JPH04503671A - 新規β―メトキシアクリレート、その製造及び使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 新規β−メトキシアクリレート、その製造及び使用本発明は、新・規β−メトキ シアクリレート、その製法並びに病気治療におけるその使用に関する。

ジャーナル・オブ・アンチビオチフス（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ＾ｎＮ、ｂｉｏｔ ｉｃｓ）、３２　（１９７９）１１１３及び３６（１９８３）６６１に、並びに “セルラール・レギュレイション・アンド・マリグナント・クロース（Ｃｅｌｌ ｕｌａｒ　Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｍａｌｉｇｎａｎｔ　Ｇｒｏｗｔｈ ）　”、スブリンガー・フェアラグ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ　Ｖｅｒｌａｇ）　、ベ ルリン１９８５．１．６９−１７６頁に、一定のβ−メトキシアクリレート、つ まりストロビルリン（５ｔｒｏｂｉｌｕｒｉｎ）及びオウデマンシン（Ｏｕｄｅ ｍａｎｓｉｎ）及びそれらの誘導体が記載されている。これらの化合物は強力な 抗菌及び静細胞活性を特徴とする。

ストロビルリンＡＳＢ及びＣ並びにオウデマンンンＡ及びＢは、ストロビルリン （Ｓｔｒｏｂｉｌｕｒｕｓ）　、オウデマンシエルう（Ｏｕｄｅｍａｎｓｉｅｌ ｌａ）、キセルう（Ｘｅｒｕｌ、ａ）、シフエルロブシス（Ｃｙｐｈｅｌｌｏｐ ｓｉｓ）　、ヒドロブス（Ｈｙｄｒｏｐｕｓ）及びミセナ（Ｍｙｃｅｎａ）属か ら単離された。全化合物は、真核生物の呼吸を抑制しかつそれによって菌類及び 細胞の成長を抑制する。ストロビルリン及びオウデマンシンは、ミトコンドリア の呼吸連鎖の複合体■におけるチトクロムｂのｂｔ−中心に可逆的に結合する。

ところで、式■： ［式中Ｒ１は水素又は１０個までの炭素原子を有する飽和又は不飽和の炭化水素 基であり、これは弗素、塩素、臭素、Ｃ１−６−アルコキシ、Ｃ２−６−アルケ ノキシ又はＣ２−６−アルキノキシによって又は弗素、塩素、臭素、沃素、トリ フルオルメチル、Ｃ１−４−アルキル又はＣｌ−４−アルコキシによって場合に より置換されたフェニル−又はフェノキシ基によって置換されていてよく、Ｒ２ 及びＲ３は同−又は異なっていて、水素原子、Ｃドローアルキル基又はＣ３−７ −シクロアルキル基又はＲ２及びＲ３が一緒になって０２−８−アルキレン基を 表わす］のβ−メトキシアクリレートがより良好な作用を有することが判明した 。

式■の化合物は、ジオキソラン環（Ｒ１＝０　１個だけで）中に２個のキラリテ ィ中心を有する。従ってこれは、種々のエナンチオマー及び／又はジアステレオ マー立体配置で生成してよく、これは常法で分離及び単離することができる。立 体配置異性体の分離は、式■の中間体（後記参照）の段階で有利に行なうことも できる。本発明による化合物の使用のためには立体配置異性体の分離は必要では ない。

更に、β−メトキシアクリレート基はＥ−又は２−立体配置で存在しうる。Ｅ− 立体配置を有する式Ｉの化合物が有利である。

本発明による式■の化合物は、式■： ［式中Ｒ１，Ｒ２及びＲ３は前記のものである］のアルデヒドを、式■： ［式中Ｒ４はＣｌ−８−アルキル基を表わす］のホスホンエステルと、塩基の存 在下に反応させかっそうして得られる化合物を（Ｒ１が不飽和基である場合に） 場合により水素添加することによって、製造される。

化合物■と■との反応は、ウィソチヒ（Ｗｉｔｔｉｇ）　−ホーナー（Ｒｏｒｎ ｅｔ）−反応の意味において、溶剤及び塩基、例えばリチウム−ジイソプロピル アミド、フェニルリチウム、ブチルリチウム、ナトリウムアルコラード、ナトリ ウムアミド、水素化ナトリウム又はカリウム−ｔ−ブチラードの存在で、行なわ れる。この反応のための溶剤としては、ペンゾール、ジメチルホルムアミド、テ トラヒドロフラン、ジエチルエーテル及びジメトキシエタンが好適である。反応 は０−２５℃の温度で有利に実施される。

場合により続いて行なわれる水素添加は常法で触媒的に行なわれる。

式■の化合物の製造は、欧州特許（Ｅ　Ｐ）第２０３６０号明細書に記載されて いる。

本発明による式■の中間体の製造は次の合成反応式に従って行なわれる・ ■ ■ ■ これには先ず、公知の式■［式中Ｘ＝Ｂｒ又はＣＩである］のケトン（Ｌｉｅｂ ｉｇｓ　Ａｎｓ、　Ｃｈｅ（７２４（１９６９）１２８）を、常法で酸触媒作用 下に、０−３０℃で、保護されたテトラヒドロピラニル（２）−誘導体Ｖに変換 し、かつこれを３．４−ンヒドロキシベンズアルデヒドと、０．２−１．２当量 の肋塩基の存在でかつ殊にプロトン性又は双極性で、中性の溶剤の存在下で反応 させて、■にする。

変換Ｖ→■のための助塩基としては、特に炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸 化ナトリウム、水酸化カリウム、１．８−ジアザ−ビシクロ［５，４，０］ウン デク−７−エン、ジイソプロピルメチルアミン及びジイソプロピルエチルアミン が好適である。溶剤としＣは、殊にジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン 、ジエチルテエーテル、メタノール、エタノール、アセトニトリル及びアセトン がこれに該当する。変換Ｖ−Ｖｌは０〜３０°Ｃの間の温度で良好に行なわれる 。

Ｔ　ＨＦ−保護基の離脱及び式Ｈのジオキソランへの環化は、式Ｒ１−ＣＨ０の アルデヒドを用いて、酸の存在で、生成する反応水の蒸留除去下で行なう。搬送 剤（５ｃｈｌｅｐｐ＋１ｉｔｔｅｌ）としては例えばペンゾール、ドルオール並 びにクロロホルム及び四塩化炭素が好適である。

次の実施例につき本発明を説明する： 例Ｉ Ａ、出発物質の製造： ａ）　式Ｖ　（Ｒ２，Ｒ３＝ＣＨ３、Ｘ＝ＣＩ）のクロルケトンの製造 １〜クロル−３−ヒドロキシ−３−メチル−ブタノン−（２）ＩＶ　（Ｒ２，Ｒ ３＝ＣＨ３）６８．３＋＋ｙ（５ｍモル）を無水ジクロルメタン２０ｗ１中に溶 かし、かつ３．４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン６３０す（７ｍモル）及びピリジニ ウム−トシレート１２５１＋９（０，７ｍモル）の添加後に室温で撹拌した。

３時間後に、反応混合物をジエチルエーテルで希釈し、かつ触媒を除去するため に半飽和ＮａＣ１−溶液で１ｘ洗浄した。ＭｇＳＯ４を介して乾燥後に、エーテ ル相を真空中で濃縮した。

無色油状物９８０ｍｇ（４，５ｍモル）が得られた。

収率：９０％ Ｃｌ０Ｈ１７Ｃ１０３（ＭＧ　２２０）ＩＲ二　２９９０．　２９５０．　２８ ６０．　１７３０（ｃｍ−１）。

ＩＨ−ＮＭＲ（９０ＭＨｚ、ＣＤＣＩ３　）：　１．３０−１．９６　（１２） ｍ　；　３．２０−３．５０　（１）ｍ　；　３゜７３−４．０７　（１）ｍ； ４．４７−４．７３　（３）ｍ：　（δｐｐｍ）　。

ｂ）　式■の化合物の製造 クロルケトンＶ　（Ｒ２，Ｒ３＝ＣＨ３）　４４０ｍｑＣ２ｍモル）及び３．４ −ジヒドロキシベンズアルデヒド２７６薦ｇ（２ｍモル）を無水アセトンｌＱ＋ ＋１’中に溶かしかつに２Ｃ０３１３ｍｇ（１ｍモル）の添加後に−夜還流加熱 した。溶剤を留去し、残渣を水に入れかつエーテルで抽出した。合一したエーテ ル相を飽和Ｎａ２ＣＯ３−溶液及び水で洗浄しかつＭｇＳＯ４を介して乾燥した 。真空中で濃縮しかつ粗生成物混合物を展開剤として石油エーテル／酢酸エチル （３：　１）を用いて珪酸ゲルのクロマトグラフィーにかけた。

０−５℃で結晶化する無色粘性油状物の形で、式■（Ｒ２，Ｒ３＝ＣＨ３）の化 合物４０２り（６２％）が得られた、融点８６−９０℃。

ＩＨ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣ＋３　）＋　９．８１（１）ｓ　；　７． ５０−７．３５　（２）ｍ；　７．１０−６゜９０　（１）ｍ　；　５．８５− ５．７０　（１）ｍ　；　５．０５−４．９５　（１）ｍ　；　４．４０−４． ２０　（１）ｍ　；　４゜１０−３．９０　（１）ｍ；３．６０−３．４５　（ １）；１．９５−１．３０　（１，２）ｍ　（δｐｐｍ）。

ＩＲ（Ｃ１（Ｃ＋３）：　３５００．３２５０．２９９５．２９４０．２８４０ ．２７１０，１，６８０．１６００．１５８０．１５００ｃｍ−’。

Ｃ）　式■のジアステレオマー化合物の製造（ＲＩ＝２．２−ジメチルビニル、 Ｒ２，Ｒ３＝ＣＨ３）式ＶＩ　（Ｒ２，Ｒ３＝ＣＨ３）の化合物１．１５９（３ ゜６ｍモル）及びピリジニウムトシレート９０ｍｇ（０゜４５ｍモル）をペンゾ ール５０ｍ１中に溶かしかつ３−メチルクロトンアルデヒド 加後にＡｒ−雰囲気下で脱水器で還流加熱した。後処理のために、反応混合物を 半飽和ＮａＣＩ−溶液中に加え、エーテルで抽出しかつＭｇＳＯ４を介して乾燥 した。

両ステレオマ−が粗生成物のＮＭＲ−検査により約１：１の割合で生成した。

粗生成を展開剤としてヘキサン／酢酸エチル（１０：１）を用いて珪酸ゲルクロ マトグラフィーにかけ、この際両ジアステレオマーが分割した。

収量； ジアステレオマ−１＝無色結晶　３　３　０　１９ジアステレオマー２：無色結 晶　３０８ｍｑジアステレオマー１　（Ｃ１７）−１２００５）　（ＭＧ３０４ ）： ！（−ＮＭＲ　（２　０　０ＭＨ　ｚ，ベンゾ−ルーｄ６）：’　９．６０　（ １）ｓ　：　７．５１（１−）ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ　；　７。

１０　（１）ｄｄ，Ｊｌ　＝２Ｈｚ，Ｊ２　＝８Ｈｚ　；　６。

８１　（１）ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ　；６．１２　（１）ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ　；　５．３ ５　（１）ｄ／七重．　Ｊ　１＝　７　ｆ（　ｚ　、　Ｊ　２＝ＩＨｚ　；　３ ．９８　（１）、Ｊ＝１　１．Ｈｚ　；　３．４０　（１）、Ｊ＝１　１Ｈｚ　 ；　１．４３　（３）ｄ，Ｊ＝１１１ｚ；　１．３２　（３）ｄ，Ｊ＝ＩＨｚ　 ；　１．３１　（３）ｓ　；０、９４　（３）ｓ　（δＩ）り＋１）。

ＩＲ　（ＫＢｒ）：３０４０．２９８０．２９４０．２９１０、２８３０，　２ ８００，　２７３０．　１６８０。

１　５　８　０　、１　５　０　０　ｃ−＝　。

ジアステレオマー２’　（Ｃ＋７Ｈ２ｏＯｓ　）　（ＭＧ　３　０　４）　： ＩＩ−（−ＮＭＲ　（２　０　０ＭＨ　ｚ，ベンゾ−ルーｄ６）＝９、５６　（ １）　ｓ　；　７．　４９　（１）ｄ．　Ｊ＝２Ｈｚ　；７、０９　（１）ｄｄ ，　Ｊ　１　＝２Ｈｚ，　Ｊ２　＝８Ｈｚ　：６、７９　（１）ｄ，　Ｊ＝８Ｈ ｚ　；５．　９２　（１）ｄ。

Ｊ＝７Ｈｚ　＋　５．５３　（１）ｄ／七重，　ＪＩ　＝７Ｈｚ、Ｊ２　＝ＩＨ ｚ　；３．　８６　（１）ｄ．’Ｊ＝１１Ｈｚ　；３、４８　（１）ｄ．　Ｊ＝ １１Ｈｚ＋１．　４１　（３）ｄ、Ｊ＝ＩＨｚ　；　１．　３８　（３）ｄ，　 Ｊ＝ＩＨｚ　；　１。

２６　（３）ｓ　；０．　８３　（３）ｓ　（δｐ１１１１）　。

ＩＲ　（ＫＢｒ）　：３０６０．　２９９０，　２９４０．　２８４０、２７４ ０，　１６８０，　１６００，　１５８０。

１５００ｃｍ−’。

Ｂ．ジアステレオマー最終生成物（式１，Ｒ＋　＝２。

２−ジメチルビニル　Ｒ２，Ｒ３　＝ＣＨ３　）の製造ａ）　ＮａＨ６０ｕ＋（ ２ｍモル）を保護ガス雰囲気（Ａｒ）下で無水テトラヒドロフラン１ｍｌ中に懸 濁させた。

その後に、無水テトラヒドロフラン５ｍｌ中の式■（Ｒ＝２．２−ジメチルビニ ル　Ｒ２、Ｒ３　＝ＣＨ３　）［ＩＡｃ参照参照化合物のジアステレオマー（１ ）６０　８　ｗｓｑ　（　２　ｍモル）及び式ｍ　（Ｒ４　＝−ＣＨ３　）　（ ７）燐酸エステル６、２８ｇ（２ｍモル）の溶液を０℃で滴加した。

室温に加温しかつ２４時間撹拌した。後処理のために、反応溶液をエーテル１５ ｍｌに加え、水３ｍｌで２Ｘかつ飽和ＮａＣＩ−溶液３ｍｌで１ｘ洗浄した。

ＭｇＳＯ４を介して乾燥した後に、回転蒸発させた（　ｅｉｎｒｏｔｉｅｒｔ） 。粗生成物を展開剤としてヘキサン／酢酸エチル（５：１．）を用いて珪酸ゲル カラムでのクロマトグラフィーにかけた。

ジアステレオマー１だけを含有する白色の凝固した油状物５４０Ｋｇ（５５％） が得られた。

ジアステレオマー１　（Ｃ２９Ｈ３２０７，　ＭＧ　４　９　２）　：ＩＨ−Ｎ ＭＲ　（２　０　０ＭＨ　ｚ，ベンゾ−ルーｄ６）ニア、６５−７．２５　（６ ）ｍ；　７．０５−６．９０　（４）ｍ；６．１８　（１）ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ ；　５．３９　（１）ｄ／七重，　Ｊｌ　＝７．５Ｈｚ，　Ｊ２　＝ＩＨｚ　； 　４。

０５　（１）ｄ，　Ｊ＝１１Ｈｚ；３．５９　（１）ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ；３．４ ０　（３）ｓ：２．８０　（３）ｓ；１、４６　（３）ｄ，　Ｊ＝ＩＨｚ　；　 １．３６　（３）ｓ　；　１。

３５　（３）ｄ．Ｊ＝ＩＨｚ　；　１．０１　（３）ｓ　（δｐｐｍ）。

ＩＲ　（ＫＢｒ）：３０６０．３０２０，２９８０．２９４０、１７１０．１６ ３０，１５８５，１５１０。

１４３５ｃｍ−１。

ｂ）　相応する方法で、式ｎ　（Ｒ＝２．２−ジメチルビニル、Ｒ２，Ｒ３＝Ｃ Ｈ３）の化合物のジアステレオマー２から、ジアステレオマー２　（Ｃ２９Ｈ３ ２０７゜ＭＧ４９２）を製造した。

ＩＩ−（−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ベンゾ−ルーｄ６）＝７．６０−７．２０　 （６）ｍ；７．００−６．８８　（４）ｍ；５．９７　（１）ｄ、Ｊ＝７．５Ｈ ｚ；５．６１　（１）ｄ／七重、Ｊｌ＝７．５Ｈｚ、Ｊ２　＝ＩＨｚ＋３．９４ 　（］）ｄ、Ｊ＝１１Ｈｚ　＋３．６７　（１）ｄ、Ｊ＝１１Ｈｚ　：３．４０ 　（３）ｓ　；２．８１　（３）ｓ；１．４５　（３）ｄ、Ｊ＝ＩＨｚ；１．４ ２　（３）ｄ；Ｊ＝ＩＨｚ；１．３２（３）ｓ；０．９２（３）ｓ（δｐｌ）Ｉ ｌｌ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）＋３０６０．３０２０，２９８０，２９４０．２８４０，１７１ ０，１６３０．１５８５゜１　５１０、１４３５　ｃｍ−ｔ　０ 例２ 例１と同様にして、式［１（Ｒ１＝２．２−ジメチルから相応する弐■のジアス テレオマーが得られた：ジアステレオマー１　（Ｃ３２Ｈ３６０７，ＭＧ　５３ ２）　・ＩＨ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ベンゾ−ルーｄ６）ニア、６４−７．３ １　（６）ｍ　；　７．１５−６．９４　（５）ｍ；６．１８　（１）ｄ、Ｊ＝ ７．５Ｈｚ；５．３９　（１）ｄ／七重、Ｊｌ　＝７．５Ｈｚ、Ｊ２　＝ＩＨｚ 　；４．０６　（１）ｄ、Ｊ＝１１Ｈｚ　；３．６８　（１）ｄ、Ｊ＝１１Ｈｚ 　；３．４０　（３）　ｓ　；２．８０　（３）　ｓ　；２゜３９−２．２５　 （］）ｍ；　１．９０−１．４５　（５）ｍ：　１．４４　（３）ｄ、Ｊ　＝Ｉ Ｈｚ　；　１．３３　（３）　ｄ。

Ｊ＝ＩＨｚ　：　１．２７−０．８５　（４）ｍ０ＩＲ（ＫＢｒ）　二　３０６ ０．　３０２０．　２９３０．　２８６０、　１７００．　１６３０．　１５８ ０．　１５０５゜１４５０、　１４３０　ｃｍ−’　０ ジアステレオマー２　（Ｃ３２Ｈ３８０７，ＭＧ　５３２）　＋ＩＨ−ＮＭＲ（ ２００ＭＨｚ、ベンゾ−ルーｄ６）＝７．６２−７．２８　（４）ｍ：　７．２ ０−６．９２　（６）ｒｒｉ　；　５．９４　（１）　ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ　： 　５．６３　（１）ｄ／七重、Ｊｌ　＝７．５Ｈｚ、Ｊ２　＝ＩＨｚ　；３．９ ８　（１）　ｄ、Ｊ＝１　１．Ｈｚ　；　３．７７　（１）　ｄ、Ｊ＝１１８ｚ 　；３．４０　（３）　ｓ　；２．８１　（３）　ｓ　；２゜３８−２．２２　 （１）ｍ　；　１．８５−１．５０　（５）ｍ；　１．４５　（３）ｄ、Ｊ＝Ｉ Ｈｚ　；　１．４２　（３）ｄ　；Ｊ　＝　Ｉ　Ｈｚ　：　１．３７−０．８０ 　（４）　ｍ０ｒＲ（ＫＢｒ）　：３０６０．　３０２０．　２９３０．　２８ ６０、　１７００．　１６３０．　１５８０．　１゜５０５゜１　４　５　０　 、　１　４　３　０　ｃｍ−１０例３ 例ＩＢ、ａ）と同様にして、式１　（Ｒ１＝２．６−シメチルー１，５−へブタ ジェニル（１）　、Ｒ２，Ｒ３＝ＣＨ３、Ｃ３４Ｈ４００７、ＭＧ５６０）の化 合物が得られた。

＋１−ｌ−１−Ｎ　（２００Ｒ２、ベンゾ−ルーｄａ）　・７゜６５−６．９０ 　（１０）ｍ：６．２２　（１）ｄ　；　Ｊ＝７゜５Ｈｚ　；　５．４８　（１ ）ｄ／七重、Ｊ１＝７．５Ｈｚ。

Ｊ２　＝ＩＨｚ　：　５．１５−５．０２　（１）ｍ、　４．０４　（１）ｄ、 Ｊ＝１１Ｈｚ　；３．５９　（１）ｄ、Ｊ＝１１１−１ｚ　；３．４５　（３） ｓ　；２．８１　（３）ｓ　；２０８−１．８５　（４）ｍ：　１．６１　（３ ）ｄ、Ｊ＝１１Ｈｚ　；　１．４７　（３）ｓ　＋　１．４３　（３）ｄ、Ｊ＝ １１−ｆｚ　；　１．．３６　（３）　ｓ　：　１．０２　（３）　５０ＩＲ（ ＣＨＣ１３）＋　３０２０．２９８０．２９４０２８５０．１，７００，１６２ ５．１５８５，１，５０５．１４３０　ｃｍ−１・ 例４−１６ 例ＩＡｃと同様にして、次の式■の中間体を製造することができる（Ｒ２，Ｒ３ ＝ＣＨ３）：Ｒ１＝Ｈ，メチル、ｎ−ブチル、メトキシメチル、トリフルオルメ チル、トリクロルメチル、２．２−ジメチルプロピル、３，３−ジメチルブテニ ル（１）、１．３−ペンタジェニル（１）、２．６−シメチルー５−へブテニル （１）、２−メチルプロピル、２−フェニル−ビニル、フェノキシメチル。

例ＩＢと同様にして、それらから式Ｉの次の作用物質を製造することができる（ Ｒ２，Ｒ３＝ＣＨ３）７　Ｅ−メトキシメチル ８　トリフルオルメチル ９　トリクロルメチル １０　２．２−ジメチルプロピル １１　３．３−ジメチルブテニル（１）１２　１．３−ペンタジェニル（１） １３　２．６−シメチルー５−へブテニル（１）１４　２−メチルプロピル １５　２−フェニル−ビニル １６　フェノキシメチル 新規化合物（特に例１〜１６の化合物）は、良好な抗ウイルス性、抗増殖性及び 細胞毒性の活性を示す。

次の実施例につき新規物質の作用を説明する：例Ａ ペニシリウム・ツタ゛ンム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｓ　Ｎｏｔａｔｕｗ）におけ る呼吸抑制作用 酸素消費を、酸素電極を用いて、気密の密閉容器（３ｍｌ容量、磁気撹拌器を有 する）中でポーラログラフィにより測定した。試験菌類を胞子懸濁液から菌糸体 湿潤重量（Ｍｙｃｅｌｆｅｕｃｈｔｇｅｗｉｃｈｔ）　１０−２０　ｍｙ／　ｍ ｌの菌糸体重量に培養した。測定は、１％のブドウ糖溶液中の菌糸体湿潤重量２ ５２５−３Ｏ／ｍｌの菌糸体濃度で実施した。短時間の一定の呼吸経過の後に、 メタノール中に溶かした化合物（０−３ｍｙ／ｍｌ）を懸濁液に添加しかつ０２ −消費を記録した。実験は比較化合物としてストロビルリンＡの使用下で実施し た。呼吸の抑制率（％）の結果を第１表に挙げる。

第１表。

化合物　呼吸抑制（対照の％） 例ＩＢＩ　９５ 例ｌＢ２９５ ストロビルリンＡ　９３ 例Ｂ ＨｅＬａ−３３−細胞への静細胞作用及び形態学作用 ＨｅＬａ−３３及び他の細胞の培養において、本発明による化合物で短時間以内 に細胞分裂が抑制された。付加的に細胞の形態が変化した。

ＨｅＬａ−３３−細胞を９６一孔滴定皿上に１０％胎生子牛血清を有する培地Ｆ １２中細胞　４Ｘ１０５／ｍｌの細胞濃度でおいた。２４時間後に細胞は表面上 に広がっていて、かつ培地の交換を行なった。細胞を試験化合物を含有する培地 （培地１ｍｌ当り１０．１．０．１もしくは０．０１μ９）で７２時間培養した （３７℃、５％Ｃ０２）。７２時間後に、通常は上皮様に生長する細胞が線維芽 細胞様の形態を有した。この形態変化は、物質の影響による４５％以下の生長抑 制率で顕著に認められる。

実験を比較化合物としてのストロビルリンへの使用下で実施した。細胞密度を１ 孔当りの総蛋白質含量の測定を介して測定した。記載の値は、試験物質と共に３ 日間の培養後の結果を示し、かつ非処理対照の総蛋白質の％として第２表に記載 した。

第２表。

化合物　蛋白質含量（対照の％） （μ　ｇ／罵１） １０μ９　１μｇ０．１μ９　０．旧μ７例］、Ｂ１　２０　２１　２３　５５ 例ＩＢ２　３８　３８　５０　７０ ストロビルリンＡ 例Ｃ ｖＳＶへのＨＥ　ｐ　−２−細胞における抗ウィルス作用 試験化合物の抗ウィルス活性の測定は、水庖性口内炎ウィルス（Ｖｅｓｉｃｕｌ ａｒ　Ｓｔｏｍａｔｉｔｉｓ　Ｖｉｒｕｓ）　（Ｖ　Ｓ　Ｖ）の細胞変性作用（ ＣＰ　Ｅ）に対するインジケーター細胞としてのヒトのＨＥｐ−２−細胞の保護 の測定に基づく。

このために、ＨＥ　ｐ　−２−細胞２Ｘ１０４を有する培養培地１０μｌを９６ 一孔−平底器の凹みに入れかつ一夜３７℃及び二酸化炭素５％（ｖ／ｖ）で培養 した。次の日に試料溶液１００μｌを全面細胞培養物に加えかつ連続的に（５ｅ ｒｉｅｌｌ）　２回滴定した。培養皿上に付加的に細胞対照（＝非処理の、ウィ ルスで感染されない細胞）及びウィルス対照（＝非処理の、ウィルスで感染され た細胞）を共においた。もう１回３７℃及び５％（ｖ／ｖ）ＣＯ２で２４時間培 養した後に、培養物を培養培地中の■Ｓ■−懸濁液５０μｌで感染させかつ３７ ℃及び５％（Ｖ／Ｖ）ＣＯ２で培養した。２日間後に、非保護培養物（＝ウィル ス対照）中のウィルスで条件付けられた細胞破壊（ＣＰ　Ｅ）が起った。試験化 合物で処理されかつ引続きｖＳＶで感染された培養物中の保護された細胞の％を 、クリスタルバイオレット呈色により測定した。抗ウィルス活性に関する尺度と して、０及び１００％保護に対して、５０％保護をもたらす試料濃度を調査した 。化合物の抗体ウィルス活性のための対照として組換えヒトインターフェロン− γ（ｒ　）１　ｕ　Ｔ　Ｆ　Ｎ−γ）を−緒に検査した。

ｖＳＶの細胞変性作用に対してＨＥｐ−２−細胞を５０％まで保護する濃度を有 する試験物質を第３表に挙げる、 第３表 化合物　抗ウィルス活性 （ｎｇ／属ｌ） 例ＩＢ１　３ 例ＩＢ２　３ 対照（ｒ　Ｉ−（ｕ　Ｉ　Ｆ　Ｎ　−７）　０　、６例１の物質は、ｒＨｕｌＦ Ｎ−γと異なり、この試験条件下で細胞対照に比較して同様に抗増殖作用を示し た。例１の物質の抗ウィルス及び抗増殖活性は、平行し、かつ細胞の形態変化と 相関しく　ｋｏｒｒｅｌ　１ｅｒｔｅｎ）、すなわち細胞は、細胞対照と比較し て長く延びていてかつ神経軸索突起様の突起を有した。

例Ｄ ヒトの腫瘍細胞への細胞毒性及び抗増殖性作用化合物ＩＢＩ及びＩＢ２の抗腫瘍 特性の測定のために、種々の組織由来の腫瘍細胞（５６３７−６＋ヒトの膀胱癌 （Ｂｌａｓｅｎｋａｒｚｉｎｏｓ）　；　ＨＴ　−２９：ヒトの結腸瘍、Ｂ−１ ６：７ウス黒色腫（ｍｕｒｉｎｅｓ　Ｍｅｌａｎｏｍ）を使用した。

指数的に生長する腫瘍細胞１〜２・１０３を９６一孔皿中で完全生長培地（ＲＰ ＭＩ　１６４０Ｘ１０％胎生子牛血清）中に塗被しかつ標準培養条件（３７℃、 ５％二酸化炭素、水蒸気飽和雰囲気）で−晩培養した。次の日に物質添加を行な い、この際、１０−４〜１０〜９Ｍの濃度範囲にわたって物質ＩＢＩ及びＩｎ２ の連続滴定を行なった。標準条件下でもう一度７２時間培養した後に、細胞数の 測定をクリスタルバイオレットでの変色により行ないかつ引続いてマルチチャン ネル光度計（Ｍｕｌｔｉｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ）により５４０ｎｍで光度計によ る評価を行なった。

１．０−４Ｍの極めて高い濃度でのみ、処置細胞の細胞溶解が、顕微鏡で認めら れた。他の検査された濃度においては、投与量に依存性の強力な細胞増殖抑制を 認めることができ、従って最も少ない１０−９Ｍの検査濃度でも処理細胞の数は 非処理細胞対照の５０％よりも少ない値を示した。

例１の物質で処理された細胞のこの強力な増殖活性減少は、細胞本体の伸展及び 細胞突起の発生を特徴とする形態変化と共に起こった。

国際調査報告 国際調査報告 ρＣＴ／Ｅｌ’　９０１００２８０ ＳＡ　３４９８７

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. １．式Ｉ： ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ ［式中Ｒ１は水素又は１０個までの炭素原子を有する、飽和又は不飽和の炭化水 素基であり、これは弗素、塩素、臭素、Ｃ１−６−アルコキシ、Ｃ２−６−アル ケノキシ又はＣ２−６−アルキノキシによって又は弗素、塩素、臭素、沃素、ト リフルオルメチル、Ｃ１−４−アルキル又はＣ１−４−アルコキシによって場合 により置換されたフェニル−又はフェノキシ基によって置換されていてよく、Ｒ ２及びＲ３は同一又は異なっていて、水素原子、Ｃ１−６−アルキル基又はＣ３ −７−シクロアルキル基又はＲ２及びＲ３が一緒になってＣ２−８−アルキレン 基を表わす］のβ−メトキシアクリレート。
2. ２．病気の治療の際に使用するための請求項１による式Ｉの化合物。
3. ３．式ＩＩ： ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩ［式中Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は前記のもの である］のアルデヒドを、式ＩＩＩ： ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩＩ［式中Ｒ４はＣ１−８−アルキル基を 表わす］のホスホンエステルと、塩基の存在で反応させ、かつそうして得られた 化合物を（Ｒ１が不飽和基である場合に）場合により水素添加することを特徴と する、請求項１に記載の式Ｉのβ−メトキシアクリレートの製法。
4. ４．請求項３に記載の式ＩＩの化合物。
5. ５．　式ＩＶ： ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＶ［式中Ｒ２及びＲ３は前記のものである ］の化合物。