JPH0471915B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、新規抗生物質３−ヒドロキシセゾマ
イシンおよびその製造法に関する。 〔従来の技術〕 従来、酸性多環式エーテル系抗生物質としては
モネンシン（Monensin）〔J.Am.Chem.Soc.，
89、5737〜5739（1967）〕、ラサロシド
（Lasalocid）〔J.Am.Chem.Soc.，92，4428〜
4434（1970）、サリノマイシン（Salinomycin）
〔J.Antibiotics，27，814〜821（1970）〕、セゾマイ
シン（Cezomycin）〔J.Antibiotics，35，1409〜
1411（1982）〕、Ｘ−14885A〔J.Antibiotics，36，
1275〜1278（1983）〕などが挙げられる。これらの
抗生物質は、種々の微生物に対して抗菌活性を有
するばかりでなく、特にニワトリの抗コクシジウ
ム症活性を有し、ブタおよび反芻動物の成長促進
および飼料利用効率増強に有効である。 〔発明が解決しようとする問題点〕 本発明は、新規で有用な抗生物質を提供するこ
とを目的とするものである。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明者らは新規な抗生物質の探索を目的とし
て多数の微生物を土壌中より分離し、その産生す
る抗生物質を分離し、その生物学的性質を調べた
ところ、長野県左久郡南牧村の畑土壌より分離し
た放線菌AC7230株がグラム陽性菌に対して抗菌
活性を示す抗生物質が生産されることを見出し
た。そして該培養物からこの抗生物質を単離し、
その理化学的性質を調べた結果、後述の構造式を
有する新規物質であることを確認し、この抗生物
質を３−ヒドロキシセゾマイシン（３−
Hydroxycezomycin）と命名した。即ち、本発
明は、式 で表わされる抗生物質３−ヒドロキシセゾマイシ
ンまたはその塩およびその製造法を提供するもの
である。 本発明者らによつて分離された抗生物質３−ヒ
ドロキシセゾマイシンを生産する菌株AC7230株
は次の菌学的性質を有する。 （） 形態的特徴 AC7230株はスターチ・無機塩寒天培地上で28
℃、10〜20日間培養し、観察した所見は次の通り
である。 基性菌糸は曲線状で分枝をなして伸長し、分断
はせず、その直径は0.4〜0.6μmであり、気菌糸は
形成しない。 基生菌糸より短かい胞子のう柄を生じ、その先
に胞子のうを形成する。胞子のうの形は指状で、
寒天培地表面上に一個または房状に形成し、その
大きさは0.8〜1.0×3.0〜5.0μmであり、その中に
２〜４個の胞子が縦に一列に入つている。 胞子のうを水中に入れると、胞子が遊離し、そ
の胞子は運動性を有する。胞子の形は楕円体形な
いし同筒形で、その大きさは0.8〜1.0×1.0〜
1.5μmであり、鞭毛を有している。 オートミール寒天培地、チロシン寒天培地、ベ
ネツト氏寒天培地およびリンゴ酸寒天培地上で多
数の球状物体（spherical bodies）〔Arch.
Mikrobiol.，58，42〜52（1967）〕が認められた。 （） 各培地における生育状態 各種培地上で28℃、20日間培養し、観察した所
見は次の通りである。観察した全ての培地上で気
菌糸の形成は認められなかつた。 尚、色の表示はColor Harmony Manual第４
版、1958年、Container Corporation of
Americaに従つた。 シユクロース・硝酸塩寒天培地 生育；不良 胞子のうの形成；僅少 基生菌糸の色；ライト・メロン・イエロー
〔Light Melon Yellow（3ea）〕 可溶性色素；なし グルコース・アスパラギン寒天培地 生育；不良 胞子のうの形成；なし 基生菌糸の色；パール・ピンク〔Pearl
Pink（3ca）〕 可溶性色素；なし グリセリン・アスパラギン寒天培地 生育；不良 胞子のうの形成；なし 基生菌糸の色；パール・ピンク（3ca）ない
し無色 可溶性色素；なし スターチ・無機塩寒天培地 生育；中程度 胞子のうの形成；中程度 基生菌糸の色；ブライト・メロン・イエロー
〔Brite Melon Yellow（3ia）〕 可溶性色素；なし チロシン寒天培地 生育；不良 胞子のうの形成；なし 基生菌糸の色；パール・ピンク（3ca） 可溶性色素；なし オートミール寒天培地 生育；中程度 胞子のうの形成；なし 基生菌糸の色；ライト・メロン・イエロー
（3ea） 可溶性色素；なし 酵母エキス・麦芽エキス寒天培地 生育；中程度 胞子のうの形成；なし 基生菌糸の色；ブライト・メロン・イエロー
（3ia） 可溶性色素；なし ベネツト氏寒天培地 生育；中程度 胞子のうの形成；僅少 基生菌糸の色；ライト・メロン・イエロー
（3ea） 可溶性色素；なし 栄養寒天培地 生育；不良 胞子のうの形成；なし 基生菌糸の色；無色ないしパール・ピンク
（3ca） 可溶性色素；なし エマソン氏寒天培地 生育；中程度 胞子のうの形成；なし 基生菌糸の色；パール・ピンク（3ca）ない
しライト・メロン・イエロー（3ea） 可溶性色素；なし ハイキー・トレスナー氏寒天培地 生育；中程度 胞子のうの形成；なし 基生菌糸の色；ライト・メロン・イエロー
（3ea） 可溶性色素；なし リンゴ酸カルシウム寒天培地 生育；不良 胞子のうの形成；僅少 基生菌糸の色；無色 可溶性色素；なし グルコース・酵母エキス寒天培地 生育；中程度 胞子のうの形成；なし 基生菌糸の色；メロン・イエロー〔Melon
Yellow（3ga）〕 可溶性色素；ゴールド〔Gold（2lc）〕僅かに
生じる。 （） 生理的性質 生育温度範囲；20〜38℃ 至適温度範囲；25〜35℃ ゼラチンの液化；陰性 澱粉の加水分解；陽性 脱脂牛乳のペプトン化；陽性 脱脂牛乳の凝固；陽性 メラニン様色素の生成；陰性 （） 炭素源の同化性 基礎培地としてLuedemannの培地〔Inter.J.
System.Bacteriol.，21，240〜247（1971）〕を用
いた。（＋；利用される、−；利用されない） Ｌ−アラビノース ＋ Ｄ−キシロース ＋ Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−フラクトース ＋ シユクロース ＋ イノシトール − Ｌ−ラムノース ＋ ラフイノース − Ｄ−マンニツト ＋ （） 細胞組成 Beckerらの方法〔Appl.Microbiol.，12，421
〜423（1964）〕により分析したジアミノピメリン
酸はヒドロキシ型が検出され、Lechevalierの方
法〔J.Lab.Clin.Med.，71，934〜944（1968）〕で
分析した糖は特徴的なものとしてキシロースとア
ラビノースが検出された。 以上の菌学的性質から、AC7230株の特徴とし
ては、形態において真性の基生菌糸に指状の胞子
のうを着生し、胞子のう中に胞子が縦に一列に並
んでおり、胞子は運動性を有し、鞭毛を着生して
おり、細胞分析においてヒドロキシジアミノピメ
リン酸、キシロースおよびアラビノースを含有し
ていることにある。 これらの特徴より判断すると、AC7230株はダ
クチロスポランギウム属に属する菌株であると同
定される。よつて、本菌株を公知のものと区別す
るため、ダクチロスポランギウム・エスピー
（Dactylosporangium sp.）AC7230と命名し、工
業技術院微生物工業研究所に受託番号微工研菌寄
第8502号（FERM Ｐ−8502）として寄託されて
いる。 本発明の抗生物質３−ヒドロキシセゾマイシン
は、上記菌株を栄養源含有培地に接種し、好気的
に培養することにより製造される。抗生物質３−
ヒドロキシセゾマイシン生産菌としては、上記菌
株に限らず、ダクチロスポランギウム属に属し、
抗生物質３−ヒドロキシセゾマイシンを生産する
能力を有するものであれば、すべて本発明に使用
することができる。 次に、抗生物質３−ヒドロキシセゾマイシンの
製造における菌株の培養について説明する。 ダクチロスポランギウム属に属する抗生物質３
−ヒドロキシセゾマイシン生産菌の培養には、通
常放線菌の培養法が用いられる。 培地としては、固体培地または液体培地が用い
られるが、特に大量生産のためには液体培地が好
ましい。 培地の栄養源としては、放線菌の培養に通常用
いられる炭素源、窒素源、さらに必要に応じて塩
類、微量栄養素、発育促進物質などを使用するこ
とができる。 炭素源としては、例えばグルコース、フラクト
ース、シユクロース、澱粉、デキストリン、グリ
セリン、糖蜜、水飴、油脂類、有機酸類などの資
化し得る炭素源が、窒素源としては、例えば大豆
粉、綿実粉、コーンスチープリカー、カゼイン、
ペプトン、酵母エキス、肉エキス、胚芽、尿素、
アミノ酸、アンモニウム塩などの有機窒素化合物
や無機窒素化合物が、また塩類としては、例えば
ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグ
ネシウム塩、リン酸塩などの無機塩類が単独ある
いは適宜組合せて使用される。さらに必要に応じ
て、鉄塩、銅塩、亜鉛塩、コバルト塩などの重金
属塩、ビオチン、ビタミンB₁などのビタミン類
その他菌の発育を助け、３−ヒドロキシセゾマイ
シンの生産を促進するような有機物や無機物を適
宜添加してもよい。また、シリコンオイル、ポリ
アルキレングリコールエーテルなどの消泡剤や界
面活性剤を培地に加えてもよい。 培養法としては、一般の抗生物質の生産に用い
られる方法が採用されるが、液体培養法、特に振
とうまたは深部通気撹拌培養が最適である。培養
条件は好気的条件下で行なわれ、培養温度は通常
25〜35℃が好ましく、培養PHは６〜８であるが、
７付近が最も好ましい。培養物中の３−ヒドロキ
シセゾマイシンの生産量は、２〜６日の培養で充
分高くなる。 以上の如くして培養物中に蓄積された３−ヒド
ロキシセゾマイシンを培養物中から採取するため
には、後記する本抗生物質の理化学的性質を利用
することによつて有利に行われる。 即ち、３−ヒドロキシセゾマイシンは培養液
および菌体中に含有されるので、培養物全体をPH
２付近の酸性下、非親水性有機溶媒、例えば酢酸
エチル、酢酸ブチル、クロロホルム、ブタノー
ル、メチルイソブチルケトンなどの有機溶媒で抽
出することにより３−ヒドロキシセゾマイシンを
遊離酸型として分離、採取できる。また培養物を
過または遠心分離により培養液と菌体とに分
離してから３−ヒドロキシセゾマイシンを分離採
取することもできる。培養液から３−ヒドロキ
シセゾマイシンを分離採取するためには、PH２付
近の酸性下、前記の非親水性有機溶媒で抽出する
ことにより行われる。菌体から３−ヒドロキシセ
ゾマイシンを分離採取するためには、アセトンな
どの親水性有機溶媒で抽出し、これを濃縮した
後、PH２付近の酸性下、前記の非親水性有機溶媒
で抽出することにより行われる。 このようにして培養物全体あるいは培養液お
よび菌体から得られた非親水性有機溶媒溶液をア
ルカリ水溶液と接触させた後、濃縮すればアルカ
リ金属塩の形で３−ヒドロキシセゾマイシンの粗
製物が得られる。 得られたアルカリ金属塩型の３−ヒドロキシセ
ゾマイシンは、必要に応じて、通常の方法により
分離精製できる。例えば、シリカゲル、活性アル
ミナ、活性炭、吸着性樹脂などの担体あるいはセ
フアデツクスLH−20などのゲル過剤を用いる
カラムクロマトグラフイーによる方法である。シ
リカゲルを用いるカラムクロマトグラフイーによ
れば、溶出溶媒としてクロロホルム、酢酸エチ
ル、メタノール、アセトン、水、酢酸などを単独
あるいは適宜組み合せた混合溶媒を用いて溶出す
ることができ、セフアデツクスLH−20を用いる
ゲル過によれば、溶出溶媒としてクロロホル
ム、酢酸エチル、メタノール、アセトンなどを単
独あるいは適宜組合せた混合溶媒を用いて溶出す
ることができる。溶出のチエツクはバチルス・ズ
ブチリスを用いるペーパー・デイスク法によるバ
イオアツセイまたはシリカゲル薄層クロマトグラ
フイー（TLC）などにより行なうことができる。
溶出した活性画分を濃縮、乾燥することにより結
晶形の３−ヒドロキシセゾマイシンのアルカリ金
属塩が得られる。 得られたアルカリ金属塩型の３−ヒドロキシセ
ゾマイシンは、必要に応じて、通常の手段により
遊離酸を形成し得る。例えば３−ヒドロキシセゾ
マイシンアルカリ金属塩を非親水性有機溶媒、例
えばクロロホルム、酢酸エチルなどの有機溶媒に
溶かし、PH２〜３の酸性水と接触させた後、濃縮
することにより３−ヒドロキシセゾマイシンを遊
離酸型として得られる。さらに、この遊離酸か
ら、通常の手段により他のアルカリ金属塩、例え
ばナトリウム塩、カリウム塩、アルカリ土類金属
塩、例えばカルシウム塩、マグネシウム塩、公知
の有機アミンとの塩、リジン、アルギニンなどの
塩基性アミノ酸との塩などを形成することができ
る。 以上の如くして得られた抗生物質３−ヒドロキ
シセゾマイシンのナトリウム塩は次の理化学的性
質を有する。 元素分析〔C₂₈H₃₃N₂O₇・Naとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ Na％ 実測値 63.31 6.37 5.24 4.63 理論値 63.15 6.25 5.26 4.32 分子量（FABマススペクトルによる） 533（MH＋Na） 融点 300℃以上 比旋光度 〔α〕²⁶ _D＋328°（Ｃ＝0.6％、クロロホルム） 紫外部吸収スペクトル 第１図に示す通りであつて、 λMeOH maxnm（Ｅ１％ １cm203（599）、 肩251（277）、 258（304）、 肩267（225）、 306（442） 赤外部吸収スペクトル（KBr法） 第２図に示す通りであつて、3160、2970、
1640、1610、1550、1500、1430、1400、1330、
1310、1280、1240、1220、1200、1170、1110、
1080、980cm^-1に特徴的な吸収帯を有する。 溶媒に対する溶解性 クロロホルム、酢酸エチル、ジメチルスルホ
オキサイドに可溶、メタノール、ベンゼンに難
溶、水、ヘキサン、石油エーテルに不溶、 呈色反応 過マンガン酸カリウム反応、ヨード反応、塩
化第二鉄反応、バナジン硫酸反応は陽性、ニン
ヒドリン反応、モーリツシユ反応は陰性、、 塩基性、酸性、中性の区別 酸性 物質の色および性状 白色針状結晶 Ｃ−13核磁気共鳴スペクトル（25MHz，
CDCl₃、内部基準TMS；0.0ppm）196.3(s)、
172.6(s)、170.8(s)、160.8(s)、142.9(s)、139.0(s)、
133.8(s)、128.7(d)、121.3(d)、115.2(d)、114.6(d)、
111.2(d)、106.8(s)、98.3(s)、74.8(d)、71.9(d)、
43.0(d)、35.5(t)、32.3(t)、32.2(d)、28.9(d)、28.1
(d)、25.7(t)、25.2(t)、16.1(q)、11.6(q)、11.1(q)、
10.6(q) 薄層クロマトグラフイー（東京化成シリカゲ
ルｆ使用） 展開溶媒 Rf値 クロロホルム：メタノール（10：１） 0.31 クロロホルム：メタノール：酢酸（10：0.2：
0.1） 0.63 クロロホルム：ブタノール：酢酸（10：0.2：
0.1） 0.37 クロロホルム：アセトン（10：0.5） 0.38 酢酸エチル：メタノール（10：0.1） 0.95 化学構造 前記の通り。尚、構造式中の位置番号はJ.
Antibiotics，Vol.35、No.10、1409〜1411
（1982）の記載に基いて付与したものである。 公知のピロールエーテル群のポリエーテル系抗
生物質は３位および15位に次の置換基を有するの
に対し、本抗生物質３−ヒドロキシセゾマイシン
は、３位にヒドロキシ基、15位にメチル基を有
し、いずれの公知の抗生物質とは一致しないの
で、新規抗生物質であると判断され、セゾマイシ
ンを基本構造として命名した。 ３位 15位 セゾマイシン Ｈ CH₃ Ａ−23187 NHCH₃ CH₃ Ｘ−14885A OH Ｈ 〔作用〕 本発明の抗生物質３−ヒドロキシセゾマイシン
（Na塩）の各種微生物に対する最少発育阻止濃度
（MIC）および急性毒性は次の通りである。 (1) MIC（μｇ／ml） Staphylococcus aureus ATCC6538P 0.4 Stapylococcus epidenmidis sp−al−１ ≦0.2 Streptococcus pyogenes N.Y.5 ≦0.2 Streptococcus faecalis1501 ≦0.2 Streptococcus agalactiae1020 0.8 Sarcina lutea ATCC9341 ≦0.2 Micrococcus flavus ATCC10240 ≦0.2 Corynebacterium diphthe riae P.W.8 ≦0.2 Bacillus subtilis ATCC6633 ≦0.2 Esherichia coli NIHJ−JC2 ＞100 Klebsiella pneumoniae ATCC10031 ＞100 Shigella flexineri type3a ＞100 Proteus vulgaris OX19 ＞100 Serratia marcescens ＞100 Pseudomonas aeruginosa IAM1095 ＞100 (2) 急性毒性 LD₅₀約50mg／Kg（マウス・ip） 〔発明の効果〕 本抗生物質３−ヒドロキシセゾマイシンおよび
その塩はグラム陽性菌に対して抗菌活性を有する
ので、抗菌剤として有用である。また、ニワトリ
のコクシジウム症治療剤、豚および反芻動物の成
長促進剤並びに飼料利用効率の増強を目的とする
飼料添加剤としても有用である。 〔実施例〕 次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明す
る。 実施例 １ 500ml容三角フラスコにグルコース１％、デキ
ストリン１％、酵母エキス0.5％、NZ−アミン
（和光純薬社製）0.5％、CaCO₃0.1％を含む液体
培地（PH6.5）100mlを仕込み、オートクレーブ滅
菌した後、ダクチロスポランギウム・エスビー
AC7230（FERM Ｐ−8502）の斜面寒天培地から
一白金耳を接種し、28℃で４日間振とう培養して
種母とした。 次に、500ml容三角フラスコにシユクロース２
％、大豆粉１％、綿実粉0.5％、エビオス（乾燥
酵母、アサヒビール社製）0.25％、NaBr0.1％、
CaCO₃0.1％を含む液体培地（PH6.5）100mlづつ
分注し、オートクレーブ滅菌したものに各々種母
３％を接種し、28℃で３日間振とう培養した。 このようにして得た培養物を10分集めて遠心
分離し、上澄液と菌体に分離した。 上澄液9.2に酢酸エチル４を加え、水層の
PHを塩酸でPH２に調節した後、抽出操作を行い、
酢酸エチル層3.2を得た。 一方、培養物から分離した菌体にアセトン２
を加え、充分混合して抽出操作を行つた。アセト
ン抽出液を減圧濃縮し、残渣に水１および酢酸
エチル１を加え、水層のPHを塩酸でPH２に調節
した後、抽出操作を行い、酢酸エチル層0.8を
分取した。前記の酢酸エチル層と合せて約４の
酢酸エチル抽出液を得た。この抽出液を0.1N水
酸化ナトリウム水溶液２で洗浄し、次いで水２
で洗浄した。有機溶媒層を無水硫酸ナトリウム
で脱水後、減圧濃縮して茶褐色油状物約800mgを
得た。 実施例 ２ 実施例１で得た油状物を予めクロロホルム：メ
タノール（１：１）の混合溶媒で充填したセフア
デツクスLH−20のカラム（420ml）にチヤージ
し、同混合溶媒で溶出展開を行つた。溶出液を10
ｇづつ分画し、分画No.38〜48を集め、減圧濃縮し
て白色針状結晶を得た。これをグラスフイルター
上に集め、熱メタノールより再結すると無色針状
結晶が析出した。グラスフイルター上に本結晶を
集め、減圧乾燥して３−ヒドロキシセゾマイシン
のナトリウム塩287mgが白色針状結晶として得た。 実施例 ３ 実施例２で得たナトリウム塩100mgをクロロホ
ルム100mlに溶かし、これに水100mlを加え、水層
のPHを3.0に調節した後、撹拌した。次いでクロ
ロホルム層を分取し、約50mlまで減圧濃縮した。
この濃縮液にメタノール50mlを加え、さらに約30
mlまで減圧濃縮した後、室温で放置すると３−ヒ
ドロキシセゾマイシンの遊離酸が析出した。これ
を採取して３−ヒドロキシセゾマイシンの遊離液
としての白色針状結晶60mgを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質３−ヒドロキシセゾマイシン
の紫外線吸収スペクトル、第２図は同抗生物質の
赤外線吸収スペクトルである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 で表わされる抗生物質３−ヒドロキシセゾマイシ
   ンまたはその塩。 ２ ダクチロスポランギウム属に属する抗生物質
   ３−ヒドロキシセゾマイシン生産菌を培地に培養
   し、その培養物中から抗生物質３−ヒドロキシセ
   ゾマイシンを採取することを特徴とする抗生物質
   ３−ヒドロキシセゾマイシンまたはその塩の製造
   法。 ３ 抗生物質３−ヒドロキシセゾマイシン生産菌
   がダクチロスポランギウム・エスピ−AC7230（微
   工研菌寄第8502号）である特許請求の範囲第２項
   記載の製造法。