JPH04505101A - ヒトラクトフェリンｃＤＮＡ配列 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ヒトラクトフェリンｃＤＮＡ配列 発明の背景 ラクトフェリンは乳汁、その他の分泌物、および体液中に存在する鉄結合性の糖 蛋白である。これは、多くの鉄結合性蛋白の１つであり、時としてトランスフェ リンとも呼ばれ、哺乳動物に於ける鉄の結合および輸送に関与している。

ラクトフェリンは新生授乳児の腸炎感染に抵抗する因子として考えられて来た。

この様な殺菌／静菌作用は、少なくとも一部はラクトフェリンの鉄結合能による ものと考えられる。ラクトフェリンは、鉄要求性微生物の鉄利用度を減少させ、 その成長、再生を阻害する。

ラクトフェリンはまた、抗ウィルス活性をも有し、更にその他の治療的応用性を 有すると考えられている。

ヒトラクトフェリン（ｈＬＦ）は、鉄に高い親和性を有し、１分子が２個のＦｅ ”″″カチオン結合することができる。完全なｈＬＦ蛋白がアミノ酸配列決定に かけられ、７０３個のアミノ酸からなると報告されている。これは２個の糖鎖結 合部位を持っている［Ｍｅｔｚ−Ｂｏｕｔｉｇｕｅら、「ヒトラクトフェリン： 他のトランスフェリンとのアミノ酸配列および構造比較」、Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｂ ｉｏｃｈｅｍ、、１４５巻、ｐｐ６５９−６７６（１９８４）　；　Ａｎｄｅｒ ｓｏｎら、ｒ３，２−Ａレゾル−ジョンでのヒトラクトフェリンの構造」、ｒ　 Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ’　１．Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ　ＳＡ、８４巻、ａｐ１ ７６９−１７７３（１９８７年４月）］。

その他の研究で、ラクトフェリン蛋白の４２８−７０３アミノ酸のクローン化ｃ ＤＮＡプローブが単離された。このｃＤＮＡ配列は、この蛋白のアミノ酸配列の 初期の分析と全般的に一致していた［ＲａｄＯら、「ヒト骨髄ライブラリーから のラクトフェリンｃＤＮＡの分離、並びに正常および白血病性の骨髄造血中のｍ ＲＮＡの発現」、Ｂ　１ｏｏｄ。

７９巻、Ｎｏ、４．ｐｐ９８９−９９３（１９８７年１０月）］。コノプローブ は、コード領域の約４０％と３′末端をカバーしていると報告されている。しか し完全に確認されたｃＤＮＡ配列は未だ報告されていない。

発明の要約 本発明は、７１１個のアミノ酸からなる蛋白をコードしている２１３３個のヌク レオチドからなるオープンリーディングフレームを含んでいる、ヒトラクトフェ リンの確証の得られたｃＤＮＡ配列に関与する。この７１１個のアミノ酸は、成 熟ヒトラクトフェリンの６９２アミノ酸の前の分泌シグナルペプチド配列に相当 する１９個のアミノ酸を含んでいる。このｃＤＮＡ配列および推定されたアミノ 酸配列は、既に発表されたデータとは異なっている。このｃＤＮＡ配列と推定ア ミノ酸配列は、複数の確認手段で証明されている。

この確認手段とは、以下の通りである。

１、複数の配列分析。

２、ｃＤＮＡから推定されたアミノ酸配列と、乳汁から分離されたｈＬＦの、通 常のアミノ酸配列決定によって得られたヒトＬＦのそれとの比較。ヒトラクトフ ェリン蛋白をコードしているこの唯一のｃＤＮＡ配列は既知または文献に記載の 種々の応用性を有している。

３、ｃＤＮＡからのｈＬＦヒト蛋白転写および翻訳と、抗ｈＬＦ抗体を用いた陽 性同定。

ｃＤＮＡ配列についての本発明を使用し、組換ヒトラクトフェリンを製造するこ とができ、かくして治療および栄養学的利用のためのヒト蛋白源を提供すること となる。本発明の確認されたｃＤＮＡは、このｃＤＮＡ配列を複製するために、 適当なりローニングビイクルに入れて使用することができる。また、このｃＤＮ Ａは、ヒトラクトフェリンの発現のためのベクター系に入れることもできる。

この発明は、ｃＤＮＡの特定の使用に限定されるものではない。組換え技術によ って誘導されるヒト蛋白である組換ｈＬＦは、種々利用され得る。この遺伝子は 、牛やその他の農学的に重要な動物の如き哺乳動物系に移し、乳汁中で発現させ ることができる。ヒトラクトフェリンの導入および動物の乳汁中での発現により 、子豚に代表される鉄欠乏に対抗することができる。ヒトラクトフェリン遺伝子 を導入し、発現させることにより、細菌やウィルス感染に対する動物の病的抵抗 性を改善する。例えば、哺乳動物の腺に於けるヒトラクトフェリンの組織特異的 発現は、授乳児に、発現された遺伝子の殺菌および殺ウイルス効果を与え、治療 目的のため分泌蛋白の生産技術となろう。

この遺伝子は、ｈＬＦ生産のための適当なりローニングベクターに入れることが できる。組換えにより生産されたｈＬＦは、鉄の輸送および分布を促進するため の治療的添加物として、ヒトまたは動物用飼料を含む種々の製品に、あるいは、 殺ウイルス性および殺細菌性品質のものとして、点眼、コンタクトレンズ、その 他の眼科用溶液、局所的皮膚ケア用剤、点耳、口腔洗浄、チューインガム、歯み がきペーストなどに使用することができる。組換ｈＬＦは、安全に摂取し得ると 共に、局所的に適用し得る、安全な天然に存在する生産物を提供するものである 。

図面の簡単な説明 第１図はｈＬＦｃＤＮＡの模式図であり、これには５“非翻訳領域、分泌ペプチ ドシグナル配列、成熟ラクトフェリン、および３゛非翻訳領域が含まれている。

第２図はｃＤＮＡ配列であり、これにはヒトラクトフェリン蛋白およびシグナル ペプチド配列の推定アミノ酸配列も含まれている。

第３図は完全なｃＤＮＡから発現された組換ヒトラクトフェリン蛋白のオートラ ジオグラフィーを模式的に示したものである。

第４図は、２，１４０ｂｐヒトラクトフ工リン配列のイン・ビトロ翻訳の結果、 および網状赤血球の溶血液中のｈＬＦヒト蛋白−トラジオグラフィーの模式図で ある。

発明の詳細な説明 ヒトラクトフェリン（ｈＬＦ）をコードする完全長のｃＤＮＡが単離され、その 分析が完了した。その推定アミノ酸配列を公表されたヒトＬＦのアミノ酸配列と 比較することにより、そのｃＤＮＡ配列はヒトラクトフェリンｃＤＮＡであるこ とが確認された。ラクトフェリンの発現は、ｃＤＮＡおよびプラスミドベクター から、真核細胞発現系で観察された。ラクトフェリンの存在は、抗ヒトラクトフ エリン抗体および相対的分子量測定により、標準的なウェスタン免疫プロット分 析で確認された。

第１図はラクトフェリンｃＤＮＡの模式図である。その配列は、長さ１７ヌクレ オチドの、初めの５′非翻訳領域として一般に記載し得る。次の部分は、１９ア ミノ酸の、メチオニンから始まる分泌シグナルペプチドをコードしている５７ヌ クレオチドである。ｃＤＮＡの次の配列は、６９２アミノ酸成熟ヒトラクトフエ リン蛋白をコードしており、ＣＤＮＡの終りの部分である２０８ヌクレオチドか らなる３′非翻訳領域がこれに続いている。この完全な配列は、２．３５８ヌク レオチドの長さである。ｈＬＦヒト蛋白リコジル化部位を含んでいる。分泌シグ ナル配列を有するｈＬＦヒト蛋白期待される分子質量、７８，４０３ダルトンで あり、成熟ｈＬＦは、グリコジル化による炭水化物を加えずに７６．３８６ダル トンである。

第２図は、分泌シグナルペプチドおよび成熟ヒトラクトフェリン蛋白の推定アミ ノ酸配列を伴なったｃＤＮＡ配列である。第２図の数値は、５′末端から始まる ヌクレオチドに相当する。２個の鉄原子との結合部位があり、それぞれの鉄との 結合に関与する４個のアミノ酸が存在する。Ａｓｐ８０、Ｔｙｒｌ１２、Ｔｙｒ ２０９、およびＨ１ｓ２７３のアミノ酸は、１個の鉄との調整に必要であり、Ａ ｓｎ１５７Ｔｙｒ４５５、Ｔｙｒ５４８、およびＨｉｓ６１７のアミノ酸はもう １つの鉄に結合する。Ａｓｎ１５７およびＡｓｎ４９８位に２個のグリコジル化 部位が存在する。数値は推定されたアミノ酸配列を示している。蛋白配列の一列 当たり、２５のアミノ酸が存在する（ヌクレオチド１８から始まる）。　。

ヌクレオチド配列分析は、ヒト前立膝ｃＤＮＡライブラリーから分離したｃＤＮ Ａについて行なわれた。前立腺ｃＤＮＡライブラリーから、非翻訳部分およびシ グナル配列を含む完全な５゛末端を含んでいる２、１４ｏｂｐのｃＤＮＡが得ら れた。カルボキシ末端の３個のアミノ酸および非翻訳領域を含む３′末端は、単 球ｃＤＮＡライブラリーおよびヒト前立膝ｃＤＮＡライブラリーの両者から、２ ０８ｂｐｃＤＮＡとして得られた。

第２図のデータは、本発明の完全長ｃＤＮＡ配列を示している。

５°非翻訳領域およびシグナルペプチドを含む完全な配列は報告されたことがな かった。更に、既に報告されているアミノ酸配列は、本発明の、ｈＬＦの推定ア ミノ酸配列と異なっている。以下の表１は、本発明のアミノ酸配列と、Ｍｅｔｚ 　−Ｂ　ｏｕｔｉｇｕｅら（Ｅｕｒ、Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　、４５巻、６５９ −６頁、１９８４）によって報告されたものとの相異をまとめたものである。こ の表では、アミノ酸の番号付けは、シグナルペプチド配列の最初のメチオニンを アミノ酸１として始まっている。

表１ ヒトラクトフェリンのアミノ酸配列の比較ｈＬＦｃＤＮＡから　変化　Ｍｅｔｚ 　−Ｂ　ｏｕｔｉｇｕｅ配列＃３０　Ｔｈｒ　置換　Ａｌａ ＃４８　Ａｒｇ　置換　Ｌｙｓ ＃１４１Ａｒｇ　挿入　なし ＃１５５Ｐｈｅ　置換　Ｌｅｕ ＃１５６Ｌｅｕ　置換　Ｐｈｅ ＃１７０Ａ１ａ　挿入　ナシ ＃２０４Ｓｅｒ　置換　Ｌｅｕ ＃２０６ＧＬｎ　置換　Ｌｙｓ ＃２０９ＴＹｒ　置換　Ｌｙｓ ＄３２１Ｌｙｓ　置換　Ｐｈｅ ＃３８６Ｇ１ｕ　置換　Ｇｌｎ ＃３９２Ｓｅｒ　置換　Ｔｒｐ ＃４１０Ａｓｐ　置換　Ａｓｎ ＃４１１−４１２　削除　ｃＤＮＡからの推定アミノ酸配列に存在しない蛋白中 の １３アミノ酸 １５３２ＧＩｎ　置換　Ｇｌｕ 第３図は完全なｈＬＦｃＤＮＡからのヒトラクトフェリン蛋白の発現を示してい る。この完全な２３５８ｂｐ　ｈＬＦｃＤＮＡを、真核性発現ベクター、ｐ９１ ０２３（Ｂ）のアデノウィルス主要後記プロモーターの下流のＥｃｏＲＩ部位に 結合した。

このプラスミドベクターはジェネティック・インステイチュート（ケンブリッジ 、マサチューセッツ）から提供を受けたが、刊行物（Ｗｏｎｇら、５ｃｉｅｎｃ ｅ２８８巻、８１０−８１５頁、１９８５）に記載されている。ｈＬＦｃＤＮＡ 発現ベクターをＣ０５Ｍ−６サル腎細胞に、標準的な組織培養トランスフェクシ ョン条件で導入した（Ｗｉｇｌｅｒら、１９７９、「原核生物および真核細胞の 遺伝子により哺乳動物細胞の形質転換」、Ｃｅ１ｌ、１６巻、７７７−７８５頁 ）。このＣＯ８細胞は通常ラクトフェリンを発現しない。トランスフェクション の４８時間後、細胞を収穫し、粗細胞抽出物を調製した。細胞抽出物中に発現さ れた蛋白の標準的なウェスタン免疫プロットにより、ヒトラクトフェリンの陽性 同定を行なうと共に、ヒトラクトフェリンに対する市販の抗体（シグマ）を使っ て細胞増殖培地中に分泌された蛋白の陽性同定を行なった。抗ラクトフェリン抗 体と結合した蛋白は、放射性ヨウ素で標識した、該抗体と反応するプロティンＡ を用いて検出した。免疫プロットをオートラジオグラフィーにかけ、ヒトラクト フェリン蛋白を同定した。第３図は、ラクトフェリンｃＤＮＡ発現ベクターでト ランスフェクトした組織培養細胞から調製した４個の細胞抽出物に発現されたヒ トラクトフェリンを示すオートラジオグラフィーフィルムを示している（レーン ５〜８）。レーン５〜８は、トランスフェクトされた細胞は全て、抗ラクトフェ リン抗体と免疫反応し、ヒトラクトフェリン（Ｍｒ＝　７８．４０３ダルトン） と同じ分子量を持ったヒトラクトフェリンを含んでいることを示している。ｃＤ ＮＡでトランスフェクションされなかった対照細胞は、ラクトフェリンを含んで いなかった（レーン３および４）。増殖培地を分析した結果、ヒトラクトフェリ ンは、トランスフェクトされた細胞からこの培地にも分泌されていたが、対照細 胞からは分泌されていないことがわかった（レーン１）。

結論として、このｃＤＮＡは、分子量サイズの比較および抗ヒトラクトフェリン との免疫反応性がられかる様に、乳汁から分離されたヒトラクトフェリン蛋白と 類似している組換ヒトラクトフェリン蛋白をコードしている。更に、ヒトラクト フェリンが、ｃＤＮＡを発現する組織培養細胞の増殖培地中へ分泌されているこ とから、分泌シグナルペプチド配列は機能している。

第４図は、ヒトラクトフェリンｃＤＮＡのインビトロでの転写および翻訳後に沈 殿したヒトラクトフェリン蛋白を模式的に表わしたものである。２１４０ｂｐの ｃＤＮＡはヒト前立膝ｃＤＮＡライブラリーからのものであり、５゛非翻訳領域 および３°末端に於ける最後の２１８ｂｐを欠く第２図のｃＤＮＡ配列に関連し ている塩基対の残りを含んでいる。２１４０ｂｐｃＤＮＡは、プラスミドベクタ ーｐＧＥＭ４（Ｐｒｏｍｅｇａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ、、　Ｍａｄｉｓｏｎ、　Ｗ　 Ｉ　５３７１１−５３０５）の、ＳＰ−プロモーターの下流のＥｃｏＲＩ部位に 結合させた。このプラスミド構築物を、制限酵素Ｈｉｎｃ　ＩＩまたはＸＢＡＩ を用いて、ｈＬＦｃＤＮＡの３゛末端で線状化した。この線状ＤＮＡ鋳型を、製 造業者のプロトコールの記載に従い（Ｐｒｏｍｅｇａ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｌ　９８８／１９８９カタログおよび応用ガイド）、リボヌクレオチドの存在下 で純化５ＰｓＲＮＡポリメラーゼを使ってインビトロで転写した。

得られたｍＲＮＡを、７５ｕＣｉ”Ｓメチオニン（８００Ｃｉ／ｍｍｏｌ。

Ａ　ｍｅｒｓｈａＩｌｌ）の存在下、ミクロコツカルヌクレアーゼ処理ウサギ網 状赤血球溶血液（Ｐ　ｒｏｍｅｇｅにより記載）および１００ｎｎＲＮＡ鋳型を 使って翻訳した。翻訳反応物１００μｌをウサギ抗ヒトラクトフェリンＩ　ｇＧ 　Ｉ　Ｑ　μｇ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｓｔ、　Ｌ ｏｕｉｓ、　ＭＯ。

６３１７．８）と４℃で２時間、５ＱｍＭトリス、ｐＨ７，５１０，１５Ｍ　Ｎ ａＣ１１０，０５％ツイーン２０（ｌｐ緩衝液）中でインキュベートすることに より、インビトロで合成されたラクトフェリンを免疫沈降させた。反応容量は２ ００μ！であった。免疫反応性ラクトフェリンは、５０ＭｇのプロティンＡセフ ァロース（ファルマシ７．Ｕｐｓａ１１ａ、　Ｓ　ｗｅｄｅｎ）と１時間インキ ュベートして沈殿させた。５分間１０゜０００ｇで遠心して免疫沈降を行ない、 沈殿物を４容量の１ｐ緩衝液で５回洗浄した。全翻訳産物および免疫沈殿物を、 変性７．５％ポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけた。５０％メタノールで固 定した後、ゲルをＥｎ’Ｈａｎｃｅ（ＮＥＮ、　ＤｕＰｏｎｔ、　Ｗｉｌｍｉｎ ｇｔｏｎ、　ＤＥ１９８０１）中で１時間インキュベートし、蒸留水で洗浄した 。次いでゲルを減圧下で乾燥させ、−７０℃でコダックＸ−〇ＭＡＴＸＡＲフィ ルムに感光させた。

レーン１は、翻訳蛋白のサイズを見積るために使用される１４Ｃ蛋自分子量マー カーである。レーン２はネガティブコントロール（対照）であり、ｍＲＮＡを翻 訳ミックスに加えない場合のこの系では、１１８標識蛋白は翻訳されないことを 示す。レーン３および４は、ラクトフェリンｓ＋ＲＮＡが２つの別々のＤＮＡ鋳 型からの調製の後に加えられる時に得られる全翻訳産物を示している。主要な蛋 白のバンド（矢印で示す）はヒトラクトフェリンである。これは、蛋白をゲルに 塗布する前に（レーン６）、抗ヒトラクトフェリンで翻訳産物を免疫沈降した時 に検出される唯一のバンドである。５ＤＳ−ＰＡＧＥによる分子質量の測定は蛋 白の二次構造による正確な分子量に相当しない。しかし、この値は、対照との比 較において、関連して変動する。翻訳されたラクトフェリンのサイズ分析は、第 ４図に示されている。この蛋白は、ヒトラクトフェリンの期待された分子買置（ 約７８ｋｄ）のところに移動した。対照レーンの６８ｋｄマーカーバンドより高 い移動率を示すレーン３および４の主要なバンドは、５ＤＳ−ＰＡＧＥ上のｈＬ Ｆ蛋白の期待される分子質量に相当する。

全ｃＤＮＡ配列および推定アミノ酸配列を使用することの他に、全蛋白より小さ いポリペプチドも有用であり得る。例えば、アミノ酸７４−２７５の間の領域は 、生物学的に利用可能な鉄または殺菌／殺ウイルス品質のため、蛋白の残りを伴 なうことなく使用し得る鉄結合ドメインを含んでいる。

ｃＤＮＡ配列は、３種の起源の配列の確証によって確認された。

真核性発現系でのｃＤＮＡの発現および特異的なラクトフェリン抗体を使用する ウェスタン免疫プロット分析による発現ラクトフェリン蛋白の検出によって、本 ｈＬＦｃＤＮＡはラクトフェリンをコードしていることが示された。

（ハ ４杖Ｉ）（／’ｉの３ダロ ＡＡＧ　ＣＴＣＧＡＡ　ＣにＣＣＴＧ　ＡＡＡ　ＣＡＧ　ＧＴＧ　ＣＴＧ　ＣＴ ＣＣＡＣＣＡＡ　ＣＡＧ　ＧＣＴ　ＡＡＡ　ＴｒＴＧにＧ　ＡＧＡ　ＡＡＴ　Ｇ ＧＡ　ＴＣＴ　ＧＡＣＴＧＣＣＣＧ　ＧＡＣＡＡＧ　ｍ　ＴＧＣＴＴＡ　ＴｒＣ ＣＡＧ　ＴＣＴＧＡＡ　ＡＣＣＡＡＡ　ＡＡＣＣＴＴ　ＣＴＧＴＴＣＡＡＴ　Ｇ ＡＣＡＡＣＡＣＴ　ＧＡＧ　ＴＧＴ　ＣＴＧ　ＧＣＣＡにＡＣＴＣＣＡＴ　ＧＧ ＣＡＡＡ　ＡＣＡ　ＡＣＡ　ＴＡＴ　ＧＡＡ　ＡＡＡ　ＴＡＴ　ＴＴＧ　にＧＡ 　ＣＣＡ　ＣＡＧ　ＴＡＴ　ＧＴＣＣＣＡ　にＣＣＡＴＴ　ＡＣＴ　ＡＡＴ　Ｃ ＴＧ　ＡＡＡ　ＡＡＧ　ＴＧＣＴＣＡ　ＡＣＣＴＣＣＣＣＣＣＴＣＣτＧＧＡＡ ＧＣＣＴＣＴ　ＧＡＡ　ＴＴＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧ　ＴＡＡＡＧＭＡＣＣＣＴＣ ＡＧＣＣＡＴＴＣＡＣＴＧＣＣＣＣＣＡＧＣＴＣＴＴＣＴＣＣＣＣＡＧにＴＧＴ ＧＴＴＧ　ＧにＧＣＣＴＴＧＧＣτＣＣＣＣＴＧＣＴＧ　ＡＡＧＧＴＧＧＣ；Ｇ Ａ　ＴＴＣＣＣＣｋＴＣＣＡＴＣＴＧＣＴＴＡＣＡＡＴＴＣＣＣＴＧＣＴＧＴＣ ＧＴＣＴＴＡＧＣＡＡＧＡＡＧＴＡ　ＡＡＡＴＧＡＧＡＡＡ　ＴＴＴＴＧＴＴＧ ＡＡ　ｖ鎮ん仏Ａｖ譲Ｍ請んすＡＭ涛んｖ請Ａん鴇Ａ４杖４（つつ４杖目 ｈＬＦ　ｃＤＮＡ　かう４社月ａ＋ｉりｈ７９ワン１に臼ｑザ６φ（ＣＯ５Ｍ６ −趙ＩＪＦ！Ｊ＋ ダ勺　、÷二 ２１４０　ｂｐ　ｈＬＦ＠己り（」９インシトｏ＄ａ４ｆＡ国際調査報告 １．、ＩＡ＊ｏｍ１．陶ｐＣＴ／υＳ　９０１０２３５６

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. １．第２図に示すＤＮＡ配列からなる、ヒトラクトフェリン蛋白をコードしてい るｃＤＮＡ配列。
2. ２．第２図に示すｃＤＮＡ配列と類似する配列からなる、ヒトラクトフェリンの 機能的等価物をコードしているｃＤＮＡ配列。
3. ３．第２図に示すｃＤＮＡ配列から生産される産物からなる合成ヒトラクトフェ リン。
4. ４．第２図に示すｃＤＮＡ配列と類似する配列から生産される産物からなる、合 成ヒトラクトフェリン機能的等価物。
5. ５．第２図のｃＤＮＡ配列を使用することからなる、合成ヒトラクトフェリン産 物を生産する方法。
6. ６．第２図に示すｃＤＮＡ配列と類似する配列を使用することからなる、合成ヒ トラクトフェリン機能的等価物を生産する方法。
7. ７．真核性発現系を用いる、請求項５または６に記載の合成ヒトラクトフェリン およびその機能的等価物の生産方法。
8. ８．Ｆｅ結合部位を有する鉄結合ドメインの少なくとも１つを含んでいるヒトラ クトフェリン蛋白をコードしている第２図のｃＤＮＡの一部を含んでいるｃＤＮ Ａ配列。
9. ９．該ｃＤＮＡ配列の１部の類似物が、Ｆｅ結合部位を有する少なくとも１つの 鉄結合ドメインと機能的等価物をコードしている請求項８に記載のｃＤＮＡ配列 。
10. １０．請求項８に記載の合成ヒトラクトフェリンの１部を生産することからなる 方法。
11. １１．請求項９に記載の合成ヒトラクトフェリン機能的等価物の１部を生産する ことからなる方法。
12. １２．Ｆｅ結合部位を有する鉄結合領域の少なくとも１つを含んでいる第２図に 記載のｃＤＮＡ配列から生産される合成ヒトラクトフェリン産物の１部からなる 、合成ヒトラクトフェリン産物。
13. １３．Ｆｅ結合部位を有する鉄結合領域の少なくとも１つの機能的等価物を含ん でいる第２図のｃＤＮＡ配列の等価物によって生産されるヒトラクトフェリン蛋 白の１部の合成機能的等価物からなる合成ヒトラクトフェリン産物。