JPH0461635B2 - - Google Patents
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- JPH0461635B2 JPH0461635B2 JP58105600A JP10560083A JPH0461635B2 JP H0461635 B2 JPH0461635 B2 JP H0461635B2 JP 58105600 A JP58105600 A JP 58105600A JP 10560083 A JP10560083 A JP 10560083A JP H0461635 B2 JPH0461635 B2 JP H0461635B2
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- Japan
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- oxygen
- parts
- nahco
- anaerobic bacteria
- anaerobic
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は嫌気性細菌の培養方法に関する。更に
詳しくは亜二チオン酸塩、炭酸水素ナトリウム、
炭酸ナトリウムおよび水を含有する脱酸素剤と嫌
気性細菌を接種した培地とを密封容器内に封入
し、５時間以内に酸素濃度を0.1％以下にし、炭
酸ガス濃度を５〜20％で培養することを特徴とす
る嫌気性細菌の培養方法に関する。 細菌は酸素の要求度から(1)偏性好気性菌、(2)通
性嫌気性菌、(3)偏性嫌気性菌に分けられ、このう
ち偏性嫌気性菌の中にはボツリヌス菌、ウエルシ
ユ菌等の食中毒菌が多く含まれており、近年予防
の見地からその研究手法の一環として、または病
原菌検査手法として嫌気性細菌の培養方法が注目
されてきている。 しかしながら、従来嫌気性細菌の培養には特別
の器具、装置を必要とし、かつ操作にはかなりの
熟練を必要とされていた。 従来までの方法には(1)重層法、(2)高層固形培地
培養法、(3)空気置換法、(4)化学的酸素吸収法、(5)
還元剤等を培地に加える方法、(6)生物学的方法等
があるが、これらはいずれも嫌気雰囲気を作るた
めには操作が煩雑であつた。 最も一般的に行なわれている方法は、(4)のうち
ガスパツク法で原理は化学的方法により水素ガス
及び炭酸ガスを発生させ、パラジウム金属触媒を
用いて水素と容器内の酸素とを反応させて嫌気状
態を作り出すものである。しかしながら、この方
法では、可燃性の水素ガスの発生を伴ない、酸
素除去後も十％の水素ガスが残存し危険である、
触媒の温度が100℃以上の高温に達する、触
媒の再生が必要である、経済性に劣る、等の欠
点があつた。 これらの欠点を解決する方法としては酸素を除
去するために脱酸素剤を使用することが考えられ
る。しかし嫌気性細菌はその生育に炭酸ガスを必
要とする菌が多く、単に脱酸素剤を使用しても嫌
気性細菌の培養方法としては不十分である。 本発明はこれらの欠点を克服したものである。
すなわち本発明は、亜二チオン酸塩、炭酸水素ナ
トリウム、炭酸ナトリウムおよび水を含有し、
（炭酸水素ナトリウム）／（炭酸水素ナトリウム
＋炭酸ナトリウム）の重量比が0.4〜0.9である脱
酸素剤と嫌気性細菌を接種した培地とを密封容器
内に封入し、５時間以内に酸素濃度を0.1％以下
にし、炭酸ガス濃度を５〜20％で培養することを
特徴とする嫌気性細菌の培養方法、である。 本発明によれは触媒や特殊な器具、装置を必要
とせず、上記の亜二チオン酸塩系脱酸素剤を密封
容器、例えば酸素透気度100c.c.／m2・24hr・atm
以下の包材で作られた袋に嫌気性細菌を接種した
培地と共に封入、密封するのみでよく、極めて簡
単に炭酸ガスの共存する嫌気雰囲気を作ることが
可能である。 また、嫌気雰囲気に到達したかどうかを簡単に
確認するため、酸素検知剤を使用することも可能
である。 本発明において亜二チオン酸塩としては亜二チ
オン酸ナトリウム（Na2S2O4）および亜二チオン
酸亜鉛（ZnS2O4）が一般的であり、好ましくは
亜二チオン酸ナトリウムが用いられる。 本発明における脱酸素剤は、Na2S2O4100部に
対してNaHCO310〜400部、Na2CO31〜950部お
よび水５〜40部からなり、かつ（NaHCO3）／
（NaHCO3＋Na2CO3）の重量比が0.3〜0.9であ
る。更に好ましくはNa2S2O4100部に対して
NaHCO350〜200部、Na2CO315〜200部および水
10〜20部からなり、かつ（NaHCO3）／
（NaHCO3＋Na2CO3）の重量比が0.4〜0.9であ
る。 この脱酸素剤に含まれている水は純水又は塩類
の水溶液又は有機物の水溶液等各種の水溶液を用
いることが可能である。 これらの水、もしくは水溶液はNa2S2O4と
NaHCO3とNa2CO3の混合物に直接添加する方法
もとられるが、好ましくは原末の取扱いの難易や
保存の好し悪しなどを考慮して粒状物質に含浸し
たかたちで添加する。この際に用いられる粒状物
質とは水または水溶液に不溶の物質であり、例え
ば珪藻土、パーライト、ゼオライト、活性アルミ
ナ、シリカゲル、活性炭、活性白土その他の無機
性粒状物を意味する。これら粒状物質の大きさは
粒径が一般的には0.1〜５mmであり、好ましくは
0.5〜3.5mmである。 また、これら脱酸素剤を包む包装材料としては
通気性の包材であればよいが、脱酸素剤の充填工
程および取扱い時の性能低下を考慮して、ガーレ
ー式透気度で10〜50000sec／100c.c.・inch2、好ま
しくは50〜10000sec／100c.c.・inch2である。 嫌気性菌の培養には適正な炭酸ガス雰囲気が必
要であり通常はその濃度が５〜20％である。 本発明はこの炭酸ガス雰囲気（NaHCO3）／
（NaHCO3＋Na2CO3）の重量比を変えることに
よりコントロールするものであり、この重量比が
0.3未満の場合は炭酸ガスの発生が５％未満であ
り、0.9を越える場合は20％を越えてしまうので
0.3〜0.9の範囲が好ましい。 本発明に使用する密封容器は酸素透気度が500
c.c.／m2・24hr・atm以下、好ましくは100c.c.／
m2・24hr・atm以下の材質で作られ、完全に密封
可能であれば、その形態にかかわらず使用可能で
ある。 例えば本発明に使用する最も簡単な容器は、各
種塩化ビニリデンコートフイルム〔KOP（商品
名）、KON、KPET、等〕、ビニロン等で作られ
た袋であり、嫌気性菌の接種された培地を亜二チ
オン酸塩及び添加物からなる脱酸素剤と共に封入
し、ヒートシートすればよい。 このような透明フイルムを用いることにより培
養中、嫌気性菌の生育状況の観察が可能となり便
利である。 嫌気性細菌を十分に生育させるには、可乃的短
時間（好ましくは５時間以内、更に好ましくは３
時間以内）に嫌気雰囲気を作りだすことと（５〜
20％の）炭酸ガスを存在させることが必要であ
り、本発明の亜二チオン酸塩系脱酸素剤を用いれ
ば容易にその条件を満足させることができる。 実施例 １ 嫌気性菌Bacteroides fragilisGAMブイヨン
24時間嫌気培養液の希釈液0.1mlをGAM寒天培地
で混釈したものをシヤーレごと、Na2S2O41.2ｇ、
NaHCO31.7ｇ、Na2CO30.7ｇ、水0.2ｇ、
CaCl20.02ｇ、造粒炭0.4ｇ〔この組成の
（NaHCO3）／（NaHCO3＋Na2CO3）重量比は
0.7〕からなる脱酸素剤と共に塩化ビニリデント
コート延伸ポリプロピレン／ポリエチレンの二層
フイルムからなる透明な袋内へ封入後ヒートシー
ルし密封した。 これを37℃で48時間培養後、コロニーの数を測
定した。 また比較例として同試料を大気下（比較例１）
及び鉄系脱酸素剤（比較例２、鉄粉12ｇ相当）を
上記の袋に封入し炭酸ガスの存在しない嫌気下に
て培養した後、コロニーの数を測定した。 その結果を表１に示す。
詳しくは亜二チオン酸塩、炭酸水素ナトリウム、
炭酸ナトリウムおよび水を含有する脱酸素剤と嫌
気性細菌を接種した培地とを密封容器内に封入
し、５時間以内に酸素濃度を0.1％以下にし、炭
酸ガス濃度を５〜20％で培養することを特徴とす
る嫌気性細菌の培養方法に関する。 細菌は酸素の要求度から(1)偏性好気性菌、(2)通
性嫌気性菌、(3)偏性嫌気性菌に分けられ、このう
ち偏性嫌気性菌の中にはボツリヌス菌、ウエルシ
ユ菌等の食中毒菌が多く含まれており、近年予防
の見地からその研究手法の一環として、または病
原菌検査手法として嫌気性細菌の培養方法が注目
されてきている。 しかしながら、従来嫌気性細菌の培養には特別
の器具、装置を必要とし、かつ操作にはかなりの
熟練を必要とされていた。 従来までの方法には(1)重層法、(2)高層固形培地
培養法、(3)空気置換法、(4)化学的酸素吸収法、(5)
還元剤等を培地に加える方法、(6)生物学的方法等
があるが、これらはいずれも嫌気雰囲気を作るた
めには操作が煩雑であつた。 最も一般的に行なわれている方法は、(4)のうち
ガスパツク法で原理は化学的方法により水素ガス
及び炭酸ガスを発生させ、パラジウム金属触媒を
用いて水素と容器内の酸素とを反応させて嫌気状
態を作り出すものである。しかしながら、この方
法では、可燃性の水素ガスの発生を伴ない、酸
素除去後も十％の水素ガスが残存し危険である、
触媒の温度が100℃以上の高温に達する、触
媒の再生が必要である、経済性に劣る、等の欠
点があつた。 これらの欠点を解決する方法としては酸素を除
去するために脱酸素剤を使用することが考えられ
る。しかし嫌気性細菌はその生育に炭酸ガスを必
要とする菌が多く、単に脱酸素剤を使用しても嫌
気性細菌の培養方法としては不十分である。 本発明はこれらの欠点を克服したものである。
すなわち本発明は、亜二チオン酸塩、炭酸水素ナ
トリウム、炭酸ナトリウムおよび水を含有し、
（炭酸水素ナトリウム）／（炭酸水素ナトリウム
＋炭酸ナトリウム）の重量比が0.4〜0.9である脱
酸素剤と嫌気性細菌を接種した培地とを密封容器
内に封入し、５時間以内に酸素濃度を0.1％以下
にし、炭酸ガス濃度を５〜20％で培養することを
特徴とする嫌気性細菌の培養方法、である。 本発明によれは触媒や特殊な器具、装置を必要
とせず、上記の亜二チオン酸塩系脱酸素剤を密封
容器、例えば酸素透気度100c.c.／m2・24hr・atm
以下の包材で作られた袋に嫌気性細菌を接種した
培地と共に封入、密封するのみでよく、極めて簡
単に炭酸ガスの共存する嫌気雰囲気を作ることが
可能である。 また、嫌気雰囲気に到達したかどうかを簡単に
確認するため、酸素検知剤を使用することも可能
である。 本発明において亜二チオン酸塩としては亜二チ
オン酸ナトリウム（Na2S2O4）および亜二チオン
酸亜鉛（ZnS2O4）が一般的であり、好ましくは
亜二チオン酸ナトリウムが用いられる。 本発明における脱酸素剤は、Na2S2O4100部に
対してNaHCO310〜400部、Na2CO31〜950部お
よび水５〜40部からなり、かつ（NaHCO3）／
（NaHCO3＋Na2CO3）の重量比が0.3〜0.9であ
る。更に好ましくはNa2S2O4100部に対して
NaHCO350〜200部、Na2CO315〜200部および水
10〜20部からなり、かつ（NaHCO3）／
（NaHCO3＋Na2CO3）の重量比が0.4〜0.9であ
る。 この脱酸素剤に含まれている水は純水又は塩類
の水溶液又は有機物の水溶液等各種の水溶液を用
いることが可能である。 これらの水、もしくは水溶液はNa2S2O4と
NaHCO3とNa2CO3の混合物に直接添加する方法
もとられるが、好ましくは原末の取扱いの難易や
保存の好し悪しなどを考慮して粒状物質に含浸し
たかたちで添加する。この際に用いられる粒状物
質とは水または水溶液に不溶の物質であり、例え
ば珪藻土、パーライト、ゼオライト、活性アルミ
ナ、シリカゲル、活性炭、活性白土その他の無機
性粒状物を意味する。これら粒状物質の大きさは
粒径が一般的には0.1〜５mmであり、好ましくは
0.5〜3.5mmである。 また、これら脱酸素剤を包む包装材料としては
通気性の包材であればよいが、脱酸素剤の充填工
程および取扱い時の性能低下を考慮して、ガーレ
ー式透気度で10〜50000sec／100c.c.・inch2、好ま
しくは50〜10000sec／100c.c.・inch2である。 嫌気性菌の培養には適正な炭酸ガス雰囲気が必
要であり通常はその濃度が５〜20％である。 本発明はこの炭酸ガス雰囲気（NaHCO3）／
（NaHCO3＋Na2CO3）の重量比を変えることに
よりコントロールするものであり、この重量比が
0.3未満の場合は炭酸ガスの発生が５％未満であ
り、0.9を越える場合は20％を越えてしまうので
0.3〜0.9の範囲が好ましい。 本発明に使用する密封容器は酸素透気度が500
c.c.／m2・24hr・atm以下、好ましくは100c.c.／
m2・24hr・atm以下の材質で作られ、完全に密封
可能であれば、その形態にかかわらず使用可能で
ある。 例えば本発明に使用する最も簡単な容器は、各
種塩化ビニリデンコートフイルム〔KOP（商品
名）、KON、KPET、等〕、ビニロン等で作られ
た袋であり、嫌気性菌の接種された培地を亜二チ
オン酸塩及び添加物からなる脱酸素剤と共に封入
し、ヒートシートすればよい。 このような透明フイルムを用いることにより培
養中、嫌気性菌の生育状況の観察が可能となり便
利である。 嫌気性細菌を十分に生育させるには、可乃的短
時間（好ましくは５時間以内、更に好ましくは３
時間以内）に嫌気雰囲気を作りだすことと（５〜
20％の）炭酸ガスを存在させることが必要であ
り、本発明の亜二チオン酸塩系脱酸素剤を用いれ
ば容易にその条件を満足させることができる。 実施例 １ 嫌気性菌Bacteroides fragilisGAMブイヨン
24時間嫌気培養液の希釈液0.1mlをGAM寒天培地
で混釈したものをシヤーレごと、Na2S2O41.2ｇ、
NaHCO31.7ｇ、Na2CO30.7ｇ、水0.2ｇ、
CaCl20.02ｇ、造粒炭0.4ｇ〔この組成の
（NaHCO3）／（NaHCO3＋Na2CO3）重量比は
0.7〕からなる脱酸素剤と共に塩化ビニリデント
コート延伸ポリプロピレン／ポリエチレンの二層
フイルムからなる透明な袋内へ封入後ヒートシー
ルし密封した。 これを37℃で48時間培養後、コロニーの数を測
定した。 また比較例として同試料を大気下（比較例１）
及び鉄系脱酸素剤（比較例２、鉄粉12ｇ相当）を
上記の袋に封入し炭酸ガスの存在しない嫌気下に
て培養した後、コロニーの数を測定した。 その結果を表１に示す。
【表】
実施例 ２
（NaHCO3）／（NaHCO3＋Na2CO3）重量比
とCO2発生量を比較するためハイドロサルフアイ
ト（亜二チオン酸ナトリウム）1.2ｇ、水0.2ｇ、
CaCl20.02ｇを一定にして、NaHCO3とNa2CO3
の割合を変えた混合物を作り、実施例１と同じよ
うにそれぞれパツクして37℃、５時間後の袋内の
ガス濃度をガスクロマトグラフで測定した。 結果を表２に示す。
とCO2発生量を比較するためハイドロサルフアイ
ト（亜二チオン酸ナトリウム）1.2ｇ、水0.2ｇ、
CaCl20.02ｇを一定にして、NaHCO3とNa2CO3
の割合を変えた混合物を作り、実施例１と同じよ
うにそれぞれパツクして37℃、５時間後の袋内の
ガス濃度をガスクロマトグラフで測定した。 結果を表２に示す。
【表】
実施例 ３
Na2S2O412部、NaHCO317部、Na2CO37部
およびCaCl20.2部を含む水溶液２部をあらかじ
め混合したものを3.82ｇずつパツカーで包装し
たもの、 Na2S2O412部、NaHCO317部、Na2CO37部
あらかじめ混合したものと、CaCl20.2部を含む
水溶液２部をあらかじめ４部の粒状ゼオライト
に含浸させた混合物とを、２種混合用パツカー
で混合後の重量が4.22ｇとなるよう包装したも
の、 をそれぞれ作つた。 上記の脱酸素剤を包装する際、原末の流動性
が悪く、の脱酸素剤の場合にくらべて、その包
装作業が約４倍もの時間を要した。 なお、包装材料はおよびともガーレー式透
気度で200sec／100c.c.・inch2のものを使用した。 上記脱酸素剤およびについて、嫌気性菌
Clostridium batuliumを用いた以外は、実施例
１と同じ方法でコロニーの数を測定した。 また、比較例３として実施例３と同じ試料を大
気で培養したのち、コロニーの数を測定した。 実施例３および比較例３の結果を表３に示す。
およびCaCl20.2部を含む水溶液２部をあらかじ
め混合したものを3.82ｇずつパツカーで包装し
たもの、 Na2S2O412部、NaHCO317部、Na2CO37部
あらかじめ混合したものと、CaCl20.2部を含む
水溶液２部をあらかじめ４部の粒状ゼオライト
に含浸させた混合物とを、２種混合用パツカー
で混合後の重量が4.22ｇとなるよう包装したも
の、 をそれぞれ作つた。 上記の脱酸素剤を包装する際、原末の流動性
が悪く、の脱酸素剤の場合にくらべて、その包
装作業が約４倍もの時間を要した。 なお、包装材料はおよびともガーレー式透
気度で200sec／100c.c.・inch2のものを使用した。 上記脱酸素剤およびについて、嫌気性菌
Clostridium batuliumを用いた以外は、実施例
１と同じ方法でコロニーの数を測定した。 また、比較例３として実施例３と同じ試料を大
気で培養したのち、コロニーの数を測定した。 実施例３および比較例３の結果を表３に示す。
【表】
実施例 ４
実施例１と同じ嫌気性菌Bacteroides fragilis
を、実施例１と同じにして37℃、48時間培養した
のち、コロニー径を測定した。 また、比較例４として、炭酸ガス濃度３〜４％
になるように調整したアスコルビン酸系脱酸素剤
を使用して実施例１と同様に培養してのちそのコ
ロニー系を測定した。 比較例４のコロニー系に対する実施例４におい
て得られたコロニー径の比を表４に示す。
を、実施例１と同じにして37℃、48時間培養した
のち、コロニー径を測定した。 また、比較例４として、炭酸ガス濃度３〜４％
になるように調整したアスコルビン酸系脱酸素剤
を使用して実施例１と同様に培養してのちそのコ
ロニー系を測定した。 比較例４のコロニー系に対する実施例４におい
て得られたコロニー径の比を表４に示す。
Claims (1)
- １ 亜二チオン酸塩、炭酸水素ナトリウム、炭酸
ナトリウムおよび水を含有し、（炭酸水素ナトリ
ウム）／（炭酸水素ナトリウム＋炭酸ナトリウ
ム）の重量比が0.3〜0.9である脱酸素剤と嫌気性
細菌を接種した培地とを密封容器内に封入し、５
時間以内に酸素濃度を0.1％以下にし、炭酸ガス
濃度を５〜20％で培養することを特徴とする嫌気
性細菌の培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10560083A JPS59232087A (ja) | 1983-06-13 | 1983-06-13 | 嫌気性細菌の培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10560083A JPS59232087A (ja) | 1983-06-13 | 1983-06-13 | 嫌気性細菌の培養方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59232087A JPS59232087A (ja) | 1984-12-26 |
| JPH0461635B2 true JPH0461635B2 (ja) | 1992-10-01 |
Family
ID=14411985
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10560083A Granted JPS59232087A (ja) | 1983-06-13 | 1983-06-13 | 嫌気性細菌の培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59232087A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US12467384B1 (en) | 2024-11-15 | 2025-11-11 | Rtx Corporation | Translatable guide vanes for aircraft propulsion system |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004283001A (ja) * | 2000-12-08 | 2004-10-14 | Bicom:Kk | 独立栄養細菌を高濃度に培養するための促進剤 |
| JP2002176972A (ja) * | 2000-12-13 | 2002-06-25 | Bicom:Kk | 高濃度亜硝酸酸化細菌、及び亜硝酸酸化細菌の高濃度培養方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS584913B2 (ja) * | 1978-01-31 | 1983-01-28 | 凸版印刷株式会社 | 嫌気性細菌の培養法 |
-
1983
- 1983-06-13 JP JP10560083A patent/JPS59232087A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US12467384B1 (en) | 2024-11-15 | 2025-11-11 | Rtx Corporation | Translatable guide vanes for aircraft propulsion system |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS59232087A (ja) | 1984-12-26 |
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