JPH04506069A - 安定化された効力のあるｇｒｆアナログ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 安定化された効力のあるＧＲＦアナログ序 本発明は、ヒトおよび他の動物、特に哺乳動物において下垂体の機能に影響を及 ぼすペプチドに関する。特に、本発明は、下垂体による成長ホルモンの放出を促 進するペプチドに指向される。本発明のペプチドは、ｉｎ　ｖｉｖｏにおいて効 力があり、血漿中でより安定であり、選択されたペプチドは、天然のＧＲＦ配列 よりも中性のｐＨで水性環境中でより安定である。

発明の背景 生理学者は、長い間、視床下部が、各脳下垂体ホルモンの分泌を刺激または抑制 する視床下部産生特別物質によって腺下垂体の分泌機能を抑制することを認識し てきた。１９８２年には、ヒト膵臓腫瘍の抽出物からヒト膵臓（腫瘍）放出因子 （ｈｐＧ　ＲＦ　）が単離され、精製、特徴付、合成、試験がなされ、それは下 垂体による成長ホルモン（ＧＨ）の放出を促進することが判明した。グイルミン 、アール（Ｇｕｉｌｌｅａ＋ｉｎ、　Ｒ，）ら、サイエンス（Ｓ　ｃｉｅｎｃｅ ）、第２１８巻、第５８５頁〜第５８５頁（１９Ｂ２）。それ以来、ラット種、 ブタ種、ヒツジ種、ウシおよびヤギ種を含めた他の種ならびに人類からの対応す る視床下部ＧＨ放出因子も特徴付けられ、合成された。

ヒト視床下部ＧＲＦ（ｈＧＲＦ）は、ｈｐｃ　ＲＦと同一の式、すなわち：Ｈ− Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ａｌａ　−Ｉ　ｌｅ　−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ ｅｒ　−Ｔ　ｙｒ　−Ａ　ｒｇ　−Ｌ　ｙｓ　−Ｖ　ａｌ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｇ　 Ｉｙ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｓ　ｅｒ　−Ａ　Ｉａ　−Ａｒｇ−Ｌｙｓ− Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｉｎ−Ａｓｐ　−Ｉ　ｌｅ−Ｍｅｔ−８ｅｒ−Ａｒｇ　−Ｇ 　ｉｎ　−Ｇ　ｉｎ　−Ｇ　ｌｙ　−Ｇ　ｌｕ　−Ｓ　ｅｒ　−Ａ　ｓｎ　−Ｇ 　Ｉｎ　−Ｇ　ｌｕ　−Ａ　ｒｇ　−Ｇ　ｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ａｒ ｇ−Ｌｅｕ−ＮＨｘを有することが判明した。

ラットＧ　ＲＦ　（ｒＧ　ＲＦ　）は、位置８にＳｅｒ残基を有し、式：Ｈ−Ｈ ｉｓ　−Ａ　ｌａ　−Ａ　ｓｐ　−Ａ　ｌａ　−Ｉ　ｌｅ　−Ｐ　ｈｅ　−Ｔ　 ｈｒ　−Ｓ　ｅｒ　−Ｓ　ｅｒ　−Ｔ　ｙｒ　−Ａｒｇ−Ａｒｇ　−Ｉ　ｌｅ− Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ　−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ −Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｇｌｕ　−１１ｅ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｇｉｎ　−Ｇ ｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｇｉｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−５ ｅｒ　−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−ＯＨを有することが判明した。（例えば、米 国特許第４，５９５．８７６号参照）。

ウシＧ　ＲＦ　（ｂＧ　ＲＦ　）は、式：　Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ａｌ ａ　−Ｉ　Ｉｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−８ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ− Ｖａｌ−Ｌｅｕ　−Ｇ　ｌｙ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｓ　ｅｒ　−Ａ　ｌ ａ　−Ａ　ｒｇ　−Ｌ　ｙｓ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ａｓｐ 　−１１ｅ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｇｉｎ−Ｇｉｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｒ ｇ　−Ａｓｎ−Ｇｉｎ−Ｇｌｕ−Ｇｉｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａ ｒｇ−Ｌｅｕ　−ＮＨ，を有することが判明した。

ブタＧＲＦは、位置２８にＳｅｒ残基を有することが判明した。

天然ＧＲＦ配列は、血漿酵素によって迅速に不活化されることが報告されている 。迅速な分解は、これまでジペプチジルアミノペプチダーゼ−■とも命名されて いたジペプチジルペプチダーゼ、■型（ＤＰＰ−ＩＶ）によるペプチドの２−３ 結合の開裂を意味する。フローマン、エル・エイ（Ｆ　ｒｏｈｍａｎ、　Ｌ、　 Ａ、）ら、ジャーナル・オブ・クリ二カ／Ｌ／−インベスティゲーション（Ｊ　 、　Ｃｔｉｎ、　Ｉ　ｎｖｅｓｔ、　）、第７８巻、第９０６頁〜第９１３頁（ １９８６）。

ＧＲＦの代謝的安定性およびジペプチジルペプチダーゼ開１１に抗してＧＲＦペ プチドを保護するための種々の方法が提案されており、それにはフェリックス（ Ｆｅｌｉｘ）ら、新規な線形および環状ＧＲＦアナログの合成および生物学的活 性（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏ ｆ　ｎｏｖｅｌ　１ｉｎｅａｒ　ａｎｄ　ｃｙｃｌｉｃ　Ｇ　ＲＦ　ａｎａｌｏ ｇｓ）、ペプタイズ（Ｐ　ｅｐｔ　１ｄｅｓ）、ケミストリー・アンド・バイオ ロジー（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄ　Ｂ　ｔｏｌｏｇｙ）、プロシーディンゲス ・オブ・ザ・テンス・アメリカン−ペプタイド・シンポジウム（Ｐｒｏｃ、　１ ０ｔｈ　Ａｍ、ＰｅｐｔｉｄｅＳ　ｙｓｐｏｓｉｕｍ）、ジー・アール・マーシ ャル（Ｇ、　Ｒ，Ｍａｒｓｈａｌｌ）編、ニスコム・サイエンス・パブリノシャ ーズ（Ｅ　Ｓ　ＣＯＭ　Ｓ　ｃｉ、　Ｐ　ｕｂｌｉ−ｓｈｅｒｓ）、ライデン、 オランダ王国、第４６５頁〜第４６７頁（１９８８）が含まれるが、彼らは、酵 素分解に対するそれらのＮ−末端の安定性を増強した、１位をｄｅｓＮＨ２−Ｔ ｙｒで、または／および２位をＤ　−Ａ　ｌａで置換したＧＲＦアナログについ て報告している。

この情報は、近年、フローマン（Ｆ　ｒｏｈｍａｎ）ら、血漿におけるヒト成長 ホルモン放出ホルモンのジペプチジルペプチダーゼ−■およびトリブシン様酵素 分解（Ｄ　１ｐｅｐｔｉｄｙｌｐｅｐｔｉｄａｓｅ−■ａｎｄ　ｔｒｙｐｓｉｎ −１ｉｋｅｅｎｚｙａ＋ａｔｉｃ　ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕａ＋ａ ｎ　ｇｒｏｗｔｈ　ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅ　ｉｎ 　ｐｌａｓｍａ、）、ジャーナル・オブ°クリ３カル・イン６ステイゲーンーａ ン（Ｊ　、　Ｃｌｉｎ、　Ｉ　ｎｖｅｓｔ、　）、第８３＠、第１５３３頁〜第 １５４０頁（１９８９）によって確認された。さらに、後者のグループは、Ｎ− 末端チロジン残基のＮ−アセチル化およびＮ−メチル化ならびにＧＲＦにおける Ｄ−Ｔｙｒ−１での置換が２−３位での開裂を完全に抑制することを示した。他 方、Ｔｙｒ−１のアルファーメチル化は、ＤＰＰ−ＩＶによる分解を部分的にプ ロ・ツクしただけである。

マーフィー、ダブリュ・エイ（Ｍｕｒｐｈｙ、　Ｗ、Ａ、）およびコイ、ディー ・エイチ（Ｃｏｙ、　Ｄ、Ｈ，）、成長ホルモン放出因子の効力のある長く作用 するアルキル化アナログ（Ｐｏｔｅｎｔ　ｌｏｎｇ−ａｃｔｉｎｇ　ａｌｋｙｌ ａｔｅｄａｎａｌｏｇｓ　ｏｆ　ｇｒｏｗｔｈ　ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｌｅａｓ ｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ）、パブタイド１ノサーチ（Ｐ　ｅｐｔｉｄｅ　Ｒｅｓｅ ａｒｃｈ）、第１巻、第３６頁〜第４１頁（１９８８）には、ペプチド鎖内でリ シンの側部のＮ−アルキル化を伴いないしは伴わずに、Ｎ−末端アミノ酸をＮ− アルキル化またはＮ−アリルアルキル化した結果、酵素分解に対する耐性の増強 を示すＧＲＦのアナログが開示されている。

天然ＧＲＦ配列は、１５−位にＧＩＹ残基を有する。１５−位にＡｌａまたはＬ ｅｕを有するアナログはＧＨ放出効力を増加させることが知られている。米国特 許第４，６４９．１３１号および第４．７３４゜３９９号ならびにリング、エヌ （Ｌ　ｉｎｇ＋　Ｎ、）ら、クオ・バブイス？（Ｑｕｏ　Ｖａｄｉｓ　？）、シ ンポジウム（Ｓ　ｙｍｐｏｓｉｕｍ）、サノフィ・グループ（Ｓａｎｏｆｉ　Ｇ ｒｏｕｐ）、１９８５年５月２９〜３０日、ツールースーラベージ（Ｔｏｕｌｏ ｕｓｅ−Ｌａｂｅｇｅ）、フランス（第３０９頁〜第３２２頁）参照。Ｇｌｙ− １５をＶａｔまたはアルファーアミノ−イン酪酸と置換すると、その結果、ＧＲ Ｆアナログの効力が増強された［フェリックス（Ｆ　ｅｌｉｘ）ら、新規な成長 ホルモン放出因子アナログの合成および生物学的活性（Ｓ　ｙｎｔｈａｓｉｓ　 ａｎｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｎｏｖｅｌ　ｇｒｏ ｗｔｈｈｏｒｍｏｎｅ　ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ａｎａｌｏｇｓ） 、ベプタイズ（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）　１９８６、ウォルター・デ・グルイタ−・ アンド・カンパニー（Ｗａｉｔｅｒｄｅ　Ｇｒｕｙｔｅｒ　＆　Ｃｏ、）、ベル リン−ニューヨーク、第４８１頁〜第４８４頁（１９８７）。

エイ−エム・フエリノクス（Ａ、Ｍ、　Ｆｅ１ｉｘ）は、Ａ　ｌａ”　ｈ−Ｇ　 ＲＦ　（１−２９）ＮＨ，およびｄｅｓＮＨｔ−Ｔｙｒ’、Ｄ−Ａｌａ’、Ａｌ ａ”　ｈＧＲＦ（１−２９）ＮＨ，の調製および試験を含めた増強および／また は延長された生物学的活性を有するアナログを合成するためのプログラムについ て報告した。例えば、米国特許第４，８４９．１３１号および第４．７３４，３ ９９号ならびにエイ・エム・フェリックス（Ａ、Ｍ。

Ｆｅ１ｉｘ）、イー・ピー・ハイｖ−（Ｅ、　Ｐ、　Ｈｅｉ＋ｍａｒ）、ティー ・エフ、・モウルス（Ｔ、　Ｆ、Ｍｏｗｌｅｓ）、エイチ・ビセンバイス（Ｈ、 Ｂ　１ｓｅｎｂｅｉｓ）、ビー・ロイング（Ｐ　、　Ｌ　ｅｕｎｇ）、ティー・ ジェイ・ランプロス（Ｔ、Ｊ、Ｌ　ａＩＩｌ−ｂｒｏｓ）、エム・アーマノド（ Ｍ、　Ａ　ｈ＋５ａｄ）、シー・ティ・ワン・アンド・ボウル・ブラジーオ（Ｃ ，−Ｔ、Ｗａｎｇ　＆　Ｐａｕｌ　Ｂｒａｚｅａｕ）：新規な成長ホルモン放出 因子アナログの合成および生物学的活性（Ｓ　ｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｂｉ ｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｎｏｖｅｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｈｏ ｒｍｏｎｅｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ａｎａｌｏｇｓ、）、ペブタイ ズ（Ｐ　ｅｐｔｉｄｅｓ）　１９８６、第４８１頁〜第４８４頁（１９８７）； フエリノクス、エイ・エム（Ｆｅｌｉｘ、Ａ、Ｍ、）、ワン、シー・ティー（Ｗ ａｎｇ、Ｃ，Ｔ、）、ノ１イマー。

イー（Ｈｅｉａ＋ｅｒ、　Ｅ、）、フォーニア°エイ（Ｆｏｕｒｎｉｅｒ、　Ａ 、）、ボリン。

ディ（Ｂｏｌｉｎ、　Ｄ、）、アーマノド、エム（Ａ　ｈ＋ｓａｄ、　Ｍ　、　 ）、ランプロス、ティー　（Ｌ　ａｍｂｒｏｓ、　Ｔ　、　）、モウルス、ティ ー（Ｍｏｗｌｅｓ＋　Ｔ、）、およびミラー。

エル（Ｍｉｌｌｅｒ、　Ｌ、）　：新規な線状および環状ＧＲＦアナログの合成 および生物学的活性（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａ ｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆｎｏｖｅｌ　１ｉｎｅａｒ　ａｎｄ　ｃｙｃｌｉｃ　ＧＲ Ｆ　ａｎａｌｏｇｓ、）、ベプタイズ（Ｐ　ｅｐｔｉｄｅｓ）、ケミストリー・ アンド・バイオロジー（Ｃｈｅ＋＊１ｓｔｒｙａｎｄ　Ｂ　ｉｏｌｏｇｙ）、プ ロシーディンゲス・オブ・ザ・テンス・アメリカ７−ペプタイド・シンポジウム （Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｉ　ｏｆ　ｔｈｅ　１０ｔｈＡ＋＋ｅｒｉｃａｎ　Ｐｅ ｐｔｉｄｅ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ）、ジー・アール・マーシャル（Ｇ。

Ｒ，Ｍａｒｓｈａｌｌ）編、ニスコム・サイエンス・パブリツシャーズ（Ｅｓｃ ｏａＳ　ｃｉｅｎｃｅ　Ｐ　ｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）、ライデン、オランダ王国、 （１９８８）、第４６５頁〜第４６７頁；ディ・ベテイクラーク（Ｄ、　Ｐｅｔ ｉｃｌｅｒｃ）、エイチ・ラピエール（Ｈ，Ｌａｐｉｅｒｒｅ）、ジー・ペルテ ィア（Ｇ、　Ｐａｌｌｅ−ｔ　１ｅｒ）、ピー・デュブロイル（Ｐ、　Ｄｕｂｒ ｅｕｉｌ）、ピー・ガラドロウ（Ｐ。

Ｇ　ａｕｄｒｅａｕ）、ティー・モウルス（Ｔ、Ｍｏｖｉｅｓ）、エイ・フェリ ックス（Ａ、　Ｆ　ｅｌｉｘ）およびピー・ブラジーオ（Ｐ　、　Ｂ　ｒａｚｅ ａｕ）　：成長ホルモン（ＧＨ）放出および乳牛のミルク産生に関するヒト成長 ホルモン放出因子（ｈＧＲＦ）の効力のあるアナログの効果（Ｅ　ｆｆｅｃｔ　 ｏｆ　ａ　ｐｏｔｅｎｔａｎａｌｏｇ　ｏｒ　ｈｕｍａｎ　ｇｒｏｗｔｈ　ｈｏ ｒｍｏｎｅ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　（ｈＧ　ＲＦ　）　ｏｎｇｒ ｏｗｔｈ　ｈｏｒ＋ａｏｎｅ　（ＧＨ）　ｒｅｌｅａｓｅ　ａｎｄ　ｍ１ｌｋ　 ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄａｉｒｙｃｏｗｓ、　）、ミーティング・アブ ストラクト（Ｍｅｅｔｉｎｇ　Ａｂｓｔｒａｃｔ）、第２２３頁、エイティ・セ カンド・ミーティング・アメリカン・プーリー・サイエンス・アソシエイション （８２ｎｄ　Ｍｅｅｔｉｎｇ　ＡｍｅｒｉｃａｎＤ　ａｉｒｙ　Ｓ　ｃｉ、　Ａ 　ｔｓｎ、　）、コロンビア、ミズリー州、６月２１〜２４日（１９８７）参照 。

同一分子中の８つの他の修飾に加えてＳ　ｅｔ”で修飾されたＧＲＦアナログは 、トウ（Ｔｏｕ）ら、両親媒性成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）アナログ：ペプ チドデザインおよびｉｎ　ｖｉｖｏでの生物学的活性（Ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ 　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｈｏｒｍｏｎｅ−Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　Ｆ　ａｃｔｏｒ　（Ｇ 　ＲＦ　）ａｎａｌｏｇｓ：　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｄｅｓｉｇｎ　ａｎｄ　ｂｉｏ ｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｖｉｖｏ）、バイオケミカル・アン ド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ、 　Ｂ　１ｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍ＋ｎｕｎ、　）、第１３９巻、第７６ ３頁〜第７７０頁（１９８６）によって開示されている。このアナログは、ｂＧ ＲＦ（１−４４）ＮＨ２と比較して、ヒツジにおいてｉｎ　ｖｉｖｏで１６５％ 活性を有することが報告された。

米国特許第４，７３４．３９９号には、２位にＡｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ またはＤ−Ａｌａを有し、１５位にＡｌａ、　Ｌｅｕ、　Ｖａｌ、Ｉ　ｌｅ。

Ｎｌｅ、　Ｎｖａｌ、β−Ａｌａまたはａ−Ａｌａを有するＧＲＦアナログが開 示されている。米国特許第４，６４９，１３１号参照。

コイ（Ｃｏｙ）およびマーコイ（Ｍｕｒｐｈｙ）の欧州特許出願、公開番号第０ １８８２１４号、出願番号第８６１００１２７．９号には、２位の置換基として ＬまたはＤ−配置の種々の非天然アミノ酸を有するＧＲＦペプチドに加えて、２ 位にＬｅｕまたはＰｈｅを有するＧＲＦアナログが開示されている。

コイ（Ｃｏｙ）ら、成長ホルモン放出因子の合成作動薬および拮抗薬のデザイン における戦略（Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｅｓｉｇｎ　ｏｒｓｙ ｎｔｈｅｔｉｃａｇｏｎｉｓｔｓ　ａｎｄ　ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ　ｏｆ　ｇ ｒｏｗｔｈ　ｈｏｒＩＩ＋ｏｎｅ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ）、ペプ タイズ（Ｐ　ｅｐｔ　１ｄｅｓ）　、第７巻、サブリメント、第４９頁〜第５２ 頁（１９８６）によって、Ｓ　ａｒ”またはＰｒｏ”を有する非常に低い生物活 性を有するＧＲＦアナログが開示されている。

リング（Ｌｉｎｇ）ら、効力のある拮抗活□性を有する成長ホルモン放出因子ア ナログ（Ｇｒｏｗｔｈ　ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｌｅａｓ’ｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ 　ａｎａｌｏｇｓ　ｗｉｔｈｐｏｔｅｎｔ　ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ　ａｃｔ ｉｖｉｔｙ、）、ベプタイズ（ｐ　ｅｐｔ　１ｄｅｓ）、ケミストリー・アンド ・バイオロジー（Ｃｈｅａ＋１ｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ）、プロシー ディンゲス・オブ・ザ・テンス・アメリカン・ペプチド・シンポジウム（Ｐｒｏ ｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　１０ｔｈ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｐｅｐｔｉｄ ｅＳ　ｙｍｐｏｓｉｕｍ）、ジー・アール・マーシャル（Ｇ、Ｒ，Ｍａｒｓｈａ ｌｌ）編、ニスコム・サイエンス・パブリッシャーズ（Ｅｓｃｏａ　５Ｃｉｅｎ ｃｅ　Ｐｕｂｌｉ−ｓｈｅｒｓ）、ライデン、オランダ王国、（１９８Ｂ）、第 ４８４頁〜第４８６頁には、２位をＡｒｇまたは種々のＤ−アミノ酸で置換した 一連のＧＲＦアナログについて報告されている。それらの全ては、親ホルモンよ りも効力が小さく、それらのいくつかは、拮抗活性を示した。

共同研究者（ｃｏ−ｗｏｒｋｅｒ）の前の発明は、水性環境において、化学的分 解（脱アミド）を抑制する手段としてポリペプチドの８位および２８位で通常見 い出されるアミノ酸残基の代わりにＳｅｒ残基を有する合成ＧＲＦポリペプチド を提供する。１９８９年１月２７日付は出願の米国特許出願第０７／３０３，５ １８号および１９８９年３月１５日付は提出の米国特許出願第０７／３２３．９ ５５号参照。

共同研究者（ｃｏ−ｗｏｒｋｅｒ）の前の発明は、Ｒ２および／またはＲｔｓ位 におけるアミノ酸残基に代えてシスティン酸残基（Ｃｙａ）を有する合成ＧＲＦ ポリペプチドを提供する。１９８８年１月２９日付は出願の米国特許出願第０７ ／１５０，３０１号および１９８９年１月２７日付は出願の米国特許出願第８９ １０　Ｏ２４５号参照。

ジー・ベリセレビ（Ｇ　、　Ｖ　ｅｌ　１ｃｅｌｅｂｉ）ら、プロシーディンゲ ス・オブ・ナシ１ナル・アカデミイ・オブ・サイエンシズ・ニーニスエイ（Ｐ　 ｒｏｅ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａ、　Ｓ　ｃｉ、　Ｕ　Ｓ　Ａ）、第８３巻、第５ ３９７頁〜第５３９９頁（１９８６）によって、ｈＧＲＦの２９−アミノ酸アナ ログがデザインされており、これにおいて、アミノ末端の最初の６個のアミノ酸 の配列は、該配列の残存部の１３アミノ酸によって天然ペプチドとは相違し、８ 位のＳｅｒ残基の結合を含んでいる。該アナログのアミドおよび遊離酸形態は、 式　Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ａｌａ　−Ｉ　ｌｅ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−３ｅ ｒ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ　−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−４ ｅｕ−Ａｌａ−５ｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ　−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ− Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−ＮＨ＊１０Ｈを有した。ラット下垂体前葉細 胞の第１培養物における成長ホルモン（ＧＨ）分泌を刺激する能力に関して検査 すると、アミドアナログは、ｈＧ　ＲＦ　（１−４０）ＯＨの効力の１．５７倍 であったが、遊離酸形は、同一の検査における効力の１／６であると報告された 。

ペイル（Ｖａｌｅ）ら（１９８７年５月２２日付は出願の米国特許出願第０５３ ，２３３号）には、別々の蛋白に複合してもよい官能側鎖基を有する３１位置残 基を利用する３１−残基ｈＧＲＦアナログが開示されている。３１−残基ｈＧＲ Ｆアナログは、８−位におけるＡｌａまたはＳｅｒ、１０−位におけるＰ　ｈｅ 、または１５−位におけるＡｌａのように天然ＧＲＦ配列で出現する他の残基に ついての置換基を有してもよい。ＡｓｎまたはＳｅｔは２８−位に存在していて もよい。

ポリペプチドにおけるＡｓｎ残基は、ある環境下、水の存在下において脱アミド 化に対する対象となると報告されている。しかしながら、脱アミド化の割合を支 配する規則は明らかではない。例えば、ポリペプチドトリプシンにおいては、部 分配列ｋｓｎ−３ｅｔを有するいくつかのＡｓｎ残基だけが脱アミド化されるが 、他は脱アミド化されない。コシアコ乙エイエイ（Ｋｏｓｓｉａｋｏｆｆ、　Ａ 　Ａ）、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、第２４０巻、第１９１頁〜第１９４頁 （１９８８）。

欧州特許出願番号第８８３０８３３７．４号、公開番号０２２０９５８号には、 式Ｈ−Ｘ−Ｐｒｏ−ペプチド（式中、Ｘは天然に生じるアミノ酸の残基であり、 Ｐｒｏは天然に生じるアミノ酸プロリンを表し、ペプチドは生物学的に活性なペ プチドまたは蛋白のものであると定義されているアミノ酸残基の配列である）を 有する化合物のクラスが開示されている。Ｈ−Ｘ、−Ｐｒｏ−ペプチドの例とし ては、化学的にＧＲＦに転換できるＭｅｔ−Ｐｒｏ　（成長ホルモン放出因子） が挙げられる。

非−〇ＲＦペプチドにおけるＮ−末端延長アナログは、様々な目的に関して報告 されている、例えば： エム・エイ・タロン（Ｍ、　Ａ　、　Ｔ　ａｌｌｏｎ）ら、バイオケミストリー （Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ、　）、第２６巻、第７７６７頁〜第７７７４頁（１９８７ ）では、延長部分においてＡｌａＳＧｌｕ−Ａｌａ、、Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｌａ またはＧ　ｌｕ　−Ａ　ｌａ　−Ｇ　ｌｕ　−Ａ　ｌａを有する一連の酵母アル ファー交配（＠ａｔ　ｉｎｇ）因子のＮ−末端延長アナログを合成的に作成する 。これらのペプチドは、構造−活性関連研究において使用された。

ディー・アンドリュー（［）　、　Ａ　ｎｄｒｅｕ）ら、トウエンティス・ヨー ロピアン・ベブタイド・シンポジウム（２０ｔｈ　Ｅ　ｕｒ、　Ｐ　ｅｐｔｉｄ ｅ　Ｓ　ｙａｐ：）、トゥビンゲン、ドイツ連邦共和−，１９８８年９月４〜９ 日、シンポジウム・アブストラクツ（Ｓ　ｙｍｐｏｓｉｕｍ　Ａｂｓｔｒａｃｔ ｓ）、第３３頁では、可能な製造中間体に従っていくつかの短いペプチドと一緒 にセクロピンＡの前駆体の６４−アミノ酸配列全体が合成された。それらの中に 、そのＮ−末端でＡ　Ｉａ　−Ｐ　ｒｏ　−Ｇ　ｌｙ　−Ｐ　ｒｏによって延長 した完全なセクロピン配列があり、これは、延長部分が、セクロビアシルクモス （ｃｅｃｒｏｐｉａ　５１１ｋｇ＋ｏｔｈ）かいこから得た部分的に精製された ジペプチジルペプチダーゼ様酵素製剤によって実際に開裂さ、れたことを示すの に使用された。エイチ・ボマン（Ｈ、Ｂ　ｏｓａｎ）ら、ジャーナル・オブ・バ イオロジカル・ケミストリー（Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅ園、）、第２６４巻、第５ ８５２頁〜第５８６０頁（１９８９）参照。

ジー・クライル（Ｇ、Ｋｒｅｉｌ）ら、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・バイ オケミストリー（Ｅ　ｕｒ、　Ｊ　、　Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ、　）、第１１１巻、 第４９頁〜第５８頁（１９８０）には、メリチン、ミツバチ毒の主成分がブロー メリチンから誘導されることが報告されている。ブローメリチンのブロー配列は 、６つのＸ−Ｐｒｏおよび５つのＸ　−Ａ　ｌａ反復ジペプチジル残基から成る 。クライル（Ｋｒｅｉｌ）らによって与えられた結果は、前駆生成物転換が、毒 液線からの抽出物中に存在するジペプチジルペプチダーゼ■型酵素によるジペプ チド単位の漸次開裂を介して進行し得ることを示唆している。

シー・モーレイ（Ｃ，Ｍｏ１ｌａｙ）ら、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・バ イオケミストリー（Ｅ　ｕｒ、　Ｊ　、　Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ、　）、第１６０巻 、第３１頁〜第３５頁（１９８６）。セルレインおよびキセノプシンは、キセノ プスレビス（Ｘｅｎｏｐｕｓ　１ａｅｖｉｓ）の皮膚分泌物中に見いだされた２ つのペプチドである。これらの各々の前駆体におけるＮ−末端延長において、前 者はＰ　ｈｅ　−Ａ　ｌａ　−Ａ　ｓｐ−Ｇ　Ｌｙからなる配列を有し、後者は Ｓ　ｅｒ　−Ａ　ｌａ　−Ｇ　ｌｕ　−Ａ　ｌａを有する。カエル皮膚分泌物か ら単離された■型のジペプチジルペプチダーゼは、成熟生成物の形態に導くこれ らのＮ−末端延長部分の開裂を特徴とする特異性を有する。

ディー・ジニリアス（Ｄ、　Ｊ　ｕｌｉｕｓ）ら、セル（Ｃｅｌｌ）、第３２巻 、第８３９Ｎ［〜第８５２ｊ［（１９８３）。アルファ因子交配フェロモンは、 サツカロマイセス・セルビシアエ（Ｓ　ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｖｉ ｓｉａｅ）アルファ細胞によって分泌された１３アミノ酸からなるペプチドであ る。膜結合ジペプチジルペプチダーゼを欠損している非交配アルファー細胞突然 変異体は、正常なアルファー因子を産生じないが、顕著に減少した生物学的活性 を有する構造Ｇ　ｌｕ　−Ａ　ｌａ　−Ｇ　ｌｕ　−Ａ　ｌａ−アルファー因子 またはＡ　ｓｐ　−Ａ　ｌａ　−Ｇ　ｌｕ　−Ａ　ｌａ−アルファー因子を有す る不完全に処理した一群の形態を放出する。膜結合性ジペプチジルペプチダーゼ が正常なアルファ因子前駆体加工に必要であり、関して速度制限し得ることが分 かった。

シー・エル・チョイ（Ｃ，Ｌ、　Ｃｈｏｙ）ら、ヨーロピアン・ジャーナル・オ ブ・バイオケミストリー（Ｅ　ｕｒ、　Ｊ　、　Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ、　）、第１ ６０巻、第２６７頁〜第２７２頁（１９８６）。ニューファウンドランド・ウイ ンターフラウンダ−（Ｎｅｗｆｏｕｎｄｌａｎｄ　ｗｉｎｔｅｒ　ｆｌｏｕｎｄ ｅｒ）から得た不凍蛋白のプロ配列は、そのＮ−末端部分に４つのＸ　−Ｐ　ｒ ｏおよび７つのＸ　−Ａ　ｌａ反復配列を含有している。この前駆体の加工は研 究されていないけれども、著者は、このような転換が、延長部分におけるジペプ チジル単位を逐次開裂し、熟成不凍蛋白を放出するジペプチジルペプチダーゼ系 酵素によって血清中で起こると推測している。

親出願の優先権主張日の後に、ジュール（Ｓｕｈｒ）らは、マウスＧＲＦをコー ドしている全長ｃＤＮＡクローンの単離および特徴を報告した。成熟マウスＧＲ Ｆは遊離カルボキシル末端を有する４２アミノ酸残基ペプチドであると予想され た。このペプチドは２位にバリン残基を有しており、これによって、２位にＡｌ ａを有する全ての他の種からのＧＲＦの間で独特なものとなる。モレキュラー・ アンド・セルーラーーｘンドクリ／ロジー（Ｍｏ１．　Ｅ　ｎｄｏｃｒｉｎｏｌ ｏｇｙ）、第３巻、第１６９３頁〜第１７００頁、１９８９参照。

発明の概要 本発明は、下垂体による成長ホルモンの放出を促進し、１５位の以下のアミノ酸 Ａｌａ、　Ｖａｌ、Ｌ　ｅｕ、　目ｅまたはＧＩＹのうちの１つと組み合わせて 、２位に通常見られるアミノ酸残基の代わりにＴ　ｈｒ。

ＶａｌまたはＩｌｅ残基を有する合成ポリペプチド（ＧＲＦペプチド）を提供す るものである。所望により、該ＧＲＦペプチドは、ポリペプチドの８および２８ 位に通常見られるアミノ酸残基の代わりにＳｅｒ残基を有し得る。加えて、本発 明のＧＲＦペプチドは、所望により、ｃ、−ｃ、アルキル、ベンジル、Ｈ−（Ｙ −Ｘ）、またはＨ−（Ｙ−Ｘ）＝（Ｙ’−Ｘ’）、（式中、ＹおよびＹ゛は同一 または異なり、天然に生じるアミノ酸、好ましくはＴｙｒまたはＡｓｐであり； ＸおよびＸｏは同一または異なり、Ｔｈｒ％ＳｅｒまたはＡｌａから選択され、 好ましくはＴｈｒまたはＳｅｒであり；ｎは１〜１０；ｍは１〜５；ｐは１〜５ を意味する）によってＮ−末端延長することもできる。

本発明のペプチドは、ｉｎ　ｖｉｖｏで効力があり、血漿酵素による分解に対し て天然ＧＲＦ配列よりも安定である。さらに、Ｓ　ｅｒ＠およびＳｅｒ＊ａで置 換された化合物は、水性環境下で脱アミド化から保護され、化学的により安定で ある。

発明の詳細な説明 明細書および請求の範囲で使用する“ＧＲＦペプチド”なる語は、長さ約２０〜 ４４残基、好ましくは２７〜４４残基で、下垂体による成長ホルモンの放出を促 進する公知のポリペプチドを意味する。

ＧＲＦペプチドの例としては、米国特許第４．５１７．１８１号、第４．５１８ ，５８６号、第４．５２８．１９０号、第４，５２９，５９５号、第４．５６３ ，３５２号、第４．５８５．７５６号、第４．５９５゜６７６号、第４．６０５ ，６４３号、第４．６１０，９７６号、第４゜８２８．５２３号、第４．６２８ ．０４３号、第４，６８９．３１８号および１９８９年１月２７日付は出願の米 国特許出願第８９１００２４５号に開示されている天然または合成ポリペプチド が挙げられ　′る；これらの全ては本明細書に資料として引用記載する。フェリ ックス、エイ（Ｆｅｌｉｘ、Ａ、）、ワン、シー・ティー（Ｗａｎｇ、　Ｃ，Ｔ 、）、ハイマー、イー（Ｈｅｉｍｅｒ、　Ｅ　、　）、フォーニア、エイ（Ｆ　 ｏｕｒｎｉｅｒ、　Ａ、　）、ポリン、ディー（Ｂｏｌｉｎ、　Ｄ、）、アーメ ド、エム（Ａ　ｈｍｅｄ、　Ｍ、　）、ランプロス。

ティ（Ｌａｍｂｒｏｓ、Ｔ、）、モウルス、ティー　（Ｍｏｖｉｅｓ、　Ｔ　、 　）、およびミラー、エル（Ｍｉｌｌｅｒ、　Ｌ、）、“新規な線状および環状 ＧＲＦアナログの合成および生物学的活性（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　Ｂ　 ｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ａｃｔｉｖｉｔｙｏｒ　Ｎｏｖｅｌ　Ｌｉｎｅａｒ　＆　 Ｃｙｃｌｉｃ　ＧＲＦ　Ａｎａｌ、ｏｇｓ）″、ペプチダイズ（Ｐ　ｅｐｔ　１ ｄｅｓ）、ケミストリー・アンド・バイオロジー（Ｃｈｅａ＋１ｓｔｒｙａｎｄ 　Ｂ　ｉｏｌｏｇｙ）、プロシーディンゲス・オブ・ザ・ランス・アメリカン・ ヘプタイド・シンポジウム（Ｐｒｏｃ、　１０ｔｈ　Ａａ＋、　Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓ　ｙｍｐｏｓ　１ｕ１１）、ジー・アール・マーシャル（Ｇ、　Ｒ，Ｍａｒｓ ｂａｌｌ）編、ニスコム・サイエンス・パブリノシャーズ（Ｅ　Ｓ　ＣＯＭ　Ｓ ｃｉ、　Ｐｕｂｌｉ−ｓｈｅｒｓ）、ライデン、オランダ王国、第４６５頁〜第 ４６７頁（１９８８）：ｌ−ウ、ジェイ・ニス（Ｔｏｕ、Ｊ、Ｓ）、ケンフェ、 エル・エイ（Ｋａｅｍｐｆｅ、　Ｌ、Ａ、）、バインヤード、ビー・ディー（Ｖ 　１ｎｅｙａｒｃＬ　Ｂ。

Ｄ、）、ブオノモ、エフ・シー（Ｂ　ｕｏｎｏｍｏ、　Ｆ　、　Ｃ、）、デ５　 ７ｚ５．！ムーｘイ（Ｄ　ｅｌｌａ−Ｆ　ｅｒａ、　Ｍ、　Ａ、　）およびパイ ル、シー・エイ（Ｂａｉｌｅ。

Ｃ，Ａ、）、“両親媒性成長ホルモン放出因子アナログ。ペプチドデザインおよ びｉｎ　ｖｉｖｏでの生物学的活性（Ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ　ＧｒｏｗｔｈＨ ｏｒａｏｎｅ　Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　Ｆａｃｔｏｒ　Ａｎａｌｏｇｓ、Ｐｅｐｔ ｉｄｅ　Ｄｅｓｉｇｎ　ａｎｄ旧ｏ１ｏｇｉｃａｌ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　 ｖｉｖｏ）″、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミ１ ニケーシ１ンズ（Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ。

Ｂ　ｉｏｐｈｙｇ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　）、第１３９巻、第２号、第 ７６３頁〜第７７０頁（１９８６）、コイ、ディー・エイチ（Ｃｏｙ、Ｄ、Ｈ， ）、マーコイ。

ダブリュ・エイ（Ｍｕｒｐｈｙ、　Ｗ、　Ａ　、　）、シニイレスーディアズ、 ジエイ（Ｓ　ｕｅｉｒｅｓ−Ｄ　ｉａｚ、　Ｊ　、）、コイ、イー・ジエイ（Ｃ ｏｙ、Ｅ、Ｊ、）、ランス。

ブイ・エイ（Ｌａｎｃｅ、Ｖ、Ａ、）、“成長ホルモン放出因子のＮ−末端領域 における構造活性研究（Ｓ　ｔｒｕｃｔｕｒｅ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　Ｓ　ｔｕｄ ｉｅｓ　ｏｎｔｈｅ　Ｎ−Ｔｅｒｍｉｎａｌ　Ｒｅｇｉｏｎ　ｏｒ　Ｇｒｏｗｔ ｈ　Ｈｏｒ＋５ｏｎｅ　ＲｅｌｅａｓｉｎｇＦ　ａｃｔｏｒ）”、ジャーナル・ オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊ。

Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ、　）、第２８巻、第１８１頁〜第１８５頁（１，９８５） ；フェリックス、エイ・エム（Ｆ　ｅｌ　ｉｘ、　Ａ、　Ｍ、　）、ノ〜イマー 、イー・ビー（Ｈｅｉｍｅｒ、　Ｅ、　Ｐ、）、モウルス、ティー・エフ（Ｍｏ ｗｌｅｓ、　Ｔ　、　Ｆ　、　）、アイゼンバイス、エイチ（Ｅ　１ｓｅｎｂｅ ｉｓ、　Ｈ、）、ロイング、ビー（Ｌ　ｅｕｎｇ。

ｐ、）、ランプロス、ティー・ジェイ（Ｌａｍｂｒｏｓ、Ｔ、　Ｊ、）、アーメ ド。

エム（Ａ　ｈａｔｅｄ、　Ｍ　、　）、およびワン、シー・テ４−（Ｗａｎｇ、 　Ｃ，Ｔ、）、′新規な成長ホルモン放出因子アナログの合成および生物学的活 性（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　 ｏｆ　Ｎｏｖｅｌ　ＧｒｏｗｔｈＨｏｒｍｏｎｅ　Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　Ｆ　ａ ｃｔｏｒ　Ａｎａｌｏｇｓ）″、ベプタイズ（Ｐ　ｅｐｔｉｄｅｓ）１９８６、 ワオルター・デ・グルイタ−・アンド・カンパニー（Ｗａｉｔｅｒ　ｄｅ　Ｇｒ ｕｙｔｅｒ　＆　Ｃｏ、）、ベルリン−二、−ヨーり、第４８１頁〜第４８４頁 （１９８７）：ベリセレビ、ジー（Ｖｅｌｉｃｅｌｅｂｉ。

Ｇ、）、バッシイ、ニス（Ｐ　ａｔｔｈｉ、　Ｓ　、　）、およびカイザー、イ ー・ティー（Ｋａｉｓｅｒ、　Ｅ、Ｔ、）、“有効な両親媒性ヘリ・ノクスカル ボキシル末端を有スる成長ホルモン放出因子のアナログのデザインおよび生物学 的活性（Ｄｅｓｉｇｎ　ａｎｄ　Ｂ　ｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　 ｏｒ　Ａｎａｌｏｇｓ　ｏｆＧｒｏｗｔｈ　Ｈｏｒｍｏｎｅ　Ｒｅｌｅａｓｉｎ ｇ　Ｆａｃｔｏｒ　ｗｉｔｈ　ＰｏｔｅｎｔｉａｌＡＬＩｌｐｈｉｐｈｉｌｉｃ 　Ｈｅ１ｉｃａｌ　Ｃａｒｂｏｘｙｌ　Ｔｅｒｍｉｎｉ）”　、プロシーディン ゲス・オブ・ナシ１ナル・アカデミイ・オブψサイエンシズ・ニー・ニス・エイ （Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、　Ｓ、Ａ、）、第８５ 巻、第５３９７頁〜第５３９９頁（１９８６）；リング、エヌ（Ｌｉｎｇ、Ｎ、 ）、ベアード、エイ（Ｂａｉｒｄ、Ａ、）、ウエーレンバーグ、ダブリュ・ビー （Ｗｅｈｒｅｎｂｅｒｇ、　Ｗ、　Ｂ　、　）、ムネグミ、ティー（Ｍｕｎｅｇ ｔｏ＊ｉ、　Ｔ、）およびウエノ、エヌ（Ｕｅｎｏ、Ｎ、）、“遺伝子工学によ って生産されたＧＲＦ治療剤の競合的拮抗体としての合成ＧＲＦ類似体（Ｓ　ｙ ｎｔｈｅｓ＋ｉｓ　Ｇ　ＲＦＡｎａｌｏｇｓ　ａｓ　Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ　 Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ　ｏｆ　ＧＲＦ　ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＡｇｅｎｔｓ 　Ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ”　、ク オ壷ノイデイス・シンポジウム（Ｑｕｏ　Ｖａｄｉｓ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ）、 サノフイ・グループ（Ｓａｎｏｆｉ　Ｇｒｏｕｐ）、１９８５年５月２９〜３０ 日、ツールースーベージ、フランス、第３０９頁〜第３２９頁、マーフイ、ダブ リニ・エイ（Ｍｕｒｐｈｙ、Ｗ、　Ａ、）およびコイ、ディ・エイチ（Ｃｏｙ、 Ｄ、Ｈ，）、成長ホルモン放出因子の優れた持続性アルキル化アナログ（Ｐ　ｏ ｔｅｎｔｌｏｎｇ−ａｃｔｉｎｇ　ａｌｋｙｌａｔｅｄ　ａｎａｌｏｇｓ　ｏｆ 　ｇｒｏｗｔｈ　ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇｆａｃｔｏｒ）、ペプク イド・リサーチ（Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）、第１巻、第３６頁〜第 ４１頁（１９８８）。ジェイ・シー・トウ（Ｊ、Ｃ，Ｔｏｕ）、エル・エイ・ケ ンフェ（Ｌ、　Ａ、　Ｋａｅｍｐｆｅ）、ビー・ディ・バインヤード（Ｂ、　Ｄ 、　Ｖ　１ｎｅｙａｒｄ）、エフ・シー・ブオノモ（Ｆ　、　Ｃ、Ｂ　ｕｏｎｏ ｍｏ）、エム・エイ・プラー７エラ（Ｍ、　Ａ、　Ｄｅｌｌａ−Ｆ　ｅｒａ）お よびシー・エイ・パイル（Ｃ，Ａ、　Ｂａ１ｌｅ）　：両親媒性成長ホルモン放 出因子（ＧＲＦ）アナログ：ペプチドデザインおよびｉｎ　ｖｉｖｏでの生物学 的活性（Ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｈｏｒｍｏｎｅ−Ｒｅｌｅａ ｓｉｎｇ　Ｆ　ａｃｔｏｒ　（Ｇ　ＲＦ　）ａｎａｌｏｇｓ：ｐｅｐｔｉｄｅ　 ｄｅｓｉｇｎ　ａｎｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｖｉ ｖｏ、　）、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニ ケーションズ（Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ、　Ｂ　１ｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃ０１ｌ ＩＩＬ［Ｔ１．　）、第１３９巻、第７６３頁〜第７７０頁（１９８６）。ＧＲ Ｆペプチドなる語は、その非毒性塩を含む。

ＧＲＦペプチド定義に使用した命名法は、ジュログー・アンド・ルブツ（Ｓｃｈ ｒｏｄｅｒ　＆　Ｌｕｂｋｅ）、′ザ・ベブタイズ（Ｔ　ｈｅ　Ｐ　ｅｐｔ　１ ｄｅｓ）″、アカデミツク・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）（１９６ ５）によって詳細に記載されたものであり、慣用の表現に従って、Ｎ−末端のア ミ７基を左側に表し、Ｃ−末端のカルボキシル基を右側に表す。アミノ酸残基が 異性体形を有する場合、他に特に指示しない限りアミノ酸のし一型を表す。

本発明は、下記式： ％式％ ［式中、 Ｒは、ＨＳＣ，〜Ｃ，アルキル、ベンジル、Ｈ−（Ｙ−Ｘ）ｎまたはＨ−（Ｙ− Ｘ）ＪＹ’−Ｘ’）、（ここに、ＹおよびＹ′は同一または異なり、天然に生じ るアミノ酸、好ましくはＴｙｒまたはＡｓｐ；ＸおよびＸ゛は同一または異なり 、Ｔ　ｈｒ、　Ｓ　ｅｔまたはＡｌａから選択され、好ましくはＴｈｒまたはＳ ｅｒ；ｎは１〜１０；ｍは１〜Ｅ５：ｉ）は１〜５）； Ｒ３は、ＴｙｒまたはＨｉｓ、好ましくはＴｙｒ；Ｒ１は、Ｔｈｒ、　Ｖａｌま たはＩｌｅ、好ましくはＶａｌまたはＩｌｅ；Ｒ８は、ＡｓｐまたはＣｙａ、好 ましくはＡｓｐ；Ｒｏは、ＡｓｎまたはＳ　ｅｒ、好ましくはＳｅｒ；Ｒｌｓは 、Ｌｙｓ、Ｎ−ε−アルキル−またはＮ−εベンジル−ＬＹｇまたはＡ　ｒｇ、 好ましくはＬｙｓ；あるいはＲが０１〜Ｃ，アルキルまたはベンジルである場合 、Ｎ−ε−アルキルーまたはＮ−ε−ベンジル−Ｌｙｓ； Ｒ１３は、ＶａｌまたはＩ　Ｉｅ、好ましくはＶａｌ；Ｒ１５は、Ａｌａ、　Ｖ ａｌ、Ｌｅｕ、ＩｌｅまたはＧｌｙ（好ましくはＡｌａ。

Ｖａｔ、ＬｅｕまたはＩ　［ｅ、より好ましくはＡｌａ）　；Ｒ４，は、Ｓｅｒ またはＴ’ｌｒｓ好ましくはＳｅｒ；Ｒ□ｌ＊、Ｌｙｓ％Ｎ−ε−アルキル−ま たはＮ−ε−ベンジル−ＬｙｓまたはＡ　ｒｇ、好ましくはＬ　ｙｓ、あるいは ＲがＣ１〜Ｃ，アルキルまたはベンジルである場合、Ｎ−ε−アルキル−または Ｎ−ε〜ベンジルーＬｙｓ： Ｒｏは、ＡｌａまたはＬ　ｅｕ、好ましくはＬｅｕ；Ｒｔｓは、ＡｓｐまたはＧ ｌｕ、好ましくはＡｓｐ；Ｒｒ？は、Ｍｅｔ％Ｉ　ｌｅまたはＬ　ｅｕ、好まし くはＬｅｕまたはＩｌｅ；Ｒ１，は、ＡｓｎまたはＳ　ｅｔ、好ましくはＳｅｒ ；Ｒｅ４は、ＳｅｔまたはＡｒｇｓ好ましくは、Ａｒｇ；Ｒｌｓは、ｋｓｎまた はｓ　ｅｔ、好ましくはＡｓｎ；Ｒｏは、ＡｒｇまたはＧｉｎ、好ましくはＧｉ ｎ；Ｒ３゜は、ＧｌｙまたはＡ　ｒｇ、好ましくはＧＬｙ；Ｒａａは、Ａｌａま たはＳ　ｅｔ、好ましくはＡｌａ；Ｒ４ｔは、Ａ　１　ａ、　Ｖ　ａ　ｌまたは Ｐ　ｈｅ、好ましくはＶａｌ；２は、Ｃ−末端のアミノ酸残基のカルボキシル部 分を表し、基−ＣＯＯＲ，、−ＣＲ，Ｏ，−ＣＯＮＨＮＨＲ，、−ＣＯＮ（Ｒ， ）（Ｒｂ）または−〇　Ｈ、ＯＲａ（ここに、Ｒ１およびＲ１，はＣ１〜Ｃ，ア ルキルまたは水素原子）である］ を有する合成ＧＲＦペプチド類似体（ＧＲＦペプチド）；あるいはＮ−末端のＲ からそのＣ−末端として２０〜４４位（好ましくは２７〜４４位）のいずれかに おける残基まで延びているそれらの生物学的に活性な断片；または前記のＨｓｅ （ラクトン）、ＨｓｅＯＨもしくはＨｓｅＮ　（Ｒ、）（Ｒｂ）および／または 前記の非毒性塩を提供するものである。

Ｒは、好ましくは水素原子（Ｈ）である。

Ｃ２〜Ｃ，アルキルの例は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘ キシル、オクチルおよびそれらの異性体形である。

ｉＰｒなる語は、イソプロピルを表す。

Ｂｚｌなる語は、ベンジルを表す。

本発明の具体例は、式：　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｌｌ）−Ａｌａ　−Ｉ　ｌｅ 　−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−８ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅ ｕ−ＡＩａ−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅ ｕ−Ｇｉｎ−Ａｓｐ　−Ｉ　Ｉｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−ＮＨｚを有するペ プチドＴｈｒ’　Ａｌａ”Ｌｅｕ″７ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ，である。

さらに、本発明の具体例は、式：　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｖａｔ−Ａｓｐ−Ａｌａ　−Ｉ 　ｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｔ− Ｌｅｕ　−Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ −Ｌｅｕ−Ｇｉｎ　−Ａｓｐ−Ｉ　ｌｅ　−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−ＮＨｔを 有するペプチドＶ　ａｌ”ＡｌａＩＳＬｅｕ″’　ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ， である。

また、さらに、本発明の具体例は、式：　Ｈ−Ｔｙｒ　−Ｉ　１ｅ−Ａｓｐ　− Ａｌａ　−Ｉ　ｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−８ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙ ｓ−Ｖａｌ　−Ｌ　ｅｕ　−Ａ　ｌａ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｓ　ｅｒ　 −Ａ　ｌａ　−Ａ　ｒｇ　−Ｌ　ｙｓ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｇｌｎ−Ａ ｓｐ　−Ｉ　ｌｅ　−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−ＮＨ、を有するペプチド目ｅ″ Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨｔである。

さらに、本発明の具体例は、式：　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ａｌａ　−Ｉ 　ｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−３ｅｒ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ− Ｌｅｕ　−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ −Ｌｅｕ−Ｇｉｎ　−Ａｓｐ　−１１ｅ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇ ｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ　−Ａｓｎ−Ｇｉｎ−Ｇｌｕ−Ｇｉｎ−Ｇｌｙ− Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ　−ＮＨ，を有するペプチドＴｈｒ’ 　Ｓｅｔ”　Ａｌａ”　Ｌｅｕ″７Ｓｅｒ”　ｂＧＲＦ（１−４４）ＮＨ，であ る。

本発明の好ましい具体例はペプチドＶａｌ”　Ｓｅｔ’　Ａｌａ”　Ｌｅｕ”Ｓ ｅｔ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−３０）Ｎｉｌ、、Ｖａｔ’　Ｓｅｔ”　Ａｌ ａ”Ｌｅｕ″’　Ｓｅｔ”　Ｈｓｅ３０ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ−ＣｔＨｓ、 ［Ｉｅ”Ｓｅｒ”　ＡｌａｌＳＬｅｕ”　Ｓｅｒ″”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１ −３０）ＮＨ，、ｌｉｅ宏Ｓｅｒ”　ＡｌａｌＳＬｅｕ”　Ｓｅｔ”　Ｈｓｅ３ ０ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ−Ｃ，Ｈ，、Ｖａｌ”　Ｓｅｔ”　Ａｌａ”　Ｌｅ ｕ”　Ｓｅｔ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−３３）ＮＨ，、Ｖａｔ”　Ｓｅｔ＠ Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　Ｓｅｔ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−３３）ＮＨ−Ｃ，Ｈ ，、Ｉ　ｌｅ”　Ｓｅｔ”　ＡｌａｌＳＬｅｕ″７ｓｅｒｔｓＨｓｅ”　ｂＧＲ Ｆ（１−３３）ＮＨ，、Ｉ　ｌｅ”　Ｓｅｔ’　Ａｌａ”　Ｌｅｕ”Ｓｅｒ宜＠ Ｈｓｅ”ｂＧＲＦ（１３３）ＮＨＣｔＨｓ、Ｔｈｒ”　Ｓｅｔ”Ａｌａ”　Ｌｅ ｕ宜フ　Ｓｅｒ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨｔ、　Ｔｈｒ鵞Ｓｅｒ ’　Ａｌａ”　Ｌｅｕ″’Ｓｅｒ″’　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ− Ｃ，Ｈ，、Ｔｈｒ’　Ｓｅｔ’　Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　Ｓｅｔ”　Ｈｓｅ３３ｂ ＧＲＦ　（１−３３）ＮＨ，、Ｔｈｒ”　Ｓｅｔ”　ＡｌａｌＳＬｅｕ”　Ｓｅ ｔ”　Ｈｓｅ３３ｂＧＲＦ（１−３３）ＮＨ−Ｃ，Ｈ，、Ｖａｌ”　Ｓｅｒ’　 ＡｌａＩ５Ｌｅｕ″’　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−２８）ＮＨ，、Ｖａｌ”　Ｓ ｅｒ’　Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−２８）ＮＨ−Ｃ，Ｈ， 、Ｉ　ｌｅ”　Ｓｅｒ’　ＡｌａＩ５Ｌｅｕ”　Ｈｓｅ”ｂＧＲＦ（１−２８） ＮＨ，、［ｌｅ”　Ｓｅｔ’　Ａｌａ１５Ｌｅｕ″７　ＨＳ　ｅ　＊　ａ　ｂＧ ＲＦ（１−２８）ＮＨ−Ｃ，Ｈ，、Ｔｈｒ”　Ｓｅｔ”　Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　 Ｈｓｅ”ｂＧＲＦ（１−２８）ＮＨ，、Ｔｈｒ”　Ｓｅｔ’　Ａｌａ”　Ｌｅｕ ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−２８）ＮＨ−Ｃ，Ｈ，、またはそれらの非毒性塩 である。

さらに本発明の好ましい具体例は、ペプチドＶａｌ”　Ｓｅｔ”　Ａｌａ”Ｌｅ ｕｔ７Ｓｅｒ”　Ｈ８ｅ”　ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ，、Ｖａｌ”　Ｓｅｒ・ ＡｌａＩＳＬｅｕ諺’　Ｓｅｔ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ−Ｃ， Ｈ，、Ｉ　ｌｅ”　Ｓｅｒ＠ＡｌａｌｆｉＬｅｕ”　Ｓｅｔ”　Ｈｓｅ３０ｂＧ ＲＦ（１−３０）ＮＨｌ、Ｉｌｅ意Ｓｅｒ’　Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　Ｓｅｔ”　 Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ−Ｃ，Ｈ，、Ｖａｌ”　Ｓｅｔ”　Ａｌａ ”　Ｌｅｕ”　Ｓｅｔ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−３３）ＮＨｔ、　Ｖａｔ” 　Ｓｅｒ”　ＡｌａｌＳＬｅｕ”　Ｓｅｔ”　Ｈｓｅ′３ｂＧＲＦ（１−３３） ＮＨ−ＣｔＨｓ、Ｉ　ｌｅ”　Ｓｅｒ”　Ａｌａ”　Ｌｅｕ！？Ｓｅｔ”Ｈｓｅ ３３　ｂＧＲＦ（１−３３）ＮＨ，、Ｉ　ｌｅ”　Ｓｅｔ”　Ａｌａ”　Ｌｅｕ 宜７Ｓ　ｅｔ’参Ｈｕｅ３５ｂＧＲＦ（１３３）ＮＨＣ＊Ｈｓ、またはそれらの 非毒性塩である。

さらに、本発明の具体例は、式：　Ｎ−ａ−ｉＰｒ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ　−Ａｓｐ −Ａｈａ　−Ｉ　Ｉｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｎ −ｓ−ｉＰｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａ ｌａ−Ａｒｇ−Ｎ　−ｅ−４Ｐｒ　−Ｌｙｓ　−Ｌｅｕ　−Ｌｅｕ−Ｇｉｎ−Ａ ｓｐ　−Ｉ　ｌｅ　−Ｌｅｕ　−３ｅｒ　−Ａ　ｒｇ　−ＨｓｅＮ　Ｈ（エチル ）を有するペプチドＮ−ａ−ｉＰｒ−Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ’　Ｎ−５−ｉＰｒ−Ｌ ｙｓ””　Ａｌａ”　Ｌｅｕ”マ　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ（Ｃ， Ｈａ）である。

また、本発明の別の具体例はＮ−末端延長ペプチドであり、例えば、Ｎ−ａ−（ Ｔｙｒ−８ｅｒ）−Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ’　５ｅｒＩＩＡｌａＩ８Ｌｅｕ！７Ｓｅ ｒ″＠ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨｔ；　Ｎ−ａ−（Ｔｙｒ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｔ ｈｒ）−Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ″Ｓｅｒ＠Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　Ｓｅｔ”　ｂａＲＦ （１−２９）ＮＨｔ；Ｎ−ａ−（Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）ｔ−Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ”　Ｓ ｅｔ”　ＡｌａｌＳＬｅｕ”　Ｓｅｔ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ　（１−３２）Ｎ Ｈｔ　：　Ｎ−ａ−（Ｔｙｒ　−３ｅｒ）−Ｔｙｒ’　Ｉ　ｌｅ’　Ｓｅｔ’　 ＡｌａＩＩＩＬｅｕ”　Ｓｅｔ”　ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ，；Ｎ−ａ−（Ｔ ｙｒ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）−Ｔｙｒ’　Ｉ　ｌｅ”Ｓｅｔ’　Ａｌａ”　 Ｌｅｕ”　Ｓｅｒ″’ｂＧＲＦ（１２９）ＮＨｔ；Ｎ−α−（Ａｓｐ−Ａｌａ− Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）−Ｔｙｒ’　Ｉ　ｌｅ’　Ｓｅｔ”　ＡｌａＩ５Ｌｅｕ”Ｓｅ ｔ” ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ，＋Ｎ−ａ−（Ａｓｐ−Ａｌａ）−Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ ”Ｓｅｔ”　Ａｌａｌｓ　Ｌｅｕ”　Ｓｅｔ”　ｂＧＲＦ（１−３７）ＮＨｚ； 　Ｎ−ａ−（Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）＊−Ｔｙｒ’　Ｉ　ｌｅ”　Ｓｅｔ”　Ａｌａ” 　Ｌｅｕ！７Ｓｅｒ”　Ｈｓｅ”ｂＧＲＦ（１−３２）ＮＨｔ；　Ｎ−ａ−（Ｔ ｙｒ−３ｅｒ）−Ｔｙｒ’　Ｖａｌ”Ｓｅｔ”　ＡｌａＩＳＬｅｕ”　Ｓｅｔ” 　ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨｔ：　Ｎ−ａ−（Ｔｙｒ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ ）−Ｔｙｒ’　Ｖａｔ”　Ｓｅｔ”　ＡｌａＩｓＬｅｕ”Ｓｅｔ”　ｂＧＲＦ（ １−２９）ＮＨ，；　Ｎ−ａ−（Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）、−Ｔｙｒ”Ｖａｌ”　Ｓｅ ｔ”　Ａｌａｌｓ　Ｌｓｕ”　Ｓｅｔ”　ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨｔ；　Ｎ− ａ　−（Ａｓｐ−Ａｌａ）−Ｔｙｒ’　Ｉｌｅ″　Ｓｅｔ”　Ａｌａ”　Ｌｅｕ ”　Ｓｅｔ”・ｂＧＲＦ（１−３７）ＮＨ，が挙げられる。

本発明のもう１つの具体例は、３位および／または２５位において、好ましくは ３位において、ＡｓｐをＣｙａに代えた前記のいずれかの具体例である。

本発明の化合物の改良された代謝安定性（天然ＧＲＦと比較した場合）の実証を ｉｎ　ｖｉｔｒｏ安定性データによって第１表に示す。１ｎｖｉｔｒｏでのウシ 血漿において、Ｔｈｒ”、Ｖａｌ’、Ｉ　ｌｅ’またはＬｅｕ’を有するアナロ グが、この研究において使用された実験条件（１時間血漿インキュベージコン） 下で血漿ＤＰＰ−■による残基２の後に開裂しなかったことに注意すべきである 。しかしながら、長期にわたる血漿インキ二ベーシ１ンにおいて、Ｔｈｒ”　Ａ ｌａ”　Ｌｅｕ”　ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＮＨ，は、わずかなりＰＰ−ＩＶ関 連開裂を呈した。

さらに、本発明の化合物の増強したｉｎ　ｖｉｖｏ効力を第１表に示す。例えば 、当業者は、各ＥＤ５０を測定し比較すると、Ｉ　１ｅ２Ａ１ａ１５　Ｌｅｕ２ ７　ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２、トリフルオロ酢酸塩がその異性体Ｌｅｕ２　 Ａ１ａＬ５　Ｌｅｕ２７　ｂＧＲＦ　（１−２９）ＮＨ２、トリフルオロ酢酸塩 の１０〜２０倍の効力を呈することが予想されることを相対ｉｎ　ｖｉｖｏ効力 （０，０１ナノモル／に９の投与量）から認識するであろう。

商業的生産方法の目的では、カルボ牛シ末端残基は、ホモセリン、ホモセリンラ クトン、ホモセリンアミド、またはＣ１〜Ｃ，アルキル（好ましくはＣ，−Ｃ， アルキル）、ホモセリンの第２級または第３級アミドが好ましい。

合成ＧＲＦペプチドアナログは、適切な方法によって合成され、例えば、米国特 許第４．５２９．５９５号（第２欄、第３５行から第５欄、第６４行）および米 国特許第４，６８９，３１８号（第２欄、第２３行から第９欄、第１３行）に開 示されている方法が含まれ、これらは、本明細書に資料として引用記載する。

製造例Ａに、本発明のＧＲＦペプチドアナログを合成する方法を記載する。

製造例Ａ アプライド・バイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂ　ｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）　 ４３０Ａペプチド合成装置（アプライド・バイオシステムズ（ＡｐｐｌｉｅｄＢ 　１ｏｓｙｓｔｅａ＋ｓ）、フォスター・シティ、カリフォルニア）およびアプ ライド・バイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂ　ｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によっ て供給された合成サイクルを利用して固相法によって合成する。Ｂｏａアミノ酸 および他の試薬はアプライド・バイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｌｏ−５ ｙｓｔｅ＋ｓｓ）および他の市販原料によって供給された。ダブルカップリング 法を使用する一連のＢｏｃ化学を、Ｃ末端カルボキシアミドの製造用の出発ｐ− メチルベンズヒドリルアミン樹脂に適用する。Ｃ末端酸の製造には、対応するＰ ＡＭ樹脂を使用する。アスパラギン、グルタミン、およびアルギニンは、予め形 成したヒドロキシベンゾトリアゾールエステルを使用してカップリングを行う。

全ての他のアミノ酸は、予め形成した対称性Ｂｏｃアミノ酸無水物を使用してカ ップリングを行う。

以下の側鎖保護を使用する： Ｃｙｓ、　４−メチルベンジル Ｇｌｕ、ベンジル ５ｅｒｓベンジル Ｔ　ｈｒ、ベンジル Ｔｒｙｓ　４−ブロモカルボベンゾキシＬＹ８％２−クロロカルボベンゾキシ。

Ｂｏｃ保護は、塩化メチレン中、トリフルオロ酢酸（Ｔ　Ｆ　Ａ）によって行う 。Ｈｓｅ含有アナログを望む場合、Ｍｅｔを固相によって一体化させ、次いで、 当該分野で周知の方法によって、ＨＦ開裂の後、臭化シアンで修飾すべきである 。この臭化シアン開裂により、ＭｅｔがＣ−末４Ｈｓｅラクトンペプチドに転換 される。これは、メタノールまたはジメチルホルムアミドのような溶媒中、適当 なアミンによる処理によってＨｓｅアミドペプチドに転換され得る。該合成の完 了後、ペプチドを脱保護し、１０％ｐ−クレゾールを含有する無水フッ化水素に よって樹脂から開裂する。側鎖保護基の開裂および樹脂からのペプチドの開裂は 、０℃またはそれ以下、好ましくは一２０’Ｃで３０分間、次いで、０℃で３０ 分間行う。ＨＦの除去後、ペプチド／樹脂をエーテルで洗浄し、ペプチドを氷酢 酸で抽出し、凍結乾燥する。精製の前、ステユワート（Ｓ　ｔｅｗａｒｔ＞ら、 ソリ・ノド・フェーズ・ベプタイド・シンセシス（Ｓｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｐ ｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ）、第１１３頁、ピアス・ケミカル・カンパ ニー（Ｐ　１ｅｒｃｅ　Ｃｈｅｎ＋１ｃａｌＣｏｍｐａｎｙ）、ロックフォード 、イリノイ、１９８４によって開示されているように、−１０℃〜１０６Ｃで、 好ましくは０°Ｃで、過ギ酸を使用して、粗システィン含有ペプチドを、対応す るシスティン酸含有化合物に酸化する。Ｃ−末端ＨｓｅラクトンおよびＨｓｅア ミドへの転換は、上記のように行う。

精製は、シンクロプレプ（Ｓ　ｙｎｃｈｒｏｐｒｅｐ）　Ｓ　−３００（シ７り ｏｌｈ−インコーホレイテッド（ＳｙｎＣｈｒｏｓ　Ｉ　ｎｃ、）、リンデン、 インディアナ）カチオン交換カラム上でイオン交換クロマトグラフィーによって 行う。ペプチドは、２０％アセトニトリルに２０ミリモルのトリス（ｐＨ６，８ ）を入れた緩衝液を用いて充填し、同溶媒中のＯ〜０．３モル塩化ナトリウムグ ラジェントを用いて溶離する。化合物を、各相が０．１％ＴＦＡを含む水ニアセ トニトリルグラジェントを用いてピダックｆｖｙｄａｃ）　Ｃ−１８（セバレイ シ嘗ン・グループ（Ｓｅｐａ−ｒａｔｉｏｎ　Ｇｒｏｕｐ）、ヘスベリア、カリ フｔルニア）カラム上の逆相液体クロマトグラフィーによって、さらに精製およ び脱塩する。所望の画分をプールし、凍結乾燥し、所望のＧＲＦペプチドをその トリフルオロ酢酸塩として得る。トリフルオロ酢酸塩は、所望により他の適当な 塩に、周知のイオン交換法によって転換させ得る。

ペプチドは、１１０℃で２４時間、捕捉剤としてのフェノールの存在下、定沸点 ＨＣＱＣピアス（Ｐ　１ｅｒｃｅ））を用い、ピコ−タッグ・ワーク−Ｘテイシ Ｎ　７（Ｐ　ｉｃｏ−Ｔａｇ　Ｗｏｒｋ　Ｓ　ｔａｔｉｏｎ）（ウォーターズ（ Ｗａｔｅｒｓ））にて気相法により真空下で加水分解させる。加水分解物を、ベ ックマン・アミノ・アシッド・アナライザー（Ｂｅｃｋｍａｎ　Ａｍ１ｎ。

Ａｃ１ｄ　Ａｎａｌｙｚｅｒ）、モデル（Ｍｏｄｅｌ）　６３００によって分析 する。

ペプチド含有量は、内標準として濃度公知のノルロイシンを使用して計算する。

実施例 実施例１　：　Ｔｈｒ”　Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨｔ、 トリフルオロ酢酸塩の製造；化合物番号１ 製造例Ａと同様の漸次手段で、式：　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｉ 　ｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ− Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ− Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ　−Ｔ　ｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−ＮＨ，を有す るＧＲＦアナログペプチド（ＣＦ３ＣＯＯＨ塩として）の合成を行う。アミノ酸 分析、かっこ内は理論値：Ａｓｐ　３．９６　（４）；Ｔｈｒ　１．８４　（２ ）；　５ｅｒ１．７９　（２）；Ｇｌｕ　２．０１　（２）、　Ａｌａ　３．０ ４　（３）；Ｖａｌ　０゜９９　（１）、ｌｉｅ　１．９３（２）、Ｌｅｕ　５ ．０５　（５）：Ｔｙｒ　１９６（２）；　Ｐｈｅ　Ｏ，９８（１）；　Ｌｙｓ 　２．０２（２）；　Ａｒｇ　３．０９　（３）。

実施例２　：　Ｖａｌ”　Ａｌａ’″Ｌｅｕ”　ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ，、 トリフルオロ酢酸塩の製造：化合物番号２ 製造例Ａと同様の漸次手段で、式：　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｉ 　Ｉｅ　−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ −Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ −Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ　−Ｉ　ｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−ＮＨ２を有 するＧＲＦアナログペプチド（ＣＦ、Ｃ０ＯＨ塩として）の合成行う。アミノ酸 分析、かっこ内は理論値：　Ａｓｐ　４．１１　（４）；Ｔｈｒ　Ｏ，９６（１ ）；　５ｅｒ１．７９　（２）；　Ｇｌｕ　２．１１　（２）、Ａｌａ　３．０ ４　（３）；　Ｖａｌ　２゜１　（２）、ｌｉｅ　１．９１　（２）、Ｌｅｕ　 ５．１７　（５）；Ｔｙｒ　２．００　’（２）；　Ｐｈｅ　Ｏ，９８（１）； 　Ｌｙｓ　１．９９　（２）：Ａｒｇ　２．７０（３）。

実施例３：Ｉｌｅ’Ａｌａ”Ｌｅｕ”ｂＧＲＦ（１２９）ＮＨ＊、トリフルオロ 酢酸塩の製造、化合物番号３ 製造例Ａと同様の漸次手段で、式：　）（−Ｔｙｒ　−Ｉ　１ｅ−Ａｓｐ−Ａｌ ａ−Ｉ　ｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖ ａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌ ｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｉｎ−Ａｓｐ　−Ｔ　ｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−ＮＨ２ を有するＧＲＦアナログペプチド（ＣＦ、Ｃ０ＯＨ塩として）の合成を行う。ア ミノ酸分析、かっこ内は理論値：　Ａｓｐ　４．１２　（４）；　Ｔｈｒ　Ｏ， ９７（１）；　５ｅｒ１．７５　（２）；Ｇｌｕ　２．０９　（２）、Ａｌａ　 ３．００　（３）；　Ｖａｌ　１゜０５　（１）、Ｉｌｅ　２．９１　（３）、 Ｌｅｕ　５．ｆ６　（５）：Ｔｙｒ　２．００（２）；　Ｐｈｅ　Ｏ，９９（１ ）；Ｌｙｓ　１．９８　（２）；　Ａｒｇ　２．７５　（３）。

実施例４　：　Ｎ−ａ−（Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ”　Ａｌａ”　Ｌ ｅｕ”マｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ，、トリフルオロ酢酸塩の製造；化合物番号 製造例Ａと同様の漸次手段で、式：　ＨＴｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ａｌ ａ　−Ｉ　ｌｅ　−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−８ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ −Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ −Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ　−Ｉ　ｌｅ　−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｒｇ− ＮＨ２を有するＧＲＦアナログペプチド（ＣＦ、Ｃ０ＯＨ塩として）の合成を行 う。アミノ酸分析、かっこ内は理論値：Ａｓｐ　４．０５　（４）：Ｔｈｒ　２ ．６Ｂ（３）；Ｓｅｒ　１．７７　（２）；Ｇｌｕ　２．０７　（２）、Ａｌａ 　２．９０　（３）；Ｖａｌ　１．０Ｂ　（１）；　Ｉｌｅ　１８９　（２）、 Ｌｅｕ　５．２０　（５）；Ｔｙｒ２．８７　（３）；Ｐｈｅ　Ｏ，９３（１） ；Ｌｙｓ　２．０１　（２）；Ａｒｇ　３゜０７（３）。

実施例５　：　Ｎ−ａ−（Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）＊Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ”　Ａｌａ”　 Ｌｅｕ”ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ，、トリフルオロ酢酸塩の製造；化合物番号 製造例Ａと同様の漸次手段で、式：　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔ ｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ａｌａ　−Ｉ　ｌｅ　−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ｅ ｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｔ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−３ｅ ｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｉｎ−Ａｓｐ　−１１ｅ−Ｌ ｅｕ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−ＮＨ２を有するＧＲＦアナログペプチド（ＣＦ　３ＣＣ ）ＯＨ塩として）の合成を行う。アミノ酸分析、かっこ内は理論値：　Ａｓｐ　 ４．０６　（４）；Ｔｈｒ　３．６６　（４）；　Ｓｅｒ　１．８５　（２）； Ｇｌｕ　２．０５　（２）、Ａｌａ２．９３　（３）：Ｖ’ａｌ　１．０９　（ １）、Ｉｌｅ　１．９１　（２）、Ｌｅｕ　５゜１５　（５）；　Ｔｙｒ　３． ９１　（４）；　Ｐｈｅ　Ｏ，９５（１）；Ｌｙｓ　２．００（２）　：　Ａｒ ｇ　３．０４　（３）。

実施例６　：　Ｎ−ａ　−（Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）Ｔｙｒ’　Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　 ｂＧＲＦ　（１−２９）ＮＨ！、ｌ−リフルオロ酢酸塩の製造；化合物番号６製 造例Ａと同様の漸次手段で、式：　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ａｓ ｐ−Ａｌａ−自ｅ　−Ｐ　ｈｅ　−Ｔ　ｈｒ　−Ａ　ｓｎ　−Ｓ　ｅｒ　−Ｔ　 ｙｒ　−Ａ　ｒｇ　−Ｌ　ｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−３ ｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＬｅｕＧＲＦアナログペプチド（ＣＦ、Ｃ０Ｏ Ｈ塩として）の合成を行う。

アミノ酸分析、かっこ内は理論値：Ａｓｐ　４．０Ｂ　（４）；Ｔｈｒ　１゜８ ６　（２）；　Ｓｅｒ　１．７７　（２）；Ｇｌｕ　２．０７　（２）、Ａｌａ 　３．９８（４）；Ｖａｌ　１．０Ｂ　（１）、　Ｉｌｅ　１．８９　（２）、 Ｌｅｕ　５．１４　（５）：Ｔｙｒ　２，９４　（３）；Ｐｈｅ　Ｏ，９６（１ ）：Ｌｙｓ　１．９９　（２）：　Ａｒｇ３．０４　（３）。

実施例７　：　Ｎ　−ａ−（Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）Ｔｙｒ’　Ｉ　Ｉｅ”　Ａｌａ” 　Ｌｅｕ”ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ，、トリフルオロ酢酸塩の製造：化合物番 号製造例Ａと同様の漸次手段で、式：　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ　−Ｉ　Ｉ ｅ−Ａｓｐ−Ａｌａ　−Ｉ　ｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｔｙｒ− Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａｌａ− Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｉｎ−Ａｓｐ　−Ｉ　ｌｅ　−Ｌｅｕ−Ａ ｓｎ−Ａｒｇ−ＮＨ２を有するＧＲＦアナログペプチド（ＣＦ、Ｃ０ＯＨ塩とし て）の合成を行う。

アミノ酸分析、かっこ内は理論値：Ａｓｐ　４．０７　（４）；Ｔｈｒ　１゜８ ７　（２）；　Ｓｅｒ　１．７５　（２）；Ｇｌｕ　２．０７　（２）、Ａｌａ 　２．９４（３）；Ｖａｌ　１．０９　（１）、　Ｔ　ｌｅ　２．８７　（３） 、Ｌｅｕ　５．１２　（５）：Ｔｙｒ　２．９２　（３）；　Ｐｈｅ　０１９６ 　（１）；　Ｌｙｓ　２．００　（２）：Ａｒｇ３．０５　（３）。

実施例８　：　Ｎ−ａ　−（Ｔｙｒ−３ｅｒ）Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ”　ＡｌａＩ５ Ｌｅｕ”ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ，、トリフルオロ酢酸塩の製造；化合物番号 製造例Ａと同様の漸次手段で、式：　Ｈ−Ｔｙｒ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａ ｓｐ−Ａｌａ　−Ｉ　ｌｅ　−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒ ｇ−ＬｙｓＶａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ −Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｉｎ−Ａｓｐ　−１１ｅ　−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａ ｒｇ−ＮＨ２を有するＧＲＦアナログペプチド（ＣＦ、Ｃ０ＯＨ塩として）の合 成を行う。

アミノ酸分析、かっこ内は理論値：Ａｓｐ　４．１１　（４）；Ｔｈｒ　１．８ ２　（２）；　Ｓｅｒ　２．６４　（３）；Ｇｌｕ　２．０５　（２）、Ａｌａ 　２．９０（３）；Ｖａｌ　１．０４　（１）、　ｌｉｅ　１．８７　（２）、 Ｌｅｕ　５．１６　（５）；Ｔｙｒ　２．９２　（３）；　Ｐｈｅ　Ｏ，９４（ １）：　Ｌｙ８２．０１　（２）；Ａｒｇ３．０４　（３）。

実施例９　：　Ｖａｌ”　Ｓｅｒ＠Ａｌａ″Ｌｅｕ”　Ｓｅｔ”　Ｈｓｅ”　ｂ ＧＲＦ（１−４５）ＮＨ２、トリフルオロ酢酸塩の製造；化合物番号９製造例八 と同様の漸次手段で、式：　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ａｌａ−ｒ　ｌｅ　 −Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−３ｅｒ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ −Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ −Ｇｉｎ−Ａｓｐ−ｒ　ｌｅ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇｉｎ−Ｇｌ ｙ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｇｉｎ−Ｇｌｕ−Ｇｉｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌ、 ｙｓ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ。

−Ｈｓｅ−ＮＨ，を有するＧＲＦアナログペプチド（ＣＦ、Ｃ０ＯＨ塩として） の合成を行う。アミノ酸分析、かっこ内は理論値：Ａｓｐ３゜０５　（３）；　 Ｔｈｒ　Ｏ，９３（１）；　Ｓｅｒ　３．２０　（４）；Ｇｌｕ　８．４１（８ ）；Ｇｌｙ　２．０４　（２）；Ａｌａ　４．１７　（４）；Ｖａｔ　２．８７ 　（３）；［１ｅ　１．７９　（２）＋　Ｌｅｕ　５．９６　（６）；Ｔｙｒ　 １．８Ｂ　（２）；ＰｈｅＯ，８３（１）；Ｌｙｓ　２．９４　（３）；Ａｒｇ 　４．９３　（５）。質量スペクトル（Ｍ＋Ｈ）”、測定値５１７９．３、理論 値５１７９．９゜実施例１０：Ｖａｌ″Ｓｅｒ’　Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　Ｓｅｔ ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−３３）ＮＨ，、トリフルオロ酢酸塩の製造；化合 物番号１０製造例Ａと同様の漸次手段で、式：　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｓｐ− Ａｌａ−［ｌｅ　−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−５ｅｒ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ −Ｖａｔ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ −Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｉｎ−Ａｓｐ　−Ｉ　ｌｅ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａｒｇ−Ｇ ｉｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｈｓｅ−ＮＨ。

を有するＧＲＦアナログペプチド（ＣＦ、Ｃ０ＯＨ塩として）の合成を行う。ア ミノ酸分析、かっこ内は理論値：　Ａｓｐ　２．０４　（２）；Ｔｈｒ　Ｏ，９ ３（１）；　Ｓｅｒ　３．２３　（４）；Ｇｌｕ　４．　Ｌ　９　（４）；Ｇｌ ｙＯ，９５（１）＋Ａｌａ　３．２１　（３）；Ｖａｌ　１．９３　（２）；　 Ｉｌｅ　ｌ。

８２　（２）；　Ｌｅｕ　４．９６　（５）：Ｔｙｒ　１．９　Ｌ　（２）；Ｐ ｈｅ　Ｏ，９１（１）；Ｌｙｓ　１．９９　（２）；Ａｒｇ　３．０３　（３） 。質量スペクトル（Ｍ＋Ｈ）”、測定値３７７０．１、理論値３７７０．４゜実 施例１１　：　Ｖａｌ”　Ｓｅｔ”　Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　Ｓｅｔ”　Ｈｓｅｓ ＯｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ，、トリフルオロ酢酸塩の製造：化合物１１製造例 Ａと同様の漸次手段で、式：　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ａｌａ−ｒ　Ｉｅ −Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−３ｅｒ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ −Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ −Ｇｉｎ−Ａｓｐ　−Ｉ　ｌｅ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｈｓｅ−ＮＨ！を有 するＧＲＦアナログペプチド（ＣＦ、Ｃ０ＯＨ塩として）の合成を行う。アミノ 酸分板、かっこ内は理論値：Ａｓｐ　２．０５　（２）；Ｔｈｒ　Ｏ，９６（１ ）：Ｓｅｒ　３．３２　（４）；Ｇｌｕ　２．０４　（２）：　Ａｌａ　３．１ ０　（３）：Ｖａｌ２．１２　（２）；　Ｉｌｅ　１．８６　（２）；Ｌｅｕ　 ５．０４（５）；　Ｔｙｒ　１゜９１　（２）；　Ｐｈｅ　Ｏ，８９（１）；　 Ｌｙｓ　２．０６　（２）；Ａｒｇ　３．０５（３）。質量スペクトル（Ｍ＋Ｈ ）”、測定値３４５６．７、理論値３４５７、００ 実施例１２　：　Ｖａｌ”　Ｓｅｔ”　Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲ Ｆ　（１−２８）ＮＨ，、トリフルオロ酢酸塩の製造；化合物番号１２製造例Ａ と同様の漸次手段で、式：　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ａｌａ−ｒ　ｌｅ− Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ− Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ”Ｌｅｕ−Ｌｅｕ− Ｇｉｎ−Ａｓｐ　−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｈｓｅ−ＮＨ＊を有するＧＲＦアナログペ プチド（ＣＦ、Ｃ０ＯＨ塩として）の合成を行う。アミノ酸分析、かっこ内は理 論値：　Ａｓｐ　２．０５　（２）；Ｔｈｒ　Ｏ，９９（１）；　Ｓｅｒ　２゜ ４６　（３）：Ｇｌｕ　２．０６　（２）；Ａｌａ　３．０９　（３）；Ｖａｌ 　２．０２（２）：Ｉｌｅ　１．８６　（２）；Ｌｅｕ　５．０１　（５）；Ｔ ｙｒ　１．９６　（２）；Ｐｈｅ　Ｏ，９６（１）；　Ｌｙｓ　２．００　（２ ）；Ａｒｇ　２．０１　（２）。質量スペクトル（Ｍ＋Ｈ）”、測定値３２１３ ．５、理論値３２１３．８゜実施例１３　：　Ｖａｌ”　Ｓｅｒ”　Ａｌａ”　 Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−２６）ＮＨ２、トリフルオロ酢酸塩の製造；化合物番 号１３製造例Ａと同様の漸次手段で、式：　）（−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ａ ｌａ−Ｉ　Ｉｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−５ｅｒ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ− Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ− Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｉｎ−Ａ　ｓｐ　−Ｈｓｅ　−Ｎ　Ｈ＊を有するＧＲＦアナ ログペプチド（ＣＦ　３Ｃ００Ｈ塩として）の合成を行う。アミノ酸分析、かっ こ内は理論値：Ａｓｐ　２．０６　（２）：Ｔｈｒ　Ｏ，９２（１）：　Ｓｅｒ 　２．６８　（３）：Ｇｌｕ２．１０　（２）；Ａｌａ　３．４６　（３）；Ｖ ａｌ　１．８９　（２）；　Ｉｌｅ　Ｏ。

８６　（１）；　Ｌｅｕ　４．１１　（４）；Ｔｙｒ　１．７８　（２）；Ｐｈ ｅ　Ｏ，８２（１）；Ｌｙｓ　１．８８　（２）；Ａｒｇ　１．９４　（２）。

質量スペクトル（Ｍ’＋Ｈ）”、測定値２９８６．７、理論値２９８７．５゜実 施例１４　：　Ｖａｌ意Ｓｅｒ＠Ａｌａ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−２１）Ｎ Ｈ，、トリフルオロ酢酸塩の製造：化合物番号１４製造例Ａと同様の漸次手段で 、式：　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ａｌａ−ｌｉｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−３ｅ ｒ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａ　ｌａ　−Ｇ　ｉｎ 　−Ｌ　ｅｕ　−Ｓ　ｅｒ　−Ａ　ｌａ　−Ａ　ｒｇ　−Ｈｓｅ　−Ｎ　Ｈ＊を 有するＧＲＦアナログペプチド（ＣＦ、Ｃ０ＯＨ塩として）の合成を行う。

アミノ酸分析、かっこ内は理論値：Ａｓｐ　１．０３　（１）；Ｔｈｒ　０゜９ ４　（１）；　Ｓｅｒ　２．７７　（３）；Ｇｌｕ　１．０６　（１）；Ａｌａ 　３．３８（３）；Ｖａｌ　１．８６　（２）；Ｉ　ｌｅ　Ｏ，８４（１）；Ｌ ｅｕ　２．０４　（２）：Ｔｙｒ　１．８４　（２）；　Ｐｈｅ　Ｏ，８６（１ ）；　Ｌｙｓ　０．９３　（１）；Ａｒｇ２．０２　（２）。質量スペクトル（ Ｍ＋Ｈ）”、測定値２３８９．３、理論値２３８９．０゜ 製造例Ａの漸次手段に従って、以下のペプチドを製造することもできる。

１１ｅ”Ｓｅｔ・　Ｉ　ｌｅ”　Ｌｅｕ”　Ｓｅｔ”　ｂＧＲＦ（１−２９）Ｎ ＨｔＩ　ｌｅ”　Ｓｅｒ＠Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　Ｓｅｔ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ （１−３０）　Ｈｔ １１ｅ”　Ｓｅｔ’　Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　Ｓｅｔ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１ −３０）ＮＨＣ４Ｈｓ １１ｅ’　Ｓｅｒ＠Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　Ｓｅｔ”　Ｈｓｅ３３ｂＧＲＦ（１− ３３）ＮＨ−Ｃ，Ｈ。

１１ｅ’　Ｓｅｔ’　Ａｌａ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−２７）ＮＨ−ＣｓＨ ＋５Ｔｂｒ″　Ｓｅｒ’　Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　Ｓｅｔ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ （１−２９）ＮＨ−ＣｅＨｌ？ Ｔｈｒ’　Ｓｅｔ”　Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１２８）ＭＨ ＩＴｂｒ”　Ｓｅｒ自ＡｌａＩＳＬｓｕ”　Ｓｅｒ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１ −３３）ＮＨ−ＣｔＨｓ Ｔｈｒ”　Ｓｅｔ’　Ａｌａ”　Ｌｅｕ！’　Ｓｅｔ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（ １−３３）ＮＨ。

Ｔｈｒ”ＶａｌＩ８ｂＧＲＦ（１２９）ＭＨＩＴｂｒ”　ＬｅｕＩＩＩ　Ｌｅｕ ″’　ｂＧＲＦ（１−２９）ＭＨＩＴｂｒ意　ＴｉｅＩｓ−Ｌｅｕｆ？ｂＧＲＦ （１−２９）ＭＨＩＴｂｒ”　Ｓｅｒ’　Ｖａｌ”　Ｌｅｕ”　Ｓｅｔ”　Ｈｓ ｅ”　ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ。

Ｔｈｒ”　Ｓｅｒ’　Ａｌａ”　Ｉｌｅ”　Ｓｅｔ”　ｂＧＲＦ（１−２９）Ｎ ＨｚＴｈｒ”　Ｓｅｔ＠Ｌｅｕ”　Ｌｅｕ”　Ｓｅｔ”　Ｈｓｅ３ＱｂＧＲＦ（ １−３０）ＯＨ Ｔｈｒ”　Ｓｅｔ”　Ｉ　ｌｅ”　Ｌｅｕ”　Ｓｅｔ”　ｂＧＲＦ（１−４０） ＯＨＶａｌ’　Ｓｅｔ”　ＶａｌＩ５Ｌｅｕ”　Ｓｅｒ″”　ｂＧＲＦ（１−２ ９）ＮＨ。

Ｖａｌ鵞Ｓｅｒ＠Ａｌａ”　Ｉｌｅ”　Ｓｅｔ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−３ ７）ＮＨ。

Ｖａｌ”　Ｓｅｒ＠ＬｅｕｌｌｌＬｅｕ”　Ｓｅｔ”　ｂＧＲＦ（１−２９）Ｎ ＨｔＮ−ａ　−（Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）ｔ−７ｙｒｌ　Ｔｈｒ鵞ＶａｌＩｓＬｅｕ！ ７ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ。

Ｎ−ａ−（Ｔｙｒ−３ｅｒ）−Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ”　ＡｌａｌＳ　Ｌｅｕ”マ　 Ｈｓｅ”ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ。

Ｎ−ａ−（Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）ｚ−Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ”　Ｉ　１ｅＩＳＬｅｕ”　 ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ。

Ｎ−ａ−（Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）−Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ”　Ｓｅｔ”　Ａｌａ”　Ｌｅ ｕ”マＳｅｒ”　ｂＧＲＦ（１２９）ＮＨｔ Ｎ−ａ　−（Ｔｙｒ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）−Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ”　Ａｌａ ”Ｌｅｕ”　ｂＧＲＦ（１２９）ＮＨｚ Ｎ−ａ−（Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−３ｅｒ）−Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ”　Ａｌａ′ ″Ｌｅｕ”　ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ。

Ｎ−ａ　−（Ａｓｐ−Ａｌａ）−Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ’　Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　Ｈ ｓｅ”ｂＧＲＦ（１−３３）ＮＨ−Ｃ，Ｈ。

Ｎ−ａ−（Ａｓｐ−Ａｌａ）−Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ″　Ｓｅｒ’　Ａｌａ”　Ｌｅ ｕ”Ｓｅｔ”　Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ−Ｃ，ＨｓＮ−ａ−（Ａｓ ｐ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）−Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ”　Ｓｅｔ’　Ａｌａ”Ｌｅ ｕ”　Ｓｅｔ”　ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨｔＴｈｒ”　Ｃｙａ”　Ａｌａ”　 Ｌｅｕ”　ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨｚＴｈｒ”　Ｃｙａ’　Ａｌａ”　Ｓｅｔ ’　Ｌｅｕ”　Ｓｅｔ”　ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ。

Ｖａｌ”　Ｃｙａ’　ＡｌａｌＳＬｅｕ”　ｂＧＲＦ　（１−２９）ＮＨｚＩ　 ｌｅ”　Ｃｙａ’　Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨｚ製造例 製造例Ｂ 固相法によるＧＲＦアナログの調製に加えて、ｂＧＲＦ（１−４４）ＯＨをフー ドしているＤＮＡのセグメントにおける以下の修飾を用いて、Ｌｅｕ”ｂＧＲＦ （１−４４）ＯＨに関して開示された方法（欧州特許出願第０２１２５３１号） による組換えＤＮＡ方法論によって、該アナログを得ることができる。Ａ　ｌａ ’、Ａ　ｓｎ’、ＧｌｙｌＳおよびＡ　ｓ　ｎ　”　’に関するコドンは、例え ば、各々、（Ａ　ＣＴ）Ｔｈｒ’または（ＡＴＴ）Ｉ　１ｅ”＊たは（ＧＴＴ） Ｖａｔ”、（ＡＧＴ）Ｓｅｔ’。（ＯＣＴ）ＡｌａＩＳ、（ＡＧＴ）Ｓｅｔ”の ようなコドンによって置換される。

さらに、Ｃｙａ３含有ＧＲＦアナログに関してコドンＧＡＴ（Ａｓｐ’）は、Ｃ ｙｓ’に関するコドンＴＧＴによって置換される。蛋白の発現および上記欧州特 許出願に開示されているようなギ酸における臭化シアノーゲンによる開裂の後、 約Ｏ′Ｃで、該溶液に過酸化水素を添加し、Ｃｙｓ残基からＣｙａへ酸化させる 。次いで、上記方法によってペプチドを精製する。

さらに、Ｎ−末端延長ＧＲＦアナログに関して、延長部分をコードしているＤＮ Ａセグメントを以下のようにＮ−末端に付加する；Ｔ　ｙｒ−Ｔ　ｈｒに関する （ＴＡＴＡＣＴ）、（Ｔ　ｙｒ−Ｔ　ｈｒ）ｆｉに関する（ＴＡＴＡＣＴ）、ま たはＴｙｒ−８ｅｔに関する（ＴＡＴＡＧＴ）、（Ｔ　ｙｒ−３ｅｔ）、に関す る（ＴＡＴＡＧＴ）、、またはＴ　ｙｒ−３ｅｒ−Ｔ　ｙｒ−Ｔ　ｈｒに関する （ＴＡＴＡＧＴＴＡＴＡＣＴ）またはＴ　ｙｒ−Ｔ　ｈｒ−Ｔ　ｙｒ−Ｓ　ｅｒ に関する（ＴＡＴＡＣＴＴＡＴＡＧＴ）、Ａｓｐ−Ａｌａに関する（ＧＡＴＧＣ Ｔ）。前駆蛋白に関する遺伝子をイー・コリ（Ｅ、ｃｏｌｉ）発現ベクター中に 挿入する。封入体の蛋白単離の発現、次いで、上記欧州特許出願において開示さ れているようにギ酸中、臭化シアノーゲンでそれらを開裂した後、ギ酸を減圧下 で除去する。次いで、既述の方法によって粗ペプチドが得られる。

請求の範囲に記載するペプチドは天然に生じるアミノ酸によって完全に構成され るので、公知の組換えＤＮＡ技術によって本発明化合物を製造する能力はありう る。これは、Ｄ−Ａｌａおよび／または脱アミノＴｙｒのような非−ＤＮＡ−暗 号成分を含む公知のアナログとはたいそう違っており、大規模生産のために、高 価な化学的合成または化学的製造法と遺伝子工学との組み合わせが必要であろう 。

本発明において使用された組換え宿主微生物は、当業者に周知の組換えＤＮＡ技 術によって作成され、例えば、モレキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａ ｒ　Ｃｔｏｎｉｎｇ）、ティー・マニアティス（Ｔ。

Ｍａｎｉａｔｉｓ）う、ゴールド・スプリング・ハーバ−・ラボラトリ−（Ｇｏ ｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）、（１９８２）お よびビー・ハーバル（Ｂ　、　Ｐ　ｅｒｂａｌ）、ア・プラクティカル・ガイド ・トウ・モレキユラー・クローニング（Ａ　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ｇｕｉｄｅ　 ｔｏ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ）、ジョン・ウィリイ・アンド・サン ズ（Ｊ　ｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆Ｓ　ｏｎｓ）、（１９８４）に開示されており 、これらは本明細書において資料として引用記載する。

Ｃ−末端Ｈｓｅ（ラクトン）、Ｈｓｅｏ　ＨおよびＨｓｅＮ　（Ｒ、ＸＲｂ）ア ナログは、ケンペ（Ｋ　ｅｍｐｅ）ら、バイオ／チクノロシイ（ＢＩｏ／ＴＥＣ ＨＮＯＬＯＧＹ）、第４巻、第５６５頁〜第５６８頁（１９８６）に開示されて いる方法によって製造され得る。

この方法は、本発明において記載したＮ−アルキル化ＧＲＦアナログの製造につ いて説明する。該ペプチドは、化学的または生物工学的方法（各々、製造例Ａま たは製造例Ｂ）のいずれかを使用して作成する。次いて、公知の方法によってＮ −アルキル化を達成する、例えば、マーフィ、ダブリュ・エイ（Ｍｕｒｐｈｙ、 Ｗ、　Ａ、）およびコイ。

ディ・エイチ（Ｃｏｙ、　Ｄ、　Ｈ，）、成長ホルモン放出因子の優れた持続性 アルキル化アナログ（Ｐｏｔｅｎｔ　ｌｏｎｇ−ａｃｔｉｎｇ　ａｌｋｙｌａｔ ｅｄ　ａｎａｌｏｇｓ　ｏｆｇｒｏｗｔｈ　ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｌｅａｓｉｎ ｇ　ｆａｃｔｏｒ）、ベプタイド・リサーチ（Ｐ　ｅｐ−ｔｉｄｅ　Ｒｅｓｅａ ｒｃｈ）、第１巻、第３６頁〜第４１頁（１９８８）、ブイ・シシイアムーシイ （Ｖ　、　Ｓ　ｙｔｈｙａｍｏｏｒｔｈｙ）ら、ボッリヌス神経毒Ａ型およびＢ 型の還元メチル化（Ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ　ｌ１ｌｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　 ｂｏｔｕｌｉｎｕａ＋ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ　ｔｙｐｅｓ　Ａ　ａｎｄ　Ｂ）、 モレキユラー・アンド・セルシーラー・バイオケミストリー（Ｍｏ１．　Ｃｅｌ ｌ、　Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ、　）％第８３巻、第６５頁〜第７２頁（１９ｓ　ｓ） 。

製造例Ｃに従って、以下のペプチドを製造することもできる：Ｎ　−ｅ　−１Ｐ ｒ−Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ”　Ｓｅｔ”　Ｎ　−ｅ　−１Ｐｒ−Ｌｙｓ”’　”Ｖａ ｌＩｓＬｅｕ”　Ｓｅｔ”　ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨｔＮ　−ｅ　−１Ｐｒ− Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ”　Ｓｅｔ”　Ｎ　−ε−１Ｐｒ−Ｌｙｓ””’ＡｌａＩ５Ｌ ｅｕ”　ｂＧＲＦ（１−４０）ＮＨ。

Ｎ−ｅニーＢｚｌ−Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ”　Ｓｅｔ’　Ｎ’−ｅ−Ｂｚｌ−Ｌｙｓ ”″宜ＶａｔＩＳ　Ｔ　ｌｅ”　Ｓｅｔ”　ｂＧＲＦ（１−３２）ＮＨ。

Ｎ−ｅ−ｉＰｒ−Ｔｙｒ’　Ｉ　ｌｅ’　Ｓｅｔ’　Ｎ−ε−１Ｐｒ−Ｌｙｓ田 鵞’Ａｌａ”　Ｌｅｕ”　ｂＧＲＦ（１−４０）ＮＨｚＮ−ε−Ｂｚｌ−Ｔｙｒ ’　Ｖａｌ’　Ｓｅｔ’　Ｎ−ｅ−Ｂｚｌ−Ｌ、ｙｓ””ＶａｌＩｓ　Ｉ　ｌｅ 鵞フ　Ｓｅｒ”　ｂＧＲＦ（１３２）ＮＨｔ実施例で調製したペプチドを含む本 発明の合成ＧＲＦペプチドの全ては、生物学的に活性であり、下垂体にょるＧＨ の放出を刺激するのに有用であると思われる。

体重１にｇ当たりこれらのペプチド約１ｏナノグラム〜約５マイクログラムの投 与量がＧＨ分泌を生じる際に特に効果的であると思われる。

このようなペプチドによるＧＨ分泌の刺激を伴い、正常レベルのＧＨを有するヒ ト、ウシおよび他の動物の成長が増大する。また、投与は、体脂肪含有量を変化 させ、他のＧＨ依存性代謝、免疫および成長プロセスを改変させる。例えば、こ れらのアナログは、火傷を負った後のような環境下でヒトにおける同化プロセス を刺激する手段として有用であり得る。他の例としては、これらのアナログは、 ニワトリ、シチメンチョウ、ブタ、ヤギ、ウシおよびヒツジのような商業的温血 動物に投与でき、魚および他の冷血海洋動物、例えばウミガメおよびウナギ、な らびに両生動物を飼育するための農業に使用され、有効量のペプチドを供給する ことによって成長を促進させ、得られる脂肪に対する蛋白の割合を増加させる。

これらのアナログは、ヒトおよび動物における免疫機能の刺激のために使用され 得る。

乳汁分泌、成長を増加させ、そして免疫機能を刺激するのに体重１にｇ当たり１ ０ナノグラム〜約５０マイクログラムの日用量が特に有効であると思われる。

ヒトおよび動物への投与に関して、これらの合成ペプチドは、少なくとも約９３ ％、好ましくは少なくとも９８％の純度を有すべきである。

これらの合成ペプチドまたはそれらの非毒性塩は、医薬的にまたは獣医学的に許 容される担体と合わせて、医薬組成物、好ましくは持続放出性製剤として形成さ れ、これをヒトを含む動物に、静脈内、皮下、筋肉内、経皮のいずれか、例えば 鼻腔内投与し得る。該投与は、処置される宿主がこのような療法学的治療を必要 とする場合にＧＨの放出を刺激するために医師によって用いられ得る。必要な投 与量は、治療される患者の症状、症状の重篤度、および所望の治療期間によって 変化するであろう。

このようなペプチドは、しばしば、酸付加塩、または、例えば亜鉛、鉄もしくは それに類するものによる金属錯体（本発明の目的の塩として考慮される）のよう な非毒性塩の形態で投与される。このような酸付加塩としては、塩酸塩、臭化水 素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、 コハク酸塩、リンゴ酸塩、アスコルビン酸塩、酒石酸塩およびそれに類するもの が挙げられる。活性成分を等侵食塩水に入れて静脈内投与によって投与する場合 、リン酸塩緩衝溶液またはそれに類するものが有効である。

該ペプチドは、医師の指導の下でヒトに投与されるべきであり、医薬組成物は、 通常、慣用の固体または液体の医薬的に許容される担体と混合したペプチドを含 有している。通常、腹腔的投与は、宿主の体重１にｇ当たり約１００ナノグラム 〜約５０マイクログラムである。

本発明は、その好ましい具体例に関して説明されているが、当業者に明白である 種々の変化および変形は、本明細書に添付した請求の範囲に記載されている発明 の範囲から逸脱せずに為され得る。例えば、ペプチド鎖の修飾、特にペプチドの Ｃ−末端で開始される１または２つの残基の削除は、現在までの公知の実験慣習 に従って行われ、ペプチドの生物学的能力の非常に実質的な部分を維持するペプ チドを生じることができ、このようなペプチドは、本発明の範囲として考慮され る。また、ペプチド化学の全技術分野において公知であるように、付加は、Ｃ− 末端および／またはＮ−末端に為され、および／または一般に、当量の残基が、 天然に生じる残基と置換され、蛋白分解に対する耐性を増大させ、例えば、化合 物１〜１４によって示されるもののように、本発明の範囲から逸脱せずに、請求 の範囲に記載するポリペプチドの効力の少なくとも実質的な部分を有する他のア ナログを生成することができる。さらに、Ｃ−末端のカルボキシル部分における 公知の置換基、例えば低級アルキルアミドは、当量の分子も生成する。

本明細書に記載と同様の方法で、 式：　Ｒ’−Ｒ，−Ｒ’＊−Ｒｓ−Ａｌａ−Ｉ　Ｉｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｒｅ− ３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｒ’＋ｔ−Ｒｔｓ−Ｌｅｕ−Ｒ，５−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ −Ｒ，、−Ａｌａ　Ａｒｇ　Ｒ’ｔ＋−Ｒｌｔ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ｒｔｓ　Ｉｌ ｅ　Ｒａｔ　Ｒｙｅ−Ａｒｇ−Ｇｉｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｒｅ４−Ｒｅ ５−Ｇｌｎ−ＧＩＬＩ−Ｒ３８Ｒ３９Ｒ４０Ａｒｇ　Ｒ４ｔ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　 Ｚ［式中、 Ｒ′は、Ｈ−（Ｙ−Ｘ）、またはＨ−（Ｙ−Ｘ）−（Ｙ’−Ｘ’）、（ここに、 ＹおよびＹｏは同一または異なり、天然に生じるアミノ酸：ＸおよびＸ′は同一 または異なり、ＴｈｒまたはＳｅｒから選択されるか、あるいはＹまたはＹｏが Ａｓｐである場合、ＸおよびＸ゛がＡｌａ；ｎは１〜１０；ｍは１〜５：ｐは１ 〜５）： Ｒ１は、ＴｙｒまたはＨｉｓ； Ｒ′、は、Ａｌａ％Ｄ−Ａｌａ、　Ｔｈｒ、　ＶａｔまたはＩｌｅ；Ｒ８は、Ａ ｓｐまたはＣｙａ； Ｒ６は、ＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ″４．は、ＬｙｓまたはＡｒｇ； Ｒ１３は、ＶａｔまたはＩｌｅ； Ｒ１，は、Ａｌａ、　Ｖａｌ、　Ｌｅｕ％Ｉ　ｌｅまたはＧｌｙ；Ｒ１，は、Ｓ ｅｒまたはＴｙｒ； Ｒ’、、は、ＬｙｓまたはＡｒｇ； Ｒｏは、ＡｌａまたはＬｅｕ； Ｒ□は、Ａ８ｐＳＧ　ｌｕまたはＣｙａ；Ｒ７７は、ＭｅｔＳＩ　ｌｅまたはＬ ｅｕ；Ｒｏは、ＡｓｎまたはＳ　ｅｒ　； Ｒ３４は、ＳｅｔまたはＡｒｇ： Ｒ３ｆｉは、ＡｓｎまたはＳｅｒ： Ｒ３１１は、ＡｒｇまたはＧｉｎ； Ｒ３９は、ＧｌｙまたはＡｒｇ； Ｒ４０は、ＡｌａまたはＳ　ｅｒ　； Ｒ４ｆｆ１は、Ａｌａ、　ＶａｌまたはＰｈｅ；そしてＺは、Ｃ−末端のアミノ 酸残基のカルボキシル部分を表し、基−ＣＯＯＲ，，−ＣＲ，○、−ＣＯＮＨＮ ＨＲ，、−ＣＯＮ（Ｒ，）（Ｒ，）または−ＣＨ，ＯＲ，（ここに、Ｒ，および Ｒ５はＣ，〜Ｃ１ｌアルキルまたは水素原子）であるコ で示されるＧＲＦペプチド：あるいはそのＣ−末端として、Ｎ−末端のＲから位 置２０〜４４（好ましくは位置２７〜４４）のいずれかにおける残基に延びてい るそれらの生物学的に活性な断片二またはそのＨｓｅ（ラクトン）、そのＨｓｅ ｏ　ＨもしくはＨｓｅＮ（Ｒ，）（Ｒｂ）および／またはその非毒性塩は、現在 まで公知の実験慣習に従って行われ、ペプチドの生物学的に有効な非常に実質的 な部分を維持するペプチドを生じることができ、このようなペプチドは、本明細 書に記載のもう１つの発明でもある。これらのペプチドは、同様の一般的な方法 で、調製（位置２のＶａｌ、ｌｉｅまたはＴｈｒをＮ−メチル−ＤＡｌａ、　Ｄ −Ａｌａまたは好ましくはＡｌａに置換する）および利用することができる。

第１表 ウシ血漿におけるｉｎ　ｖｉｔｒｏ安定性および２位および１５位で置換された ＧＲＦアナログの食用ウシ（ｓｔｅｅｒ）におけるｉｎ　ｖｉｖｏ生物学的活性 研究■ ｂＧＲＦ（１−４４）Ｎｌ２　ｎｄ　１００’Ｌｅｕ２７−ｂＧＲＦ（１−２９ ）Ｎ）ｌｘ　３９．８　１０６’Ａｌａ１５．　Ｌｅｕ２７−ｂＧＲＦ（１−２ ９）Ｎｌ２　５６．２　１１ｇ”Ｔｈｒ２．Ｌｅｕ２７−ｂＧＲＦ（１−２９） ＮＨ２＋＋　７５．６　、　９４”Ｔｈｒ２．　Ａ１ａ１５．　Ｌｅｕ２７−ｂ ＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２＋＋　９１．１　１９５”研究■ ｂＧＲＦ（１−４４）Ｎｌ２　ｎｄ　１００’　１００’Ｌｅｕ２７−ｂＧＲＦ （１−２９）Ｎｌ２　４６．８　ｎｄ　ｎｄＬｅｕ２．Ａ１ａ１５．Ｌｅｕ２７ −ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２＋＋　８６Ｊ　１００’　ｎｄＶａ１２．　Ａ１ ａ１５．　Ｌｅｕ２７−ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２＋＋　８３．４　１６７ｂ ２１４ｂ１１ｅ２．Ａｌａ１５．Ｌｅｕ２７−ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２＋＋ 　８０！　１７１″１６２゜Ｔｈｒ２．＾１ａ１５．Ｌｅｕ２７−ｂＧＲＦ（１ ，−２９）ＮＨ２＋＋　ｎｄ　”　１４８ｂ１８７′′↑　３７°Ｃで１時間、 ０．０３１Ｍのペプチドをウシ血漿と一緒にインキコベートした。０．１ｘＱの 微量試料を０．２％トリフルオロ酢酸水溶液２ＲＱで急冷し、固相抽出し、ティ ー・エム・クビアク（Ｔ、Ｍ、　Ｋｕｂｉａｋ）ら、ドラッグ・メタボリズム・ アンド・ディスポジション（Ｄ　ｒｕｇ　Ｍｅｔ、　Ｄ　ｉｓｐ、　）、第１７ ＠、第３９３頁〜第３９７頁（１，９８９）に開示されているようにＨＰＬＣ分 析した。

＃　食用ウシ（ｓｔｅｅｒ）に０．０１ナノモル／ｋｖの投与量でペプチドを静 脈内注射した。該方法はダブリュ・エム・モスリイ（Ｗ、Ｍ。

Ｍｏ５ｅｌｅｙ）ら、ジャーナル・オブ・エンドクリノロジー（Ｊ。

Ｅ　ｎｄｏｃｒ、　）、第１１７巻、第２５３頁〜第２５９頁（１９８８）の記 載に従った。相対効力は、処置後、２時間モニターした血清成長ホルモン（ＧＨ ）曲線下面積に基づいて算出した。

９　食用ウシに０．７５ナノモル／に９の投与量のペプチドを皮下注射した。相 対効力は、処置後、６時間モニターした血清ＧＨ曲曲線面面積基づいて算出した 。各欄および／または研究内で異なる上付文字を有する１、′、′値は、ｐ＜０ ．０５で統計的に異なった。

ｎｄ−測定せず 本　血漿ブール１ 宜寡　血漿ブール１とは異なる血漿ブール２十　トリフルオロ酢酸塩として ＋十　残基２が１時間のインキュベートの間にわたってｉｎ　ｖｉｔｒｏでウシ 血漿中でのインキュベーションによって観察された後に開裂しなかった。

国際調査報告 ＰＣＴ／ＵＳ　９０１０２９２３ Ｓ＾３７４２２

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）２位に通常見られるアミノ酸残基の代わりにＴｈｒ、ＶａｌまたはＩｌｅ 残基を有し、１５位にＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＩｌｅまたはＧｌｙからなる群 から選択されたアミノ酸を有し、所望により、Ｎ−末端がＨ−（Ｙ−Ｘ）ｎまた はＨ−（Ｙ−Ｘ）ｍ（Ｙ′−Ｘ′）ｐ［式中、ＹおよびＹ′は、同一または異な り、天然に生じるアミノ酸であり；ＸおよびＸ′は、同一または異なり、Ｔｈｒ 、ＳｅｒまたはＡｌａから選択され；ｎは１〜１０；ｍは１〜５；ｐは１〜５を 意味する〕で置換されていてもよいＧＲＦペプチド。 （２）１５位のアミノ酸がＡｌａである請求項１記載のＧＲＦペプチド。 （３）式Ｒ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｒ８−Ｓｅ ｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｒ１２−Ｒ１３−Ｌｅｕ−Ｒ１５−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｒ１ ６−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｒ２１−Ｒ２２−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｒ２５−Ｉｌｅ−Ｒ２ ７−Ｒ２８−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−ＧＩｙ−Ｇ１ｕ−Ｒ３４−Ｒ３５−Ｇｌ ｎ−Ｇｌｕ−Ｒ３６−Ｒ３８−Ｒ１０−Ａｒｇ−Ｒ４２−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｚ［ 式中、 Ｒは、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、ベンジル、Ｈ−（Ｙ−Ｘ）ｎまたはＨ−（Ｙ− Ｘ）ｍ（Ｙ′−Ｘ′）ｐ（ここに、ＹおよびＹ′は同一または異なり、天然に生 じるアミノ酸であり；ＸおよびＸ′は同一または異なり、Ｔｈｒ、Ｓｅｒまたは Ａｌａから選択され：ｎは１〜１０；ｍは１〜５；ｐは１〜５； Ｒ１は、ＴｙｒまたはＨｉｓ； Ｒ２は、Ｔｈｒ、Ｖａ１またはＩｌｅ；Ｒ３は、ＡｓｐまたはＣｙａ； Ｒ８は、Ａｓｎ、Ｓｅｒ； Ｒ１２は、ＬｙｓまたはＡｒｇ、あるいはＲがＣ１〜Ｃ５アルキルまたはベンジ ルである場合、Ｎ−ε−アルキル−もしくはＮ−ε−ベンジル−Ｌｙｓ； Ｒ１３は、Ｖａ１またはＩｌｅ； Ｒ１５は、Ａｌａ、Ｖａ１、Ｌｅｕ、ＩｌｅまたはＧｌｙ；Ｒ１６は、Ｓｅｒま たはＴｙｒ； Ｒ２１は、ＬｙｓまたはＡｒｇ、あるいはＲがＣ１〜Ｃ５アルキルまたはベンジ ルである場合、Ｎ−ε−アルキル−またはＮ−ε−ベンジル−Ｌｙｓ； Ｒ２２は、ＡｌａまたはＬｅｕ； Ｒ２５は、ＡｓｐまたはＧｌｕ； Ｒ２７は、Ｍｅｔ、ＩｌｅまたはＬｅｕ；Ｒ２８は、ＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ３４は、ＳｅｒまたはＡｒｇ； Ｒ３５は、ＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ３６は、ＡｒｇまたはＧｌｎ； Ｒ３８は、ＧｌｙまたはＡｒｇ； Ｒ４０は、ＡｌａまたはＳｅｒ； Ｒ４２は、Ａｌａ、ＶａｌまたはＰｈｅ；Ｚは、Ｃ−末端のアミノ酸残基のカル ボキシル部分を表し、基−ＣＯＯＲａ、−ＣＲａＯ、−ＣＯＮＨＮＨＲａ、−Ｃ ＯＮ（Ｒａ）（Ｒｂ）または−ＣＨ２ＯＲａ（ここに、ＲｏおよびＲｂはＣ１〜 Ｃ６アルキルまたは水素原子）である］ を有する請求項１記載のＧＲＦペプチド；あるいはＮ−末端のＲからそのＣ−末 端としての２０〜４４位いずれかの残基まで延びるその生物学的活性断片；また は、前記のＨｓｅ（ラクトン）、そのＨｓｅＯＨまたはＨｓｅＮ（Ｒａ）（Ｒｂ ）および／またはその前記の非毒性塩。 （４）式Ｈ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅ ｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｌｅ ｕ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｈｓ ｅ−ＮＨ２を有する請求項３記載のＧＲＦペプチドまたはその非毒性塩。 （５）式Ｈ−Ｔｙｒ−Ｖａ１−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅ ｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｌｅ ｕ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｈｓｅ−ＮＨ２を有するＧＲＦペプチドまたはそ の非毒性塩。 （６）Ｎ−末端のＲからそのＣ−末端としての２７〜４４位いずれかの残基まで 延びるその生物学的活性断片からなり、Ｒ１５がＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕまたは Ｉｌｅである請求項３記載のＧＲＦペプチド。 （７）ＲがＨであり、Ｒ１５がＡｌａである請求項６記載のＧＲＦペプチド。 （８）Ｒ、がＴｙｒである請求項７記載のＧＲＦペプチド（９）ＲａおよびＲ２ ６がＳｅｒである請求項８記載のＧＲＦペプチド。 （１０）式Ｈ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓ ｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｌ ｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｉ ｌｅ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇ１ｙ−Ｈｓｅ−ＮＨ２を有 する請求項９記載のＧＲＦペプチドまたはその非毒性塩。 （１１）Ｒ２がＴｈｒである請求項６記載のＧＲＦペプチド。 （１２）式Ｈ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓ ｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｌ ｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｉ ｌｅ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｈｓｅ−ＮＨ２、Ｈ −Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ −Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａ１ａ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ −Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ −Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｈｓｅ−ＮＨ−Ｃ２Ｈ５、Ｈ−Ｔ ｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔ ｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａ ｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｈ ｓｅ−ＮＨ２を有する請求項１１記載のＧＲＦペプチドまたはその非毒性塩。 （１３）Ｒ２がＩｌｅである請求項６記載のＧＲＦペプチド。 （１４）式Ｈ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓ ｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｌ ｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｉ ｌｅ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｈｓｅ−ＮＨ２を有する請求項１３記載のＧＲ Ｆペプチドまたはその非毒性塩。 （１５）Ｖａｌ２Ｓｅｒ８Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ２８Ｈｓｅ３０ｂＧＲＦ （１−３０）ＮＨ２、Ｖａｌ２Ｓｅｒ８Ａ１ａ１５Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ２８Ｈｓｅ ３０ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ−Ｃ２Ｈ５、Ｉｌｅ２Ｓｅｒ８Ａｌａ１５Ｌｅｕ ２７Ｓｅｒ２８Ｈｓｅ３０ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ２、Ｉｌｅ２Ｓｅｒ６Ａｌ ａ１５Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ２６Ｈｓｅ３０ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ−Ｃ２Ｈ５、 Ｖａｌ２Ｓｅｒ６Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ２８Ｈｓｅ３３ｂＧＲＦ（１−３ ３）ＮＨ２、Ｖａｌ２Ｓｅｒ６Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ２８Ｈｓｅ３３ｂＧ ＲＦ（１−３３）ＮＨ−Ｃ２Ｈ５、Ｉｌｅ２Ｓｅｒ６Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７Ｓｅ ｒ２８Ｈｓｅ３３ｂＧＲＦ（１−３３）ＮＨ２、Ｉｌｅ２Ｓｅｒ８Ａｌａ１５Ｌ ｅｕ２７Ｓｅｒ２８Ｈｓｅ３３ｂＧＲＦ（１−３３）ＮＨ−Ｃ２Ｈ５、Ｔｈｒ２ Ｓｅｒ８Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ２８Ｈｓｅ３０ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ ２、Ｔｈｒ２Ｓｅｒ８Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ２８Ｈｓｅ３０ｂＧＲＦ（１ −３０）ＮＨ−Ｃ２Ｈ５、Ｔｈｒ２Ｓｅｒ８Ａ１ａ１５Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ２８Ｈ ｓｅ３３ｂＧＲＦ（１−３３）ＮＨ２、Ｔｈｒ２Ｓｅｒ６Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７ Ｓｅｒ２８Ｈｓｅ３３ｂＧＲＦ（１−３３）ＮＨ−Ｃ２Ｈ５、Ｖａｌ２Ｓｅｒ６ Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７Ｈｓｅ２８ｂＧＲＦ（１−２８）ＮＨ２、Ｖａｌ２Ｓｅｒ ８Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７Ｈｓｅ２８ｂＧＲＦ（１−２８）ＮＨ−Ｃ２Ｈ５、ｌｌ ｅ２Ｓｅｒ８Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７Ｈｓｅ２８ｂＧＲＦ（１−２８）ＮＨ２、Ｉ ｌｅ２Ｓｅｒ６Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７Ｈｓｅ２８ｂＧＲＦ（１−２８）ＮＨ−Ｃ ２Ｈ５、Ｔｈｒ２Ｓｅｒ８Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７Ｈｓｅ２８ｂＧＲＦ（１−２８ ）ＮＨ２、Ｔｈｒ２Ｓｅｒ８Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７Ｈｓｅ２８ｂＧＲＦ（１−２ ８）ＮＨ−Ｃ２Ｈ５からなる群から選択される請求項６記載のＧＲＦペプチドま たはその非毒性塩。 （１６）Ｔｈｒ２Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２、Ｖａｌ２ Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２、Ｉｌｅ２Ａｌａ１５Ｌｅｕ ２７ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２、Ｎ−α−（Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）Ｔｙｒ１Ｔｈｒ ２Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２、Ｎ−α−（Ｔｙｒ−Ｔｈ ｒ）２Ｔｙｒ１Ｔｈｒ２Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２、Ｎ −α−（Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）Ｔｙｒ１Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７ｂＧＲＦ（１−２９） ＮＨ２、Ｎ−α−（Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）Ｔｙｒ１Ｉｌｅ２Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７ｂ ＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２、Ｎ−α−（Ｔｙｒ−Ｓｅｒ）Ｔｙｒ１Ｔｈｒ２Ａｌ ａ１５Ｌｅｕ２７ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２、Ｖａｌ２，Ｓｅｒ８Ａ１ａ１５ Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ２８Ｈｓｅ４５ｂＧＲＦ（１−４５）ＮＨ２、Ｉｌｅ２Ｓｅｒ ６Ａｌａ１５Ｈｓｅ２７ｂＧＲＦ（１−２７）ＮＨ２、Ｔｈｒ２Ｖａｌ１５ｂＧ ＲＦ（１−２９）ＮＨ２、Ｔｈｒ２Ｌｅｕ１５Ｌｅｕ２７ｂＧＲＦ（１−２９） ＮＨ２、Ｔｈｒ２Ｉｌｅ１５Ｌｅｕ２７ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２、Ｔｈｒ２ Ｓｅｒ８Ｖａｌ１５Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ２８Ｈｓｅ３０ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ ２、Ｔｈｒ２Ｓｅｒ８Ａｌａ１５Ｉｌｅ２７Ｓｅｒ２８ｂＧＲＦ（１−２９）Ｎ Ｈ２、Ｔｈｒ２Ｓｅｒ８Ｌｅｕ１５Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ２８Ｈｓｅ３０ｂＧＲＦ（ １−３０）ＯＨ、Ｔｈｒ２Ｓｅｒ８Ｉｌｅ１５Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ２８ｂＧＲＦ（ １−４０）ＯＨ、Ｎ−α−（Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）２−Ｔｙｒ１Ｔｈｒ２Ｖａｌ１５ Ｌｅｕ２７ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２、Ｎ−α−（Ｔｙｒ−Ｓｅｒ）−Ｔｙｒ １Ｔｈｒ２Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７Ｈｓｅ３０ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ２、Ｎ− α−（Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）２−Ｔｙｒ１Ｔｈｒ２Ｉｌｅ１５Ｌｅｕ２７ｂＧＲＦ（ １−２９）ＮＨ２、Ｎ−α−（Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）−Ｔｙｒ１Ｔｈｒ２Ｓｅｒ８Ａ ｌａ１５Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ２８ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２、Ｎ−α−（Ｔｙｒ −Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）−Ｔｙｒ１Ｔｈｒ２Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７ｂＧＲＦ （１−２９）ＮＨ２、Ｎ−α−（Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ）−Ｔｙｒ１ Ｔｈｒ２Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２、Ｎ−α−（ＡｓＰ −Ａｌａ）−Ｔｙｒ１Ｔｈｒ２Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７Ｈｓｅ３３ｂＧＲＦ（１− ３３）ＮＨ−Ｃ２Ｈ５、Ｎ−α−（Ａｓｐ−Ａｌａ）−Ｔｙｒ１Ｔｈｒ２Ｓｅｒ ８Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ２８Ｈｓｅ３０ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ−Ｃ４ Ｈ８、Ｎ−α−（Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ）−Ｔｙｒ１Ｔｈｒ２Ｓｅｒ ８Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ２８ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２からなる群から 選択される請求項６記載のＧＲＦペプチドまたはその非毒性塩。 （１７）２位で通常見られるアミノ酸残基の代わりにＴｈｒ、ＶａｌまたはＩｌ ｅ残基を有し、１５位にＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＩｌｅまたはＧｌｙからなる 群から選択されるアミノ酸を有し、所望によりＮ−末端がＨ−（Ｙ−Ｘ）ｎまた はＨ−（Ｙ−Ｘ）ｍ（Ｘ′−Ｘ′）ｐ（ここに、ＹおよびＹ′は、同一または異 なり、天然に生じるアミノ酸であり；ＸおよびＸ′は同一または異なり、Ｔｈｒ 、ＳｅｒまたはＡｌａから選択され；ｎは１〜１０；ｍは１〜５；ｐは１〜５を 意味する）で置換されていてもよいＧＲＦペプチドの有効量を動物に投与するこ とを特徴とする動物における成長ホルモン放出刺激方法。 （１８）ＧＲＦペプチドが式Ｒ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ− Ｔｈｒ−Ｒ６−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｒ１２−Ｒ１３−Ｌｅｕ−Ｒ１５−Ｇ ｈ−Ｌｅｕ−Ｒ１８−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｒ２１−Ｒ２２−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｒ２ ５−Ｉｌｅ−Ｒ２７−Ｒ２８−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｒ３ ４−Ｒ３５−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｒ３８−Ｒ３９−Ｒ４０−Ａｒｇ−Ｒ４２−Ａｒ ｇ−Ｌｅｕ−Ｚ［式中、 Ｒは、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、ベンジル、Ｈ−（Ｙ−Ｘ）ｎまたはＨ−（Ｙ− Ｘ）ｍ（Ｙ′−Ｘ′）ｐ（ここに、ＹおよびＹ′は、同一または異なり、天然に 生じるアミノ酸であり；ＸおよびＸ′は同一または異なり、Ｔｈｒ、Ｓｅｒまた はＡｌａ；ｎは１〜１０；ｍは１〜５；ｐは１〜５）； Ｒ１は、ＴｙｒまたはＨｉｓ； Ｒ２は、Ｔｈｒ、Ｖａ１またはＩｌｅ；Ｒ３は、ＡｓｐまたはＣｙａ； Ｒ８は、Ａｓｎ、Ｓｅｒ； Ｒ１２は、ＬｙｓまたはＡｒｇ、あるいはＲがＣ１〜Ｃ５アルキルまたはベンジ ルである場合、Ｎ−ε−アルキル−もしくはＮ−ε−ベンジル−Ｌｙｓ； Ｒ１３は、ＶａｌまたはＩｌｅ； Ｒ１５は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＩｌｅまたはＧｌｙ；Ｒ１６は、Ｓｅｒま たはＴｙｒ； Ｒ２１は、ＬｙｓまたはＡｒｇ、あるいはＲがＣ１〜Ｃ５アルキルまたはベンジ ルである場合、Ｎ−ε−アルキル−またはＮ−ε−ベンジル−Ｌｙｓ； Ｒ２２は、ＡｌａまたはＬｅｕ； Ｒ２５は、ＡｓｐまたはＧｌｕ； Ｒ２７は、Ｍｅｔ、ＩｌｅまたはＬｅｕ；Ｒ２８は、ＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ３４は、ＳｅｒまたはＡｒｇ； Ｒ３５は、ＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ３６は、ＡｒｇまたはＧｌｎ； Ｒ３９は、ＧｌｙまたはＡｒｇ； Ｒ４０は、ＡｌａまたはＳｅｒ； Ｒ４２は、Ａｌａ、ＶａｌまたはＰｈｅ；Ｚは、Ｃ−末端のアミノ酸残基のカル ボキシル部分を表し、基−ＣＯＯＲａ、−ＣＲａＯ、−ＣＯＮＨＮＨＲａ、−Ｃ ＯＮ（Ｒａ）（Ｒｂ）または−ＣＨ２ＯＲａ（ここに、ＲａおよびＲｂはＣ１〜 Ｃ８アルキルまたは水素原子）である］ を有するか；あるいはＮ−末端のＲからそのＣ−末端としての２０〜４４位いず れかの残基まで延びるその生物学的活性断片；または、前記のＨｓｅ（ラクトン ）、そのＨｓｅＯＨまたはＨｓｅＮ（Ｒａ）（Ｒｂ）および／または前記の非毒 性塩である請求項１７記載の方法。 （１９）ＧＲＦペプチドがＮ−末端のＲからそのＣ−末端としての２７〜４４位 いずれかの残基まで延びるその生物学的活性断片からなる請求項１７記載の方法 。 （２０）式【配列があります】 ［式中、 Ｒは、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、ベンジル、Ｈ−（Ｙ−Ｘ）ｎまたはＨ−（Ｙ− Ｘ）ｍ（Ｙ′−Ｘ′）ｐ（ここに、ＹおよびＹ′は、同一または異なり、天然に 生じるアミノ酸であり；ＸおよびＸ′は同一または異なり、Ｔｈｒ、Ｓｅｒまた はＡｌａ；ｎは１〜１０；ｍは１〜５；ｐは１〜５）； Ｒ１は、ＴｙｒまたはＨｉｓ； Ｒ２は、Ｔｈｒ、ＶａｌまたはＩｌｅ；Ｒ３は、ＡｓｐまたはＣｙａ； Ｒ８は、Ａｓｎ、Ｓｅｒ； Ｒ１２は、ＬｙｓまたはＡｒｇ、あるいはＲがＣ１〜Ｃ５アルキルまたはベンジ ルである場合、Ｎ−ε−アルキル−もしくはＮ−ε−ベンジル−Ｌｙｓ； Ｒ１３は、ＶａｌまたはＩｌｅ； Ｒ１５は、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕまたはＩｌｅ；Ｒ１６は、ＳｅｒまたはＴｙ ｒ； Ｒ２１は、ＬｙｓまたはＡｒｇ、あるいはＲがＣ１〜Ｃ５アルキルまたはベンジ ルである場合、Ｎ−ε−アルキル−またはＮ−ε−ベンジル−Ｌｙｓ； Ｒ２２は、ＡｌａまたはＬｅｕ； Ｒ２５は、ＡｓｐまたはＧｌｕ； Ｒ２７は、Ｍｅｔ、ＩｌｅまたはＬｅｕ；Ｒ２８は、ＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ３４は、ＳｅｒまたはＡｒｇ； Ｒ３５は、ＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ３６は、ＡｒｇまたはＧｌｎ； Ｒ３８は、ＧｌｙまたはＡｒｇ； Ｒ４０は、ＡｌａまたはＳｅｒ； Ｒ４２は、Ａｌａ、ＶａｌまたはＰｈｅ；Ｚは、Ｃ−末端のアミノ酸残基のカル ボキシル部分を表し、基−ＣＯＯＲａ、−ＣＲａＯ、−ＣＯＮＨＮＨＲａ、−Ｃ ＯＮ（Ｒａ）（Ｒｂ）または−ＣＨ２ＯＲａ（ここに、ＲａおよびＲｂはＣ１〜 Ｃ８アルキルまたは水素原子）である］ で示されるＧＲＦペプチド；あるいはＮ−末端のＲから、そのＣ−末端としての ２０〜４４位いずれかの残基まで延びるその生物学的活性断片；または、前記の Ｈｓｅ（ラクトン）、そのＨｓｅＯＨまたはＨｓｅＮ（Ｒａ）（Ｒｂ）および／ または前記の非毒性塩の有効量および医薬的に許容される担体からなる動物にお ける成長ホルモン放出刺激用組成物。 （２１）ＧＲＦペプチドがＮ−末端のＲからそのＣ−末端としての２７〜４４位 いずれかの残基まで延びる生物学的活性断片からなる請求項１９記載の組成物。 （２２）式Ｒ′−Ｒ１−Ｒ′２−Ｒ３−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｒ６ −Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｒ′１２−Ｒ１３−Ｌｅｕ−Ｒ１５−Ｇｌｎ−Ｌｅ ｕ−Ｒ１８−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｒ′２１−Ｒ２２−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｒ２５−Ｉ ｌｅ−Ｒ２７−Ｒ２８−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｒ３４−Ｒ ３５−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｒ３８−Ｒ３９−Ｒ４０−Ａｒｇ−Ｒ４２−Ａｒｇ−Ｌ ｅｕ−Ｚ［式中、 Ｒ′は、Ｈ−（Ｙ−Ｘ）ｎまたはＨ−（Ｙ−Ｘ）ｍ（Ｙ′−Ｘ′）ｐ（ここに、 ＹおよびＹ′は、同一または異なり、天然に生じるアミノ酸であり；ＸおよびＸ ′は同一または異なり、ＴｈｒまたはＳｅｒ、またはＹおよびＹ′がＡｓｐであ る場合、ＸおよびＸ′はＡｌａ；ｎは１〜１０；ｍは１〜５；ｐは１〜５）； Ｒ１は、ＴｙｒまたはＨｉｓ； Ｒ′２は、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｔｈｒ、ＶａｌまたはＩｌｅ；Ｒ３は、Ａｓｐ またはＣｙａ； Ｒ６は、ＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ′１２は、ＬｙｓまたはＡｒｇ； Ｒ１３は、ＶａＩまたはＩｌｅ； Ｒ１５は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＩｌｅまたはＧｌｙ；Ｒ１６は、Ｓｅｒま たはＴｙｒ； Ｒ′２１は、ＬｙｓまたはＡｒｇ； Ｒ２２は、ＡｌａまたはＬｅｕ； Ｒ２５は、Ａｓｐ、ＧｌｕまたはＣｙａ；Ｒ２７は、Ｍｅｔ、ＩｌｅまたはＬｅ ｕ；Ｒ２８は、ＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ３４は、ＳｅｒまたはＡｒｇ； Ｒ３５は、ＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ３６は、ＡｒｇまたはＧｌｎ； Ｒ２８は、ＧｌｙまたはＡｒｇ； Ｒ４０は、ＡｌａまたはＳｅｒ； Ｒ４２は、Ａｌａ、ＶａｌまたはＰｈｅ；Ｚは、Ｃ−末端のアミノ酸残基のカル ボキシル部分を表し、基−ＣＯＯＲａ、−ＣＲａＯ、−ＣＯＮＨＮＨＲａ、−Ｃ ＯＮ（Ｒａ）（Ｒｂ）または−ＣＨ２ＯＲａ（ここに、ＲａおよびＲｂはＣ１〜 Ｃ６アルキルまたは水素原子）である］ で示されるＧＲＦペプチド；あるいはＮ−末端のＲから、そのＣ−末端としての ２０〜４４位いずれかの残基まで延びるその生物学的活性断片；または、Ｈｓｅ （ラクトン）、そのＨｓｅＯＨまたはＨｓｅＮ（Ｒａ）（Ｒｂ）および／または その非毒性塩。