JPH0463854B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、抗癌性物質徐放性剤の製造法に関す
るものである。

本出願人は、長期間有効に癌又は腫瘍に作用し
得る抗癌性物質徐放性剤を得るべく検討を重ねた
結果、抗癌性物質と血液凝固剤の両者を構造物に
固定化することにより徐放性と局所滞留性を兼備
させることができることを見いだし、先に提案し
た（特開昭58−140011号）。しかしながら、一般
に止血剤としてよく使用される酸化セルロースを
素材とした構造物に抗癌性物質と血液凝固剤を固
定化したところ、酸化セルロースをそのまま用い
ると徐放性に悪影響があるという問題点が判明し
た。

本発明者らは、かかる状況に鑑み、上記ごとき
問題点を解消すべく引続き検討を重ねた結果、酸
化セルロースを中和した後、抗癌性物質と血液凝
固剤を固定化すれば徐放性は良好に保持されるこ
とを見いだし、本発明に到達したものである。

すなわち本発明は、中和した酸化セルロースを
素材とした繊維集合体、、スポンジ、粉末、モノ
フイラメント、フイルム、マイクロカプセルなど
の形状を有する構造物に抗癌性物質と血液凝固剤
を固定化することを特徴とする抗癌性物質徐放性
剤の製造法である。

これまでに、酸化セルロースを中和してから固
定化の担体として用いることに関しては、例えば
米国特許第2517772号明細書に、酸化セルロース
を一部中和してからトロンビン処理を行うことに
より、トロンビンの失活を防ぎうることが示され
ている。しかるに、酸化セルロースを抗癌性物質
で処理したごとくの前例はなく、さらには本発明
のごとくに徐放性能への影響などを考慮した前例
などは全くない。

本発明に用いる酸化セルロースとは、例えばウ
ツドパルプ、綿、綿リンター、ラミー、ジユート
紙、ヘムプ、再生セルロース、レーヨン等のセル
ロース材料をオゾン、過酸化水素、過ヨウ素酸
塩、二酸化窒素等を用いて公知の方法にて酸化し
たものをいうが、本発明においては、セルロース
の−CH₂OH基の10〜30％が−COOH基に酸化さ
れたものが生体吸収性良好のため好ましく用いら
れ、15〜25％のものが特に好ましく用いられる。

本発明においては、かかる酸化セルロースを中
和して用いるが、ここにいう中和とは酸化セルロ
ースの−COOHなる酸基を塩に変換させること
を意味する。中和を行うには、酸化セルロースを
例えばナトリウムやカルシウム等の金属の水酸化
物やあるいはナトリウム、カルシウム、アンモニ
ウム等の各種の塩、例えばアセテート塩やヤーボ
ネート塩にて処理すればよい。中和の度合は、過
ぎれば構造物は水溶性となり固定過しにくくな
り、一方、足らずば良好な徐放性を得ることがで
きにくくなるので、構造物がゲル状となつてその
形を失う手前にて行うのが好ましく、その目安と
しては、中和された酸化セルロースを水中に浸漬
した際のPHが３〜７、好ましくは５〜６の間にな
るように中和を行うのが好ましい。中和は、構造
物について行つてよいし、構造物に加工する前の
素材を中和してから構造物としてもよい。

本発明に用いられる抗癌性物質とは、一般に抗
癌剤又は制癌剤又は抗腫瘍剤と呼ばれている物質
並びに一般に免疫製剤又は免疫賦活剤と呼ばれて
いる物質を意味し、前者の物質としては、例えば
ニトロゲンマスタード、ニトロミン、クロラムブ
シル、サイクロフオスフアミド、メルフアラン、
ウラシルマスタード、マンノムスチン、ドーパ
ン、BCNU、トリエチレンメラミン、チオ−
TEPA、Aza−TEPA、トレニモン、インプロキ
ユオン、ブスルフアン、ジメチルミレラン、ピポ
スルフアン、エトグルシド、エポキシプロピジ
ン、エポキシピペラジン、ヘキサメチルメラミ
ン、ジブロモマンニトール、ピポブロマンなどの
アルキル化剤、葉酸、アミノプテリン、メトトレ
キセート、グアニン、８−アザガニン、６−メル
カプトプリン、アザチオプリン、ウリシル、５−
フルオロウラシル、シタラビン、アザセリン、ジ
アゾマイシンなどの代謝拮抗剤、アクチノマイシ
ンＤ、サクロマイシン、マイトマイシンＣ、ダウ
ノマイシン、ブレオマイシン、クロモマイシン、
カルジノフイリン、アドレアマイシンなどの抗生
物質、５−HP、IQ−１などの合成剤、チオテバ
シクロホスフアミド、ドキソルビシン、ダウノル
ビシン、ネオカルチノスタンなどの植物成分、
Hg−ヘマトポルフイリン、Co−プロトポルフイ
リン、ステイルベストロール、ヒドロキシウレ
ア、プロカルバジン、メチルグリヨキザル−ビス
−グアニルヒドラゾン、Ｌ−アスパラギナーゼな
どがあげられ、これらはそれぞれ単独にて用いて
も２種以上を用いてもよいが、アルキル化剤から
１種、代謝拮抗剤から１種、抗生物質から１種を
選んで組み合わせて使用する方法などは一般的で
あり、エンドキサン、５−フルオロウラシル、マ
イトマイシンあるいはブレオマイシンの３者の組
み合わせなどは特に一般的である。後者の物質と
しては、例えばチミツクホルモンとその関連物
質、BCG、細胞壁スケルトン及びそのメタノー
ル不溶分画、コリネバクテリウムパルバム、OK
−432などの細菌及び細菌成分、ピシバニール、
レエンチナン、SPG、マンナン、レバン、グル
カンなどの多糖体、ムラミルジペプト及びその誘
導体、レバミソール、ベスタチン、イソプリノシ
ン、NPT15392、アジメクリン、トランスフアー
フアクター、リンホオカイン、イムノPNA、イ
ンタフエロン及びインデユーサー、丸山ワクチン
などのワクチン類などがあげられ、これらはそれ
ぞれ単独にて用いても２種以上用いてもよいが、
前述の抗癌剤又は制癌剤又は抗腫瘍剤と呼ばれて
いる物質と併用するのが一般的である。

本発明に用いられる血液凝固剤としては、例え
ば血液凝固の第因子、第因子、第因子、第
因子、第因子、第因子、第因子、第因
子、第因子、第XI因子、第XII因子及び第因
子、ブレカリクレン、高分子キニノーゲン、トロ
ビンなどがあげられる。これらは単独で用いるこ
ともできるし、２種以上組み合わせて用いること
もできる。本発明においては血液凝固第因子
（以降Ｆと略記する。）、トロンビンが好まし
く使用され、Ｆ、トロンビンの組み合わせが
特に好ましく使用される。Ｆはフイブリン安
定化因子と呼ばれ、フイブリン分子間のイソペプ
チド結合による安定化フイブリンの生成を促進す
る因子である。Ｆは人、牛などの血液あるい
は胎盤より分離されるが、人に使用する場合には
人由来のＦを用いるが好ましい。

トロンビンは、フイブリノーゲンをフイブリン
に転化することができるタン白分解酵素である。
トロンビンは、人、牛、豚などの血液より分離さ
れるが、人に使用する場合には人トロンビンを用
いるのが好ましい。

本発明に用いる抗癌性物質及び血液凝固剤は、
中和酸化セルロースを素材とする構造物に結合さ
せるか、又は吸着させるか、又は内包させること
により固定化することができる。抗癌性物質又は
血液凝固剤を構造物に結合させるには、例えば
O.Zaborsky，“Immobilzed Ennzymes”CRC
Press1973に記載されているような従来より公知
の共有結合法やイオン結合法を採用することがで
きるし、また吸着させるには、同じく物理的吸着
法や抱括法を採用することができるし、また内包
させるには中和酸化セルロースを外壁として、公
知のマイクロカプセル化法にてマイクロカプセル
化する方法を採用することができる。

本発明においては、例えば次のようにして構造
物に抗癌性物質又は血液凝固剤を結合させること
ができる。すなわち抗癌性物質や血液凝固剤が、
アミノ基などの共有結合又はイオン結合形成能を
持つ官能基を有する場合には、これを含む溶液に
て構造物を処理することにより目的とする係合に
よる固定化を行うことができる。

抗癌性物質又は血液凝固剤が官能基を有しない
場合には、前述の場合と同様に化学反応にて官能
基を導入して後、使用することも可能であるが、
多くの場合このような化学反応にては抗癌性物質
又は血液凝固剤の薬剤としての特性が損なわれる
こととなるのでこの方法は好ましく採用されるこ
とはない。なお共有結合させる場合は、ジシクロ
ヘキシルカーボジイミド、１−シクロヘキシル−
３−（２−モノホリノエチル）−カーボジイミド−
メト−ｐ−トルエンスルホネートなどの脱水縮合
剤を用いるのが好ましい。

また、本発明においては次のようにして構造物
に抗癌性物質又は血液凝固剤を物理的吸着法や包
括法などにより吸着することができる。すなわち
構造物を湿潤しうる溶媒に抗癌性物質又は血液凝
固剤を別々に溶解又は懸濁し、この溶液により構
造物を処理することにより抗癌性物質又は血液凝
固剤を物理的に吸着することができま。包括法は
抗癌性物質又は血液凝固剤をゲルの微細な格子の
中に包み込んで脱離できないようにする方法であ
る。この吸着法及び包括法はどのような抗癌性物
質、血液凝固剤の組み合わせにも有効であり、簡
便でかつ薬剤としての特性を損なうことも少ない
ので本発明においては好ましく採用される。

本発明においては、前記のごとく構造物に抗癌
性物質又は血液凝固剤を結合させるか又は吸着さ
せる方法のほかに、まず構造物の加工する前の素
材そのものに抗癌性物質又は血液凝固剤を係合さ
せるか又は吸着させ、しかるのち抗癌性物質又は
血液凝固剤が結合するか又は吸着した素材を構造
物に加工することもできる。

上記のいずれの方法により抗癌性物質及び血液
凝固剤を固定化する場合も、抗癌性物質及び血液
凝固剤を同時に固定化してもよいし、あるいは先
に抗癌性物質を固定化しておいてから、引き続き
血液凝固剤を固定化してもよいし、その逆であつ
てもよい。

本発明による徐放性剤の製造に際しては、抗癌
性物質、血液凝固剤の他にアンチプラスミン、ア
ルブミン、α₂−マクログロブリンなどのプロテア
ーゼインヒビター、セルロプラスミン、ハプトグ
ロビン、コールドインソルブルグロブリンなどの
血しようたん白、フアイブロネクチン、抗生物質
などを構造物に固定化することができる。アンチ
プラスミンはフイブリン溶解酵素であるプラスミ
ンの阻害剤であり、従つてプラスミンを阻害する
ことにより効果を発揮するものである。本発明に
おいてはアンチプラスミンとしては、例えばε−
アミノカプロン酸、トラネキサム酸などが好まし
く用いられる。

本発明の方法にて製造された徐放性剤は癌又は
腫瘍の治療に好ましく使用されるが、特に血管閉
塞法、穿刺法などに特に好ましく使用される。

本発明の方法にて製造された徐放性剤の血管閉
塞療法への適用は、例えば血管を通じ血管カテー
テル先端を標的癌又は腫瘍組織への栄養動脈まで
到達させ、他端より塞栓剤を生理食塩水などに懸
濁させたものを注入することによつてなされる。

この際に徐放性剤は、一部は標的組織上及びそ
の近傍組織にまで達し、到達部位に付着して留ま
り、一部は栄養血管内部に留まり迅速に血管を閉
塞する。また閉塞された血管は再開通を起こさな
い。

さらに標的組織上及びその近傍組織及び血管閉
塞部に留まつた徐放性剤は、抗癌性物質徐放性剤
として働き、このものからは抗癌性物質が徐放さ
れ、癌又は腫瘍組織に局所的に長時間作用してい
き壊死を早めかつ確実にする。このことは、すな
わち本発明により製造された徐放性剤を使用した
場合には迅速かつ正確に血管閉塞療法を施行する
ことが可能であり、同時にこの徐放性剤は抗癌性
物質徐放性剤として働くので、従来は並行して行
い得なかつた化学療法を、並行して行うことが可
能となることを意味する。

本発明の方法により製造された徐放性剤の穿刺
法への適用は、例えば標的とする癌又は腫瘍組織
上へ到達させた穿刺針を通じて徐放性剤を生理食
塩水などに懸濁させたものを必要量注入した後、
さらにこの懸濁液を徐々に注入しながら抜針を行
うことによつてなされる。このことによつて徐放
性剤は標的組織上及び穿刺針の経路付近の組織上
に分散されたその部位に付着して留まる。標的組
織上に留まつた徐放性剤は直ちに出血を停止させ
血管損傷部位を修復する一方、抗癌性物質徐放性
剤として働き、抗癌性物質を徐放して癌又は腫瘍
組織に長時間有効に作用していく。一方、抜針時
に注入され穿刺針の経路付近の組織上に分散され
不着して留まつた徐放性剤は近傍の血管の損傷部
位からの出血を直ちに押え修復を行い、かつ針の
経路付近に散布された癌又は腫瘍組織に長時間有
効に作用していく。

以上のごとくに、本発明によれば活性の高い徐
放性剤を容易に製造することができる。従つて、
そのようにして得られた徐放性剤は血管閉塞療法
及び穿刺法などの施術に際して好ましく使用さ
れ、優れた塞栓剤としての性能と抗癌性物質徐放
性剤としての性能を合わせもつものである。ま
た、この徐放性剤は直接散布法の用途も有する。
すなわち従来の抗癌性物質徐放性剤を例えば切開
手術を行い露出した癌組織上に散布して局所的に
作用するごとくに投与しても、徐放性剤は血液、
体液などのため散布後直ちに局所から流されさつ
てしまい効果が期待しにくいがこの徐放性剤を同
様に投与した場合には、局所に直ちに粘着し流れ
さつてしまうことはない。

以下に実施例をあげて本発明をさらに具体的に
説明する。

実施例 １ オキシセル綿（吸収性酸化セルロース綿型、三
共株式会社）20mgを0.5規定の酢酸カルシウム水
溶液20ml中に室温にて２時間浸漬したのち、水に
て洗浄し、風乾を行つて中和オキシセル綿を得
た。

このもの全量をフイブロガミン水溶液（血液凝
固第因子の濃縮乾燥性剤、ヘキスト株式会社
１ビンを水４mlに溶解したもの）５ml及びマイト
マイシンＣ水溶液〔20mg（力価）／４ml〕４mlか
らなる混合液に、室温にて５分間浸漬した後、−
30℃で凍結乾燥を15時間行つてフイブロガミンと
マイトマイシンＣの固定化された固定化中和オキ
シセル綿を得た。

一方、内径４mmのシリコン医用チユーブ34cmを
用いてループを造り、２℃の部屋において、これ
に２mlのACD保存血にCaCl₂の10重量％水溶液１
mlを添加したものを充填したのち、先に調製した
固定化オキシセル綿20mgを加えた後、23度の傾斜
を持つ回転板の上で16回転／分にて回転させた。

回転開始後１分にて血中に凝血塊の形成が認め
られた。この時点において回転を停止させ、停止
後１時間目にペーパーデイスク（東洋製作所製、
抗生物質試験ペーパーデイスク、径８mm）をルー
プ内の血液又は凝血塊に十分に浸漬させ、このも
のをサンプルとし、試験菌としてBacillus
Subtilis ATCC6633を用い、円筒平板法にて生
ずる阻止円の大きさを求め、この阻止円の大きさ
より１時間目のマイトマイシンＣの血中力価を求
めたところ11μｇ／mgであつた。同様にして５時
間目、10時間目、24時間目、1.5日目、２日目、
３日目の血中力価を求めたところそれぞれ18μ
ｇ／mg、25μｇ／mg、49μｇ／mg、91μｇ／mg、
135μｇ／mg、239μｇ／mgであつた。

参考例 １ 実施例１と同様にして得られた固定化中和オキ
シセル綿全量を37℃の水200ml中に48時間浸漬し
た後、浸漬液のマイトマイシンＣの力価を実施例
１と同様の方法で測定したところ、80μｇ／mlで
あつた。

このことは、溶出したマイトマイシンＣの力価
が16mgであることを示し、最初の固定化量（力
価）の20mgに対して溶出してきた量のみでも80％
の薬効が保たれていることが明らかである。

比較例 １ 酢酸カルシウム水溶液による処理を行わなかつ
た以外は、実施例１と同様にして固定化オキシセ
ル綿を得た。

この20mgを用いて実施例１と同様の回転ループ
試験を行つたところ、凝血塊の形成が認められた
のは２分後であり、また１時間目、５時間目、10
時間目、24時間目、24時間目の血中力価はそれぞ
れ34μｇ／mg、58μｇ／mg、102μｇ／mg、255μ
ｇ／mgであり、、実施例１に比べて大きく高値を
示し、徐放性が劣つていた。

参考例 ２ 酢酸カルシウム水溶液による処理を行わなかつ
た以外は、実施例１と同様にして得た固定化オキ
シセル綿全量を用いて、参考例１と同様の溶出テ
ストを行つたところ、溶出マイトマイシンＣの力
価は８mgであり、当初の固定化量に対して40％の
薬効しか保たれていなかつた。

実施例 ２ オキシセルガーゼ（吸収性酸化セルロース ガ
ーゼ型、三共株式会社）１枚を、水酸化ナトリウ
ムの2wt％の水溶液20mlに室温にて５時間浸漬
後、取り出して水洗、乾燥し、中和オキシセルガ
ーゼを得た。

このものを実施例１と同様のトロンビン水溶液
に室温液に３分間浸漬した後、−30℃にて凍結乾
燥を15時間行つた。次いで、このものを５−フル
オロウラシル25mgを４mlのジメチルホルムアミド
に懸濁させた懸濁液に室温にて５分間浸漬した
後、−30℃にて凍結乾燥を15時間行い、トロンビ
ンと５−フルオロウラシルの固定化された固定化
中和オキシセルガーゼを得た。このものを20mg用
いて実施例１と同様に回転ループによる凝血試験
を行つたところ、回転開始後１分20秒にて凝血塊
の形成がみとめられた。この時点において回転を
停止させ、停止後５時間目、10時間目、24時間
目、1.5日目、２日目、３日目において血液又は
凝血塊を50μｇずつサンプリングし、各々を凍結
乾燥後、水酸化ナトリウム及び水の混液を吸収液
とし、酸素フラスコ燃焼法のフツ素の定量操作作
法により、各サンプルに含まれる５−フルオロウ
ラシルの重量を測定し、各サンプリング時の５−
フルオロウラシルの血中濃度を求めたところ、そ
れぞれ133μｇ／mg、188μｇ／mg、419μｇ／mg、
853μｇ／mg、1114μｇ／mg、1781μｇ／mgであつ
た。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 中和した酸化セルロースを素材とした繊維集
   合体、スポンジ、粉末、モノフイラメント、フイ
   ルム、マイクロカプセルなどの形状を有する構造
   物に抗癌性物質と血液凝固剤を固定化することを
   特徴とする抗癌性物質徐放性剤の製造法。