラ；）Ｉｙ ；　ＨＡｈｏｍｏＣｈａ　ｌ’；ＡＦＩＧ、　２．Ｃｃｏｎｔｄ、） ＦＩＧ、　２　（ｃｏｎｔｄ、） ｚ１４　Ｘ［ＮｌＮａ１ｌ　ｉｓ　ｄｅｒｉｖａｔｉｚｅｄ　３−（１’−ｎａ ｐｈｔｈｙｌ）ａｌａｎｙＬ。

ｗｈｅｒｅｉｎ　Ｘ　ｉｓ　Ｆ、　ｈｏｍｏＦ、　ｏｒ　Ｇ、　ｏｒ　ｔｈｅ　 ｈｙｄｒｏｘａｍａｔｅＺ１５　Ｘ［Ｎ）Ｃｈａ　ｉｓ　ｄｅｒｉｖａｔｉｚｅ ｄ　３−（ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ）ａｌａｎｙｌ、　Ｗｈ＠ｒ＠ｉｎＸ　ｉｓ　 Ｆ、　ｈｏｍｏＦ、　ｏｒ　Ｇ、　ｏｒ　ｔｈｅ　ｈｙｄｒｏｘａｍａｔｅ　ｔ ｈｅｒｅｏｆ＝２１６　Ｘ［Ｎ］ｈｏｍｏＦ　ｉｓ　ｄｅｒｉｖａｔｉｚｅｄ　 ｈｏｍｏｐｈｅｎｙｌａｌａｎｙｌ、　ｗｈｅｒｅｉｎ　ＸＦＩＧ、　２　（ｃ ｏｎｔｄ、） Ｚ１７　Ｘ［Ｎ］ｈｏｍｏＣｈａ　ｔｔ　３−にグυヘキ４７＋、＜走←し）ア ヲｗｔ、、；ｈ４ｔｒ；刈まＦ、　ｈｏｍｏＦあシいＩＪ　に、あ紅・Ｃよ桑０ ヒ戸口キザメート：ｚ１９　、ボスＡミソル−ｆ　（ｚ。

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Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．哺乳類において、ナトリウム排泄増加作用、利尿作用および／または血管拡 張作用を有する直鎖ペプチド化合物であって、該直鎖ペプチド化合物は次式を有 する：Ｚ１Ｚ２−ＡＡ１０９−ＡＡ１１０−ＡＡ１１１−ＡＡ１１２−ＡＡ１１ ３−Ｚ３　（１）ここで、各ＡＡ１０９およびＡＡ１１２は、独立して、塩基性 ／非環式の、または中性／極性／大型／非芳香族のアミノ酸残基であり、そして 、ＡＡ１０９は、中性／無極性／大型／非芳香族のアミノ酸残基であり得； ＡＡ１１０は、ＤまたはＬ配置の中性／無極性／大型／非芳香族アミノ酸残基で あり； ＡＡ１１１は、酸性のアミノ酸残基であり；ＡＡ１１３は、ＤまたはＬ配置の中 性／無極性／大型／非芳香族のアミノ酸残基であるか、もしくは共有結合であり ；そして、ここで、Ｚ１は、 ▲数式、化学式、表等があります▼ ここで、Ｘ１は、４〜１４Ｃの疎水性環式または非環式残基であり、Ｘ２は、式 中の−ＣＨ−から１．５〜７Åの範囲において金属配位原子を含み、該金属配位 原子は、ＳおよびＯから選択され、そして−Ｘ３−は、単結合、−ＣＨ２−、− ＣＯまたは−ＮＨ−であり；Ｚ２は、ＡＡ１０９とＺ１の疎水性部分との間に４ ．５〜１５Åの距離を提供することができるスペーサー基であり；Ｚ３は、（Ｏ Ｈ）、ＮＨ２、ＮＨＲ′′またはＮＲ′′Ｒ′′′であり、ここでＲ′′または Ｒ′′′は、それぞれ独立して１〜１０個の炭素原子の直鎖または分岐鎖アルキ ルであり、１または２個の炭素はＯ、ＮまたはＳによって置換され得；あるいは １〜２０個のアミノ酸残基のペプチド、あるいはそのアミドまたはアルキルアミ ドであるが、ＡＡ１１３が共有結合の際には、Ｚ３は、（ＯＨ）、ＮＨ２または ペプチドではあり得ない；そして 該式において、隣接するアミノ酸残基の間の１個またはそれ以上のアミド結合は 、必要に応じて−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ＝Ｃ Ｈ−、−ＣＯＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−および−ＣＨ２ＳＯ−からなる 群から選択される連結基によって置換され得る。 ２．Ｚ１が、 ▲数式、化学式、表等があります▼ である請求項１に記載の化合物； ここで、Ｘ１は、少なくとも１個のＣＨ２、ＮＨ、ＯまたはＳ連結基を介して結 合する環式（５〜１２員環）の芳香族または非芳香族基を含み；そして −Ｘ２は、−ＣＨ２ＳＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＯＨ 、ＣＨＲＣＯＯＨから選択され；Ｒは、−ＣＨ２Ｐｈまたは−ＣＨ２ＣＨ２Ｐｈ であり、Ｐｈは、フェニル、−ＣＯＮＨＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＮＨＯＨ、、ＨＨＣ Ｈ２ＣＯＯＨおよび−ＮＨＰＯ（ＯＲ′）２であり、各Ｒ′は、独立してＨまた はアルキル（１〜７Ｃ）である。 ３．Ｚ１が以下よりなる群から選択される、請求項２に記載の化合物； ▲数式、化学式、表等があります▼▲数式、化学式、表等があります▼▲数式、 化学式、表等があります▼▲数式、化学式、表等があります▼および▲数式、化 学式、表等があります▼４．Ｚ２が以下よりなる群から選択される、請求項１か ら３に記載の化合物： （ａ）−（ＡＡ）ａ−：ここで、ＡＡはアミノ酸であり、そしてａは１または２ である； （ｂ）−（Ｐ）ｎ−（ＣＯ）−ｘ：ここで、Ｘは０または１、ｎは１〜６、そし てＰはＣＨ２であり、Ｎ−Ｎが生じないという条件下において、該−ＣＨ２−基 の１から２個がＮＨによって置換され得る；および（ｃ）−（Ｑ）ｎ−Ｂ−（Ｑ ）ｍ−（ＣＯ）ｘ−：ここで、Ｘは０または１で、各ｍが０から３であり、ｍの 合計は５以下であり、−Ｂ−は必要に応じてＮヘテロ原子を含む、飽和または不 飽和の５または６員環であり、−Ｎ−Ｎ−が生じないという条件下において、Ｑ はＣＨ２またはＮＨである。 ５．Ｚ３がＮＨ２またはＮＨＲ′′、あるいは１〜２個のアミノ酸残基のペプチ ド、あるいはそのアミドまたはアルキルアミド型である、請求項１から４に記載 の化合物。 ６．ＡＡ１０９−ＡＡ１１０−ＡＡ１１１−ＡＡ１１２−ＡＡ１１３が、Ｒ（Ｉ ／Ｍ）ＤＲＩであり、その中の多くとも１個の残基が、 ＡＡ１０９においてＲを、Ｋ、アセチル　Ｋ、Ｑ、Ｎ、しまたはＮＭｅｌｌｅと 置換すること、 ＡＡ１１８においてＩまたはＭを、Ｖ、Ｖ＋、Ｌ、Ｌ＋、Ｉ＋、Ｍ＋、ｔ−Ｂｕ Ａ、ｔ−ＢｕＧまたはＣｈａと置換すること、Ａ１１１においてＤをＥと置換す ること、Ａ１１２においてＲを、Ｑ、Ｎ、Ｋ、Ｏｒｎまたはｉｔと置換すること 、および Ａ１１３においてＩを、Ｍ、Ｍｔ、Ｖ、Ｖｔ、Ｌ、Ｌｔ、Ｉｔ、Ｐ、Ｎ−Ｍｅｌ ｌｅ、ｔ−ＢｕＡまたは共有結合と置換すること、ここでｔは、Ｄ型を示す、 によって置換される、請求項１から５に記載の化合物。 ７．ＡＡ１０９−ＡＡ１１０−ＡＡ１１１−ＡＡ１１２−ＡＡ１１３が、以下よ りなる群から選択される、請求項６に記載の化合物：Ｋ（Ｉ／Ｍ）ＤＲＩ Ｑ（Ｉ／Ｍ）ＤＲＩ ＲＶＤＲＩ ＲＩｔＤＲＩ ＲＭｔＤＲＩ ＲＬＤＲＴ Ｒ（Ｉ／Ｍ）ＥＲＩ Ｒ（Ｉ／Ｍ）ＤＫＩ Ｒ（１／Ｍ）ＤＱＩ Ｒ（Ｉ／Ｍ）ＤＲＬ Ｒ（Ｉ／Ｍ）ＤＲＭ Ｒ（Ｉ／Ｍ）ＤＲＭｔ Ｒ（Ｉ／Ｍ）ＤＲＩｔ Ｒ（Ｉ／Ｍ）ＤＲＶ　および Ｒ（Ｉ／Ｍ）ＤＲＩ ここで、ｔは、それがついているアミノ酸がＤ型であろことを示す。 ８．隣接するアミノ酸残基の間の１またはそれ以上のアミド結合が、−ＣＨ２Ｎ Ｈ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シスおよびトランス ）、−ＣＯＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−および−ＣＨ２ＳＯ−からなる群 から選択される連結基によって置換され得る、請求項１から７に記載の化合物。 ９．Ｚ１が、第２図の置換基から選択される、請求項１から８に記載の化合物。 １０．Ｚ２が、−Ｇ−Ｇ−、−Ｄ−Ｇ−、［Ｄ−Ａｓｐ］−Ｇ−、Ｄ−またはＬ −ｒ−ＧＩｕ、Ｄ−またはＬ−β−Ａｓｐ、４−ＡＢ、４−ＡＰＡ、４−ＰｌＰ および４−ＡＭＣから選択される、請求項１から９に記載の化合物。 １１．ＡＡ１０９−ＡＡ１１０−ＡＡ１１１−ＡＡ１１２−ＡＡ１１３−Ｚ３が 、Ｒ（Ｉ／Ｍ）ＤＲ−ＮＨＲ′′であり、Ｒ−が３〜１０個の炭素のアルキルで ある、請求項１から１０に記載の化合物。 １２．ＡＡ１０９−ＡＡ１１０−ＡＡ１１１ＡＡ１１２−ＡＡ１１３がＲＩＤＲ Ｉであり、そして、Ｚ３がＮＨＨ２である、請求項１から９に記載の化合物。 １３．アナログ＃１２２：ＭＢＰ−４−ＡＰＡ−Ｒ−Ｉ−Ｄ−Ｒ−Ｉ−ＮＨ２で ある、請求項１に記載の化合物。 １４．第４図の化合物からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。 １５．ナトリウム排泄増加剤、利尿剤および／または血管拡張剤として有用な組 成物であって、請求項１の、治療学上有効な量の化合物を、薬学的に受容され得 る担体と共に含む、組成物。 １６．哺乳類において、ナトリウム排泄増加作用、利尿作用および／または血管 拡張作用を有するペプチド化合物の製造方法であって、該ペプチド化合物は、請 求項１の式の化合物、またはその薬学的に受容され得る塩を含み、該方法は、以 下の工程を包含する： ａ．反応混合物中において固体樹脂担体と結合させた保護されたペプチドを調製 する工程であって、該ペプチドは、上記のアミノ酸配列を有する； ｂ．該固体樹脂担体をペプチドから除去し、該ペプチドを脱保護する工程； ｃ．上記のように、所望の有機置換基を付加するために、必要に応じて該ペプチ ドを修飾する工程；およびｄ．反応混合物から該ペプチドを単離し、必要に応じ て、該ポリペプチドをその酸付加塩に変化させる工程。