JPH04501709A

JPH04501709A - ペプチド合成法および該法における固体支持体の使用

Info

Publication number: JPH04501709A
Application number: JP1509602A
Authority: JP
Inventors: ベルグ，ロルフ・エイチ; アルマール，クリストファー; ペデルセン，ワルター・バツベルグ; ホルム，アルン; タム，ジェイムズ・ピイ; メリーフィールド，ロバート・ブルース
Original assignee: フォルスクニングスセンター・リソ
Priority date: 1988-09-01
Filing date: 1989-08-31
Publication date: 1992-03-26
Anticipated expiration: 2013-10-08
Also published as: DE68914843D1; FI102833B; EP0433345B1; DE68914843T2; JP2807522B2; FI911029A0; NO910812L; NO180198B; NO180198C; CA1339987C; FI102833B1; NO910812D0; EP0433345A1; WO1990002749A1; AU4225889A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】ペプチド合成法および該法における固体支持体の使用発明の分野本発明は、ペプチドまたはタンパク質の高収率および高純度の固相合成のための方法および固体支持体に関する。該方法は、単一のペプチドまタンパク質の合成およびそれら複数の平行および実質的同時合成の双方に適する。特に本発明は、ポリスチレン鎖とグラフト化したポリマー基質を固体支持として用いる方法に関し、該ポリスチレン鎖は、さらに所望により、該合成全体にわたる条件下において反応性でない置換基を有し、所望置換基を含めずに少なくとも２００．０００の推定分子量を有する。本発明は、通常の化学法を用い、分析的（マイクログラム）および調製的規模（ミリグラムまたはそれ以上）の合成の双方に容易に適合する。さらに、本発明は、手動、半自動または全自動操作のバッチ法および連続フロー法の双方に適合する。

発明の背景今日、ペプチドまたはタンパク質の固相合成法は主として、官能基を導入した架橋スチレン／ジビニルベンゼンコポリマーすなわち、スチレンモノマーに数パーセント（典型的には約２％）のジビニルベンゼンを加え重合させて形成した架橋コポリマーを用いる、最初にメリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆ　１ｅｌｄ）により開発された方法に基づく。このコポリマーは普通、しばしばその大半が２０〜８０μｍの大きさである、ビーズまたは小片の形で供給される。メリフィールドが最初に選んだ官能基を導入［例えばジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・ケミカル・ソシエティ−（Ｊ　、　Ａｍ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ、　）８５．２１４９（１９６３）を参照］は、クロロメチル基をコポリマーの芳香環に官能基導入するものでり、このクロロメチル基は、固体コポリマーを５ｎＣ（４／クロロメチルメチルエーテルと反応させて導入された。もっとも、その後、アミノメチル、 α−アミノベンジルおよびα−アミノ−４−メチルベンジルを包含する多数の他の官能基が利用されてきている。官能基の目的は、その性質に関係なく、通常、コポリマーの固体支持体と固体支持体にカップリングさせたい最初のアミノ酸のＣ−末端との間に、固定のための結合（ａｎｃｈｏｒｉｎｇｌ　ｉｎｋａｇｅ）を形成することである。メリフィールド法を改良したより最近のものは、さらに、ポリスチレン鎖上の官能基（例えば、前記官能基のうちの１つ）とカップリングさせる最初のアミノ酸のＣ−末端との間に、二官能性の「スペーサー」または「ハンドル」基を導入することを包含し、それらの基の反応性は、とりわけ、固体支持体への最初のアミノ酸のカップリングおよび／または完成した合成ペプチドまたはタンパク鎖が固体支持体から開裂する容易性の双方の点に関し、所望の要求にかなうようにしである。そのようなスペーサー基の例は、フェニルアセトアミドメチル（Ｐａｍ）およびｐ−アルコキンベンジルエステル系を包含する。

メリフィールドによる導入以来の固相ペプチド合成の発達に関する最近の評論を、バラニー（Ｂ　ａｒａｎｙ）らが与えている［インターナショナル・ジャーナル・オブ・ペブタイド・アンド・プロティン・リサーチ（Ｉ　ｎｔ、　Ｊ　、　ＰｅｐｔｉｄｅＰｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、）３　０　、　７０５〜７３９（１９８７）コ。

バイオテクノロジー、特に組換えＤＮＡの領域における最近の進歩は特有の状況、すなわち、未定義か未知の機能および／または未知の生物活性を持つ多数の新規タンパク質の配列の入手および急速な蓄積を生じさせた。特定部位の突然変異誘発または類似の構造工学による詳細な構造分析により、タンパク質の活性部位におけるアミノ酸残基の機能に関して有用なアプローチをすることができるようになった。

しかしながら、約５〜４０アミノ酸残基を含有し、生物活性機能を有するサブユニットに関する特異的な情報は、好ましくは、化学合成を通じて得られる。現代の固相技術はそのようなペプチドを、確信をもって高純度で得るに全く十分なものであるが、「直線」法のアプローチを経由する従来の固相ペプチド合成法では、■合成につきＩペプチドを生成するに過ぎない。

従って、ペプチド合成のアプローチに「同時」または「平行」法を用いる方法が望ましい。それにより、例えばタンパク質の機能本体を明らかにし、マツプ（ｍａｐ）するのに使用できる、多数のペプチドが容易に生産できるようになる。

ペプチド合成の固相技術の基本的特徴は、新しく加えるアミノ酸によるペプチド鎖の延長において、すべての処理工程が前サイクルの繰り返しであることである。ただし、アミノ酸のカップリング工程自身において、前サイクルでカップリングしたアミノ酸と同一または同一でない次のアミノ酸をペプチド鎖とカップリングさせる場合に例外がありうる。したがって、１個以上のペプチドの平行的な、実質的同時合成は、平行合成に共通の脱保護、中和および洗浄のような反復工程を平行して行うことにより達成できる。技術的に困難な点は主に、交差混入が起こらないよ・う°に各アミノ酸カップリング工程を区分（ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌｉｚａｔｉｏｎ）することである。

最近、多数のペプチドの実質的同時合成に関して、２つの異なる方法が提案された。

最初の方法［ゲイセン（Ｇ　ｅｙｓｅｎ）ら、プロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス・オブ・ザ・ユナイテッド・スティン・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳ特表千４ −５０１７０９　（１２）Ａ、）８１．３９９８〜４００２（１９８４）および８２．１７８〜８２（１９８５）コは、９６マイクロ力価のウェル（ｗｅｌ　ｉｓ）中、酵素標識免疫吸着法（Ｅ　Ｌ　Ｉ　Ｓ　Ａ　（Ｅ　ｎｚｙｔｎｅ　Ｌ　１ｎｋｅｄ　Ｉ　ｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔＡｓｓａｙ））によりペプチド性エピトープの迅速なスクリーニングをするために発明された。アクリル酸グラフト化ポリエチレンロンド（８ｃｒｙｌｉｃ　ａｃｉｄ−ｇｒａｆｔｅｄ　ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎ　ｒｏｄ）および９６マイクロ力価のウェルを用い、成長するペプチド鎖を固定し、区分された合成を行う。しかしながら、該法は非常に効率的ではあるが、調製的規模すなわちミリグラム量の製造には適用できない。２番目の方法「ホウテン（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ）、プロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステイッ・才ブ・アメリカ、８２．５１３１〜３５（１９８５）コは、伝統的に用いられているポリマー・ビーズ（ｐｏｌｙｍｅｒ　ｂｅａｄｓ）を含有する「ティーバッグ（ｔｅａ　ｂａｇ）Ｊを用い、ペプチド樹脂ビーズのＩＩ’（分を閉じた細かいメツシュのポリプロピレン・ネットの袋内に隔離して、該合成を区分する。後者の方法はミリグラム量の製造に適する。

多数のペプチドの平行的および実質的同時合成を可能にする方法の明白な利点は、時間および、各ペプチドを１つ１つ合成することが包含する余分な反復労働を節約できることである。

発明の簡単な開示本発明は、前記の両方法の好ましい側面をすべて含有し、所望のペプチドおよびタンパク質を高収率、高純度で与え、分析的および調製的規模の合成双方に等しく適合するという前記利点を有する。一般に、本発明は、タンパク質の機能性サブユニットの分子組織化に関する研究において非常に貴重であるというだけでなく、構造活性相関の研究、抗原エピトープのマツピングのような研究、ホルモン −受容体相互作用の詳細の解明および医薬的に活性なペプチド薬のスクリーニングにおいても大きな利益をもたらす。

本発明は、長くグラフト化し、実質的に熱架橋ポリエチレン鎖であるポリマー基質を包含する固体支持体の供給および使用に基づく。

該ポリスチレン鎖は、これらの条件下において、恐らく立体的に容易に接近できるため、合成するペプチドの特に有効な固相担体として働く。

本発明は、例えばポリエチレンのような無架橋ポリオレフィンが、室温ですべての有機溶媒に不溶であることを利用する。さらに、グラフト化ポリマーは熱可塑性物質であり高温で溶けるので再成型も可能である。

図面の簡単な説明図１．４４３重量％ポリスチレン−グラフト化ポリエチレン上、［Ａ　ｓｐ”］　−ｈＰ　Ｔ　Ｈフラグメント（７０〜８４）の固相集合のだめの保護図。

図２．μボンダパック（μＢＯＮＤＡＰ　ＡＫ　）　Ｃｌ５Ｃ３００Ｘ　３　。

９ｎ＋＋ａ、１０　μｍ）上、（Ａ）粗　Ｈ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−５ｅｒ −Ｇｌｎ−ＯＨ，（Ｂ）粗　Ｈ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｉｎ−ＯＨおよび（Ｃ）粗　Ｈ−Ａｌａ−Ａ、ｓｐ　Ｌｙｓ　−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ −Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ　−５ｅｒ−Ｇｌｎ−ＯＨの分析ＨＰＬＣクロマトグラム。バッフｙ−Ａ：Ｈ，Ｏ１０，０９５％ＣＦ３ＣＯＯＨ，バッファーＢ：９０％アセトニトリル／１０％Ｈ，Ｏｌｏ、０７２％ＣＦｓＣＯＯＨ；流速１゜３ｍρ／分。

図３．メリチン−（７〜２１）およびメリチンー（７〜２１）アナローブのアミノ酸配列。

図４．低／高ＨＦ開裂後（凍結乾燥前）の粗メリチン−（７〜２１）およびアナローブの分析ＨＰＬＣクロマトグラム。

クロマトグラムｌは、粗のメリチンー（７〜２１）、すなわちペプチドＩのものである。クロマトグラム２は、ペプチド２などのものである。バッファーＡ：５％ＣＨ３ＣＮ／９５％Ｈ，Ｏ１０，０４４５％ＴＦＡ、バッファーＢ：６０％　ＣＨ，ＣＮ／４０％Ｈ，Ｏ１０゜０３９０％ＴＦＡ；直線グラジェント：８５〜９５％３０分間；流速１．５ｍ（２／分；カラム：ヴイダック（Ｖｙｄａｃ）Ｃ＋ａ（０、４６ｘ　２５ｃｍ）発明の詳細な説明本発明の１つの態様においては、ペプチドまたはタンパク質の合成法を与える。

該方法は、Ａ）ポリスチレン鎖でグラフト化したポリマー基質を与える段階（ここに、前記ポリスチレン鎖は、さらに所望により、合成全体にわたる条件下にて反応性でない置換基を有し、該ポリマーにグラフト化した実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量が、所望置換基を含めずに、少なくとも２００，０００であり、ポリスチレン−グラフト化ポリマー基質のポリスチレン鎖の少なくとも一部分に、該ポリスチレン部分と、少なくともＮ末端が保護され所望によりカルボキシル末端の誘導されたアミノ酸との間の、固定結合形成を容易にする化学的官能基が導入されている）、Ｂ）Ｎ端が保護され所望によりカルボキシル末端の誘導されたアミノ酸を、官能基導入したポリスチレン部分にカップリングさせる工程（ここに、前記官能基およびＮ端が保護され所望によりカルボキシル末端の誘導された前記アミノ酸は、合成したペプチドおよびタンパク質を実質的に崩壊させることなく、形成した固定結合をその後開裂するのに互いに適するものである）、Ｃ）カップリングしＮが保護されたアミノ酸のＮ−保護アミノ基または置換アミノ基からＮ−保護基を除去し、カップリングしたアミノ酸のアミノ基または置換アミノ基と、新しく加えるアミノ酸のカルボキシル基または活性化カルボキシル基との反応を容易にする工程、Ｄ）最後にカップリングしたアミノ酸の前記アミノ基または置換アミノ基を、新しく加えるＮ−保護アミノ酸のカルボキシル基および活性化カルボキシル基と反応させ、２つのアミノ酸部分間にペプチド結合を形成させる工程、Ｅ）最後にカップリングしたＮ−保護アミノ酸のＮ−保護アミノ基または置換アミノ基からＮ−保護基を所望により除去し、後のアミノ酸のアミノ基および置換アミノ基と、新しく加えるＮ−保護アミノ酸のカルボキシル基または活性化カルボキシル基との反応を容易する工程、Ｆ）工程Ｅ）を行った場合において、工程Ｄ）およびＥ）を所望の回数繰り返す工程、Ｇ）所望により、合成したペプチドまたはタンパク質鎖のアミノ酸部分上に残存しうる、数個またはすべての保護基を除去する工程、Ｈ）所望により、官能基導入したポリスチレン部分に合成ペプチドまたはタンパク質鎖を固定している結合を開裂させる工程、および ■）所望により、合成ペプチドまたはタンパク質鎖から、さらに残る所望でない基のすべてを除去する工程、からなることを特徴とする。

本明細書で使うポリマー基質という語は、前記のとおりグラフト化し、それ自体は合成に用いる反応媒体に実質的に不溶で不活性なあらゆる適当なポリマーを示す。適当なポリマーは、例えば、ナイロンのようなポリアミド、ポリイミド、ポリ（バラキシリレン）、ポリ（テトラフルオロエチレン）またはポリ（クロロトリフルオロエチレン）のようなポリ（ハロフルオロアルケン）、フェノールーホルムアミドポリマー、およびポリプロピレンおよびポリエチレンのようなポリオレフィンから選択されうる。該ポリマー基質は、例えばシート、フィルム、ビード、ペレット、ディスク、リング、チューブ、ロッドおよびネットのようなあらゆる適当な形にすることができる。

本発明におけるペプチドまたはタンパク質合成法の好ましい具体化において、ポリマー基質はシートまたはフィルム型式の低密度ポリエチレンである。なお、実験（後記）は高密度ポリエチレンもまた適当であることを示している。

該ポリマー基質にグラフト化したポリスチレン鎖は、ポリスチレンそのものの鎖か、または合成全体にわたる条件下にて反応性でない置換基で、ある程度置換されたポリスチレン鎖である。そのような置換基の適当なものとしては、例えばメチル、エチル、プロピルまたはブチルのようなアルキル置換基、メトキシ、エトキシ、プロポキシまたはブトキシのようなアルコキシ置換基またはフェノキシのようなアリールオキシ置換基でありうる。置換は、ビニル基由来の非芳香炭素原子においても考えられるが、好ましくは芳香環内で１個またはそれ以上の置換基、例えば１個またはそれ以上の前記置換基により置換する形式をとる。本発明におけるペプチドまたはタンパク質合成法の好ましい具体化においては、ポリマー基質はこの場合ポリエチレンであり、グラフト化ポリスチレン鎖は非置換ポリスチレン鎖である。

該ポリマー基質にグラフト化したポリスチレン鎖の分子量が、該ポリスチレン埴土の所望置換基を含めないで２００，０００であることは、特に都合のよいことだと考えられている。本発明の別の態様においては、この条件を満たすポリスチレン鎖は、該ポリマー基質と、有機溶媒中のモノマーの溶液中に存在する所望により置換されたスチレンモノマーとの間の実質的なラジカル開始反応により好適に形成されうる。実験（後記）によると、ポリエチレンシートまたはフィルムを、メタノールのような溶媒のスチレンモノマーの種々の濃度の溶液に浸す条件において、ポリエチレンシートまたはフィルムがポリスチレン鎖とグラフト化する時、γ放射線によるラジカル開始反応においては、グラフト化反応だけでなく、非グラフト化（すなわちフリーの）ポリスチレン鎖も形成する。グラフト化ポリスチレン鎖自身の分子量を正確に測定する明白で容易な方法は現在ないが、生成した非グラフト化ポリスチレン鎖の分子量は、例えば、いわゆる「サイズ排除クロマトグラフィー」により容易に測定しうる。

純粋なスチレンモノマーを使用した時、すなわちメタノールが存在しない時は、一定のγ放射条件下で生成するシート内に吸蔵された（およびジクロロメタンでシートから抽出された）非グラフト化ポリスチレン鎖（以後「ホモポリマー」と示す）の分子量は約１８０，０００が優先的であり、ホモポリマーの優勢な分子量は、スチレンモノマー／メタノール溶液のメタノール含量が増加するにつれて増加する。例えば、７０　：３０　（ｖ／ｖ）メタノール／スチレンでは、優勢な分子！（Ｍｐｅａｋ）は、約１，０００，０００である。

種々の程度にグラフト化したポリスチレン−グラフト化ポリエチレンシートで得た結果がはっきり示すところによると、以下でより詳細に説明するように、シート内に吸蔵されたホモポリマーの分子量およびグラフト化ポリスチレン鎖の分子量は全くよく一致する。

サイズ排除クロマトグラフィーにより、種分子ｆｉ（ｓｐｅｃｉｅｓｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ）および保持容量の間の関係、いわゆる「検量線」が決まる。分子量既知の標準ポリスチレンの保持容量との比較により、個々の保持容量における、任意のフラクション、例えばポリスチレンホモポリマの分子量を決定する。しかしながら、鎖分子量既知の標準ポリスチレン−グラフト化ポリエチレンが得られないため、できうる最善のことは、同じ溶液条件で標準ポリスチレンの保持容量と比較することである。

グラフト化シート、該ホモポリマーおよび該標準ポリスチレンは、例えば熱いキシレン中に溶解でき、幾つかのそのような実験において、ホモポリマーの最も豊富なフラクション（Ｍｐｅａｋ）の分子量は約ｔ　、ｏ　ｏ　ｏ、ｏ　ｏ　ｏであることがわかった。標準ポリスチレンの保持容量との前記比較に基づくポリスチレン−グラフト化ポリエチレンのＭｐｅａｋ値は約３，０００，０００以上であることがわかった［個々のポリエチレン鎖の一定部分が１以上のポリスチレン部分とグラフト化し、前記方法で決定されたポリスチレン−グラフト化ポリエチレンのＭｐｅａｋ値は、対応する吸蔵されたポリスチレンホモポリマーのものと同じかまたはそれ以上であると考えられる］。

さらにまた、前記分子量評価法が妥当である証拠を前記実験から以下のように誘導できる。

分子量Ｍｉの個々のフラクションｉの豊富度ｎｉは、Ｍｉに対応する保持容量において分配曲線の高さに比例する。したがって、いわゆる「重量平均分子量」、ＭＷは、Ｍｖ＝Σ　ｎｉ　Ｘ　Ｍｉ”／ｎｉ　ｘ　Ｍｉで与えられ、一方、いわゆる「数平均分子量」、Ｍｎは、Ｍｎ−Σ　ｎｉ　ｘ　Ｍｉ／Σ　ｎｉで与えられる。ラジカル開始重合に関する現在の理論によれば、Ｍｗ／Ｍｎ比（「多分散性」）は２．０と予想される。ホモポリマーの該値は約２であり、ポリスチレン−グラフト化ポリエチレンの該値もまた約２だとわかった。このことは、ポリエチレン基質にグラフト化したポリスチレン鎖が本質的にホモポリマーと同様に成長したことを示すものと受け取れる。これはさらに、前記分子量評価法の裏づけとなる。本明細書および請求の範囲中にいう推定分子量は前記方法で評価した。

したがって、一定の条件（溶媒、スチレン濃度、温度、γ放射線強度およびγ照射時間）において形成した吸蔵ホモポリマーの分子量は、同じ条件で形成したグラフト化ポリスチレン鎖の分子量を細大に反映するものと考えられる。よって、ホモポリマーについて決定された分子量はグラフト化ポリスチレン鎖の推定分子量とみなせる。

また、グラフト化ポリスチレン鎖の架橋の程度のみならず、ポリマー基質表面上のグラフト化部分の密度、すなわち単位表面積当たりのポリスチレン鎖の付着位置数も、グラフト化の起こる条件、特にグラフト化工程に用いた有機溶媒の性質により強く影響されると考えられる。水酸基をもつ有機溶媒、特にメタノールのようなアルコールは比較的親水性であり、したがってスチレンモノマーのような比較的疎水性な物質を溶解するのに選択する溶媒としては好ましくない。それゆえ、該モノマーのそのような溶媒による溶媒和の程度は、より疎水性と思われる有機溶媒、例えばジクロロメタンのようなハロゲン化脂肪族炭化水素（ジクロロメタンは通常および本発明の場合ともに、固相ペプチド合成法の好ましい溶媒である）の溶媒和の程度と比較して比較的低いと予想される。グラフト化工程においてグラフト化ポリスチレンの膨潤または溶媒和の程度がメタノールのような溶媒中で低いことは、成長しつつあるポリスチレン鎖の移動度を低レベルに保ち、それゆえ拡散律速鎖停止工程の抑制（ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｃｈａｉｎ−ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｅｓ）につながり、よって特に長いポリスチレン鎖の成長を促進するものと考えられる。

本明細書において、グラフト化ポリスチレン鎖が高分子量であることの魅力的な特徴は、官能基導入をした時、それらが溶解した試薬に対する反応性の点で、均一溶液中かなりの程度、あたかも非グラフト化（すなわちフリーの）官能化ポリスチレン鎖かの１うにふるまうと推定されるということである。したがって、本発明のとおり形成した官能化グラフト化ポリスチレン鎖が、保護され、所望により誘導されたアミノ酸を包含する溶解した試薬と容易に反応することは、最も望ましいものとみなせる。ポリオレフィンにグラフト化したポリスチレン鏡開の架橋が、明らかに、実質的に存在しないことは、固相ペプチド合成で通常好ましいクロロ炭化水素溶媒（具体的に本発明で好ましくはジクロロメタン）による該鎖の高程度の膨潤および溶媒和を促進する。前記のとうり、「メリフィールド形式」を用いる通常の固相ペプチド合成では、使う固体支持体は普通官能化架橋スチレン／ジビニルベンゼンコポリマーであり、この架橋コポリマーは、スチレンモノマーに数％（典型的には約２％）のジビニルベンゼンを加えて重合させて形成したものである。この架橋は、官能化コポリマーマトリックスの膨潤および溶媒和の程度を、本発明により形成した官能化グラフト化ポリスチレン鎖の場合に比べて低下させ、これにより対応して前記マトリクスの反応性を低下させる。

本発明において、ポリマーにグラフト化した実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量は、所望置換基を含めずに、３００．０００〜１，６００，０００、特に４００，０００〜１，４００，０００、好ましくは、６００，０００〜ｌ　、２００，０００の範囲が望ましい。

現在好ましい、実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量は、７００．０００〜１．０００，０００である。４００，０００以上のより高い推定分子量は特に好都合だと考えられるが、逆にグラフト化ポリスチレン鎖が約１，０００，０００以上の非常に大きい推定分子量をもつ場合は、特に基質が、しばしば好ましいシートまたはフィルムの形式である場合、ポリマー基質の機械的性質に有害な効果を及ぼすようである。

ポリスチレン鎖が該ポリマー基質にグラフト化する程度、すなわちポリマー基質に対するポリスチレンの重量パーセントは、もちろん、ポリスチレン鎖の長さ、グラフト化部位密度およびポリマー基質の大きさに依存し、幅広く変化しうる。

したがって、厚さ２５〜１００μｍの範囲のポリマー基質のシートまたはフィルムの場合、ポリスチレン鎖のグラフト化の程度は、例えば約５〜約８００重量％、例えば約１０％〜約７００％であってもよい。ポリスチレン鎖のグラフト化度が非常に低いことおよび高いことはどちらも、中程度のグラフト化と同様に、本発明の好ましい具体例として価値がある。

したがって、通常小規模、典型的にはマイクログラム規模で、タンパク質のペプチド配列が合成できればよいような分析のためには、例えば、ポリスチレン鎖のグラフト化の程度が５〜２００％、通常ｌＯ〜６０％（厚さ２５〜１００μｍの範囲のポリマー基質のシートまたはフィルム）というように比較的低く、好ましくは制御された、しばしば官能化の程度の低いポリマー基質の供給により、形成されるペプチド量を自在に制限できることが保証される。

本明細書で選択されたように生産されたポリスチレン−グラフト化ポリエチレンシートまたはフィルムは、ペプチド化学や生化学の分析面に関し特に好都合である。つまり、それが光、特に可視光に対し高い透過度を持つため、分光光度技術の使用が容易になるという点においてであり、例えば抗原／抗体反応の測定（例えばＥＬＩＳＡ技術によるもの）のような場合であり、この場合、抗原／抗体反応は連続する呈色反応によって測定され、その際、抗原は固体支持体上で合成され固体支持体に固定されて残っている個々のペプチド配列であってもよい。

明らかにペプチドおよびタンパク質の可能な最大収量を得ることが所望される調製的合成のためには、最大の実用的グラフト化度によるのが好都合である。全体の観点からいえば、厚さ２５〜１００μｍ（好ましい具体化で用いた）の範囲のポリマー基質のシートまたはフィルムのグラフト化度の実用上の上限は、しばしば約５００〜６００重量％である。もっとも、特別な場合には７００％のグラフト化度というように、この範囲を超えることが所望されることもある。逆に、実際のグラフト化度は最小でも、その薄いシートまたはフィルムでは、普通的４０％を下まわることはない。最も実用的な目的のためには、その薄いシートまたはフィルムのグラフト化度は、１００〜６００％の範囲であり、しばしば２００〜６００％の範囲であり、調製的な目的のためには、しばしば好ましくは２００〜４００重量％であり、これは官能基のついたグラフト化シートを用いて行ったペプチド合成の収率および効率の観点およびグラフト化シートまたはフィルムの機械的強度の観点の両親点からみて適切と思える。

本発明を説明する実施例から明らかなように、高純度のペプチドが異常な高収率で得られる。例えば、本発明の好ましい具体例である、厚さ約５０μｍでグラフト化度的４００〜５００％の薄いシートまたはフィルムの形のポリエチレン基質から形成した官能化ポリスチレン−グラフト化ポリエチレンシートまたはフィルムを用いる　−場合である。

前記のとおり、本発明の１つの態様においては、ポリマー基質と、有機溶媒中の前記モノマー溶液中の所望により置換したスチレンモノマーとの間の実質的なラジカル開始反応により、ポリスチレン−グラフト化ポリマー基質が形成する。また前記のとおり、長く、実質的に無架橋なポリスチレン鎖を得る観点からみると、水酸基をもつ有機溶媒、特にアルコールのような、成長しているポリスチレン鎖が膨潤したりまたは溶媒和されにくい溶媒中でグラフト化することが好ましい。このために好ましいアルコールは、Ｃ＋−＊脂肪族アルコールである。実際には、メタノールが最も適切な溶媒であることがわかっているが、例えばエタノール、プロピルおよびイソプロピルアルコールおよびｎ−ブチル、５ｅｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルアルコールが適用できることも考えられる。

グラフト化に用いる溶液中の、すなわち前記のとおり、成長しているポリスチレン鎖を膨潤したり溶媒和しにくい溶媒、前記のとおり特にアルコール、例えばメタノールのような溶媒の溶液中の、所望による置換スチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）は、形成したグラフト化ポリスチレン鎖の分子量に顕著な影響を及ぼす。つまり、溶液中の溶媒の容量パーセントが大きくなれば、少なくともある時点までは、溶媒の鎖延長効果も大きくなる。したがって、溶液中の所望による置換スチレンの容量パーセントは、１〜９５％というように非常に広範囲であるが、この容量パーセントは、一般には１０〜９０％、より一般には２０〜８０％である。溶液中の所望による置換スチレンの容量パーセントの非常に興味深い範囲は、２５〜５０％の間である。実施例から明らかになるように、２５〜３５％の範囲、言いかえれば、約３０容量％において素晴しい特性をもっことが支持される。グラフト化工程におけるメタノール中のスチレンの容量パーセントと、得られた、ポリスチレン鎖の長さの推定値との間の関係は、メタノール中の所望による置換スチレンの容量パーセントと、一定のγ放射線量および線量率で生成したホモポリマーの分子量との間の関係についての後記実験で示す。

実質的に周囲の温度またはそれよりやや高い温度、液体成分の全蒸気圧に等しい圧、所望によりアルゴンのような不活性ガスの適度な圧を加えて全圧力を約１気圧にし、無酸素中、γ照射することにより、非常にうまく、グラフト化工程を行うことがでる。反応系から酸素を除去する適切な方法は、強力な真空装置上、凍結、解凍サイクルを繰り返すことである。γ照射は、線量率約１〜約１００゜０００Ｇｙ／時間、例えば、約３００〜１０００Ｇｙ／時間、特に約２００〜５０００Ｇｙ／時間において、うまく行うことができる。

長く、実質的に無架橋なポリスチレン鎖をもつ所望の立体配置を得るには、照射強度が非常に重要であると信じられている。もし、該強度が高すぎるならば、フリーラジカルの形成が非常に高くなり、グラフト化は、通常は所望でない、より多数のより短い鎖および恐らく高い架橋度を包含するであろう全体としてみると、ポリマー、所望による置換スチレンモノマー、反応混合物、放射線線量率および照射時の温度の選択により、鎖長、グラフト化および支持体の光学的特性（これは支持体がシートまたはフィルムの時、特に重要である）の最適化を行う。

γ照射を包含する前記方法は現在好ましい方法であるが、通常のラジカル開始剤、例えば過酸化水素、過酸化ベンゾイルまたは過酸化ジアセチルのような過酸化物、またはラジカル形成源としてアゾ化合物を包含する別の方法を用いて、ポリスチレン−グラフト化フィルムをうまく製造することも考えられる。使われうる、他のラジカル形成源としては、例えばオゾンおよびＵｖ線があり、他の特に興味深いラジカル形成源に電子線がある。重要なのは、ラジカル生成に用いる方法が、ラジカルにより開始したポリスチレン鎖の成長を、比較的よく制御するものであるということである。使う溶媒の特性の重要性に関する前記条件は、これらフリーラジカル開始源と関連して適合すると信じられている。

また、ラジカル開始によらずに、本発明に有用なポリスチレン／ポリエチレンブロック共重合体を生成することも可能と考えうる。

したがって、例えばブタジェンおよびスチレンのブロック共重合体を合成するのに、２つのブロックの鎖長を正確に制御できるアニオン重合を用いることが可能である。ポリブタジェンブロックがポリエチレンに変換するのと同様にして、このポリマーを水素化することが可能である。形成したポリエチレンは、固体状態で高密度のポリエチレンを形成するような規則的構造をとるだろう。コポリマーのポリエチレン部分が、互いに密着したフィルムを形成することが、この方法において決定的に重要である。以下の方法でこれを得ることか考えられる。ポリスチレン部分は室温およびそれより高温で溶けるがポリエチレン部分は溶媒が熱いときしか溶けないような溶媒に、エチレン／スチレンブロック共重合体を溶かす。そのような溶媒は例えばキシレンである。該ポリマー溶液を溶融状態で入れ、ポリエチレンが沈澱する温度以下にゆっくり冷やす。ポリエチレンフィルムが形成したら、残りの溶媒を除く。

さらに、後記の製造別法は、他のポリスチレン／ポリオレフィンブロック共重合体、例えばポリスチレン／ポリプロピレンブロック共重合体の製造に拡大することも考えられる。ポリスチレン／ポリプロピレンブロック共重合体の場合、ブタジェン以外のモノマー、例えば２−メチル−１，３−ペンタジェンを用いる。

ポリスチレン−グラフト化ポリマー基質は、前記のようにあらゆる適合形式であってよい。本発明の具体化で非常に興味深いのは、シートまたはフィルムの形式をとることである。そのシートまたはフィルムの出発物質であるポリマー基質、例えばポリエチレン基質、そのものの厚さは、広範囲で変化し、通常１０〜１０，０００μｍ１大半の目的には好ましくは２５〜１０００μｍの範囲、典型的には２５〜７５μｍのような２５〜１００μｍの範囲である。もちろん、グラフト化工程は厚さの増大につながる。したがって、シートまたはフィルムが薄いほど、そのグラフト化条件において厚さの増加の割合は大きくなる。実施例のとおり、グラフト化した薄シートまたは薄フィルムの厚さは、２５〜２００μｍの範囲である。

シートまたはフィルム形式のグラフト化ポリマーは、熱可塑性物質であり高温で可溶なので、可能性としてグラフト化工程完了後の再成型が考えられる。したがって、ポリスチレン−グラフト化ポリエチレンシートまたはフィルムの場合、好ましくは、シートまたはフィルムを適当な溶媒に溶かし、該溶液を冷却し溶媒を蒸発させ、ポリマー支持体の新しい「キャスティング（ｃａｓｔｉｎｇ）Ｊを、例えば、グラフト化ポリエチレン鎖をもつ薄いシートまたはフィルムとして得ることが可能である。適当な溶媒となるのは、適度な高温においてグラフト化ポリスチレン鎖をもつポリマー支持体を溶かしくしかしグラフト化は保持したまま）、さらに低温に冷却すると、もはや溶液中にポリマー基質を維持できなくなるが、それでもなお有効にポリスチレン鎖を膨潤または溶媒和するものである。例えば、ポリスチレン−グラフト化ポリエチレンに有用な溶媒として、キシレンまたはキシレンの混合物がある。

ペプチドまたはタンパク質合成を実際に行う際、シートまたはフィルムは多くの利点を有する。つまり、フラスコ、ビーカー、ミクロビーカー、漏斗、ウェル、カラムまたはネットを包含するあらゆる型の既知ペプチド合成反応容器のような、使用する反応容器に応じた適当な大きさに、容易に、シートまたはフィルムを切ることができるのである。

シートまたはフィルムの支持体は、ペプチド合成についての新規で実用的な方法の創作を可能とする。例えば、多数のシートまたはフィルム片を共通の支持体上に載せ、例えば、種々の試薬および洗浄溶媒にさらすことにより、ペプチド合成の種々の工程で一緒にしてもよく、また、該片をセットでならべてもよく、それぞれのセットを特有の反応媒体の組合わせに付してもよい。

この後者の可能性は、効率的な「区分（ｃｏｌｌｌｐａｒｔｍｅｎｔａｌｉｚａｔｉｏｎ）ｊを容易にし、２個またはそれ以上のペプチドを平行的に、実質的に同時に製造することができる。

したがって、１つの態様において本発明は、ペプチドおよびタンパク質の「区分」合成の特に実用的な方法を提供する。この態様は、固相ペプチド合成支持体として、ポリスチレン−グラフト化シートまたはフィルムを使用することに基づく。本発明のこの態様は、１個またはそれ以上のペプチドまたはタンパク質を合成する方法として表されてもよい。この方法では、２個またはそれ以上のペプチドまたはタンパク質を合成しようとする時、所望の数のペプチドおよびタンパク質を平行的に、および実質的に同時に合成できる。該方法は、Ａ）複数の実質的に同一の、ポリスチレン鎖とグラフト化したポリマー基質を提供しくここに、前記ポリスチレン鎖は、該合成全体にわたる条件において反応性でない置換基を、所望によりさらに有していてもよく、各ポリスチレン−グラフト化ポリマー基質のポリス千しン鎖の少なくとも１部分が、ポリスチレン部分と、少なくともＮが保護され所望によりカルボキシル末端が誘導されたアミノ酸との間の固定のための結合形成を容易にする化学官能基が導入されている）、Ｂ）所望により、前記の複数のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質の１部分を、それぞれ１個またはそれ以上の前記複数の物を含有する２個またはそれ以上のセットに物理的に区分し、Ｎ−保護および所望によりカルボキシル末端を誘導したアミノ酸を、前記複数の物の各部分の官能化されたポリスチレン部分にカップリングさせ、または、可能であれば、用いたＮ−保護および所望によりカルボキシル末端の誘導されたアミノ酸の各セットの各部分が、該複数の物のすべての部分にとって同一であるか、可能であれば、１つのセットの全部分がそうであり、さらに、可能であれば、以下から選ばれるもののうちの１つに一致し、（ｉ）すべてのセットにとり同一である、（ｉｉ）前記セットが２以上の時、少なくとも２つのセットにとり同一である、（ｉｉｉ）各セットにとり異なる、ここに、前記官能基および前記Ｎ−保護および所望によりカルボキシル末端の誘導されたアミノ酸がお互いに適合し、合成するペプチドまたはタンパク質鎖を実質的に分解させることなく、形成した固定結合はその後開裂でき、Ｃ）前記複数の物の各部分または、可能であれば、前記各セットの各部分を処理し、カップリングした、Ｎ−保護アミノ酸のＮ−保護アミノ基または置換アミノ基からＮ−保護基を除去し、カップリングしたアミノ酸のアミノ基および置換アミノ基が、別のＮ−保護アミノ酸のカルボキシル基または活性カルボキシル基と反応するのを容易にし、Ｄ）前記複数の物の各部分の、可能であれば各セットの各部分の、官能基化ポリスチレン部分に最後にカップリングしたアミノ酸の前記アミノ基または置換アミノ基を、別のＮ−保護アミノ酸のカルボキシル基または活性カルボキシル基と反応させて、前記アミノ基または置換アミノ基、および前記カルボキシル基または活性カルボキシル基の間にペプチド結合を形成させ、ここに、前記の別のＮ−保護アミノ酸は、該複数の物の全部分または可能でれば１つのセットの全部分にとり同一であり、さらに、可能であれば、ステップＢ）との関連で前記３つの選択枝の１つに一致し、Ｅ）所望により、前記複数の物の各部分の、または可能であれば前記各セットの各部分を処理して、最後にカップリングしたＮ−保護アミノ酸のＮ−保護アミノ基または置換アミノ基からＮ−保護基を除き、後のアミノ酸のアミノ基または置換アミノ基が、別のＮ−保護アミノ酸のカルボキシル基または活性カルボキシル基と反応するのを容易にさせ、Ｆ）工程Ｅ）を行った場合に工程Ｄ）およびＥ）を所望の回数繰り返し、Ｇ）所望により、前記複数の物の各部分の、または可能であれば前記各セットの各部分を処理し、合成ペプチドまたはタンパク質鎖のアミノ酸部分上に残っているかもしれない、幾つかのまたはすべての保護基を除去し、Ｈ）所望により、前記複数の物の各部分の、または可能であれば前記各セットの各部分を処理し、前記多数物の各部分の、ま１こは可能であれば前記各セットの各部分の官能基化ポリスチレン部分に、合成されたペプチドまたはタンパク質鎖を固定している結合を開裂させ、および、Ｉ）所望により、さらに、合成したペプチドまたはタンパク質鎖から、所望でないあらゆる基を除去すること、からなることを特徴とする。

区分のために、シートまたはフィルム形式のポリマー支持体を扱う１つの実用的な方法は、シートまたはフィルムの幾つかの部分の表面上に溶融黒鉛性インク（ｇｒａｐｈｉｔｅ−ｂａｓｅｄ　ｉｎｋ　ｍｅｌｔｅｄ）により消えない印をつけたシートまたはフィルムを、所望の数の小片に切ることである。他の方法としては、種々の小片を同一の大きさのシートまたはフィルム上に置き、ついで、場合により一緒にまたは別々に、異なる部分（これは上記のとおり適切に印がつけられている）を処理することである。明らかなごとく、１つの具体例としは、行う処理が同じであるかぎり、同一のフィルム上に該小片を残し、行う工程が異なる場合は、フィルムをサブユニットに分割することである。

少なくともＮ末端が保護され、所望により誘導されたアミノ酸と、官能基導入されたポリスチレン部分との間の固定結合を容易にする化学官能基は、適切には、クロロ−、ブロモ−およびヨード−置換アルキル、アミノ−置換アルキル、アミノ−およびアリール−置換アルキル、アミノ−およびアルキルアリール−置換アルキル、ヒドロキシ−置換アルキル、を包含する基のものまたはそれらの基から誘導されたものである。

該官能基が前記の基のどれかから誘導されたものである場合は、該官能基は、合成ペプチドまたはタンパク質鎖を、該鎖の実質的崩壊なしでポリスチレン部分から開裂させるスペーサー基を有する官能基である。

本発明の適当な具体例においては、クロロ−置換アルキルはクロロメチルであり、アミノ−置換アルキルはアミノメチルであり、アミノ−およびアルキル−置換アリールはα−アミノベンジル（ベンズヒドリルアミノ）であり、アミノ−およびアルキルアリール−置換アルキルは、α−アミノ−２−１α−アミノ−３−およびα−アミノ−４−メチルベンジル（後者はまた、４−メチルベンズヒドリルアミノとして知られている）を包含する基から選択され、ヒドロキシ−置換アルキルはヒドロキシメチルである。

ポリスチレン−グラフト化ポリマー基質の最初の官能基導入については、伝統的固相ペプチド合成に関し、５０以上の方法が記載されており（バラニーおよびメリフィールド（Ｂ　ａｒａｎｙ　ａｎｄＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）、ザ・ペプチド（Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ）、第２巻、アカデミツクプレス、ニューヨーク（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）、１９７９．１〜２８４頁）およびスチュワードおよびヤング（Ｓｔｅｗａｒｔａｎｄ　Ｙ　ｏｕｎｇ）、固相ペプチド合成（Ｓｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　ＰｅｐｔｉｄｅＳ　ｙｎｔｈｅｓｉｓ）、第２版、ピアース・ケミカル・カムバニー、イリノイ（Ｐ　１ｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ、　Ｉ　１１ｉｎｏｉｓ）、１９８４、参照）、そのクロロメチルを導入する反応（クロロメチルメチルエーテル／５ｎＣＱ＋反応による）、アミノメチル（Ｎ−ヒドロキシメチルフタルイミド反応を経由する；ミヅチェル（ｍｉｔｃｈｅｌｌ）ら、テトラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｂｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　）、３７９５（１９７６）参照）およびベンズヒドリルアミノ（ピータおよびマーシャル（Ｐ　１ｅｔｔａ　ａｎｄＭａｒｓｈａｌｌ）、ジャーナル・オブ・ケミカルソシエテイ（Ｊ　、　Ｃｈｅｍ。

Ｓｏｃ、）、６５０　（１９７’０））基が、最も幅広く利用されている。最初に導入された他の反応性官能基は、４−メチルベンズヒドリルアミノおよび４− メトキシベンズヒドリルアミノを包含する。これら確立された方法はすべて、原則的には、本発明において有用である。

本発明におけるペプチドおよびタンパク質合成方法の好ましい具体例は、最初の官能基としてアミノメチルを用いるものである。アミノメチルは「スペーサー」または「ハンドル」基の組み込みに関し、特に好都合である。これは、スペーサー形成試薬の一方の端のカルボン酸基に対して、本質的に定量的なアミド結合を形成する点に関するアミノメチル基のアミノ基の反応性によるものである。非常に多数の、関連するスペーサーまたはハンドル形成パイファンクンヨナル試薬が記載されており（バラニー（Ｂ　ａｒａｎｙ）ら、インターナショナル・ジャーナル・オブ・ペプチド・プロティン・リサーチ（Ｉｎｔ。

Ｊ、　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、　）、３０．７０５〜７３９（１９８７）参照）、特に、例えば、４−（ブロモメチル）フェニル酢酸のような４−（ハロアルキル）アリール−低級アルカン酸、Ｂｏｃ−アミノアシル−４ −（オキシメチル）フェニル酢酸のようなりｏｃ−アミノアシル−４−（オキシメチル）アリール−低級アルカン酸、Ｎ−Ｂｏａ−ｐ−グルタロイルベンズヒドリルアミンのようなＮ−Ｂｏａ−ｐ−アシルベンズヒドリルアミン、Ｎ−Ｂｏａ −４’−メチル−ｐ−グルタロイルベンズヒドリルアミンのようなＮ−Ｂｏａ− ４’−低級アルキル−ｐ−アシルベンズヒドリルアミン％Ｎ−Ｂｏａ−４’−メトキシ−ｐ−グルタロイルベンズヒドリルアミンのようなＮ　Ｂｏｃ　４°−低級アルコキシ−ｐ−アシルベンズヒドリルアミンおよび４−ヒドロキシメチルフェノキシ酢酸のような４−ヒドロキシメチルフェノキシ−低級アルカン酸を包含するアミノメチル基のようなアミノ基に対して反応性のある試薬である。

合成したペプチドまたはタンパク質鎖を固体支持体から開裂するために組込み、ペプチドまたはタンパク質鎖のＣ−末端がアミドの形であるベンズヒドリルアミノ、４−メチルベンズヒドリルアミノおよび４−メトキシベンズヒドリルアミノのような一定の官能基はスペーサー基を導入する必要はなく、そのような官能基はどれも本発明において都合よく利用される。

スペーサー基またはハンドル基の導入に関する別法として、いわゆる「前形成ハンドル（ｐｒｅ−ｆｏｒｍｅｄ　ｈａｎｄｌｅ）Ｊ法（タム（Ｔａｍ）ら、シンセシス（Ｓ　ｙｎｔｈｅｓｉｓ）、９５５〜５７（１９７９）参照）があり、これは、最初のアミノ酸のカップリングを完全に制御し、ペプチドまたはタンパク質の合成に無関係の所望でない官能基の存在により生じる複雑化を排除する。この方法では、前記のとおり通常同型のスペーサー基またはハンドル基を、該固体支持体に固定させたい最初のアミノ酸と反応させる。該アミノ酸はＮを保護し、所望のペプチドまたはタンパク質鎖の形成には関係ない他の側鎖を所望により保護している。通常の固相ペプチド合成でよく知られた多数の他の可能性も存在するが、適当なＮ−保護基には、普通、ベンジル基と組合わせて側鎖を保護するＢｏｃ、普通、ｔ−ブチルと組合わせてあらゆる側鎖を保護するＦｍｏｃ（Ｂｏｃ＝ｔ−ブチルオキシカルボニル；Ｆｍ。

ｃ＝９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）がある。

したがって、スペーサー基またはハンドル基が所望の場合は、固体支持体にカップリングする最初のアミノ酸は、例えばアミノメチルのような最初に導入した官能基に結合しているスペーサー基の自由反応末端にカップリングするか、または最初に導入した官能基と反応させるスペーサー形成試薬と反応させうるかである。

カップリングさせる最初のアミノ酸のカップリングの完了に続き、固相合成の次の段階は、所望のペプチドまたはタンパク質鎖を系統的に仕上げることである。

この仕上げは、脱保護／カップリングサイクルの繰り返しを包含する。最後にカップリングしたアミノ酸上の、前記ＢｏａまたはＦ　ｍｏｃ基のような一時的な保護基は適当な処理により定量的に除去される。例えば、Ｂｏｃの場合、トリフルオロ酢酸によるようなアシドリシスにより、Ｆ　ｍｏｃの場合、ピペリジンによるような塩基処理により、最後にカップリングしたアミノ酸のＮ−末端アミン官能基を遊離させる。

ついで、次の所望のＮ−保護アミノ酸を最後にカップリングしたアミノ酸のＮ− 末端にカップリングさせる。この、最後にカップリングしたアミノ酸とアミノ酸のＣ−末端をカップリングさせることは、幾つかの方法で行なわれうる。例えば、活性エステル誘導体の最初の形成または無水物の最初の形成を包含する幾つかの方法のどれか１つにより活性化されたカルボキシル基を有する形で新しいアミノ酸を与えることによるようなものである。また、新しいアミノ酸のカルボキシル基は、例えばジシクロへキシルカルボジイミドまたはその誘導体のような縮合剤の補助により、最後にカップリングしたアミノ酸のＮ−末端と直接反応させてもよい。

保護基を包含する所望のペプチドまたはタンパク質鎖の集合の完了に続き、次の工程は通常、該ペプチドまたはタンパク質鎖のアミノ酸部分の脱保護および合成ペプチドまたはタンパク質を固体支持体から開裂させることである。これらの工程は、実質的に同時に起こりうるものであり、これによりフリーなペプチドが所望の形で得られる。また、２つの別々に合成されたペプチドまたはタンパク質鎖の縮合を行う場合、合成の最初に適当なスペーサー基を選ぶことにより、所望のペプチドまたはタンパク質鎖を個々の固体支持体がら開裂させることが可能である。ペプチドまたはタンパク質鎖はどちらもまだ側鎖保護基を有しており、例えば保護ペプチドまたはタンパク質の２つの側鎖をカップリングさせてより長いペプチドまたはタンパク質鎖を形成し、最後に側鎖保護基を除去する。３っめの可能性は、例えばペプチド化学または生化学の分析面で特に関係のあるものであり、該鎖を固体支持体に保っている固体結合の開裂なしにペプチドタンパク質鎖から保護基を除去することである本発明によるものと類似するが問題としている特有の化学に適合するリンカ−またはスペーサー基を包含するポリスチレン−グラフト化ポリエチレン基質は、ペプチド以外の、単一または複数の生体高分子の合成において貴重かもしれない。１つの例として、オリゴヌクレオチドの合成があり、これらは通常わずか４個の異なる反応区画、すなわち４つのヌクレオチド単位それぞれのもの（すなわち、ＤＮＡフラグメントにはＡ％Ｔ、ＧおよびＣ５ＲＮＡフラグメントにはＡ、Ｇ、ＣおよびＵ）が必要であるに過ぎないので、概念的には合成は容易である。そのような合成は平行的に、実質的に同時に、本発明と同様の方法により行なわれるであろう。

以下、実施例により本発明を説明する。使用略語は以下のとおりである。略語一覧表Ｂｏａ：　ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルＣρＺ：　２−クロロベンジルオキシカルボニルＤＣＣ：　Ｎ、Ｎ”−ジシクロへキシルカルボジイミドＤ　ＣＵ　：　Ｎ　、　Ｎ　’−ジシクロへキシルウレアＤ　ＩＥＡ：　Ｎ、Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミンＤＭＦ：　Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミドＦＡＢＭＳ：　高速原子衝撃質量分析法ＨＯＢｔ：　１−ヒドロキシベンゾトリアゾールＨＰＬＣ：　高速液体クロマトグラフィーＰａ１１：　フェニルアセトアミドメチルＰＥ：　ポリエチレンＰＰ：　ポリプロピレンＳＥＣ：　サイズ排除クロマトグラフィー５ＰＰＳ：　固相ペプチド合成ＴＥＡ：　トリフルオロ酢酸ＴＦＭＳＡ：　トリフルオロメタンスルホン酸ＴＨＦ：　テトラヒドロフラン種々のアミノ酸に使用する略語は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢコミッション・オブ・バイオケミカル・メタンクラチャー（Ｃｏｍｍｉｓ８ｉｏｎ　ｏｒＢ　１ｏｃｈｅＩＩｌｉｃａｌ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ）［ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　）、２４７．９７７−９８３（１９７２）］のとおりであり、すべての場合、Ｌ−配置アミノ酸を意味する。

実施例１ポリスチレン−グラフト化ポリエチレンシートの製造の一般性スチレン（９９％　アルドリッチ（Ａ　Ｉｄｒｉｃｈ））を塩基性アルミナに通した。ある場合には更にナトリウムまたは水素化カルシウムから蒸留した。メタノール中の純粋スチレン３０％（Ｖ／Ｖ）溶液２０ｄを、ｎ−へキサン中洗浄した低密度ＰＥシート長方形片ととも？こ、アンプル中に入れた。使ったシートの厚さは５４μｍであった。凍結−解凍サイクルを高真空ライン上で繰り返すことにより、該溶液を完全に脱気し、ついで該アンプルを真空下封かんした。ついで、該アンプルおよび内容物を、コバルトガンマ照射施設中で照射した。該照射は２段階で行った。

線量分布をできる限り均一にするため、２段階の間に該アンプルを照射源中の１箇所から他へ移動させた。線量率は約４００ＧＹ／時間であった。使用した最高の線量率は４１７Ｇｙ／時間であり、最低は３３９Ｇｙ／時間であった。照射後、該シートをソックスレー抽出器中、ジクロロメタンで抽出し、乾燥した。固有のデータを表１に示す。照射線量とグラフト化の程度の間に明確な相互関係があるが、データ中多くのばらつきがあることは注目に値する。これは、１つにはいわゆる「余効（ａｆｔｅｒ　ｅｆｆｅｃｔ）Ｊによるものであり、照射停止後、重合工程がある程度継続しているのである。この効果の例として、４５０％グラフト化シートを得るために全線量３．４ｋＧｙで照射したシートを含有するアンプルを、２段階の照射の間の１０時間、照射源外に置いた。さらに、該アンプルを照射完了１０日後に初めて開けた。２３０％のグラフト化を得るために全線量２．０ｋＧｙで照射したシートにも同様の方法を用いた。

表１メタノール／スチレン（７０％　Ｖ／Ｖ）中のＰＥシートのグラフト化ＰＥシートの　照射線量（ｋＧｙ）　グラフト　ＣＨｔ　ＣＱ　ｔでの質量（ｇ）（照射時間、時間）　％＊　抽出持続時間（時間）０．２２８８　５．６（１４，０）　５４７　３００．２９０　４．０（１０，０）　４４３　９６０．３３２２　３．４（９，０）　４５０　３３００．２７４２　３．０（８，１）　２２０　２４００．３８６６　２．９（８，０）　２Ｂ５　１７００．３４００　２．７（６，７）　２３１　９００．２３９８　２．４（６，０）　１７３　１２００．３３９９　２．０（６，０）　２３０　１８５０．３５０２　１．７（４，８）　２００　１８２０．３７１０　１．７（５，０）　１８０　２６００．３４５６　１．０（３，０）　７５　５６０．３３８５　１．０（３，０）　５５　１１４！ｉ０．３８３１　０．９８（２，８）　８０　１１９＊　ニゲラフト率％− ［（最終のシートの質量）−（ポリエチレンの質ｆｆ１）］　Ｘ　１００／（ポリエチレンの質量）且　：アンプルの封かんの際、シートの上部を傷つけた。

また、グラフト化がそれぞれ４６．１２９および３３１％のシートも製造した。

実施例２ポリプロピレン・コアおよび他の高密度ポリエチレン層を含有する繊維からなる不縁フェルト上のグラフト化方法不織ＰＰ／ＰＥフェルトをｎ−ヘキサンで洗浄し、実施例１記載の通常法と全く同様に、メタノール中の脱気した精製スチレン３０％（ｖ／ｖ）溶液を含有する封かんしたアンプル中照射した。結果を表２に示す。

表２メタノール／スチレン（７０：３０　ｖ／ｖ）中のＰＰ／ＰＥ不縁フェルトのグラフト化Ｐ　Ｅ／Ｐ　Ｐフ　照射線量（ｋｅｙ）　グラフト　ＣＨ２Ｏムでのフェルトの　（照射時間、時間）　％＊　抽出持続時間！　ｉｔ　（）　□ｃ待時間０．２４００’　１．６（４，５）　８６　’　１．２４＊　ニゲラフト率％＝［（最終のシートの質Ｉｔ）−（ポリエチレンの質量）］　ｘ　ｌ　００／（ポリエチレンの質量）実施例３グラフト化ポリスチレン鎖の長さに対するメタノール／スチレン率の影響以下の結果は、異なるメタノール／スチレン混合物中、低密度ポリエチレンンートの照射により得た（線量５ｔｃｙ、線量率４００Ｇｙ／時間、室温）。

溶媒中のメタノール％（Ｖ／Ｖ）　ホモポリマーの最大分子量０　１８０．０００２０　３００．０００４０５００．０００７０８００．０００ポリスチレン−グラフト化ポリエチレンシートのグラフト鎖中に吸蔵され、シートからジクロロメタンで抽出されたホモポリマー分画の分子量（架橋スチレン／ジビニルベンゼンカラム物質上、サイズ排除クロマトグラフィーで測定）は、溶液中のメタノール／スチレン率により増加することがわかる。同時に、高いメタノール／スチレン率において、分子量分布は狭くなる傾向にある。

実施例４グラフト化ポリスチレン鎖の分子量の評価に関する実験。

シートから抽出したポリスチレンホモポリマーはＳＥＣにより特徴づけられた。

抽出したポリスチレンは２つのふくらみを有する典型的な分子量分布を示す。これは、照射中、シート中および周囲の溶液中の両方において、ポリスチレンが形成されたことによるものである。もし、ソックスレー抽出を行う前にジクロロメタン中、シートを簡単に洗浄すれば、低分子量フラクション量は高分子量フラクション量に比べて大幅に減少するだろう。抽出したホモポリマーの高分子量フラクションの分子量データを表３に示す。典型的なサンプルの大きさは、ポリマーが０．０１ｍｇ〜０．２Ｂであった。それぞれ１７３．２２０．２３１および４５０重量％にグラフト化したシートからのホモポリマーについては、ＳＥＣにトーヨ・ソーダ（Ｔｏｙｏ　５ｏｄａ）ＴＳＫ　ＧＭＨ６の６０ｃｍカラムを外界温度で使用し、ＴＨＦで溶出し、流速０．５ｍ１２／分であった。４４３重量％にグラフト化したシートからのホモポリマーについては、ＳＥＣにショーデックス（Ｓ　ｈｏｄｅｘ）Ａ　８０−　Ｍの５０ｃｍカラムを５０℃で使用し、溶媒にキシレンを用い、流速０．５ｍｇ／分であった。グラフト化ポリマーのＳＥＣにもこのセットを使用したが、この場合は９０℃、流速的０．３１１１（！／分であった。該グラフト化シートは熱いキシレン中で溶ける。５つのグラフト化シートのポリスチレン−グラフト化ポリエチレンの分子量データを表４に示す。得られたすべての分子量データは、分子量２８００ｇ／ｍｏ１２〜８，０００，０００ｇ／ｍｏρのポリスチレン標準に基づく検量線を用いて計算した。該検量線の形は３次多項式に一致する。１次（直線）検量線を用いても同じ結果になる。

スチレンホモポリマーで得られた分子量は絶対的なものだが、グラフトコポリマーで得られた分子量は絶対的なものでないことに注意しなければならない。ショーテックスＡ３０−Ｍカラムの場合、観察された極端に大きな分子量を計算するためには、検量線の外挿が必要であった。この外挿は重量平均分子量の過小評価につながり、また結果的に多分散性の過小評価につながりうる。非グラフト化ポリエチレンは、１，２．４−トリクロロベンゼンで溶出する高温ＳＥＣにより特徴づけられた。以下の値を得た。

Ｍｗ＝４　ｘ　Ｉ　Ｏ’ｇ／ｍｏ（ｌおよびＭｗ／Ｍｎ＝５゜後者のデータはポリスチレン標準に基づく検量線を用いて得た。

ポリスチレンホモポリマーのデータは、分子量は全照射線量に影響を受けないが、ポリスチレン−グラフト化ポリエチレンについては、測定分子量は該線量によく比例することを示している。これらの観測は、非常に長鎖のグラフトが全照射工程で形成し、本質的にはグラフトの数だけが該線量の影響を受けることを示している。

表３照射シートから抽出したポリスチレンホモポリマーの高分子量フラクションについての分子量データ。

グラフト　照射線量　Ｍｗ＃　Ｍｗ／Ｍｎ＠率（％）　（ｋＧｙ）　（ｘｉ　Ｏ −’モル／ｇ）４５０　３．４　１．４　２．２４４３　４．０　２．６　３．７２３１　２．７　１．２　２．３２２０　３．０　１．２　２．２＋７３　２．４　１．１　２．２６　：Ｍｗｉ＝重量平均分子量Ｎ　：　Ｍ　ｗ　／　Ｍ　ｎ　＝数平均分子量で除した重量平均分子畳表４照射シートからのポリスチレン−グラフト化ポリエチレンについての分子量データ。

り゛う７Ｆ率　照射線量　Ｍｄ　Ｔｏ／Ｍｎ　且Ｍｐｅａｋ＊（＄）　（ｋＧｙ）　（ｘｌＯ−’モル／ｇ）　（ｘｌｏ−＠モル／ｇ）４５０　３．４　７．０　１．６　７．２４４３４．０　６．６　１．８　６．１２３１　２．７　２．９　２．２　３．５２２０　３．０　４．７　１．６　４．５１７３　２．４　４．１　１．６　３．１＃　：Ｍｖ＝重量平均分子量＠　：Ｍｗ／Ｍｎ・数平均分子量で除した重量平均分子量＊　：Ｍｐｅａｋ＝クロマトグラム中最高点における分子量実施例５ポリスチレン−グラフト化ポリエチレンシートの再成型１７３％グラフトシート（表１参照）の１部分を１００℃てキシレン中に溶解し、８０℃で該溶液をテフロン鋳型中へ注いだ。キシレンをゆっくり蒸発させた後、非常に薄いフィルムが形成した。フィルムが極端に薄いため、フィルム小片（１〜２ｍｍ平方）以外には何も得られなかった。しかしながら、これら小片はジクロロメタンにさらしても崩壊しなかった。このことはポリエチレン層が切れ間なく再型成していることを意味する。

実施例６ポリスチレン−グラフト化ＰＥシートのアミノメチル化（官能基導入）。

４４３％ポリスチレン−グラフト化ポリエチレンシート（全１゜３０ｇ）の８つの等しい大きさの長方形片（１，５ｘ　４．　５ｃｍ）を、手動式５ＰＰＳ振盪器上６０ｍ１２ＳＰＰＳ反応容器中へ入れＴＦＡ／ＣＨ，Ｃ１２！（１：１　ｖ／ｖ）で３！５分間洗浄した。Ｎ−（ヒドロキシメチル）フタルイミド（９７％純度；ＥＧＡ−ＣＨＥＭｉＥ）０．３５ｇ（１、９ｍｍｏｆ２）のＴＦＡ／ＣＨｔＣＬ（１：１ｖ／ｖ）４０ｍ１２溶液を該洗浄シートに加え、該混合物を１０分間振盪した。ＴＦＭＳＡ／ＴＦＡ／ＣＨｔＣｆｆｚ（１０：４５　：４５　ｖ／ｖ／ｖ）　１０ｍ１２をゆっくり４〜５時間にかけて加え、Ｓ盪を更に３時間続けた。該シートを濾過により中離し、以下のようｌこ順次洗浄した：　Ｔ　Ｆ　Ａ、／ＣＨ％　ｃｃｔ（１：　１ｖ／ｖＸ　１２０　ｍ（２）、ＣＨｔＣｆｆ −（２４０ｍｆｆ）、メタノール（１６０ｍ１２）およびエタノール（１６０ｍ（２）。ついでそれらを、１０％ヒドラジン（フル力）を含有するエタノール４０ｍ＋２中、７０℃で１２時間振盪した。

該シートを熱混合物から濾過し、以下のように順次洗浄した（各洗浄につき２０分の振盪）：熱エタノール（３ｘ　４０ｍＱ）、熱Ｄ　Ｍ　Ｐ　（３ｔ４０ｍ（り、熱エタノール（３ｘ　４０ｍ（り、熱メタノール（３Ｘ４０　ｍ（）およびＣＨ，Ｃａｔ（３ｘ　４０ｍｆ２）。最後に、該シートをＤＩＥＡ／′ＣＨｔＣＱｔＣ１：　９　ｖ／ｖ）４０−で２ｔ５分間処理し、ＣＨ，ＣＣ。

２００ｍ１２で洗浄し、室温で乾燥した。４回の分光光学的ニンヒドリンカラー試験を総合すると、１　、００ｍｍｏ１２　ＮＨｚ／ｇシート（それぞれ０．９９．０．９６、■、０２およびＩ　、　０１　ｍｍｏｃ／ｇ　）を示し、元素分析は、１．０７ｍｍｏσＮ／ｇシートを示した。

また、以下のポリスチレン−グラフト化ポリエチレンシートもアミノメチル化した。

３３１％グラフト化シート：（換＝　０　、　２１　ｍｍｏｆｆ　ＮＨｔ／ｇシート５４７％　／／　／／　／／　Ｑ、４６／／　／／　／／１２９％／／／／／／Ｑ、５Ｑ／／）ＩＩ４６％　／／　／／　／／　０．０２／／　／／　１１２８５％　／／　／／　／／　０．６　／／　／／　／１実施例７ＢｏｃＧ　Ｉｎ　−４−（オキシメチル）Ｐａｌｌ＋−シートの製造アミノメチル−シート（置換＝　１．０ｍｍｏｆ２／ｇシート：４４３％グラフト）０．６３ｇを、５ＰＰＳ振盪器上６０１反応容器中、ＤＭＦ／　ＣＨｔ　Ｃ１２ｔ（１ −＝　２　ｖ／　ｖ）中で３ｔ３分間、前洗浄した。ＢｏｃＧｌｎ−４−（オキシメチル）フェニル酢酸０．　９８ｇ（２，５ｍｍｏｆ！、　４当量）およびＨＯＢｔ　Ｏ，３８ｇ（２，５ｍｍｏｆ２，４当量）をＤＭＦ／ＣＨｔＣ（ｌｔＣＩ　：１　ｖ／ｖ）　２０ｍρ中に溶解しネジ検使試験管（ｓｃｒｅｗ　−ｃａｐｐｅｄｔ　ｕｂｅ）中、０℃で３分間撹拌した。ＤＣＣ０，５２ｇをＣＨｔ　ＣＴ。

１〇−中に溶解し、該混合物に加えた。０℃で２５分撹拌後、ＤＣＵを濾過し、該濾過液を前洗浄アミノメチルシートに加え、２時間撹拌した。該シートを濾過し、ＣＨ−ＣＱｔで洗浄し、ＤＩＥＡ／ＣＨ，Ｃｌ２ｔ　（５：９５　ｖ／ｖ）で中和し、ＣＨｘ　Ｃ１２！で洗浄し、乾燥した。ニンヒドリン試験が陽性でないことは、定量的カップリングを示し、また以下の処理によるＢｏａ基の除去後にもこれを確認した。

３０ｍ１２ＴＦ　Ａ／　ＣＨ−ＣＬ（１：　１　ｖ／ｖ）でＩＸ２分間および１Ｘ３０分間、３０ｍ（ＩＣＨｔＣ（２ｔで６ｔ１分間、３０　ｍ１２Ｄ　Ｉ　Ｅ　Ａ　／　ＣＩＩ　ｔＣ（１−Ｃ５：　９５　ｖ／ｖ）で２ｔ５分間および３０ｍ（ｌｃＨｔｃＱｔで４ｔ１分間。ついで２回のニンヒドリン試験は、　Ｎ　Ｈを置換度が０゜７６１１１１１１０１２　Ｎ　Ｈｔ／　ｇシート（それぞれ０．７４および０　、　７７１１１１１１０１２／ｇ）を示し、これは理論値０　、　７８　ｍｍｏＱ　Ｎ　Ｈｘ／　ｇシートに非常に近いものである。

実施例８ペプチド合成：（ａ）４４３　重ｊ１％ポリスチレンーグラフト化ポリエチレン ′シー１−上、保護ヒト［Ａ　ｓｐ”］−副甲状腺ホルモンフラグメント８０〜８４．７５−・８１４および７０〜８４の合体。

ＢｏｃＧｌｎ−ＯＣＨｔ−Ｐａｗ−シート（０，８４ｇ、４４３％グラフト、０．５８ａ＋ｍｏ（７０Ｉｎ）を、５ｐｐｓ振盪器上、６０１反応容器に入れた。

保護ｈＰＴＨ７０〜８４（図１参照）を以下の合成法により合体させた。

（ｉ）ＣＨｒＣＬ、３５−１３ｘｉ分：（２）ＴＦ　Ａ／　ＣＨｔＣｆｆｔ（１：　１　ｖ／ｖ）、３５−１３ｘ１分；（３）Ｔ　Ｆ　Ａ／　ＣＨｔＣＱｔ（１：　１　ｖ／　ｖ）、３Ｅ＋ｍＩ２．３０分；（４）ＣＨ＊Ｃｌ２ｔ、３５分、６ｘ１分；（５）Ｄ　ＩＥＡ／ＣＨｔＣＩＬ（１：１９　ｖ／ｖ）、３５ｍ１２．３０分；（６）ＣＨｔＣ１２，，３５−１６ｘ１分；（７）サンプル３〜ｌ０ｍｇをニンヒドリン分析のために取った。

（８）ＤＭＦ／ＣＨｚＣ＆、（１：４　ｖ／ｖ）３５ｍｆ２中、２時間撹拌しながら、保護アミノ酸を前形成対称無水物（３当量、０．０５Ｍ）としてカップリングさせた。

（９）ＣＩ−１ｔｃ１２２．３５ｍ１２．４ｘ２分；（ｌＯ）サンプル３〜１０ｍｇを取り、ニンヒドリン分析の前に（５）および（６）を繰り返して中和した。

カップリング物はすべて、単一であった。定量的ニンヒドリン試験［もともとビーズ上のペプチド合成のために開発された、例えば、サリン（Ｓａｒｉｎ）ら、アナリティカル・バイオケミストリー（Ａｎａｌ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　）１１７．１４７（１９８１）参照」を用いる合成のモニタリングは成功しく表５）、２番目のアミノ酸カップリング（すなわちＢｏｃ　− Ｓ　ｅｒ”（Ｂ　ｚｌ）Ｇ　ｉｎ”　−ＯＣＨｔ　−Ｐ　ａｍ−シートの形成を伴うもの）についての結果を除き（理由は不明）、各カップリング段階におけるカップリング効率の数値は満足なものを示した。

表５４４３重量％ポリスチレン−グラフト化ポリエチレン上、保護ヒト副甲状腺ホルモンフラグメント（７０〜８４）固相合成の定量的ニンカフ７”！Ｉンク゛　残った７１７−な　推定Ｃ完了度　測定置換　理論置換した残基　アミ７基　％　（ｍｍｏｌ／ｇ）　（ｍｍｏｌ／ｇ）（μｍｏｌ／ｇ）８４　ＢｏｃＧｌｎＸｄ　Ｏ，０１０００，７６±０．０２　０．７８８３ＢｏｃＳｅｒ（Ｂｚｌ）　３ｇ、０　９４．０　０Ｊ５＋：０．０４　０．６９８２　ＢｏｃＬｙｓ（２ＣＩ−Ｚ）　１．６　９９．７　０．５４±０．０３　０．５７８１ＢｏｃＡｌａ　Ｏ，６９９，７０，５２±０．０３　０．５５８０　ＢｏｃＬｙｓ（２Ｃ１−Ｚ）　１．２　９９．７　０．５３±０．０２　０．４７７９　ＢｏｃＴｈｒ（Ｂｚｌ）　０．０　１００　０．４４±０．０３　０．４３７８　ＢｏｃＬｅｕ　Ｏ，４９９，９０，３９±０．０１　０．４１７７　ＢｏｃＶａｌ　Ｏ，０１０００Ｊ９±０．０３　０．４０７６　ＢｏｃＡｓｐＣＯＢｚｌ）　ｏ、ｏ　１００　０．３５±０．０１　０．３７７５　ＢｏｃＶａｌ　Ｏ，２９９，９０，３１±０．０２　０．３５７４　ＢｏｃＡｓｐ（ＯＢｚｌ）　０．７　９９．８　０ＪＩ±０．０２　０．３３７３　ＢｏｃＡｌａ　Ｏ，０１０００，２９±０．０１　０．３３７２　ＢｏｃＬｙｓ（２Ｃ１−Ｚ）　１．１　９９．６　０．３０±０．０２　０．３０７１　ＢｏｃＡｓｐ（ＯＢｚｌ）　ＩＪ　９９．５　０．２８±０．０２　０．２８７０　ＢｏｃＡｌａ　Ｏ，０１，０００，２３±０．０１　０．２７ａ　各サイクルにおけるカップリングおよび脱保護後の２〜４回のニンヒドリン分析に基づく、ペプチドシートｍｍｏｌ／ｇとして表した平均値。

ｂ　どの残基も再カップリングはしなかったが、Ｂｏａ　−５ｅｒ（Ｂｚｌ）はカップリング後、塩化メチレン中、Ｎ−アシルイミダゾールを用いて残ったフリーのアミノ基を完全にアセチル化した。

ｃ　Ｂｏａ−保護残基のカップリング後の理論的置換と関連づけてこれらの推定値を計算した。前残基の不完全カップリングについての修正は包含しない。

ｄ　Ｘ＝−ＯＣＨ，−Ｃ，Ｈ，−ＣＨｌ−Ｃ００Ｈ（ｂ）合成ｈＰＴＨ−（８０〜８４）の開裂、精製および同定。

Ｈ−Ｌｙｓ（Ｃ１ｚ）ＡｌａＬｙｓ（Ｃ１ｚ）Ｓｅｔ（Ｂｚｌ）ＧｌｎＯＣＨｔ −Ｐａａ＋　−シート　９０ｍｇを、無水ＨＦ／アニソール（９：１ｖ／ｖ）５ＩＩＩＩ２と０℃で１時間処理し、同時に側鎖保護基を脱保護し、シートからペプチドを開裂させた。エーテルで抽出し、アニソールやアルキル化アニソールのような有機化合物を除去し、ついで１０％酢酸水溶液で抽出した。凍結乾燥し高純度の粗生成物２４．０ｍｇを得た［図２（Ａ）のＨＰＬＣクロマトグラム参照コ。

該粗生成物をプレパラティブＣＩ８カラム（３００ｘ　１９ｍｍ）上、２段階で精製した。ＴＦＡを包含する緩衝液を減圧下留去し、該生成物を水中に再溶解した。該溶液を濾過し、凍結乾燥しＨ−ＬｙｓＡｌａＬｙｓｓｅｒＧｌｎ−ＯＨ１７，８ｍｇを得、アミノ酸分析（表６）およびＦＡＢＭＳ分子量測定（表７）により確認した。

定量的アミノ酸分析に基づき、全合成収率は約８４％、純粋ペプチドの収率は約６９％であった。

（ｃ）合成ｈＰＴＨ−（７５〜８４）の開裂、精製および同定。

Ｈ−Ｖ　ａｌＡｓｐ（ＯＢ　ｚｌ）Ｖ　ａｌ　Ｌ　ｅｕＴｈｒ（Ｂ　ｚｌ）Ｌ　ｙｓ（Ｃ１ｚ）Ａ　ｌａＬ　ｙｓ（Ｃ１ｚ）Ｓｅｔ（Ｂｚｌ）Ｇｉｎ−ＯＣＨ＊ −ＰａＩｌ−シート　９３ｍｇをｈＰＴＨ−（８０〜８４）と同様に処理し、粗生成物３６．６ｍｇを得［図２（Ｂ）のＨＰＬＣクロマトグラムを参照］、最終的に純粋ペプチド２７゜２ｍｇを得、アミノ酸分析（表６）および分子量測定（表７）により同定した。定量的アミノ酸分析に基づき、全合成収率は約８５％、純粋ペプチドの収率は約６９％であった。

（ｄ）合成ｈ−ＰＴＨ−（７０〜８４）の開裂、精製および同定。

（ｂ）および（ｃ）と同様にして、ｈＰＴＨ−（７０〜８４）フラグメントをペプチドシート９６ｍｇから遊離させた［図２（Ｃ）のＨＰＬＣクロマトグラムを参照］。全合成収率は約８３％、純粋ペプチドの収量は２６ｍｇ（約６３％）であった。該純粋ペプチドは、アミノ酸分析（表６）および分子量測定（表７）により同定した。

表６精製した合成ｈＰＴＨ化合物のアミノ酸組成ｈ−ＰＴＨ−（７０〜８４）　ｈ− ＰＴＨ−（７５〜８４）　ｈ−ＰＴＨ−（８０〜８４）Ａｓｐ　２．９４（３）　１．０１（１）Ｔｈｒ　ｂ　Ｏ，９９（１）　０．９５（１）Ｓｅｒ　ｂ　１．０５（１）　０．８１（１）　０．９４（１）Ｇｌｕ　１．３１（１）　１．０３（１）　１．０７（１）Ａｌａ　３．００（３）　１．００（１）　１．００（１）Ｖａｌ　２．００（２）　２．００（２）Ｌｅｕ　１．０３（１）　１．００（ＤＬｙｓ　３．０ｇ（３）　１．９８（２）　１．８９（２）加水分解は、封かんした空のチューブ中、１１０℃、２０時間、０．０５％フェノールを自存する５、７Ｍ　ＨＣｌ２により行った。

蛍光検出（３３８／４５０ｎｍ）を用いるＨＰＬＣによる分析、ついで０−フタルジアルデヒド誘導剤と処理（ポスト−カラム）。

ａ　括弧内の数値は理論値である。

ｂ　ＴｈｒおよびＳｅｔは、加水分解中の損失について修正していない。

表７ｈ−ＰＴＨ（８０〜８４）　５６０．３　５６０．３ｈ−ＰＴＨ（７５〜８４）　１０８８　１０８８ｈ−ＰＴＨ（７０〜８４）　１５８８　１５８ｇ四重極質量分析計により測定した。ｍ／ｚの計算値はＣ・１２．０００ｕおよびＨ＝１．００８Ｕである。

実施例９多重ベブチドアナローグのラピッドパラレル合成（ａ）シートのラベリングアミノメチル化した２８５％ポリスチレン−グラフト化ポリエチレンシート（０、６ｍｍｏ１２Ｎ　Ｈ＝／　ｇシート）を１３の分解小片（多片：ｌ。

５　ｘ　３ｃｍ、厚さ約５０μｍ１約４Ｏｎ＋ｇ）に切り、それぞれグラファイト製インクでラベルした。−片のポリエチレンフィルムをそれぞれラベルした表面の最上面に置き、熱電気封かん器を用いてグラフトシート中に溶融させた。最後に、該シートを５０％Ｔ　Ｆ　Ａ　／　ＣＨｔＣＩ２２中、２０分間振盪させ、すべてのラベルがうまくシールされているかを調べた。

（ｂ）ラベルシート上のメリチン−（７〜２１）および１２のアナローブの同時合成。

保護メリチンー（７〜２１）、すなわち、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＩＺ）−Ｖａｌ− Ｌｅｕ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｐｒ。

−Ａｌａ−Ｌｅｕ　−１１ｅ　−５ｅｔ（Ｂｚｌ）−Ｔｒｐ（ＣＨＯ）　−１１ｅ−Ｌｙｓ（Ｃ１Ｚ）−Ｐａｗ−シート、および１２位および１４位の置換により誘導した１２のアナローブ（遊離ペプチドの配列を図３に示す）を、ラベルシート上、それぞれ逐次的に合体させた。同一のアミノ酸の脱保護、中和、洗浄およびカップリングの共通の段階は、単一の反応容器中で行い、一方、異なるアミノ酸のカップリングは、別々の容器中で行った。

標準的な固相法を用い、３０％Ｄ　Ｍ　Ｆ　／　ＣＨｔ　ＣＱ　を中、ＨＯＢｔエステルとしてダブルカップリングさせたＢｏｃ−ＧｉｎおよびＢｏｃ−Ａｓｎ、２０％ＤＭＦ／ＣＨｔＣｆｆｆ中、対称酸無水物としてダブルカップリングさせたＢｏａ−Ｌｅｕ”からＧ　Ｉｎ”を除くすべての残基については、ダブルＤＣＣカップリング（３０％Ｄ　Ｍ　Ｆ　／　ＣＨｔ　Ｃ１２を中、３゜５当量、０．０５Ｍ）を用いた。

Ｎ−末端Ｂｏａ基の除去に続き、低／高ＨＦ法（タム（Ｔａｍ）ら、ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・ケミカル・ソシエテイー（Ｊ、Ａｍ。

Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　）、１０５．６４４２（１９８３））により、シートからのペプチドの脱保護および遊離を行った。全合成収率的７０％にて、１５残基遊離ペプチドを得た。図４は、１３の未精製ペプチドのＨＰＬＣクロマトグラムを示す。ペプチドはすべて、セミプレパラティブＣＩｅカラム上、１〜２段階で行った。例えば、１　ｃ＋ｎ’（２３。

２　ｍｇ）の完全保護ペプチド−シートから、純粋メリチン（７〜２１）３．２ｍｇを得た。ペプチドの同一性は、アミノ酸分析（表８）および分子量測定（表９）により確認した表８アミノ酸へ°７°チド１　へ０ブチド２　へ°ブチド３　へ°フ０チド４　へ°フ゛チド５Ｌｙｓ　１．９５（２）　１．６９（２）　１．７７（２）　２．８３（３）　１．４７（２）Ｖａｌ　Ｏ，６５（１）　０．８２（１）　０．８７（１）　０．７８（１）　０．８７（１）Ｌｅｕ　２．９７（３）　２．８５（３）　２．９４（３）　２．６７（３）　２．８６（３）Ｔｈｒ　ｂ　ＩＪ７（２）　１．８９（２）　１．９３（２）　１．７０（２）　１．８４（２）Ｇｌｙ　１．０８（１）　１．０３（１）　２．０４（２）　１．０７（１）　１．１２（１）Ｐｒｏ　０．９８（１）　０．９８（１）　−Ａｌａ　１．００（１）　１．００（１）　１．００（１）　１．００（１）　１．００（１）ｌｉｅ　１．９３（２）　１．７５（２）　１．８１（２）　１．７５（２）　１．７７（２）Ｓｅｒ　ｂ　０．９０（１）　０．９６（１）　０．９７（１）　１．００（１）　０．９８（１）Ｌｙｓ　１．８７（２）　１．７１（２）　１１３３（２）　１．９３（３）　（２）Ｍａｌ　Ｏ，８ｇ（１）　０．８１（１）　０．８８（１）　０．８７（１）　（１）Ｌｅｕ　２．９２（３）　２．９３（３）　３．９０（４）　３．０６（３）’　（３）Ｔｈｒ　ｂ　１．８７（２）　１．９０（２）　１．８８（２）　２．０６（２）　（２）Ｇｌｙ　１．０９（１）　１．０８（１）　１．０５（１）　１．２６（１）　（１）Ａｌａ　１．００（１）　１．００（Ｄ　１．００（１）　１．００（１）　（１）ｌｉｅ　１．８２（２）　１．８０（２）　１．８３（２）　１．９５（２）　（２）Ｓｅｒｂ　０．９５（１）　１．８８（２）　０．９５（１）　１．０１（１）　（１）丁ｒｐ　ＣＡｓｐ　１．０４（１）Ｐｈｅ　Ｏ，９１（１）　（１）Ｌｙｓ　１．７５（２）　１．６６（２）　２．６２（３）Ｖａｌ　１．７５（２）　０．８１（１）　Ｏ，１ｌｆ９（１）Ｌｅｕ　２．７３（３）　３．７０（４）　３．７１（４）Ｔｈｒ　ｂ　１．９２（２）　１．６２（２）　１．９３（２）Ｇｌｙ　１．０５（１）Ａｌａ　１．００（１）　１．００（１）　１．００（１）１１ｅ　１．７３（２）　１．７３（２）　１．８０（２）Ｓｅｒ　ｂ　０．９７（１）　１．００（１）　０．９５（１）該ペプチドは、封かん非真空管中、１１０℃、１８時間、５．７ＭＨＣｌ２で加水分解した。ただし、ペプチド１は真空管中、２４時間加水分解した。濾過後、加水分解物をベックマン６３００アミノ酸分析器で分析した。

ａ　括弧内の数値は理論値である。

ｂ　ＴｈｒおよびＳｅｔの数値は加水分解中の損失について修正しなかった。

ｃ　トリプトファンは測定していない。

°ｄ　ペプチドアナローブＮｏ、１０は分析しなかった。

表９１　１６４０．５　１６４０．０　＋０．５２　１６４０．１　１６４０．０　＋０．１３　１６００゜０　１５９９．９　＋０．１Ａ２１５ｎｍ補正書の翻訳文提出書（特許法第１８４条の８）邊平成３年２月２８日

Claims

【特許請求の範囲】

１．Ａ）ポリスチレン鎖でグラフト化したポリマー基質を与える工程（ここに、前記ポリスチレン鎖は、さらに所望により、合成全体にわたる条件下にて反応性でない置換基を有し、該ポリマーにグラフト化した実質的にすべてのポリスチレン領の推定分子量が、所望置換基を含めずに、少なくとも２００，０００であり、ポリスチレン−グラフト化ポリマー基質のポリスチレン鎖の少なくとも一部分に、該ポリスチレン部分と、少なくともＮ末端が保護され所望によりカルボキシル末端の誘導されたアミノ酸との間の、固定結合形成を容易にする化学的官能基が導入されている）、Ｂ）Ｎ端が保護され所望によりカルボキシル末端の誘導されたアミノ酸を、官能基導入したポリスチレン部分にカップリングさせる工程（ここに、前記官能基およびＮ端が保護され所望によりカルボキシル末端の誘導された前記アミノ酸は、合成したペプチドおよびタンパク質を実質的に崩壊させることなく、形成した固定結合をその後開裂するのに互いに適するものである）、Ｃ）カップリングしＮが保護されたアミノ酸のＮ−保護アミノ基または置換アミノ基からＮ−保護基を除去し、カップリングしたアミノ酸のアミノ基または置換アミノ基と、新しく加えるアミノ酸のカルボキシル基または活性化カルボキシル基との反応を容易にする工程、Ｄ）最後にカップリングしたアミノ酸の前記アミノ基または置換アミノ基を、新しく加えるＮ−保護アミノ酸のカルボキシル基および活性化カルボキシル基と反応させ、２つのアミノ酸部分間にペプチド結合を形成させる工程、Ｅ）最後にカップリングしたＮ−保護アミノ酸のＮ−保護アミノ基または置換アミノ基からＮ−保護基を所望により除去し、後のアミノ酸のアミノ基および置換アミノ基と、新しく加えるＮ−保護アミノ酸のカルボキシル基または活性化カルボキシル基との反応を容易する工程、Ｆ）工程Ｅ）を行った場合において、工程Ｄ）およびＥ）を所望の回数繰り返す工程、Ｇ）所望により、合成したペプチドまたはタンパク質鎖のアミノ酸部分上に残存しうる、数個またはすべての保護基を除去する工程、Ｈ）所望により、官能基導入したポリスチレン部分に合成ペプチドまたはタンパク質鎖を固定している結合を開裂させる工程、およびＩ）所望により、合成ペプチドまたはタンパク質鎖から更に残る所望でない基のすべてを除去する工程、からなることを特徴とするペプチドまたはタンパク質の合成方法。
２．ポリマーにグラフト化された、実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量が、所望置換基を含めずに３００，０００〜１，６００，０００の範囲にある請求の範囲第１項の方法。
３．ポリマーにグラフト化された、実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量が、所望置換基を含めずに４００，０００〜１，４００，０００の範囲にある請求の範囲第２項の方法。
４．ポリマーにグラフト化された、実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量が、所望置換基を含めずに６００，０００〜１，２００，０００の範囲にある請求の範囲第３項の方法。
５．ポリマーにグラフト化された、実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量が、所望置換基を含めずに７００，０００〜１，０００，０００の範囲にある請求の範囲第４項の方法。
６．ポリスチレン−グラフト化ポリマー基質がポリマー基質から、厚さ２５〜１００μｍの範囲のシートまたはフィルムの形態で製造される請求の範囲第１項の方法。
７．ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が４０〜７００重量％の範囲である請求の範囲第６項の方法。
８．ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が１００〜６００重量％の範囲である請求の範囲第７項の方法。
９．ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が２００〜６００重量％の範囲である請求の範囲第８項の方法。
１０．ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が４００〜６００重量％の範囲である請求の範囲第６項の方法。
１１．前記ポリスチレーグラフト化ポリマー基質が、有機溶媒中の後記モノマーの溶液中に存在する、ポリマー基質および所望により置換したスチレンモノマー間の実質的なラジカル開始反応により形成する請求の範囲第１項の方法。
１２．所望により置換したスチレンモノマーを溶解させるのに使用する有機溶媒がアルコールである請求の範囲第１１項の方法。
１３．該アルコールがＣ１−４脂肪族アルコールである請求の範囲第１２項の方法。
１４．該脂肪族アルコールがメタノールである請求の範囲第１３項の方法。
１５．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が、１≦％ｖ／ｖ≦９５である請求の範囲第１１項の方法。
１６．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が、１０≦％ｖ／ｖ≦９０である請求の範囲第１５項の方法。
１７．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が、２０≦％ｖ／ｖ≦８０である請求の範囲第１６項の方法。
１８．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が、２５≦％ｖ／ｖ≦５０である請求の範囲第１７項の方法。
１９．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が、２５≦％ｖ／ｖ≦３５である請求の範囲第１８項の方法。
２０．ポリスチレン−グラフト化ポリマー基質がシートまたはフィルムの形態である、請求の範囲第１項の方法。
２１．該シートまたはフィルムの厚さが１０〜１０．０００μｍである請求の範囲第２０項の方法。
２２．該シートまたはフィルムの厚さが２５〜１０００μｍである請求の範囲第２１項の方法。
２３．該シートまたはフィルムの厚さが２５〜２００μｍである請求の範囲第２２項の方法。
２４．少なくともＮ末端が保護され、所望により誘導体化されたアミノ酸と、官能基導入されたポリスチレン部分との間の固定結合を促進する化学官能基が、クロロ−、プロモ−およびヨード−置換アルキル、アミノ−置換アルキル、アミノ−およびアリール−置換アルキル、アミノ−およびアルキルアリール−置換アルキル、ヒドロキシ−置換アルキル、からなる群の基またはそれらの基から誘導されたものであり、該官能基が前記の基のどれかから誘導されたものである場合は、該官能基は、合成ペプチドまたはタンパク質鎖を、該鎖の実質的崩壊なしにポリスチレン部分から開裂させるスペーサー基を有する官能基である請求の範囲第１項の方法。
２５．クロロ−置換アルキルがクロロメチルであり、アミノ−置換アルキルがアミノメチルであり、アミノ−およびアルキル−置換アリールがα−アミノベンジルであり、アミノ−およびアルキルアリールー置換アルキルが、α−アミノ−２ −、α−アミノ−３−およびα−アミノ−４−メチルベンジルを包含する基から選択され、ヒドロキシ−置換アルキルがヒドロキシメチルである請求の範囲第２４項の方法。
２６．ポリマーがポリオレフィンである請求の範囲第１項〜第２５項のすべての方法。
２７．ポリオレフィンがポリエチレンである請求の範囲第１項〜第２５項のすべての方法。
２８．Ａ）ポリスチレン鎖でグラフト化したポリマー基質を与える工程（ここに、前記ポリスチレン鎖は、さらに所望により、合成全体にわたる条件下にて反応性でない置換基を有し、前記ポリスチレン−グラフト化ポリマー基質は、ポリマー基質と、有機溶媒中の前記モノマー溶液中に存在する所望により置換したスチレンモノマーとの間の実質的なラジカル開始反応により形成され、ポリスチレン −グラフト化ポリマー基質のポリスチレン鎖の少なくとも−部分に、該ポリスチレン部分と、少なくともＮ末端が保護され所望によりカルボキシル末端の誘導されたアミノ酸との間の、固定結合形成を容易にする化学官能基が導入されている）、Ｂ）Ｎ端が保護され所望によりカルボキシル末端の誘導されたアミノ酸を、官能基導入したポリスチレン部分にカップリングさせる工程（ここに、前記官能基およびＮ端が保護され所望によりカルボキシル末端の誘導された前記アミノ酸は、合成したペプチドおよびタンパク質を実質的に崩壊させることなく、形成した固定結合をその後開製するのに互いに適するものである）、Ｃ）カップリングしＮが保護されたアミノ酸のＮ−保護アミノ基または置換アミノ基からＮ−保護基を除去し、カップリングしたアミノ酸のアミノ基または置換アミノ基と、新しく加えるアミノ酸のカルボキシル基または活性化カルボキシル基との反応を容易にする工程、Ｄ）最後にカップリングしたアミノ酸の前記アミノ基または置換アミノ基を、新しく加えるＮ−保護アミノ酸のカルボキシル基および活性化カルボキシル基と反応させ、２つのアミノ酸部分間にペプチド結合を形成させる工程、Ｅ）最後にカップリングしたＮ−保護アミノ酸のＮ−保護アミノ基または置換アミノ基からＮ−保護基を所望により除去し、後のアミノ酸のアミノ基および置換アミノ基と、新しく加えるＮ−保護アミノ酸のカルボキシル基または活性化カルボキシル基との反応を容易する工程、Ｆ）工程Ｅ）を行った場合において、工程Ｄ）およびＥ）を所望の回数繰り返す工程、Ｇ）所望により、合成したペプチドまたはタンパク質鎖のアミノ酸部分上に残存しうる、数個またはすべての保護基を除去する工程、Ｈ）所望により、官能基導入したポリスチレン部分に合成ペプチドまたはタンパク質鎖を固定している結合を開裂させる工程、およびＩ）所望により、合成ペプチドまたはタンパク質鎖から更に残る所望でない基のすべてを除去する工程、からなることを特徴とする、ペプチドまたはタンパク質の合成方法。
２９．所望により置換したスチレンモノマーを溶解させるのに使用する有機溶媒がアルコールである請求の範囲第２８項の方法。
３０．該アルコールがＣ１−４脂肪族アルコールである請求の範囲第２９項の方法。
３１．該脂肪族アルコールがメタノールである請求の範囲第３０項の方法。
３２．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が１≦％ｖ／ｖ≦９５である請求の範囲第２８項の方法。
３３．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が１０≦％ｖ／ｖ≦９０である請求の範囲第３２項の方法。
３４．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が２０≦％ｖ／ｖ≦８０である請求の範囲第３３項の方法。
３５．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が２５≦％ｖ／ｖ≦５０である請求の範囲第３４項の方法。
３６．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が２５≦％ｖ／ｖ≦３５である請求の範囲第３５項の方法。
３７．ポリスチレン−グラフト化ポリマー基質がポリマー基質から厚さ２５〜１００μｍの範囲のシートまたはフィルムの形態で製造され、ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が５〜８００重量％の範囲である請求の範囲第２８項の方法。
３８．ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が４０〜７００重量％の範囲である請求の範囲第３７項の方法。
３９．ポリスチレン−グラフト化ポリマー基質がシートまたはフィルムの形態である請求の範囲第２８項の方法。
４０．該シートまたはフィルムの厚さが１０〜１０，０００μｍである請求の範囲第３９項の方法。
４１．該シートまたはフィルムの厚さが２５〜１０００μｍである請求の範囲第４０項の方法。
４２．該シートまたはフィルムの厚さが２５〜２００μｍである請求の範囲第４１項の方法。
４３．少なくともＮ末端が保護され、所望により誘導されたアミノ酸と、官能基導入されたポリスチレン部分との間の固定結合を促進する化学官能基が、クロロ−、プロモ−およびヨード−置換アルキル、アミノ−置換アルキル、アミノ−およびアリール−置換アルキル、アミノ−およびアルキルアリール−置換アルキル、ヒドロキシ−置換アルキル、からなる群の基のものまたはそれらの基から誘導されたものであり、該官能基が前記の基のどれかから誘導されたものである場合は、該官能基は、合成ペプチドまたはタンパク質鎖を、該鎖の実質的崩壊なしにポリスチレン部分から開裂させるスペーサー基を有する官能基である請求の範囲第２８項の方法。
４４．クロロ−置換アルキルがクロロメチルであり、アミノ−置換アルキルがアミノメチルであり、アミノ−およびアルキル−置換アリールがα−アミノベンジルであり、アミノ−およびアルキルアリールー置換アルキルが、α−アミノ−２ −、α−アミノ−３−およびα−アミノ−４−メチルベンジルを包含する基から選択され、ヒドロキシ−置換アルキルがヒドロキシメチルである請求の範囲第４３項の方法。
４５．ポリマーがポリオレフィンである請求の範囲第２８項〜第４４項のいずれかの方法。
４６．ポリオレフィンがポリエチレンである請求の範囲第２８項〜第４４項のいずれかの方法。
４７．Ａ）複数の実質的に同−の、ポリスチレン鎖とグラフト化したポリマー基質を提供し（ここに、前記ポリスチレン鎖は、該合成全体にわたる条件において反応性でない置換基を、所望によりさらに有していてもよく、各ポリスチレン− グラフト化ポリマー基質のポリスチレン鎖の少なくとも１部分が、ポリスチレン部分と、少なくともＮが保護され所望によりカルボキシル末端が誘導されたアミノ酸との間の固定のための結合形成を容易にする化学官能基が導入されている）、Ｂ）所望により、前記の複数のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質の１部分を、それぞれ１個またはそれ以上の前記複数の物を含有する２個またはそれ以上のセットに物理的に区分し、Ｎ−保護および所望によりカルボキシル末端を誘導したアミノ酸を、前記複数の物の各部分の官能基化されたポリスチレン部分にカップリングさせ、または、可能であれば、用いたＮ−保護および所望によりカルボキシル末端の誘導されたアミノ酸の各セットの各部分が、該複数のすべての部分にとって同−でありまたは、可能であれば、１つのセットの全部分がそうであり、さらに、可能であれば、以下から選ばれるもののうちの１つに−致し、（ｉ）すべてのセットにとり同−である、（ｉｉ）前記セットが２以上の時、少なくとも２つのセットにとり同一である、（ｉｉｉ）各セットにとり異なる、前記官能基および前記Ｎ−保護および所望によりカルボキシル末端の誘導されたアミノ酸がお互いに適合し、合成するペプチドまたはタンパク質鎖を実質的に分解させることなく、形成した固定結合はその後開裂でき、Ｃ）前記複数の各部分または、可能であれば、前記各セットの各部分を処理し、カップリングした、Ｎ−保護アミノ酸のＮ−保護アミノ基または置換アミノ基からＮ−保護基を除去し、カップリングしたアミノ酸のアミノ基および置換アミノ基が、別のＮ−保護アミノ酸のカルボキシル基または活性カルボキシル基と反応するのを容易にし、Ｄ）前記複数の各部分の、可能であれば各セットの各部分の、官能基化ポリスチレン部分に最後にカップリングしたアミノ酸の前記アミノ基または置換アミノ基を、別のＮ−保護アミノ酸のカルボキシル基または活性カルボキシル基と反応させて、前記アミノ基または置換アミノ基、および前記カルボキシル基または活性カルボキシル基の間にペプチド結合を形成させ、前記の別のＮ−保護アミノ酸は、該複数の全部分または可能でれば１つのセットの全部分にとり同一であることおよび、さらに、可能であれば、ステップＢ）との関連で前記３つの選択枝の１つに一致させ、Ｅ）所望により、前記複数の各部分の、または可能であれば前記各セットの各部分を処理して、最後にカップリングしたＮ−保護アミノ酸のＮ− 保護アミノ基または置換アミノ基からＮ−保護基を除き、後のアミノ酸のアミノ基または置換アミノ基が、別のＮ−保護アミノ酸のカルボキシル基または活性カルボキシル基と反応するのを容易にし、Ｆ）工程Ｅ）を行った場合に工程Ｄ）およびＥ）を所望の回数繰り返し、Ｇ）所望により、前記複数の各部分の、または可能であれば前記各セットの各部分を処理し、合成ペプチドまたはタンパク質鎖のアミノ酸部分上に残っているかもしれない、幾つかのまたはすべての保護基を除去し、Ｈ）所望により、前記複数の各部分の、または可能であれば前記各セットの各部分を処理し、前記複数の各部分の、または可能であれば前記各セットの各部分の官能基化ポリスチレン部分に、合成されたペプチドまたはタンパク質鎖を固定している結合を開裂させ、および、Ｉ）所望により、さらに、合成したペプチドまたはタンパク質鎖から、所望でないあらゆる基を除去すること、からなることを特徴とする、２個またはそれ以上のペプチドまたはタンパク質を合成する時、所望の数のペプチドおよびタンパク質を平行的に、および実質的に同時に合成できる、１またはそれ以上のペプチドまたはタンパク質の合成方法。
４８．ポリマーにグラフト化された、実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量が、所望置換基を含めずに少なくとも２００，０００である請求の範囲第４７項の方法。
４９．ポリマーにグラフト化された、実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量が、所望置換基を含めずに３００，０００〜１，６００，０００の範囲にある請求の範囲第４８項の方法。
５０．ポリマーにグラフト化された、実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量が、所望置換基を含めずに４００，０００〜１，４００，０００の範囲にある請求の範囲第４９項の方法。
５１．ポリマーにグラフト化された、実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量が、所望置換基を含めずに６００，０００〜１，２００，０００の範囲にある請求の範囲第５０項の方法。
５２．ポリマーにグラフト化された、実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量が、所望置換基を含めずに７００，０００〜１，０００，０００の範囲にある請求の範囲第５１項の方法。
５３．ポリスチレン−グラフト化ポリマー基質がポリマー基質から、厚さ２５〜１００μｍの範囲のシートまたはフィルムの形態で製造され、ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が５〜８００重量％の範囲である請求の範囲第４７項の方法。
５４．ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が４０〜７００重量％の範囲である請求の範囲第５３項の方法。
５５．ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が１００〜６００重量％の範囲である請求の範囲第５４項の方法。
５６．ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が２００〜６００重量％の範囲である請求の範囲第５５項の方法。
５７．ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が４００〜６００重量％の範囲である請求の範囲第５６項の方法。
５８．前記ポリスチレーグラフト化ポリマー基質が、有機溶媒中の後記モノマーの溶液中に存在する、ポリマー基質および所望により置換したスチレンモノマー間の実質的なラジカル開始反応により形成する請求の範囲第５７項の方法。
５９．所望により置換したスチレンモノマーを溶解させるのに使用する有機溶媒がアルコールである請求の範囲第５８項の方法。
６０．該アルコールがＣ１−４脂肪族アルコールである請求の範囲第５９項の方法。
６１．該脂肪族アルコールがメタノールである請求の範囲第６０項の方法。
６２．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が、１≦％ｖ／ｖ≦９５である請求の範囲第６１項の方法。
６３．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が、１０≦％ｖ／ｖ≦９０である請求の範囲第６２項の方法。
６４．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が、２０≦％ｖ／ｖ≦８０である請求の範囲第６３項の方法。
６５．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が、２５≦％ｖ／ｖ≦５０である請求の範囲第６４項の方法。
６６．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が、２５≦％ｖ／ｖ≦３５である請求の範囲第６５項の方法。
６７．ポリスチレン−グラフト化ポリマー基質がシートまたはフィルムの形態である請求の範囲第４７項の方法。
６８．該シートまたはフィルムの厚さが１０〜１０，０００μｍである請求の範囲第６７項の方法。
６９．該シートまたはフィルムの厚さが２５〜１０００μｍである請求の範囲第６８項の方法。
７０．該シートまたはフィルムの厚さが２５〜２００μｍである請求の範囲第６９項の方法。
７１．少なくともＮ末端が保護され、所望により誘導体化されたアミノ酸と、官能基導入されたポリスチレン部分との間の固定結合を促進する化学官能基が、クロロ−、プロモ−およびヨード−置換アルキル、アミノ−置換アルキル、アミノ−およびアリール−置換アルキル、アミノ−およびアルキルアリール−置換アルキル、ヒドロキシ−置換アルキル、からなる群の基またはそれらの基から誘導されたものであり、該官能基が前記の基のどれかから誘導されたものである場合は、該官能基は、合成ペプチドまたはタンパク質鎖を、該鎖の実質的崩壊なしでポリスチレン部分から開裂させるスペーサー基を有する官能基である請求の範囲第４７項の方法。
７２．クロロ−置換アルキルがクロロメチルであり、アミノ−置換アルキルがアミノメチルであり、アミノ−およびアルキル−置換アリールがα−アミノベンジルであり、アミノ−およびアルキルアリールー置換アルキルが、α−アミノ−２ −、α−アミノ−３−およびα−アミノ−４−メチルベンジルを包含する基から選択され、ヒドロキシ−置換アルキルがヒドロキシメチルである請求の範囲第７１項の方法。
７３．ポリマーがポリオレフィンである請求の範囲第４７項〜第７２項のすべての方法。
７４．ポリオレフィンがポリエチレンである請求の範囲第４７項〜第７２項のすべての方法。
７５．前記ポリスチレン鎖が、さらに所望により、合成全体にわたる条件下にて反応性でない置換基を有し、ポリマーにグラフト化した実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量が、所望による置換基を含まずに少なくとも２００，０００であり、ポリスチレン部分と、少なくともＮ末端が保護され所望によりカルボキシル末端の誘導されたアミノ酸との間の、固定結合を促進する化学的官能基が、ポリスチレン−グラフト化ポリマー基質のポリスチレン鎖の少なくとも−部に導入されている、ポリスチレン鎖でグラフト化したポリマー基質。
７６．ポリマーにグラフト化された、実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量が、所望置換基を含めずに３００，０００〜１，６００，０００の範囲にある請求の範囲第７５項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
７７．ポリマーにグラフト化された、実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量が、所望置換基を含めずに４００，０００〜１，４００，０００の範囲にある請求の範囲第７６項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
７８．ポリマーにグラフト化された、実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量が、所望置換基を含めずに６００，０００〜１，２００，０００の範囲にある請求の範囲第７７項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
７９．ポリマーにグラフト化された、実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量が、所望置換基を含めずに７００，０００〜１，０００，０００の範囲にある請求の範囲第７８項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
８０．ポリマー基質から、厚さ２５〜１００μｍの範囲のシートまたはフィルムの形態で製造され、ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が５〜８００重重％の範囲である請求の範囲第７５項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
８１．ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が４０〜７００重量％の範囲である請求の範囲第８０項の方法。
８２．ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が１００〜６００重量％の範囲である請求の範囲第８１項の方法。
８３．ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が２００〜６００重量％の範囲である請求の範囲第８２項の方法。
８４．ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が４００〜６００重量％の範囲である請求の範囲第８３項の方法。
８５．前記ポリスチレーグラフト化ポリマー基質が、有機溶媒中の後記モノマーの溶液中に存在する、ポリマー基質および所望により置換したスチレンモノマー間の実質的なラジカル開始反応により形成する請求の範囲第７５項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
８６．所望により置換したスチレンモノマーを溶解させるのに使用する有機溶媒がアルコールである請求の範囲第８５項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
８７．該アルコールがＣ１−４脂肪族アルコールである請求の範囲第８６項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
８８．該脂肪族アルコールがメタノールである請求の範囲第８７項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
８９．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が、１≦％ｖ／ｖ≦９５である請求の範囲第８５項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
９０．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が、１０≦％ｖ／ｖ≦９０である請求の範囲第８９項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
９１．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が、２０≦％ｖ／ｖ≦８０である請求の範囲第９０項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
９２．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が、２５≦％ｖ／ｖ≦５０である請求の範囲第９１項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
９３．使用溶液中の所望により置換したスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が、２５≦％ｖ／ｖ≦３５である請求の範囲第９２項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
９４．ポリスチレン−グラフト化ポリマー基質がシートまたはフィルムの形態である請求の範囲第７５項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
９５．該シートまたはフィルムの厚さが１０〜１０，０００μｍである請求の範囲第９４項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
９６．該シートまたはフィルムの厚さが２５〜１０００μｍである請求の範囲第９５項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
９７．該シートまたはフィルムの厚さが２５〜２００μｍである、請求の範囲第９６項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
９８．少なくともＮ末端が保護され、所望により誘導体化されたアミノ酸と、官能基導入されたポリスチレン部分との間の固定結合を促進する化学官能基が、クロロ−、プロモ−およびヨード−置換アルキル、アミノ−置換アルキル、アミノ−およびアリール−置換アルキル、アミノ−およびアルキルアリール−置換アルキル、ヒドロキシ−置換アルキル、からなる群の基またはそれらの基から誘導されたものであり、該官能基が前記の基のどれかから誘導されたものである場合は、該官能基は、合成ペプチドまたはタンパク質鎖を、該鎖の実質的崩壊なしでポリスチレン部分から開裂させるスペーサー基を有する官能基である請求の範囲第７５項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
９９．該官能基がアミノ置換アルキル、アミノ−およびアリールー置換アルキル、およびアミノ−およびアルキルアリール−置換アルキルから選択されるアミノ基含有部分から誘導されており、該官能基が、４−（ブロモメチル）フェニル酢酸のような４−（ハロアルキル）アリール−低級アルカノン酸、Ｂｏｃ−アミノアシル−４−（オキシメチル）フェニル酢酸のようなＢｏｃ−アミノアシル−４ −（オキシメチル）アリール−低級アルカノン酸、Ｎ−Ｂｏｏ−ｐ−グルタロイルベンズヒドリルアミンのようなＮ−Ｂｏｃ−ｐ−アシルベンズヒドリルアミン、Ｎ−Ｂｏｃ−４′−メチル−ｐ−グルタイリルベンズヒドリルアミンのようなＮ−Ｂｏｃ−４′−低級アルコキシ−ｐ−アシルベンズヒドリルアミンおよび４ −ヒドロキシメチルフェノキシ酢酸のような４−ヒドロキシメチルフェノキシ− 低級アルカノン酸を包含する基から誘導したスペーサー基からなることを特徴とする、請求の範囲第９８項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
１００．該化学官能基が反応して、少なくともＮが保護されたアミノ酸と固定結合を形成する請求の範囲第９８項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
１０１．クロロ−置換アルキルがクロロメチルであり、アミノ−置換アルキルがアミノメチルであり、アミノ−およびアルキル−置換アリールがα−アミノベンジルであり、アミノ−およびアルキルアリール−置換アルキルが、α−アミノ− ２−、α−アミノ−３−およびα−アミノ−４−メチルベンジルを包含する基から選択され、ヒドロキシ−置換アルキルがヒドロキシメチルである請求の範囲第９８項のポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
１０２．ポリマーがポリオレフィンである請求の範囲第７５項〜第１０１項のすべてのポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
１０３．ポリオレフィンがポリエチレンである請求の範囲第７５項〜第１０１項のすべてのポリスチレン−グラフト化ポリマー基質。
１０４．有機溶媒中の所望により置換したスチレンモノマーの溶液中に浸したポリマー基質を、フリーラジカルの形成につながる処理に付してポリスチレン鎖をポリマー基質にグラフト化させること、およびポリスチレン部分と少なくともＮが保護され所望によりカルボキシル末端が誘導体化されているアミノ酸との間の、固定結合形成を促進する化学官能基を有するポリスチレン鎖の少なくとも１部分に官能基導入することからなることを特徴とする官能化ポリスチレン−グラフト化ポリマー基質の製造方法。
１０５．フリーラジカルの形成につながる処理がガンマ線照射である請求の範囲第１０４項の方法。
１０６．ガンマ放射線量率約１〜約１００，０００Ｇｙ／時間を使用してガンマ線照射を行う請求の範囲第１０３項の方法。
１０７．ガンマ放射線量率約２００〜約５，０００Ｇｙ／時間を使用してガンマ線照射を行う請求の範囲第１０６項の方法。
１０８．ガンマ放射線量率約３００〜約１，０００Ｇｙ／時間を使用してガンマ線照射を行う請求の範囲第１０７項の方法。
１０９．該有機溶媒がアルコールである請求の範囲第１０２項の方法。
１１０．該有機溶媒が脂肪族アルコールである請求の範囲第１０９項の方法。
１１１．該有機溶媒がＣ１−４脂肪族アルコールである請求の範囲第１０９項の方法。
１１２．該有機溶媒がメタノールである請求の範囲第１１１項の方法。
１１３．該溶液中のスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が０＜％ｖ／ｖ＜１００である請求の範囲第１０４項の方法。
１１４．該溶液中のスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が１０≦％ｖ／ｖ≦ ９０である請求の範囲第１１３項の方法。
１１５．該溶液中のスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が２０≦％ｖ／ｖ≦ ８０である請求の範囲第１１４項の方法。
１１６．該溶液中のスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が２５≦％ｖ／ｖ≦ ５０である請求の範囲第１１５項の方法。
１１７．該溶液中のスチレンの容量パーセント（％ｖ／ｖ）が２５≦％ｖ／ｖ≦ ３５である請求の範囲第１１６項の方法。
１１８．該ポリマーにグラフト化した実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量が所望による置換基を含まないで３００，０００〜１，６００，０００の範囲となるようにグラフト化させる、請求の範囲第１０４項の方法。
１１９．該ポリマーにグラフト化した実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量が、所望置換基を含めないで４００，０００〜１，４００，０００の範囲となるようにグラフト化させる請求の範囲第１１８項の方法。
１２０．該ポリマーにグラフト化した実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量が、所望置換基を含めないで６００，０００〜１，２００，０００の範囲となるようにグラフト化させる請求の範囲第１１９項の方法。
１２１．該ポリマーにグラフト化した実質的にすべてのポリスチレン鎖の推定分子量が、所望置換基を含めないで７００，０００〜１，０００，０００の範囲となるようにグラフト化させる請求の範囲第１２０項の方法。
１２２．該ポリマー基質が厚さ２５〜１００μｍの範囲のシートおよびフィルムの形態であり、ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が５〜８００重量％の範囲となるようにグラフト化を行う請求の範囲の方法。
１２３．ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が４０〜７００重量％の範囲となるようにグラフト化を行う請求の範囲第１２２項の方法。
１２４．ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が１００〜６００重量％の範囲となるようにグラフト化を行う請求の範囲第１２３項の方法。
１２５．ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が２００〜６００重量％の範囲となるようにグラフト化を行う請求の範囲第１２４項の方法。
１２６．ポリマー基質にグラフト化するポリスチレン鎖が４００〜６００重量形の範囲となるようにグラフト化を行う請求の範囲第１２５項の方法。
１２７．該ポリマー基質がシートまたはフィルムの形態である請求の範囲第１０２項の方法。
１２８．ポリマー基質の厚さが１０〜１０，０００μｍである請求の範囲第１２７項の方法。
１２９．シートまたはフィルムの厚さが２５〜１０００μｍである請求の範囲第１２８項の方法。
１３０．シートまたはフィルムの厚さが２５〜１００μｍである請求の範囲第１２９項の方法。
１３１．少なくともＮ末端が保護され、所望により誘導体化されたアミノ酸と、官能基導入されたポリスチレン部分との間の固定結合を促進する化学官能基が、クロロ−、プロモ−およびヨード−置換アルキル、アミノ−置換アルキル、アミノ−およびアリール−置換アルキル、アミノ−およびアルキルアリール−置換アルキル、ヒドロキシ−置換アルキル、からなる群の基またはそれらの基から誘導されたものであり、該官能基が前記の基のどれかから誘導されたものである場合は、該官能基は、合成ペプチドまたはタンパク質鎖を、該鎖の実質的崩壊なしでポリスチレン部分から開裂させるスペーサー基を有する官能基である請求の範囲第１０４項の方法。
１３２．該官能基がアミノ置換アルキル、アミノ−およびアリールー置換アルキル、およびアミノ−およびアルキルアリール−置換アルキルから選択されるアミノ基含有部分から誘導されており、該官能基を処理して、４−（ブロモメチル）フェニル酢酸のような４−（ハロアルキル）アリール−低級アルカノン酸、Ｂｏｃ−アミノアシル−４−（オキシメチル）フェニル酢酸のようなＢｏｃ−アミノアシル−４−（オキシメチル）アリール−低級アルカノン酸、Ｎ−Ｂｏｃ−ｐ− グルタロリルベンズヒドリルアミンのようなＮ−Ｂｏｃ−ｐ−アシルベンズヒドリルアミン、Ｎ−Ｂｏｃ−４′−メチル−ｐ−グルタロリルベンズヒドリルアミンのようなＮ−Ｂｏｃ−４′−低級アルコキシ−ｐ−アシルベンズヒドリルアミンおよび４−ヒドロキシメチルフェノキシ酢酸のような４−ヒドロキシメチルフェノキシ−低級アルカノン酸を包含する基から誘導したスペーサー基を有する官能基を得る請求の範囲第１３１項の方法。
１３３．該化学官能基が反応して、少なくともＮが保護されたアミノ酸と固定結合を形成する、請求の範囲第１３２項の方法。
１３４．クロロ−置換アルキルがクロロメチルであり、アミノ−置換アルキルがアミノメチルであり、アミノ−およびアルキル−置換アリールがα−アミノベンジルであり、アミノ−およびアルキルアリール−置換アルキルが、α−アミノ− ２−、α−アミノ−３−およびα−アミノ−４−メチルベンジルを包含する基から選択され、ヒドロキシ−置換アルキルがヒドロキシメチルである請求の範囲第１３３項の方法。
１３５．ポリマーがポリオレフィンである請求の範囲第１０４項〜第１３４項のすべての方法。
１３６．ポリオレフィンがポリエチレンである請求の範囲第１０４項〜第１３４項のすべての方法。