JPS5938651A - カテコ−ルアミンの定量法 - Google Patents
カテコ−ルアミンの定量法Info
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- JPS5938651A JPS5938651A JP14955282A JP14955282A JPS5938651A JP S5938651 A JPS5938651 A JP S5938651A JP 14955282 A JP14955282 A JP 14955282A JP 14955282 A JP14955282 A JP 14955282A JP S5938651 A JPS5938651 A JP S5938651A
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/94—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving narcotics or drugs or pharmaceuticals, neurotransmitters or associated receptors
- G01N33/9406—Neurotransmitters
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、カテコールアミンの定量法に関し。
血液、尿等の生体試料液中に挾めてｇＣ量に含有される
カテコールアミンを液体クロマトグラブイ−を利用して
分離し、ノルアドレナリン、アドレナリン、ドーノｑミ
ンの３成分を定量する方法に関する。
カテコールアミンを液体クロマトグラブイ−を利用して
分離し、ノルアドレナリン、アドレナリン、ドーノｑミ
ンの３成分を定量する方法に関する。
従来生体試料液中に含有されるカテコールアミンの定量
法として、高速液体クロマトグラフィーで、ノルアドレ
ナリン、アドレナリン、ドー／（ミンの３成分を分画し
、これらの各成分の電気化学的性質を利用１．て検出す
る方法（Ｖ ＰＪ Ｄ法）と、高速液体クロマトグラフ
ィーでノルアドレナリン、アドレナリン、ドーパミンの
３成分に分画し、次いで蛍光物質に変換した後、その蛍
光を検知し定量する方法（Ｔ ＩＩ Ｉ法）の二法が′
共用化されている。
法として、高速液体クロマトグラフィーで、ノルアドレ
ナリン、アドレナリン、ドー／（ミンの３成分を分画し
、これらの各成分の電気化学的性質を利用１．て検出す
る方法（Ｖ ＰＪ Ｄ法）と、高速液体クロマトグラフ
ィーでノルアドレナリン、アドレナリン、ドーパミンの
３成分に分画し、次いで蛍光物質に変換した後、その蛍
光を検知し定量する方法（Ｔ ＩＩ Ｉ法）の二法が′
共用化されている。
しかしながらＶ Ｍ Ｄ法では、生体試料液中の電気化
学的性質を有する全ての成分を同感度で検出するため、
カテコールアミンを検出するためにはかなり繁ｔｌな前
処理を必要とする欠点があり、又曲中カテコールアミン
はその濃度が１０−１！ｐ（ｐｇ）程度であって栖めて
微量であるため、アドレナリン、ドーパミンの検出が困
４′？ｔであった。又Ｔ ＨＩ決でけ感度的［Ｖ Ｍ
ＩＴｈ、ｌ：り僚れ、血中カテコールアミンも、ノルア
ドレナリン、アドレナリンの検出が可能である。しかし
ドーパミンはＴＨＩ物質への変換効率が悪く、シかも測
定波長がノルアドレナリン、アドレナリンとけ眉なるた
め検出できないという欠点があった。
学的性質を有する全ての成分を同感度で検出するため、
カテコールアミンを検出するためにはかなり繁ｔｌな前
処理を必要とする欠点があり、又曲中カテコールアミン
はその濃度が１０−１！ｐ（ｐｇ）程度であって栖めて
微量であるため、アドレナリン、ドーパミンの検出が困
４′？ｔであった。又Ｔ ＨＩ決でけ感度的［Ｖ Ｍ
ＩＴｈ、ｌ：り僚れ、血中カテコールアミンも、ノルア
ドレナリン、アドレナリンの検出が可能である。しかし
ドーパミンはＴＨＩ物質への変換効率が悪く、シかも測
定波長がノルアドレナリン、アドレナリンとけ眉なるた
め検出できないという欠点があった。
本発明は上記の欠点を解消し、生体試石液中のノルアド
レナリン、アドレナリン、ドーノ叱ミンの各成分を液体
クロマトグラフィーにより分１ｉ１Ｎし、ドーパミンを
選択的にノルアト１ナリンに変換し、更に蛍光を発現す
る誘導体＋（ｇ％ｙ控１７て蛍光を検知し、定量する方
法を提供する仁、（−を目ｒ句にする。
レナリン、アドレナリン、ドーノ叱ミンの各成分を液体
クロマトグラフィーにより分１ｉ１Ｎし、ドーパミンを
選択的にノルアト１ナリンに変換し、更に蛍光を発現す
る誘導体＋（ｇ％ｙ控１７て蛍光を検知し、定量する方
法を提供する仁、（−を目ｒ句にする。
本発明の要旨は、カテコールアミンを合資するｇｉ Ｐ
Ｉ液を液体クロマトグラフィーにおける分子ｆ！力う八
Ｋ ）Ｑ入して、ノルアドレナリン、アドレナリン、１
゛−パミンの３成９分を分ｎｆ Ｌ、これｅでドーパミ
ン−β−水酸化酵素を作用させてドーノ（ミンを選・択
的にノルアドレナリンＶＣｆ 撲ｔ、、次いでノルアド
レナリン、アドレナリン、ドーパミンから変換されたノ
ルアドレナリンにテトラヒドロキシインドールを接触さ
せ、これにより得られた夫々の誘導体の蛍光を検出し、
これＶＣ井づいてツルアドレナリン、アドレナリン及び
ドーパミンの３酸分を定量することを特徴とする、カテ
コールアミンの尾骨法に存する。
Ｉ液を液体クロマトグラフィーにおける分子ｆ！力う八
Ｋ ）Ｑ入して、ノルアドレナリン、アドレナリン、１
゛−パミンの３成９分を分ｎｆ Ｌ、これｅでドーパミ
ン−β−水酸化酵素を作用させてドーノ（ミンを選・択
的にノルアドレナリンＶＣｆ 撲ｔ、、次いでノルアド
レナリン、アドレナリン、ドーパミンから変換されたノ
ルアドレナリンにテトラヒドロキシインドールを接触さ
せ、これにより得られた夫々の誘導体の蛍光を検出し、
これＶＣ井づいてツルアドレナリン、アドレナリン及び
ドーパミンの３酸分を定量することを特徴とする、カテ
コールアミンの尾骨法に存する。
次（′ｒ本発１１１カテコールアミンの定は法（でつい
て更に詳細に説明する。
て更に詳細に説明する。
＋ｒｎ液、尿等の生体液中に１ｊカテコールアミンがｐ
ｇ単位で微景に含有されている。この生体液を試ｔ’ｌ
とし、その中に含有されるカテコールアミンを定量する
ために液体クロマトグラフィーを用いる。
ｇ単位で微景に含有されている。この生体液を試ｔ’ｌ
とし、その中に含有されるカテコールアミンを定量する
ために液体クロマトグラフィーを用いる。
液体クロマトグラフィーにかけられる生体試料＃；！：
、カテコールアミンの分画を阻害する成分を予め除去
するだめの前処理操作にかけられる。
、カテコールアミンの分画を阻害する成分を予め除去
するだめの前処理操作にかけられる。
液体クロマトグラフィ一工程をｍｉ図に示ず。
］、 ｉ、ｌ：溶隙液槽であり、例えばリン酸綬衛液が
使用され、定流ｔ、１．ポンプ２により送液される。３
ｖｉ試料注入器であり、カテコールアミンを含有する試
料液が供給されて溶６＃液と混合される。
使用され、定流ｔ、１．ポンプ２により送液される。３
ｖｉ試料注入器であり、カテコールアミンを含有する試
料液が供給されて溶６＃液と混合される。
４は分離用カラムであり、例えばオクタｆシルＪンを導
入した多孔性シリカ、ジビニルベンセ°ンー（メタ）ア
クリル酸共重合体等の粒子が充填されている。
入した多孔性シリカ、ジビニルベンセ°ンー（メタ）ア
クリル酸共重合体等の粒子が充填されている。
１’！’； ＩｆＥ、液のＰＨ値、イオン強度、イオン
の種類、流速は分離用カラム４０分σ＃能に心じて適宜
調整される。
の種類、流速は分離用カラム４０分σ＃能に心じて適宜
調整される。
溶Ｎｒ液と混り合った前記試料液は分ｎｔ用カラム４を
通過することにより、ツルアドレナリン、アドレナリン
、ドーパミンの３成分に順次分離される。
通過することにより、ツルアドレナリン、アドレナリン
、ドーパミンの３成分に順次分離される。
ところでｒ−パミンは、ツノテコールアミンの分画の常
法とされてきたＶ Ｍ Ｄ法やＴ ＨＩ法では感度よく
検出されない。そこで本発明に訃いてｉ」、ドーパミン
β−水酸化酵累を作用させる。
法とされてきたＶ Ｍ Ｄ法やＴ ＨＩ法では感度よく
検出されない。そこで本発明に訃いてｉ」、ドーパミン
β−水酸化酵累を作用させる。
５は酵素溶液槽であり、定液面ポンプ６によってドーパ
ミンβ−水酸化酵素溶液が供給される。
ミンβ−水酸化酵素溶液が供給される。
１ｉ（Ｉ記ｒｆｆ素ンＪドーノ慴ミンを選択的ｔでノル
アドレナリンに変換するｊｉ％２であり、ツルア：°レ
ナリン、アドレナリン、Ｆ−パミンの順に外部されたカ
テコールアミンは＠ 素反応によってドーパミンがノル
アドレナリンに変換さｔｌｌ、ノルアドレナリン、アド
レナリン、ドーパミンから変換されたツルアドレナリン
となる。
アドレナリンに変換するｊｉ％２であり、ツルア：°レ
ナリン、アドレナリン、Ｆ−パミンの順に外部されたカ
テコールアミンは＠ 素反応によってドーパミンがノル
アドレナリンに変換さｔｌｌ、ノルアドレナリン、アド
レナリン、ドーパミンから変換されたツルアドレナリン
となる。
前記酵素シ容液は、ドーノ曵ミンβ−水酸化酵累の他（
・τ、例λげ＋Ｉ Ｈ液、助「；ｉ′素と［７てのアス
コルビン酸、酵素活性を安定化するためのカタラーゼ、
アデノシントリフオスプエートとグルコースデヒＦロゲ
ノーーゼの混合物等を溝底成分とする。緩青液として社
、例えばリン酸、酢酸、クエン酸等のＨ’２とそのナト
リクム塩、カリクム塩。
・τ、例λげ＋Ｉ Ｈ液、助「；ｉ′素と［７てのアス
コルビン酸、酵素活性を安定化するためのカタラーゼ、
アデノシントリフオスプエートとグルコースデヒＦロゲ
ノーーゼの混合物等を溝底成分とする。緩青液として社
、例えばリン酸、酢酸、クエン酸等のＨ’２とそのナト
リクム塩、カリクム塩。
リチウム塩等よりなるものが使用される。又、酵不活性
１ｅｔ−３１１基を有する化合物によって活性が低ドす
るので、−８ｉｔ井を有する化合物を失活さｔＬ゛るた
めにＮ−エチルマレイミド、硫酸鈎等を構Ｉ′ｉし、成
分とする。又、ドーパミン力）らノルアト１／ナリンへ
の、ｙ ２ ツカ率を高めるためフマル酸等のジカルボ
ン酸をｉ７マ成成分とするのが好適である。
１ｅｔ−３１１基を有する化合物によって活性が低ドす
るので、−８ｉｔ井を有する化合物を失活さｔＬ゛るた
めにＮ−エチルマレイミド、硫酸鈎等を構Ｉ′ｉし、成
分とする。又、ドーパミン力）らノルアト１／ナリンへ
の、ｙ ２ ツカ率を高めるためフマル酸等のジカルボ
ン酸をｉ７マ成成分とするのが好適である。
前記酵素はその酵素反応の好適ＰＨ値は４．８〜５．７
であり、更に好適にけ５．２〜５．４であり、醸適には
５．３である。
であり、更に好適にけ５．２〜５．４であり、醸適には
５．３である。
このような酵素原Ｆ［適したＰ ＩＩ値とするために緩
衝液のＰＨ値、イオン強度を調整する必要がある。緩衝
液のＰ Ｒ値、イオン強度は分院カラム４を面過後の溶
離液のＰ １１侑、イオン強度、流速に応じて調整する
のが好ましい。酵素反応によりドーパミンをノルアドレ
ナリンｔで変換す。
衝液のＰＨ値、イオン強度を調整する必要がある。緩衝
液のＰ Ｒ値、イオン強度は分院カラム４を面過後の溶
離液のＰ １１侑、イオン強度、流速に応じて調整する
のが好ましい。酵素反応によりドーパミンをノルアドレ
ナリンｔで変換す。
る（Ｃけ、前記酵素溶液をｎｆ素溶液槽５から定流１葎
ポンプ６で送給し、反応槽７で反応させるか、又は反応
４１７ Ｋかオーで前記酵素を固定化した担体が充填さ
れているカラムを荷置し、１１４Ｊ液によりＰ Ｈを調
整しカラム中で酵素反応を行なわせるのが好適でちる。
ポンプ６で送給し、反応槽７で反応させるか、又は反応
４１７ Ｋかオーで前記酵素を固定化した担体が充填さ
れているカラムを荷置し、１１４Ｊ液によりＰ Ｈを調
整しカラム中で酵素反応を行なわせるのが好適でちる。
反応槽７としては、例えば反応コイルをＦ？ｆｆしコイ
ルを流通するノルアドレナリン、アドレナリン、ドーパ
ミンに分鐸されたカテコールアミンと溶ｆｆＥ液との混
合成分に前記酵素溶液を供給し、ドー・１ミンと前記酵
素との選択的反応を生じさせ、Ｆ−パミンをノルアドレ
ナリンＱて変換する、 反応槽７又Ｃ５１カラムから出たノルアドレナリン、ア
ドレナリン、ドーパミンから変換さ１またノルアト１／
ナリンにテトラヒドロキシインドールを４ｉｑ ｊｊ！
ｊｌさｂで、これによりイ（１られた夫々の誘導体の蛍
光を検出する。テトラヒドロキシインドール誘導体Ｖｒ
：’を喚するには、７エリシアン化カリクム水溶液、ア
スコルビン酸水溶液、水酸化ナトリクム水溶液が供給さ
れる。これらの各水溶液ｒｔ、ノルアドレナリン、アド
レナリン、ドーノ（三ンから変換されたノルアドレナリ
ンの夫々と反応し、テトラヒドロキシインドール誘導体
を生成する。
ルを流通するノルアドレナリン、アドレナリン、ドーパ
ミンに分鐸されたカテコールアミンと溶ｆｆＥ液との混
合成分に前記酵素溶液を供給し、ドー・１ミンと前記酵
素との選択的反応を生じさせ、Ｆ−パミンをノルアドレ
ナリンＱて変換する、 反応槽７又Ｃ５１カラムから出たノルアドレナリン、ア
ドレナリン、ドーパミンから変換さ１またノルアト１／
ナリンにテトラヒドロキシインドールを４ｉｑ ｊｊ！
ｊｌさｂで、これによりイ（１られた夫々の誘導体の蛍
光を検出する。テトラヒドロキシインドール誘導体Ｖｒ
：’を喚するには、７エリシアン化カリクム水溶液、ア
スコルビン酸水溶液、水酸化ナトリクム水溶液が供給さ
れる。これらの各水溶液ｒｔ、ノルアドレナリン、アド
レナリン、ドーノ（三ンから変換されたノルアドレナリ
ンの夫々と反応し、テトラヒドロキシインドール誘導体
を生成する。
９ Ｈ７、Ｚ ＩＪシアン化カリクム水溶液槽、１０は
アスコルビン酸水溶液槽、１１ ｉ−１カセイソーダ水
溶液槽であり、これらの６槽から定流量３連ポンプ８に
より夫々の水溶液が反応槽１２に供給される。これらの
３液と反応してツノ【・アドレナリンのテトラヒドロキ
シインドール誘導体、アドレナリンのテトラヒドロキシ
インドール誘導体、ドーノ曵ミンからｐ１％されたノル
アドレナリンのテトラヒＦロギシインドール誘３ｒ１体
に変換される。
アスコルビン酸水溶液槽、１１ ｉ−１カセイソーダ水
溶液槽であり、これらの６槽から定流量３連ポンプ８に
より夫々の水溶液が反応槽１２に供給される。これらの
３液と反応してツノ【・アドレナリンのテトラヒドロキ
シインドール誘導体、アドレナリンのテトラヒドロキシ
インドール誘導体、ドーノ曵ミンからｐ１％されたノル
アドレナリンのテトラヒＦロギシインドール誘３ｒ１体
に変換される。
夫々の誘導体は蛍光性物質でちり、蛍光検出器１３によ
り検出することができる。１４ｔ：ｌ記録計であり、蛍
光検出部１３による検出れｆｆ呆は記録計で記録される
。そしてこの検出結果に基づいて、ノルアドレナリン、
アドレナリン、ドーパミンから変換されたノルアドレナ
リンのヒドロキシインドール誘導体の量を知ることがで
き、これＶＣより知り得た景から生体試料中（で元々含
有さね、でいたノルアドレナリン、アドレナリン。
り検出することができる。１４ｔ：ｌ記録計であり、蛍
光検出部１３による検出れｆｆ呆は記録計で記録される
。そしてこの検出結果に基づいて、ノルアドレナリン、
アドレナリン、ドーパミンから変換されたノルアドレナ
リンのヒドロキシインドール誘導体の量を知ることがで
き、これＶＣより知り得た景から生体試料中（で元々含
有さね、でいたノルアドレナリン、アドレナリン。
ドーパミンを定荀匂するこ七ができる。。
木発ｒｌｌｌによれば試１′＋１中ＶＣ微量にしか含有
されないカテコールアミンにおける、アドレナリン、ノ
ルアドレナリン、ド−パミンの３成分ヲ同時にかつ高感
度に測定することができる。又測定に際して−りの装置
で測定を行うこ七ができ、測定時間も短縮される等の利
点が存する。
されないカテコールアミンにおける、アドレナリン、ノ
ルアドレナリン、ド−パミンの３成分ヲ同時にかつ高感
度に測定することができる。又測定に際して−りの装置
で測定を行うこ七ができ、測定時間も短縮される等の利
点が存する。
実施例°１
健り１！人５検体の血液５ ｍｅを真空採血管に採取し
、３０分間室温放置後、３０００ ｒ、ｐ、ｍ、で５分
間遠心分離し、血＄ ２ ｍｇを得た。
、３０分間室温放置後、３０００ ｒ、ｐ、ｍ、で５分
間遠心分離し、血＄ ２ ｍｇを得た。
１（いでこの血清を活性アルミナによりｎｆｌ処理し、
液体クロマ；・グラフィーによるカテコールアミンの分
離を阻害する成分を除去し、カテコールアミンを含有す
る血清試料を得た。
液体クロマ；・グラフィーによるカテコールアミンの分
離を阻害する成分を除去し、カテコールアミンを含有す
る血清試料を得た。
溶ｌｌＩ液槽１から０．１モルリン酸緩衝液を定流量ポ
ンプ２でαＦ３ ｍｅ ７分の流速で供給し、試ｔ−１
注入器３からカテコールアミンを含有する血清試料を注
入し、前記リン酸緩衝液と混合した。分離用カラム４と
しては、ジビニルペンセ°ンーアクリル酸共重合体粒子
を充填した内径５ｒＴｌｆｆ、長さ３０ｍのステンレス
カラムを使用した。
ンプ２でαＦ３ ｍｅ ７分の流速で供給し、試ｔ−１
注入器３からカテコールアミンを含有する血清試料を注
入し、前記リン酸緩衝液と混合した。分離用カラム４と
しては、ジビニルペンセ°ンーアクリル酸共重合体粒子
を充填した内径５ｒＴｌｆｆ、長さ３０ｍのステンレス
カラムを使用した。
酵素溶液槽５から定流量ポンプ６により０．２ｎ、１７
分の流速で酵素溶液を供給した。酵素溶液の組成（・ｊ
ドーパミンβ−水駿化酵素５単位／２００ｍｅ１Ｐ Ｔ
ｌ ６．０の０．５モルリンｒｅｘ衝液、４０ミリモル
のＮ−エチルマレイミド、１重量％のカタラーゼ、１０
ミリモルの７マル酸ナトリウム、１０ミリモルのアスコ
ルビン酸ナトリウム、５μモルの硫酸銅から成るものと
した。酵素反応１＋”ｌ ７け０．５門の内径を有１．
．１０ｍの昆さを有ノーるコイルを使用し、３７℃で酵
素反応今生じさぜた。ｎソ素反応ｒよりドーパミンはツ
ルアトレーＪ゛リンＫ１７変換された。
分の流速で酵素溶液を供給した。酵素溶液の組成（・ｊ
ドーパミンβ−水駿化酵素５単位／２００ｍｅ１Ｐ Ｔ
ｌ ６．０の０．５モルリンｒｅｘ衝液、４０ミリモル
のＮ−エチルマレイミド、１重量％のカタラーゼ、１０
ミリモルの７マル酸ナトリウム、１０ミリモルのアスコ
ルビン酸ナトリウム、５μモルの硫酸銅から成るものと
した。酵素反応１＋”ｌ ７け０．５門の内径を有１．
．１０ｍの昆さを有ノーるコイルを使用し、３７℃で酵
素反応今生じさぜた。ｎソ素反応ｒよりドーパミンはツ
ルアトレーＪ゛リンＫ１７変換された。
ｒ９ｊ １１″’； ４’ｉｌ ７を出たノルアドレナ
リン、アドレナリン、Ｆ−パミリから変換されたノルア
ドレナリンに、７エリシアン化カリウム水溶液、アスコ
ルビン酸水溶液、水酸化す） ＩＪクム水溶液を夫々接
触さ亡て、夫々のテトラヒＭＴ３−＋レインｌ゛−ル脣
導体を生成させた、 フェリシアン化カリクム水溶液槽９け０．０５重量％の
フェリシアン化カリクム、０．２モルのリン酸−カリタ
ム、０．４モルのリン酸ヱカリウムを組成とし、アルコ
ルビン酸水溶液槽１０）よ０．゛２重量％の濃度Ｖｃｑ
整し、カセイソーダ水溶演目６規定の濃度に調整し、夫
々０．２ ｍｌ ／分の流速で定流量３連ポンプ８によ
り供給した１反応槽＋２の温Ｊ！￥′け６０℃に保持し
た。
リン、アドレナリン、Ｆ−パミリから変換されたノルア
ドレナリンに、７エリシアン化カリウム水溶液、アスコ
ルビン酸水溶液、水酸化す） ＩＪクム水溶液を夫々接
触さ亡て、夫々のテトラヒＭＴ３−＋レインｌ゛−ル脣
導体を生成させた、 フェリシアン化カリクム水溶液槽９け０．０５重量％の
フェリシアン化カリクム、０．２モルのリン酸−カリタ
ム、０．４モルのリン酸ヱカリウムを組成とし、アルコ
ルビン酸水溶液槽１０）よ０．゛２重量％の濃度Ｖｃｑ
整し、カセイソーダ水溶演目６規定の濃度に調整し、夫
々０．２ ｍｌ ／分の流速で定流量３連ポンプ８によ
り供給した１反応槽＋２の温Ｊ！￥′け６０℃に保持し
た。
コレらの各水ｆｉ÷液との反応（τよりノルアドレナリ
ン、アドレナリン、１°−パミリから変換されたノルア
ドレナリンの夫々のヒドロキシイントル訪導体が生成さ
７１（た。夫々の誘導体を蛍光検出Ｍ１３で検出し、記
録計１４により記録した。Ｐ、 、Ｐ２ 、Ｐ３け夫々
ノルアドレナリン、アドレナリン、ドーノ（ミリから変
換されたノルアドレナリンの、ｌｉ Ｊｐ体のピークで
ある。
ン、アドレナリン、１°−パミリから変換されたノルア
ドレナリンの夫々のヒドロキシイントル訪導体が生成さ
７１（た。夫々の誘導体を蛍光検出Ｍ１３で検出し、記
録計１４により記録した。Ｐ、 、Ｐ２ 、Ｐ３け夫々
ノルアドレナリン、アドレナリン、ドーノ（ミリから変
換されたノルアドレナリンの、ｌｉ Ｊｐ体のピークで
ある。
このようにし゛Ｃ記録計１４により記録された夫々の誘
導体・′）クロマトグラムを第２図に示ｔ。
導体・′）クロマトグラムを第２図に示ｔ。
このようにして得られた結果に基づいて、標ｒ（代カテ
コールアミンを用いた検陽線、及びプール面消に標準カ
テコールアミンを添加し、前処理操作を施してｔまた回
収率より５検体夫々のカテコールアミンの曲中濃度が表
１の通り得られた。
コールアミンを用いた検陽線、及びプール面消に標準カ
テコールアミンを添加し、前処理操作を施してｔまた回
収率より５検体夫々のカテコールアミンの曲中濃度が表
１の通り得られた。
以下余白
表 １
第１図は本発明方法における実施態様の一例を示す説明
図、第２図は実施例ｔておいて得られたクロマトグラム
を示している。 符号の説明 １溶ｍ液槽、 ２，６定流量ポンプ、 ３試料注入器
、４分離用カラム、５酵素溶液槽、７．１２反応槽、
８定流吸３連ポンプ、９フエリシアン化カリウム水溶
液槽、 １０アスコルビン酸水溶液槽、 １１カセイソーダ水
溶液槽、 １３蛍光検出器、１４．記録計特許出願人 稍水化学工業株式会社 代表者 胛 沼 基 利
図、第２図は実施例ｔておいて得られたクロマトグラム
を示している。 符号の説明 １溶ｍ液槽、 ２，６定流量ポンプ、 ３試料注入器
、４分離用カラム、５酵素溶液槽、７．１２反応槽、
８定流吸３連ポンプ、９フエリシアン化カリウム水溶
液槽、 １０アスコルビン酸水溶液槽、 １１カセイソーダ水
溶液槽、 １３蛍光検出器、１４．記録計特許出願人 稍水化学工業株式会社 代表者 胛 沼 基 利
Claims (1)
- Ｌ カテコールアミンを含有する試料液を液体クロマト
グラフィーにおける分離カラムに導入して、ノルアドレ
ナリン、アドレナリン、Ｆ−パミンの３成分を分離し、
これにドーパミン−β−水酸化酵素を作用させてドーノ
ベミンを選択的にノルアドレナリンに変換し、次いでノ
ルアドレナリン、アドレナリン、ドー／ζミンから変換
されたノルアドレナリンにテトラヒドロキシインドール
を接触させ、これにより得られた夫々の誘導体の蛍光を
検出し、これに基づいてノルアドレナリン、アドレナリ
ン及びドーパミンの３成分を定量することを特徴とする
、カテコールアミンの定に法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14955282A JPS5938651A (ja) | 1982-08-27 | 1982-08-27 | カテコ−ルアミンの定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14955282A JPS5938651A (ja) | 1982-08-27 | 1982-08-27 | カテコ−ルアミンの定量法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5938651A true JPS5938651A (ja) | 1984-03-02 |
| JPH022600B2 JPH022600B2 (ja) | 1990-01-18 |
Family
ID=15477652
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14955282A Granted JPS5938651A (ja) | 1982-08-27 | 1982-08-27 | カテコ−ルアミンの定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5938651A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3511356A1 (de) * | 1984-03-29 | 1985-10-24 | Toyo Soda Manufacturing Co., Ltd., Shinnanyo, Yamaguchi | Verfahren zur fluorometrischen analyse von catecholaminen |
| JPH03134560A (ja) * | 1989-10-20 | 1991-06-07 | Hitachi Ltd | 液体クロマトグラフ分析計およびプレラベル反応処理方法 |
| JPH0666778A (ja) * | 1991-08-29 | 1994-03-11 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 高精度分析法 |
| US6320702B1 (en) | 1999-11-24 | 2001-11-20 | Nikon Corporation | Afocal zoom lens, and microscope having the lens |
| US7072119B2 (en) | 2003-09-17 | 2006-07-04 | Olympus Corporation | Afocal zoom lens for microscopes |
-
1982
- 1982-08-27 JP JP14955282A patent/JPS5938651A/ja active Granted
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3511356A1 (de) * | 1984-03-29 | 1985-10-24 | Toyo Soda Manufacturing Co., Ltd., Shinnanyo, Yamaguchi | Verfahren zur fluorometrischen analyse von catecholaminen |
| JPH03134560A (ja) * | 1989-10-20 | 1991-06-07 | Hitachi Ltd | 液体クロマトグラフ分析計およびプレラベル反応処理方法 |
| JPH0666778A (ja) * | 1991-08-29 | 1994-03-11 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 高精度分析法 |
| US6320702B1 (en) | 1999-11-24 | 2001-11-20 | Nikon Corporation | Afocal zoom lens, and microscope having the lens |
| US7072119B2 (en) | 2003-09-17 | 2006-07-04 | Olympus Corporation | Afocal zoom lens for microscopes |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH022600B2 (ja) | 1990-01-18 |
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