JPH04501436A - ポリマー組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ポリマー組成物 本発明はポリマー組成物、特に、これに限られるわけではないが、アフィニティ ークロマトグラフィー用の支持体の製造に使用するのに適しているポリマー組成 物に関する。

公知のポリマー支持体としては、架橋された、化学変化を受けやすいヒドロキシ 基を含むポリマーが挙げられる。たとえば、米国特許第４．３３０．４４０号は ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）を含むアフィニティークロマトグラフ ィー用のポリマー支持体を記載している。この支持体は、カルボニル化剤との反 応によって活性化されて、リガンドの支持体への結合を促進させる。リガンドは 、ポリマー支持体上に固定された化合物と特異的に相互作用するように選ばれた 置換基である。たとえば、リガンドはタンパク質であることができる。

架橋ポリマーを製造するための多数の架橋剤が知られている。架橋剤は、低分子 量化合物、たとえば、グルタルアルデヒド及びエビクロロヒドリンである。ある 範囲の用途の場合には、残留する未反応のまたは一部分反応した架橋剤の存在に よってポリマーの製造及び使用上の種々の問題がもたらされる。これらの問題と しては、ポリマーからの架橋剤の漸次滲出及びアフィニティー分離系におけるリ ガンド、たとえば、タンパク質の不活性化が挙げられる。

本発明は、添加された低分子量架橋剤によらずに架橋結合を生ずることのできる モノマー単位を取り入れるコポリマーを提供することによってこれらの問題を克 服しようとするものである。

さらに詳しくは、本発明は、エステル基が化学変化を受けやすい第一ヒドロキシ ル基を含むエチレン系不飽和カルボン酸のエステルから誘導されたモノマー単位 及びエチレン系不飽和カルボン酸のハロヒドロキシアルキルエステルから誘導さ れたモノマー単位を含んでなる親水性架橋性コポリマーを提供する。

本発明はまた、エステル基が化学変化を受けやすい第一ヒドロキシル基を含むエ チレン系不飽和カルボン酸のエステル、エチレン系不飽和カルボン酸のハロヒド ロキシアルキルエステル及び重合開始剤を含んでなる組成物を形成し、そして重 合開始剤から遊離基を発生させる条件下に該組成物を供することを含んでなる、 親水性架橋性コポリマーの製造方法を提供する。

別の観点において、本発明は、本発明のコポリマーの層が塗布された支持体を含 んでなる、液体からの化学物質除去用の要素を提供する。

液体からの化学物質の除去方法は、化学物質用のリガンドが結合した本発明のポ リマーと液体とを接触させることを含んでなる。

本発明の全てのポリマーは、化学変化を受けやすいヒドロキシ基の存在のために アフィニティー分離系に役立つことが期待される。

化学変化を受けやすいヒドロキシ基含有モノマー単位はポリマー基準で９５モル ％以下の量で存在できる。好ましくは、モノマー単位はコポリマーの主要なモノ マー成分を表し、６０〜９５モル％、より好ましくは７５〜９０モル％の量で存 在できる。

化学変化を受けやすい、好ましいヒドロキシ基含有モノマーとしてはヒドロキシ アルキル含有モノマー、たとえば、ヒドロキシアルキルアクリレート及びメタク リレートが挙げられる。特に好ましいモノマーはヒドロキシエチルメタクリレー トである。

ハロヒドロキシアルキルエステルモノマー単位はコポリマーを架橋させる。コポ リマー中に存在する単位の量は所望の架橋度によって決まるであろう。モノマー 単位は通常、ポリマーの少ない方の成分として、たとえば、５〜４０モル％、好 ましくは１０〜２５モル％の量で存在するであろう。

好ましい実施態様において、ハロヒドロキシアルキルエステルはアクリル酸エス テルまたはメタクリル酸エステルである。

好ましくは、ハロヒドロキシアルキル基は炭素原子を２〜６個、より好ましくは ３個含み、ハロ及びヒドロキシ置換基は隣接する炭素原子上にある。好ましいハ ロ置換基はクロロ置換基である。最も好ましいモノマーは３−クロロ−２−ヒド ロキシプロピルメタクリレートである。

コポリマーの親水性の改良は、水素結合に関与できる基、たとえば、ヒドロキシ ル基をエステル基が含まないエチレン系不飽和カルボン酸のエステルから誘導さ れた別のモノマー単位を取り入れることによって達成できる。

このようなモノマー単位は好ましくは、４５モル％以下、好ましくは１〜１０モ ル％の蛍で存在する。

好ましいモノマーとしてはアクリル酸アルキル及びメタクリル酸アルキルが挙げ られ、メタクリル酸メチルが特に好ましい。

コポリマーの非特異的吸着特性の改良は、コポリマーに負の電荷を与えることの できる少量の別のエチレン系不飽和モノマー単位を取り入れることによって達成 できる。このようにして、表面への物質、たとえば、タンパク質の表面への望ま しくない吸着が低減される。モノマーは好ましくは、１〜１０モル％の量で存在 する。

好ましい負電荷付与モノマーはイオン化性（ｉｏｎｉｓａｂｌｅ）　酸作用を含 み、その例としてはエチレン系不飽和カルボン酸、たとえば、アクリル酸及びメ タクリル酸が挙げられる。

本発明の特に好ましい架橋性コポリマーはメタクリル酸ヒドロキシエチル、メタ クリル酸３−クロロ−２−ヒドロキシプロピル、メタクリル酸メチル及びメタク リル酸から誘導されたモノマー単位を含んでなる。

本発明のコポリマーは標準遊離基重合法によって合成できる。たとえば、適当な モノマー及び熱重合開始剤の溶液をコポリマーを生成するのに充分な時間、たと えば、５０〜８０℃の温度において０．５〜３０時間、加熱できる。好ましくは 、重合は早期架橋を防ぐのに充分に低いｐＨにおいて、たとえば、２以下のｐＨ において実施する。

架橋性コポリマーの分子量は決定的なものではない。好ましくは、分子量はコポ リマーを溶媒中に溶解させ、塗布し、次いで架橋させることのできるようなもの である。以下に報告した測定に基づく分子量（Ｍｗ）の好ましい範囲は１０’〜 １０６である。

架橋性コポリマーは架橋を起こさせるのに充分高いｐＨにおいて架橋させること ができる。架橋性コポリマーは好ましくは塩基の存在下において架橋させる。適 当な塩基の例としては水酸化テトラアルキルアンモニウム及びアルカリ金属アル コキシド及び水酸化物が挙げられる。好ましい塩基としては水酸化テトラブチル アンモニウム及び水酸化テトラメチルアンモニウムが挙げられる。

本発明の架橋性コポリマーを支持体上に塗布しようとする場合には、溶媒中に溶 解したコポリマーを含む塗料組成物の形態で使用できる。好ましくは、組成物は さらに塩基を含んでなる。塗料組成物は架橋前に支持体上に塗布する。塗料の乾 燥時に、好ましくは高温において架橋が起こり、それによって塗布支持体の製造 が容易になる。

架橋されたコポリ＝−は液体かび攬学物質の選択的除去に使用するのに、たとえ ば、アフィニティークロマトグラフィーに使用するのに適当である。このような 使用は、架橋されたコポリマー中の化学変化を受けやすい、第一ヒドロキシル基 の存在によって可能になる。除去すべき物質と相互作用するであろうリガンドは 、化学変化を受けやすい第一ヒドロキシル基を介してコポリ゛７−に共有結合で きる。いくつかの場合には、結合はヒドロキシル基を介して直接起こることがで きる。あるいは、ヒドロキシル基はリガンドの結合が起こる前に活性化剤との反 応によって活性化できる。種々の活性化剤が先行技術に記載されている。

リガンドと除去ずべき物質との相互作用はイオン交換またはキレート化のように 主に化学的であるか、または生化学分子間の゛γクィニディーコンブ１ノックス の形成のように生化学的性質を持つものであるう相互作用が可逆的である場合に は、固定された物質は溶離によって回収できる。

本発明は、本発明のコポリマーの層が塗布された支持体を含んでなる、液体から の化学物質除去用の要素を提供する。

要素は、前記のように塗料組成物を支持体に塗布し、そして塗布された支持体を 、好ましくは高温で乾燥させることによって製造できる。

本発明はまた、化学物質に対するリガンドが結合している本発明の架橋ポリマー と液体とを接触させることを含んでなる、液体からの化学物質の除去方法を提供 する。

本発明を一例として、添付の略図中で説明する：第１図は本発明の好まし７い要 素の横断面図であり；第２図は要素を使用できる装置の外部の斜視図であり；第 ３間は第２図の線２−２に沿って切った縦断面図であり；そして 第４図は第２図の線３−３に沿って切った横断面図である。

方法は生物特異的親和性反応、特に免疫化学反応を使用できるものである。この 場合、リガンドは別の免疫化学成分に対して生物特異的親和性を示す免疫化学的 成分、たとえば、タンパク質であることができる。重要なこのような反応は抗原 （またはハプテン）とそれに対する抗体との間の反応である。単クローン性抗体 の使用によって特異性の高い親和性反応が実施可能になる。

通常、異物と称される抗原の例としてはウィルス、細菌、細菌毒素、炭水化物、 ホルモン、薬物及びレクチンが挙げられる。

本発明のポリマーに結合させることのできるリガンドの具体例としては、トリア ジン色素Ｐｒｏｃｉｏｎ　ＭＸ−Ｒ及びＣ１ｂａｃｒｏｎＢｌｕｅ　Ｆ３Ｇ−Ａ のような反応性色素、ラット抗−マウスに一鎖抗体ならびにタンパク質Ａが挙げ られる。

リガンドをポリマーに直接結合させることができない場合には、リガンドの結合 を可能にするように活性化剤を使用できる。活性化剤の例としてはジビニルスル ホン、臭化シアン及びカルボニルジイミダゾールが挙げられる。

架橋性コポリマーは溶液から塗布できる。塗料溶液は架橋が起こるように塩基を 含むことができる。塩基を適当に選択することによって、架橋及び製造をコント ロールできる。たとえば、架橋が完了する数時間前に架橋が起こるように塩基を 選択することもできるし、有効な架橋が起こる前に加熱が必要な場合もある。

架橋性コポリマーは支持体上に塗布してから架橋して、液体からの化学物質の選 択的除去用の、たとえば、アフィニティ゛−クロマトグラフィー用の要素を提供 できる。

支持体は材料のシートの形態を取ることができる。本発明の要素の支持体シート は種々の材料から形成できる。たとえば、適当な材料は金属、ガラスまたはポリ マーであることができる。シートまたはフィルムを形成できる多くの高分子材料 が適当であって、その例としては、たとえば、セルロースエーテルもしくはエス テル、たとえば、酢酸セルロース、ポリエステル、たとえば、ポリ　（エチレン テレフタレート）、ポリオレフィン、たとえば、ポリ　（プロピレン）及びポリ 塩化ビニルが挙げられる。

支持体の厚さは、それを製造する材料及び要素の使用法に応じて広範囲に変化さ せることができる。コンパクトであるためには、支持体シートは好ましくはでき るだけ薄く、しかも機械的安定度の要件を満たすものである。−例として、支持 体シートの厚さはＯ，Ｏ１〜０．５　ｍｍ、より好ましくハ０．０５〜０、２　 ｍｍであることができる。

好ましくは、支持体シートは軟質である。また、支持体シートは平らであること が好ましい。

好ましくは、ポリマー層は支持体上に連続層を構成する。

ポリマー層の厚さは使用するポリマーのような要因によって決まるであろう。リ ガンドと除去すべき物質との間の相互作用は通常、主に層の表面で起こるので、 それは支持体シートへのリガンドの適切な結合を生ずるのに充分な厚さでありさ えすればよい。−例として、ポリマー層の乾燥厚さは５〜１００ｎ、より好まし くは１０〜５０１ｍであることができる。

ポリマー層と支持体シートとの間の適切な接着は、関与する２種の物質の適当な 選択によって得られる。あるいは、接着は下塗り層の使用のような他の手段によ って、またはポリマー層を適用する前に支持体シートをコロナ放電または高周波 プラズマ処理にかけることによって促進できる。

ポリマー層は支持体シートの各面に提供できる。

ポリマー層はスペーサ一手段として作用する粒状物質を含むことができる、すな わち、粒状物質が、本発明の要素を別の要素から間隔をあけることのできるまた は同一要素の別の部分をそれを背にして保持することができる手段を提供する。

粒状物質はポリマー塗膜上または内に化学的に保持され得る。

好ましくは、粒状物質は実質的に均一の形状及び寸法を有する粒子からなる。多 くの用途の場合に、個々の粒子は、隣接する要素間に実質的に均一な距離の分離 を提供するように、層内に分布させることが望ましい。

前述のように、粒状物質は、たとえば、ポリマーまたはガラスのビーズを含む種 々の形態を取ることができる。粒子が提供する間隔の程度を決定する粒子の寸法 は、隣接する要素間に必要とされる分離距離及びポリマー層の厚さのような要因 によって決まるであろう。全て２０〜５００μ、好ましくは３０〜２００Ｂの範 囲内の実質的に同一の直径を有する不活性物質の実質的に球形のビーズが適当な 粒状物質の一例である。

前記粒状スペーサ一手段の特に有利な特徴は、粒状物質にポリマー層を塗布でき ることである。このようにして、一体スペーサ一手段を有する要素が製造される 。ポリマー層が形成する均質塗料組成物及び粒状物質を単に製造することによっ て、塗布層上に粒子が均質に分布され、それによって均一な分離が保証される。

液体からの化学物質の除去方法は、室を規定する外被を含んでなる装置であって 、該外被が液体入口及び出口手段を有し、液室が除去すべき物質に対するリガン ドを含んでなる本発明の少なくとも１つの要素を保持し、１つまたは複数個の要 素が、装置を使用する場合に入口を通って室に入る液体が出口を通って室から出 る前に１つまたは複数個の要素の表面上を通過するように流路を規定するように 入口及び出口に対して配置された装置中で実施できる。

好ましくは、流路は、１つまたは複数個の要素上を通過する液体の深さが２０〜 ５ＱＱｐａ、より好ましくは３０〜２００　ｔ−であるようなものである。

装置に含まれる本発明の要素は多数の異なる方法で配列できる。

たとえば、装置は向かい合う配置で複数の要素を含み、各要素がスペーサ一手段 で隣接する要素から分離されることができる。

装置の好ましい実施態様において、要素は、コイルの回旋がスペーサ一手段によ って分離されたコイルの形態であり、規定された流路はコイルの軸に対して軸方 向である。

別の好ましい実施態様において、要素は、コイルの回旋がスペーサ一手段によっ て分離されたコイルの形態であり、規定された流路が回旋の円周方向である。

好ましくは、スペーサ一手段は、１つまたは複数個の要素の隣接する面間に実質 的に一定の分離距離を提供する。分離距離は２０〜５００−１好ましくは３０〜 ２００　ｐ−であることができる。

前述のように、スペーサ一手段は要素と一体であることができる。あるいは、ス ペーサ一手段は別個であって、たとえば、装置を通る液体の流れを可能にするテ ープ、ロッドまたはメツシュ様構造の形態を取ることができる。

スペーサ一手段が実質的に均一な距離の分離を提供することが重要でない場合に は、スペーサ一手段は要素自体であることができる。たとえば、要素は波形であ って、その隣接部分または隣接する別の要素は、１個または複数個の要素の一部 分だけが接するように配列することができる。

前記装置の使用に関連する利点としては、装置が粒状物質、たとえば、細胞を含 む液体を取り扱うことができ、従って入手可能な装置に比較してこのような粒状 物質ではるかに閉塞しにくい事実が挙げられる。さらに、装置は自蔵型であって 、且つ使用及び処理に便利であり、所望ならば一回のみの使用に適するようにさ れる。これは、病原菌、ウィルスまたはＤ　Ｎ　Ａ生成物のような物質を含有す る材料を取り扱う場合に、または処理された液体を患者に再注入しようとする場 合（たとえば、骨髄パージ）に重要な点である。さらに、装置は容易に事前包装 でき、所望ならば、事前滅菌できる。

装置はそこに含まれる要素の性質に鑑み、種々の形態で供給できる。たとえば、 ポリマー層は、活性化可能な形態であることかできるため、使用前に活性化剤で の処理及びそれに続くリガンドを結合するための処理を必要とするであろう。

あるいは、ポリマー層はすでに活性化されていて、リガンドを結合するための処 理のみを必要とする場合もあるであろう。

最後に、要素に結合したリガンドを装置に供給できるであろう。

本発明の要素及び方法をさらに第１図〜第４図（縮尺通りではない）を参照して 図中で例示しながら説明する。

第１図は、本発明の要素の横断面図を示す。要素は本発明のポリマー層１１が塗 布された支持体シート１０からなる。層１１中に取り入れられたビーズ１２は支 持体１０に付着する。

第２図は、要素を使用できる装置の外部の斜視図である。

プラスチック材料、たとえば、ポリプロピレンから作ることのできる外被２０が 示されている。外被２０は蓋２２に結合した円筒本体部分２１からなる。蓋は液 体入口管２３を具備し、本体部分は液体出口管２４を具備する。

第３図及び第４図は、第２図のそれぞれ線２−２及び３−３に沿って切った断面 図である。

蓋２２は外被２０によって規定される室中に液体を通ずことのできる軸方向通路 ２５を含む。蓋２２の内面は、通路２５から半径方向に伸張し°Ｃ１液体が室に 入ったときに液体の流れを拡げる溝２６を具備する。室は本発明の要素のコイル ２７を含む。第１図に示した型の要素は円筒コア２８上に螺旋状に巻かれている 。コイルの外部巻線は、コイルの外面と同一の広がりを持ち且つコイルと外被２ ０の内面との間に流体密封シールを生じる接着テープ２９によってコイルの本体 に結合される。

コイルは一端の蓋２２と他端の、室の円形壁の向い側に保持されたポリプロピレ ンディスク３０との間において室を満たす。

コイルに面するディスクの表面は、ディスクを通って軸方向に走る中央通路から 半径方向に伸張する溝３１を具備する。この通路は、外被の末端壁及び出口管２ ４を通過する通路３２と連絡する。

装置を使用する場合には、入口を通って室に入る液体は、コイルの回旋を軸方向 に通過してから、出口から室を出る。

図面及び特にコイルの表示は概要であることを強調する。

実際、要素の全厚は２００趨のオーダーであることができる。

コイルはこのような要素から、直径約１２ＩｎＩＮ＋の中心円筒コア上に螺旋状 に巻かれた幅３５ｍｍ及び長さ１１ｍｍのストリップの形態で製造できる。この ようなコイルは全長８０ｍｍ及び外部直径７０ｍｍの示した型の装置中に含まれ ることができる。明らかに、コイルは、多くの密に配置する回旋からなるが、縮 尺図面では適切に示すことが不可能である。

本発明をさらに、以下の例によって説明する。

５００ｍｌの二頭丸底フラスコに以下の材料を装入した：２．２′−アゾビス（ イソブチロニトリル）　０．１９９８ｇジオキサン　１００蔵 硝酸（濃）（ｐＨ＝　２　）　０．２ｍｌ。

この溶液を５０℃において１．５時間攪拌した。この期間全体にわたって溶液を 通して窒素を泡立てた。過剰のジエチルエーテル中に沈澱させることによってポ リマーを回収し、デシケータ−中で乾燥させた。（収量＝５．２５ｇ）。

５００献の二頭丸底フラスコに以下の材料を装入した＝２．２′−アゾビス（イ ソブチロニトリル）　０．２００　ｇジオキサン　１００ｍ１゜ 硝酸（濃）（ｐＨ＝２）　０．２ｍ１ 反応時間が４．０時間である以外は例１０手法に従った。

（収量＝３．４８ｇ）。

例３ ０ロー２−ヒドロキシプロピルメタクリレート）（９：１）の合成 １００１ｒＬ１の二頭丸底フラスコに以下の材料を装入した：２．２′−アゾビ ス（イソブチロニトリル）　０．２０１７ｇジオキサン　３０ｍ１ 硝酸（濃＞（ｐＨ＝　１　）　０．１ｍｊ’例１の手法に従った。（収量＝３． ３２ｇ）。

１００１００Ｏの二頭丸底フラスコに以下の材料を装入した：メタクリル酸メチ ル（０，０３７５モル）　３．７５ｇエタノール／メチルセロソルブ（９：　１ ）　５００ｒｎｌｐ−トルエンスルホン酸−水和物（ｐＨ＝　２　）　２．１ｇ 反応時間が１７時間である以外は例１０手法に従った。（収量−３９，４５ｇ　 ）。

１０１００Ｏの二頭丸底フラスコに以下の材料を装入した：メタクリル酸メチル （０，０４５モル）　４．５０ｇエタノール／メチルセロソルブ（９：　１）　 ２５０ｄｐ−＋−ルエンスルホン酸−水和物（ｐＨ＝１〜２）　２．１ｇ反応時 間が２４時間である以外は例１の手法に従った。（収量＝５７．５８ｇ）。

１０００ｒｒＬ１．の二頭丸底フラスコに以下の材料を装入した：メタクリル酸 メチル（０，０５モル）　５．００ｇエタノール／メチルセロソルブ（９：　１ ）　５００ｄｐ−トルエンスルホン酸−水和物（ｐＨ＝　１　）　４．２ｇ反応 時間が２４時間である以外は例１の手法に従った。（収量＝７７．９０ｇ）。

１０１００Ｏの二頭丸底フラスコに以下の材料を装入した：メタクリル酸メチル （０，０３６モル）　３．６０ｇメタクリル酸（０，０３６モル＞　３．０６ｇ エタノール／メチルセロソルブ（９：　１）　２５０ｍ１ｐ−）ルエンスルホン 酸−水和物（ｐＨ＝１〜２）　２．１ｇ反応時間が１７時間である以外は例１の 手法に従った。（収量＝７２．８ｇ）。

例８ ポリ　（２−ヒドロキシエチルメタクリレートーコーメチルメタクリレートーコ −３−クロロ−２−ヒドロキシプロピルメタクリレート）（１８：　１　：　１ ）の合成１０００ｍ７！の二頭丸底フラスコに以下の材料を装入した：メタクリ ル酸メチル（０，０５モル）　５．０ｇエタノール／メチルセロソルブ（９：Ｉ ）　５００ｍ１ｐ−トルエンスルホン酸−水和物（ｐＨ＝　１　）　４．２ｇ反 応時間が２３時間である以外は例１の手法に従った。（収量−５２，３４ｇ）。

ポリマーの分子量はゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）によって測定した。

サンプル溶液は、ポリマー２０■を溶媒１０ｍ１中に溶解させることによって調 製した。２％１，２−ジクロロベンゼン０．２５ｍｊ！を内部マーカーとして溶 液に加えた。サンプルは、ＧＰＣ系に注入する前に０．２４膜フイルターを通し て濾過した。溶媒として１１００ｐｐ臭化リチウムを含むジメチルホルムアミド を用いて、温度８０℃において０．５ｍｌ／分の流速でクロマトグラフィーを実 施した。検出器によって、屈折率（Ｋｎａｕｅｒ）を測定した。ポリマーは４０ ０．０００の平均分子量（Ｍｗ）を有することが示された。（使用したＧＰＣ系 はポリ（エチレングリコール）とポリ　（エチレンオキシド）との組合せによっ て較正されたので、得られた分子量はポリ　（エチレングリコール）／ポリ　（ エチレンオキシド）当量として表される）。

コポリマーの数平均分子量（Ｍｎ）は３３．９００であることが判明し、これは 系の多分散性を１１．８とするものであった。

示差走査熱量法（ＤＳＣ）はポリマーのＴｇが１２７．２℃であることを示した 。

冷却器及び窒素入口を装着した１１の二頭丸底フラスコに以下の材料を装入した ： メタクリル酸メチル（０，０３モル）　３．００ｇメタクリル酸（０，０３モル ＞　２．５５ｇｐ−）ルエンスルホン酸−水和物２．１０ｇ反応時間が１７時間 である以外は例１の手法に従った。（収量＝７４．９ｇ）。

前述のモノマー組成を有する種々の分子量の多数のポリマーを調製した。例８に 記載した方法によって測定した分子量（Ｍｗ）は２５０．０００〜４０９．００ ０であった。分子量（Ｍｎ）は２９．６００〜７９．５００であり、多分散性の 範囲は３．１４〜１１．９であった。

ポリマーは９７．１〜１１５．２℃のガラス転移温度（Ｔｇ）を有し例１〜８の ポリマーの各々について、１００％ジメチルホルムアミド中１０％Ｗ　／　Ｗポ リマー及び５％Ｗ／Ｗカリウム第三ブトキシド／ポリマーを含んでなる被覆溶液 を調製した。カリウム第三ブトキシドは第三ブタノール溶液（１０％Ｗ　／　Ｗ 　）中に加えた。５０−シリカ塗布スチレンビーズをスペーサービーズとしてこ の溶液中に懸濁して取り入れた。

コロナ放電処理したポリエチレンテレフタレートシートの一面にこの溶液を塗布 して、湿潤塗布（ｌａｙｄｏｗｎ）厚さ１００−を生じた。被覆は９０℃におい て乾燥した。

１００％ジメチルホルムアミド中例９のポリマー１０％Ｗ／Ｗ及び１０％Ｗ　／ 　Ｗテトラブチルアンモニウムヒドロキシ／ポリマーからなる塗料溶液を調製し た。１００−シリカ塗布スチレンビーズをスペーサービーズとして溶液中に懸濁 して取り入れた。

この溶液を、コロナ放電処理したポリエチレンテレフタレートシートの一面に塗 布して、湿潤塗布厚さ１００ｐａを生じた。

被覆は９０℃において約２０分間乾燥した。被覆溶液がスペーサービーズを含ま ない以外は、シートの他の面も同様にして塗布した。

この被覆は水、塩溶液、エタノール、アセトン及びジメチルホルムアミド中で安 定であって、有効な架橋が起こっていることが証明された。

例１１の塗布されたポリマーのサンプルを、０．５Ｍ炭酸水素ナトリウム中４％ ジビニルスルホン溶液（ｐＨ１ｌ）で処理することによって活性化した。０．８ ■／ｒｎ１のラット抗マウスに一鎮単クローン性抗体を、ｐＨ８の０．１　Ｍ炭 酸水素ナトリウム、０．５Ｍ塩化ナトリウム溶液中において活性化ポリマー被覆 に結合させた。ラット抗マウスに一鎖抗体は、５ｅｒａ−１ａｂから得られた腹 水液（クローン０Ｘ−２０、コードＭＡＳ　２０２Ｃ）から精製した。

５％牛脂児血清を補ったＲＰＭＩ　１６４０培地（両者ともＦｌｏｗＬａｂｏｒ ａｔｏｒ　１ｅｓ）中で増殖させたＪｕｒｋａｔ細胞、ヒトＴ細胞白血病（Ｊ、 Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　１５２　：　１７０９．１９８ ０　；　Ｇ１１ｌｉｓ。

Ｓ、、及びＷａｔｓｏｎ、　Ｊ）を洗浄して培地を取り除き、燐酸塩緩衝生理食 塩水中に再懸濁させた。（ＰＢＳ組成：　０．１５Ｍ　ＮａＣｊｌ！　。

２、７　ｍＭ　ＫＣＩ！　、　８　ｍＭ　Ｎａ、ＨＰＯ，，１，５ｍＭ　ＮＨ２ ＰＯ４、ｐＨ７，２’）。

細胞の生活能力（ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）は、トリパンブルー排除によって判断し て、８５％より大きかった。

３．１ｘｌＯ７個のＪｕｒｋａｔ細胞（細胞５．２　ｘ　１０８個／ｒ１１１） 全てをＴ細胞表面抗原ＣＤ２に対するマウス単クローン、性抗体で標識した。抗 体はＢｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ　Ｌｔｄ、から入手した（Ａｎｔｉ−Ｌ ｅｕ−５ｂ、カタログＮ［１７５９０）　。抗体０．５７Ｋ　／細胞１０７個の 割合で抗体を細胞に加えた。細胞と抗体を一緒にインキュベートし、次いで、過 剰の抗体を遠心分離によって除去し、標識した細胞をＰＢＳ中に再懸濁した。

０Ｘ−２０を結合させたポリマー被覆を標識した細胞の懸濁液と共にインキュベ ートした。次いで、被覆をＰＢＳで洗浄し、鏡検した。被覆は、高密度において 結合細胞の良好で均等な塗布量を示した。

比較のために被覆のサンプルを抗体非標識細胞と共にインキュベートした。次の 鏡検によって、ポリマーにはほとんど細胞が結合していなかったことがわかった 。

寸法１００−のビーズの代わりに５０−シリカ被覆スチレンビーズを用いる以外 は例１１に記載されたようにしてポリマー被覆ポリエチレンテレフタレートシー トを調製した。

被覆シートを概ね長さ１５ｍ及び幅３５ｍｍのストリップにスリットした。スｌ −ＩＪツブを清浄な条件下で中央コア上にスプールに巻き、コイル巻きした要素 をポリプロピレンでできた第２図〜第４図に示したものと同様にして装置中にコ イル巻した要素を挿入した。コイル巻きした要素を装置の本体に挿入後、超音波 溶接によって蓋を結合させた。

装置をｒＭｉｌｌｉｐｏｒｅ　Ｊ品質の水でフラッジした。

Ｃ１ｂａｃｒｏｎ　Ｂｌｕｅ　Ｆ３Ｇ−Ａ色素を以下の手法に従って、コイル巻 した要素に結合させた。水６５ｒｎ１及び塩化ナトリウム溶液（４Ｍ）　１０ｒ ｒＬ！、中に溶解させた色素２．４ｇを、あらかじめフラッジした装置から６０ ｍ１／分で３０分間吸入排出した。装置を９０分間室温に放置して、色素をポリ マー表面に吸着させた。水酸化ナトリウム溶液（ＩＯＭ）　１．２５ｍ１．を色 素溶液に加え、１２より大きいｐＨにおいて３０分間装置を通して循環させた。

装置の入口及び出口をシールし、振盪機中で２５℃において２日間貯蔵した。

２８０ｎｍにおけるスペクトル吸収によって色素が検出されなくなるまで水を６ ０ｒＩＬ１７分で装置を通してフラッジした。塩化ナトリウム（ＬＭ＞／エチル アルコール（２５％）溶液でフラッジすることによって、未結合の色素を全て被 覆表面から除去した。

装置を、０．０５Ｍ燐酸塩緩衝剤溶液（ｐｔｌ？　）２００ｍｌで５０ｒｎＩ！ ／分でフラッジした。未処理家兎血清５０ｍｆを３（７／分で装置に装入した。

装置から出た最初の３０−の溶液を廃棄し、残りの溶液を同一流速において３０ 分間、装置を通して循環させた。次いで、ポンプを切り、装置をさらに３０分間 放置した。２８０ｎｍにおける洗液のＵＶ吸収がゼロになるまで、０．０５Ｍ燐 酸塩緩衝剤溶液を６０ｍ１／分で装置に通してフラッジした。

選択された溶液で３０ｍ１／分で溶離を行い、最初の６個のフラクションを採取 した。１０分間、３０１ｒ１１／分で溶液を循環させ、７番目のフラクションを 採取した。流速を６０−７分に増し、さらに２Ｘ２０ｒｎｌフラクシヨンを採取 した。

多数の実験に対して溶離剤として０．２　Ｍ　Ｎａ５ＣＮ／　０．０５ＭＴｒｉ ｓ／ＨＣｊ２　（ｐＨ８）を用いて、アルブミン３〜１１■を生成した。

タンパク質の回収を、２８０ｒ＋ｍにおける光学吸収によって測定し、電気泳動 を用いて、回収されたタンパク質を同定した。

タンパク質回収はまた、この例の手法に従ってＣ１ｂａｃｒｏｎＦ３Ｇ−Ａの代 わりにＰｒｏｃｉｏｎ　ＭＸ−Ｒ色素を用いて証明した。

国際調査報告 国際調査報告 ＧＢ　９００００１４ ＳＡ　３３４２３

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．エステル基が化学変化を受けやすい第一ヒドロキシル基を含むエチレン系不 飽和カルボン酸のエステルから誘導されたモノマー単位及びエチレン系不飽和カ ルボン酸のハロヒドロキシアルキルエステルから誘導されたモノマー単位を含ん でなる親水性架橋性コポリマー。 ２．前記化学変化を受けやすいヒドロキシ基含有モノマー単位が６０〜９５モル ％の量で存在する請求の範囲第１項に係るコポリマー。 ３．前記化学変化を受けやすいヒドロキシ基含有モノマーがアクリル酸またはメ タクリル酸ヒドロキシアルキルである請求の範囲第１項または第２項に係るコポ リマー。 ４．前記化学変化を受けやすいヒドロキシ基含有モノマーがメタクリル酸ヒドロ キシエチルである請求の範囲第３項に係るコポリマー。 ５．前記ハロヒドロキシアルキルエステルモノマー単位が５〜４０モル％の量で 存在する前記請求の範囲のいずれか１項に係るコポリマー。 ６．前記ハロヒドロキシアルキルエステルがアクリル酸エステルまたはメタクリ ル酸エステルである前記請求の範囲のいずれか１項に係るコポリマー。 ７．前記ハロヒドロキシアルキルエステルが３−クロロ−２−ヒドロキシプロピ ルメタクリレートである請求の範囲第６項に係るコポリマー。 ８．エステル基が水素結合に関与できる基を含まないエチレン系不飽和カルボン 酸のエステルから誘導されたモノマー単位をさらに含んでなる前記請求の範囲の いずれか１項に係るコポリマー。 ９．エステル基が水素結合に関与できる基を含まないエチレン系不飽和カルボン 酸のエステルから誘導された前記モノマー単位が１〜１０モル％の量で存在する 請求の範囲第８項に係るコポリマー。 １０．エステル基が水素結合に関与できる基を含まないエチレン系不飽和カルボ ン酸のエステルがアクリル酸またはメタクリル酸アルキルである請求の範囲第８ 項または第９項に係るコポリマー。 １１．エステル基が水素結合に関与できる基を含まないエチレン系不飽和カルボ ン酸のエステルがメタクリル酸メチルである請求の範囲第１０項に係るコポリマ ー。 １２．コポリマーに負電荷を与えることができるエチレン系不飽和モノマー単位 をさらに含んでなる請求の範囲のいずれか１項に係るコポリマー。 １３．コポリマーに負電荷を与えることができる前記エチレン系不飽和モノマー 単位が１〜１０モル％の量で存在する請求の範囲第１２項に係るコポリマー。 １４．コポリマーに負電荷を与えることができる前記エチレン系不飽和モノマー 単位がアクリル酸またはメタクリル酸から誘導される請求の範囲第１３項に係る コポリマー。 １５．前記請求の範囲のいずれか１項に係る架橋されたコポリマー。 １６．前記請求の範囲のいずれか１項に記載されたコポリマーの層が塗布された 支持体を含んでなる、液体からの化学物質の除去用の要素。 １７．化学物質に対するリガンドが結合された請求の範囲第１５項に係るポリマ ーと液体とを接触させることを含んでなる１８．エステル基が化学変化を受けや ろい第一ヒドロキシ基を含むエチレン系不飽和カルボン酸のエステル、エチレン 系不飽和カルボン酸のハロヒドロキシアルキルエステル、及び重合開始剤を含ん でなる組成物を形成し、そして重合開始剤から遊離基を発生させる条件に組成物 を供することを含んでなる親水性架橋性コポリマーの製造方法。 １９．前記重合を２以下のｐＨにおいて実施する請求の範囲第１８項に係る方法 。 ２０．前記重合開始剤が熱的開始剤であり且つ前記組成物を加熱して遊離基を発 生させる請求の範囲第１８項または第１９項に係る方法。 ２１．請求の範囲第１８項〜第２０項のいずれか１項の方法によって製造された コポリマーを塩基の存在下において架橋させることを含んでなる架橋親水性コポ リマーの製造方法。