JPH04504662A - 全血グルコース決定方法及び該方法を実施するためのキュベット及び光度計 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は全血の総グルコース含量を定量的に決定する方法、及び該方法を実施す るための使い捨てキュベツト及び光度計に関する。

全血グルコースの決定は糖尿病の診断、管理及び内分泌学的調査のために行われ る。ある種の意識消失の場合にも、全血グルコースの決定は有効である。糖尿病 は世界の主要な健康問題の一つであり、４０００万Å以上の人々がこの病気で苦 しんでおり■型糖尿病の罹患率は増大するように見える。

グルコースを決定するいくつかの方法が知られている。

発癌性試薬の非特異性もしくは包含性により昔の多くの方法は今日廃棄されてい る。

血液中のグルコース、全血グルコース、とは血液中に存在する蛋白非結合グルコ ースのことを意味する。グルコースは細胞外水及び、例えば赤血球等の細胞内水 に自由に分布するが、必ずしも同じ濃度ではない。これは全血の総グルコース含 量が血漿や漿液中の総グルコース含量とは異なることを意味する。例えば糖尿病 に対する診断基準は広く全血グルコースに基いている。従って、臨床医にとって は全血に対して直接グルコースを決定することか明らかに有利である。全グルコ ースと血漿もしくは漿液中グルコースの決定の違いについてはダブリューティ、 カラウェイかＡｍｅｒ、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｐａｔｈ、　３７　：　４４５　 。

１９６２年で検討を行っている。完全な赤血球か除去される、現在行われている 多くのグルコーステストでは血液グルコースとしての結果は正しく表示されず従 って使用する基準の違いにより医療診断に混乱を来すことがある。

今日の大概の特定グルコース決定法は酵素もしくは酵素系を含む試薬に基いてい る。３つの異なる酵素系か支配的であり、それはグルコースオキシダーゼ、ヘキ ソキナーゼ及びグルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）である。

好ましくは、本発明はグルコースデヒドロゲナーゼ（ＣＨＤ）を含む試薬を使用 する。ＧＤＨを使用した公知の決定方法か米国特許第４，１２０．７５５号及び 第３．９６４，９７４号に記載されている。ＧＤＨを使用したこれら従来技術の 決定方法は伝統的な液相化学法である。

しかしながら前記した方法はいずれも希釈されていない全血中のグルコースを決 定するのに適していない。米国特許第３，９６４，９７４号の例７には全血グル コース法が記載されているが、この方法は血液サンプルの希釈溶液及び蛋白沈降 もしくは単独溶血に基いている。

ＥＰ第８４１１２８３５．８号には非希釈血液に対する全血グルコース法が記載 されている。使用する化学酵素反応はグルコースオキシダーセに基いており、光 学的反射率の測定は６００ｎｍよりも上の波長で実施される。

ヘモグロビンかオキシダーゼ反応に干渉することか良く知られている。また、オ キシダーゼ反応には自由酸素と接触できることか必要である。従って、マイクロ キュベツトを使用してグルコースオキシダーゼ方式により非希釈血液中の全血グ ルコースを決定しようとするとかなりの問題を伴う。

米国特許第４，０８８，４４８号から血液のヘモグロビン測定（Ｈｂ測測定にマ イクロキュベツトを使用できることが判っている。キュベツトは試薬により前処 理され、キュベツトに血液サンプルを吸引した時に赤血球の壁か溶解して化学反 応が開始され、その結果正確に規定されたギャップ幅を有するキュベツトに直接 吸光測定を行ってＨｂを決定することかできる。

グルコース含量を決定する吸光測定はヘモグロビンによる吸光により著しく干渉 を受けるため、米国特許第４゜０８８．４４８号に従ったグルコースのＨｂ決定 法は実際上容易に応用することはできない。従って、ヘモグロビン濃度の変動に よりグルコースの決定は相当な干渉を受ける。

従って、今日の方法は複雑化している。血液サンプルの希釈溶液を必要とする場 合も多く、赤血球のグルコース含量を考慮せずに血漿のグルコースのみを決定す る場合もある。

従って、希釈されていない全血中の総グルコース含量を定量的に決定する簡単で 信頼度の高い迅速な方法が糖尿病を診断及び管理するのに重要な助けとなること は明白である。

本発明の一つの目的は伝達測光法により非希釈全血中の総グルコース含量を定量 的に決定する方法を提供することである。もう一つの目的はこのような決定を行 うためのキュベツト及び光度計を提供することである。

一般的に、ヘモグロビン含量により前記干渉問題は本発明に従って次のようにし て解決される。

適切な試薬を使用すれば、最初に赤血球の壁を溶解させ、次に血液サンプルの総 グルコース含量と試薬との間で化学反応を起してグルコースに基いた化合物を生 じ、波長に従った、その吸光範囲が少くとも部分的にヘモグロビン吸光範囲の波 長範囲外となるようにすることかできる。従って、適切に選定された波長におけ る吸光測定を行えば、測定結果に及ぼすヘモグロビンの影響を完全に解消するこ とができ非常に迅速にグルコースを決定することができる。

従って、本発明により、全血サンプルが試薬と接触し試薬がサンプル中のグルコ ースと化学反応を行ってサンプル中で検出可能な色素濃度変化を生じその大きさ かグルコース含量の測定値と決定される、全血中のグルコース決定法が提供され 、該方法は次のステップを特徴とすサンプルを受け入れるための少くとも一つの 空胴を存するマイクロキュベツト内へ非希釈サンプルを導入し、前記空胴の内部 は乾燥状態の試薬により前処理されていて前記化学反応は前記空胴内で生じ、 試薬中に含まれる活性成分として少くともサンプルの血球に含まれるグルコース を露呈させて全血溶血物中の総グルコースの定量決定を行う同種溶血剤、及び化 学反応に加って少くとも血液ヘモグロビンの吸光範囲外の波長範囲で色素濃度変 化が生じることを保証する薬剤を選定し、 前記波長範囲においてキュベツト内のサンプルに対して直接吸光測定を行う。

発明の方法の実施例を請求項２−７に記述する。

本発明の実施例に従って、本方法は小さなギャップ幅を存し同種溶血剤、ＧＤＨ 、ジアホラーゼもしくは類似物、ＮＡＤもしくは類似物、洗剤及び色素形成物質 を含むキュベツト内の乾燥試薬へ非希釈全血を供給し、フィルター光度計内の伝 達測定により形成される色素の濃度の測光を行うステップからなっている。ジア ホラーゼ類似物はフェナジメト０サルフェートもしくはフェナジンニトロサルフ ェートタイプのレドックス特性を有する物質である。これらはノアホラーセ物質 と置換できるか、毒性の点からは不適切である。

グルコースデヒドロゲナーゼ法はβ−グルコースに特定される。血液中において 、α−グルコースとβ−グルコースは温度依存平衡状態にある。血液サンプルの 温度を低下させると、平衡状態は大部分α−グルコースとなるように遷移する。

平衡状態はゆっくり変化する。グルコースデヒドロゲーナーゼ法の反応速度は酵 素ムタロターゼ、従って、α−グルコース／β−グルコース平衡により影響され る。血液グルコースの決定において、遅延なく分析を行ってサンプル中の固有の 代謝を防止することが重要である。α→β自然反応は非常にゆっくり発生し且つ 体温はα／β平衡を保証するのに充分に一定しているため、体温血液に対して直 接テストを行う場合にムタロターゼは有利に除去され、しかも総グルコースに対 して光度計を較正することができる。コスト節減の他に、本方法の利点として反 応時間が短縮され分析範囲が拡張される点か挙げられる。決定としては較正及び 管理溶液を少くとも１時間適切な温度としなければならない点が挙げられる。

本発明の実施例に従って、グルコースデヒドロゲナーゼタイプの試薬系は赤血球 を解体してヘモグロビンを遊離させる同種溶血剤、ＮＡＤＨ反応を可視化するＧ ＤＨジアホラーゼもしくは類似物、ＮＡＤもしくは類似物、例えばテトラゾリウ ム化合物から選んだ洗剤もしくは色素形成物質からなっている。これらの活性物 質の他に他の化学物質を製造補助剤として使用することかできる。

溶血中に遊離されるヘモグロビンによる吸光度はＡｄｖ。

Ｃｌ１ｎ、　Ｃｈｅｍ、８．　１４１−１８７．イー、ジー、ヴアンヵンペン及 びダブリュ、ノー、ジジルストラ（１９６５）の論文“ヘモグロビン及びその誘 導体の決定”の第１６５頁、第１２図に記載されている。この図から、６４５ｎ ｍよりも上の波長で吸光度測定を行う場合、いかなるヘモグロビン誘導体の影響 も最少限とされることか判る。

別のタイプの吸光度測定は、例えば細胞、脂肪、塵もしくは他の欠失からの光の 粒子散乱である。ヘモグロビン及び形成色素により干渉吸光度が高まることのな い、主測定波長よりもしばしば上の別の波長で測定を行えばこの背景吸光度を補 償することかできる。

グルコースデヒドロゲナーゼ方式の反応工程は良く知られており、米国特許第３ ，９６４，９７４号に記載されている。この出願には可視範囲の吸光度のテトラ ゾリウム塩からなる反応工程か報告されている。

本発明による方法の本質的特徴は、化学的にも吸光測光学的にも、グルコースデ ヒドロゲナーゼ反応手順を終点まで使用することである。安全性及び信頼性の点 から、このような反応はユーザにとって好ましいものである。

溶液中の化学物質の濃度を定量的に決定する光学的方法は公知であり良く実証さ れている。吸光測光法は光学決定技術である。吸光測光法の理論及び光度計の設 計についてはスクープ及びウェストか５ｅｃｔｉｏｎ　Ｅｄｉｔｉｏｎ　、第２ ９章、”分析化学の基礎”に記載している。基本的に光度計は３部分、すなわち 光学部、機械部及び電子部からなっている。光学部はモノクロメータもしくは干 渉フィルタを有する光源、光検出器、及び場合によってはレンズ系からなってい る。機械部は光学部のサスペンション及び化学溶液を存するキュベツトの移送手 段からなっている。電子部は光源及び光検出器からの測定信号を制御監視するよ うに設計されており、これらの信号は測定化学濃度を表わすかもしくはそれに関 連した数値をユーザが読み取れるように処理される。

このような光度計構成は米国特許第４，３５７．１０５号に開示されている。こ の特許には、公知の部品で最適化を行って、できるだけ測定波長５４０ｎｍの近 くで測光決定を行う血液中のヘモグロビンを決定するための光度計が記載されて いる。測定波長５４０ｎｍへの調整は発光ダイオード及び酸化ディディミアムガ ラス型の光フィルターを使用して行われる。別の実施例では、赤外範囲内の発光 ダイオードを使用して光学溶液の混濁度が測定される。この公知の光度計は血液 と試薬間の１／２００以上の希釈度を有する通常の液相化学ヘモグロビン決定法 に使用されるものである。

前記方法に従って全血中のグルコース含量を決定する光度計、すなわち非希釈血 液へ乾燥グルコース試薬を加えマイクロキュベツトに対して２波長測光測定を行 う光度計は簡単で、信頼度が高く低コストてなければならない。キュベツトには 乾燥グルコース試薬を入れるため、使い捨て式であり、非希釈血液を充填した後 てキュベツトは簡単に持ち運べて迷走光線の影響を最少限としなければならない 。動作上、光度計は測光上安定していて最少の制御で済むようにしなければなら ない。

従って、本発明の方法を実施するために本発明はさらに乾燥試薬で前処理した請 求項８記載の使い捨てキュベツト、及び２つの独立した波長で作動する請求項９ 記載の光度計を提供し、後者の実施例は請求項１Ｏ及びｌｌに記載されている。

本発明の方法を実施して、干渉フィルタを有する発光ダイオード及び算術演算能 力を有する監視制御マイクロプロセッサにより非希釈血液中の少量の全血グルコ ースを測定する光度計は、取扱いか簡単で技術的に安定で全面的にシリコン電子 装置を使用した構造を有し、消費電力か少く、信頼度が高く低コストで製造でき る。光学部品を取り付ける部分を含めたキュベツト移送手段のみならず、機械部 、泊体及び底部をプラスチックで射出成形すると、光度計の全体製造コストか低 下する。

マイクロプロセッサ支援光度計は全ての処理をコントロールし且つ対数変換を含 む全ての計算を実施することができる。２波長測定用光度計の発光ダイオードは マイクロプロセッサにより脈動されて一時に１個の発光ダイオードだけが点灯す るようにされる。発光ダイオードは残光が無いために極めて有利である。発光ダ イオードの光強度が経年劣化することのないように、光度計は１００％光に対応 する最大光強度を異なるキュベ・ノド測定を行うたびに定期的に測定するように 設計されている。キュヘットを測定するのか総強度、１００％光、を測定するの かを光度計か感知できるように機械的キュベ、ソト移送機能を設計すれば、光強 度を補償して光度計を作動させることかできる。測定値かキュベ・ノド値である かブランク値、１００％透過、であるかを確立する能力により、光度計は対数ア ナログ増幅器を必要とすることなくそのマイクロプロセッサ装置により作動する ことができる。

対数アナログ増幅器か無いため光度計の信頼度及び安定度が向上し、同時にマイ クロプロセッサプログラム内の対数アルゴリズムにより多数演算の任意の精度が 確立される。マイクロプロセッサ支援光度計のもう一つの利点は較正曲線や線型 化の異なる型式の算術曲線適応を容易にプログラムに導入できることである。ま た、マイクロプロセッサ機能により、異なる形式の終点ルーチンを使用すること もできる、すなわちプログラム自体が終点ζこ達する時を決定することができ、 それは所望により異なる濃度値に対しては異なる精度で行うことかできる。

次に添付図を参照として本発明の詳細な説明する。

第１図はヘモグロビン誘導体の混合体及びグルコース試薬に含まれる色素形成物 質の両方について、波長（二対して設定した吸光度のグラフ。

第２Ａ図、第３Ａ図及び第４Ａ図は本発明の光度計の３つの異なる実施例。

第２Ｂ図、第３Ｂ図及び第４Ｂ図は、独立した対数増幅器を含む、それぞれ第２ Ａ図、第３Ａ図及び第４Ａ図の実施例に対応する実施例。

第５図は本発明の光度計の光学部の実施例の破断図である。

第１図に実線ｌＯによりテトラゾリウム塩、３−　（４゜５−ジメチルチアゾリ ル−１−２）　−２，５−ジフェニールテトラゾリウムブロマイド（ＭＴＴ）の 吸光スペクトルを示し、破線１２により溶血の吸光スペクトルを示す。６００ｎ ｍよりも上にヘモグロビンの干渉が最少でＭＴＴを定量的に決定てきる波長範囲 があることが判る。

また、背景干渉に対する補償はより上の波長で生じることも判る。吸光度の２波 長測定では、互いに干渉しないように明確に分離された波長を使用することが重 要である。フィルター光度計に使用される干渉フィルターの波長は最大光伝達が 得られる波長により定義される。さらに、干渉フィルターは最大５０％の光伝達 が得られるように定義された単帯域幅を存している。

第２Ａ図、第３Ａ図、第４Ａ図及び第２Ｂ図、第３Ｂ図、第４Ｂ図にマイクロプ ロセッサ支援光度計の異なる実施例を示す。これらの図におけるバージョン°Ａ °は対数増幅器の無い光度計を示し、対数演算はマイクロプロセッサのプログラ ムにより行われる。これらの図におけるバージョン°Ｂ“は独立した対数増幅器 １９を使用している。独立した対数増幅器１９を使用することはマイクロプロセ ッサのプログラムが簡単になるが光度計の技術的特性が劣化することを意味する 。

第３Ａ図及び第３Ｂ図はアナログ形式をデジタル形式とするのにデジタル／アナ ログコンバータ４６を使用スる点において第２Ａ図、第２Ｂ図とは異っている。

この構成は経済的ではあるか、周辺装置を必要とするため安定度が低い。

第２図〜第４図の光度計は物理的に２つの構造ブロック、すなわち一つの光学一 体と一つの電子印刷回路板１６からなっている。電子印刷回路板は標準型であり 、使用部品は従来の方法で穿孔積層板に表面実装もしくははんだ付けされている 。また、異なる実装技術を組合せることができる印刷回路板を使用することもで きる。

次に、第２Ａ図の実施例について詳細に説明する。光度計に含まれる印刷回路板 １６を破線により略示し、マイクロプロセッサ１８、アナログ／デジタルコンバ ータ２０、マルチプレクサ２２、ポテンショメータ２４、ＬＣＤドライブユニッ ト２６、ＬＣＤディスプレイユニット２８、発光ダイオードドライブ回路３０． 主整流器３２、バッテリ充電回路３４、及び同業者にとっては公知の（図示せぬ ）周辺装置を含んでいる。

印刷回路板１６はキュベツト相体３６．２個の発光ダイオード３８、光センサ４ ０、及びスイッチ４２を具備する他方の光度計部に接続されている。

動作上、マルチプレクサ２２は光センサ４０．バッテリ充填回路３４及びポテン ショメータ２４からアナログ信号は受信し、マイクロプロセッサＩ８からのコン トロール命令４４に従って、これらの信号の一つをアナログ／デジタルコンバー タ２０へ送信する。信号はプロセッサＩ８か処理可能な形式へ変換され、受信信 号に従って異なるオペレーションか実行される。

プロセッサＩ８はグルコース含量が公知のサンプルにより光度計か較正される時 に、ユーザが調整可能なポテンショメータ２４から信号を受信する。このように して、アルゴリズムに定数が確立されそれにより測定透過率に基いてグルコース 含量が算出される。

バッテリ充電の変動を補償しなければならない場合、プロセッサ１８はバッテリ 充電回路３４から信号を受信する。

１００％透過率を基準として測定する場合、及び発光ダイオード３８と光センサ ４０間に配置された使い捨てキュベツト内の血液サンプルに対する透過率を測定 する場合、プロセッサ１８は光センサ４０からデジタル化された測定信号を受信 する。

プログラムされたアルゴリズムに基いて、プロセッサ１８はサンプルのグルコー ス含量を算出し結果をＬＣＤドライブ回路２６へ送ってＬＣＤディスプレイ２８ を介してユーザへ表示する。

第２Ｂ図、第３Ａ図、第３Ｂ図及び第４Ａ図、第４Ｂ図において、第２Ａ図と同 じ部品には同じ参照番号か付されている。

第３Ａ図のバリエーションでは、第２Ａ図のアナログ／デジタルコンバータはコ ンバレタ４５、デジタル／アナログコンバータ４６及びマイクロプロセッサ１８ の組合せと置換されている。プロセッサ１８はコンバータ４６ヘデジタル値を送 り、それはアナログ形式へ変換されコンパレタ５５の出力にゼロ信号が得られる まで引き続きプロセッサ１８により変化される。その他の機能は第２Ａ図と同じ である。

光学内体の基本設計を第５図に示す。この構成は互いに９０°に配置された２個 の発光ダイオード５２．６４からなっている。同じ光軸とするために、発光ダイ オードは搭載する前に調整しなければならない。

非希釈血液中のグルコース光度計は測定波長を６６０ｎｍ（第１図の符号１４） とすることができる。形成される色素に対する吸光度側面の測定結果により、測 定波長の単帯域幅は明確にしなければならない。非希釈血液中の測定グルコース に対する背景波長は７００ｎｍよりも上としなければならない。背景波長は市販 の発光ダイオードの波長、例えば７４０〜９４０ｎｍ、へ選定される。

第５図において、赤色発光ダイオード５２からの光線５０は６６０ｎｍにおいて 最大透光率を有し単帯域幅が１５μｍよりも小さい干渉フィルター５４、及び４ ５°の角度で配置されたミラーを通る。干渉フィルター５４及びミラー５６を通 過した光線は次に、非希釈全血及びグルコース試薬もしくはグルコース試薬生成 物を入れた、キュヘット５８の空胴６０を通り、キュヘットホルダー５５の開口 ５３を通って光検出器４０へ達する。光検出器４０には小さな集光レンズ６２を 設けることができる。

赤外発光ダイオード６４からの光線は４５°傾斜ミラー５６の裏面で反射され、 キュベツト５８の空胴６０を通って検出器４０に達する。赤外背景波長は平坦な 吸光度値（例えば、第１図の符号１５）において第２の発光ダイオード６４によ り測定され、赤外発光ダイオード６４の単帯域幅は殆んど重要性が無い。

キュベツト移送装置５５、例えばキャリッジ構造、に静止配置されたセンサによ り感知可能な素子を具備すれば、キュベツト５８を配置する位置に関する情報４ ３を容易にマイクロプロセッサ１８に与えることかできる。

キャリッジ５５をキュベツトコンベアとして使用する場合には、２個の固定磁気 リードリレーにより感知される磁石を設けることかできる。キャリッジかキュベ ツト５８を導入する位置へ抜き出されると、最大光、１００％光、が測定される 。

最大光は測定波長及び背景測定波長の両方に対して測定される。測定値、測定位 置におけるキュベツト及び最大光間の％商を連続的に算出することにより、透光 率測定値について光源５２．６４の経年現象か良く補償される。透光率値に対す る対数演算はマイクロプロセッサ１８もしくは吸光度測定値を受信する独立回路 （パージョン　“Ｂ’　）により実行される。

光検出器４０の電流は演算増幅器に到達し電圧に変換され、印刷回路板１６の信 号処理か容易になる。マイクロプロセッサ１８はまた検出器４０からの暗電流が 低いかどうかを監視し、使用する計算式にこれを考慮することにより暗電流の影 響を補償する。

第２図〜第４図には可動部が一つ、すなわちポテンショメータ２４、しかない。

ポテンショメータ２４はユーザか印刷回路板１６上で操作できる唯一の部品であ る。

ポテンショメータ２４はグルコース含量か公知の血液に対して光度計を較正する のに使用される。安定度を最大とするために、好ましくはポテンショメータの他 の部品は静止型とされる。

経済的理由により、マイクロプロセッサはワンチッププロセッサである。エネル ギを節減するために、デジットディスプレイはＬＣＤ型でありポテンショメータ は主変圧器もしくはバッテリにより給電される。

第４Ａ図に本発明のもう一つの実施例を示す。このバージョンでは調整が容易で 安定度を向上させた光度計を提供するマイクロプロセッサ１８のプログラミング 可能性が使用される。これは、プログラミングに関して、測定信号が帰還される デジタル／アナログコンバータ７０を介して２個の発光ダイオード３８への電流 供給を制御して行われる。こうして、測定に関して、ブランク値、１００％透光 率、を一定値に維持することかできる。この一定値はデジタル／アナログ変換の 分解能（ピット数）により電子的に決定される。

例 乾燥試薬により凍結乾燥して全血中の総グルコースを定量的に決定するための前 記米国特許第４．０８８．４４８号に記載されているタイプのマイクロキュベツ トを用意した。第１段階で水溶性試薬組成を調製してマイクロキュベツトに乾燥 試薬を充填した。水溶性グルコース試薬組成は次のものからなっている（体積１ ｍ１）。

１００単位ＧＤＨ、グルコースジヒドロゲナーゼ２０単位　ジアホラーゼ ２０　μｍｏｌ　ＮＡＤ ３０　μｍｏｌ　ＭＴＴ ２５■　ホワイトサポニン １ｍ７　イオン交換水 第２段階において、マイクロキュベツトにおよそ５μｌの試薬組成溶液を充填し 、分析空胴としても機能するサンプル吸収空胴６０内の壁間距離はおよそ０．１ ４ｍｍであった。

第３段階において、マイクロキュヘットを凍結乾燥させた。第３段階の後で、空 胴６０内に均一に分布されている非希釈血液中のグルコースを決定するための乾 燥試薬をマイクロキュヘット内に入れた。こうして、マイクロキュベツトの分析 準備を完了した。

インテル８７５１のマイクロプロセッサ１８を具備する前記したタイプの光度計 に全血中のグルコースを決定するための適切なプログラムを準備した。光度計は 、終点において、全血中のグルコースに関する結果をｍｍｏｌ／ｌて表示するよ うに順次プログラムされた。発光ダイオード３８は１５秒ごとに脈動されＳｍＳ ｍＳ灯点灯た。

異なるグルコース値を得るためにグルコースで”スパイク”した全血から得られ た結果を下表に示す。使用した基準方法はＭｅｒｃｋ、　Ｇｌｕｅ−Ｄ　Ｈ−法 １３８８６．１３８８７タイプからのグルコースジヒドロゲナーゼテスト方式で あった。基準方法では、分光測光はＵＶ範囲、すなわちＧｌｕｅ−Ｄ　Ｈ−法の バッキング仕様に従ったおよそ３４０ｎｍ、で実施された。基準方法は液相化学 型の分析法である。

“スパイク”された血液サンプルのグルコース含量は基準方法により３重に決定 された。各グルコース値について、１０個の前処理されたマイクロキュベツトに 非希釈血液を充填し本発明に従って６６０ｎｍの測定波長及び８８０ｎｍの背景 波長で分析を行った。得られた結果を下表に示す。

本発明に従った方法 値ｍｍｏＩ！／ｌ　ｃＶ％　終点までの時間（秒）ＣＶ＝変数係数 Ｆｉｇ、１ 波長 Ｆｉｇ、２Ａ Ｆｉｇ、　２　Ｂ Ｆｉｇ、　３Ａ Ｆｉｇ、３Ｂ Ｆｉｇ、４Ａ Ｆｉｇ、４Ｂ 国際調査報告 ８．１．□１．。ｎｉｌ　ＡＤｐｌ＋ｅ＋１゜、。ρＣＴ／ＳＥ　９０１００２ ７３国際調査報告 １頁の続き ＤＩｎｔ、　Ｃ１，’　識別記号　庁内整理番号陪　明　者　エルシン、スベン 　−　エリッ　スウェーデン国エスク、レンナート　ウスベーゲン　３９ 特表平４−５０４６６２　（１０） １、　−　２８３　６７　へルシングボルク、ドーベリ

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. １．全血サンプルが試薬と接触しそれがサンプル中のグルコースと化学反応を行 ってサンプル中で検出可能な色素濃度変化を生じその大きさがグルコース含量の 測定値と決定される、全血中のグルコース含量決定方法において、該方法は次の ステップ、すなわち、サンプルを受容する少くとも一つの空胴を有するマイクロ キュベット内へ非希釈サンプルを導入し、前記空胴は乾燥試薬により内部が前処 理されており前記化学反応は前記空胴内で行われ、 試薬に含まれる活性成分としてサンプルの血球に含まれているグルコースを露呈 させて全血溶血物の総グルコースを定量できるようにする少くとも一つの溶血剤 、及び化学反応に加わって少くとも血液ヘモグロビンの吸光範囲外の波長範囲で 色素濃度変化が生じることを保証する薬剤を選定し、 前記波長範囲においてキュベット内のサンプルに対して直接吸光測定を行う、 を特徴とする、全血中のグルコース含量決定方法。
2. ２．請求項１記載の方法において、化学反応としてグルコースデヒドロゲナーゼ 法を使用することを特徴とする、全血中のグルコース含量決定方法。
3. ３．請求項２記載の方法において、試薬に含まれる活性成分としてジアホラーゼ も選定されることを特徴とする、全血中のグルコース含量決定方法。
4. ４．請求項１〜３記載の方法において、試薬に含まれる活性成分としてムタロタ ーゼも選定されることを特徴とする、全血中のグルコース含量決定方法。
5. ５．請求項１〜４記載の方法において、前記色素濃度変化が生じる前記波長範囲 における前記吸光測定の他に、背景干渉を補償するために高い波長範囲において ２次吸光測定も行われることを特徴とする、全血中のグルコース含量決定方法。
6. ６．請求項５記載の方法において、前記色素変化が生じる最初に述べた波長範囲 は６５０ｎｍよりも上であり、前記補償測定が行われる前記第２の波長範囲は７ ００ｎｍよりも上、好ましくは７４０〜９４０ｎｍであることを特徴とする、全 血中のグルコース含量決定方法。
7. ７．請求項１〜６記載の方法において、前記化学反応は終点反応であり、前記吸 光測定は前記色素濃度変化が実質的に終止した時のみ行われることを特徴とする 、全血中のグルコース含量決定方法。
8. ８．全血サンプルが試薬と接触してサンプル中のグルコースと化学反応を行いサ ンプル中で検出可能な色素濃度変化を生じその大きさをグルコース含量の測定値 と決定するような全血中のグルコース含量決定を行うのに使用する使い捨てキュ ベット（５８）において、キュベット（５８）はサンプルを受容するための少く とも一つの空胴（６０）を有し、前記空胴の内部は乾燥状態の試薬により前処理 されており前記化学反応は非希釈状態でサンプルを導入した後に前記空胴内で行 われるようにされ、キュベットの試薬に含まれる活性成分はサンプルの血球に含 まれるグルコースを露呈させて総グルコースを決定できるようにするための少く とも一つの溶血剤と、化学反応に加わって色素濃度変化が少くとも血液ヘモグロ ビンの吸光範囲外の波長範囲で行われることを保証する薬剤で構成されており、 キュベットは少くとも部分的に透明とされていて前記波長範囲においてキュベッ トの空胴内のサンプルに対して直接吸光測定を行うことができることを特徴とす る、使い捨てキュベット。
9. ９．全血サンプルが試薬と接触してサンプル中のグルコースと化学反応を行いサ ンプル中で検出可能な色素濃度変化を生じその大きさをグルコース含量の測定値 と決定するような全血中のグルコース含量決定を行うのに使用する光度計におい て、前記光度計は乾燥状態の試薬により内部が前処理されており且つキュベット に非希釈状態のサンプルを導入した後にその中で化学反応を生じさせる少くとも 部分的に透明な使い捨てマイクロキュベット（５８）と組合せて使用するように されており、キュベット内のサンプルに対して直接吸光測定を行う光度計は前記 色素濃度変化が生じる前記波長範囲内の光波長を有する第１の発光ダイオード（ ５２）と、前記波長範囲とは異なる光波長を有する第２の発光ダイオード（６４ ）と、測定中にキュベット及びサンプルを介して前記第１及び第２の発光ダイオ ードから交互に伝達される光を受光する光検出器（４０）と、光検出器（４０） が測定する光量に基いて前記第１の発光ダイオード（５２）の光波長における透 過率と前記第２の発光ダイオード（６４）の光波長における透過率との差からサ ンプルのグルコース含量を算出する電子評価手段（１８，２０，２２，２４；４ ６）、及び前記評価手段が算出するグルコース含量を表示するディスプレイ手段 （２６，２８）を具備することを特徴とする、光度計。
10. １０．請求項９記載の光度計において、前記第１の発光ダイオード（５２）の光 波長は６５０ｎｍよりも上であり前記第２の発光ダイオード（６４）の光波長は ７００ｎｍよりも上、好ましくは７４０〜９４０ｎｍであることを特徴とする、 光度計。
11. １１．請求項９もしくは１０記載の光度計において、前記発光ダイオードの少く とも一方（５８）からの光が単色フィルター（５４）を通過するようにされてい ることを特徴とする、光度計。