JPH0470317B2 - - Google Patents
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明はスクシニル化されたタンパク質と鉄の
塩とを適正なPH範囲で処理することによりえら
れ、該スクシニル化の程度が20〜100％であり、
生物学的に利用し得る鉄を0.1〜20重量％好まし
くは0.8重量％以上含有するスクシニル化された
タンパク質に関する。該タンパク質は完全な薬剤
耐性を有し、鉄を最適に生物学的に利用する特徴
を有する。 あらゆる生体組織に存在する鉄は、生理学上必
要不可欠な役割を演じている。鉄はヘモグロビ
ン、ミオグロビンおよびカタラーゼ、フマル酸−
デヒドロゲナーゼ、ペルオキシダーゼ、チトクロ
ム類、DPN−チトクロムレダクターゼ、フエロ
フラビンのような金属フラボタンパク質などの酵
素の部分的および本質的構成成分である。成人の
身体組織は1.5〜５ｇの鉄を含有し、そのうちの
60〜65％は赤血球に集中しており、18〜30％は肝
臓、脾臓、骨髄および内皮細胞の網状組織細胞に
局在しているフエリチンタンパク質およびヘモジ
デリン（haemosiderin）に結合している。残り
は上記の多くの酵素系に散在しており、ミオグロ
ビンに約４％、腸由来の鉄を血液にのせて輸送す
るβ1グロブリンであるトランスフエリンに約0.1
％含有されている。生理的PH値において２つの鉄
原子を実際上分割できない方法で結合することが
できる。 鉄の補給は、古い赤血球の破壊による生体内の
鉄の使用と外部から鉄を吸収することで満たされ
る。外部からの鉄は十二脂腸および空腸の上部で
吸収され、主として肝臓に蓄積される。鉄欠乏に
よる初期の病理学的微候は血色素増加性
（hyperchromic）鉄欠乏性貧血であり、その主な
原因は胃および十二脂腸潰瘍あるいは胃および十
二脂腸腫瘍での慢性の出血、下痢時の食事量不足
あるいは食事の吸収不良、たとえば妊娠、授乳
期、感染症などによる鉄の需要増加、代謝不良、
副じん皮質刺激ホルモン（ACTH）およびコル
チゾンの投与などの特殊療法などである。 そのばあい最適な療法は鉄を投与することであ
る。それによつて、実際に鉄欠乏から誘引される
貧血であれば、該貧血状態を効果的に回復する。
しかしながら、一般に、鉄に使用される媒体（ベ
クトル（vector））の型に関係した好ましくない
副作用が伴う。経口薬に最も一般的な製剤法は幾
多の有機酸塩および無機酸塩に基づき、徐々に上
記の副作用を軽減するよう療法に導入する。した
がつて経口薬は塩化第二鉄、硫酸第一鉄、リン酸
第二鉄などの無機塩類、あるいはクエン酸塩、コ
リンの塩、アスパラギン酸塩、フマル酸塩、グル
コン酸塩、グリシン酸塩、乳酸塩、シユウ酸塩、
コハク酸塩などの有機塩類にして用いられる。深
部筋肉注射（deep intramuscular
administration）のばあいは、鉄−デキストラン
錯体が、経口投与では効果が現われない鉄欠乏性
貧血に対する静脈注射では鉄−デキストリン錯体
が使用されている。 鉄−デキストリンの錯体を用いるばあいの副作
用は筋肉注射したばあいのアレルギー反応、発
熱、頻拍、白血球増加、リンパ節疾患および静注
投与したばあいのアナフイラキシーシヨツク、血
栓性静脈炎、循環虚脱の形で現われる。叙上の化
合物に基づいた処方を用いて経口投与したばあ
い、一般に副作用は粘膜の壊死および穿孔などの
胃腸障害、より重篤なばあいは下痢および嘔吐を
おこす。さらに薬剤耐性が低いと鉄の適量を投与
することが困難となる。副作用を最小限にくいと
めるために、投与と同時に食事をとることが提案
されているが、そのばあい食物中に元々含まれて
いる鉄のため鉄の摂取量が変わつてしまう。実際
製剤からの鉄の摂取は患者が絶食したときに最適
であることが確認された。さらに胃の炎症
（gastric irritation）は胃酸中和剤の使用に起因
しており、吸収量が減少し、貧血症状が悪化す
る。 鉄療法、とくに経口投与による鉄療法が専門的
なフエリチンの市場が導入されて急激に進歩し
た。 フエリチンは第２鉄のグロブリンで哺乳動物の
身体に最重要な鉄含有タンパク質である。商品と
して販売されているのは原材料としてウマの脾臓
から抽出されたものである。 フエリチンの鉄含有率は乾燥重量として20％で
ある。そのタンパク質部分であるアポフエリチン
は分子量が約44500であり、リン酸鉄酸化物の結
晶の核を取り囲んでいて、水に可溶であるので経
口投与に適している。 フエリチンを投与したとき、前記の鉄誘導体の
使用でおこる胃腸に対する副作用は生じない。し
かしながらフエリチンの使用は原材料が非常に高
価であること、またとくに、その抽出しようとす
る供給源に限りがあることの結果として制約され
ている。 先行技術によれば、副作用なしに吸収されるこ
とを目的とした最適な鉄のキヤリアは、タンパク
質キヤリアである。多くのタンパク質は鉄に対し
ある程度親和力を有している。動物起源のある種
のタンパク質（血清タンパク質、臓器タンパク
質、オバルブミン、ラクトタンパク質）あるいは
植物起源のタンパク質（ダイズタンパク質）を鉄
のキヤリアとして使用できるかどうか検討されて
きた。 無機の第２鉄の塩と前記単純タンパク質とを相
互作用させて鉄タンパク質誘導体を形成せしめる
のであるが、タンパク質に結合した鉄が0.5重量
％を超えるときその誘導体が不溶化すること、不
溶化したとき全鉄量のどの程度が実際にタンパク
質に結合しており、どの程度が重い胃の障害をお
こす酸化物の含水塩の形で共沈するのか、判断す
るのが困難あるいは不可能でさえあること、これ
ら誘導体の鉄に関して均質性および成分の安定性
が欠けていることなどの欠点のため、その治療上
の興味はそがれている。 さらに乳から誘導されるタンパク質を含むいく
つかの単純タンパク質のばあい、その鉄誘導体の
ほとんどは不溶であるが、可溶な鉄誘導体が、
種々のPH値で存在することが知られており、その
可溶な鉄誘導体の組成は実験パラメータのわずか
な変化で多様に変化する。 前記単純タンパク質を適正条件下で、たとえば
食料品や家畜飼料に使用するスクシニル化タンパ
ク質誘導体の製造に普通に用いられている方法を
用いてスクシニル化し鉄と反応させることによ
り、安定で、PH５を超えると可溶な、多様ではあ
るが再現性のある鉄含有量の高い鉄単純タンパク
質誘導体をえることができ、該誘導体が、胃の障
害のような副作用をおこすことなく哺乳動物に鉄
の補給のため経口投与できることが確められた。
ラツトに20日間連続で毎日経口投与しても胃の障
害はみられず、高い耐性度を示した。 ラツトを使つて、硫酸第２鉄、馬脾臓フエリチ
ン（シグマ社製、セントルイス、ミズリー州）お
よび実施例１でえられるスクシニル化された乳タ
ンパク質の鉄誘導体の形で、等量の鉄を経口投与
した後の鉄沈着の状態を比較した結果、 (a) 本発明の鉄誘導体によつて生じる血液の鉄レ
ベルには、硫酸第２鉄によつて生じる鉄レベル
に比して、持続性がみとめられ（第９表参照）、 (b) 本発明の鉄誘導体によつて生じる血液の鉄レ
ベルは、実験中６時間、標準物質のフエリチン
によつて生じる鉄レベルに比して、平均約
1.5：１の比で高いことがわかつた（第10表参
照）。 製品の許容量が高いこと、その毒性が低いこと
（スイス種マウスでLD50値が4000mg／Kg体重を超
える）、鉄レベルが高いことおよび原材料の供給
が容易であることを考慮すると、本発明の鉄誘導
体は、現在の鉄療法技術の状態を全面的に改良す
るものである。 なお、鉄を含む既知の糖タンパク質をサクシニ
ル化した誘導体が知られている（Arch.Bio−
chem.Biophys.180(2)、239〜47、1977；Ｊ、Exp.
Med.140(4)、1068〜84、1974；Ｊ、Biol.
Chem.245(19)、4988〜94、1970；Biochim.
Biophys.Acta.181、295〜304、1969）が、これ
らは構造研究のために製造されたものであつて、
１分子当り２〜８個の鉄原子しか結合することが
できず、しかも鉄との結合能力があつても一旦結
合した鉄の放出能力が乏しく、生体への鉄補給に
適さない。 因みに、本発明のサクシニル単純タンパク質
は、１分子当り100個までの鉄原子と結合するこ
とが可能であるとともに、一旦結合した鉄の放出
能力もすぐれ、生体への鉄補給に適している。 叙上のスクシニル化された鉄単純タンパク質の
物理化学的特性は実施例に記載するごとく安定で
あり再現性があり、タンパク質に結合していない
鉄が存在しないことがスクシニル化された単純タ
ンパク質と鉄とからえられる調製物が、アルカリ
溶媒（鉄イオンが酸化物の含水塩として沈殿する
条件）中に完全に溶解することによつて示され
る。 したがつて本発明は、鉄を種々の割合で含有
し、種々の程度にスクシニル化された動物性単純
タンパク質あるいは植物性単純タンパク質を含有
し、経口投与しても胃腸障害をおこさない生物学
的に利用できる哺乳動物に鉄を供給する新規な鉄
誘導体に関する。 本発明の誘導体は、哺乳動物の鉄欠乏症に起因
する貧血治療剤の有効成分として使用しうる。し
たがつて本発明は本発明の鉄誘導体を有効成分と
するヒト用あるいは動物用の貧血治療剤に関す
る。 本発明はまた、スクシニル化された単純タンパ
ク質を（それ自体公知の方法で製造される）、水
性溶媒中PH約２〜10、好ましくは中性に近いとこ
ろで鉄のイオンと反応させ、えられた生成物を、
自発的にあるいは酸性化してPHを２〜４の範囲で
析出せしめて反応液から単離するか、あるいはPH
を中性近くに調整したのち溶媒を除去して反応生
成物を単離することを特徴とするスクシニル化鉄
単純タンパク質誘導体の製造法に関する。 以下、実施例に基づいて本発明をさらに詳しく
説明するが、本発明はかかる実施例のみに限定さ
れるものではない。 実施例 １ （スクシニル化された全粉乳（whole milk
powder）タンパク質から鉄を５重量％含有す
る鉄誘導体の製造） １Kgの全粉乳（カゼイン75〜85％、残部はラク
トアルブミン、アルブミンおよびイムノグロブリ
ンから本質的に成る。）を６リツトルの0.3M炭酸
ナトリウム水溶液に懸濁させたところに、4N水
酸化ナトリウム水溶液を加え、機械的に撹拌して
PHを7.5〜８に維持調節しながら、500ｇの無水コ
ハク酸を連続的に添加した。添加終了後、さらに
室温で２〜３時間撹拌すると懸濁液は完全に溶解
し、乳白光を放つ溶液となつた。ついで該溶液を
殆んど透明になるまで遠心分離あるいは過した
のち、塩酸でPH３まで徐々に酸性化した。 えられた沈殿を遠心分離あるいは過すること
により分離し、再び水（約８リツトル）に懸濁さ
せ、該懸濁液が完全に溶解するまで（約PH7.5）
水酸化ナトリウム水溶液を加えた。遠心分離した
のち、えられた透明な溶液に塩酸を加えることに
より再びPH2.5〜３に酸性化し沈殿を再生させ、
該沈殿を過あるいは遠心分離し、PH３の塩酸で
洗浄した。該沈殿はスクシニル化されたタンパク
質からなり、そのスクシニル化の程度は用いられ
る無水コハク酸の官能量によつて変化しうるもの
であつた。実施例１のばあい、タンパク質のスク
シニル化の程度は、はじめに与えられたタンパク
質のスクシニル化されうる基に対し90％であつ
た。この沈殿を真空圧で乾燥したのち、蒸留水に
分散し、PH7.5まで水酸化ナトリウム水溶液を加
えて該沈殿を溶解し、最終的にタンパク質濃度が
約0.04ｇ／mlになるように溶液を希釈した。鉄の
塩（たとえばFeCl3など）をスクシニル化された
タンパク質に対し重量で10％含有する溶液を前記
タンパク質溶液に加えて懸濁させ機械的に撹拌し
て該懸濁を微細に分散し、PHを約2.5に落とした。
さらに室温で３時間撹拌を続けたのち該懸濁を
取し、水（約３倍量）に懸濁させ、PH7.5まで水
酸化ナトリウム水溶液を加えて該懸濁を溶解し
た。 完全には透明でないこの溶液を取し、つぎの
方法のいずれかを用いて固体生成物を再生した。 (i) 溶液を酸性化し、PH2.5でえられた沈殿を
取し、該沈殿を真空圧で乾燥した。 (ii) 透明な溶液を水で透析して塩化ナトリウムを
除去し、該溶液を凍結乾燥あるいはスプレイド
ライヤーにて乾燥した。 最終生成物の収率は上記(i)の方法、(ii)の方法の
いずれを選んでも同じで、出発物質の粉乳に対し
重量で約20％であつた。該生成物の特性を第１表
の乳タンパク質1bに示す。 実施例 ２ （スクシニル化された乳タンパク質から鉄を５
重量％含有する鉄誘導体の製造） 実施例１において粉乳の代わりに、該粉乳を水
（約５リツトル）に分散させ、鉱酸でPH2.5に酸性
化したのち固体のタンパク質を取あるいは遠心
分離し、乾燥することによつてえられる350ｇの
乳タンパク質（カゼインαとカゼインβの55：45
混合物を主成分とする）を出発物質として用いた
ほかは実施例１と同様にして目的とする鉄誘導体
をえた。 第１表に示したように実施例１および実施例２
の誘導体の鉄含有率は約４〜５重量％であつた。 実施例 ３ （スクシニル化された乳タンパク質から実施例
１および実施例２とは異なつた鉄の含有率を有
する鉄誘導体の製造） 実施例１および実施例２と同量の粉乳あるいは
予め析出させた乳タンパク質を使用し、Fe3+／
スクシニル化されたタンパク質の比が重量で
0.1：10、0.2：10、0.5：10および1.5：10にかえ
たほかは実施例１と同様にして目的とする鉄誘導
体をえた。えられた鉄誘導体の特性を第１表の乳
タンパク質ａ、ｃ、ｄ、ｅに示す。 実施例 ４ （スクシニル化された卵タンパク質（オバルブ
ミン）からの鉄誘導体の製造） ５ｇのオバルブミンを３ｇのKHCO3を含有す
る100mlの水に溶解し、NaOHの添加によりPHを
５〜８に維持しながら、透明な該溶液に2.5ｇの
無水コハク酸を連続的に添加した。添加終了後、
室温でさらに２時間反応させた。該溶液をPH3.4
に酸性化したのち、生じた沈殿を遠心分離で単離
し、該沈殿をPH7.5の水酸ナトリウム水溶液に溶
解し、ついでPH3.4にして再び析出させることに
より精製した。えられた固体を遠心分離し、真空
下に乾燥し、乾燥固体を蒸留水に懸濁し、
NaOHを添加して（PH８）該懸濁を溶解し、最
終的に溶液のタンパク濃度が0.04ｇ／mlになるよ
うにした。 Fe3+の塩（たとえば塩化第２鉄）の溶液を非
常に粘性の高い前記溶液に加え、スクシニル化さ
れたタンパク質／Fe3+の比が重量で10：１にな
るようにした。このとき、PHは2.6に下がり、沈
殿が生成した。該沈殿を取し、水に再び溶解
し、完全に溶解するまでNaOHを添加した（PH
7.5）。該溶液を水で透析して塩化ナトリウムを除
去したのち、凍結乾燥あるいはスプレイドライヤ
ーで乾燥させることにより固体生成物をえた。え
られた誘導体の収率は、出発物質のタンパク質に
対し重量で33％であつた。該誘導体の鉄含有率お
よび特性を第１表に示す。 実施例 ５ （スクシニル化されたウシ血清タンパク質から
の鉄誘導体の製造） 1.5ｇのNaHCO3を、ウシ血清タンパク質（主
としてアルブミン50〜58％およびグロブリン40〜
45％から成る）の溶液50mlに添加し、NaOHの
添加によつてPHを7.5〜８に維持しながら、６ｇ
の無水コハク酸を連続的に添加した。添加終了
後、室温でさらに２時間反応させ、ついで鉱酸で
PH2.4に酸性化することにより沈殿を生成せしめ
た。該沈殿を実施例４と同様にして遠心分離し、
精製することにより固体生成物をえた。 えられた固体生成物を水に懸濁し、NaOHを
用いて該懸濁液をPH7.5にした。えられた懸濁液
にFe3+の塩（たとえば塩化第２鉄）の水溶液を
加えて、スクシニル化されたタンパク質／Fe3+
の比が重量で10：１になるようにすると、溶液の
PHは自動的に2.4に下がり、PH7.5で一部可溶する
沈殿がえられた。遠心分離で沈殿と溶液をわけ、
溶液を水に透析することにより塩化ナトリウムを
除去した。ついで凍結乾燥することにより目的と
する鉄誘導体をえた。出発物質のタンパク質に対
し収率は重量で約30％であつた。鉄含有率および
特性を第１表に示す。 参考例 ６ （スクシニル化されたブタ肝臓タンパク質から
の鉄誘導体の製造） 400ｇの新鮮なブタ肝臓をSilversonホモジナイ
ザーを用いてPH8.3の0.2MKHCO3水溶液800ml中
でホモジナイズした。５℃、900rpmで遠心分離
したのち上澄液をとり、0.45μ厚の酢酸セルロー
ス膜を通して過した。50mlの透明な液に1.2
ｇの無水コハク酸を、NaOHを添加することに
よりPH7.5〜８に維持しながら、連続的に添加し
た。 添加終了後、該溶液を室温で１時間放置したの
ち、鉱酸でPH３に酸性化することにより沈殿をえ
た。該沈殿を実施例４と同様にして処理し、水に
透析した溶液を凍結乾燥した。 凍結乾燥してえられた残渣を水に懸濁し、ナト
リウムを用いてPH８にすることにより完全には透
明でない溶液をえた。該溶液を遠心分離し、えら
れた透明な上澄液にFe3+の塩（たとえば塩化第
２鉄）の水溶液を加えてスクシニル化されたタン
パク質／Fe3+の比が約10：１とした。 溶液のPHは2.6に下がり、沈殿が生成した。沈
殿を実施例４と同様にして精製し、水に透析した
最終溶液を凍結乾燥することにより固体の目的と
する鉄誘導体をえた。その特性および鉄含有率を
第１表に示す。 実施例 ７ （スクシニル化されたダイズタンパク質からの
鉄誘導体の製造） ５ｇのダイズタンパク質（主成分：グリシニ
ン、レグメリン、大豆−レグメリン）を、３ｇの
NaHCO3を含有する100mlの水に懸濁させた混合
物を、完全に溶解するまで撹拌し、NaOHを添
加することによりPHを7.5〜８に維持しながら、
2.5ｇの無水コハク酸を連続的に添加した。添加
終了後、室温でさらに２時間撹拌したのち、鉱酸
を加えることによりPHを3.4にした。えられた沈
殿を実施例４と同様にして精製し、凍結乾燥して
えた最終固体残渣を100mlの水に懸濁させ、
NaOHを添加することによりPHを８に修正して
えられた完全には透明でない溶液を遠心分離し
た。 えられた透明な上澄液をFe3+の塩（たとえば
塩化第２鉄）の溶液で処理し、スクシニル化され
たタンパク質／Fe3+の比が重量だ10：１になる
ようにした。自動的に溶液のPHは2.6に下がり、
沈殿が生成した。えられた沈殿を実施例４と同様
に処理し、凍結乾燥により固体の目的とする鉄誘
導体をえた。収率は出発物質のタンパク質に対し
重量で22％であつた。その特性および鉄含有率を
第１表に示す。 つぎに例１〜７でえられたスクシニル化された
タンパク質の鉄誘導体を以下に示す方法によつて
分析し、その物理化学的性質を示す。 (1) スクシニル化の程度 この特性は、初めのタンパク質中のスクシニ
ル化されうる基に対するスクシニル化された基
の百分率で表わした。S.MooreおよびW.H.
Stein（J.Biol.Chem.、211、907（1954））による
遊離のアミノ基とニンヒドリンとの反応を含む
方法を用いた。結果を第１表に示す。 (2) 鉄含有量 鉄含有量はStandard Methods、第14版、
1975、208頁、APHA−AWWA−WRCF（ｏ−
フエナントロリンとの反応）にしたがつて、
2N−HClで温時抽出したのち、あるいは硫酸
でタンパク質を完全に消化したのち定量した。
結果を第１表に示す。 (3) スペクトルデータ (i) EPRスペクトル 前記例１〜７でえられた全ての誘導体は同
じスペクトル挙動を示した。実施例１でえら
れたスクシニル鉄タンパク質誘導体のEPR
スペクトルをプロツトした。凍結乾燥してえ
た粉末を使用してスペクトルを記録したとこ
ろ約2.0を中心としたｇ値および約2000Gの
振幅をもつ非常に幅広いシグナルを示した。
さらに高分解されたシグナルでもｇ値は約
2.0を中心としていた。両シグナルともその
形はFe3+の常磁性中心の相互作用に特徴的
なものであつた（F.Reidら、Inorg.Chem.
７、119（1968））。叙上の全てのデータは結合
試剤の周囲にタンパク構造が存在することを
示すものであつた。 (ii) 円偏光二色性 例１〜７でえられた誘導体の多くは同様の
挙動を示した。実施例１でえられたスクシニ
ル鉄タンパク質誘導体の円偏光二色性スペク
トルをプロツトした。スペクトルはUV領域
で負の反応性を示すことが特徴的であり、
200nｍ付近で強い負方向への吸収帯ピーク
および225nｍを中心として負方向への肩を
示した。このスペクトルの特徴はランダムな
タンパク構造が顕著であることを示すもので
あつた（F.CiardelliおよびP.Salvadori著、
Optical Rotatory Dispersion and Circular
Dichroism、Heyden ＆ Son Ltd.刊、ロ
ンドン、４、５章（1973））。 (iii) 紫外−可視吸収スペクトル 例１〜７でえられた誘導体の多くは類似し
た電子スペクトル挙動を示した。第１図は実
施例１でえられたスクシエル鉄タンパク質誘
導体の紫外−可視吸収スペクトルである。 第１図中、実線で示したスペクトルは吸収
ピクを示さず、ただ非常に弱い肩を450nｍ
付近に表わすだけであつた。紫外領域では
270nｍ付近を中心に、はつきりそれとわか
る肩があり、220nｍ未満で非常に強い吸収
ピークを有していた。 また第１図には、比較のためウマ脾臓のフ
エリチンのスペクトルを破線で示した
（Boehringer−Mannheim）。 第１図に示した可視領域での吸収スペクト
ルはPH７の水中で測定したものであり、同条
件下でのウマ脾臓のフエリチンのスペクトル
もまた比較のために示した（Boehringer−
Mannheim）。 (iv) 螢光発光スペクトル分析 螢光発光スペクトルチヤートを第２図に示
した。図中、実線は本発明のスクシニル化さ
れた乳タンパク質の鉄誘導体に関するもので
あり、一点鎖線はラクトタンパク質に、破線
はスクシニル化されたラクトタンパク質に関
するものである。 金属の存在に起因して、タンパク質の螢光
が消化されることが観測された。 (v) 1H−NMRスペクトル Brucker cxp300を用い、D2O（１％）中、
300MHzにおいて測定した。 実施例１〜７で得られた誘導体の多くは、
類似した電子スペクトル挙動を示した。 第１０図は、実施例１で得られたスクシニ
ル鉄タンパク質誘導体の1H−NMRスペクト
ルを示す。 2.4ppmにおけるシグナルはヘミコハク酸
残基による。 (vi) 13C−NMRスペクトル VARIAN CTF20を用い、13C−NMRスペ
クトルを０〜88ppmのインターバルで記録し
た。 実施例１〜７で得られた誘導体の多くは類
似した電子スペクトル挙動を示した。 第１１図は、実施例１に準じて得られたス
クシニル鉄タンパク質（Ａ、鉄分2w／ｗ％）
と実施例１で得られたスクシニル鉄タンパク
質誘導体（Ｂ、鉄分5w／ｗ％）の13C−
NMRスペクトルを示す。 (vii) 赤外部吸収スペクトル KBr法で測定した。 実施例１〜７で得られた誘導体の多くは類
似した電子スペクトル挙動を示した。 第１２図は、実施例１で得られたスクシニ
ル鉄タンパク質誘導体の赤外部吸収スペクト
ルを示す。 下記の吸収極大を示した。 −NH2：3500〜3000cm-1； −Ｏ−Ｃ＝Ｏ：1720、1250、1000cm-1； −CH2−CO−：1450cm-1； −CH2−：1100cm-1； −CH−：700cm-1； (4) 電気泳動法 スクシニル化されたタンパク質、比較のため
のスクシニル化されていないタンパク質および
フエリチンをセルロースアセテート膜上で電気
泳動し、その結果をそれぞれ第３〜５図に示
す。 第３図は、ダイズタンパク質（像１）、スク
シニル化されたダイズタンパク質（像２）、ス
クシニル化されたダイズタンパク質の鉄誘導体
（像３）、ダイズタンパク質の鉄誘導体の可溶分
のフラクシヨン（像４）の電気泳動の結果を示
す。 第４図は、オバルブミン（像１）、スクシニ
ル化されたオバルブミン（像２）、スクシニル
化されたオバルブミンの鉄誘導体（像３）、オ
バルブミンの鉄誘導体（像４）の電気泳動の結
果を示す。 第５図は、ラクトタンパク質（像１）、スク
シニル化されたラクトタンパク質（像２）、ス
クシニル化されたラクトタンパク質の鉄誘導体
（像３）、ウマ脾臓フエリチン（像４）の電気泳
動の結果を示す。 第６図に、電気泳動後にデンシトメータを用
いて550nｍの光でスキヤニングした結果を示
す。第６図中、実線はスクシニル化されたラク
トタンパク質の鉄誘導体、一点鎖線はスクシニ
ル化されたダイズタンパク質の鉄誘導体および
破線はスクシニル化されたオバルブミンの鉄誘
導体のものである。 (5) ゲル過 セフアデクスG75（Pharmacia社製、
Uppsala）を使用し、スクシニル化された乳タ
ンパク質と実施例１でえられたその鉄誘導体と
をゲル過した。その結果を第７図に図示す
る。第７図中、実線はスクシニル化された乳タ
ンパク質、破線はその鉄誘導体に関するもので
あり、縦軸は280nｍでの吸光度、横軸はフラ
クシヨン番号である。第７図に示すように、鉄
が存在すると、カラムのボイド（void）の保持
時間に類似した保持時間を有する１つのピーク
が現われた。セフアデクスG75が排除できる分
子量は約75000ダルトン（Daltons）であり、
フラクシヨンを総計してえられる見かけの最小
分子量は、75000ダルトンより大きかつた。ま
た鉄が存在しないと異なる溶出パターンの不明
瞭な２つのピークが記録された。この現象は電
気泳動法においても観測された（第５図）。叙
上に示した電気泳動またはゲル過における挙
動は、鉄がタンパク質体全体の中心に位置して
いることを示すものであつた。さらにセフアデ
クスG200によるゲル過をスクシニル化され
た乳タンパク質の鉄誘導体および比較のためフ
エリチンについて行なつた（第８図参照。図
中、縦軸と横軸とは第７図に同じ。実線はスク
シニル化された乳タンパク質の鉄誘導体、破線
はウマ脾臓のフエリチンに関する）。このばあ
いもまたピークは明瞭であり、本発明の鉄誘導
体の保持時間がフエリチンの保持時間よりも大
きいことから該鉄誘導体の見かけの分子量はウ
マ脾臓フエリチンの分子量よりも小さいことが
わかる。 (6) 溶解性 実施例１〜７で得られた誘導体は中性および
アルカリ性のPH域で水に可溶である。 水と混和しない有機溶媒、並びにアルコール
およびアセトンに不溶である。 (7) 呈色反応 実施例１〜７で得られた誘導体を0.1％含む
PH８の水の溶液10mlに５％フエリシアン化カリ
ウムを加え、希HClで酸性にすると青色沈殿を
生ずる。 同じく５％溶液50mlに6N HCl5mlを加える
と白色のかさばつた沈殿を生ずる。 NH4OHで処理したsurnatantは水酸化鉄か
らなる赤褐色の沈殿を生ずる。 (8) アミノ酸組成 本願発明のスクシニル鉄タンパク質の代表と
みなされる、実施例１で得られたスクシニル鉄
乳タンパク質誘導体（鉄分5w／ｗ％）のアミ
ノ酸組成（±10％）は下記の通りである。 （％） アスパラギン酸／アスパラギン 6.77 スレオニン 3.91 セリン 4.77 グルタミン酸／グルタミン 22.06 プロリン 10.16 グリシン 1.77 アラニン 2.90 システイン − バリン 6.49 メチオニン 2.69 イソロイシン 5.34 ロイシン 9.10 チロシン 5.79 フエニルアラニン 4.50 ヒスチジン 2.87 リジン 7.07 アルギニン 3.73 コハク酸含量：タンパク質の含量の7.7％ (9) 元素分析値 本願発明のスクシニル鉄タンパク質誘導体の
代表とみなされる、実施例１で得られたスクシ
ニル鉄タンパク質誘導体（鉄分５％）の元素分
析値（％）は下記のとおりである。 Ｃ：44.61％；Ｈ：6.17％ Ｎ：11.22％；Cl：1.76％ Ｐ：0.85％；Ｓ：0.58％ (10) 胃液中での安定性 実施例１でえられた鉄誘導体を用いて行なつ
た。25mgの前記鉄誘導体を0.5mlの蒸留水に溶
解したところに５mlのラツトの胃液を加えた。
沈殿が生成した懸濁液を37℃で60分間撹拌した
のち、遠心分離して該沈殿を除去し、上澄液の
鉄含有量を分析した結果、胃液により遊離した
鉄の量は最初の量の１％であつた。 (7) 硫酸アンモニウムによる鉄誘導体の沈殿 30重量％の硫酸アンモニウム溶液を、実施例
１でえられた鉄誘導体10重量％溶液に加えてタ
ンパク質の鉄誘導体の沈殿を生成せしめた。該
沈殿は用いた鉄誘導体と同じ特性を有し、依然
として水に可溶であり液中には鉄は存在しな
かつた。 叙上のデータから、鉄に対するスクシニル化さ
れたタンパク質の複合体形成能（complexing
capacity）は、スクシニル化された乳タンパク質
だけに典型的なものでなく、動物性、植物性に関
係なく様々な起源の生理機能を有するスクシニル
化されたタンパク質誘導体にもまた特徴的なもの
である。 前記のごとく、非修飾型（non−modified
type）動物性タンパク質あるいは植物性タンパク
質の多くは鉄と結合するのに適している。非修飾
型乳タンパク質、オバルブミン、ダイズタンパク
質、血清タンパク質、臓器から抽出されたタンパ
ク質（たとえば肝臓）を前記の条件で鉄と反応さ
せて相当するスクシニル化されたタンパク質誘導
体をえるとき、その生成物の溶解度および安定性
はまつたく異なるが、鉄含有量は類似している。
たとえば、第１表に示すように、ダイズタンパク
質はその最終生成物が冷凍乾燥したとき75％を超
えて不溶であり、胃液で処理するとその鉄を遊離
した。さらに、鉄に関する複雑な挙動に加えて、
本発明のスクシニル化されたタンパク質の鉄誘導
体の挙動（たとえば、アルカリ溶媒への溶解度、
酸性溶媒中での安定性および鉄含有量が高いばあ
いの胃液中の安定性）は元のタンパク質の性質か
ら推測することができない。 【表】 （毒性） (a) 実施例１でえられた乳タンパク質の鉄スクシ
ニルタンパク質をキヤリアーとして蒸留水を用
い、胃消息子（gastric probe）によつてスイ
ス種マウスに経口投与して急性毒性をテストし
た。LD50値は4000mg／Kg体重を超えた。 (b) 実施例１でえられた鉄誘導体（以下、
Ferrolatという）を、14日間監禁したのち任意
に10群に分けた体重200ｇのオスのウイスター
種ラツトに20日間連続して経口投与したときの
毒性を記録した（第１群：対照（controls）、
第２、第３および第４群のFerrolat量はそれぞ
れ30、100、300mg／Kg／日）。 使用時に供試化合物を蒸留水に溶解せしめ、毎
日同じ時刻に消息子を使用して投与した。対照に
も同量の水道水（10ml／Kg）を与えた。実験中、
ラツトの体重は供試化合物を投与する前の毎日と
投与後の数時間は、増加しつづけた。食餌摂取量
を投与終了時および最終投与後24時間時に測定し
た。ついで20時間絶食させたのち被験動物をエー
テルで麻酔し、頚動脈を切つて殺した。血液の一
部分を、EDTA（４％溶液２滴）を含有する試験
管に集め、残りを血清として保存した。全血に関
しては血液血色素計（haemo
chromocytometer）を用いて分析を行ない、血
清に関しては血液化学的なテストを行なつた。 つぎに叙上の各試験の結果を示す。 （体重変化と食餌摂取量） 第９図に、被験動物を殺すまでの投与期間にお
ける体重増加曲線を示す。 第２表および第３表にそれぞれ投与期間中の動
物の体重変化と食餌摂取量とを示す。 【表】 【表】 Ferrolatを毎日300mg／Kg投与した群のラツト
の体重増加曲線は、投与後15日めから対照群のラ
ツトの体重増加曲線よりも著しく下降しており、
食餌摂取量は平均で11.7％のマイナスであつた。 統計的観点からは重要ではないが、Ferrolat投
与したラツトのその他の群に関してもわずかな差
異が認められた。 （血液学的試験） 結果を第４表に示す。 【表】 （血液化学的試験） 結果を第５表に示す。 【表】 第５表に示したごとくFerrolatを300mg／Kg体
重／日投与したラツトに、アルカリホスフアター
ゼのわずかの減少がみられた。 （尿試験） 結果を第６表に示す。 【表】 （臓器試験） 第７表にラツトの主要臓器の絶対平均重量を、
第８表に体重に対する相対重量を％で示す。 【表】 【表】 Ferrolatを100mg／Kg体重／日投与したラツト
の群において脾臓と肺の相対重量の顕著な増加が
みられた。Ferrolatを300mg／Kg体重／日投与し
たラツトの群において体重の顕著な減少および睾
丸の平均重量の顕著な増加がみられた。 （経口投与後の血液レベル） (a) Ferrolatと硫酸第１鉄の比較 体重約200ｇのオスのウイスター種ラツトを
18時間絶食させたのち、任意に５群に分け、お
のおのの群を時間を決めて殺し、すべての動物
の頚動脈から採血した。血液中の鉄の量を群の
すべての動物について、深色（batho）フエナ
ントロリンスルホン酸を用いて分光学的に定量
した（Fe−テスト、Wako）。供試化合物は水
溶液にして消息子を用いて経口投与した（５
ml／Kg体重）。供試化合物としては実施例１で
えられたFerrolatと硫酸第１鉄を用いた。ただ
し両誘導体の投与量を体重１Kg当りの鉄の量が
等しくなるように（１mg／Kg）調節した。結果
を第９表に示す。 【表】 (b) Ferrolatとフエリチンの比較 体重約200ｇのオスのウイスター種ラツトを
18時間絶食させたのち、任意に９群に分け、お
のおのの群を時間を決めて殺し、すべての動物
の頚動脈から採血した。血液中の鉄の量を群の
すべての動物について、鉄比色法（Iron
Colorimetric Method）（Boehringer−
Mannheim）により分光学的に定量した。供試
化合物は水溶液にして消息子を用いて経口投与
した（５ml／Kg）。ただし供試化合物の
Ferrolatとフエリチン（Ｆ−4503、シグマ社
製、St Louis Missouri）の投与量を両者の体
重１Kg当りの鉄量が等しくなるように（１mg／
Kg）調節した。結果を第10表に示す。 【表】 (c) 異なつたタンパク質からえられたスクシニル
鉄タンパク質誘導体間の比較 体重約200ｇのオスのウイスター種ラツトを
18時間絶食させてのち、任意に５群に分け（鉄
誘導体を投与する群と、対照群）、おのおのの
群を投与後２時間で殺し、すべての動物の頚動
脈から採血した。血液中の鉄の量を群のすべて
の動物について、深色フエナントロリンスルホ
ン酸を用いて分光学的に定量した（Fe−テス
ト、Wako）。供試化合物を水溶液にして消息
子を用いて経口投与した（５ml／Kg）。使用さ
れる、おのおのの誘導体の投与量は、１mg／Kg
の鉄が常に投与されるように調節した。 供試化合物： (1) スクシニル化されたダイズタンパク質＋
Fe（4.42％） (2) スクシニル化されたオバルブミン＋Fe
（3.57％） (3) スクシニル化されたウシ血清タンパク質＋
Fe（5.78％） (4) スクシニル化された乳タンパク質＋Fe（4.5
％）（Ferrolat） 結果を第11表に示す。 【表】 【表】 本発明はまた、本発明のスクシニル鉄タンパク
質を有効成分とするヒトまたは動物の鉄欠乏性貧
血治療作用を有する医薬に関する。 本発明の化合物はたとえば錠剤、カプセル、ア
ンプル、顆粒分包、シロツプ、飼料添加用の粉末
などの形態で経口的に投与しうる。 以下に処方例をあげる。 (1) 鉄スクシニルタンパク質の形で鉄を５〜10〜
40mg、水性溶媒、安定剤、芳香剤など一般に薬
に使用される添加物を含有するアンプル剤。 (2) 鉄スクシニルタンパク質の形で鉄を５〜10〜
40mg、賦形剤、分散剤など一般に薬に使用され
る添加物を含有する錠剤。 (3) 鉄スクシニルタンパク質の形で鉄を５〜10〜
40mg含有するカプセル剤。 (4) 鉄スクシニルタンパク質の形で鉄を５〜10〜
40mg、糖類、芳香剤、安定剤など一般に薬に使
用される添加物を含有する発泡顆粒を含む分包
剤。 (5) 有効成分を重量で５〜20％含有する離乳食添
加用粉乳。
塩とを適正なPH範囲で処理することによりえら
れ、該スクシニル化の程度が20〜100％であり、
生物学的に利用し得る鉄を0.1〜20重量％好まし
くは0.8重量％以上含有するスクシニル化された
タンパク質に関する。該タンパク質は完全な薬剤
耐性を有し、鉄を最適に生物学的に利用する特徴
を有する。 あらゆる生体組織に存在する鉄は、生理学上必
要不可欠な役割を演じている。鉄はヘモグロビ
ン、ミオグロビンおよびカタラーゼ、フマル酸−
デヒドロゲナーゼ、ペルオキシダーゼ、チトクロ
ム類、DPN−チトクロムレダクターゼ、フエロ
フラビンのような金属フラボタンパク質などの酵
素の部分的および本質的構成成分である。成人の
身体組織は1.5〜５ｇの鉄を含有し、そのうちの
60〜65％は赤血球に集中しており、18〜30％は肝
臓、脾臓、骨髄および内皮細胞の網状組織細胞に
局在しているフエリチンタンパク質およびヘモジ
デリン（haemosiderin）に結合している。残り
は上記の多くの酵素系に散在しており、ミオグロ
ビンに約４％、腸由来の鉄を血液にのせて輸送す
るβ1グロブリンであるトランスフエリンに約0.1
％含有されている。生理的PH値において２つの鉄
原子を実際上分割できない方法で結合することが
できる。 鉄の補給は、古い赤血球の破壊による生体内の
鉄の使用と外部から鉄を吸収することで満たされ
る。外部からの鉄は十二脂腸および空腸の上部で
吸収され、主として肝臓に蓄積される。鉄欠乏に
よる初期の病理学的微候は血色素増加性
（hyperchromic）鉄欠乏性貧血であり、その主な
原因は胃および十二脂腸潰瘍あるいは胃および十
二脂腸腫瘍での慢性の出血、下痢時の食事量不足
あるいは食事の吸収不良、たとえば妊娠、授乳
期、感染症などによる鉄の需要増加、代謝不良、
副じん皮質刺激ホルモン（ACTH）およびコル
チゾンの投与などの特殊療法などである。 そのばあい最適な療法は鉄を投与することであ
る。それによつて、実際に鉄欠乏から誘引される
貧血であれば、該貧血状態を効果的に回復する。
しかしながら、一般に、鉄に使用される媒体（ベ
クトル（vector））の型に関係した好ましくない
副作用が伴う。経口薬に最も一般的な製剤法は幾
多の有機酸塩および無機酸塩に基づき、徐々に上
記の副作用を軽減するよう療法に導入する。した
がつて経口薬は塩化第二鉄、硫酸第一鉄、リン酸
第二鉄などの無機塩類、あるいはクエン酸塩、コ
リンの塩、アスパラギン酸塩、フマル酸塩、グル
コン酸塩、グリシン酸塩、乳酸塩、シユウ酸塩、
コハク酸塩などの有機塩類にして用いられる。深
部筋肉注射（deep intramuscular
administration）のばあいは、鉄−デキストラン
錯体が、経口投与では効果が現われない鉄欠乏性
貧血に対する静脈注射では鉄−デキストリン錯体
が使用されている。 鉄−デキストリンの錯体を用いるばあいの副作
用は筋肉注射したばあいのアレルギー反応、発
熱、頻拍、白血球増加、リンパ節疾患および静注
投与したばあいのアナフイラキシーシヨツク、血
栓性静脈炎、循環虚脱の形で現われる。叙上の化
合物に基づいた処方を用いて経口投与したばあ
い、一般に副作用は粘膜の壊死および穿孔などの
胃腸障害、より重篤なばあいは下痢および嘔吐を
おこす。さらに薬剤耐性が低いと鉄の適量を投与
することが困難となる。副作用を最小限にくいと
めるために、投与と同時に食事をとることが提案
されているが、そのばあい食物中に元々含まれて
いる鉄のため鉄の摂取量が変わつてしまう。実際
製剤からの鉄の摂取は患者が絶食したときに最適
であることが確認された。さらに胃の炎症
（gastric irritation）は胃酸中和剤の使用に起因
しており、吸収量が減少し、貧血症状が悪化す
る。 鉄療法、とくに経口投与による鉄療法が専門的
なフエリチンの市場が導入されて急激に進歩し
た。 フエリチンは第２鉄のグロブリンで哺乳動物の
身体に最重要な鉄含有タンパク質である。商品と
して販売されているのは原材料としてウマの脾臓
から抽出されたものである。 フエリチンの鉄含有率は乾燥重量として20％で
ある。そのタンパク質部分であるアポフエリチン
は分子量が約44500であり、リン酸鉄酸化物の結
晶の核を取り囲んでいて、水に可溶であるので経
口投与に適している。 フエリチンを投与したとき、前記の鉄誘導体の
使用でおこる胃腸に対する副作用は生じない。し
かしながらフエリチンの使用は原材料が非常に高
価であること、またとくに、その抽出しようとす
る供給源に限りがあることの結果として制約され
ている。 先行技術によれば、副作用なしに吸収されるこ
とを目的とした最適な鉄のキヤリアは、タンパク
質キヤリアである。多くのタンパク質は鉄に対し
ある程度親和力を有している。動物起源のある種
のタンパク質（血清タンパク質、臓器タンパク
質、オバルブミン、ラクトタンパク質）あるいは
植物起源のタンパク質（ダイズタンパク質）を鉄
のキヤリアとして使用できるかどうか検討されて
きた。 無機の第２鉄の塩と前記単純タンパク質とを相
互作用させて鉄タンパク質誘導体を形成せしめる
のであるが、タンパク質に結合した鉄が0.5重量
％を超えるときその誘導体が不溶化すること、不
溶化したとき全鉄量のどの程度が実際にタンパク
質に結合しており、どの程度が重い胃の障害をお
こす酸化物の含水塩の形で共沈するのか、判断す
るのが困難あるいは不可能でさえあること、これ
ら誘導体の鉄に関して均質性および成分の安定性
が欠けていることなどの欠点のため、その治療上
の興味はそがれている。 さらに乳から誘導されるタンパク質を含むいく
つかの単純タンパク質のばあい、その鉄誘導体の
ほとんどは不溶であるが、可溶な鉄誘導体が、
種々のPH値で存在することが知られており、その
可溶な鉄誘導体の組成は実験パラメータのわずか
な変化で多様に変化する。 前記単純タンパク質を適正条件下で、たとえば
食料品や家畜飼料に使用するスクシニル化タンパ
ク質誘導体の製造に普通に用いられている方法を
用いてスクシニル化し鉄と反応させることによ
り、安定で、PH５を超えると可溶な、多様ではあ
るが再現性のある鉄含有量の高い鉄単純タンパク
質誘導体をえることができ、該誘導体が、胃の障
害のような副作用をおこすことなく哺乳動物に鉄
の補給のため経口投与できることが確められた。
ラツトに20日間連続で毎日経口投与しても胃の障
害はみられず、高い耐性度を示した。 ラツトを使つて、硫酸第２鉄、馬脾臓フエリチ
ン（シグマ社製、セントルイス、ミズリー州）お
よび実施例１でえられるスクシニル化された乳タ
ンパク質の鉄誘導体の形で、等量の鉄を経口投与
した後の鉄沈着の状態を比較した結果、 (a) 本発明の鉄誘導体によつて生じる血液の鉄レ
ベルには、硫酸第２鉄によつて生じる鉄レベル
に比して、持続性がみとめられ（第９表参照）、 (b) 本発明の鉄誘導体によつて生じる血液の鉄レ
ベルは、実験中６時間、標準物質のフエリチン
によつて生じる鉄レベルに比して、平均約
1.5：１の比で高いことがわかつた（第10表参
照）。 製品の許容量が高いこと、その毒性が低いこと
（スイス種マウスでLD50値が4000mg／Kg体重を超
える）、鉄レベルが高いことおよび原材料の供給
が容易であることを考慮すると、本発明の鉄誘導
体は、現在の鉄療法技術の状態を全面的に改良す
るものである。 なお、鉄を含む既知の糖タンパク質をサクシニ
ル化した誘導体が知られている（Arch.Bio−
chem.Biophys.180(2)、239〜47、1977；Ｊ、Exp.
Med.140(4)、1068〜84、1974；Ｊ、Biol.
Chem.245(19)、4988〜94、1970；Biochim.
Biophys.Acta.181、295〜304、1969）が、これ
らは構造研究のために製造されたものであつて、
１分子当り２〜８個の鉄原子しか結合することが
できず、しかも鉄との結合能力があつても一旦結
合した鉄の放出能力が乏しく、生体への鉄補給に
適さない。 因みに、本発明のサクシニル単純タンパク質
は、１分子当り100個までの鉄原子と結合するこ
とが可能であるとともに、一旦結合した鉄の放出
能力もすぐれ、生体への鉄補給に適している。 叙上のスクシニル化された鉄単純タンパク質の
物理化学的特性は実施例に記載するごとく安定で
あり再現性があり、タンパク質に結合していない
鉄が存在しないことがスクシニル化された単純タ
ンパク質と鉄とからえられる調製物が、アルカリ
溶媒（鉄イオンが酸化物の含水塩として沈殿する
条件）中に完全に溶解することによつて示され
る。 したがつて本発明は、鉄を種々の割合で含有
し、種々の程度にスクシニル化された動物性単純
タンパク質あるいは植物性単純タンパク質を含有
し、経口投与しても胃腸障害をおこさない生物学
的に利用できる哺乳動物に鉄を供給する新規な鉄
誘導体に関する。 本発明の誘導体は、哺乳動物の鉄欠乏症に起因
する貧血治療剤の有効成分として使用しうる。し
たがつて本発明は本発明の鉄誘導体を有効成分と
するヒト用あるいは動物用の貧血治療剤に関す
る。 本発明はまた、スクシニル化された単純タンパ
ク質を（それ自体公知の方法で製造される）、水
性溶媒中PH約２〜10、好ましくは中性に近いとこ
ろで鉄のイオンと反応させ、えられた生成物を、
自発的にあるいは酸性化してPHを２〜４の範囲で
析出せしめて反応液から単離するか、あるいはPH
を中性近くに調整したのち溶媒を除去して反応生
成物を単離することを特徴とするスクシニル化鉄
単純タンパク質誘導体の製造法に関する。 以下、実施例に基づいて本発明をさらに詳しく
説明するが、本発明はかかる実施例のみに限定さ
れるものではない。 実施例 １ （スクシニル化された全粉乳（whole milk
powder）タンパク質から鉄を５重量％含有す
る鉄誘導体の製造） １Kgの全粉乳（カゼイン75〜85％、残部はラク
トアルブミン、アルブミンおよびイムノグロブリ
ンから本質的に成る。）を６リツトルの0.3M炭酸
ナトリウム水溶液に懸濁させたところに、4N水
酸化ナトリウム水溶液を加え、機械的に撹拌して
PHを7.5〜８に維持調節しながら、500ｇの無水コ
ハク酸を連続的に添加した。添加終了後、さらに
室温で２〜３時間撹拌すると懸濁液は完全に溶解
し、乳白光を放つ溶液となつた。ついで該溶液を
殆んど透明になるまで遠心分離あるいは過した
のち、塩酸でPH３まで徐々に酸性化した。 えられた沈殿を遠心分離あるいは過すること
により分離し、再び水（約８リツトル）に懸濁さ
せ、該懸濁液が完全に溶解するまで（約PH7.5）
水酸化ナトリウム水溶液を加えた。遠心分離した
のち、えられた透明な溶液に塩酸を加えることに
より再びPH2.5〜３に酸性化し沈殿を再生させ、
該沈殿を過あるいは遠心分離し、PH３の塩酸で
洗浄した。該沈殿はスクシニル化されたタンパク
質からなり、そのスクシニル化の程度は用いられ
る無水コハク酸の官能量によつて変化しうるもの
であつた。実施例１のばあい、タンパク質のスク
シニル化の程度は、はじめに与えられたタンパク
質のスクシニル化されうる基に対し90％であつ
た。この沈殿を真空圧で乾燥したのち、蒸留水に
分散し、PH7.5まで水酸化ナトリウム水溶液を加
えて該沈殿を溶解し、最終的にタンパク質濃度が
約0.04ｇ／mlになるように溶液を希釈した。鉄の
塩（たとえばFeCl3など）をスクシニル化された
タンパク質に対し重量で10％含有する溶液を前記
タンパク質溶液に加えて懸濁させ機械的に撹拌し
て該懸濁を微細に分散し、PHを約2.5に落とした。
さらに室温で３時間撹拌を続けたのち該懸濁を
取し、水（約３倍量）に懸濁させ、PH7.5まで水
酸化ナトリウム水溶液を加えて該懸濁を溶解し
た。 完全には透明でないこの溶液を取し、つぎの
方法のいずれかを用いて固体生成物を再生した。 (i) 溶液を酸性化し、PH2.5でえられた沈殿を
取し、該沈殿を真空圧で乾燥した。 (ii) 透明な溶液を水で透析して塩化ナトリウムを
除去し、該溶液を凍結乾燥あるいはスプレイド
ライヤーにて乾燥した。 最終生成物の収率は上記(i)の方法、(ii)の方法の
いずれを選んでも同じで、出発物質の粉乳に対し
重量で約20％であつた。該生成物の特性を第１表
の乳タンパク質1bに示す。 実施例 ２ （スクシニル化された乳タンパク質から鉄を５
重量％含有する鉄誘導体の製造） 実施例１において粉乳の代わりに、該粉乳を水
（約５リツトル）に分散させ、鉱酸でPH2.5に酸性
化したのち固体のタンパク質を取あるいは遠心
分離し、乾燥することによつてえられる350ｇの
乳タンパク質（カゼインαとカゼインβの55：45
混合物を主成分とする）を出発物質として用いた
ほかは実施例１と同様にして目的とする鉄誘導体
をえた。 第１表に示したように実施例１および実施例２
の誘導体の鉄含有率は約４〜５重量％であつた。 実施例 ３ （スクシニル化された乳タンパク質から実施例
１および実施例２とは異なつた鉄の含有率を有
する鉄誘導体の製造） 実施例１および実施例２と同量の粉乳あるいは
予め析出させた乳タンパク質を使用し、Fe3+／
スクシニル化されたタンパク質の比が重量で
0.1：10、0.2：10、0.5：10および1.5：10にかえ
たほかは実施例１と同様にして目的とする鉄誘導
体をえた。えられた鉄誘導体の特性を第１表の乳
タンパク質ａ、ｃ、ｄ、ｅに示す。 実施例 ４ （スクシニル化された卵タンパク質（オバルブ
ミン）からの鉄誘導体の製造） ５ｇのオバルブミンを３ｇのKHCO3を含有す
る100mlの水に溶解し、NaOHの添加によりPHを
５〜８に維持しながら、透明な該溶液に2.5ｇの
無水コハク酸を連続的に添加した。添加終了後、
室温でさらに２時間反応させた。該溶液をPH3.4
に酸性化したのち、生じた沈殿を遠心分離で単離
し、該沈殿をPH7.5の水酸ナトリウム水溶液に溶
解し、ついでPH3.4にして再び析出させることに
より精製した。えられた固体を遠心分離し、真空
下に乾燥し、乾燥固体を蒸留水に懸濁し、
NaOHを添加して（PH８）該懸濁を溶解し、最
終的に溶液のタンパク濃度が0.04ｇ／mlになるよ
うにした。 Fe3+の塩（たとえば塩化第２鉄）の溶液を非
常に粘性の高い前記溶液に加え、スクシニル化さ
れたタンパク質／Fe3+の比が重量で10：１にな
るようにした。このとき、PHは2.6に下がり、沈
殿が生成した。該沈殿を取し、水に再び溶解
し、完全に溶解するまでNaOHを添加した（PH
7.5）。該溶液を水で透析して塩化ナトリウムを除
去したのち、凍結乾燥あるいはスプレイドライヤ
ーで乾燥させることにより固体生成物をえた。え
られた誘導体の収率は、出発物質のタンパク質に
対し重量で33％であつた。該誘導体の鉄含有率お
よび特性を第１表に示す。 実施例 ５ （スクシニル化されたウシ血清タンパク質から
の鉄誘導体の製造） 1.5ｇのNaHCO3を、ウシ血清タンパク質（主
としてアルブミン50〜58％およびグロブリン40〜
45％から成る）の溶液50mlに添加し、NaOHの
添加によつてPHを7.5〜８に維持しながら、６ｇ
の無水コハク酸を連続的に添加した。添加終了
後、室温でさらに２時間反応させ、ついで鉱酸で
PH2.4に酸性化することにより沈殿を生成せしめ
た。該沈殿を実施例４と同様にして遠心分離し、
精製することにより固体生成物をえた。 えられた固体生成物を水に懸濁し、NaOHを
用いて該懸濁液をPH7.5にした。えられた懸濁液
にFe3+の塩（たとえば塩化第２鉄）の水溶液を
加えて、スクシニル化されたタンパク質／Fe3+
の比が重量で10：１になるようにすると、溶液の
PHは自動的に2.4に下がり、PH7.5で一部可溶する
沈殿がえられた。遠心分離で沈殿と溶液をわけ、
溶液を水に透析することにより塩化ナトリウムを
除去した。ついで凍結乾燥することにより目的と
する鉄誘導体をえた。出発物質のタンパク質に対
し収率は重量で約30％であつた。鉄含有率および
特性を第１表に示す。 参考例 ６ （スクシニル化されたブタ肝臓タンパク質から
の鉄誘導体の製造） 400ｇの新鮮なブタ肝臓をSilversonホモジナイ
ザーを用いてPH8.3の0.2MKHCO3水溶液800ml中
でホモジナイズした。５℃、900rpmで遠心分離
したのち上澄液をとり、0.45μ厚の酢酸セルロー
ス膜を通して過した。50mlの透明な液に1.2
ｇの無水コハク酸を、NaOHを添加することに
よりPH7.5〜８に維持しながら、連続的に添加し
た。 添加終了後、該溶液を室温で１時間放置したの
ち、鉱酸でPH３に酸性化することにより沈殿をえ
た。該沈殿を実施例４と同様にして処理し、水に
透析した溶液を凍結乾燥した。 凍結乾燥してえられた残渣を水に懸濁し、ナト
リウムを用いてPH８にすることにより完全には透
明でない溶液をえた。該溶液を遠心分離し、えら
れた透明な上澄液にFe3+の塩（たとえば塩化第
２鉄）の水溶液を加えてスクシニル化されたタン
パク質／Fe3+の比が約10：１とした。 溶液のPHは2.6に下がり、沈殿が生成した。沈
殿を実施例４と同様にして精製し、水に透析した
最終溶液を凍結乾燥することにより固体の目的と
する鉄誘導体をえた。その特性および鉄含有率を
第１表に示す。 実施例 ７ （スクシニル化されたダイズタンパク質からの
鉄誘導体の製造） ５ｇのダイズタンパク質（主成分：グリシニ
ン、レグメリン、大豆−レグメリン）を、３ｇの
NaHCO3を含有する100mlの水に懸濁させた混合
物を、完全に溶解するまで撹拌し、NaOHを添
加することによりPHを7.5〜８に維持しながら、
2.5ｇの無水コハク酸を連続的に添加した。添加
終了後、室温でさらに２時間撹拌したのち、鉱酸
を加えることによりPHを3.4にした。えられた沈
殿を実施例４と同様にして精製し、凍結乾燥して
えた最終固体残渣を100mlの水に懸濁させ、
NaOHを添加することによりPHを８に修正して
えられた完全には透明でない溶液を遠心分離し
た。 えられた透明な上澄液をFe3+の塩（たとえば
塩化第２鉄）の溶液で処理し、スクシニル化され
たタンパク質／Fe3+の比が重量だ10：１になる
ようにした。自動的に溶液のPHは2.6に下がり、
沈殿が生成した。えられた沈殿を実施例４と同様
に処理し、凍結乾燥により固体の目的とする鉄誘
導体をえた。収率は出発物質のタンパク質に対し
重量で22％であつた。その特性および鉄含有率を
第１表に示す。 つぎに例１〜７でえられたスクシニル化された
タンパク質の鉄誘導体を以下に示す方法によつて
分析し、その物理化学的性質を示す。 (1) スクシニル化の程度 この特性は、初めのタンパク質中のスクシニ
ル化されうる基に対するスクシニル化された基
の百分率で表わした。S.MooreおよびW.H.
Stein（J.Biol.Chem.、211、907（1954））による
遊離のアミノ基とニンヒドリンとの反応を含む
方法を用いた。結果を第１表に示す。 (2) 鉄含有量 鉄含有量はStandard Methods、第14版、
1975、208頁、APHA−AWWA−WRCF（ｏ−
フエナントロリンとの反応）にしたがつて、
2N−HClで温時抽出したのち、あるいは硫酸
でタンパク質を完全に消化したのち定量した。
結果を第１表に示す。 (3) スペクトルデータ (i) EPRスペクトル 前記例１〜７でえられた全ての誘導体は同
じスペクトル挙動を示した。実施例１でえら
れたスクシニル鉄タンパク質誘導体のEPR
スペクトルをプロツトした。凍結乾燥してえ
た粉末を使用してスペクトルを記録したとこ
ろ約2.0を中心としたｇ値および約2000Gの
振幅をもつ非常に幅広いシグナルを示した。
さらに高分解されたシグナルでもｇ値は約
2.0を中心としていた。両シグナルともその
形はFe3+の常磁性中心の相互作用に特徴的
なものであつた（F.Reidら、Inorg.Chem.
７、119（1968））。叙上の全てのデータは結合
試剤の周囲にタンパク構造が存在することを
示すものであつた。 (ii) 円偏光二色性 例１〜７でえられた誘導体の多くは同様の
挙動を示した。実施例１でえられたスクシニ
ル鉄タンパク質誘導体の円偏光二色性スペク
トルをプロツトした。スペクトルはUV領域
で負の反応性を示すことが特徴的であり、
200nｍ付近で強い負方向への吸収帯ピーク
および225nｍを中心として負方向への肩を
示した。このスペクトルの特徴はランダムな
タンパク構造が顕著であることを示すもので
あつた（F.CiardelliおよびP.Salvadori著、
Optical Rotatory Dispersion and Circular
Dichroism、Heyden ＆ Son Ltd.刊、ロ
ンドン、４、５章（1973））。 (iii) 紫外−可視吸収スペクトル 例１〜７でえられた誘導体の多くは類似し
た電子スペクトル挙動を示した。第１図は実
施例１でえられたスクシエル鉄タンパク質誘
導体の紫外−可視吸収スペクトルである。 第１図中、実線で示したスペクトルは吸収
ピクを示さず、ただ非常に弱い肩を450nｍ
付近に表わすだけであつた。紫外領域では
270nｍ付近を中心に、はつきりそれとわか
る肩があり、220nｍ未満で非常に強い吸収
ピークを有していた。 また第１図には、比較のためウマ脾臓のフ
エリチンのスペクトルを破線で示した
（Boehringer−Mannheim）。 第１図に示した可視領域での吸収スペクト
ルはPH７の水中で測定したものであり、同条
件下でのウマ脾臓のフエリチンのスペクトル
もまた比較のために示した（Boehringer−
Mannheim）。 (iv) 螢光発光スペクトル分析 螢光発光スペクトルチヤートを第２図に示
した。図中、実線は本発明のスクシニル化さ
れた乳タンパク質の鉄誘導体に関するもので
あり、一点鎖線はラクトタンパク質に、破線
はスクシニル化されたラクトタンパク質に関
するものである。 金属の存在に起因して、タンパク質の螢光
が消化されることが観測された。 (v) 1H−NMRスペクトル Brucker cxp300を用い、D2O（１％）中、
300MHzにおいて測定した。 実施例１〜７で得られた誘導体の多くは、
類似した電子スペクトル挙動を示した。 第１０図は、実施例１で得られたスクシニ
ル鉄タンパク質誘導体の1H−NMRスペクト
ルを示す。 2.4ppmにおけるシグナルはヘミコハク酸
残基による。 (vi) 13C−NMRスペクトル VARIAN CTF20を用い、13C−NMRスペ
クトルを０〜88ppmのインターバルで記録し
た。 実施例１〜７で得られた誘導体の多くは類
似した電子スペクトル挙動を示した。 第１１図は、実施例１に準じて得られたス
クシニル鉄タンパク質（Ａ、鉄分2w／ｗ％）
と実施例１で得られたスクシニル鉄タンパク
質誘導体（Ｂ、鉄分5w／ｗ％）の13C−
NMRスペクトルを示す。 (vii) 赤外部吸収スペクトル KBr法で測定した。 実施例１〜７で得られた誘導体の多くは類
似した電子スペクトル挙動を示した。 第１２図は、実施例１で得られたスクシニ
ル鉄タンパク質誘導体の赤外部吸収スペクト
ルを示す。 下記の吸収極大を示した。 −NH2：3500〜3000cm-1； −Ｏ−Ｃ＝Ｏ：1720、1250、1000cm-1； −CH2−CO−：1450cm-1； −CH2−：1100cm-1； −CH−：700cm-1； (4) 電気泳動法 スクシニル化されたタンパク質、比較のため
のスクシニル化されていないタンパク質および
フエリチンをセルロースアセテート膜上で電気
泳動し、その結果をそれぞれ第３〜５図に示
す。 第３図は、ダイズタンパク質（像１）、スク
シニル化されたダイズタンパク質（像２）、ス
クシニル化されたダイズタンパク質の鉄誘導体
（像３）、ダイズタンパク質の鉄誘導体の可溶分
のフラクシヨン（像４）の電気泳動の結果を示
す。 第４図は、オバルブミン（像１）、スクシニ
ル化されたオバルブミン（像２）、スクシニル
化されたオバルブミンの鉄誘導体（像３）、オ
バルブミンの鉄誘導体（像４）の電気泳動の結
果を示す。 第５図は、ラクトタンパク質（像１）、スク
シニル化されたラクトタンパク質（像２）、ス
クシニル化されたラクトタンパク質の鉄誘導体
（像３）、ウマ脾臓フエリチン（像４）の電気泳
動の結果を示す。 第６図に、電気泳動後にデンシトメータを用
いて550nｍの光でスキヤニングした結果を示
す。第６図中、実線はスクシニル化されたラク
トタンパク質の鉄誘導体、一点鎖線はスクシニ
ル化されたダイズタンパク質の鉄誘導体および
破線はスクシニル化されたオバルブミンの鉄誘
導体のものである。 (5) ゲル過 セフアデクスG75（Pharmacia社製、
Uppsala）を使用し、スクシニル化された乳タ
ンパク質と実施例１でえられたその鉄誘導体と
をゲル過した。その結果を第７図に図示す
る。第７図中、実線はスクシニル化された乳タ
ンパク質、破線はその鉄誘導体に関するもので
あり、縦軸は280nｍでの吸光度、横軸はフラ
クシヨン番号である。第７図に示すように、鉄
が存在すると、カラムのボイド（void）の保持
時間に類似した保持時間を有する１つのピーク
が現われた。セフアデクスG75が排除できる分
子量は約75000ダルトン（Daltons）であり、
フラクシヨンを総計してえられる見かけの最小
分子量は、75000ダルトンより大きかつた。ま
た鉄が存在しないと異なる溶出パターンの不明
瞭な２つのピークが記録された。この現象は電
気泳動法においても観測された（第５図）。叙
上に示した電気泳動またはゲル過における挙
動は、鉄がタンパク質体全体の中心に位置して
いることを示すものであつた。さらにセフアデ
クスG200によるゲル過をスクシニル化され
た乳タンパク質の鉄誘導体および比較のためフ
エリチンについて行なつた（第８図参照。図
中、縦軸と横軸とは第７図に同じ。実線はスク
シニル化された乳タンパク質の鉄誘導体、破線
はウマ脾臓のフエリチンに関する）。このばあ
いもまたピークは明瞭であり、本発明の鉄誘導
体の保持時間がフエリチンの保持時間よりも大
きいことから該鉄誘導体の見かけの分子量はウ
マ脾臓フエリチンの分子量よりも小さいことが
わかる。 (6) 溶解性 実施例１〜７で得られた誘導体は中性および
アルカリ性のPH域で水に可溶である。 水と混和しない有機溶媒、並びにアルコール
およびアセトンに不溶である。 (7) 呈色反応 実施例１〜７で得られた誘導体を0.1％含む
PH８の水の溶液10mlに５％フエリシアン化カリ
ウムを加え、希HClで酸性にすると青色沈殿を
生ずる。 同じく５％溶液50mlに6N HCl5mlを加える
と白色のかさばつた沈殿を生ずる。 NH4OHで処理したsurnatantは水酸化鉄か
らなる赤褐色の沈殿を生ずる。 (8) アミノ酸組成 本願発明のスクシニル鉄タンパク質の代表と
みなされる、実施例１で得られたスクシニル鉄
乳タンパク質誘導体（鉄分5w／ｗ％）のアミ
ノ酸組成（±10％）は下記の通りである。 （％） アスパラギン酸／アスパラギン 6.77 スレオニン 3.91 セリン 4.77 グルタミン酸／グルタミン 22.06 プロリン 10.16 グリシン 1.77 アラニン 2.90 システイン − バリン 6.49 メチオニン 2.69 イソロイシン 5.34 ロイシン 9.10 チロシン 5.79 フエニルアラニン 4.50 ヒスチジン 2.87 リジン 7.07 アルギニン 3.73 コハク酸含量：タンパク質の含量の7.7％ (9) 元素分析値 本願発明のスクシニル鉄タンパク質誘導体の
代表とみなされる、実施例１で得られたスクシ
ニル鉄タンパク質誘導体（鉄分５％）の元素分
析値（％）は下記のとおりである。 Ｃ：44.61％；Ｈ：6.17％ Ｎ：11.22％；Cl：1.76％ Ｐ：0.85％；Ｓ：0.58％ (10) 胃液中での安定性 実施例１でえられた鉄誘導体を用いて行なつ
た。25mgの前記鉄誘導体を0.5mlの蒸留水に溶
解したところに５mlのラツトの胃液を加えた。
沈殿が生成した懸濁液を37℃で60分間撹拌した
のち、遠心分離して該沈殿を除去し、上澄液の
鉄含有量を分析した結果、胃液により遊離した
鉄の量は最初の量の１％であつた。 (7) 硫酸アンモニウムによる鉄誘導体の沈殿 30重量％の硫酸アンモニウム溶液を、実施例
１でえられた鉄誘導体10重量％溶液に加えてタ
ンパク質の鉄誘導体の沈殿を生成せしめた。該
沈殿は用いた鉄誘導体と同じ特性を有し、依然
として水に可溶であり液中には鉄は存在しな
かつた。 叙上のデータから、鉄に対するスクシニル化さ
れたタンパク質の複合体形成能（complexing
capacity）は、スクシニル化された乳タンパク質
だけに典型的なものでなく、動物性、植物性に関
係なく様々な起源の生理機能を有するスクシニル
化されたタンパク質誘導体にもまた特徴的なもの
である。 前記のごとく、非修飾型（non−modified
type）動物性タンパク質あるいは植物性タンパク
質の多くは鉄と結合するのに適している。非修飾
型乳タンパク質、オバルブミン、ダイズタンパク
質、血清タンパク質、臓器から抽出されたタンパ
ク質（たとえば肝臓）を前記の条件で鉄と反応さ
せて相当するスクシニル化されたタンパク質誘導
体をえるとき、その生成物の溶解度および安定性
はまつたく異なるが、鉄含有量は類似している。
たとえば、第１表に示すように、ダイズタンパク
質はその最終生成物が冷凍乾燥したとき75％を超
えて不溶であり、胃液で処理するとその鉄を遊離
した。さらに、鉄に関する複雑な挙動に加えて、
本発明のスクシニル化されたタンパク質の鉄誘導
体の挙動（たとえば、アルカリ溶媒への溶解度、
酸性溶媒中での安定性および鉄含有量が高いばあ
いの胃液中の安定性）は元のタンパク質の性質か
ら推測することができない。 【表】 （毒性） (a) 実施例１でえられた乳タンパク質の鉄スクシ
ニルタンパク質をキヤリアーとして蒸留水を用
い、胃消息子（gastric probe）によつてスイ
ス種マウスに経口投与して急性毒性をテストし
た。LD50値は4000mg／Kg体重を超えた。 (b) 実施例１でえられた鉄誘導体（以下、
Ferrolatという）を、14日間監禁したのち任意
に10群に分けた体重200ｇのオスのウイスター
種ラツトに20日間連続して経口投与したときの
毒性を記録した（第１群：対照（controls）、
第２、第３および第４群のFerrolat量はそれぞ
れ30、100、300mg／Kg／日）。 使用時に供試化合物を蒸留水に溶解せしめ、毎
日同じ時刻に消息子を使用して投与した。対照に
も同量の水道水（10ml／Kg）を与えた。実験中、
ラツトの体重は供試化合物を投与する前の毎日と
投与後の数時間は、増加しつづけた。食餌摂取量
を投与終了時および最終投与後24時間時に測定し
た。ついで20時間絶食させたのち被験動物をエー
テルで麻酔し、頚動脈を切つて殺した。血液の一
部分を、EDTA（４％溶液２滴）を含有する試験
管に集め、残りを血清として保存した。全血に関
しては血液血色素計（haemo
chromocytometer）を用いて分析を行ない、血
清に関しては血液化学的なテストを行なつた。 つぎに叙上の各試験の結果を示す。 （体重変化と食餌摂取量） 第９図に、被験動物を殺すまでの投与期間にお
ける体重増加曲線を示す。 第２表および第３表にそれぞれ投与期間中の動
物の体重変化と食餌摂取量とを示す。 【表】 【表】 Ferrolatを毎日300mg／Kg投与した群のラツト
の体重増加曲線は、投与後15日めから対照群のラ
ツトの体重増加曲線よりも著しく下降しており、
食餌摂取量は平均で11.7％のマイナスであつた。 統計的観点からは重要ではないが、Ferrolat投
与したラツトのその他の群に関してもわずかな差
異が認められた。 （血液学的試験） 結果を第４表に示す。 【表】 （血液化学的試験） 結果を第５表に示す。 【表】 第５表に示したごとくFerrolatを300mg／Kg体
重／日投与したラツトに、アルカリホスフアター
ゼのわずかの減少がみられた。 （尿試験） 結果を第６表に示す。 【表】 （臓器試験） 第７表にラツトの主要臓器の絶対平均重量を、
第８表に体重に対する相対重量を％で示す。 【表】 【表】 Ferrolatを100mg／Kg体重／日投与したラツト
の群において脾臓と肺の相対重量の顕著な増加が
みられた。Ferrolatを300mg／Kg体重／日投与し
たラツトの群において体重の顕著な減少および睾
丸の平均重量の顕著な増加がみられた。 （経口投与後の血液レベル） (a) Ferrolatと硫酸第１鉄の比較 体重約200ｇのオスのウイスター種ラツトを
18時間絶食させたのち、任意に５群に分け、お
のおのの群を時間を決めて殺し、すべての動物
の頚動脈から採血した。血液中の鉄の量を群の
すべての動物について、深色（batho）フエナ
ントロリンスルホン酸を用いて分光学的に定量
した（Fe−テスト、Wako）。供試化合物は水
溶液にして消息子を用いて経口投与した（５
ml／Kg体重）。供試化合物としては実施例１で
えられたFerrolatと硫酸第１鉄を用いた。ただ
し両誘導体の投与量を体重１Kg当りの鉄の量が
等しくなるように（１mg／Kg）調節した。結果
を第９表に示す。 【表】 (b) Ferrolatとフエリチンの比較 体重約200ｇのオスのウイスター種ラツトを
18時間絶食させたのち、任意に９群に分け、お
のおのの群を時間を決めて殺し、すべての動物
の頚動脈から採血した。血液中の鉄の量を群の
すべての動物について、鉄比色法（Iron
Colorimetric Method）（Boehringer−
Mannheim）により分光学的に定量した。供試
化合物は水溶液にして消息子を用いて経口投与
した（５ml／Kg）。ただし供試化合物の
Ferrolatとフエリチン（Ｆ−4503、シグマ社
製、St Louis Missouri）の投与量を両者の体
重１Kg当りの鉄量が等しくなるように（１mg／
Kg）調節した。結果を第10表に示す。 【表】 (c) 異なつたタンパク質からえられたスクシニル
鉄タンパク質誘導体間の比較 体重約200ｇのオスのウイスター種ラツトを
18時間絶食させてのち、任意に５群に分け（鉄
誘導体を投与する群と、対照群）、おのおのの
群を投与後２時間で殺し、すべての動物の頚動
脈から採血した。血液中の鉄の量を群のすべて
の動物について、深色フエナントロリンスルホ
ン酸を用いて分光学的に定量した（Fe−テス
ト、Wako）。供試化合物を水溶液にして消息
子を用いて経口投与した（５ml／Kg）。使用さ
れる、おのおのの誘導体の投与量は、１mg／Kg
の鉄が常に投与されるように調節した。 供試化合物： (1) スクシニル化されたダイズタンパク質＋
Fe（4.42％） (2) スクシニル化されたオバルブミン＋Fe
（3.57％） (3) スクシニル化されたウシ血清タンパク質＋
Fe（5.78％） (4) スクシニル化された乳タンパク質＋Fe（4.5
％）（Ferrolat） 結果を第11表に示す。 【表】 【表】 本発明はまた、本発明のスクシニル鉄タンパク
質を有効成分とするヒトまたは動物の鉄欠乏性貧
血治療作用を有する医薬に関する。 本発明の化合物はたとえば錠剤、カプセル、ア
ンプル、顆粒分包、シロツプ、飼料添加用の粉末
などの形態で経口的に投与しうる。 以下に処方例をあげる。 (1) 鉄スクシニルタンパク質の形で鉄を５〜10〜
40mg、水性溶媒、安定剤、芳香剤など一般に薬
に使用される添加物を含有するアンプル剤。 (2) 鉄スクシニルタンパク質の形で鉄を５〜10〜
40mg、賦形剤、分散剤など一般に薬に使用され
る添加物を含有する錠剤。 (3) 鉄スクシニルタンパク質の形で鉄を５〜10〜
40mg含有するカプセル剤。 (4) 鉄スクシニルタンパク質の形で鉄を５〜10〜
40mg、糖類、芳香剤、安定剤など一般に薬に使
用される添加物を含有する発泡顆粒を含む分包
剤。 (5) 有効成分を重量で５〜20％含有する離乳食添
加用粉乳。
第１図は実施例１でえられたスクシニル鉄タン
パク質誘導体およびウマ脾臓フエリチンの紫外お
よび可視吸収スペクトルのチヤート、第２図は本
発明のスクシニル鉄タンパク質誘導体、ラクトタ
ンパク質およびスクシニル化されたラクトタンパ
ク質の螢光発光スペクトルのチヤート、第３図は
ダイズタンパク質、スクシニル化されたダイズタ
ンパク質、スクシニル化されたダイズタンパク質
の鉄誘導体およびダイズタンパク質の鉄誘導体の
電気泳動の結果を示すチヤート、第４図はオバル
ブミン、スクシニル化されたオバルブミン、スク
シニル化されたオバルブミンの鉄誘導体およびオ
バルブミンの鉄誘導体の電気泳動の結果を示すチ
ヤート、第５図はラクトタンパク質、スクシニル
化されたラクトタンパク質、スクシニル化された
ラクトタンパク質の鉄誘導体およびウマ脾臓フエ
リチンの電気泳動の結果を示すチヤート、第６図
はスクシニル化されたラクトタンパク質の鉄誘導
体、スクシニル化されたダイズタンパク質の鉄誘
導体およびスクシニル化されたオバルブミンの鉄
誘導体を電気泳動せしめたのちデンシトメータを
用い550nｍ波長の光でスキヤニングした結果を
示すチヤート、第７図はスクシニル化されたラク
トタンパク質およびスクシニル化されたラクトタ
ンパク質の鉄誘導体をセフアデクスG75を用いて
ゲル過したときの溶出経過にともなう280nｍ
波長での吸収スペクトル変化、第８図はスクシニ
ル化されたラクトタンパク質の鉄誘導体およびウ
マ脾臓フエリチンをセフアデクスG200を用いて
ゲル過したときの溶出経過にともなう280nｍ
波長での吸収スペクトル変化および第９図は対照
ラツトおよびFerrolatを毎日30、100、300mg／Kg
体重投与したラツトの体重増加曲線であり、それ
ぞれ図中の１，２，３，４が対応する。第１０図
は、実施例１で得られたスクシニル鉄タンパク質
誘導体の1H−NMRスペクトルを示す。第１１図
は、実施例１に準じて得られたスクシニル鉄タン
パク質誘導体（鉄分２％）と実施例１で得られた
スクシニル鉄タンパク質誘導体（鉄分５％）の
13C−NMRスペクトルを示す。図において前者
をＡ、後者をＢで表わす。第１２図は、実施例１
で得られたスクシニル鉄タンパク質誘導体の赤外
吸収スペクトルを示す。
パク質誘導体およびウマ脾臓フエリチンの紫外お
よび可視吸収スペクトルのチヤート、第２図は本
発明のスクシニル鉄タンパク質誘導体、ラクトタ
ンパク質およびスクシニル化されたラクトタンパ
ク質の螢光発光スペクトルのチヤート、第３図は
ダイズタンパク質、スクシニル化されたダイズタ
ンパク質、スクシニル化されたダイズタンパク質
の鉄誘導体およびダイズタンパク質の鉄誘導体の
電気泳動の結果を示すチヤート、第４図はオバル
ブミン、スクシニル化されたオバルブミン、スク
シニル化されたオバルブミンの鉄誘導体およびオ
バルブミンの鉄誘導体の電気泳動の結果を示すチ
ヤート、第５図はラクトタンパク質、スクシニル
化されたラクトタンパク質、スクシニル化された
ラクトタンパク質の鉄誘導体およびウマ脾臓フエ
リチンの電気泳動の結果を示すチヤート、第６図
はスクシニル化されたラクトタンパク質の鉄誘導
体、スクシニル化されたダイズタンパク質の鉄誘
導体およびスクシニル化されたオバルブミンの鉄
誘導体を電気泳動せしめたのちデンシトメータを
用い550nｍ波長の光でスキヤニングした結果を
示すチヤート、第７図はスクシニル化されたラク
トタンパク質およびスクシニル化されたラクトタ
ンパク質の鉄誘導体をセフアデクスG75を用いて
ゲル過したときの溶出経過にともなう280nｍ
波長での吸収スペクトル変化、第８図はスクシニ
ル化されたラクトタンパク質の鉄誘導体およびウ
マ脾臓フエリチンをセフアデクスG200を用いて
ゲル過したときの溶出経過にともなう280nｍ
波長での吸収スペクトル変化および第９図は対照
ラツトおよびFerrolatを毎日30、100、300mg／Kg
体重投与したラツトの体重増加曲線であり、それ
ぞれ図中の１，２，３，４が対応する。第１０図
は、実施例１で得られたスクシニル鉄タンパク質
誘導体の1H−NMRスペクトルを示す。第１１図
は、実施例１に準じて得られたスクシニル鉄タン
パク質誘導体（鉄分２％）と実施例１で得られた
スクシニル鉄タンパク質誘導体（鉄分５％）の
13C−NMRスペクトルを示す。図において前者
をＡ、後者をＢで表わす。第１２図は、実施例１
で得られたスクシニル鉄タンパク質誘導体の赤外
吸収スペクトルを示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 全粉乳、乳タンパク質、卵タンパク質、ウシ
血清タンパク質およびダイズタンパク質から選ば
れた単純タンパク質含有材料をスクシニル化し、
次いで得られたスクシニル化タンパク質を鉄の塩
と反応させることにより得られる、スクシニル化
の程度が20〜100％であり且つ生物学的に利用可
能な鉄を0.8重量％以上含有するスクシニル化鉄
タンパク質。 ２ スクシニル化の程度が70％を超え、生物学的
に利用可能な鉄を４重量％を超えて含有する乳タ
ンパク質である、特許請求の範囲第１項記載のス
クシニル化鉄タンパク質。 ３ スクシニル化の程度が70％を超え、生物学的
に利用可能な鉄を４重量％を超えて含有する卵タ
ンパク質である、特許請求の範囲第１項記載のス
クシニル化鉄タンパク質。 ４ スクシニル化の程度が70％を超え、生物学的
に利用可能な鉄を４重量％を超えて含有するダイ
ズタンパク質である、特許請求の範囲第１項記載
のスクシニル化鉄タンパク質。 ５ スクシニル化された、全粉乳、乳タンパク
質、卵タンパク質、ウシ血清タンパク質およびダ
イズタンパク質から選ばれた単純タンパク質含有
材料と鉄の塩とをPH２〜10の水溶液中で反応さ
せ、ついで酸性化することによりあるいは自発的
に、PH２〜４の範囲で析出させて得られた生成物
を単離することを特徴とする、スクシニル化の程
度が20〜100％であり、生物学的に利用できる鉄
を0.8重量％以上含有するスクシニル化鉄タンパ
ク質の製造法。 ６ スクシニル化された単純タンパク質含有材料
と鉄の塩との反応を中性に近いPHで行うことを特
徴とする、特許請求の範囲第５項記載の製造法。 ７ スクシニル化された単純タンパク質含有材料
と鉄の塩とをPH２〜10の水溶液中で反応させ、つ
いで該水溶液のPHを中性に近づけたのち、溶媒を
除去することによりえられる反応生成物を単離す
ることを特徴とする、特許請求の範囲第５項記載
の製造法。 ８ 有効成分として、全粉乳、乳タンパク質、卵
タンパク質、ウシ血清タンパク質およびダイズタ
ンパク質から選ばれた単純タンパク質含有材料か
ら製造された、生物学的に利用できる鉄を0.8重
量％以上含有し且つスクシニル化の程度が20〜
100％のスクシニル化鉄タンパク質を有効量含有
する、ヒトまたは動物の鉄欠乏性貧血治療剤。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT19908/82A IT1150213B (it) | 1982-03-02 | 1982-03-02 | Derivati di ferro biodisponibile esenti da gastrolesivita',procentimento di preparazione e relative composizioni farmaceutiche |
| IT19908A/82 | 1982-03-02 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58159421A JPS58159421A (ja) | 1983-09-21 |
| JPH0470317B2 true JPH0470317B2 (ja) | 1992-11-10 |
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ID=11162241
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58033718A Granted JPS58159421A (ja) | 1982-03-02 | 1983-03-01 | 胃損傷をおこさない生物学的に利用できる鉄誘導体、その製造法およびそれを有効成分とする医薬 |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
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| JP (1) | JPS58159421A (ja) |
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| IT1207996B (it) * | 1986-03-18 | 1989-06-01 | Magis Farmaceutici | Composti contenenti ferro biodisponibile, procedimento per la loro preparazione e composizioni farmaceutiche che li contengono. |
| JP2520262B2 (ja) * | 1987-08-21 | 1996-07-31 | 春幸 川原 | パツチテスト材料 |
| IT1222912B (it) * | 1987-10-14 | 1990-09-12 | Italfarmaco Spa | Derivati polipeptidici a elevato tenore di ferro e altamente solubili atti alla terapia marziale procedimenti di preparazione e loro forme farmaceutiche |
| IT1223122B (it) * | 1987-11-13 | 1990-09-12 | Unibios Spa | Derivati proteici del ferro altamente biodisponibile e tollerabili, loro preparazione e composizioni farmaceutiche che li contengono |
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| IT1237783B (it) * | 1989-11-16 | 1993-06-17 | Italfarmaco Spa | Derivati di ferro-albumina biodisponibile, loro procedimento di preparazione e relative composizioni farmaceutiche. |
| IT1251702B (it) * | 1991-10-16 | 1995-05-19 | Mediolanum Farmaceutici Srl | Complessi del ferro con la conalbumina e i suoi derivati |
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