JPH04501259A - Ｃｒｆ拮抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ペプチドおよびそのペプチドを用いた補乳動物の集的療法に関する。

より詳細には、ヘンテトラコンタペプチドＣＲＦの拮抗体、その拮抗体を含む医 薬組成物および類似体を使った哺乳動物の治療法に関する。

発明の背景 視床下部が腺下垂体にある、コルチコトロピン産生細胞の分泌機能調節に対し重 要な役割を演じていることが、実験や臨床観察により示唆されている。２５年以 上前、ガイレミン（Ｇｕｉｌｌｅｍｉｎ）、ローゼンバーグ（Ｒｏｓｅｎｂｅｒ ｇ）、サフラン（Ｓａｆ　ｆ　ｒａｎ　）とスカーリ−（Ｓｃｈａｌｌｙ）は独 々別々に、インビトロに培養された下垂体や器官培養により保持されている下垂 体によるＡＣＴＨ分泌速度を速める因子が視床下部に存在することを提唱した。

しかし、１９８１年に至るまで、生理学的にコルチコトロピン放出因子（ＣＲＦ ）と認められる分泌促進物質の構造は明らかにされなかった。１９８１年になっ て、米国特許第４，４１５．５５８号明細書において開示されるように、ヒツジ ＣＲＦ（ｏｃＲＦ）のアミノ酸配列が下記の通りであることが判明した。

Ｈ−Ｓｅ　ｒ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｕ−Ｐｒ　ｏ−Ｐｒ　ｏ−Ｉ　１　ｅ−８ｅ　 ｒ　−Ｌｅ　ｕ　−Ａｓ　ｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈ　ｒ−Ｐｈｅ　|Ｈｉ　５ −Ｌｅ　ｕ−Ｌｅｕ−Ａｒ　ｇ−Ｇｌ　ｕ　−Ｖａ　ｌ　−Ｌｅｕ−Ｇｌ　ｕ　 −Ｍｅ　ｔ　−Ｔｈ　ｒ−Ｌｙｓ　−Ａｌ　ｔ−Ａｓｐ−Ｇ戟@ｎ　− Ｌｅ　ｕ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｎ−Ａｌ　ａ−Ｈｉ　ｓ　−８ｅ　ｒ− Ａｓ　ｎ−Ａｒｇ−Ｌｙ　ｓ　−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅｕ　−Ａｓ@ｐ　− １１ｅ−Ａｌａ　−ＮＨＩ　。

ソーバジン（Ｓａｕｖａｇｉｎｅ　）はこれに類似するものであり、南アフリカ かえるＰｈｙｌｌｏｍｅｄｕｓａ　ｓａｕｖａｇｅｔ　の皮膚から単離された４ ０残基のペプチドである。ソーバジンはエルスパーマー（Ｅｒｓｐａｍｅｒ）ら によつ”Ｃ同定すＦＬ、Ｒｅｇｕ−１ａｔｏｒｙ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ＋　２　（ １９８１）、１〜１３に記載されている。ソーバジンは、式： ％式％ で表わされる。ウロテンシン（Ｕｒｏｔｅｎｓｉｎ　）　Ｉは、イチカワらのｐ ｅ　ｐ　ｔ　ｉ　ｄｅ　８　＋３．８５９（１９８２）に記載されるように真青 上目魚類の尿（ｕｒｏｐｈｙｓｅｓ　）から単離された４１残基の同族ペプチド である。ンーバジン、ウロテンシンエやＣＲＦ同族体は、哺乳類の血圧を下げＡ ＣＴＨやβ−エンドルフィンの分泌を促進する生物学的効力を有することが報告 されて（・る。

ラツ）ＣＲＦは、ｏＣＲＦと極めて似た４１残基のペプチドで式：％式％ で表わされる。ヒ）ＣＲＦはこれと同一の配列を有するため、ｒＣＲＦとｈＣＲ Ｆは相互に入れ換えて用いうる。

下記の式で表される４１残基からなるＣＲＦ同族体の拮抗体又はその無毒性付加 塩を合成した。

Ｙ　−Ｒ９−ＲＩＯ−Ｒ１１−Ｒｈｏ−Ｊｌ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｊ７− 　Ｒ，ｓ−Ｒ，、−Ｒ，、−Ｒ，−ＲＨ−Ｊ３−　Ｒ４４−ＲｌＢ　−Ｒｔ６− 　ＲＨ−ＪＨ−ＲＨ−Ｇｌ　ｎ−ａ　ｌ　ａ−Ｒ３１−Ｒ３３−Ａｓ　ｎ−Ａｒ ｇ−Ｒ３６−Ｒ３？−Ｎｌｅ−Ｒ３ｇ−Ｒ＜ｏ−Ｒ４＋−ＮＨｔ上式において、 Ｙは炭素数７以下のアシル基または水素であり；ＲｏはＡｓｐ又はｄｅｓＲｌ　 ：　ＲｈｏはＬｅｕ又はｄｅｓＪｏ　：　Ｒ１１はＴｈｒ、Ｓｅｒ又はｄｅｓＲ Ｂ　；　Ｒ４２は（Ｑ　）　Ｄ　−Ｐ　ｈ　ｅ　＋　Ｄ　−Ｔ　ｙ　ｒ　＋　Ｄ 　−Ｌｅ　ｕ　ｌＤ　−Ｈｒ　ｓ　＋　Ｄ　−Ｎａ　ｌ　、Ｄ　−Ｐ　ａ　ｌ@ ＋　Ｄ　−Ｉ　１　ｅ　＋　Ｄ　− Ｎｌｅ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｄ−Ｍｅｔ＋Ｐｈｅ又はＬｅｕ；ＱはＨ，４Ｃ１又は４Ｆ ；ＲｈｏはＨｉｓ＋Ｔｙｒ又はＧｌｕ；ＲｈｏはＧｌｕ、Ａ、ｉｎ又はＬｙＩ； ＲｈｏはＶａｌ、Ｎｌｅ又はＭｅｔ＋Ｒ＋。

およびＲ２４はｌｅｕ、　Ｉｌｅ、　ａｌａ＋Ｇｌｙ＋Ｖａｌ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ 、Ａｓｎおよび引ｎからなる群より選択され；Ｒ２ＯはＧｌｕ又はＤ−Ｇｌｕ； Ｒ１，はＭｅＬＮｖａ＋　Ｉｌｅ、　ａｌａ。

Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｖａｌ＋Ｐｈｅ又はＧｉｎ；ＲＨはａｌａ、　Ｔｈｒ、　Ａｓ ｐ又はＧｌｕ；ＲｕはＡｒｇ＋　Ｏｒｎ、　Ｈａ　ｒ又はＬＹ”　：　Ｒｚｓは Ａｓｐ又はＱｌｕ；Ｒ２ＢはＧｉｎ、Ａｓｎ又はＬｙＣＧｌｕ；Ｒｕはａ　Ｉ　 ａ　＋　Ａｒ　ｇ又はＬｙｓ；Ｒ２゜はＧｉｎ又はＧｌｕ＋ＲｓｔはＨｉｓ、Ｇ １ｙ＋Ｔｙｒ又はａ　Ｉ　ａ　；　Ｒ３ｓはＳｅｒ＋　Ａａｎ＋　Ｌｅｕ、　Ｔ ｈｒ又はａｌａ；　Ｒ３６はＬ）’　ｓ　＋　Ｏｒ　ｎ　。

Ａｒｇ　ｒ　Ｈａｒ又はＬｅｕ；Ｒ３７はＬｅｕ又はＴｙｒ；ＲｓｏはＧｌｕ又 はＡｓ　ｐ　：　Ｒ４０はＩｌｅ＋Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、　ａｌａ、Ｖａｔ、　ｌｅ ｕ＋Ｎ］ｅ＋　Ｐｈｅ、Ｎｖａ＋　Ｇｌｙ又はＧｉｎ；そしてＲ４１はａｌａ、 　１１ｅ＋Ｇ１ｙ＋Ｖａｌ、　ｌｅｕ、Ｎｌｅ＋　Ｐｈｅ、Ｎｖａ又はＧｉｎで ある。

このようなＣＲＦ拮抗体またはその無毒性付加塩を含有する本発明の医薬組成物 は、薬学的または獣医学的に許容される固体または液体担体中に分散する。この ペプチドまたはその薬学的または獣医学的に許容される付加塩は、Ａ　ＣＴ　） （１β−エンドルフィン、β−リポトロフィン、や他のブローオピオメラノコル チン（Ｐｒｏ−ｏｐｉｏｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ）遺伝子生成物およびコルチ コステロンの分泌を調整し、および、／またはストレス反応を低くし、および／ または情動、行動および胃腸機能、自立神経系の活性に影響を与える。さらにＣ ＲＦ類似体は、下垂体、代謝系心臓血管、胃腸や中枢神経の機能評価に使用する こともできる。

好ましい態様の詳細な説明 ペプチドを定義するために用いる命名法は５ｃｈｒｏｄｅｒ　＆　Ｌｕｂｋｅ　 ＴｈｅＰｅｐｔｉｄｅｓ”＋　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓａ　（１９６５）に 明記されるものであり、慣用的表示に従ってＮ未満のアミノ酸は左に、Ｃ未満の カルボキシル基は右に表示する。α−アミノ酸残基の表示には、標準的な英字３ 文字からなる記号を用いている。アミノ酸残基が異性体を有するときは、特に断 りのな〜・限りＬ体を表わす。例えｉｆ、ＳｅｒはＬ−セリン、Ｎｌｅはノルロ イシン、Ｎｖａはノルバリン、Ｈａｒはホモアルギニン、Ｏｒｎはオルニチンを 表わす。さらに、ＬｅｕはＬ−ロイシンまたはＣａＣＨ，−Ｌ−ロイシン（ＣＭ Ｌ）；ａｌａはＬ−アラニンまたはＣａＣＨ。

−Ｌ−アラニン（ＣＭＡ）；Ｄ−ＮａｌはＤ−アラニン（β炭素がナフタレンで 置換されており、１または２位の炭素に結合している）Ｄ−ＰａｌはＤ−アラニ ン（β炭素はピリジンの３位に結合している）を表す。

本発明は下記の式（１）で表わされるＣＲＦ拮抗体およびその無毒性付加塩を提 供する。

Ｙ−Ｒ９−ＲＩＧ−Ｒ１１Ｊｌ−Ｒ１３−１ｅｕ−１ｅｕ−Ａｒｇ−Ｒｈｏ−Ｒ ｈｏ−Ｒｈｏ−Ｒｍ−ＲＨ−Ｒａ−Ｒ４３−ＲＨ−Ｒ２５−Ｒｇ−ＲＨ−Ｒ２ｇ −Ｒ２Ｇ−Ｇｌ　ｎ−ａ　ｌ　ａ　−Ｒｇ−Ｒ３３−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｒｇ−Ｒ ３１−Ｎ　１　ｅ　−Ｒ３ｇ　−Ｒ４６−Ｒ４Ｉ−Ｎ　Ｈ２上式において、Ｙは 炭素数７以下のアシル基または水素であり；ＲｏはＡｓｐ又はｄｅｓＲｏ；Ｒｌ ｇはＬｌｌｌｌ又はｄｅｓＲ４ｏ；ＲｏはＴｈｒ、ＳｅｒヌはｄｅｓＪｌ　：　 Ｒｌｇは（Ｑ）Ｄ−４’ｂｅ　、　Ｄ−Ｔｙｒ　、Ｄ−Ｌｅｕ　、　Ｄ−Ｈｉ　 ｓ　＋Ｄ−Ｎａ　ｌ　、Ｄ−Ｐａｌ　、　Ｄ−Ｉ　ｌ　ｅ　、　Ｄ　| Ｎｌ　ｅ　＋　Ｄ−Ｖａ　１　＊　Ｄ−Ｍｅ　ｔ　＋　Ｐ　ｈｅ又はＬｅｕ；Ｑ はＨ，４Ｃｌヌは４Ｆ：ＲｌｇはＨｉｓ、、Ｔｙｒ又はＧｌｕ；Ｒ＋ｙはＧｌｕ 、Ａａｎ又はＬ）’　ｍ　：　ＲｌｇはＶａ、　ｌ　、　Ｎｌ　ｅ又はＭｅｔ； Ｒ１９およびＲ，はｌｅｕ＋ＩＩｅ、ａｌａ、Ｇｌｙ＋Ｖａｌ＋Ｎｌｅ＋Ｐｈｅ ＋ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群より選択され；Ｒ９はＧｌｕ又はＤ−Ｇｌｕ； ＪｌはＭｅＬＮｖａ＋Ｉｌｅ＋ａ１ｍ＋１ｅｕ、Ｎ１ｅ＋Ｖａ１．Ｐｈｅ＋Ａｓ ｎ又はＧｉｎ；ＲＨはａｌａ４’ｈｒ、Ａｓｐ又はＧｌｕ；Ｒ２３はＡｒｇ＋Ｏ ｒｎ＋Ｈａｒ又はＬＹ　Ｓ　：　Ｒ２ＳはＡｓｐ又はＱｌｕ；Ｒ２６はＧｉｎ。

Ａｓｎ又はＬｙ　８　：　Ｒ２７はＬｅｕ＋Ｉｌｅ、ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、 Ｍｅｔ、ＮＩｅ＋Ｐｈｅ＋Ａｓｐ、Ａｓｎ＋Ｇｌｎ又はＧｌｕ；Ｒｚｓはａ　ｌ 　ａ　＊　Ａ　ｒ　ｇ又はＬ）’８；ＲｔｏはＧｉｎ又はＧ　１　ｕ　＋Ｒ３２ はＨｉｓ、Ｇ１ｙ＋Ｔｙｒ又はａｌａ：ＲｓｓはＳｅｒ＋Ａｓｎ、Ｌｅｕ、Ｔｈ ｒ又はａｌａ；Ｒ，ＩＩｌはＬｙＩｌ、ＯｒｒｚＡｒｇ、Ｈａｒ又はＬｅｕ；Ｒ ｓｔはＬｅｕ又はＴＹ　ｒ　：　Ｒ２ＯはＧｉｎヌはＡｓｐ；Ｒ４０はＩｌｅ＋ Ｔｈｒ、Ｇ１ｕ＋ａｌａ＋Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ、Ｎｖａ、Ｇｘｙ又 はＧｌｎ；そしてＲ４＋はａｌａ＋Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ＋ｌｅｕ＋Ｎｌｅ＋ Ｐｈｅ＋ＮｖａヌはＧ　１．　ｎである。上式で表される拮抗剤は、天然ＣＲＦ の下垂体レセプターに極めて良く結合する。

好ましい拮抗体は下記の式で表される。

Ｙ　−Ｒ１２−Ｒ，，３−１ｅ　ｕ　−１ｅ　ｕ−Ａｒ　ｇ−Ｒ，７−Ｒｌｇ　 −Ｊ＠−ＲＨ−Ｊｌ　−Ｒ，２−Ｒ２３−Ｒ２４−Ｒ２５−Ｒ２６−Ｒ２７−Ｒ ｚｓ−Ｒ，２ｇ−Ｇ　ｌ　ｎ−ａ　１　ａ　−Ｒ３２−Ｒ３３−Ａｓ　ｎ−Ａｒ 　ｇ−Ｒ３６−Ｒ３７−Ｎｌｅ−Ｒ３＋１−’Ｒ４゜−Ｒ，、−ＮＨｔ上式にお いて、ＹはＡｃ又はり、ｙｄｒｏｇｅｎ；　Ｒ１２はＤ　−Ｐ　ｈ　ｅ　＋　Ｄ 　−Ｔ　ｙ　ｒ　＋　Ｄ　−Ｌ　ｅ　ｕ　＋Ｄ−Ｈｉ　ｓ　、Ｄ−Ｎａｌ　＋　 Ｄ−Ｐａ　ｌ　、Ｄ−Ｎｌ　ｅ　、Ｄ−Ｉ　１ｅ　＋Ｄ−Ｖａｌ　、Ｄ−Ｍｅ　 を又はＰｈｅ；Ｒ１３は）ｉｉｓ４’ｙｒ又はＧｌｕ＋Ｒ＋７はＧｌｕ、Ａｓｎ 又はＬｙｓ；　ＲｌｇはＶａｌ、Ｎｌｅ又はＭｅ　ｔ　；　ＲａｇおよびＲ２４ はｌ　ｅ　ｕ　＋　Ｉ　ｌ　ｅ　＋　ａ　ｌ　ａ　＋　Ｇ　ｌ　ｙ　＋　Ｖ　ａ 　ｌ　＋　Ｎ　１　■@ｒ　Ｐ　ｈ　ｅおよ びＧｉｎからなる群より選択され；Ｒ９はＧｌｕ又はＤ−Ｇｌｕ；Ｒ２１はＭｅ ｔ、Ｎｖａ＋Ｉ　ｌ　ｅ　＋　ａ　１　ａ　＋　ｌ　ｅ　ｕ　＋　Ｎ　１’　ｅ 　＋　Ｖ　ａ　ｌ　＋　Ｐ　ｈ　ｅ又はＧｉｎ；Ｒ２，はａｌａ、’Ｔｈ秩AＡ ｓｐ又は Ｇｌｕ；Ｒ２ｓはＡｒｇ＋Ｏｒｎ＋Ｈａｒ又はＬ）’ｓ：ＲｚｓはＡｓｐ又はＧ 　ｌ　ｕ　；　Ｒ２６はＧｉｎ。

Ａｓｎ又はＬｙｓ：　Ｒ２？はｌｅｕ、Ｉｌｅ＋ａｌａ＋Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｍｅ ｔ＋Ｎ１ｅ＋Ｐｈｅ＋Ａ　ｓ　ｐ　＋　Ａ　ａ　ｎ　＋　Ｇ　ｌ　ｎ又はＧｌｕ ；Ｒｚｓはａｌａ、Ａｒｇ又はＬｙｓ；ＲｔｅはＧｌｎ又はＧ　ｌ　ｕ　ｒ　Ｒ ，３２はＨ４ｓ＋Ｇ１ｙ＋Ｔｙｒ又はａｌａ；ＲｓｓはＳｅｒ、Ａｓｎ、　１ｅ ｕ＋Ｔｈｒ又はａｌａ；Ｒ３１１はＬｙｓ＋Ｏｒｎ、Ａｒｇ、Ｈａｒ又はｌ　ｅ 　ｕ　：　Ｒ３？はｌｅｕ又は’ｒｙ　ｒ　：　Ｒａ９はＧ　１　ｕ又はＡｓｐ ；Ｒ，。はＩｌｅ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、ｓ＋ｌａ、Ｖａｌ、ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｐｈ ｅ＋　、Ｎｖａ、Ｇｌｙ又はＧｉｎ；そしてＲ４＋はａｌａ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、 Ｖａｌ、ｌｅｕ、Ｎ１ｅ。

Ｐｈｅ、Ｎｖａ又はＧｉｎである。上式の無毒性塩も好ましい拮抗体として使用 しうる。好ましい残基は、ＲｌｇがＤ−Ｐｈｅ；Ｐｈｅ又はＤ−２Ｎａｌ　：　 Ｒ１３がＨｌ　ｇ　：　ＲＩ？がＧｌｕ；Ｒ１１がＶａ　ｌ　＋　Ｒｌｇおよび Ｒ３７がＬｅｕ；Ｒ２０がＧｌｕ又はｐ−Ｇ　ｌ　ｕ　：　ＲｔｓがＮｌｅ；Ｒ ＨがＡｌａ；Ｒ２３がＡｒｇ；ＲｕおよびＲｔｓがＡ　Ｉ　＆　；Ｒｔｓおよび Ｒ５゜がＧｌｕ；Ｒ−がＧｉｎ；Ｊ７がＬｅ　ｕ　；　ＲｚｓがＧ　ｌ　ｎ　： 　ＲｓｔがＨｉ　ｓ　；　Ｒ３３がＳｅｒ；Ｒ３６がＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈａｒ又 はＬｅ　ｕ　；Ｒ４６がＩｌｅ；そしてＲ２１がＡｌａ又はＩｌｅである。特に 効力が強いことが見出されているものの１つとして、［Ｄ−Ｐｈｅ”、Ｎｌｅ” 、”）−ｒＣＲＦ（１２−４１）が挙げられる。

本発明のペプチドは、完全な固相法、部分的な固相法、フラグメントコンデンセ ーションあるいは古典的な液相カップリングといった適当な方法により合成され る。Ｄ−異性体残基または非天然アミノ酸残基を含有しないＣＲＦ拮抗体部分は 、近年開発された組み替えＤＮＡ法により合成してもよい。

この組み替えＤＮＡ法による合成には、ＣＲＦ同族体の所望の形に適切に構造遺 伝子をコードする工程が含まれていることが理解されなくてはならない。ある種 の合成ＣＲＦペプチドは、かかる構造遺伝子とともにプロモーターとオペレータ ーを含む発現ベクターを有する微生物を転換し、こうして転換した微生物からＣ ＲＦペプチドを発現させることによって得られる。１９８２年１２月２３日に公 開されたＷＯ３２１０４４４３および１９８３年５月２６日に公開されたｗ。

８３１０１７８３に記載されるように、構造遺伝子を用いて遺伝子を形成し胎内 注入することによってＣＲＦペプチドを合成するのに、ヒト以外の哺乳類を用い ることもできる。こうして合成されたＣＲＦペプチドは、その後血清などから抽 出することによって哺乳類から回収する。

種々のアミノ酸部分の不安定な側鎖基を適当な保護基で保護し、その保護基が最 終的に除去されるまで、その部位で化学反応がおこるのを防ぐことは、ペプチド 合成によく用いられる方法である。また、アミノ酸や断片がカルボキシル基の部 位で反応する間、その物質のα−アミノ酸を保護する手法もよく用いられる。

その後、α−アミノ酸を除去してその位置で次の反応を行わせる。従って、合成 の一段階として、ペプチド鎖中に意図する配列で位置するアミノ酸残基を含みか つ適当なアミノ酸残基に側鎖保護基を結合した中間体が生成するのは一般的なこ とである。

下記の式で表される中間体（ＩＩ）も、本発明の範囲内に含まれると考えられる 。

”　−Ｒｌｇ（Ｘ）　Ｒ１５ＣＸ又はＸ’）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ　（Ｘ’ ）−Ｒ＋７（Ｘ’　、Ｘ’又はＸ’）−Ｒｌｇ−Ｒｌｇ（Ｘ’）−Ｒ２Ｏ（Ｘ’ ）−Ｒｓｔ−Ｒｈ（Ｘ”又はＸ’）−Ｒ，３（Ｎ３又はＮ６）−Ｒ２４（Ｘ’　 ）　−Ｒ２５（Ｎ５）　−Ｒｚｓ　（Ｘ’又はｘ’　）　−Ｒ２？　（ｘ’又は Ｎ５）−Ｒ２８（Ｎ３又はＸ’）−Ｒｎ（Ｘ’又はＸ’）−Ｇｉｎ（Ｘ’）−ａ ｌａ−Ｒ３２（Ｘ）−Ｒ３３（Ｎ２又はＸ’）−Ａｓｎ（Ｘ’）−Ａｒｇ（Ｘ” ）−Ｒ，６（Ｘ’又はＸ’）　−Ｒ３７（Ｘ）−Ｎｌｅ−Ｒ３ｇ（Ｘ’）−Ｒ４ ゜（ｘ　２又はＮ４又はＸ’）−Ｒ４１（Ｘ’）−Ｘ’上式において、Ｒは上で 定義した通りである。

式中、Ｘｌは水素またはα−アミノ保護基である。Ｘｌに包含されるα−アミノ 保護基は、ポリペプチドの逐次合成の分野において有用であると知られているも のである。Ｘｌ　とし、て使用しうるα−アミン保護基の種類には（１）アシル 型保護基、例えばホルミル、アクリル（Ａｃ　ｒ　）、ベンゾイル（Ｂｚ）、ア セチル（Ａｃ）であり、Ｎ床端のみに用いるのが好ましく、（２）芳香族ウレタ ン型保護基、例えば、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、　およびｐ−クロルベ ンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロムベ ンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニルのような置換 Ｚ　；　（３）脂肪族ウレタン型保護基、例えばｔ−ブチルオキシカルボニル（ ＢＯＣ）、ジイソプロピルメチルオキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボ ニル、エトキシカルボニル、およびアリルオキシカルボニル；および（４）シク ロアルキルウレタン型保護基、例えばフルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆ ＭＯＣ）シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、お よびシクロヘキシルオキシカルボニル；（５）チオウレタン型保護基、例えばフ ェニルチオカルボニルが含まれる。好ましいアミノ保護基はＢＯＣである。

Ｎ２は、ＴｈｒおよびＳｅｒの水酸基のための保護基であって、アセチル（Ａｃ 　）、ベンゾイル（Ｂｚ）、ｔ−ブチル、トリフェニルメチル（トリチル）、テ トラヒドロピラニル、ベンジルエーテル（Ｂｚｌ）　マタハ、２　、６−ジクロ ロベンジル（ＤＣＢ）であるのが好ましい。最も好ましい保護基はＢｚｌである 。Ｎ２は水素、原子であってもよく、そのときは水酸基上に保護基は存在しない 。

Ｎ３は水素；またはＡｒｇまたはＨａｒのグアニジノ基のための保護基であり、 ニトロ、ｐ−１ルエンスルホニル（ＴＯ８）、Ｚ、アダマンチルオキシカルボニ ルまたはＢＯＣであるのが好ましい。

Ｎ４は、水素；またはＡｓｎまたはＧｉｎのアミノ基のための保護基であり、キ サンチル（Ｘａｎ）であるのが好ましい。

Ｎ５は、水素；またはＡｓｐまたはＧｌｕのβまたはγ−カルボキシル基のため のエステル形成保護基であり、ヘンシル（ＯＢｚｌ）、２．６−ジクロロベンジ ル、メチル、エチルおよびｔ−ブチルエステルを用いるのが好ましい。最も好ま しいのは０Ｂｚｌである。

Ｎ６は水素原子；またはＬｙｓまたはＯｒｎの側鎖アミノ基のための適当な保護 基である。適当な側鎖アミン保護基の例はＺ、２−クロルベンジルオキシカルボ ニル（２−ＣＩ−Ｚ）、Ｔｏｓ、ｔ−アミルオキシカルボニル（Ａｏｃ）、ＢＯ Ｃ。

上述のような脂肪族または芳香族ウレタン型保護基である。

Ｈｉｓが存在するとき、Ｘは水素または、Ｔｏｓまたは２，４−ジニトロフェニ ル（ＤＮＰ）などのイミダゾール窒素の保護基である。Ｔｙｒが存在するとき、 Ｘは水素または、ＤＣＢなどの水酸基保護基である。Ｍｅｔが存在するとき、所 望により硫黄を酸素で保護してもよい。

側鎖アミノ保護基の選択は、合成中のアルファアミン基の保護基除去の際に除去 されないものでな（てはならない点を除き、条件はない。このため、アルファア ミン保護基と側鎖アルファ保護基は同一ではありえない。

Ｎ７は、ＮＨ，；または固相合成において使用される、固体樹脂支持体への連結 のためのアンカー結合またはエステルなどの保護基である。支持体として好まし いのは、−ＮＨ−ベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂支持体および−ＮＨ−パ ラメチルベンズヒドリルアミン（ＭＥ　ＨＡ　）樹脂支持体である。ＢＩ（Ａま たはＭＢＨＡ樹脂から切断することによって直接ＣＲＦ類似アミドを得ることが できる。このような樹脂のＮ−メチル誘導体を用いることによって、これらと同 じと考えられるメチル置換アミドをつくることが可能である。

中間体）構造式ニオイテ、Ｘ　、　Ｘ’＋　Ｘ’ｓ　Ｘ”ｒ　Ｘ’ｒ　Ｘ’、オ 、ｌヒＸ’　ｔｆ）　５チノ１　以上が保護基である。各々のＲＫついて選択さ れた個々のアミノ酸が、当業者に周知である上記の保護基の存在性を決定する、 ペプチドの合成に用いる特定の側鎖保護基の選択は以下の規則に従って行う。（ ａ）合成の各工程におけるα−アミ、ｌ保護基除去のために選ばれた反応条件下 で試薬に対ｌ−で安定でなくてはならない。（ｂ）保護基はその保護基としての 性質を維持し、カップリング条件下で分解するものであってはならない。（ｃ） 側鎖保護基は、所望のアミノ酸配列を有する合成終了後に、ペプチド鎖を変化さ せない条件下で除去１，５るものでなくてはならない。

Ｙで表わされるＮ末端におけるアシル基は、アセチル、ホルミル、アクリリルま たはベンゾイルであるのが好ましい。

本発明はまた、式（Ｉ）で衣わされる化合物の製造方法も提供する。その方法は 、（ａ）少な（とも１つの保護基を有し；　Ｘ　Ｉ　Ｘ’ｌ　Ｘ”ｌ　Ｘ３１　 Ｘ’ｌ　Ｘ’ｌおよびＸ６は各々水素か保護基でＸ７が保護基か樹脂支持体また はＮＨ，に対するアンカー結合である式（ＩＩ）を有するペプチドをつくり、（ ｂ）式（ＩＩ）で表わされるペプチドがら保護基またはアンカー結合を除去し、 （ｃ）必要に応じて、得られたペプチドを非毒性付加塩にする工程からなる。

合成するのが好ましい。しかし、この他の公知かつ同等の合成法も前述のように 採用可能である。固相合或は、本明細書の一部としてここに引用する米国特許第 ４．２４４，９４６号明細書（Ｒ４ｖｉｅｒら；　１９８１年１月２１日特許） に一般的に記載されるように、保護されたα−アミノ酸を適当な樹脂にカップリ ングすることによってペプチドのＣ末端から合成を開始するのが一般的である。

このようなヒ）ＣＲＦの拮抗体のための出発物質は、α−アミノ保護されたＩｌ ｅをＢＨＡ樹脂に結合させることによってつくることができる。

ＢＯＣで保護されたＩｌｅは、塩化メチレンおよびジメチルホルムアミド（ＤＭ Ｆ）を用いてＢＨＡ樹脂上にカップリングする。その後、塩化メチレン中のトリ フルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ＴＦＡのみ、またはジオキサン中のＨＣＩ　を用いる ことによってα−アミノ保護基を除去する。このとき、５０体積％のＴＦＡの塩 。

化メチレン溶液を、０＝５重量％の１，２−エタンジチオールとともに用いるの が好まｌ〜い。保護基の除却ま約り℃〜室温で行う。この他にも、５ｃｈｒｏａ ｅｒ　＆Ｌｕｂｋｅ、　”　Ｔｂｅ　ＰｅｐＬｉｄｅｓ″＋　１　＋　ｐｐ　７ ２−７５　（Ａｅａｄｅｎｖｉｅ　Ｐｒｅｓｓ１９６５）に記載され又いるよう に特定のび一アミン保護基を除去するための電性や試薬を用いうる。

１１ｅのα−アミノ保護基を除去した後に、残ったα−アミノ酸と側鎖保護アミ ノ酸を段階的に所望の順序でカップリングし、後述する中間体を得る。合成の際 に、各々のアミノ酸を別々に加える代わりに、固相反応器に添加する前にそれら のうちのい（つかを互いにカップリングさせてもよい。適切なカップリング用試 薬は当業者に公知の範囲内で選択する。その中でも特に好ましいのは、Ｎ、Ｎ’ −ジシクロ−・キシルカルボジイミド（ＤＣＣ）とＮ、Ｎ’−ジイソプロピルカ ルボジイミド（ＤＩＣＩ　）である。

ペプチドの固相合成に用いられる活性化試薬はペプチドの分野においてよく知ら れている。適当な活性化試薬の例はカルボジイミド類、例えばＮ、Ｎ’−ジイソ プロピルカルボジイミドおよびＮ−エチル−Ｎ’−（３’−ジメチルアミンプロ ピル）カルボジイミドである。その他の活性化試薬ならびにペプチドカップリン グにおけるそれらの使用はシュレーダー＆　リュプケの上記文献第■章およびカ ブそれぞれの保護アミノ酸またはアミノ酸配列は大体４倍以上の過剰量で固相反 応器へ導入され、カップリング反応はジメチルホルムアミド（ＤＭＦ　）　；　 ＣＨ２Ｃｈ（１：１）の混合媒体中で、あるいはＤＭＦまたはＣＨ２Ｃｌ、単独 中で行われる。不完全なカップリングが起った場合は、α−アミン保護基を除去 する前にそのカップリング反応を繰り返し、その後次のアミノ酸をカップリング させる。合成の各段階でのカップリング反応の成就は、もしその合成か手動で行 われるなら、カイザー（Ｅ、　Ｋａｉｓｅｒ　）らのＡｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅ ｍ、　３４．　５９５（１９７０）に記載されるようなニンヒドリン反応で監視 するのが好ましい。カップリングが完全に進行しなかったときは、次のアミノ酸 カップリングに先立ってα−アミン保護基の除去の前にカップリング工程をくり 返す。カップリング反応は自動的に用いて行うことができる。

意図するアミノ酸配列が完了した後、液状フッ化水素のような試薬で処理して中 間体ペプチドを樹脂支持体から切り離す。その際液状フッ化水素はペプチドを樹 脂から切り離すばかりでなく、残っている全ての側鎖保護基Ｘ２１　Ｘ”ｌ　Ｘ ’ｌ　Ｘ’１およびＸ６およびα−アミノ保護基ｘｌ　（最終的にペプチド中に アシル基を存在させることを意図しない場合）をも切り離し℃ペプチドを得る。

切断の際にフッ化水素を用いるときは、反応容器中にスカンベンジャーとしてア ニソールまたはフレゾールおよびメチルエチルスルフィドを入れてお（。配列中 にＭｅｔが存在するときには、樹脂からペプチドを切断する前にトリフルオロ酢 酸（ＴＦＡ）／エタンジチオールでＢＯＣ保護基を切断し、Ｓ−アルキル化を回 避することもできる。

以下の実施例に、固相法によるＣＲＦ類似体の好ましい合成法を記載する。

下記の配列 Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉ　５−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ　−Ａｒ　ｇ−Ｇｌ　ｕ　−Ｖａ　 １−Ｌｅｕ−Ｇｌ　ｕ　−Ｎｌ　ｅ−Ａｌ　ａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌ ｎ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−８ｅｒ−Ａｓｎ−Ａｒ ｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−１１ｅ−１１ｅ−ＮＨＩを有するＣ　Ｄ 　−Ｐ　ｈ　ｅ　”　＋　Ｎ　ｌ　ｅ　”　Ｉ”　〕−ヒトＣＲＦ（１２−４１ ）をＢａｃｈｅｒｎ社から入手し５る適用範囲約０．１〜Ｑ、　７　ｍ　ｍｏ　 １／　ｇの樹脂のようなＭＢＨＡヒドロクロリド樹脂上樹脂路的方法により合成 した。この合成は、適当なプログラムを用いてベックマン９９０Ｂペプチド自動 合成機で行った。好ましいプログラムは次のとおりである。

２　メタノール（３０ｍｌ）で洗浄（２回）　３３　ＣＩ（、ＣＩ（８０ｍｌ） で洗浄（３回）　３４　５０％ＴＥＡと５％１，２−エタンジチオールの　１２ ＣＨ，Ｃ１２溶液（７０ｍＡ）（２回）５　イソプロパツール（８０ｍｌ）で洗 浄（２回）　３６　１２．５％ＴＥＡのＣＨ２Ｃｌ、溶液（７０ｍｌ）（２回） 　５７　１り／−＃（４０ｍ１）で洗浄（２回）　２８　ＣＨｔ　Ｃｌｘ　（８ ０ｍｌ　）で洗浄（３回）　３９　Ｂｏｃ−アミノ酸（１０ｍｍｏりの３０縦エ ーテル、３０〜３００ＤＭＦまたはＣＨ，ＣＩ、溶液〔溶媒は特に保護されたア ミノ酸の溶解度によって決定する〕（１回）およびＤＣＣＩ　（１０ｍｍｏｌ） のＣＨ，ＣＩ。

溶液 ＢＯＣ−１１ｅのカップリングによって、樹脂１ｇあたり約０．３５ｍｍｏｌの Ｉｌｅが置換された。なお、使用した溶媒はすべて注意深くガス抜きした。ガス 抜きは）ヘリウムや窒素といった不活性ガスでスパーンングすることによって行 うことが好ましい。

保護基を除去して中和した後、ペプチド鎖を樹脂上に一段ずつ付加して行った。

一般に、樹脂１ｇあたり塩化メチレン中のＢＯＣ保護アミノ駿１〜２ｍｍｏｌを チレンとの混合物を使用した。Ｓｅｔのヒドロキシル側鎖保護基としてＢｚｌを 使用した。ＡｓｎやＧ１ｎ０カルボキシル末端を活性化するためにｐ−ニトロフ エと塩化メチレンの５０％混合物中のＨＯＢｔ　１当量を用いて一部カツブリン グさせた。ＡｓｎやＧｉｎのアミノ基は、活性エーテル法の代わりにＤＣＣＩカ ップリングを使用する場合、Ｘａｎ　で保護した。２−ＣＩ−ＺはＬｙｓ側鎖の 保護基として使用した。ＴｏｓはＡｒｇのグアニド基およびＨｉｓのイミダゾー ル窒素を保護するために使用Ｉ−た。またＧｌｕのカルボキシル側鎖は０Ｂｚｌ で保護した。合成終了時に次の組成物が得られた。

ＢＯＣ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＨＡｓ（Ｔｏｓ）−Ｌｅｕ＝Ｌｅｕ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）− Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｖａｉ−Ｌｓｕ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｎｌｅ−ＡＸａ− Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ＡＸａ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌ　ｎ　（Ｘａｎ　）−Ｌ ｅｕ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｎ　（Ｘａｎ　）−Ｇｌ　ｎ（Ｘａｎ　）”Ａｌ　ａ− Ｈｉ　ｓ　（Ｔｏｓ　）　’−３ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ａｓｎ（Ｘａｎ）−Ａｒｇ（ Ｔｏｓ）−Ｌｙｓ（２−ＣＩ−Ｚ）−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−１ １ｅ−１１ｅ−ＭＢＨＡ樹脂支持体Ｘａｎはα−アミノ保護基を除去するために 用いたＴＦＡ処理によって部分的または完全に除去できた。

保護ペプチド−樹脂を切り離し、て保護基を除去するために、ペプチド−樹脂１ ｇあたりアニソール１．５ｍｌ、メチルエチルスルフィド０．５威、フッ化水素 ＣＨＦ）１５＋＋＋Ａを用いて一２０℃で２０分および０℃で１．５時間処理し た。高真空下でＩＦを除去した後、樹脂−ペプチドを乾燥ジエチルエーテルおよ びクロロホルムで交互に洗い、ついでペプチドをガス抜きした２Ｎ酢酸水溶液で 抽出し、濾過によって樹脂から分離した。

ルらのＪ、　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、　２８８　、３０３−３２８　（ １９８４）に示されるような調製用）ＩＰＬＣで精製した。クロマトグラフ画分 は注意してＨＰＬＣで監視し、実質純度を示す画分のみを集めた。

上記方法によって合成し精製したｈＣＲＦペプチドの比旋光度を、パーキネシマ ーモデル２４１ポーラリメータ−を使用して測定したところ、〔Ｇ３　ｖ＝−３ ９，４±１．０　（５０％酢酸中でｃ＝０．５）（水およびＴＦＡの存在を補正 ）；純度約９５％であった。

正しい配列に合成されているか否かを確認するために、常に沸騰しているＨＣＬ 、３μｌチオグリコ一ル／ｍｌおよび内部標準としてＮｌｅ　ｌｎｍｏｌを含む 密封脱気管中で、ＣＲＦ類似体を１４０℃で９時間加水分解した。ベン２１フ１ ２１、上記の３０のアミノ酸からなるペプチドが得られたことが確認された。

Ａｓｘ（０．９）、Ｇｌｘ（７．１　）、Ａｌａ　（３．９）、Ｎｌｅ　（　１ ．９）、Ｖａｌ　（　１．１　）。

５ｅｙ（１．１　）、Ｉｃｅ　（２．１　）、Ｌｅｕ（５．０）、Ｐｈｅ　（０ ．９）、Ｌｙｓ（１．０）。

Ｈｉｓ（２．１）およびＡｒｇ　（　３．０　）実施例■ 下記の配列 Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ− Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ　−Ｌｅ　ｕ −Ａｌａ−Ｇｌ　ｎ−Ｇｌｎ−Ａｌ　ａ−Ｈｉ　５−８ｅ　ｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ −Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−１１ｅ−１１ｅ−ＮＨ２を有するペプチド ＣＤ−Ｐｈｅ”＋　Ｎｌｅ”＋”＋Ａｒｇｓａ〕−ｈＣＲＦ（１２−４１　）を 実施例Ｉに記載される方法により合成した。

上述の方法で合成し精製したｈＣＲＦペプチドの比旋光度は、Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅ ｌ−ｍｅｒ　Ｍｏｄｅｌ　２４　１　Ｐｏｌａｒｉｍｅｔｅｒで測定したところ （ｄ）　２２＝−２７．７主１。０　（　ｃ＝０．５　：　５　０％酢酸中）（ 水とＴＦＡの存在につき補正後）であった。純度は約９９％であった。

得られたペプチドは種々の溶媒による薄層クロマト分かにより一様であることが 判明した。Ｗａｔｅｒｓ　ＨＰＬＣ　（　０．４６Ｘ２５Ｃｍカラム中に孔径３ ００１の５μｍＧ１１シリカ、を充填）を用いて特に逆層高圧液体クロマト分析 を行った。緩衝液Ａは溶液１０１００Ｏあたり１．０１のＴＦＡと４２．６％の アセトニトリルを含む０．１％ＴＦＡ溶液である。操作は室温で行った。流速は ２，０ｍＡ／分であり、保持体積は１０．４ｍＡとした。

得られた精製ペプチドのアミノ酸分析の結果、上記の３０のアミノ酸からなるペ プチドであることが確認された。

実施例■ 実施例Ｉおよび実施例■で得られた合成ＣＲＦ拮抗体について、インビトロでの ＡＣＴ）ｔおよびβエンドルフィン分泌への影響を試験した。合成ＣＲＦ拮抗体 によるラット下垂体細胞によるＡＣＴＨおよびβエンドルフィン分泌抑制をベー ル（Ｖａｌｅ）らのＥｎｄｏｃｒｊｎｏｌｏｇｙ，　９　１　＋　５　６　２　 （　１　９　７　２　）に一般的に記載される方法により測定した。

８８９−８９１　（１９８４）に詳しく記載される方法にしたがって試験し、１ 威ＭのｏＣＲＦによるＡＣＴＨ分泌の５０％抑制効果を決定した。米国特許第４ ，６０　５、６　４　２号に記載される強力なＣＲＦ拮抗体であるＡＨＣＣ９− ４１）と比較して、本ペプチドは１７倍以上効力が高かった。このことは、標準 拮抗体が、ＧＲＦ刺激によるＧＨ分泌、ＧｎＲＨ刺激によるＬＨ分泌およびＦＳ ＨまたはＴＲＦ刺激によるＴＳＨおよびプロラクトンの分泌になんら影響がない ことからも説明される。様々な濃度のｏＣＲＦに対する拮抗体の効果と、ｏＣＲ Ｆの濃度を一定にして（　１威Ｍ）刺激したＡＣＴＨ分泌を様々な濃度のペプチ ドＩが℃・かに抑制するかについても検討したが、いずれもペプチドＩにすぐれ た分泌抑制が認められた。実施例■で合成したペプチド■についても同様の試験 を行い、ＡＭＣ（９−４１）に比較して４１倍効果が優れていることが判明した 。

ＣＲＦ拮抗体のインビボ試験を、副腎摘出ラットによる自発的ＡＣＴＨ分泌の抑 制を調べることによって行った。ＢＷ３■／対（約２．７威ｍｏ１．）を静脈注 射することによって血しよう中のＡＣＴＨ量がかなり増太し、２時間効果的に持 続した（ベールらの５ｃｉｅｎｃｅ，２１３，１３９４．１９８１に記載される 方法で測定した）。非麻酔ラットについては、拮抗体の投与量に関連してＣＲＦ によるＡＣ　Ｔ　Ｈ分泌の抑制が起こった（投与量は０．０９μｍｍｏｌで効果 的に抑制）。また、エーテルで処理することによって殆ど（すべてではない）の 場合ＡＣＴＨの増加が抑制された。

これらの結果は、ＣＲＦ拮抗体を投与することによってコルチコステロイドフィ ードバック除去後に数量される自発的なＡＣＴＨの分泌が抑制され、ＣＲＦによ るＡＣＴＨ分泌をブロックし、未処理のラットにおいてストレスにより誘発され るＡＣＴＨ分泌をほとんど抑制することを示している。これらのデータは、リバ ーらの５ｃｌｅｎｃｅ．２１８，３７７−９（１９８２）に記載される、内因性 ＣＲＦによるＡＣＴＨ分泌調節効果を示すＣＲＦの抗血清で得られたデータに符 合するものである。

合成ｈＣＲＦは、調製ラットにおけるインビボＡＣＴＨ分泌およびβエンドルフ ィン様（β−ＥＮＤ４ＬＩ）免疫活性に対し高い効力を有していることが示され た。メンプタール麻酔ラット、静態オスまたはメスラットに静脈カニユーレを用 いてｈＣＲＦを投与して５〜２０分後のＡＣＴＨおよびβーＥＮＤーＬＩの血し よう濃度は増加した。さらに、ｈＣＲＦはラットやイヌの血圧をかなり低くする 効果も有することが明らかにされている。これらの拮抗体はかかる効果を妨げる 。

実施例■ 下記の配列 Ｈ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌ ｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ−Ｌｅ　ｕ−Ａｌ 　ａ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｎ−Ａｌ　ａ−Ｈｉ　５−８ｅｒ　−Ａｓ　ｎ−Ａｒｇ −Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−１１ｅ−１１ｅ−ＮＨＩを有するペプチド ［Ｎ１ｅ”・”）−ｈＣＲＦ（１２−４１）を実施例Ｉに記載される方法により 合成した。

上述の方法で合成し精製したｈＣＲＦペプチドの比旋光度は、Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅ ｌ−ｍｅｒ　Ｍｏｄｅｌ　２４１　Ｐｏｌａｒｉｍｅｔｅｒ　で測定したところ ［ｄ）　Ｄ−−２７．２士１、０　（　ｃ＝ｏ．５　；　５　０％酢酸中）（水 とＴＦＡの存在につき補正後）であった。

純度は約９９％であった。

得られたペプチドは糧々の溶媒による薄層クロマト分析により一様であることが 判明した。Ｗａｔｅｒｓ　ＨＰ　ＬＣ　（　０．４　６　Ｘ　２　５ｃｍカラム 中に孔径３ｏｏ；の５μｍＧ１３シリカ、を充填）を用いて特に逆層高圧液体ク ロマト分析を行った。緩衝液Ａは溶液１０１００Ｏあたり１．０　ｍＡのＴＦＡ と３６．０％のアセトニトリルを含む０，１％ＴＦＡ溶液である。操作は室温で 行った。流速はｚ．ｏｒｎｌＶ１分であり、保持体積は９．５ｍｌとした。

得られた精製ペプチドのアミノ酸分析の結果、上記の３０のアミノ酸からなるペ プチドであることが確認された。

実施例■に記載される一般的な方法にしたがって試験した結果、本実施例のペプ チドもＡＣＴＨおよびβエンドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らかに なった。本実施例のペプチドはＡＭＣ（９−４１）の１２倍の効力を示した。

下記の配列 Ｈ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌ ｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌ’ｕ　−Ｎｌ　ｅ−Ａｌ　ａ−Ａｒｇ−Ａｌ　ａ−Ｇ ｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ−Ｌｅｕ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｎ−Ａｌ　ａ−Ｈｉ　 ｓ@− ８ｅｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−１１ｅ−１１ｅ− Ｎ％を有するペプチドＩ：Ｎ１ｅ””）−ｈＣＲＦ（９４１）を合成した。

上述の方法で合成し精製したｈＣＲＦペプチドの比旋光度は、ｐｅｒｋｉｎ　Ｅ ｌ−０純度は約９９％であった。

得られたペプチドは種々の溶媒にょる薄層クロマト分析により一様であることが 判明した。Ｗａｔｅｒｓ　ＨＰＬＣ（０，４６Ｘ２５ｃｒＩＬカラム中に孔径３ ００ズの５μｍｃ１ｇシリカ、を充填）を用いて特に逆層高圧液体クロマト分析 を行った。緩衝液Ａは溶液１０１００Ｏあたり１．０１ｄのＴＦＡと３９．６％ のアセトニトリルを含む０，１％ＴＦＡ溶液である。操作は室温で行った。流速 は２．０ｍ１１分であり、保持体積は１０．１ｍ上した。

得られた精製ペプチドのアミノ酸分析の結果、上記の３３のアミノ酸からなるペ プチドであることが確認された。

プチドもＡＣＴＨおよびβエンドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らか になった。本実施例のペプチドはＡＭＣ（９−４１）の６倍の効力を示した。

実施例■ 下記の配列 Ｈ−Ｐｈｅ　−Ｈｉ　ｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｓｎ　−Ｍｅ　ｔ−Ｉ　 ｌ　ｅ　−Ｇｌ　ｕ　−Ｍｅ　ｔ−Ａｌ　ａ　−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ａｓ ｎ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｒ ｇ−Ｔ、ｙｓ−Ｔｙｒ　−Ｎｌ　ｅ　−Ａｓ　ｐ−Ｇｌ　ｕ　−Ｖａ　１−ＮＨ ２を有するペプチド［Ｎ１ｅ”）−コイウロテンシンエ（１２−４１）を合成し た。

実施例■に記載される方法にしたがって試験した結果、本実施例のペプチドもＡ ＣＴ）（およびβエンドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らかになった 。

実施例■ 下記の配列 Ｈ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈ　ｒ−Ｐｈｅ−Ｈｉ　ａ　−Ｌｅ　ｕ　−Ｌｅ　ｕ− Ａｒｇ−Ｇｌ　ｕ　−Ｖａ　ｌ　−Ｌｅ　ｕ　−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒ ｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−ＡＸａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｌｔ−Ｈｉ ｓ−８ｅｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｌｅ−Ｉｌ ｅ−ＮＨ２を有するペプチド［Ｎｌｅ”Ｉ３６〕−ｈ　ＣＲＦ　（９−４１）を 合成した。

上述の方法で合成し精製したｈＣＲＦペプチドの比旋光度は、Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅ ｌ−ｍａｒ　Ｍｏｄｅｌ　２４１　Ｐｏｌａｒｉｍｅｔｅｒ　で測定したところ ［ｄ）　”、：＝−１６，０±１．０　（ｃ＝０．５　：　５０％酢酸中）（水 とＴＦＡの存在につき補正後）であった。純度は約９９％であった。

得られたペプチドは種々の溶媒による薄層クロマト分析により一様であることが 判明した。Ｗａｔｅｒｓ　ＨＰＬＣ（０，４６Ｘ２５Ｃｍカラム中に孔径３ｏｏ Ａの５μｍｃ１ｇシリカ、を充填）を用いて特に逆層高圧液体クロマト分析を行 った。緩衝液Ａは溶液１０００ｍＡあたり１．ＯＮのＴＦＡと３９．０％のアセ トニトリルを含む０．１％ＴＦＡ溶液である。操作は室温で行った。流速は２． ０ｄ／分であり、保持体積は９．１ｍｌとした。

得られた精製ペプチドのアミノ酸分析の結果、上記の３３のアミノ酸からなるペ プチドであることが確認された。

実施例■に記載される一般的な方法にしたがって試験した結果、本実施例のペプ チドもＡＣＴＨおよびβエンドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らかに なった。本実施例のペプチドはＡ）（Ｃ（９−４１）の２倍の効力を示した。

実施例■ 下記の配列 Ｈ−Ｐｈｅ　−Ｈｉ　５−Ｌｅｕ　−Ｌｅ　ｕ−Ａｒｇ−Ａｓｎ　−Ｎｌ　ｅ− Ｉ　ｌ　ｅ−Ｇｌ　ｕ−Ｎｌｅ−Ａｌ　ａ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ− Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｒｇ− Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｎｌｅ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−ＮＨ２を有するペプチド（ Ｎｌｅ”・２１・５〕−コイウロテンシンＩ（１２−４１）を合成した。実施例 ■に記載される方法にしたがって試験した結果、本実施例のペプチドもＡＣＴＨ およびβエンドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らかになった。

実施例■ 下記の配列 Ｈ−Ｐｈｅ−Ｈｉ　ｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇ ｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇ ｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｈｉ　ｓ−８ｅｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ− Ｎｌｅ−Ｇｌｎ５−８ｅｒ−Ａｓｎ−Ａｒを有するペプチドＣＮ１ｅ””＋　Ａ ｒｇ”　）　−ｈＣＲＦ（１２４１）を合成ｌまた上述の方法で合成し精製した ｈＣＲＦペプチドの比旋光度は、Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌ−ｍｅｒ　Ｍｏｄｅｌ　２ ４１　Ｐｏｌａｒｉｍｅｔｅｒ　で測定したところＣｄ〕”２−−２３．７士１ ．０　（ｃ＝ｏ、５　：　５０％酢酸中）（水とＴＦＡの存在につき補正後）で あった。

純度は約９ｇ％であったー 得らｔ′したペプチドは種々の溶１Ｊｉによ５薄層クロマト分析により一様であ ること力５４８ＩＩ明した。Ｗａｔｅｒａ　ＨＰ　ＬＣ（０，４６Ｘ　Ｚ　５ａ ｒＬカフム中に孔径３００λの５μｍ（Ｈシリカ、を充填）を用いて特に逆層高 圧液体クロマト分析を行った。緩衝液Ａは溶液１０１００Ｏあたり１．Ｑｍｌの ＴＦＡと３６．６％のアセトニトリルを含む０．１％ＴＦＡ溶液である。操作は 室温で行った。流速は２．０ｍ１１分であり、保持体積は１０．１ｍＡとした。

得られた精製ペプチドのアミノ酸分析の結果、上記の３０のアミノ酸からなるペ プチドであることが確認された。

実施例■に記載される一般的な方法にしたがって試験した結果、本実施例のペプ チドもＡＣＴＨおよびβエンドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らかに なった。本実施例のペプチドはＡＨＣ（９−４１）の６倍の効力を示した。

実施例Ｘ 下記の配列 Ｈ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ −Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−ＡＩａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ａｌａ −Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ −Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−１１ｅ−１１ｅ−ＮＨ２で表わされるペプチド（Ｄ−２Ｎａ １１２＋　Ｎ１．ｅ”＋”　）　−ｈＣＲＦ　（１２４１）を合成した。

上述の方法で合成し精製したｈＣＲＦペプチドの比旋光度は、Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅ ｌ−ｍｅｒ　Ｍｏｄｅｌ　２４１　Ｐｏｒａｒｔｍｅｔｅｒで測定したところ［ ：　ｄ］”、ｐ＝−２６，８士１．０　（ｃ＝ｏ、５　二５０％酢酸中）（水と ＴＦＡの存在につき補正後）であった。

純度は約９９％であった。

得られたペプチドは種々の溶媒による薄層クロマト分析により一様であることが 判明した。Ｗａｔｅｒｓ　ＨＰＬＣ（０，４６Ｘ２５Ｃｍカラム中に孔径３ｏｏ ；の５μｍｃ１６シリカ、を充填）を用いて特に逆層高圧液体クロマト分析を行 った。緩衝液Ａは溶液１０１００Ｏあたり１．ＯｌのＴＦＡと３９％のアセトニ トリルを含む０．１％ＴＦＡ溶液である。操作は室温で行った。流速は２．０ｍ ｌ／分であり、保持体積は８．９尼とした。

窃らに？＝精ｊＬＭフ０チト６のアミノ酸分析の結果−上記の３０のアミノ酸か らなるペプチドそあることが確認さｈた。

実施例■に記載されみ一般的な方法にしたがって試験した結果一本実施例のペプ チドもＡＣＴＨおよびβエンドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らかに なった。本実施例のペプチドはＡＨＣ（９−４１）の９倍の効力を示した。

実施倒立 下記の配列 Ｈ−Ｄ　−Ｐｈｅ−Ｈｉ　ａ　−Ｌｓ　ｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌ　ｕ−Ｖａ　 ｌ　−Ｌｅ　Ｌｌ−Ｇｌ　ｕ　−Ｎｌ　ｅ−Ａｌｍ−Ａｒｇ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　 ｕ−Ｇｌ　ｎ−Ｌｅ　ｕ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｎ−ＡＸ　ａ　−Ｈｉ　 ５−８ｅ　ｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−１１ｅ−１ １ｅ−ＮＨ２で表わされるペプチド［Ｄ−ＰｈｅＩｔ、Ｎｌｅ”＋”、Ｌｅｕ３ １′）−ｈＣＲＦ（１２−４１）を合成した。

上述の方法で合成し精製したｈＣＲ，Ｆペプチドの比旋光度は、Ｐｅｒｋｉｎ　 Ｅｌ−ｍｅｒ　Ｍｏｄｅｌ　２４１　Ｐｏｌａｒｔｍｅｔｅｒで測定したところ ［ｄ　Ｅ　２２＝−２２，７±１．０　（ｃ＝０．５　：　５０％酢酸中）（水 とＴＦＡの存在につき補正後）であった。

純度は約６８．２％であった。

得られたペプチドは種々の溶媒による薄層クロマト分析により一様であることが 判明した。Ｗａｔｅｒｓ　ＨＰ　ＬＣ（０，４６Ｘ　２５ｃｍカラム中に孔径３ ００久の５μｍ０１６シリカ、を充填）を用いて特に逆層高圧液体クロマト分析 を行った。緩衝液Ａは溶液ＺＯＯＭあたりＬＯｍｌのＴＦＡと４５．０％のアセ トニトリルを含む０．１％ＴＦＡ溶液である。操作は室温で行った。流速は２． ０７Ｍ／分であり、保持体積は９．０ｍｌとした。

得られた精製ペプチドのアミノ酸分析の結果、上記の３０のアミノ酸からなるペ プチドであることが確認された。

実施例■に記載される一般的な方法にしたがって試験した結果、本実施例のペプ チドもＡＣＴＨおよびβエンドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らかに なった。本実施例のペプチドはＡＨＣ（９−４１）の３倍の効力を示した。

下記の配列 Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｐｂｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇ ｌｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇ ｌｎ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−８ｅｒ−Ａｓｎ−Ａ ｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ａｓｐ−Ｎｖａ−Ｉｌｅ−ＮＨ２を有するペプ チド［Ａｃｅｔｙｌ−Ａａｐ’＋Ｇｌｙ”＋Ｎｌｅ”＋Ａｓｐ”、Ｎｖａ４ｏ） −ｈＣＲＦ（９−４１）を合成した。実施例■に記載される方法にしたがって試 験した結果、本実施例のペプチドもＡＣＴＨおよびβエンドルフィンの分泌を同 様に抑制することが明らかになった。

実施例■ 下記の配列 ）１−Ｐｈｅ−）ｔｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ− Ｇｌｕ−Ｍｅｔ−ＡＮａ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ａｌａ− Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−ＣＭＡ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ− Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−１１ｅ−１１ｅ−ＮＨｌを有するペプチド［：Ｇｌｎ”、Ｌｙ ｓ”、Ｖａｌ”＋　ＣＭＡ”、Ｎｌｅ”：］−ｈＣＲＦ（１２−４１）を合成し た。実施例■に記載される方法にしたがって試験した結果。

本実施例のペプチドもＡＣＴＨおよびβエンドルフィンの分泌を同様に抑制する ことが明らかになった。

実施例ＸＶ 下記の配列 Ｈ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｃ１ｕ−Ｖａ ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌ　ｅ　−Ａｌ　ａ−Ａｒ　ｇ−Ｇｌ　ｙ−Ｇｌ　ｕ− Ｇｌ　ｎ−Ｌｅ　ｕ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１’ｎ−Ａｌ　ａ　−Ｔｙ　ｒ− ８ｅｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−１１ｅ−１１ｅ− ＮＨＩを有するペプチドＣＮ１ｅ”＋”＋Ｇｌｙ”＋　Ｔｙｒ”、０ｒｎ３１′ ’：１−ｈＣＲＦ（１Ｏ−４１）を合成した。実施例■に記載される方法にした がって試験した結果、本実施例のペプチドもＡＣＴＨおよびβエンドルフィンの 分泌を同様に抑制することが明らかになった。

実施例ＸＶＩ 下記の配列 Ｈ−Ｓｅ　ｒ　−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌ　ｕ　−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ　 −Ｍｅ　ｔ−Ｉ　１　ｅ−Ａｌ　ａ−Ｌｙｓ　−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌ ｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａａｎ−Ａｒｇ−Ｌｅ ｕ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｂｒ−Ｇｉｎ−ＮＨ２を有するペプチド［Ａｌ ｔ”、Ｎｌｅ”、Ｇｉｎ”）−ソーバジン（１０−４０）を合成した。実施例■ に記載される方法にしたがって試験した結果、本実施例のペプチドもＡＣＴＨお よびβエンドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らかに下記の配列 Ｈ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−１１ｅ−Ｇｌ ｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｈａｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙａ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌ ｎ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌｓ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｎｌ ｅ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−１１ｅ−ＮＨ２を有するペプチド［Ａｌａ”、Ｈａｒ”＋ Ｎ１ｅ３）、ｐｈｅ”］−ソーバジン（１１−４０）を合成した。実施例■に記 載される方法にしたがって試験した結果、本実施例のペプチドもＡＣＴＨおよび βエンドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らかになった。

実施例Ｘ■ 下記の配列 Ｈ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ｖａｌ−Ｇｌ ｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−１１ｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌ ｎ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｏ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｎｌ ｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−ＮＨ２を有するペプチド［Ｖａｌ”＋”、ｌ１ｅ ２ｆｌ＋Ｎｌｅ”、Ｇｌｙ”　）−ンーバジン（１１−４０）を合成した。実施 例■に記載される方法にしたがって試験した結果、本実施例のペプチドもＡＣＴ Ｈおよびβエンドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らかになった。

実施例ＸｔＸ 下記の配列 Ｈ−４ＦＤ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＬ−ＣＭＬ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｍｅｔ−ＣＭ Ｌ−Ｇｌｕ−Ｍｅｔ−ＣＭＡ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−ＣＭＬ−Ａｌ ａ−Ｇｉｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−ＣＭＡ−ＣＭＬ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−ＣＭ Ｌ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−ＣＭＡ−ＮＨ２を有すルヘ”ｊ”ｆ　）”　Ｃ４ ＦＤ　−Ｐｈｅ”　Ｉ　ＣＭＬ”ｌ”　ｌ”Ｉ”　！”ｌ”　Ｉ　ＣＭＡ”Ｉ　 ”ｌ”　ＩＮｊｅ”）−ＡＨＣ（１２−４１）を合成した。実施例■に記載され る方法にしたがって試験した結果、本実施例のペプチドもＡＣＴＨおよびβエン ドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らかになった。

下記の配列 Ｈ−Ａｓ　ｐ　−Ｌｅ　ｕ−Ｔｈｒ−４ＣＩＤ−Ｐｈｅ−Ｈｉ　５−Ｌｅｕ　− Ｌｅ　ｕ−Ａｒｇ−Ｇｌ　ｅ　−Ｎｌ　ｅ　−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ −Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌ’ｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｌ 　ａ−Ａｌ　ａ　−Ｌｅ　ｕ−Ａｓ　ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ　−Ｎｌ　ｅ 　−Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　ｕ−ＡＮ　ａ　−ＮＨｔを有するペプチドＬ　４　ＣＩＤ −Ｐｈｅ’＋　Ｎｌ　ｅ””　”　〕−ＡＭ　Ｃ（９４１）を合成した。実施例 Ｉｎに記載される方法にしたがって試験した結果、本実施例のペプチドもＡＣＴ Ｈおよびβエンドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らかに下記の配列 Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｊｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ− Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ｌｙ　５−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ　−Ｍ、ｅ 　ｔ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｕ−Ｇ　１　ｎ−Ａｌ　ａ−Ａｌ　ａ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ −Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ’−Ａｌａ−ＮＨＩを有す るペプチド〔Ｄ　−ＰｈｅＩ２＋　Ｍｅ　ｔ”＋　Ｎｌｅ”　Ｔ”　）　−ＡＨ Ｃ（１２４１）を合成した。実施例■に記載される方法にしたがって試験した結 果、不実施例のペプチドもＡＣＴＨおよびβエンドルフィンの分泌を同様に抑制 することが明らかになった。

実施例ＸＸ■ 下記の配列 Ｈ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌ ｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｕ−Ｇ　１　ｎ−Ａｌ　ａ−Ａ ｌ　ａ　−Ｇ　ｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ−Ａｌ　ａ−Ａｌ　ａ−Ｌｅ　ｕ−Ａｓｎ−Ａ ｒｇ−Ｌｅ　ｕ　−Ｌｅ　ｕ−Ｎｌ　ｅ−Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　ｕ−Ａｌ　ａ−ＮＨ ２を有するペプチド［Ｎｌｅ””’＋　Ｌｅｕ”＋Ａｌａ”丁：）−ＡＨＣ（１ ２−４１）を合成した。実施例■に記載される方法に１−たがって試験した結果 、本実施例のペプチドもＡＣＴＨおよびβエンドルフィンの分泌を同様に抑制す ることが明らかになった。

実施例ｘｘｍ 下記の配列 Ｈ−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌ　ｕ−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅ　ｕ−Ａｒｇ−Ｇｌ　ｕ　−Ｍｅ　ｔ 　−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌ　ｕ　−Ｍｅ　ｔ−Ｇｌ　ｕ　−Ｌｙ　５−Ａｌ　ａ−Ｇｌ 　ｕ−Ｌｙ　５−Ｇｌ　ｕ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ−Ａ、ｌ　ａ−Ａｌ 　ａ−Ｌｅｕ　−Ａｓ　ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅ　ｕ−Ｎ１．　ｅ−Ｇｌ　 ｕ−Ｇｌ　ｕ−Ａｌ　ａ−ＮＨ２を有するペプチド［Ｌｅｕ１２．Ｇｌｕ””’ 、Ｌｙｓ”＋Ｎｌｅ”、）−ＡＭＣ（１２−４１）を合成した。実施例■に記載 される方法にしたがって試験した結果、本実施例のペプチドもＡＣＴＨおよびβ エンドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らかになった。

実施例ＸＸＩＶ 下記の配列 Ｈ−Ｄ　−Ｉ　ｌ　ｅ　−Ｔｙ　ｒ−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅ　ｕ−Ａｒ　ｇ−Ｇ１．　 ｅ　−Ｍｅ　ｔ−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌ　ｕ　−Ｍｅ　Ｌ−Ａｌｔ−Ｌｙ　５−Ａｌ　 ａ−Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ　−Ｇ　１　ｕ−ＣＭＡ−Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ−Ａｌ　 ａ−Ａｌ　ａ−Ｌｅ　ｕ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｎ１．ｅ−Ｇｌｕ −Ｇｌｕ−Ａｌａ−ＮＨ２を有するペプチド〔Ｄ−口、ｘｔ、Ｔｙｒ１３＋ＣＭ Ａ”、Ｎｌｅ”）−ＡＨＣ（１２−４１）を合成した。実施例■に記載される方 法にしたがって試験した結果、本実施例のペプチドもＡ　ＣＴ　Ｈおよびβエン ドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らかになった。

実施例ＸＸｖ 下記の配列 Ｈ−Ｄ　−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌ　ｕ−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅ　ｕ−Ａ、ｒ　ｇ−Ｇｌ　ｕ　 −Ｍｅ　ｔ　−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌ　ｕ、　−Ｍｅ　ｔ−Ａｌａ−Ｌｙ　５−Ａｌ　 ａ−Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｕ−ＡＸ　ａ　−Ｇ　ｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ−ＡＸ 　ａ　−Ａｌ　ａ−Ａｌ　ａ−Ａａ　ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇ ｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−ＮＨ２を有するペプチド（Ｄ−Ｌｅｕ”、Ｇｌｕ”＋Ａ ｌａ３３＋Ｎｌｅ”　：］−ＡＨＣ（１２−４１）を合成した。実施例■に記載 される方法にしたがって試験した結果、本実施例のペプチドもＡＣＴＨおよびβ エンドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らかになった。

実施例ＸＸＶＩ 下記の配列 Ｈ−Ｐｂ　ｅ−Ｈｉ　ｓ−ＣＭＬ−Ｌｅ　ｕ−Ａｒｇ−Ｇｌ　ｕ　−Ｍｅ　ｔ− ＣＭＬ−Ｇｌ　ｕ　−Ｍｅ　ｔ−Ａｌ　ａ　−Ｌｙｓ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｕ−Ｇ ｌ　ｎ−ＣＭＬ−Ａ　１　ａ−Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ−ＡＸ　ａ−Ａｌ　ａ−Ｌｅ 　ｕ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−ＣＭＬ−Ｌｅｕ−Ｎｌ　ｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　 ｕ−Ａｌ　ａ　−ＮＨＩを有するペプチド［ＣＭＬＬ４．＋９．．ｓａ、　Ｎｌ ｅ”　〕−ＡＨＣ（１２−４１）を合成した。実施例■に記載される方法に１− たがって試験した結果、本実施例のペプチドもＡＣＴＨおよびβエンドルフィン の分泌を同様に抑制し、血圧も有意に降下することが明らかになった。

下記の配列 Ｈ−Ｄ　−Ｎｌ　ｅ−Ｈｉ　ｓ　−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅ　ｕ−Ａｒ　ｇ−Ｇｌ　ｕ− Ｎｌ　ｅ　−Ａｓ　ｎ−Ｇ１　ｕ−Ｎｌ　ｅ−Ａｓｐ−Ｌｙ　５−Ａｌ　ａ−Ｇ ｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ−Ｐｈ　ｅ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ−Ａｌ　ａ−Ａｌ 　ａ−Ｌｅ　ｕ−Ａｓ　ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ −Ａｌａ−ＮＨＩを有するペプチド［Ｄ−Ｎｌｅ”＋Ｎ１ｅ’Ｌ”＋３８．Ａａ ｎ”＋Ａｓｐ”、Ｐｂｅ２７〕−ＡＭＣ（１２−４１）を合成ｌ−だ。実施例■ に記載される方法にしたがって試験した結果、本実施例のペプチドもＡＣＴＨお よびβエンドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らかになった。

実施例Ｘη１ 下記の配列 Ｈ−Ｔｈ　ｒ−Ｄ−Ｖａ　１−Ｈｉ　ｓ　−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅ　ｕ−Ａｒ　ｇ−Ｇ ｌ　ｕ　−Ｖａ　１−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌ　ａ−Ａｒｇ−Ｉ　ｌ　 ｅ−Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ−Ｉ　ｌ　ｅ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｎ−Ａｌ　 ａ−Ｈｉ　５−３ｅ　ｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ− １１ｅ−Ｎｖａ−ＮＨ２を有するペプチド［Ｄ−Ｖａｌ”＋Ｎｌｅ”ｌ”、ｌ１ ｅ２４１３？、Ｎｖａ”）−ｈＣＲＦ（１ｌ−４１）を合成した。実施例■に記 載される方法にしたがって試験した結果、本実施例のペプチドもＡＣＴＨおよび βエンドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らかになった。

実施例ＸｘＩＸ 下記の配列 Ａｅ　ｒ−Ｌｅ　ｕ−Ｔｈ　ｒ−Ｐｂ　ｅ−Ｈ４５−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅ　ｕ−Ａｒ ｇ−Ｇｌ　ｕ　−Ｖａ　ｌ　−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌ　ｅ−Ｍｅ　ｔ−Ａｌ　ａ−Ａｒ ｇ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ　−Ｖａ　１−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　 ｎ−Ａｌ　ａ−Ｈｉｓ−３ｅｒ−Ａａｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇ ｌｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ４を有するペプチドしアクリル−Ｌｅｕ”、Ｖａ１ ２７．Ｎｌｅ”＋Ａｌａ”、Ｌｅｕ”］　−ｈＣＲＦ（１０−４１）を合成した 。実施例■に記載される方法にしたがって試験に抑制することが明らかになった 。

実施例ＸＸＸ 下記の配列 Ｈ−Ｄ−Ｔｙ　ｒ−Ｈｉ　ｓ　−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅ　ｕ−Ａｒｇ−Ｇｌ　ｕ−Ｖａ 　１−ＡＸ　ａ−Ｇｌ　ｅ−Ｍｅ　ｔ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｎｌ　ｅ−Ｇｌ　ｕ− Ｇｌ　ｎ−Ｎｖａ−Ａ’ｌ　ａ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｎ−Ａｌ　ａ−Ｈｉ　５−３ ｅ　ｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ　−Ｌｅ　ｕ−Ｎｌ　ｅ−Ｇｌ　ｕ−Ｎｌ　ｅ −Ｉ　ｌ　ｅ　−ＮＨＩを有するペプチドＣＤ−Ｔｙｒ”＋Ａｌｔ”＋Ｌｙｓ” 、Ｎｌｅ”＋”＋”、Ｎｖａ”）−ｈＣＲＦ（１２−４１）を合成した。実施例 ■に記載される方法にしたがって試験した結果、本実施例のペプチドもＡＣＴＨ およびβエンドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らかになった。

実施例ＸＸＸ　Ｉ 下記の配列 Ｈ−Ｔｈｒ　−Ｄ−Ｈ４ａ−Ｈｉ　ｓ　−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌ　ｕ 　−Ｖａ　ｌ　−ＣＭＡ−Ｇｌ　ｕ　−ＣＭＡ　−Ａｌ　ａ−Ａｒｇ−ＣＭＡ　 −Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ　−ＣＭＡ　−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｎ−Ａｌ　ａ 　−Ｔｙｒ　−Ｔｂ　ｒ　−Ａｓ　ｎ−Ａｒｇ−Ｌｙ　ｓ　−Ｌｅ　ｕ　−Ｎｌ 　ｅ−Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ　−Ｉ　ｌ　ｅ−ＮＨ２を有するペプチドＣＤ−Ｈｌ ｓ”、ＣＭＡ”＋”＋”＋２７．Ｔｙｒ”＋Ｔｈｒ”、Ｎ１ｅ３８゜Ｇｌｕ４０ ）−ｈＣＲＦ（１１−４１）を合成した。実施例■に記載される方法にしたがっ て試験した結果、本実施例のペプチドもＡＣＴＨおよびβエンドルフィンの分泌 を同様に抑制することが明らかになった。

実施例ｘｘｘｎ 下記の配列 Ｈ−４Ｃ１−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉ　ｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌ　ｕ−Ｖａ ｌ　−Ｎｌ　ｅ−Ｄ−Ｇｌｕ−Ｎｖ　ａ−Ａｌ　ａ−Ａｒ　ｇ−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌ 　ｕ−Ｇｌ　ｎ−Ｎ１　ｅ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｎ−Ａｌ　ａ　−Ｈｉ 　ｓ−８ｅｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ５−８ｅｒ− Ａｓｎ−Ａｒを有するペプチドＣ４Ｃ１−Ｄ−Ｐｈｅ”、Ｎ１ｅ１９Ｉ”ｌｓｓ 、Ｄ−Ｇｌｕ”＋Ｎｖａ”、Ｌｅｕ”、Ｇｌｙ４０．ＣＭＡ”：］−ｈＣＲＦ（ １２４１）を合成した。実施例■に記載される方法にしたがって試験した結果、 本実施例のペプチドもＡＣＴＨおよびβエンドルフィンの分泌を同様に抑制する ことが明らかになった。

実施例ｘｘｘｍ 下記の配列 Ｂｚ−Ｄ−Ｍｅｔ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ　Ｇｌｕ−Ｖａｌ−’Ｌｅ ｕ−Ｇｌｕ−ＣＭＬ−Ａ１　ａ−Ａ　ｒｇ−ＣＭＬ−Ｇ　ｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ−Ｌ ｅ　ｕ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｎ−Ａｌ　ａ−Ｈｉ　Ｉ！ｌ−８ｅ　ｒ　 −Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｈａｒ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ２ を有するペプチドしベンゾイル−Ｄ−Ｍ　ｅ　ｔ　”　＋　ＣＭ　Ｌ　”　’　 ”　ｒ　Ｈａ　ｒ　３６＋　Ｎ　ｌ　ｅ　”　＋　Ｌｅｕ”、Ｐｈｅ”）−ｈＣ ＲＦ（１２４１）を合成した。実施例■に記載される方法にしたがって試験した 結果、本実施例のペプチドもＡＣＴＨおよびβエンドルフィンの分泌を同様に抑 制することが明らかになった。

実施例ＸＸＸＶＩ 下記の配列 Ｈ−Ｄ　−Ｈｉ　５−Ｈｉ　５−Ｌｅ　ｕ　−Ｌｅ　ｕ−Ａｒ　ｇ−Ｇｌ　ｕ　 −Ｖａ　１−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌ　ｕ−Ｐｈ　ｅ−Ａｌａ−Ｏｒ　ｎ−Ｐｈ　ｅ−Ｇ ｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ−Ａｓ　ｐ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｎ−Ａｌ　ａ−Ｈｉ 　５−８ｅ　ｒ−Ａｓ　ｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＡ −Ｖａｌ−ＮＨ２を有するペプチドＣＤ−Ｈ４ｓ１２＋Ｐｈｅ”＋２４＋Ｏｒｎ ”＋　Ａｓｐ２７．Ｎｌｅ”、ＣＭＡ”＋Ｖａｌ”］−ｈＣＲＦ（１２４１）を 合成した。実施例■に記載される方法にしたがって試験した結果、本実施例のペ プチドもＡＣＴＨおよびβエンドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らか になった。

実施例ｘｘｘｖ 下記の配列 Ｆｏ　ｒ　−Ｄ　−Ｐａ　１−Ｈｉ　ｓ　−Ｌｅ　ｕ　−Ｌｅ　ｕ−Ａｒｇ−Ｇ ｌ　ｕ　−Ｖａ　１−Ｐｈｅ−Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ　−Ｔｈ　ｒ　−Ａｒ　ｇ− Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ−Ｌｅ　ｕ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｎ−Ａ ｌ　ａ　−Ｔｙ　ｒ−８ｅ　ｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇ ｌｕ−ＣＭＬ−ＣＭＬ−ＮＨ２を有するペプチドしフォルミルーＤ−Ｐａｌ”＋ Ｐｈｅ”＋Ｇｌｎ”＋Ｔｈｒ２２．Ｔｙｒ”＋Ｎｌｅ”、ＣＭＬ”！”）−ｈＣ ＲＦ（１２４１）を合成した。実施例■に記載される方法にしたがって試験した 結果、本実施例のペプチドもＡＣＴＨおよびβエンドルフィンの分泌を同様に抑 制することが明らかになった。

実施例ｘｘｘｖｉ 下記の配列 Ｈ−Ｄ　−Ｐｈ　ｅ−Ｈｉ　５−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅ　ｕ−Ａｒ　ｇ−Ｇｌ　ｕ　− Ｖａ　１−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌ　ｕ−Ｎｌ　ｅ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ａｌ　ａ−Ａｓ　 ｐ　−Ｇ　１　ｎ−Ｔ、ｅ　ｕ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｒ＋−Ａｌ　ａ− Ｈ４５−８ｅ　ｒ−Ａｓ　ｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ａｓｐ−１１ ｅ−Ａｌａ−ＮＨＩを有するペプチド［Ｄ−Ｐｈｅ′２＋Ｎ１ｅ２１＋”］−ｏ ＣＲＦ（１２４１，）を合成した。実施例■に記載される方法にしたがって試験 した結果、本実施例のペプチドもＡＣＴＨおよびβエンドルフィンの分泌を同様 に抑制することが明らかになった。

実施例ＸＸＸ■ 下記の配列 Ｈ−Ｄ　−Ｐｈｅ−Ｈｉ　ｓ　−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅｕ−Ａｒ　ｇ　−Ｇ　１　ｕ　 −Ｖａ　Ｉ　−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌ　ｕ−Ｎｌ　ｅ−Ｔｈｒ−Ｌｙ　５−Ａｌ　ａ− Ａｓ　ｐ−Ｇ　ｌ　ｎ−Ｌｅ　ｕ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｎ　−Ｇ　ｌ　ｎ−Ａｌ　 ａ−Ｈｉ　ｓ−８ｅ　ｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ａｓｐ− Ｘｌｅ−Ａｌａ−ＮＨ２を有するペプチドＣＤ　−Ｐ　ｈ　ｅ　”　＋　Ｎ　１ 　ｅ　”　＋３８＋　Ａ　ｒ　ｇ　３１′３−　ｏ　ＣＲＦ　（１２４１）を合 成した。実施例■に記載される方法にしたがって試験した結果、本実施例のペプ チドもＡＣＴＨおよびβエンドルフィンの分泌を同様に抑制することが明らかに なった。

ＣＲＦは下垂体の副腎皮質軸を大いに刺激し、ＣＲＦ拮抗体はＡＣＴＨ又は体内 グルココルチコイド産生量の多℃・ある種の患者の副腎皮質機能を抑制するの瘍 に病む患者の下垂体副腎皮質の機能を調整するのに有用である。

他の多くの調節ペプチドは、内分泌系、中枢神経系および胃腸系に影響を及ぼす ことが知られている。ＡＣＴ）（やβ−ＥＮＤ−ＬＩ分泌はストレスに対する哺 乳動物の応答のｒ　Ｓｉｒ＋ｅ　ｑｕａ　ｎｏｎＪであるため、ＣＲＦが体のス トレス応答の媒介物として脳に効果的な作用を及ぼすということは驚くに値しな い。従って、脳にお（・てＣＲＦ拮抗体は通常のまたは精神障害に病む患者の気 分、学習機能・や行動を改善するのに用いることができる。また、脳においてＣ ＲＦ拮抗体は、内因性ＣＲＦが寄与していると考えられているストレスによ・つ て誘発される条件（ある種の高面用症、不音症、性欲減退症、インポテンス、高 血糖症を含む）を改善することができる。抹消投与したＣＲＦ拮抗体はＡ、　Ｃ Ｔ　Ｈ１βエンドルフィン、βリポト咄！ンやその他のブローオピオメラノコル チン遺伝子生成物およびコルチオステロン量を下げるので、拮抗体の投与は脳に おけるこれらの物質の影響を軽減し、記憶力、気分、痛み、より具体的には警戒 、抑うつおよび／または不安を改善１７、免疫系、胃腸障害、副腎皮質機能を調 製しうるのに使用することができるであろう。

ＣＲＦに類似するペプチドはすべて、腸間膜血管床拡張作用を有することが明ら かになっている。ＣＲＦ拮抗体は、哺乳類（とくにヒト）の胃腸系の血流を減少 させるのに有用である。また、ｏＣＲＦは胃酸の産生を抑え、ＣＲＦ拮抗体は哺 乳動物の胃酸の産生な抑えおよび／または胃腸の機能の調整に有効に使用しうる 。

ＣＲＦ拮抗体またはその無毒性塩は、医薬組成物をつくるために薬学的または獣 医学的に受容されるキャリアーと混合されて、ヒトを含めた動物へ静脈内、皮下 、筋肉内、経皮的（例えば鼻控内）、または経口的にさえ投与することができる 。これらの合成ペプチドは少なくとも約９０％、好ましくは少なくとも約９８％ の純度をもつべきである。しかし、ヒト以外の哺乳動物にはこれ以下の純度のも のも効果的であり使用しうる。本明細書において純度とは意図するペプチドが存 在する全てのペプチドおよびペプチドフラグメントの表示重量％を占めることを 意味する。本発明のペプチドは、血圧降下またはグルココルチコイド体内産生抗 体を脳室かを髄液に供給する必要がある。あるいは、拮抗体が血液−脳のバリヤ ーを通過することができるような手段が見いだされるべきである。

こわらのペプチド（ｉ適当に投与し、て生体機能を監視することＫよって、対象 とする内分泌腺または中枢神Ｅ系病理学とともに哺乳動物の視床下部下垂体副腎 の機能評価に使用することも可能ｔある。例えば、クツシング（Ｃｕｓｈｉｎｇ 　）病の評価のための診断手段とし７て投与しうる。

これらのペプチドは、亜鉛、鉄、カルシウム、バリウム、マグネシウム、アルミ ニウムなどの金属との錯体（これも本発明の無毒性付加塩の一つとする）または 酸付加塩のような薬学的または獣医学的に許容しうる無毒性塩の形で投与される こともある。このよ、プな酸伺加塩の例として、塩酸塩、臭化水素塩、硫酸塩、 リン酸塩、タンニン酸塩、シュク酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、アルギン酸 塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩 、アスコルビン酸塩、酒石酸塩などである。活性成分を錠剤の形で経口的に投与 する場合、錠剤はトラガカント、トウモロコシでんぷんまたはゼラチンのような 結合剤；アルギン酸のような崩壊剤；およびステアリン酸マグネシウムのような 滑沢剤を含みうる。液体での投与が望筐れる場合は甘味料および／または風味料 を使用することができ、また等張塩水やリン酸緩衝液などによって静脈内投与を 行うこともできる。

本ペプチドは医師の指導のもとでヒトに投与されるべきであり、医薬組成物は通 常薬学的に受容される慣用の固体または液体キャリアーと共にペプチドを含むだ ろう。一般に、投与量は受容動物の体重１〜あたりペプチド約１〜約２００マイ クログラムであるだろう。本明細書において温度はすべて℃表示であり、比はす べて体積比である。液体についてパーセンテージも体積％である。

本発明を本発明者が認める最もよい方法である好適な実施態様で説明してきたが 、当分野での通常の知識を有する者に明らかないろいろな変更および修飾が特補 正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８） 平成　３年　３月）４日 特許庁長官　植　松　敏　殿　畷１ １、特許出願の表示 ＰＣＴ／ＵＳ８９１０４１１８ ２、発明の名称 ＣＲＦ拮抗体 ３、特許出願人 住　所　アメリカ合衆国カリフォルニア用９２０３７．　ラ・ホーラ。

ノース・トーレイ・バインズ・ロード　１００１０名　称　ザ・サルク・インス テチュート・フォー−ノクイオロジカル・住　所　東京都千代田区大手町二丁目 ２番１号新大手町ビル　２０６区 ５、補正書の提出日 ３４条補正 １．　Ｈ−Ｒ，−Ｒ，１ｏ−Ｒ４，−Ｒ，□−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ −Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｒ２ｏ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒ　ｇ−Ａｌ　ａ−Ｇ ｌｕ−Ｇｌ　ｎ−Ｌｅｕ−Ａｌ　ａ−Ｇｉｎ−Ｇｉｎ−Ａｌ　ａ−Ｈｉ　５−８ ｅ　ｒ−Ａｓｎ−Ａｒ　ｇ−Ｒｓｓ　−Ｒ３７−Ｎ１ｅ−Ｇｌ　ｕ−Ｉ　ｌ　ｅ −Ｒ４１−ＮＨ２（上式においてＲｏはＡｓｐ又はｄｅｓ　Ｒｅ　；　Ｒｌｏに １．　ｅ　ｕ又はｄｅｓ　Ｒ４ｏ　；　ＲａｔはＴｈｒ又はｄｅｓＲ，；Ｒ１２ はＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−２Ｎａｌ又はＰｈｅ　；　Ｒ２ｏはＧｌｕ又はＤ　−Ｇｌ　 ｕ　；　Ｒ３ｅはＬｙｓ＋Ａｒｇ、Ｌｅｕ又はＨａｒ；Ｒ，７はｌｅｕ　；そし てＲ４＋はＡｌ３又はＩｌｅである） 又はその無毒性付加塩。

２、Ｒｏはｄｅｓ　Ｒｅ　：　Ｒｌｏはｄｅ　ｓ　Ｒ４ｏ；　ＲａｔはｄｅｓＲ Ｈ；そしてＲ１２はＤ−Ｐｈｅ又はＤ−２Ｎａｌである請求項１の化合物。

３．３７位のＬｅｕがＣ（：ｔＣＨ３−Ｌｅｕである請求項２の化合物。

４、ＲＩ□はＤ　−Ｐ　ｈ　ｅ　：　Ｒ２ＯはＧ　ｌ　ｕ　ｐ　ＲｓａはＬｙｓ 　；そしてＲ４１はＩｌｅである請求項３の化合物。

５　Ｙ−Ｒｅ　Ｒ＋ｏ　Ｒｕ−Ｒａｔ−Ｈｔｓ−１５−１ｅｕ−１ｅｕ−Ａｒ＋ ７　ＲＩｇ−Ｒ＋、−Ｒｚｏ−Ｒｚｔ−Ｒｚ２−Ｒｚｓ−Ｒｚ４　Ｒｚ５−Ｒｚ ａ−Ｒｚｔ−Ｒｚｓ−Ｒｚａ　Ｇｌｎ−ａｌａＲ３２Ｒ３３−Ａｓｎ−Ａｒｇ− Ｒｓｅ　Ｒ５７−Ｎｌｅ−Ｒｓｏ　Ｒ４ｏ−Ｒ４＋−ＮＨｔ（上式において、Ｙ は水素または炭素数７以下のアシルであり：Ｒ０はＡｓｐ又はｄｅｓＲ，：Ｒ＋ ｏはＬｅｕ又はｄｅｓ　Ｒ７ｏ：　ＲｏはＴｈｒ　、Ｓｅｒ又はｄｅ　Ｓ　Ｒｏ 　：　Ｒａｔは（Ｑ）　Ｄ−Ｐｈｅ　、Ｄ−Ｔｙｒ　、Ｄ−Ｌｅｕ　、Ｄ−Ｈｉ 　ｓ　、Ｄ−Ｎａｌ　、　Ｄ−Ｐａ　ｌ　、Ｄ−Ｉ　ｌｅ　、Ｄ−Ｎｌｅ、Ｄ− Ｖａｌ、Ｄ−Ｍｅｔ、Ｐｈｅ又はＬｅｕ；ＱはＨ，４Ｃ１又は４Ｆ；Ｒ，、はＨ ｉｓ、Ｔｙｒ又はＧ　Ｉ　ｕ　；　Ｒｌ　７はＧｌｕ、Ａｓｎ又はＬｙＳ；ＲＩ ｇはＶａｌ、Ｎｌｅ又はＭｅｔ；Ｒ，ｇおよびＲ２４はｌｅｕ、ＩＩｅ、ａｌａ 、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群より選択さ れ；Ｒ，、はＧｌｕ又はＤ−Ｇ　ｌ　ｕ　；Ｒ２１はＭｅｔ、Ｎｖａ。

１１ｅ、ａｌａ、Ｉｅｕ、Ｎｌｅ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ又はＧｌｎ：Ｒ２ｚはａ　ｌ ａ　、Ｔｈｒ　、Ａｓｐ　又はＧｌｕ；ＲＨはＡｒｇ、Ｏｒｎ、Ｈａｒ又はＬｙ ｓ　；　Ｒ，、はＡｓｐ又＆ＬＧ　Ｉ　ｕ　；　Ｒ２６はＧＩｎ、Ａｓｎ又はＬ ｙｓ；Ｒ２２はｌｅｕ、ＩＩｅ、ａｌａ、Ｖａｔ　、Ｎｖａ、Ｍｅｔ＋ＮＩｅ＋ Ｐｈｅ。

Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｉｎ又はＧｌｕ　；　Ｒ２８はａｌａ、Ａｒｇ又はＩ−Ｙ　 Ｓ　：　Ｒ２９はＧｉｎ又はＧｌｕ；Ｒ３２はＨｉｓ、Ｇｌｙ４’ｙｒ又はａｌ ａ；Ｒ３３はＳｅｒ、Ａｓｎ＋Ｌｅｕ、Ｔｈｒ又はａｌａ；ＲｖはＬｙｓ＋Ｏｒ ｎ＋Ａｒｇ＋Ｈａｒ又はＬ　ｅ　ｕ　；　Ｒ３７はｌｅｕ又は’ｒｙ　ｒ　；　 ＲｓｅはＧｌｕ又はＡ８ｐ：Ｒ２Ｏは１１ｅ４’ｈｒ＋Ｇｌｕ＋ａｌａ、Ｖａｌ ＋ｌｅｕ、Ｎ１ｅ＋Ｐｈｅ。

Ｎｖａ、Ｇｌｙ又はＧｌｎ；そしてＲ４＋はａ　ｌ　ａ　、Ｉ　ｌ　ｅ　＋　Ｇ 　１　ｙ　＋　Ｖ　ａ　ｌ　＋　ｌ　ｅ　ｕ　＋　Ｎ　］、@ｅ　＋　Ｐ ｈｅ、Ｎｖａ又はＧｉｎである） 又はその無毒性付加塩。

６、Ｒ，はＨ４ｓ　；　Ｒ１７はＧｌｕ：ＲｕはＶａｌ；Ｒ２１１はＧｉｎ；そ してＲ２ＨはＡｌｍである請求項５の化合物。

７、Ｒ，、がＮ　ｌ　ｅである請求項６の化合物。

８、Ｒ，ｎがＡ　ｌ　ａ　：　ＲｘｓがＡｒ　ｇ　：　Ｊ５がＧｌｕ；ＲｕがＨ ｔｓ；ＲｕがＳｅｒ；そしてＲ，、がＩＩｓである請求項７の化合物。

９、Ｒ，、がＬｅｕ：ＲｚａがＡＩＩＬ；　Ｒ２７がＬｅ−ｕ；そしてＲ３９が Ｇｌｕである請求項８の化合物。

１０、　Ｒ，、がｄｅａＲｇ　；　’Ｊ。がｄｅａＲ４ｏ：そしてＲ１１がｄｅ ｓＲＨである請求項９の化合物。

１１、　Ｒ，□がＤ−２ＮＡＬである請求項９の化合物。

１２、　Ｒ，、がＤ　Ｐｈｅである請求項１０の化合物。

１３、　Ｒ，がＬｙｓ　である請求項１１または１２の化合物。

１４、　Ｒ，□がＰｈｅ　である請求項８の化合物。

１５、　Ｒ，がＡｒｇである請求項１４の化合物。

１６、　Ｒ，、がＤ−Ｇｌｕである請求項７の化合物。

１７、下記の配列 Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉ　ａ　−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅ　ｕ−Ａｒｇ−Ｇ　ｌ　ｕ　−Ｖ ａ　ｌ　−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌ　ｕ−Ｎｌ　ｅ−Ａｌａ−Ａｒ　ｇ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ 　ｕ−Ｇｌ　ｎ　−Ｌｅ　ｕ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｎ−Ｇｌｎ−Ａｌ　ａ−Ｈｉ　 ｓ−８ｅｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ５−８ｅｒ−Ａ ｓｎ−Ａｒを有する請求項５の化合物。

１８、下記の配列 Ｈ−Ｄ　−Ｐｈｅ−Ｈｉ　ｓ　−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅ　ｕ−Ａｒ　ｇ−Ｇｌ　ｕ−Ｖ ａ　ｌ　−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌ　ｕ−Ｎｌ　ｅ　−Ａｌ　ａ−Ａｒｇ−Ａｌ　ａ−Ｇ ｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ−Ｌｅｕ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｎ−Ａｌ　ａ−Ｈｉ　 ５−８ｅ　ｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−１１ｅ−１１ｅ−Ｎ Ｈ２を有する請求項５の化合物。

１９、下記の配列 Ｈ−Ｄ　−２ＮＡ　Ｌ−Ｈｔ　５−Ｌｅｕ−Ｌｅ　ｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ　−Ｖａ 　ｌ　−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌ　ｅ−Ａｌ　ａ−Ａｒ　ｇ−Ａｌ　ａ　−Ｇ　 １　ｕ　−Ｇ　１　ｎ−Ｌｅ　ｕ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｎ−Ａｌ　ａ− Ｈ４ｓ　−３ｅｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ −Ｉｌｅ−ＮＨ２を有する請求項５の化合物。

２０、請求項５の合成ペプチド又はその無毒性付加塩の効果量と薬学的または獣 医学的に許容しうる液体または固体担体からなる哺乳類のストレスを軽減する組 成物。

国際調査報告

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. １．【配列があります】 （上式において、Ｒ９はＡｓｐ又はｄｅｓＲ９；Ｒ１０はＬｅｕ又はｄｅｓＲ１ ０；Ｒ１１はＴｈｒ又はｄｅｓＲ１１；Ｒ１２はＤ−Ｐｈｅ，Ｄ−２Ｎａｌ又は Ｐｈｅ；Ｒ２０はＧｌｕ又はＤ−Ｇｌｕ；Ｒ３６はＬｙｓ，Ａｒｇ，Ｌｅｕ又は Ｈａｒ；そしてＲ４１はＡｌａ又はＩｌｅである） 又はその無毒性付加塩。
2. ２．Ｒ９はｄｅｓＲ９；Ｒ１０はｄｅｓＲ１０；Ｒ１１はｄｅｓＲ１１；そして Ｒ１２はＤ−Ｐｈｅ又はＤ−２Ｎａｌである請求項１の化合物。
3. ３．Ｙ−Ｒ９−Ｒ１０−Ｒ１１−Ｒ１２−Ｒ１３−Ｉｅｕ−Ｉｅｕ−Ａｒｇ−Ｒ １７−Ｒ１８−Ｒ１９−Ｒ２０−Ｒ２１−Ｒ２２−Ｒ２３−Ｒ２４−Ｒ２５−Ｒ ２６−Ｒ２７−Ｒ２８−Ｒ２９−Ｇｌｎ−ａｌａ−Ｒ３２−Ｒ３３−Ａｓｎ−Ａ ｒｇ−Ｒ３６−Ｒ３７−Ｎｌｅ−Ｒ３９−Ｒ４０−Ｒ４１−ＮＨ２（上式におい て、Ｙは水素または、炭素数７以下のアシルであり；Ｒ９はＡｓｐ又はｄｅｓＲ ９；Ｒ１０はＬｅｕ又はｄｅｓＲ１０；Ｒ１１はＴｈｒ，Ｓｅｒ又はｄｅｓＲ１ １；Ｒ１２は（Ｑ）Ｄ−Ｐｈｅ，Ｄ−Ｔｙｒ，Ｄ−Ｌｅｕ，Ｄ−Ｈ１ｓ，Ｄ−Ｎ ａｌ，Ｄ−Ｐａｌ，Ｄ−Ｉｌｅ，Ｄ−Ｎｌｅ，Ｄ−Ｖａｌ，Ｄ−Ｍｅｔ，Ｐｈｅ 又はＬｅｕ；ＱはＨ，４Ｃｌ　又は４Ｆ；Ｒ１３はＨｉｓ，Ｔｙｒ又はＧｌｕ； Ｒ１７はＧｌｕ，Ａｓｎ又はＬｙｓ；Ｒ１６はＶａｌ，Ｎｌｅ又はＭｅｔ；Ｒ１ ９およびＲ２４はＩｅｕ，Ｉｌｅ，ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｖａｌ，Ｎｌｅ，Ｐｈｅ， ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群より選択され；Ｒ２０はＧｌｕ又はＤ−Ｇｌｕ； Ｒ２１はＭｅｔ，Ｎｖａ，Ｉｌｅ，ａｌａ，Ｉｅｕ，Ｎｌｅ，Ｖａｌ，Ｐｈｅ又 はＧｌｎ；Ｒ２２はａｌａ，Ｔｈｒ，Ａｓｐ又はＧｌｕ；Ｒ２３はＡｒｇ，Ｏｒ ｎ，Ｈａｒ又はＬｙｓ；Ｒ２５はＡｓｐ又はＧｌｕ；Ｒ２６はＧｌｎ，Ａｓｎ又 はＬｙｓ；Ｒ２７はｌｅｕ，Ｉｌｅ，ａｌａ，Ｖａｌ，Ｎｖａ，Ｍｅｔ，Ｎｌｅ ，Ｐｈｅ，Ａｓｐ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ又はＧｌｕ；Ｒ２８はａｌａ，Ａｒｇ　又は Ｌｙｓ；Ｒ２９はＧｌｎ又はＧＩｕ，Ｒ３２はＨｉｓ，Ｇｌｙ，Ｔｙｒ又はａｌ ａ；Ｒ３３はＳｅｒ，Ａｓｎ，Ｉｅｕ，Ｔｈｒ又はａｌａ；Ｒ３６はＬｙｓ，Ｏ ｒｎ，Ａｒｇ，Ｈａｒ又はＩｅｕ；Ｒ３７はＩｅｕ又はＴｙｒ；Ｒ３０はＧｌｕ 又はＡｓｐ；Ｒ４０はＩｌｅ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，ａｌａ，Ｖａｌ，Ｉｅｕ，Ｎｌ ｅ，Ｐｈｅ，Ｎｖａ，Ｇｌｙ又はＧｌｎ；そしてＲ４１はａｌａ，Ｉｌｅ，Ｇｌ ｙ，Ｖａｌ，Ｉｅｕ，Ｎｌｅ，Ｐｈｅ，Ｎｖａ又はＧｌｎである）又はその無毒 性付加塩。
4. ４．Ｒ１３はＨｉｓ；Ｒ１７はＧｌｕ；Ｒ１８はＶａｌ；Ｒ２０はＧｌｎ；そし てＲ２８はＡｌａである請求項３の化合物。
5. ５．Ｒ２２はＡｌａ；Ｒ２３はＡｒｇ；Ｒ２５はＧｌｕ；Ｒ３２はＨｉｓ；Ｒ３ ３はＳｅｒ；そしてＲ４０はＩｌｅである請求項３又は４の化合物。
6. ６．Ｒ１９はＬｅｕ；Ｒ２４はＡｌａ；Ｒ２７はＬｅｕ；そしてＲ３９はＧｌｕ である請求項３〜５のいずれかの化合物。
7. ７．Ｒ２１がＮｌｅである請求項３〜６のいずれかの化合物。
8. ８．Ｒ１２がＤ−２ＮＡＬである請求項３〜７のいずれかの化合物。
9. ９．Ｒ１２がＤ−Ｐｈｅである請求項３〜７のいずれかの化合物。
10. １０．Ｒ１２がＰｈｅである請求項３〜７のいずれかの化合物。
11. １１．Ｒ３６がＡｒｇである請求項３〜１０のいずれかの化合物。
12. １２．Ｒ３６がＡｒｇである請求項３〜１０のいずれかの化合物。
13. １３．Ｒ３６がＬｙｓである請求項３〜１０のいずれかの化合物。
14. １４．Ｒ２０がＤ−Ｇｌｕである請求項３〜１３のいずれかの化合物。
15. １５．Ｒ９はｄｅｓＲ９；Ｒ１０はｄｅｓＲ１０；そしてＲ１１はｄｅｓＲ１１ である請求項３〜１４のいずれかの化合物。
16. １６．下記の配列 【配列があります】 を有する請求項３の化合物。
17. １７．下記の配列 【配列があります】 を有する請求項３の化合物。
18. １８．下記の配列 【配列があります】 を有する請求項３の化合物。
19. １９．請求項１〜１８のいずれかの合成ペプチド又はその無毒性付加塩の効果量 と薬学的または獣医学的に許容しうる液体または固体担体からなる哺乳類のスト レスを軽減する組成物。
20. ２０．請求項１９の組成物を哺乳類に効果量することからなる哺乳類のストレス を軽減する方法。