JPH0466314B2 - - Google Patents

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JPH0466314B2
JPH0466314B2 JP62001965A JP196587A JPH0466314B2 JP H0466314 B2 JPH0466314 B2 JP H0466314B2 JP 62001965 A JP62001965 A JP 62001965A JP 196587 A JP196587 A JP 196587A JP H0466314 B2 JPH0466314 B2 JP H0466314B2
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Ee Isumeiru Iburahimu
Itsupu Teresa
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Miles Inc
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Publication of JPH0466314B2 publication Critical patent/JPH0466314B2/ja
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    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
    • C12Q2326/10—Benzidines
    • C12Q2326/12—3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine, i.e. TMB
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    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
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Description

【発明の詳細な説明】
［発明の技術分野］ 本発明は一般に水性流体中の過酸化的に活性な
物質（過酸化活性物質）を測定するための安定組
成物及び特に尿中の潜血を測定するための安定試
験具に関する。 ［実用性］ ヘモグロビン及びその誘導体は酵素であるペル
オキシダーゼと同様の挙動を示すので、「過酸化
活性」物質の代表例として挙げられる。そのよう
な物質は、ペルオキシドと、ベンジジン、ｏ−ト
リジン、３，3′，５，5′−テトラチルベンジジ
ン、２，７−ジアミノフルオレンのような指示薬
化合物又は同様の物質との酸化還元反応を触媒
し、それにより色変化を引き起こすことから、偽
ペルオキシダーゼつまり酵素様物質とも呼ばれて
いる。過酸化活性物質の試験は尿のような体液試
料及び便中のしばしば「潜」血と呼ばれる少量の
血液の検出に特に有用である。尿及び便における
血液の存在は癌をはじめとする種々の異常な状態
によつて起こされる出血を示すものである。かか
る状態を初期に診断することが重要であるため、
潜血の試験手段は通常複数の試験パツドで構成さ
れた試験具に含まれている。各パツドは異なつた
分析対象物の検査に適した試薬を含有するため、
ここでは多種（数）試験具又は「マルチプル」
（“multiples”）と呼び、日常の身体検査における
尿試料の選別に使用される。また一般に、大部分
の多種選別試験具にはペルオキシダーゼに基づく
グルコース測定が含まれる。 沃化カリウム指示薬系を用いるグルコース試験
手段を、基質としてヒドロペルオキシドを含有す
る潜血試験手段とともにマルチプル上に置き、得
られたマルチプルをびんに入れ、保存及び／又は
輸送する場合に問題が認められた。これらの試験
手段に一般に使用されるヒドロペルオキシド、特
にクメンヒドロペルオキシド、２，５−ジメチル
ヘキサン−２，５−ジヒドロペルオキシド及びｐ
−ｔ−ブチルクメンヒドロペルオキシドが保存及
び取り扱い中に揮発及び／又は分解したり、びん
に密封されれている間にグルコース試験手段中の
沃化カリウムと反応して「緑変」するか又は偽り
の陽性反応を引き起こすことは明らかである。本
発明はかかる問題を解決した。 ［情報の開示］ 潜血試験手段は当業界で周知であり、一般にヘ
モグロビンの基質としてのヒドロペルオキシド、
色原体及び反応の安定剤又は促進剤の使用に基づ
くものである。 米国特許第3853471号はヒドロペルオキシド、
色原体及び安定剤としてリン酸又はホスホン酸を
含有するキヤリアで構成される試験片を開示して
いる。ジイソプロピルベンゼンジヒドロペルオキ
シドが有用な基質として開示されている。 米国特許第3975161号は有機ヒドロペルオキシ
ド又はその塩、酸性緩衝剤、色原体、湿潤剤、天
然又は合成の固体ポリマーフイルム形成物質及び
新規な促進剤を含有する組成物を含浸せしめた吸
水性キヤリアからなる試験片を開示している。上
記促進剤はイソキノリン又はその誘導体の１つで
ある。ヒドロペルオキシドはクメンヒドロペルオ
キシド、パラ−メタンヒドロペルオキシド、１，
４−ジイソプロピルベンゼン−１，４−ジヒドロ
ペルオキシド、２，５−ジメチルヘキサン−２，
５−ジヒドロペルオキシド又は１−ヒドロキシシ
クロヘキサン−１−ヒドロペルオキシドからなる
群より選ばれることが開示されている。 キノリンの酸性塩又は付加物及びその誘導体は
過酸化活性物質の検出のための試験組成物におけ
る相乗作用剤として米国特許第3986833号に開示
されている。 ［発明の概要］ 本発明はモル比が約0.9ないし約3.0の１，４−
ジイソプロピルベンゼンジヒドロペルオキシド及
びベンジジン指示薬からなることを特徴とする、
試料中の過酸化活性物質の測定のための安定試験
組成物を提供するものである。 尿試料100万部中の１部の潜血の存在に感受性
を有する安定試験具は試験組成物を包含せしめた
キヤリアマトリツクスで形成され、試験組成物は
更に増強剤及び約４ないし約7.5の範囲のPHを与
えうる緩衝剤を含む。第二鉄キレートを含有せし
めることにより、試験具にアスコルビン酸塩耐性
が付与される。試験具はグルコース酸化酵素、ペ
ルオキシダーゼ及び沃化カリウム指示薬の使用に
基づき、緑変の問題の徴候なく、グルコースの測
定を行うこともできるマルチプルの製造に使用で
きる。 ［発明の説明］ 本発明の安定組成物は試料中の過酸化活性物質
の存在を測定するために使用することができる。
過酸化活性物質を含有すると推定される水性流体
試料又は水性流体に溶解しうる試料であれば、ど
のようなものでも検査することができる。試験組
成物は、尿のような体液又は便に関して特に有用
である。最も有用な実施態様の１つは尿における
使用を意図する潜血用固体試験具である。尿潜血
試験手段は１つの試薬パツドとして多種試験具上
に存在せしめて特に有用である。また、そのよう
な多種試験具は通常少なくともグルコース測定手
段をも含んでいる。種々のマルチプルがインヂア
ナ州エルクハートのマイルス・ラボラトリーズ社
のエイムズ・デイビジヨン（Ames Division of
Miles Laboratories，Inc.，Elkhert，IN）より
マルチステイツクス（MULTISTIX ）試薬片
及びＮ−マルチステイツク（Ｎ−MULTISTIX
）試験片の商標名で市販されている。 （問題点） グルコース測定手段及び潜血試験手段の両者を
含む前記マルチステイツクス及びＮ−マルチステ
イツクスの組成は、消費者の使用に先立つ輸送及
び／又は保存中に、グルコース用試薬パツドの
「緑変」として知られる現象を示すことが判明し
ている。グルコース測定は、グルコースを含有す
る試料と接触せしめた後のグルコース酸化酵素に
よる過酸化水素の発生及びそれに続く、発生した
過酸化水素のペルオキシダーゼの存在下に視認可
能な色を発する沃化カリウム指示薬系による測定
に基づくものである。グルコース用パツドの「緑
変」は消費者が使用にあたつて試験片のびんを開
ける前にもペルオキシダーゼ／沃化カリウム系と
の何らかの反応が起きたことを示すものであつ
た。この現象は保存及び輸送中のマルチプル上の
潜血試験手段において有機ヒドロペルオキシド基
質の分解及び／又は揮発によつて生じるものと思
われている。 そのようなマルチプルを市販するためには、輸
送及び流通を見込んだ十分な貯蔵寿命及び顧客の
ために妥当な有効寿命が必要である。「緑変」が
生じると陰性応答を示すはずの試料において、デ
シリツター当り30ミリグラム（mg／dl）のグルコ
ースの陽性応答を示すものと解釈され得る。従つ
て、そのような使用前の「緑変」は許容されな
い。 （解決方法） 臨床的に有用な潜血試験手段は尿100万部中の
１部のヘモグロビン（潜血）に対しても感受性を
有するものでなければならない。十分な感受性及
び安定性をもたらし、多種試験具上の他の試薬試
験手段に影響を及ぼさない唯一のヒドロペルオキ
シドが見出された。 １，４−ジイソプロピルベンゼンジヒドロペル
オキシド。 １，４−ジイソプロピルベンゼンジヒドロペル
オキシド（DBDHと省略し、本文中では「ジヒ
ドロペルオキシド」と称するが、α，α′−ジヒド
ロペルオキシ−１，４−ジイソプロピルベンゼン
と呼ぶこともできる）は、次式： を有し、DBDHは不揮発性、非昇華性化合物で
あることがわかつた。他のヒドロペルオキシド類
とは異なり、種々の条件下で非爆発性であること
が認められ、従つて大量に製造し保存することが
可能であつた。 ３，3′，５，5′−テトラメチルベンジジンを用
いた、尿中潜血測定用試験具の組成を最適化する
ことにより、目的とする応答を得るためにはジヒ
ドロペルオキシドとベンジジン指示薬の間に一定
範囲のモル比を維持しなければならないことがわ
かつた。一定範囲のモル比はベンジジン指示薬１
モルにつきジヒドロペルオキシドが約0.9ないし
約3.0モル、好ましくはベンジジン指示薬１モル
につきジヒドロペルオキシドが約1.6ないし3.0モ
ルであつた。このモル比の範囲を下まわると必要
な感受性が得られず、このモル比を上まわると、
驚くべきことに試薬パツドはヘモグロビンに対し
明確な反応性を示さなかつた。 試験組成物 過酸化活性物質の測定のための安定試験組成物
は、ベンジジン指示薬に対しジヒドロペルオキシ
ドと同様の一定範囲のモル比を必要とする。組成
物は50℃で４週間の熱をかける条件に対し安定し
ている、つまり活性を保持する。３，3′，５，
5′−テトラメチルベンジジンは好ましい指示薬で
あるが、他のベンジジン指示薬を使用することも
できる。好適なベンジジン指示薬としては、テト
ラエチルベンジジン、ｏ−トリジン、ベンジジ
ン、ｏ−ジアニシジン等が挙げられる。 試料100万部中の１部の過酸化活性物質に対す
る感受性は、組成物中に増強剤を包含せしめるこ
とにより得られる。過酸化活性物質の測定のため
の当業界で公知の増強剤を使用することができ
る。かかる増強剤としてはキノリン類及びその誘
導体並びにイソキノリン類及びその誘導体が挙げ
られる。増強剤は、好ましくは、イソキノリン、
４−ブロモイソキノリン、４−メチルキノリン、
６−メトキシキノリン、３−アミノキノリン又は
５，６−ベンゾキノリンであつてもよい。この群
の中でもキノリン類、４−メチルキノリン及び６
−メトキシキノリンが好ましく、４−メチルキノ
リン［商標名 レピジン（Lepidine ）としてウ
イスコンシン州ミルウオーキーのアルドリツヒケ
ミカル社（Aldrich Chemical Co.，
Milwaukee，WI）より市販］が最も好ましい。 試験試料の酸性度又は塩基性がい場合、試験組
成物は緩衝化すべきである。緩衝剤は、PHを約
4.0ないし約7.5の範囲とすることができるものか
ら任意に選択される。リン酸塩、クエン酸塩等の
緩衝剤又はそれらを組合せたものを使用して適切
なPH範囲とする。 試験具 上記の試験組成物をキヤリアマトリツクスに包
含せしめ、乾燥することにより便利な乾燥試薬試
験のフオーマツト（format）が得られる。 試験具は人体からの試料の選別に特に好都合な
フオーマツトである。人体からの試料100万部に
つき少なくとも１部のヘモグロビンの存在に感受
性を有する安定試験具はキヤリアマトリツクス
に、DBDHとベンジジン指示薬とを、モル比が
約0.9〜約3.0にて、更に、増強剤及びPHを約４な
いし7.5の範囲にしうる緩衝剤を包含せしめるこ
とにより製造することができる。有用なベンジジ
ン指示薬、増強剤及び緩衝剤は先に述べた。安定
試験具は50℃で４週間保存した後に正確な試験結
果を提供する試験具の能力によつてその範囲が限
定される。色応答が本来のカラーブロツクの応答
とは異ならないと判定された場合は、目視的に読
取つた試験結果は正しいと言える。このことは、
「２分の１未満のカラーブロツクにおける色の減
退」と呼ばれることがあり、使用者に提供された
適切なカラーチヤート上の色ブロツクに言及する
ものである。着色の「２分の１のカラーブロツ
ク」以内の色応答は分析対象物の正確な量として
読み取られる。ヘモグロビン（潜血）の臨床的選
別に有用な感受性は100万につき１部であると決
められている。体液試料は通常望ましい範囲外の
PHを有しているため、緩衝剤が試験組成物に添加
される。 市販の使用可能な尿潜血試験具は３つの主な属
性、つまり安定性、感受性及びアスコルビン酸の
影響に対する耐性を有していなければならない。
安定性及び感受性の必要条件については既に定義
した。１：1000000の感受性は尿１デシリツトル
当たり0.15mgのヘモグロビンに相当する。アスコ
ルビン酸の影響は当業界公知である。アスコルビ
ン酸は指示薬の酸化を妨げ、見掛け上は陰性の結
果をもたらす。「アスコルビン酸塩耐性」はここ
では、尿試料が試料１デシリツトルにつき50ミリ
グラム程度のアスコルビン酸を含有する場合に観
察される指示薬の色に対する無視し得る妨害を意
味するものとして定義する。アスコルビン酸又は
アスコルビン酸塩は酸化還元指示薬系に基づく診
断試験に対する共通の妨害物であり、日常ピタミ
ンＣを摂取する人々の試験を行なう場合には特に
重大である。 試験組成物に第二鉄キレートを添加することに
より、試験具にアスコルビン酸塩による妨害に対
する耐性を付与することができる。使用可能な第
二鉄キレートとしては、Ｎ−（２−ヒドロキシエ
チル）エチレンジアミン三酢酸（Fe−
HEDTA）、エチレンジアミンテトラ酢酸（Fe−
EDTA）、シクロヘキシレンジアミンテトラ酢酸
（Fe−CDTA）、ニトリロ三酢酸（Fe−NTA）、
イミノジ酢酸（Fe−IMDA）、エチレンジアミン
ジ酢酸ジプロピオン酸（Fe−EDDPα及びβ型）、
ヒドロキシエチルイミノジ酢酸（Fe−HIMDA）
の第二鉄キレートのようなポリカルボキシアルキ
ルアミン第二鉄キレート類及びその混合物が挙げ
られる。好ましくはFe−HEDTA及びFe−
EDTAであり、最も好ましくはFe−HEDTAで
ある。ポリカルボキシアルキルアミン第二鉄キレ
ートは米国特許願第575725号にさらに詳細に記載
されており、参考例としてここに取り上げる。 Fe−HEDTAを使用して所望のアスコルビン
酸塩耐性を得るためには、試験具がPH6.5以上に、
つまり6.5ないし7.1に緩衝化されていることが好
ましい。広範囲に亘る実験により、最適PH範囲
6.7ないし7.1、最も好ましくは6.80ないし6.82の
場合に、PH及び比重が極めて変動的である尿試料
について最も良い感受性と安定性とアスコルビン
酸塩耐性とのバランスが最も良くなることが判明
した。試験を行なつた250を上まわる緩衝剤の組
合せの中でも、モル比が１ないし３のトリス−
（ヒドロキシメチル）アミノメタン−マロン酸と
硼酸トリエタノールアミンの併用により尿試験に
ついて最良の結果が得られることが判明した。リ
ン酸塩、クエン酸塩又はコハク酸塩等の他の緩衝
剤及び緩衝剤の組合せを使用することができる。
しかしながら、その場合には、感受性、安定性又
はアスコルビン酸塩耐性が多少損なわれる。 濃縮剤、色安定剤、界面活性剤等のような他の
成分を添加することができる。ポリビニルピロリ
ドンのようなポリマーを加えることにより安定性
及び試験具上の発色の均一性が上昇する。 キヤリアマトリツクス キヤリアマトリツクスは、試験組成物に対して
実質的に不活性で、多孔質であり及び／又は試験
すべき水性試料に対して吸収性である限り、試験
組成物の成分を包含せしめることが可能ないかな
る物質であつてもよい。「キヤリアマトリツクス」
という表現は水又は他の生理的流体と接触せしめ
た場合、不溶性であり、その構造的一体性を維持
する吸収性又は非吸収性マトリツクスを意味す
る。使用可能な適切な吸収性マトリツクスとして
は、紙、セルロース、木材、合成樹脂フリース、
織布及び不織布等が挙げられる。紙は好ましいキ
ヤリアマトリツクスである。非吸収性マトリツク
スとしては、グラスフアイバー、ポリマーフイル
ム、予備成形された又は微細孔質の膜及びポリプ
ロピレンのような有機プラスチツク材料等が挙げ
られる。 試薬の導入は浸漬、塗布又は吹付けのようなど
のような方法によつても行なうことができる。好
ましい方法は紙を試薬溶液に浸漬して含浸を行
い、溶媒を乾燥により除去することである。乾燥
は包含せしめた試薬に有害な影響を与えない方法
であればいかなるものによつても行うことができ
るが、通常空気乾燥オーブンによつて行なわれ
る。 製造方法 前記の潜血試験手段はキヤリアマトリツクスに
全試験成分を含有する単一の溶液を含浸させ、上
記マトリツクスを乾燥させることにより製造され
た。通常紙を試薬含有溶液に浸漬することにより
紙製キヤリアへの試薬の含浸を行つた。現在でも
その方法を使用して一般の過酸化活性物質の測定
のための試験具を製造することができる。しかし
ながら、第二鉄キレートとしてFe−HEDTAを
含有する好ましい試験具は２段階の含浸工程によ
り製造される。 好ましい試験具の製造方法は次の工程を含む： ａ 試験具にアスコルビン酸塩耐性を付与するこ
とができる第二鉄キレート及びPHを約6.5ない
し約7.1の範囲とすることができる緩衝剤を含
有する第１の溶液を製造し、 ｂ 有機溶媒；モル比約0.9ないし3.0の１，４−
ジイソプロピルベンゼンジヒドロペルオキシド
及びベンジジン指示薬；並びに増強剤を含有す
る第２の溶液を製造し、 ｃ キヤリアマトリツクスに第１又は第２の溶液
を含浸させ、 ｄ 溶液を含浸させたキヤリアを乾燥し、 ｅ 乾燥したキヤリアに、第１又は第２の溶液
の、先に含浸させなかつた方を含浸させ、 ｆ ２種類の溶液を含浸させたキヤリアを乾燥す
る。 第１の溶液は50％未満の有機溶媒を含有するの
に対し、第２の溶液は50％を越える、好ましくは
70ないし80％の有機溶媒を含有する。どちらの含
浸工程にも適した有機溶媒としてはジメチルホル
ムアミド、エタノール及びメトキシプロパノール
が挙げられる。 DBDHのベンジジンに対するモル比の好まし
い範囲は1.6ないし3.0である。DBDHのベンジジ
ンに対するモル比は第２の含浸溶液を製造するた
めに使用された化合物の量から計算された。乾燥
された試験具におけるモル比は、紙を乾燥する間
の少量（約10％）のDBDHの損失、すなわち分
解のため多少低くてもよい。更にポリビニルピロ
リドンのような成分を、最も都合のよいようにど
ちらかの溶液に包含せしめることができる。 得られた２度の含浸及び乾燥を行つた紙を切断
し、ポリスチレンのような硬質ポリマーの基材に
貼付する。その他の基材は周知である。得られた
試験具は便宜上防水性の持ち手に貼付された小さ
い矩形の試薬パツドから成る。多種試験具におい
ては、グルコース、蛋白質、PH、比重及び白血球
のような種々の診断試験手段を含む他の試薬パツ
ドを更に設けることができる。特に本発明の試薬
パツドは、ペルオキシダーゼ／沃化カリウム指示
薬系を含むグルコース試薬パツドを備えた多種試
験具において使用することができる。 使用法 試験組成物は直接水性試験試料により又は試料
と接触せしめる前に水を加えることにより溶液を
形成して使用することができる。試験具は体液試
料を接触させ、試験具を取り出し、発生した色を
目視又は機械により測定することによつて有利に
使用される。通常目視読み取り試験は、使用者に
提供されている専用のカラーチヤートと比較する
ことにより半定量的濃度範囲を与える機械による
結果の方がややより定量的であり、インヂアナ
州、エルクハートのマイルスラボラトリーズ社エ
イムズ・デイビジヨンより入手可能なクリニテツ
ク（CLINITEK ）10反射光度計のような装置
を用いることにより得られる。尿試料中への浸漬
による潜血試験の結果は、通常、目視又は機械に
より読み取においては、約１分未満で得られる。
マルチプルの機械的読み取りの方が長い読み取り
時間を要する他の試薬試験が含まれているため長
い時間を要する。 ［略 語］ 次の略語を便宜上使用する。実施例で使用する
化学薬品の正式名は表記の通りである。 Ｍ モル mM ミリモル mg ミリグラム dL デシリツトル DBDH
１，４−ジイソプロピルベンゼンジヒドロ
ペルオキシド ％
パーセント、特に明記しない限り容量／容
量 ℃ 摂氏温度 PVP K30
ポリビニルピロリドン分子量40.000ニユー
ヨーク州、ニユーヨークのGAF社（GAF
Corp.，New York，N.Y.）より市販 レピジン（Lepidine）
４−メチルキノリンウイスコンシン州ミル
ウオーキーのアルドリツヒケミカル社より
市販 SSD 標準液表示単位 Fe−HEDTA
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジ
アミン三酢酸第二鉄 SG 比重 トリス
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン ビス−トリス
１，３−ビス［トリス（ヒドロキシメチ
ル）メチルアミノ］プロパン HEPES
Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−
N′−エタンスルホン酸 TEB 硼酸トリエタノールアミン トリス−マレイン酸塩
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
−マレイン酸 トリス−マロン酸塩
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
−マロン酸 次の実施例で行なつた実験について説明する。
実施例は発明を説明するためのものであつて、そ
れらは発明の範囲を限定するものと解釈すべきで
はない。その範囲は特許請求の範囲によつてのみ
限定される。当業者は組成物の成分及び反応パラ
メーターを望ましいと思われる様に変化させた
り、代用物を用いたり、変更させることができ
る。 ［実施例］ 実施例１：好ましい実施態様 尿試料100万部に対し１部の潜血の存在に感受
性を有する安定なアスコルビン酸塩耐性試験手段
を下記の通り２段階の含浸工程により製造した。 第１の含浸液は下記の化合物の水性混合物を含
有していた。 トリス−マロン酸塩 0.1M 硼酸トリエタノールアミン 0.3M ドデシルスルホン酸ナトリウム 0.3重量％ Fe−HEDTA ５mm 上記の水性混合物のPHを6.80から6.82の間に調
整した後ジメチルホルムアミド（最終溶液はジメ
チルホルムアミドを45％含有）で希釈した。ホア
ツトマン（Whatman ）3MM紙を上記水溶液に
浸漬し85℃で５分間乾燥した。 次に乾燥した紙を： ３，3′，５，5′−テトラメチルベンジジン
25−35mM ４−メチルキノリン 0.6容量％ PVP K30 ４重量％ DBDH 45−60mM ジメチルホルムアミド 80容量％ エチルオレンジ 25mg／dL 橙色Ｇ染料 25mg／dL を含有する第２含浸液に浸漬した。試験によつて
この配合物が市販に適する尿潜血試験手段として
すべての要求条件に合うことが示された。 実施例２：不適切なヒドロペルオキシド 下記の表１は実施例１の配合物中のDBDHの
代わりに使用し、不適切であることが判明した多
数の他のヒドロペルオキシドを示す。
【表】 ペルオキシド
実施例３：不適切な緩衝剤 緩衝剤系はPH及び比重に影響を与える尿に対す
る耐性に加えその他の必要な特性を有する市販に
適する尿潜血用乾燥試験薬試験具を提供するため
には重要であることがわかつている。実施例１の
配合物を緩衝剤を変化させて使用し、尿潜血用単
一パツド試験具を用いて試験を行なつた。次表の
一部に紙製キヤリアに含浸させたDBDH／Fe−
HEDTA試験配合物と共に用いた緩衝剤の組合わ
せリストを挙げる。
【表】 モル比が１対３のトリスーマロン酸塩、硼酸ト
リエタノールアミンの緩衝剤系により、広範囲な
PHと多様に変動する比重を有し、その多様性が試
験の感受性に影響を与える臨床上の尿の母集団で
最良の結果が得られることが判明した。 実施例４：安定性 実施例１の好ましい試験具用配合物を以下の実
験に使用し、試験具の無類な熱安定特性を証明し
た。下記に示した安定性のデータ（表）はイン
ヂアナ州、エルクハートのマイルス・ラボラトリ
ーズ社のエイムズ・デイビジヨンより市販されて
いる潜血試験手段である、ヘマスチツクス
（HEMASTIX）試薬試験片と本発明の試験具と
は比較するものである。50℃の熱を４週間かけた
後の本試験具の読み取り値は期待値に非常に近い
のに対し、ヘマストツクスの高い血液濃度読み取
り値は一貫して低かつた。
【表】 SSD単位は種々の色ブロツクレベルに使用され
る一連の任意単位であり、陰性を10として読み、
漸進レベルは10単位ずつ増加する。 実施例５：緑変 目視により読み取りが行なわれる試験結果の定
量化における問題点の１つは色覚の個人差であ
る。この差は、色をL*，a*，b*の三次元目盛で
測定するニユーヨーク州ニユーバーグのコルモー
ゲン社（Kollmorgen Corp.，Newburgh，N.
Y.）から入手可能であるマクベス（MacBeth）
1500比色計の使用により排除される。L*，a*，
b*値は色の明瞭な表示を可能にする。色が類似
している場合はL*，a*，b*の値はそれぞれ等し
くなり、これらの値の１つ以上が異なる場合は、
色が異なることを示す。 マイルスラボラトリー社インヂアナ州、エルク
ハートのエイムズ・デイビジヨンよりＮ−マルチ
スチツクスSG（Ｎ−MULTISTIXSG）として市
販されている多種試験具上での潜血試験は、対照
試料との反応後、試験片に60℃の熱をかけなが
ら、３日及び７日の間隔をおいてマクベスによる
読み取り試験を行なつた。得られたL*，a*，b*
値のグラフは一段階高い色ブロツクへの移行を明
らかに示した。熱応力を加えた後、陰性試料に浸
漬した後の試験片の色は陰性試料よりも30mg／
dLのヘモグロビン試料の期待色に近かつた。同
様に30mg／dL試料の色も100mg／dL試料から期待
される色への明らかなる移行を示した。 先に使用したものと同様のグルコース試験手段
（グルコースオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ及
び沃化カリウム）と本発明の潜血試験手段を含む
マルチパツド試験片を用いて行なつた同様のグラ
フは、60℃の熱を７日間かけた後室温で試験した
ところL*，a*，b*軸上での実質的移行は示され
なかつた。苛酷な熱をかけたにもかかわらず、陰
性試料及び30mg／dL試料については、「緑変」は
認められなかつた。 発明の精神からはなれない範囲で好ましい実施
態様の修正及び変更を行なうことができる。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ 過酸化活性物質試験用組成物とペルオキシダ
    ーゼ／ヨウ化カリウム指示薬によるグルコース測
    定系とが、同じキヤリアマトリツクスに保持され
    ているか又は一緒に存在している液体試料の多種
    試験具に用いられる過酸化活性物質試験用組成物
    であつて、該組成物が、 (a) １，４−ジイソプロピルベンゼンジヒドロペ
    ルオキシド及び (b) ベンジジン指示薬を、 該指示薬１モルに対し該ジヒドロペルオキシ
    ドを0.9〜3.0モルの範囲で含む ことを特徴とする、安定で前記グルコース測定系
    の有効性に悪影響を与えることがない過酸化活性
    物質試験用組成物。 ２ 該指示薬が、３，3′，５，5′−テトラメチル
    ベンジジンである特許請求の範囲第１項記載の組
    成物。 ３ 該組成物が、更に増強剤を含有する特許請求
    の範囲第１項記載の組成物。 ４ 該増強剤が、４−メチルキノリン又は６−メ
    トキシキノリンである特許請求の範囲第３項記載
    の組成物。 ５ 該組成物が、更に組成物のPHを４ないし7.5
    の範囲とするのに十分な緩衝剤を含有する特許請
    求の範囲第４項記載の組成物。 ６ 過酸化活性物質試験用組成物とペルオキシダ
    ーゼ／ヨウ化カリウム指示薬によるグルコース測
    定系とが、同じキヤリアマトリツクスに保持され
    ているか又は一緒に存在している液体試料の多種
    試験具であつて、該過酸化活性物質試験用組成物
    が、 (a) １，４−ジイソプロピルベンゼンジヒドロペ
    ルオキシド及び (b) ベンジジン指示薬を、 該指示薬１モルに対し該ジヒドロペルオキシ
    ドを0.9ないし3.0の範囲で含む ことを特徴とする、安定で前記グルコース測定系
    の有効性に悪影響を与えることがない試験具。 ７ 過酸化活性物質が、人体試料中のヘモグロビ
    ンである特許請求の範囲第６項記載の試験具。 ８ 該指示薬が、３，3′，５，5′−テトラメチル
    ベンジジンである特許請求の範囲第６項記載の試
    験具。 ９ 該組成物が、更に増強剤を含有する特許請求
    の範囲第６項記載の試験具。 １０ 該組成物が、更に組成物のPHを４ないし
    7.5の範囲とするのに十分な緩衝剤を含有する特
    許請求の範囲第６項記載の試験具。 １１ 該緩衝剤が、トリス（ヒドロキシメチル）
    アミノメタン−マロン酸と硼酸トリエタノールア
    ミンとの組合わせであり、そのモル比が１：３で
    ある特許請求の範囲第１０項記載の試験具。 １２ 該組成物が、アスコルビン酸耐性とするの
    に十分量の第二鉄キレートを含有する特許請求の
    範囲第１０項記載の試験具。 １３ 第二鉄キレートが、Ｎ−（２−ヒドロキシ
    エチル）エチレンジアミン三酢酸であり、緩衝剤
    が、該組成物のPHを6.5ないし7.1の範囲とするの
    に十分である特許請求の範囲第１２項記載の試験
    具。 １４ 該組成物が、更にポリビニルピロリドンを
    含有する特許請求の範囲第１３項記載の試験具。
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