JPH0469997B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0469997B2 JPH0469997B2 JP1321246A JP32124689A JPH0469997B2 JP H0469997 B2 JPH0469997 B2 JP H0469997B2 JP 1321246 A JP1321246 A JP 1321246A JP 32124689 A JP32124689 A JP 32124689A JP H0469997 B2 JPH0469997 B2 JP H0469997B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- glycerol
- biomass
- propanediol
- hydrogen donor
- bacterial strain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/18—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic polyhydric
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は水素供与体として補基質
（cosubstrate）を添加し、生成したプロパンジオ
ールを分離する、適した細菌株の増殖培地中でグ
リセロールから１，３−プロパンジオールを微生
物学的に生成する方法に関する。
（cosubstrate）を添加し、生成したプロパンジオ
ールを分離する、適した細菌株の増殖培地中でグ
リセロールから１，３−プロパンジオールを微生
物学的に生成する方法に関する。
グリセロールから１，３−プロパンジオール又
はトリメチレングリコール（TMG）を生成する
方法は公知である。この方法を行なうときには本
質的に下記の点を考慮に入れなければならない。
グリセロールを１，３−プロパンジオールに変換
できる細菌株は例えばクレブシエラ
（Klebsiella）〔ジヤーナル・オブ・バクテリオロ
ジー（J.Bacteriol.）（1982年）第149巻第413乃至
419頁参照〕、シトロバクター（Citrobacter）〔ジ
ヤーナル・オブ・バクテリオロジー（1944年）第
39巻第409乃至415頁参照〕、クロストリデイウム
（Clostridium）〔アプライド・アンド・エンバイ
ロメンタル・マイクロバイオロジー（Appl.
Environ.Microbiol.（1987年）第53巻第639乃至
643頁参照〕、イリオバクター（Ilyobacter）〔ア
ーカイブス・オブ・マイクロバイオロジー
（Arch.Microbiol.）（1984年）第140巻第139乃至
146頁参照〕及びラクトバチルス〔システマチツ
ク・アンド・アプライド・マイクロバイオロジー
（System.Appl.Microbiol.）（1984年）第５巻169
乃至178頁参照〕属に見出される。さらに必然的
又は任意に発酵をおこさせる物質も発酵生成物と
しての１，３−プロパンジオールを生成すること
を無視することはできない。シトロバクター属の
中ではシトロバクター・フリユンジイ（C.
freundii）は１，３−プロパンジオール生成体と
して特によく知られている。数種の菌株（例えば
DSM30039、30040及び30047）は入手可能であ
る。
はトリメチレングリコール（TMG）を生成する
方法は公知である。この方法を行なうときには本
質的に下記の点を考慮に入れなければならない。
グリセロールを１，３−プロパンジオールに変換
できる細菌株は例えばクレブシエラ
（Klebsiella）〔ジヤーナル・オブ・バクテリオロ
ジー（J.Bacteriol.）（1982年）第149巻第413乃至
419頁参照〕、シトロバクター（Citrobacter）〔ジ
ヤーナル・オブ・バクテリオロジー（1944年）第
39巻第409乃至415頁参照〕、クロストリデイウム
（Clostridium）〔アプライド・アンド・エンバイ
ロメンタル・マイクロバイオロジー（Appl.
Environ.Microbiol.（1987年）第53巻第639乃至
643頁参照〕、イリオバクター（Ilyobacter）〔ア
ーカイブス・オブ・マイクロバイオロジー
（Arch.Microbiol.）（1984年）第140巻第139乃至
146頁参照〕及びラクトバチルス〔システマチツ
ク・アンド・アプライド・マイクロバイオロジー
（System.Appl.Microbiol.）（1984年）第５巻169
乃至178頁参照〕属に見出される。さらに必然的
又は任意に発酵をおこさせる物質も発酵生成物と
しての１，３−プロパンジオールを生成すること
を無視することはできない。シトロバクター属の
中ではシトロバクター・フリユンジイ（C.
freundii）は１，３−プロパンジオール生成体と
して特によく知られている。数種の菌株（例えば
DSM30039、30040及び30047）は入手可能であ
る。
用いられる細菌株によつて、増殖及び１，３−
プロパンジオールの附随生成のためにグリセロー
ルを有する無機培地又は、グリセロールを有する
複合培地を用いることが可能である。PH及び温度
のような周囲条件も又、用いる細菌株による。グ
リセロールを１，３−プロパンジオールに変換す
る酵素は嫌気条件下でのみ生成されるので常に嫌
気増殖条件を与えなければならない。関与する酵
素、グリセロールデヒドラターゼは補酵素B12を
含有するので、細菌に適当なコバルト鉄を確実に
供給しなければならない〔アーカイブス・オブ・
バイオケミストリー・アンド・バイオフイジツク
ス（Arch.Biochem.Biophys.）（1962年）第97巻、
第538乃至543頁参照〕。
プロパンジオールの附随生成のためにグリセロー
ルを有する無機培地又は、グリセロールを有する
複合培地を用いることが可能である。PH及び温度
のような周囲条件も又、用いる細菌株による。グ
リセロールを１，３−プロパンジオールに変換す
る酵素は嫌気条件下でのみ生成されるので常に嫌
気増殖条件を与えなければならない。関与する酵
素、グリセロールデヒドラターゼは補酵素B12を
含有するので、細菌に適当なコバルト鉄を確実に
供給しなければならない〔アーカイブス・オブ・
バイオケミストリー・アンド・バイオフイジツク
ス（Arch.Biochem.Biophys.）（1962年）第97巻、
第538乃至543頁参照〕。
前記の細菌株を用いると、１，３−プロパンジ
オールを回分式で又は連続的に生成できる。種に
よつてグリセロールの回分式嫌気発酵での１，３
−プロパンジオールの収率は異なる。ラクトバチ
ルス・ブフネリ（Lactobacillus buchneri）では
78％、クロストリジウム・ブチリカム
（Clostridium butylicum）では61％、イリオバ
クター・ポリトロパス（Ilyobacter polytropus）
では40％、シトロバクター・フリユンジイ
（Citrobacter freundii）では50％である。ラクト
バチルス属に関しては、グリセロールのみでな
く、グリセロールとグリコースの２：１混合物が
発酵されることに注意すべきである。細菌種によ
つて、グリセロールの発酵中に主として酢酸塩、
酪酸塩、乳酸塩、ギ酸塩、コハク酸塩、エタノー
ル、ブタノール及びヒドロキシプロピオン酸塩
（イリオバクター・ポリトロパスの場合）の異な
る副生物のスペクトルが現われる。
オールを回分式で又は連続的に生成できる。種に
よつてグリセロールの回分式嫌気発酵での１，３
−プロパンジオールの収率は異なる。ラクトバチ
ルス・ブフネリ（Lactobacillus buchneri）では
78％、クロストリジウム・ブチリカム
（Clostridium butylicum）では61％、イリオバ
クター・ポリトロパス（Ilyobacter polytropus）
では40％、シトロバクター・フリユンジイ
（Citrobacter freundii）では50％である。ラクト
バチルス属に関しては、グリセロールのみでな
く、グリセロールとグリコースの２：１混合物が
発酵されることに注意すべきである。細菌種によ
つて、グリセロールの発酵中に主として酢酸塩、
酪酸塩、乳酸塩、ギ酸塩、コハク酸塩、エタノー
ル、ブタノール及びヒドロキシプロピオン酸塩
（イリオバクター・ポリトロパスの場合）の異な
る副生物のスペクトルが現われる。
前記の発酵は回分式法で行なう培養に関する
が、1987年に、１，３−プロパンジオールが生成
する、グリセロールの連続的発酵に関する結果が
初めて発表された〔アプライド・アンド・エンバ
イロメンタル・マイクロバイオロジー（1987年）
第53巻第639乃至643頁参照〕。発酵は、必然的に
発酵をおこさせる物質としてクロストリジウム・
ブチリカムB593を用いて行なつた。3.8％のグリ
セロールを化学的に特定した培地に添加し、その
97％が細菌と反応した。培地に0.2％酵母エキス
を添加することも必要だつた。気相において酵素
がなく二酸化炭素があり、反応器中での細菌の滞
留時間は10時間であり温度は35℃であつた。連続
的発酵はHPLC及びGCで分析して下記の生成物
スペクトルを与えた： １，３−プロパンジオール 61％、 酢酸塩 6.6％、酪酸塩 1.6％、 乳酸塩 0.9％、ブタノール 0.6％、 エタノール 0.6％ 上記記載から細菌を用いて副生物なしに１，３
−プロパンジオールを合成することは不可能のよ
うに考えられる。なぜなら、グリセロールの１，
３−プロパンジオールへの還元が生成する水素を
除去するのに用いられる一方、グリセロールの一
部は、エネルギーを得るために酸化されなくては
ならないからである。PH値が6.5から4.9に低下す
ると細菌の増殖と１，３−プロパンジオールの生
成は減少する。１，３−プロパンジオールの合成
中の中間体は３−ヒドロキシプロピオンアルデヒ
ドであり、その生成は又、ある発酵試験の目的で
もあつた。〔アプライド・アンド・エンバイロメ
ンタル・マイクロバイオロジー（1983年）第46巻
第１号、第62乃至67頁参照。〕クレブシエラ・ニ
ユーモニアエ（Klebsiella pneumoniae）を用い
るグリセロールの嫌気発酵の場合、発酵反応の速
さはセミカルバジド塩酸塩の添加により変わる。
３−ヒドロキシプロピオンアルデヒドの生成は次
の１，３−プロパンジオールへの還元より非常に
速く起こり、結果として３−ヒドロキシプロピオ
ンアルデヒドの蓄積をもたらした。30g／のグ
リセロール溶液の場合13.1g／の３−ヒドロキ
シプロピオンアルデヒドの収量を得た。本発明の
課題はグリセロールから１，３−プロパンジオー
ルを高収率でしかし実質的に環境的に有害な副生
物を除去しながら得る単純で経済的で迅速にそし
て連続的に生成するように上記の方法を改良する
ことである。
が、1987年に、１，３−プロパンジオールが生成
する、グリセロールの連続的発酵に関する結果が
初めて発表された〔アプライド・アンド・エンバ
イロメンタル・マイクロバイオロジー（1987年）
第53巻第639乃至643頁参照〕。発酵は、必然的に
発酵をおこさせる物質としてクロストリジウム・
ブチリカムB593を用いて行なつた。3.8％のグリ
セロールを化学的に特定した培地に添加し、その
97％が細菌と反応した。培地に0.2％酵母エキス
を添加することも必要だつた。気相において酵素
がなく二酸化炭素があり、反応器中での細菌の滞
留時間は10時間であり温度は35℃であつた。連続
的発酵はHPLC及びGCで分析して下記の生成物
スペクトルを与えた： １，３−プロパンジオール 61％、 酢酸塩 6.6％、酪酸塩 1.6％、 乳酸塩 0.9％、ブタノール 0.6％、 エタノール 0.6％ 上記記載から細菌を用いて副生物なしに１，３
−プロパンジオールを合成することは不可能のよ
うに考えられる。なぜなら、グリセロールの１，
３−プロパンジオールへの還元が生成する水素を
除去するのに用いられる一方、グリセロールの一
部は、エネルギーを得るために酸化されなくては
ならないからである。PH値が6.5から4.9に低下す
ると細菌の増殖と１，３−プロパンジオールの生
成は減少する。１，３−プロパンジオールの合成
中の中間体は３−ヒドロキシプロピオンアルデヒ
ドであり、その生成は又、ある発酵試験の目的で
もあつた。〔アプライド・アンド・エンバイロメ
ンタル・マイクロバイオロジー（1983年）第46巻
第１号、第62乃至67頁参照。〕クレブシエラ・ニ
ユーモニアエ（Klebsiella pneumoniae）を用い
るグリセロールの嫌気発酵の場合、発酵反応の速
さはセミカルバジド塩酸塩の添加により変わる。
３−ヒドロキシプロピオンアルデヒドの生成は次
の１，３−プロパンジオールへの還元より非常に
速く起こり、結果として３−ヒドロキシプロピオ
ンアルデヒドの蓄積をもたらした。30g／のグ
リセロール溶液の場合13.1g／の３−ヒドロキ
シプロピオンアルデヒドの収量を得た。本発明の
課題はグリセロールから１，３−プロパンジオー
ルを高収率でしかし実質的に環境的に有害な副生
物を除去しながら得る単純で経済的で迅速にそし
て連続的に生成するように上記の方法を改良する
ことである。
本発明により、この課題は、ａ）グリセロール
を供給し、必要なら、定常発育期（stationary
growth phase）になるまで発育期（growth
phase）の水素供与体を実質的に除去して、選択
した細菌株からバイオマスを生成し、ｂ）１，３
−プロパンジオールを増加生成させるために、さ
らにグリセロール及びバイオマスに適合した水素
供与体を相当する静置細胞懸濁液に添加すること
により解決された。
を供給し、必要なら、定常発育期（stationary
growth phase）になるまで発育期（growth
phase）の水素供与体を実質的に除去して、選択
した細菌株からバイオマスを生成し、ｂ）１，３
−プロパンジオールを増加生成させるために、さ
らにグリセロール及びバイオマスに適合した水素
供与体を相当する静置細胞懸濁液に添加すること
により解決された。
このように本発明の最も重要な点はまず工程
ａ）において定常発育期又は細胞懸濁液が得られ
るまでバイオマスが生成されることである。本発
明の範囲において有用な細菌株の殆どは前記工程
ａ）において水素供与体を実質的に除去すること
が必要である。このことは、シトロバクター・フ
リユンジイ、クレブシエラ・ニユーモニアエ、ク
ロストリジウム・オートブチリカム及びクロスト
リジウム・ブチリカムに特に適用される。しかし
発育期に水素供与体の存在下増殖する、そしてあ
るいは水素供与体を必要とさえする、例えば、ラ
クトバチルス・ブレビス（Lactobacillus
brevis）及びラクトバチルス・ブフネリのような
数種の細菌株が存在する。しかし本発明方法に用
いられ得る細菌株の殆どの増殖は水素供与体の存
在により妨害されるのでそのような場合は水素供
与体を実質的に除くべきである。このことは又、
グリセロール含有出発物質の質的評価に関しても
注意すべきことである。このように、グリセロー
ル出発物質がすでにかなりの、グルコースのよう
な糖フラクシヨンを含有していたならこのフラク
シヨンは工程ａ）を妨害する原因となり得る。グ
リセロール出発物質に関してはこの他には本発明
方法における重要な制限はない。このようにグリ
セロール出発物質は高圧分解からのグリセロール
分解水、石けん分解からのグリセロール水又は例
えば魚油、ココヤシ油又はパーム核油からの油脂
のメタノール分解からのグリセロール水であり得
る。
ａ）において定常発育期又は細胞懸濁液が得られ
るまでバイオマスが生成されることである。本発
明の範囲において有用な細菌株の殆どは前記工程
ａ）において水素供与体を実質的に除去すること
が必要である。このことは、シトロバクター・フ
リユンジイ、クレブシエラ・ニユーモニアエ、ク
ロストリジウム・オートブチリカム及びクロスト
リジウム・ブチリカムに特に適用される。しかし
発育期に水素供与体の存在下増殖する、そしてあ
るいは水素供与体を必要とさえする、例えば、ラ
クトバチルス・ブレビス（Lactobacillus
brevis）及びラクトバチルス・ブフネリのような
数種の細菌株が存在する。しかし本発明方法に用
いられ得る細菌株の殆どの増殖は水素供与体の存
在により妨害されるのでそのような場合は水素供
与体を実質的に除くべきである。このことは又、
グリセロール含有出発物質の質的評価に関しても
注意すべきことである。このように、グリセロー
ル出発物質がすでにかなりの、グルコースのよう
な糖フラクシヨンを含有していたならこのフラク
シヨンは工程ａ）を妨害する原因となり得る。グ
リセロール出発物質に関してはこの他には本発明
方法における重要な制限はない。このようにグリ
セロール出発物質は高圧分解からのグリセロール
分解水、石けん分解からのグリセロール水又は例
えば魚油、ココヤシ油又はパーム核油からの油脂
のメタノール分解からのグリセロール水であり得
る。
上記の説明は適した細菌株の選択にも該当す
る。シトロバクター・フリユンジイのようなシト
ロバクター属の代表的細菌が特に有利に用いられ
る。細菌株DSM30039、30040及び30041は特に適
している。
る。シトロバクター・フリユンジイのようなシト
ロバクター属の代表的細菌が特に有利に用いられ
る。細菌株DSM30039、30040及び30041は特に適
している。
工程ａ）において下記の工程を用いるのが望ま
しい：シトロバクター・フリユンジイDSM30040
に関する記載は相当する注意を除いて他の細菌に
も適用される。無機溶液を当業者に公知の方法で
調製する。特別な特徴として特に高濃度の塩化コ
バルト（250乃至550μgのCoCl2／）のようなコ
バルト塩、及び増殖制限窒素源として特に硫酸ア
ンモニウムのようなアンモニウム塩を含有する。
所望のバイオマス濃度により硫酸アンモニウム濃
度は約0.4乃至1.5g／となり得る。グリセロー
ル（例えば約0.3モル／）添加及びDSM30040
株の前培養の後にインキユベーシヨンを約37℃で
嫌気条件下で行なう。約12乃至20時間（0.3モ
ル／で）後、増殖培養は工程ｂ）に必要な定常
期に入る。
しい：シトロバクター・フリユンジイDSM30040
に関する記載は相当する注意を除いて他の細菌に
も適用される。無機溶液を当業者に公知の方法で
調製する。特別な特徴として特に高濃度の塩化コ
バルト（250乃至550μgのCoCl2／）のようなコ
バルト塩、及び増殖制限窒素源として特に硫酸ア
ンモニウムのようなアンモニウム塩を含有する。
所望のバイオマス濃度により硫酸アンモニウム濃
度は約0.4乃至1.5g／となり得る。グリセロー
ル（例えば約0.3モル／）添加及びDSM30040
株の前培養の後にインキユベーシヨンを約37℃で
嫌気条件下で行なう。約12乃至20時間（0.3モ
ル／で）後、増殖培養は工程ｂ）に必要な定常
期に入る。
工程ａ）におけるグリセロールの濃度は臨界的
ではない。グリセロール濃度は広範囲−例えば
0.001乃至１モル／、この範囲を超えることも
可能であるが−であり得る。約0.1乃至0.4モル／
が好ましく、特には約0.3モル／である。
ではない。グリセロール濃度は広範囲−例えば
0.001乃至１モル／、この範囲を超えることも
可能であるが−であり得る。約0.1乃至0.4モル／
が好ましく、特には約0.3モル／である。
工程ａ）を嫌気的又は好気的のいずれで行なう
かは臨界的ではない。グリセロールの１，３−プ
ロパンジオールへの望ましい変換が最適の形態で
行なわれるように嫌気的に行なうのが好ましい。
工程ａ）により所望のバイオマス量を生成させた
とき、増殖を終らせるために処置を講じる。これ
は、好ましくは、増殖の終りをリン酸塩又は窒素
源を一定量添加することにより調節することで行
なう。硫酸アンモニウムのようなアンモニウム塩
は特に有効であることが認められた。
かは臨界的ではない。グリセロールの１，３−プ
ロパンジオールへの望ましい変換が最適の形態で
行なわれるように嫌気的に行なうのが好ましい。
工程ａ）により所望のバイオマス量を生成させた
とき、増殖を終らせるために処置を講じる。これ
は、好ましくは、増殖の終りをリン酸塩又は窒素
源を一定量添加することにより調節することで行
なう。硫酸アンモニウムのようなアンモニウム塩
は特に有効であることが認められた。
本発明方法は、複合培地中及び無機培地中の両
方で行なわれる。無機培地の方が安く、扱い易
く、本発明方法の終りに廃棄し易いので好まし
い。無機培地は無機塩及び付加的にグリセロー
ル、場合によつては還元剤としてシステインを含
有するのみの培地を意味する。複合培地は酵母エ
キスを好ましくは約１％量含有することにより区
別される。
方で行なわれる。無機培地の方が安く、扱い易
く、本発明方法の終りに廃棄し易いので好まし
い。無機培地は無機塩及び付加的にグリセロー
ル、場合によつては還元剤としてシステインを含
有するのみの培地を意味する。複合培地は酵母エ
キスを好ましくは約１％量含有することにより区
別される。
工程ａ）で得られたバイオマスは直接、工程
ｂ）に供給され得る。遠心分離によりバイオマス
を濃縮するか又はバイオマスを固定することは有
利である。固定は例えばアルギン酸カルシウム、
カラギーナン又はポリウレタンのような種々の方
法で行なわれる。固定は、容易に入手可能な市販
のアルギン酸カルシウム〔プロタナル
（Protanal）−LF−20／60〕で行なうのが好まし
い。バイオマスの固定形を、例えば、処理される
グリセロール溶液を連続的に供給するカラムに充
填し得る。これにより連続的方法の実施が特に有
利になり、バイオマスは何週間も使用でき、グリ
セロールから１，３−プロパンジオールを得るの
に有効性を減じない。42日より長い間、バイオマ
スが活性で効力が失われないということが試験に
より確認された。
ｂ）に供給され得る。遠心分離によりバイオマス
を濃縮するか又はバイオマスを固定することは有
利である。固定は例えばアルギン酸カルシウム、
カラギーナン又はポリウレタンのような種々の方
法で行なわれる。固定は、容易に入手可能な市販
のアルギン酸カルシウム〔プロタナル
（Protanal）−LF−20／60〕で行なうのが好まし
い。バイオマスの固定形を、例えば、処理される
グリセロール溶液を連続的に供給するカラムに充
填し得る。これにより連続的方法の実施が特に有
利になり、バイオマスは何週間も使用でき、グリ
セロールから１，３−プロパンジオールを得るの
に有効性を減じない。42日より長い間、バイオマ
スが活性で効力が失われないということが試験に
より確認された。
工程ｂ）では、微生物を発育させるのにグリセ
ロールは必須ではなく、その代わりにグリセロー
ル／水素供与体の組み合わせを用いるべきであ
る。水素供与体の選択に関して重要な制限はな
い。当業者は、彼の知識及び選択した細菌株に基
づいて水素供与体を選択する。一般に水素供与体
は、単糖類及び二糖類、特にフルクトース及びグ
ルコースにより構成され得る。グルコースは、細
菌株としてのシトロバクター・フリユンジイと組
み合わせることにおいて特に有利であることがわ
かつた。
ロールは必須ではなく、その代わりにグリセロー
ル／水素供与体の組み合わせを用いるべきであ
る。水素供与体の選択に関して重要な制限はな
い。当業者は、彼の知識及び選択した細菌株に基
づいて水素供与体を選択する。一般に水素供与体
は、単糖類及び二糖類、特にフルクトース及びグ
ルコースにより構成され得る。グルコースは、細
菌株としてのシトロバクター・フリユンジイと組
み合わせることにおいて特に有利であることがわ
かつた。
工程ｂ）において時期早尚の阻害を受けないた
めに、PH値の調節が必要である。PH値は約5.5乃
至8.5の範囲であるべきである。約6.5乃至7.5、特
に約７が好ましい。このPH値は、グリセロールか
ら１，３−プロパンジオールの生成に最適な生物
学的変換条件をもたらす。
めに、PH値の調節が必要である。PH値は約5.5乃
至8.5の範囲であるべきである。約6.5乃至7.5、特
に約７が好ましい。このPH値は、グリセロールか
ら１，３−プロパンジオールの生成に最適な生物
学的変換条件をもたらす。
水素供与体及びグリセロールの量的適合は本発
明方法をさらに最適にする。この厳密な数値は水
素供与体の性質及び選択した細菌株の性質によ
る。一般的なガイドラインは与えられない。細菌
株シトロバクター・フリユンジイ及び、グルコー
スの形態の水素供給体を好ましく用いる場合は、
グルコース及びグリセロールの好ましいモル比は
約１：７乃至１：８である。グルコース及びグリ
セロールのモル比は一般に約１：１乃至１：25、
特に１：５乃至１：10であるのが実際的に有利で
ある。
明方法をさらに最適にする。この厳密な数値は水
素供与体の性質及び選択した細菌株の性質によ
る。一般的なガイドラインは与えられない。細菌
株シトロバクター・フリユンジイ及び、グルコー
スの形態の水素供給体を好ましく用いる場合は、
グルコース及びグリセロールの好ましいモル比は
約１：７乃至１：８である。グルコース及びグリ
セロールのモル比は一般に約１：１乃至１：25、
特に１：５乃至１：10であるのが実際的に有利で
ある。
工程ｂ）も又、好ましくは無機培地で行なわれ
る。本発明方法を最適に行なうために、工程ｂ）
の培地中のグリセロール濃度が一定の役割を果た
す。過剰のグリセロール濃度は関与する酵素系を
阻害する。不適当なグリセロール濃度は望ましく
ない高価な処理コストをもたらす。約0.2乃至1.5
モルのグリセロール溶液、特に約１モルのグリセ
ロール溶液が工程ｂ）で扱われる培地に最適であ
る。
る。本発明方法を最適に行なうために、工程ｂ）
の培地中のグリセロール濃度が一定の役割を果た
す。過剰のグリセロール濃度は関与する酵素系を
阻害する。不適当なグリセロール濃度は望ましく
ない高価な処理コストをもたらす。約0.2乃至1.5
モルのグリセロール溶液、特に約１モルのグリセ
ロール溶液が工程ｂ）で扱われる培地に最適であ
る。
本発明はさらに、その本質を変えずにそれ自体
公知の変形を行なうことができる。以下に例示す
る。
公知の変形を行なうことができる。以下に例示す
る。
工程ａ）：各成分の濃度に関しての無機培地の
変形；グリセロールの濃度、それにより供給源に
よる不純物が性質及び濃度に関して広く異なり得
る；撹拌による培地の混合、吸入排出又は発泡の
通しでの性質；還元剤及び不活性ガスによる嫌気
条件の具備。
変形；グリセロールの濃度、それにより供給源に
よる不純物が性質及び濃度に関して広く異なり得
る；撹拌による培地の混合、吸入排出又は発泡の
通しでの性質；還元剤及び不活性ガスによる嫌気
条件の具備。
工程ｂ）：バイオマスの濃度；操作PH及び温
度；再供給するグリセロールの性質；水素供給体
の性質及び濃度。
度；再供給するグリセロールの性質；水素供給体
の性質及び濃度。
本発明方法は、従来の公知の方法と比較して多
くの利点を有する。２工程方法、すなわち、定常
期への移行を有する、第１の工程中の発育期及び
次の生物学的変換期の実施の結果、１，３−プロ
パンジオールの収率が90％より多く増加し得る。
第１の工程で生成するバイオマスを固定化し、カ
ラムに導入すると、このことが長期の連続的実
施、例えば40日より長い実施を可能にする。グリ
セロールは特に１，３−プロパンジオールに変換
され、副生物は問題にならない少量生成する。あ
る場合には副生物は酢酸塩及び乳酸塩であり、そ
れらは容易に除去でき、環境に有害なものではな
い。工程ａ）において安い栄養培地を用いること
も可能である。両工程で用いる培地において比較
的高濃度のグリセロールが選ばれ得る。出発物質
のグリセロールの特別な純度を守る必要はない。
事実、微生物を妨害する副生物を含有しなければ
工業グリセロールを用いてもよい（工業グリセロ
ールは、粗グリセロール）。工業グリセロールが
工程ａ）には適さない場合があるが、その場合、
より純粋なグリセロール出発物質を用いなければ
ならないが、第２の工程では純度のより低いグリ
セロールが使用できる。定常期の形成及び第２の
工程に必要なバイオマスの生成には、第２の工程
の場合より比較的少ないグリセロールしか必要で
ないので、このことは重要な利点である。このこ
とは本方法のより順応性のある実施を可能にす
る。
くの利点を有する。２工程方法、すなわち、定常
期への移行を有する、第１の工程中の発育期及び
次の生物学的変換期の実施の結果、１，３−プロ
パンジオールの収率が90％より多く増加し得る。
第１の工程で生成するバイオマスを固定化し、カ
ラムに導入すると、このことが長期の連続的実
施、例えば40日より長い実施を可能にする。グリ
セロールは特に１，３−プロパンジオールに変換
され、副生物は問題にならない少量生成する。あ
る場合には副生物は酢酸塩及び乳酸塩であり、そ
れらは容易に除去でき、環境に有害なものではな
い。工程ａ）において安い栄養培地を用いること
も可能である。両工程で用いる培地において比較
的高濃度のグリセロールが選ばれ得る。出発物質
のグリセロールの特別な純度を守る必要はない。
事実、微生物を妨害する副生物を含有しなければ
工業グリセロールを用いてもよい（工業グリセロ
ールは、粗グリセロール）。工業グリセロールが
工程ａ）には適さない場合があるが、その場合、
より純粋なグリセロール出発物質を用いなければ
ならないが、第２の工程では純度のより低いグリ
セロールが使用できる。定常期の形成及び第２の
工程に必要なバイオマスの生成には、第２の工程
の場合より比較的少ないグリセロールしか必要で
ないので、このことは重要な利点である。このこ
とは本方法のより順応性のある実施を可能にす
る。
本発明を実施例により、より詳細に説明する。
実施例
工程順序ａ）の進行を第１図に示す。シトロバ
クター・フリユンジイをアンモニウムを制限して
下記の無機培地中で増殖させる： KH2PO4、6g／；K2HPO4・3H2O、14g／
；（NH4）2SO4、0.4g／；MgSO4・7H2O、
0.2g／；CaCl2、0.1g／；システイン・HCl、
0.1g／；微量元素溶液〔１溶液は5gEDTA
（ニナトリウム塩）〕、0.3g H3BO4・4H2O、0.03g
MnCl2・4H2O、0.02g CoCl2・6H2O、
2gFeSO4・7H2O、0.1g ZnSO4・7H2O、0.03g
NaMoO4・2H2O、0.02g NiCl2・6H2O及び0.01g
CuCl2・2H2Oを含有する。）〔アーカイブス・オ
ブ・マイクロバイオロジー（1966年）第55巻第
245乃至256頁参照〕、1ml／；CoCl2、550μg／
、グリセロール880ミリモル／。接種（20ml
前培養／1.2主培養）後、37℃でインキユベー
シヨンを行ない、PH値を7.5に一定に保つた。20
時間後、培養は定常期に移行し、そこでグリセロ
ールはさらに反応がおこり、１，３−プロパンジ
オールになる。工程ｂ）のシトロバクター・フリ
ユンジイの細胞懸濁液により、水素供給体として
グルコースの存在下、グリセロールの１，３−プ
ロパンジオールへの反応を第２図に示す。この場
合、細胞を３mg乾燥重量／mlの濃度でPH7.5のリ
ン酸カリウム緩衝液中に懸濁した。グリセロール
240ミリモル／及びグルコース42ミリモル／
を添加後、酸素の不存在下（窒素雰囲気下）、37
℃でインキユベーシヨンを行なつた。２規定の水
酸化カリウムでの滴定によりPH値を7.5に保つた。
211ミリモルのグリセロールから191ミリモルの
１，３−プロパンジオールが生成され、すなわち
モル基準で91％、重量基準で75％（最大可能値83
％）の収率であつた。
クター・フリユンジイをアンモニウムを制限して
下記の無機培地中で増殖させる： KH2PO4、6g／；K2HPO4・3H2O、14g／
；（NH4）2SO4、0.4g／；MgSO4・7H2O、
0.2g／；CaCl2、0.1g／；システイン・HCl、
0.1g／；微量元素溶液〔１溶液は5gEDTA
（ニナトリウム塩）〕、0.3g H3BO4・4H2O、0.03g
MnCl2・4H2O、0.02g CoCl2・6H2O、
2gFeSO4・7H2O、0.1g ZnSO4・7H2O、0.03g
NaMoO4・2H2O、0.02g NiCl2・6H2O及び0.01g
CuCl2・2H2Oを含有する。）〔アーカイブス・オ
ブ・マイクロバイオロジー（1966年）第55巻第
245乃至256頁参照〕、1ml／；CoCl2、550μg／
、グリセロール880ミリモル／。接種（20ml
前培養／1.2主培養）後、37℃でインキユベー
シヨンを行ない、PH値を7.5に一定に保つた。20
時間後、培養は定常期に移行し、そこでグリセロ
ールはさらに反応がおこり、１，３−プロパンジ
オールになる。工程ｂ）のシトロバクター・フリ
ユンジイの細胞懸濁液により、水素供給体として
グルコースの存在下、グリセロールの１，３−プ
ロパンジオールへの反応を第２図に示す。この場
合、細胞を３mg乾燥重量／mlの濃度でPH7.5のリ
ン酸カリウム緩衝液中に懸濁した。グリセロール
240ミリモル／及びグルコース42ミリモル／
を添加後、酸素の不存在下（窒素雰囲気下）、37
℃でインキユベーシヨンを行なつた。２規定の水
酸化カリウムでの滴定によりPH値を7.5に保つた。
211ミリモルのグリセロールから191ミリモルの
１，３−プロパンジオールが生成され、すなわち
モル基準で91％、重量基準で75％（最大可能値83
％）の収率であつた。
第１図は２度の増加濃度のCo2+の存在下での、
アンモニウムを制限した静置培養におけるグリセ
ロールからTMG生成の経過を示す（0.04％硫酸
アンモニウム、880ミリモルのグリセロール及び
550μgのCo2+／を有する無機培地における1.2
培養でPHを7.5に一定に保ち、TMGの生成及び増
殖がおこつた）。（▼）は生成したTMGであり、
（□）は生成した酢酸塩、（▲）は生成したエタノ
ール、（●）は生成した乳酸塩、（▽）は生成した
ピルビン酸塩であり、（■）は吸光度を（△）は
グリセロールを示す。第２図はKOH滴定により
PH値を一定に保ちながら、細胞懸濁液でのTMG
の生成経過を示す〔42ミリモルのグルコースの存
在下でのグリセロールからのTMGの生成の後に
PH7.5でKPO4緩衝液中の細胞希懸濁液（３mg／
ml）で行ない、PH値は２規定のKOHでの滴定に
より一定に保つた〕。（▲）はグリセロール、（●）
はTMGを示す。第３図は異なつた一定のPH値で
の静置培養によりグリセロールからのTMG生成
の比較を示す。〔試験は４ml細胞懸濁液（蛋白質
濃度：1.8mg／ml）で一定のPH値6.6(A)、7.0(B)、
7.9(C)及び8.0(D)で行なつた。PH値は0.6規定の
NaOHでの滴定により一定に保つた。用いた緩
衝液は248ミリモルのKPO4（Ａ乃至Ｃ）及び100
ミリモルのトリス／HCl(D)であつた。〕（▲）はグ
リセロール、（●）はTMG、（■）は酢酸塩、
（▼）はエタノールを示す。第４図はグルコース
の不存在下(A)又は存在下(B)における、静置細胞培
養でのグリセロールからのTMG生成の比較を示
す〔KPO4緩衝液中の細胞懸濁液（蛋白質濃度：
2.4mg／ml）によりグリセロールからのTMGの生
成の経過は一定のPH値7.5で行なわれ、混合物Ｂ
は84ミリモルのグルコースを含有する〕。（▲）は
グリセロール、（●）はTMG、（□）はグルコー
スを示す。
アンモニウムを制限した静置培養におけるグリセ
ロールからTMG生成の経過を示す（0.04％硫酸
アンモニウム、880ミリモルのグリセロール及び
550μgのCo2+／を有する無機培地における1.2
培養でPHを7.5に一定に保ち、TMGの生成及び増
殖がおこつた）。（▼）は生成したTMGであり、
（□）は生成した酢酸塩、（▲）は生成したエタノ
ール、（●）は生成した乳酸塩、（▽）は生成した
ピルビン酸塩であり、（■）は吸光度を（△）は
グリセロールを示す。第２図はKOH滴定により
PH値を一定に保ちながら、細胞懸濁液でのTMG
の生成経過を示す〔42ミリモルのグルコースの存
在下でのグリセロールからのTMGの生成の後に
PH7.5でKPO4緩衝液中の細胞希懸濁液（３mg／
ml）で行ない、PH値は２規定のKOHでの滴定に
より一定に保つた〕。（▲）はグリセロール、（●）
はTMGを示す。第３図は異なつた一定のPH値で
の静置培養によりグリセロールからのTMG生成
の比較を示す。〔試験は４ml細胞懸濁液（蛋白質
濃度：1.8mg／ml）で一定のPH値6.6(A)、7.0(B)、
7.9(C)及び8.0(D)で行なつた。PH値は0.6規定の
NaOHでの滴定により一定に保つた。用いた緩
衝液は248ミリモルのKPO4（Ａ乃至Ｃ）及び100
ミリモルのトリス／HCl(D)であつた。〕（▲）はグ
リセロール、（●）はTMG、（■）は酢酸塩、
（▼）はエタノールを示す。第４図はグルコース
の不存在下(A)又は存在下(B)における、静置細胞培
養でのグリセロールからのTMG生成の比較を示
す〔KPO4緩衝液中の細胞懸濁液（蛋白質濃度：
2.4mg／ml）によりグリセロールからのTMGの生
成の経過は一定のPH値7.5で行なわれ、混合物Ｂ
は84ミリモルのグルコースを含有する〕。（▲）は
グリセロール、（●）はTMG、（□）はグルコー
スを示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 水素供与体の形の補基質（cosubstrate）の
添加及び生成したプロパンジオールの分離を伴
う、適した細菌株の増殖培地中でグリセロールか
ら１，３−プロパンジオールを微生物学的に生成
する方法において、 ａ） バイオマスを、選択した細菌株の発育期
（growth phase）から生成し、グリセロールを
供給し、もし必要なら、定常発育期
（stationary growth phase）になるまで水素
供与体を実質的に除去し ｂ） さらに、グリセロール及び、バイオマスに
適合する水素供与体を、生成した静置細胞懸濁
液に添加し、１，３−プロパンジオールの増加
生成を伴うこと を特徴とする方法。 ２ 糖を工程ｂ）における水素供与体として添加
することを特徴とする請求項１に記載の方法。 ３ シトロバクター属（Citrobacter species）
からの細菌株を用いることを特徴とする、請求項
１又は請求項２に記載の方法。 ４ シトロバクター属の細菌としてシトロバクタ
ー・フリユンジイ（Citrobacter freundii）を用
いることを特徴とする請求項３に記載の方法。 ５ 工程ａ）において、嫌気的作業が行われるこ
とを特徴とする、請求項１乃至４のいずれか１請
求項に記載の方法。 ６ 工程ｂ）において、嫌気的作業が行なわれる
ことを特徴とする、請求項１乃至５のいずれか１
請求項に記載の方法。 ７ 工程ａ）及びｂ）において約6.5乃至8.5のPH
値を維持することを特徴とする、請求項１乃至６
のいずれか１請求項に記載の方法。 ８ 無機培地中で行なうことを特徴とする、請求
項１乃至７のいずれか１請求項に記載の方法。 ９ 所定量のリン酸塩及び窒素源の添加により増
殖の終りを調節する、請求項１乃至８のいずれか
１請求項に記載の方法。 １０ 窒素源としてアンモニウム塩を、又はリン
酸塩源としてリン酸二水素カリウムを用いること
を特徴とする請求項９に記載の方法。 １１ 工程ｂ）においてグリセロールが最初に約
0.2乃至1.5モル濃度存在することを特徴とする、
請求項１乃至１０のいずれか１請求項に記載の方
法。 １２ 工程ａ）においてグリセロールが最初に約
0.1乃至0.4モル濃度存在することを特徴とする、
請求項１乃至１１のいずれか１請求項に記載の方
法。 １３ 工程ａ）において得られるバイオマスは固
定されており、工程ｂ）の培地を前記バイオマス
上に供給することを特徴とする、請求項１乃至１
２のいずれか１請求項に記載の方法。 １４ 固定化をアルギン酸カルシウムを用いて行
なうことを特徴とする請求項１３に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP88120718A EP0373230B1 (en) | 1988-12-12 | 1988-12-12 | Process for the microbiological preparation of 1,3-propane-diol from glycerol |
| EP88120718,7 | 1988-12-12 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02257885A JPH02257885A (ja) | 1990-10-18 |
| JPH0469997B2 true JPH0469997B2 (ja) | 1992-11-09 |
Family
ID=8199647
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1321246A Granted JPH02257885A (ja) | 1988-12-12 | 1989-12-11 | グリセロールから１，３‐プロパンジオールを微生物学的に生成する方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5164309A (ja) |
| EP (1) | EP0373230B1 (ja) |
| JP (1) | JPH02257885A (ja) |
| AT (1) | ATE85813T1 (ja) |
| DE (1) | DE3878564T2 (ja) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5633362A (en) * | 1995-05-12 | 1997-05-27 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Production of 1,3-propanediol from glycerol by recombinant bacteria expressing recombinant diol dehydratase |
| US6428767B1 (en) | 1995-05-12 | 2002-08-06 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method for identifying the source of carbon in 1,3-propanediol |
| US5686276A (en) * | 1995-05-12 | 1997-11-11 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Bioconversion of a fermentable carbon source to 1,3-propanediol by a single microorganism |
| BR9712761B1 (pt) | 1996-11-13 | 2010-02-23 | mÉtodo para a produÇço de 1,3- propanodiol e microorganismo hospedeiro transformado. | |
| DE19803270A1 (de) * | 1998-01-29 | 1999-08-05 | Thomson Brandt Gmbh | Schaltung zum Ansteuern eines Schalttransistors |
| EP1204755B1 (en) | 1999-08-18 | 2006-08-09 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Process for the biological production of 1,3-propanediol |
| US6852517B1 (en) | 1999-08-30 | 2005-02-08 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Production of 3-hydroxypropionic acid in recombinant organisms |
| FR2801058B1 (fr) | 1999-11-16 | 2002-01-18 | Roquette Freres | Procede de purification du 1,3-propanediol a partir d'un milieu de fermentation |
| US6479716B2 (en) | 2000-03-29 | 2002-11-12 | Archer-Daniels-Midland Company | Method of recovering 1,3-propanediol from fermentation broth |
| US7056439B2 (en) * | 2003-05-06 | 2006-06-06 | Tate & Lyle Ingredidents Americas, Inc. | Process for producing 1, 3-propanediol |
| TWI568847B (zh) | 2007-03-16 | 2017-02-01 | 奇諾麥提卡公司 | 用於１，４-丁二醇及其前驅物之生物合成的組合物及方法 |
| US7947483B2 (en) | 2007-08-10 | 2011-05-24 | Genomatica, Inc. | Methods and organisms for the growth-coupled production of 1,4-butanediol |
| DE102007048277A1 (de) | 2007-10-08 | 2009-04-09 | Agraferm Technologies Ag | Verfahren und Vorrichtung zur mikrobiellen Herstellung eines bestimmten Produktes und Methan |
| AR072446A1 (es) * | 2008-03-02 | 2010-09-01 | Dow Global Technologies Inc | Proceso de hidrogenacion mejorado |
| CA2735883C (en) | 2008-09-10 | 2020-05-05 | Genomatica, Inc. | Microorganisms for the production of 1,4-butanediol |
| BRPI1010581A2 (pt) | 2009-06-04 | 2016-11-08 | Genomatica Inc | micro-organismos para a produção de 1,4-butanodiol e métodos relacionados |
| PL2438036T3 (pl) | 2009-06-04 | 2017-09-29 | Genomatica, Inc. | Sposób oddzielania składników brzeczki fermentacyjnej |
| AU2010306785B2 (en) * | 2009-10-13 | 2016-01-14 | Genomatica, Inc. | Microorganisms for the production of 1,4-butanediol, 4-hydroxybutanal, 4-hydroxybutyryl-CoA, putrescine and related compounds, and methods related thereto |
| US8530210B2 (en) | 2009-11-25 | 2013-09-10 | Genomatica, Inc. | Microorganisms and methods for the coproduction 1,4-butanediol and gamma-butyrolactone |
| US8048661B2 (en) | 2010-02-23 | 2011-11-01 | Genomatica, Inc. | Microbial organisms comprising exogenous nucleic acids encoding reductive TCA pathway enzymes |
| US8637286B2 (en) | 2010-02-23 | 2014-01-28 | Genomatica, Inc. | Methods for increasing product yields |
| CN111705028A (zh) | 2012-06-04 | 2020-09-25 | 基因组股份公司 | 制造4-羟基丁酸酯、1，4-丁二醇和相关化合物的微生物和方法 |
| WO2015034948A1 (en) | 2013-09-03 | 2015-03-12 | Myriant Corporation | A process for manufacturing acrylic acid, acrylonitrile and 1,4-butanediol from 1,3-propanediol |
| CN110541004B (zh) * | 2019-09-30 | 2021-05-28 | 江南大学 | 一种生产1,3-丙二醇的方法 |
| CN119410528A (zh) * | 2024-10-25 | 2025-02-11 | 安徽师范大学 | 一种弗氏柠檬酸杆菌及其应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3336051A1 (de) * | 1983-10-04 | 1985-04-25 | Maizena Gmbh, 2000 Hamburg | Verfahren zur herstellung von 1,2-propandiol, insbesondere d(-)-1,2-propandiol |
-
1988
- 1988-12-12 DE DE8888120718T patent/DE3878564T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-12-12 EP EP88120718A patent/EP0373230B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-12-12 AT AT88120718T patent/ATE85813T1/de not_active IP Right Cessation
-
1989
- 1989-12-11 JP JP1321246A patent/JPH02257885A/ja active Granted
- 1989-12-12 US US07/448,137 patent/US5164309A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE85813T1 (de) | 1993-03-15 |
| DE3878564D1 (de) | 1993-03-25 |
| EP0373230B1 (en) | 1993-02-17 |
| DE3878564T2 (de) | 1993-08-19 |
| EP0373230A1 (en) | 1990-06-20 |
| JPH02257885A (ja) | 1990-10-18 |
| US5164309A (en) | 1992-11-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5164309A (en) | Process for the microbiological preparation of 1,3-propane-diol from glycerol by citrobacter | |
| Buschhorn et al. | Production and utilization of ethanol by the homoacetogen Acetobacterium woodii | |
| Biebl et al. | Glycerol conversion to 1, 3-propanediol by newly isolated clostridia | |
| Shimizu et al. | Stereoselective reduction of ethyl 4-chloro-3-oxobutanoate by a microbial aldehyde reductase in an organic solvent-water diphasic system | |
| US5254467A (en) | Fermentive production of 1,3-propanediol | |
| EP0148132B1 (en) | Microbiological process for stereoselectively synthesizing l(-)-carnitine | |
| US4786598A (en) | Process for the biotechnological preparation of poly-d-(-)-3-hydroxybutyric acid | |
| CA1217672A (en) | Single cell protein from sulfur energy sources | |
| JP2003199595A (ja) | 光学活性マンデル酸誘導体の製造方法 | |
| EP0648273B1 (fr) | Procédé pour l'obtention de produits à activité bactérienne capables de transformer le glycérol en 1,3-propanediol, souches correspondantes et application à la production industrielle d'1,3-propanediol | |
| Payen et al. | Use of cytoplasmic hydrogenase from Alcaligenes eutrophus for NADH regeneration | |
| JPH0775589A (ja) | プロトカテキュ酸の製造方法 | |
| US4059489A (en) | Production of glucose isomerase | |
| Fukuda et al. | Ethylene production from L-methionine by Cryptococcus albidus | |
| Jungermann et al. | Pyruvate formate lyase in Rhodospirillum rubrum Ha adapted to anaerobic dark conditions | |
| US4194065A (en) | Process for producing coenzyme Q | |
| US4540665A (en) | Process for producing D-β-hydroxyalkanoic acid | |
| US5846793A (en) | Microbial process for biotransformation to (R)-3-chloro-1,2-propanediol | |
| Hou | Other applied aspects of methylotrophs | |
| EP1550730B1 (en) | Method for producing optically active 3-chloro-2-methyl-1,2-propanediol taking advantage of microorganism | |
| JPH0568576A (ja) | コハク酸の製造法 | |
| EP0899342B1 (en) | Process for the biotechnological production of Delta-decalactone and Delta-dodecalactone | |
| US5610045A (en) | Producing a high content of acetate kinase using bacillus stearothermophilus | |
| JPH0569512B2 (ja) | ||
| US3703439A (en) | Process for the preparation of l-beta-(3,4-dihydroxyphenyl)-alpha-alanine by fermentation |