JPH046897B2 - - Google Patents

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JPH046897B2
JPH046897B2 JP59062890A JP6289084A JPH046897B2 JP H046897 B2 JPH046897 B2 JP H046897B2 JP 59062890 A JP59062890 A JP 59062890A JP 6289084 A JP6289084 A JP 6289084A JP H046897 B2 JPH046897 B2 JP H046897B2
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catecholamines
fluorescence
diphenylethylenediamine
epinephrine
dopamine
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Yosuke Ookura
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Tosoh Corp
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    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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Description

【発明の詳細な説明】
本発明は１，２−ジフエニルエチレンジアミン
によるカテコールアミンの蛍光分析法に関するも
のである。 カテコールアミンは３，４−ジヒドロキシフエ
ニル骨格をもつ生体アミンの総称であつて、とく
にチロシンの代謝産物であるノルエピネフリン、
エピネフリン、ドーパミン等のカテコールアミン
は副腎髄質ホルモンとして、また交感神経末端で
の化学伝達物質として重要な働きを営んでいる。
従つてカテコールアミンの分析は内分泌系や神経
系の研究において欠かすことができない。しかし
ながら、組識中のカテコールアミノ含量は極めて
低く、アミノ酸の１／104にすぎず、感度の高い
分析法が要求されている。最近、高感度を特徴と
する蛍光分析法がカテコールアミンの微量分析法
として注目を集め、臨床検査の一つとしてカテコ
ールアミンの分析も蛍光法により行なわれるよう
になつている。 蛍光分析法としては、pH1でカテコールアミン
それ自身の蛍光を測定する方法もあるが、特異的
ではなく感度も高くない。最も広く行なわれてい
る方法は、カテコールアミンを酸化剤によつて処
理し、生成するトリヒドロキシインドール
（THI）の蛍光を定量する手法である。とくにノ
ルエピネフリン、エピネフリンに対し感度が高
い。しかし、酸化されにくいドーパミンはTHI
法をもつてしても十分な感度で測定することはで
きない。エチレンジアミン縮合反応によつてカテ
コールアミンを測定する方法も知られているが、
操作が繁雑なこと、感度が低い事が欠点となつて
いる。 本発明者は生体内カテコールアミンに対する高
感度発蛍光試薬の開発を目的として実験を重ね、
ジアミン誘導体の性質を調べているうち、１，２
−ジフエニルエチレンジアミンが中性条件下、フ
エリシアン化物イオン共存のもとでカテコールア
ミンと反応して、強い蛍光性の化合物を与えるこ
とを見出し、本発明を完成した。 １，２−ジフエニルエチレンジアミンは文献記
載の合成法（J.Inorg.Nucl.Chem.27巻（1965）
271）により調製でき、得られた試薬は水溶性で、
しかも長期間安定であるという特徴をもつてい
る。１，２−ジフエニルエチレンジアミンとカテ
コールアミンとの反応はグリシンおよびフエロシ
アン化カリウムの共存下、pH4〜９の領域ですみ
やかに進行し、反応成績体の蛍光は少なくとも２
時間は安定である。従つて、本蛍光分析法は用手
法はもとより、高速液体クロマトグラフイーのプ
レラベル法にも応用できるすぐれた方法である。 以下、実施例により本発明を更に具体的に説明
する。 実施例 １ ノルエピネフリン、エピネフリン、ドーパミン
及びイソプロテレノールを用いて用手法による蛍
光定量の検討を行なつた。0.5Mグリシンを含む
0.05M Bicine緩衝液（pH7.0）2.0ml、0.1M1，２
−ジフエニルエチレンジアミン溶液（エタノール
溶媒）0.1ml及び0.08％フエリシアン化カリウム
溶液0.1mlを順次加えて、37℃30分間以上放置し
た後、蛍光を測定する。測定波長は表１に示した
最適励起蛍光波長に設定した。定量下限（Ｓ／Ｎ
＝２）はいずれのカテコールアミンにおいても２
×10-8Ｍである。また１×10-6Ｍ溶液を用いて20
回同時測定してとき、その変動係数はいずれのカ
テコールアミンにおいても１％前後と良好であ
る。１，２−ジフエニルエチレンジアミンは表１
に示した様なカテコール骨格を有する化合物との
み選択的に反応し、ノルエピネフリン、エピネフ
リン、ドーパミン及びイソプロテレノールについ
てそれらの蛍光強度に大差はない。THI法と比
較した場合、ノルエピネフリン、エピネフリン、
イソプロテレノールについては約10倍、ドーパミ
ンについては約500倍の強い蛍光を示し、高感度
である。１，２−ジフエニルエチレンジアミンは
糖類、ケト酸、アミノ酸、核酸塩基、ステロイド
類、ポリアミンカルボン酸、アルコール及びアル
デヒドなどの生体成分とは全く反応せず、カテコ
ールアミンに対して選択的な試薬であることを確
かめた。
【表】 トロン

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. １ １，２−ジフエニルエチレンジアミンを発蛍
    光試薬とするカテコールアミンの新規な定量方
    法。
JP59062890A 1984-03-29 1984-03-29 １，２−ジフエニルエチレンジアミンを用いるカテコ−ルアミンの定量方法 Granted JPS60205262A (ja)

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DE3511356A1 (de) 1985-10-24
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