JPH046353B2 - - Google Patents
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- JPH046353B2 JPH046353B2 JP59127471A JP12747184A JPH046353B2 JP H046353 B2 JPH046353 B2 JP H046353B2 JP 59127471 A JP59127471 A JP 59127471A JP 12747184 A JP12747184 A JP 12747184A JP H046353 B2 JPH046353 B2 JP H046353B2
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6897—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids involving reporter genes operably linked to promoters
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
- C12N15/71—Expression systems using regulatory sequences derived from the trp-operon
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2468—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1) acting on beta-galactose-glycoside bonds, e.g. carrageenases (3.2.1.83; 3.2.1.157); beta-agarase (3.2.1.81)
- C12N9/2471—Beta-galactosidase (3.2.1.23), i.e. exo-(1-->4)-beta-D-galactanase
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01023—Beta-galactosidase (3.2.1.23), i.e. exo-(1-->4)-beta-D-galactanase
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/61—Fusion polypeptide containing an enzyme fusion for detection (lacZ, luciferase)
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Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の利用分野〕
本発明は遺伝子操作技術に関連し、特に複合プ
ラスミド及びそれを保持するβ−gal生産性宿主
微生物に関するものである。更に詳しくは本発明
はtrpプロモータ下流のtrpE遺伝子の開始コドン
を含むDNAに連結されたβ−gal遺伝子を含む複
合プラスミドを保持したβ−gal生産性宿主微生
物に関するものである。 〔発明の背景〕 β−galは牛乳中の乳糖（ラクトース）をグル
コースとガラクトースに加水分解する酵素であ
り、乳糖不耐症の人のために牛乳を加工するのに
用いられている。これは工業的には大腸菌や
Aspergillus niger及びAspergillus foetidusなど
から生産されている。 最近、宿主微生物のベクタープラスミドに有用
物質の生産情報を有するDNAを組み込んだ複合
プラスミドを保持する宿主微生物を用いて、該微
生物に上記有用物質を大量生産させる遺伝子組み
換え技術が発展してきた。この技術により既にヒ
トインターフエロンやインスリンなどが生産され
つつあり、大腸菌は宿主微生物として利用されつ
つある。 〔発明の目的〕 本発明の目的は、上記したβ−galを生産させ
るための、又β−galの発現を利用して新たなプ
ロモータの探索のためのプロモータフローニング
に有用な複合プラスミド及び該複合プラスミドを
保持する宿主微生物を提供するにある。 〔発明の概要〕 本発明者らは次に述べる手法を利用して、trp
プロモータとβ−gal遺伝子を連結した複合プラ
スミドの造成に成功した。 trpプロモータを有するプラスミドpTRE1は大
腸菌のtrpオペロンのプロモータ、trpL（リーダペ
プタイド）及びtrpE（アントラニル酸合成酵素）
の先端部分の一部を含む約500bp（base pairs）の
DNA断片をpBR322プラスミドのEcoRI部位に挿
入したものである。trpプロモータの向きは
pBR322のTcr（テトラサイクリン耐性遺伝子）の
向きであり、またtrpプロモータの上流側の
EcoRI部位はDNAポリメラーゼＩで埋めて欠失
させ、プロモータ下流側のEcoRI部位のみに改良
したものである。第１図にtrpプロモータ下流域
の塩基配列を示す。trpEポリペプタイド遺伝子
中のEcoRI部位に外来遺伝子を連結することで
trpEポリペプタイドのＮ末端側８個のアミノ酸
と融合した形で外来遺伝子の発現が可能である。 一方、β−gal遺伝子pMC1403（J.Bacterol.、
143、p971〜980、1980）を用いた。これは、
pB322のEcoRIとSalI部位間に6.2kb（kilobase
pairs）のβ−gal遺伝子（lacZ＋lacY）を挿入し
たものである。 第２図にtrpプロモータの下流にβ−gal遺伝子
が連結されたpTREZ1の造成方法を示す。
pTRE1から切り出したtrpプロモータを含む
4.21kbのDNA断片とpMC1403から切り出した
6.2kbのβ−gal遺伝子とをDNAリガーゼで連結
すると10.21kbの複合プラスミドpTRE1を造成で
きる。 第３図にtrpプロモータとβ−gal遺伝子の連結
部分の塩基配列を示す。trpポリペプタイドのＮ
末端側８個のアミノ酸をコードするDNA断片に
β−gal遺伝子が連結している。連結部付近には
図に示すように、EcoRI，SmaI及びBamHIの制
限酵素部位があり、これらを利用して外来遺伝子
をこの部分に挿入可能である。これにより、trp
プロモータ以外のプロモータの検索や活性発現の
測定がが難しい外来遺伝子の発現効率をβ−gal
活性で測定することなどに利用できる。 trpプロモータ以外のプロモータの探索には上
記した３つの制限酵素部位のいずれかを用いて、
大腸菌の染色体などを同じ制限酵素で切り出した
DNA断片を挿入し、β−gal活性の増大を検出す
ることで達成できる。また、外来遺伝子の発現で
は酵素または生理活性そのもので直接検出する
か、 125Iラベルした抗体を用いた抗原抗体反応
などが用いられるが、その検出には煩雑な操作が
必要である。この場合、外来遺伝子を上記の３つ
の制限酵素部位のいずれかに挿入し、β−gal活
性を検出することでtrpプロモータによる外来遺
伝子の発現効率を容易に測定できる。 以上要するに、本発明の提案する複合プラスミ
ドは、強力なプロモーターであるtrpプロモータ
ーに、遺伝子の発現測定が極めて容易なβ−ガラ
クトシダーゼ遺伝子を連結し、遺伝子発現の程度
の比較をし易くしたものである。これを用いれば
trpプロモーターよりも強力なプロモーターの検
索が容易になる。つまり、trpプロモーターとβ
−ガラクトシダーゼ遺伝子の連結部に作成された
制限酵素の切断部位EcoRI、SmaI及びBamHIの
いずれかに大腸菌の染色体より切り出されてきた
DNA断片を挿入し、本組換えプラスミドを大腸
菌に導入して培養して、合成されたβ−ガラクト
シダーゼ量を比較することにより、挿入された
DNA断片がtrpプロモーターよりもより強力なプ
ロモーター活性を有するか否かを判定することに
利用できる。つまり、trpプロモータによるβ−
ガラクトシダーゼ発現量をベースとして、これよ
り、より強力なプロモーターを獲得するためのー
ルとして使用することができるのである。 〔発明の実施例〕 以下、実施例により本発明複合プラスミドの造
成、これを保持する宿主微生物の調製について述
べる。 実施例 １ 約3μgのpTRE1とpMC1403をEcoRIとSalIそれ
ぞれ25unitsで切断後、アガロースゲル電気泳動
を行いDNA断片を回収した。回収したDNAの二
断片をTEN緩衝液（0.02MTris−HCl、
1mMEDTA、0.02MNaCl、PH8.0）に溶解後、
T4DNAリガーゼ2.5units（全量50ml）にて連結し
た。この複合プラスミドを染色体上のβ−gal遺
伝子が欠損している大腸菌M182株に導入しよう
とした形質転換株を得ることができなかつた。こ
の原因を調べるため、pBR322で大腸菌C600株ま
たはM182株を形質転換したところ形質転換効率
はそれぞれ１×106個／μgDNAと７×103個／
μgDNAであつた。これからM182株はC600株に
比べて形質転換効率は約1/100であり、きわめて
低いことが分つた。そこで、まずC600株を形質
転換し、得られた形質転換株の中からpTREZ1を
有する株を選択し、培養して得られたpTREZ1を
用いてM182株を形質転換することにした。培養
して採取した約0.1μgのpTREZ1を用いてM182株
を形質転換したところ、１個の形質転換株が得ら
れ複合プラスミドpTREZ1を保持する大腸菌
M182〔pTREZ1〕（微工研菌寄第7650号）を得る
ことができた。 実施例 ２ 複合プラスミドを保持する大腸菌をAp（アンピ
シリン）を50μg/ml添加したLB培地（トリプト
ン10g、酵母エキス5g、グルコース1g、NaCl5g、
水道水１、PH7.2）10mlで37℃で15時間種培養
した。この培養液１mlをApを500μg/ml添加した
M9−カザミノ酸培地（NH4Cl 1g、Na2HPO4
6g、KH2PO4 3g、NaCl 5g、MgSO4・7H2O
0.1g、CaCl2・2H2O 15mg、グルコース2g、カザ
ミノ酸20g、蒸留水１、PH7.0）10mlに接種し、
37℃で４時間培養した。なお、培養開始１時間目
にIA（３−β−インドリルアクリリツク酸）を15
μｇ／ml添加してmRNAの転写を開始させた。 培養終了後、β−galの活性を測定するため、
培養液１mlを採取し、トルエン15mlを添加して激
しく撹拌し、37℃で30分間振とうした。これに
0.35Mリン酸緩衝液（PH7.25）を２ml、0.25Mラ
クトース液をを２ml添加し、30℃で40分間振とう
後、沸騰水中に15分間浸漬して酵素反応を停止さ
せた。液中のグルコース量をグルコース分析計
（YSI製）にて測定した。β−galの酵素活性は１
分間に1μmoleのラクトースを分解する量を１単
位（unit，Ｕ）とした。 【表】 第１表に大腸菌によるβ−galの生産量を示す。
M182〔pTREZ1〕（微工研菌寄第7650号）の培養
中に誘導物質のIAを添加すると培養液１ml当り
のβ−gal活性は1.22Uとなり、添加しない場合
の約５倍量であつた。ONPG（orthonitrophenyl
−galactoside）法で測定した場合の純粋なβ−
gallmgは340Uであり、かつONPG法で測定した
β−gal活性はラクトース基質の場合より約５倍
高い値となる。そこて、これらの値を用いてβ−
gal量を算出し、大腸菌１個当たりのβ−gal分子
数として表わすとIAを添加した場合は86000分子
であつた。これは通常の大腸菌の最大生産量の20
〜30倍の生産量になる。これから、遺伝子組換え
により多量の酵素生産が可能になつた。抑制物質
としてTrp（トリプトフアン）を添加した場合は、
β−gal生産量はIAを添加しない場合の1/2であ
つた。これはTrpによりリプレツサが活性化され
オペレータ部分に結合するため、trpプロモータ
へのRNAポリメラーゼの結合が妨げられるから
である。 以上のことから、trpプロモータ下流に連結し
たβ−gal遺伝子を有する複合プラスミドはβ−
galを細胞１個当り86000分子生産していること
と、β−gal遺伝子の発現はtrpプロモータにより
制御されていることを実証した。 〔発明の効果〕 本発明により造成された複合プラスミド
pTREZ1を用いることにより、β−galを大量生
産できるのは勿論、β−galの発現を利用して新
たなプロモータの探索のためのプロモータクロー
ニングが効果的に実現できる。
ラスミド及びそれを保持するβ−gal生産性宿主
微生物に関するものである。更に詳しくは本発明
はtrpプロモータ下流のtrpE遺伝子の開始コドン
を含むDNAに連結されたβ−gal遺伝子を含む複
合プラスミドを保持したβ−gal生産性宿主微生
物に関するものである。 〔発明の背景〕 β−galは牛乳中の乳糖（ラクトース）をグル
コースとガラクトースに加水分解する酵素であ
り、乳糖不耐症の人のために牛乳を加工するのに
用いられている。これは工業的には大腸菌や
Aspergillus niger及びAspergillus foetidusなど
から生産されている。 最近、宿主微生物のベクタープラスミドに有用
物質の生産情報を有するDNAを組み込んだ複合
プラスミドを保持する宿主微生物を用いて、該微
生物に上記有用物質を大量生産させる遺伝子組み
換え技術が発展してきた。この技術により既にヒ
トインターフエロンやインスリンなどが生産され
つつあり、大腸菌は宿主微生物として利用されつ
つある。 〔発明の目的〕 本発明の目的は、上記したβ−galを生産させ
るための、又β−galの発現を利用して新たなプ
ロモータの探索のためのプロモータフローニング
に有用な複合プラスミド及び該複合プラスミドを
保持する宿主微生物を提供するにある。 〔発明の概要〕 本発明者らは次に述べる手法を利用して、trp
プロモータとβ−gal遺伝子を連結した複合プラ
スミドの造成に成功した。 trpプロモータを有するプラスミドpTRE1は大
腸菌のtrpオペロンのプロモータ、trpL（リーダペ
プタイド）及びtrpE（アントラニル酸合成酵素）
の先端部分の一部を含む約500bp（base pairs）の
DNA断片をpBR322プラスミドのEcoRI部位に挿
入したものである。trpプロモータの向きは
pBR322のTcr（テトラサイクリン耐性遺伝子）の
向きであり、またtrpプロモータの上流側の
EcoRI部位はDNAポリメラーゼＩで埋めて欠失
させ、プロモータ下流側のEcoRI部位のみに改良
したものである。第１図にtrpプロモータ下流域
の塩基配列を示す。trpEポリペプタイド遺伝子
中のEcoRI部位に外来遺伝子を連結することで
trpEポリペプタイドのＮ末端側８個のアミノ酸
と融合した形で外来遺伝子の発現が可能である。 一方、β−gal遺伝子pMC1403（J.Bacterol.、
143、p971〜980、1980）を用いた。これは、
pB322のEcoRIとSalI部位間に6.2kb（kilobase
pairs）のβ−gal遺伝子（lacZ＋lacY）を挿入し
たものである。 第２図にtrpプロモータの下流にβ−gal遺伝子
が連結されたpTREZ1の造成方法を示す。
pTRE1から切り出したtrpプロモータを含む
4.21kbのDNA断片とpMC1403から切り出した
6.2kbのβ−gal遺伝子とをDNAリガーゼで連結
すると10.21kbの複合プラスミドpTRE1を造成で
きる。 第３図にtrpプロモータとβ−gal遺伝子の連結
部分の塩基配列を示す。trpポリペプタイドのＮ
末端側８個のアミノ酸をコードするDNA断片に
β−gal遺伝子が連結している。連結部付近には
図に示すように、EcoRI，SmaI及びBamHIの制
限酵素部位があり、これらを利用して外来遺伝子
をこの部分に挿入可能である。これにより、trp
プロモータ以外のプロモータの検索や活性発現の
測定がが難しい外来遺伝子の発現効率をβ−gal
活性で測定することなどに利用できる。 trpプロモータ以外のプロモータの探索には上
記した３つの制限酵素部位のいずれかを用いて、
大腸菌の染色体などを同じ制限酵素で切り出した
DNA断片を挿入し、β−gal活性の増大を検出す
ることで達成できる。また、外来遺伝子の発現で
は酵素または生理活性そのもので直接検出する
か、 125Iラベルした抗体を用いた抗原抗体反応
などが用いられるが、その検出には煩雑な操作が
必要である。この場合、外来遺伝子を上記の３つ
の制限酵素部位のいずれかに挿入し、β−gal活
性を検出することでtrpプロモータによる外来遺
伝子の発現効率を容易に測定できる。 以上要するに、本発明の提案する複合プラスミ
ドは、強力なプロモーターであるtrpプロモータ
ーに、遺伝子の発現測定が極めて容易なβ−ガラ
クトシダーゼ遺伝子を連結し、遺伝子発現の程度
の比較をし易くしたものである。これを用いれば
trpプロモーターよりも強力なプロモーターの検
索が容易になる。つまり、trpプロモーターとβ
−ガラクトシダーゼ遺伝子の連結部に作成された
制限酵素の切断部位EcoRI、SmaI及びBamHIの
いずれかに大腸菌の染色体より切り出されてきた
DNA断片を挿入し、本組換えプラスミドを大腸
菌に導入して培養して、合成されたβ−ガラクト
シダーゼ量を比較することにより、挿入された
DNA断片がtrpプロモーターよりもより強力なプ
ロモーター活性を有するか否かを判定することに
利用できる。つまり、trpプロモータによるβ−
ガラクトシダーゼ発現量をベースとして、これよ
り、より強力なプロモーターを獲得するためのー
ルとして使用することができるのである。 〔発明の実施例〕 以下、実施例により本発明複合プラスミドの造
成、これを保持する宿主微生物の調製について述
べる。 実施例 １ 約3μgのpTRE1とpMC1403をEcoRIとSalIそれ
ぞれ25unitsで切断後、アガロースゲル電気泳動
を行いDNA断片を回収した。回収したDNAの二
断片をTEN緩衝液（0.02MTris−HCl、
1mMEDTA、0.02MNaCl、PH8.0）に溶解後、
T4DNAリガーゼ2.5units（全量50ml）にて連結し
た。この複合プラスミドを染色体上のβ−gal遺
伝子が欠損している大腸菌M182株に導入しよう
とした形質転換株を得ることができなかつた。こ
の原因を調べるため、pBR322で大腸菌C600株ま
たはM182株を形質転換したところ形質転換効率
はそれぞれ１×106個／μgDNAと７×103個／
μgDNAであつた。これからM182株はC600株に
比べて形質転換効率は約1/100であり、きわめて
低いことが分つた。そこで、まずC600株を形質
転換し、得られた形質転換株の中からpTREZ1を
有する株を選択し、培養して得られたpTREZ1を
用いてM182株を形質転換することにした。培養
して採取した約0.1μgのpTREZ1を用いてM182株
を形質転換したところ、１個の形質転換株が得ら
れ複合プラスミドpTREZ1を保持する大腸菌
M182〔pTREZ1〕（微工研菌寄第7650号）を得る
ことができた。 実施例 ２ 複合プラスミドを保持する大腸菌をAp（アンピ
シリン）を50μg/ml添加したLB培地（トリプト
ン10g、酵母エキス5g、グルコース1g、NaCl5g、
水道水１、PH7.2）10mlで37℃で15時間種培養
した。この培養液１mlをApを500μg/ml添加した
M9−カザミノ酸培地（NH4Cl 1g、Na2HPO4
6g、KH2PO4 3g、NaCl 5g、MgSO4・7H2O
0.1g、CaCl2・2H2O 15mg、グルコース2g、カザ
ミノ酸20g、蒸留水１、PH7.0）10mlに接種し、
37℃で４時間培養した。なお、培養開始１時間目
にIA（３−β−インドリルアクリリツク酸）を15
μｇ／ml添加してmRNAの転写を開始させた。 培養終了後、β−galの活性を測定するため、
培養液１mlを採取し、トルエン15mlを添加して激
しく撹拌し、37℃で30分間振とうした。これに
0.35Mリン酸緩衝液（PH7.25）を２ml、0.25Mラ
クトース液をを２ml添加し、30℃で40分間振とう
後、沸騰水中に15分間浸漬して酵素反応を停止さ
せた。液中のグルコース量をグルコース分析計
（YSI製）にて測定した。β−galの酵素活性は１
分間に1μmoleのラクトースを分解する量を１単
位（unit，Ｕ）とした。 【表】 第１表に大腸菌によるβ−galの生産量を示す。
M182〔pTREZ1〕（微工研菌寄第7650号）の培養
中に誘導物質のIAを添加すると培養液１ml当り
のβ−gal活性は1.22Uとなり、添加しない場合
の約５倍量であつた。ONPG（orthonitrophenyl
−galactoside）法で測定した場合の純粋なβ−
gallmgは340Uであり、かつONPG法で測定した
β−gal活性はラクトース基質の場合より約５倍
高い値となる。そこて、これらの値を用いてβ−
gal量を算出し、大腸菌１個当たりのβ−gal分子
数として表わすとIAを添加した場合は86000分子
であつた。これは通常の大腸菌の最大生産量の20
〜30倍の生産量になる。これから、遺伝子組換え
により多量の酵素生産が可能になつた。抑制物質
としてTrp（トリプトフアン）を添加した場合は、
β−gal生産量はIAを添加しない場合の1/2であ
つた。これはTrpによりリプレツサが活性化され
オペレータ部分に結合するため、trpプロモータ
へのRNAポリメラーゼの結合が妨げられるから
である。 以上のことから、trpプロモータ下流に連結し
たβ−gal遺伝子を有する複合プラスミドはβ−
galを細胞１個当り86000分子生産していること
と、β−gal遺伝子の発現はtrpプロモータにより
制御されていることを実証した。 〔発明の効果〕 本発明により造成された複合プラスミド
pTREZ1を用いることにより、β−galを大量生
産できるのは勿論、β−galの発現を利用して新
たなプロモータの探索のためのプロモータクロー
ニングが効果的に実現できる。
第１図はtrpプロモータ下流域の塩基配列を示
す図、第２図はpTREZ1の造成方法を示す図、第
３図はtrpプロモータとβ−gal遺伝子の連結部分
の塩基配列を示す図及び第１表は大腸菌によるβ
−gal生産量を示す表である。
す図、第２図はpTREZ1の造成方法を示す図、第
３図はtrpプロモータとβ−gal遺伝子の連結部分
の塩基配列を示す図及び第１表は大腸菌によるβ
−gal生産量を示す表である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ トリプトフアン（trp）プロモータ下流域の
trpEポリペプタイドのＮ末端側８個のアミノ酸
をコードするDNAにEcoRIサイトを介して連結
されたβ−ガラクトシダーゼ（β−gal）遺伝子
を有することを特徴とするプロモータクローニン
グ用複合プラスミド。 ２ トリプトフアン（trp）プロモータ下流域の
trpEポリペプタイドのＮ末端側８個のアミノ酸
をコードするDNAにEcoRIサイトを介して連結
されたβ−ガラクトシダーゼ（β−gal）遺伝子
を有するプロモータクローニング用複合プラスミ
ドを保持することを特徴とする細菌。 ３ 特許請求の範囲第２項の細菌が大腸菌
（Escherichia coli）であることを特徴とする宿
主細菌。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59127471A JPS619287A (ja) | 1984-06-22 | 1984-06-22 | 複合プラスミド及びそれを保持する微生物 |
| EP85107679A EP0165614A3 (en) | 1984-06-22 | 1985-06-21 | Hybrid plasmid and microorganism containing the same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59127471A JPS619287A (ja) | 1984-06-22 | 1984-06-22 | 複合プラスミド及びそれを保持する微生物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS619287A JPS619287A (ja) | 1986-01-16 |
| JPH046353B2 true JPH046353B2 (ja) | 1992-02-05 |
Family
ID=14960743
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59127471A Granted JPS619287A (ja) | 1984-06-22 | 1984-06-22 | 複合プラスミド及びそれを保持する微生物 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0165614A3 (ja) |
| JP (1) | JPS619287A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2693475B1 (fr) * | 1992-07-08 | 1994-09-02 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Procédé d'identification et/ou de clonage de promoteurs transcriptionnels, et utilisation de ces promoteurs pour l'expression de gènes. |
| JP6449653B2 (ja) | 2012-01-10 | 2019-01-09 | シージェイ チェイルジェダン コーポレーションＣｊ Ｃｈｅｉｌｊｅｄａｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ | Ｌ−トリプトファン産生能が強化されたエシェリキア属微生物及びこれを用いてｌ−トリプトファンを産生する方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH078231B2 (ja) * | 1985-03-25 | 1995-02-01 | 株式会社日立製作所 | 培養制御方法及び培養制御装置 |
-
1984
- 1984-06-22 JP JP59127471A patent/JPS619287A/ja active Granted
-
1985
- 1985-06-21 EP EP85107679A patent/EP0165614A3/en not_active Ceased
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| J.BACTERIOL=1980 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS619287A (ja) | 1986-01-16 |
| EP0165614A2 (en) | 1985-12-27 |
| EP0165614A3 (en) | 1988-01-07 |
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