JPH0472398A - 自動食器洗浄機用洗浄剤組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、澱粉質汚れのみならず、澱粉質の汚れと油賭
汚れ、蛋白質汚れ等が混じり合った複合汚れに対する洗
浄力の優れた自動食器洗浄機用洗浄剤組成物に関するも
のである。

〔従来の技術及びその課題〕

現在家庭用に普及している自動食器洗浄機は、加温した
洗浄剤水溶液を回転式スプレーアームノズルにより食器
に噴射して洗浄し、その後連続して、すすぎ工程、乾煙
工程に入るタイプのものである。この様な洗浄機による
汚れ落ちは、機械力、洗浄温度、洗浄時間により大きく
左右されるが、これらの要素は洗浄機の特性として各洗
浄機に固有のものである。この為、自動食器洗浄機用洗
剤は、一定の機械力、洗浄温度、洗浄時間の下で種々の
汚れに有効に作用し、高い洗浄力を発揮できるものでな
ければならない。

従来の自動食器洗浄機用洗剤は、炭酸塩、珪酸塩、はう
酸塩等のアルカリ剤を主成分とし、これに使用水中の硬
度成分によるスケールの食器或いは洗浄機内への付着を
防止する目的でトリポリリン酸塩、オルトリン酸塩、ピ
ロリン酸塩、エチレンジアミン四酢酸塩、ニトリロ三酢
酸塩等のキレート剤が配合されている。また、界面活性
剤は、洗浄時に発泡し、洗浄機の運転に支障を来すこと
のない様に、低泡性の非イオン性界面活性剤が少量配合
されているか、もしくは全く含まないものが多く、洗浄
剤水溶液の液性は強アルカリ性のものが多い。この様な
洗浄剤は、油汚れに対する洗浄力は強いが、澱粉質の汚
れや、澱粉質の汚れと蛋白質汚れ、油汚れ等が混じり合
った複合汚れに対する洗浄力は充分とは言えず、また食
器の光沢を失わしめると言う欠点があった。

一方、澱粉質の汚れ、例えば、日本人の主食である米飯
のこびりつき汚れ等に対しては、澱粉加水分解酵素が有
効であるとされ、−船釣には澱粉分子のα−１，４−グ
リコシド結合に作用するα−アミラーゼが使用されてい
る。しかし、食器類に強固に付着した澱粉質の汚れを短
時間で落とすことは、自動食器洗浄機用洗剤にα−アミ
ラーゼを配合しても未だ充分とは言えなかった。これに
対し、本発明者らは特定のプルラナーゼが食器等に強固
に付着した澱粉質汚れに効果的に作用し洗浄力を顕著に
向上せしめ得ることを見出した（特開平２−１３２１９
３号、及び特開平２−１３２１９４号）。しかしながら
、かかるプルラナーゼを用いても、澱粉質の汚れと蛋白
質汚れ、油汚れ等が複雑に混じり合った複合汚れに対し
ては、まだまだ満足できる洗浄レベルには達し得なかっ
た。

従って、澱粉質汚れ、油脂汚れ、蛋白質汚れ等が複雑に
混じり合った複合汚れに対して有効に作用し、高い洗浄
力を発揮できる自動食器洗浄機用洗浄剤組成物が望まれ
ていた。

〔課題を解決するための手段〕

かかる実情において本発明者らは、鋭意研究を行った結
果、特定の非イオン性界面活性剤及びカルシウム捕捉キ
レート剤に、特定のアルカリプルラナーゼ及びリパーゼ
を配合し、特定のｐＨ範囲を有する洗浄剤組成物が、上
記複合汚れに対して有効に作用し、高い洗浄力を発揮す
ることを見出し本発明を完成した。

すなわち本発明は、次の成分（ａ）〜（ｄ）（ａ）　　
非イオン性界面活性剤　　　　１〜３０重量％（ｂ）　
　カルシウムイオン捕捉キレート剤１〜５０重量％ （Ｃ）　　リパーゼ （ｄ）　　次の酵素学的性質を有するアルカリプルラナ
ーゼ′ １）作用 プルランのα−１，６グルコシド結合を分解してマルト
トリオースを生成する。また、澱粉、アミロペクチン、
グリコーゲン又はこれらの部分分解物のα−１，６グル
コシド結合を加水分解する。

２）基質特異性 α−１，６グルコシド結合で分岐した枝分かれ構造を有
する糖のうち、マルトース以上の重合度を有する枝分か
れ構造を加水分解する。

３）作用ｐ＋＋及び至適ｐＨ 作用ｐＨはｐＨ５〜１１の範囲であり、至適ｐＨは９．
５〜１１の範囲である。

４）　ｐＨ安定性 ｐＨ８〜１０の範囲で極めて安定であり、ｐＨ７〜１０
５の範囲に於いても、５０％以上の相対活性を有する（
４５℃、１０分間処理による）。

５）作用温度範囲及び最適温度 １０〜６０℃の範囲で作用し、その最適作用温度は約５
０℃である。

６）温度安定性 ４０℃までは極めて安定である（ｐＨ９，５のｌＱｍＭ
グリシン−食塩−水酸化す）　ＩＪウム緩衝液中、３０
分間処理による）。

７）分子量 ソゲイウムドデシル硫酸電気泳動法による分子量は１２
０．０００±５．０００である。

８）金属イオンの影響 Ｈｇ２−１Ｃｄ”、Ｍｎ’＋及びＰｄ’＋で阻害される
。

９）界面活性剤の影響 直鎖アルキルペンセンスルフオン酸ナトリウム、アルキ
ル硫酸エステルナトリウム塩、ポリオキシエチレンアル
キル硫酸エステルナトリウム塩、α−オレフィンスルフ
ォン酸ナトリウム、α−スルフォン化脂肪酸エステルナ
トリウム、アルキルスルフォン酸ナトリウーム、ソディ
ウムドデシル硫酸、石鹸及びソフタノール等の界面活性
剤によって殆ど活性阻害を受けない。

１０）キレート剤の影響 ＥＤＴＡ、　ＥＤＴＡ、クエン酸及び七オライドで殆ど
活性阻害を受けない。

１１）プロテアーゼ耐性 アルカリブロテアーセに対して強い耐性を有する。

を含有し、０．２重量％水溶液のｐＨが７〜１０である
自動食器洗浄機用洗浄剤組成物を提供するものである。

本発明に用いる（ａ）成分の非イオン性界面活性剤とし
ては、次の一般式（Ｉ） ％式％（） （式中、Ｒ’は炭素数８〜２０のアルキル若しくはアル
ケニル基であり、ｍは平均付加モル数で５〜１５の数を
示し、ｎは平均付加モル数で３〜１５の数を示す） で表わされる高級アルコールのエチレンオキシドとプロ
ピレンオキシド付加体、分子量１．０００〜１０、００
０のポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック
共重合体、１．０００〜１０．０００の分子量を有する
エチレンジアミンのポリオキシエチレンポリオキシプロ
ピレン付加体等が好ましい例として挙げられる。これら
の非イオン性界面活性剤は一種でも二種以上を混合して
用いてもよい。本発明組成物中への非イオン性界面活性
剤（ａ）の配合量は１〜３０重量％である。１重量％未
満では、油汚れ及びリパーゼによる分解物（主に脂肪酸
）を洗浄液中に分散させる作用が不充分であり、３０重
量％を超えると発泡が多くなりすぎ、洗浄機の運転に支
障を来すおそれがあり、いずれも好ましくない。

特に好ましい配合量は２〜１０重量％である。

本発明に用いられる（ｂ）成分のカルシウムイオン捕捉
キレート剤としては例えばクエン酸塩、リンゴ酸塩、酒
石酸塩等のヒドロキシ多価カルボン酸、ポリアクリル酸
塩、アクリル酸と無水マレイン酸との共重合体の塩、無
水マレイン酸とメチルビニルエーテルとの共重合体の塩
、無水マレイン酸とオレフィンとの共重合体の塩、アク
リル酸とメタクリル酸との共重合体の塩等の高分子電解
質、無水マレイン酸と酒石酸の縮合物、ゼオライト等が
挙げられる。

開放分のキレート剤は、そのキレート効果を有効に発揮
させるため本発明組成物中に１〜５０！　ｆｆｉ％配合
される。１重量％未満ではキレート効果が不充分であり
、５０重量％を超えるとリパーゼ活性を阻害するため好
ましくない。

本発明の（Ｃ）成分であるリパーゼは、市販のもの、例
えば、リパーゼＡＰ、　＋ＪバーゼトＡＰ、リパーゼＰ
１リパーゼＦ−ＡＰ、リパーゼ０１リパーゼＡＹ、リパ
ーゼＬ１リパーゼＧ１リパーゼＲ１リパーゼＣＢ、リパ
ーゼＣＢＳ　、リパーゼＧＣ，リパーゼＮ、（以上、大
野製薬＠）　、ＬＩＰＡＳＢ　（東洋醸造■）、リパー
ゼＢ（サラポロビールｒｗＪ）、オリバーゼ、サイケン
１００　、Ｌｉｐａｓｅ　Ｐ　（以上、長潮産業＠）、
リパーゼ（生化学工業Ｑ！ｌＪ）、タリパーゼ（田辺製
薬側）、リパーゼＯＦ、リパーゼＭＹ　（以上、名糖産
業＠）、Ｐａ１ａｔａｓｅ　Ａ、　Ｐａ１ａｔａｓｅ　
ＭＳＬＩＰＯＬＡＳＥ　（以上、ノボ・インダストリー
・ジャパン）等を用いることができる。（Ｃ）成分は本
発明組成物１ｇ中にリパーゼ活性として１〜５００単位
、特に好ましくは５０〜５００単位含有せし杓るのが好
ましい。１単位未満では洗浄力が不充分であり、５００
単位を超えると効果に比して経済的に不利となる為好ま
しくない。

なお、リパーゼの酵素活性は実施例に示す方法によって
測定されるものである。

本発明に用いられる（ｄ）成分のアルカリプルラナーゼ
は、例えば好アルカリ性微生物の一種であるバチルスエ
スピー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｐ、）ＫＳＭ−ＡＰ１８
７６（ＦＥＲＭ　Ｐ−１０８８７）が産生ずるものが挙
げられる。

この微生物は、次のような菌学的性質を有する。

尚、以下において菌株の分類に用いた培地は次の培地１
〜２１の２１種類であり、これらは何れも別滅菌した炭
酸す）　ＩＪウム（Ｎａ２ＣＯｓ）を０．５重量％（以
下、単に％という）含有する。

使用した培地の組成（表示は％）　： 培地１．　ニュートリエンドブロス、０．８；寒天束（
和光紬薬製）、１．５ ニュートリエンドブロス、０．８ ニュートリエントブロヌ、０．８．ゼラチン、２０．０
；寒天束（和光紬薬製）、１．５バタトリトマスミルク
、１０．５ ニュートリエンドブロス、０．８．にＮ０３゜培地６、
　バタトベプトン、０．７　；　ＮａＣｊ！　、０．５
　；ブドウ糖、０．５ ３１Ｍ寒天培地（栄研化学製）、指示量ＴＳＩ寒天培地
（栄研化学製）、指示量酵母エキス、０．５．バタトベ
ブトン＋１．５；に２ＨＰＯ４，０，ｌ　；　ＭｇＳＯ
４・７Ｈ２０，０，０２；可溶性澱粉、２．０；寒天束
（和光紬薬製）、１．５培地１０．コーサー培地（栄研
化学製）、指示量培地１１．クリステンセン培地（栄研
化学製）、指培地２゜ 培地３、 培地４゜ 培地５゜ 培地７゜ 培地８ 培地９゜ 水量 培地１２．■酵母エキス、　０．０５　：　Ｎａ２Ｓ口
４＋　ｏ、　１　；ＫＨ，ＰＯ，、０，１；ブドウ糖、
１．０■酵母エキス、　０．０５　；　Ｎａ２５Ｏ＜、
　０．１　；ＫＨ，Ｐ［］、、　０．１　；ブドウ糖、
１．０　；　ＣａＣｌ！、、　・２Ｈ２０，０，０５；
　ＭｎＳＯ４・４〜６　Ｈ２Ｏ，０，０１：Ｆｅ５Ｏ１
・７Ｈ２０，ｏ、　００１　：　Ｍｇ５Ｏ−４ｆ１２０
．０．０２窒素源としては、硝酸す）　ＩＪウム、亜硝
酸ナトリウム、塩化アンモニウム及びリン酸アンモニウ
ムをそれぞれ０．２５％、０．２０２５％、０．１５８
％、０．１９５％となるように上記■及び■の培地に加
えて用いた。

キングＡ培地“栄研”　（栄研化学製）。

指示量 キングＢ培地“栄研”　（栄研化学製）。

指示量 尿素培地“栄研”　（栄研化学製）、指示量 チトクローム・オキシダーゼ試験用濾紙（日本製薬製） 培地１４゜ 培地１３゜ 培地１６ 培地１５゜ 培地１７．３％過酸化水素水 培地１８．バタトペプトン、０．５；酵母エキス、０４
５に２８ＰＯ，、０，１；ブドウ糖、　１．０　；　Ｍ
ｇ５Ｏ，・７Ｈ，０，０，０２ 培地１９．バタトペブトン、２．７　；　ＮａＣｊｌ！
　、５．５　・Ｋ、ＩＩＰＯ，、０，３；ブドウ糖、０
．５；ブロモチモールブルー、０．０６．寒天末（和光
紬薬製）、１．５ 培地２０．　　（Ｎ）ｆ、ン。ＨＦＯ２，０，１；　Ｋ
ＣＩ　、　０．０２　；　１．ＩｇＳｆ）、・ｌＨ２Ｏ
，０，０２、酵母エキス、　０．０５　、糖、１．０培
地２１．カゼイン、０．５；酵母エキス、０．５・ブド
ウ糖、　１．０　：　Ｋ２ＨＰ［］−、０，１：　Ｍｇ
５Ｏ−・７日２００、０２　、寒天末（和光紬薬製）、
　１．５〔菌学的性質〕 （ａ）　　顕微鏡的観察結果 菌体の大きさは、１．０−２．２ｕ　ｍ　ｘ　２．２〜
４．４μｍの桿菌であり、菌体の一端に楕円形の内生胞
子（０，８〜１．０　μｍ　Ｘ　１．０〜１．８１ｔｍ
　）を作る。

周鞭毛を有し運動性がある。ダラム染色は不定。

抗酸性はない。

わ） 各種培地に於ける生育状態 ■　肉汁寒天平板培養（培地］） 生育状態は良い。集落の形状は円形であり、表面は円滑
、周縁は円滑又は波状である。

又集落の色調は乳白色半透明で光沢がある。

■　肉汁寒天斜面培養（培地１） 生育する。その状態は拡布状で光沢が有り、乳白色半透
明である。

■　肉汁液体培養（培地２） 生育する。

■　肉汁ゼラチン穿刺培養（培地３） 生育状態は良い。ゼラチンの液化が認狛られる。

■　リドマスミルク培地（培地４） ミルクの凝固、ペプトン化は認められない。

リドマスの変色は培地がアルカリ性のため判定できない
。

（Ｃ）　　生理学的性質 ■　硝酸塩の還元及び脱窒反応（培地５）硝酸塩の還元
は陽性。脱窒反応は陰性。

■　ＭＲテスト（培地６） 培地がアルカリ性のため判定できない。

■　ｖＰテスト（培地６） 陰性。

■　インドールの生成（培地７） 陰性。

■　硫化水素の生成（培地８） 陰性。

■　澱粉の加水分解（培地９） 陽性。

■　クエン酸の利用 コーサー培地（培地１０）で陰性。クリステンセン培地
（培地１１）では陽性か陰性が判定できない。

■　無機窒素源の利用（培地１２） 硝酸塩、アンモニウム塩、亜硝酸塩とモニ利用する。

■　色素の生成（培地１３．１４） 陰性。

０　ウレアーゼ（培地１５） 陰性。

■　才手シダーゼ（培地１６） 陽性、陰性のどちらとも判断できない。

■　カタラーゼ（培地１７） 陽性。

■　生育の範囲（培地１８） 生育の温度範囲は２０〜４０℃、生育最適温度範囲は３
０〜３５℃であった。

生育のｐＨ範囲はｐ）１７〜１０．５、生育最適ＪＩＩ
Ｈはｐ）１１０であった。

■　酸素に対する態度 好気的。

■　０−Ｆテスト　（培地１９＞ アルカリ性のため変色は判定できない。

好気状態でのみ生育する。

■　糖の利用性（培地２０） Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、
Ｄ−マンノース、Ｄ−フラクトース、Ｄ−ガラクトース
、麦芽糖、ショ糖、乳糖、）レバロース、Ｄ−ソルビッ
ト、Ｄ−マンニット、クリセリン、テ゛ンプン、サリシ
ン、Ｄ−リボース及びデキストリンを利用する。

■　食塩含有培地に於ける生育（培地１を改変）食塩濃
度が５％では生育するが、７％で生育できない。

■　カゼインの分解（培地２１＞ 陽性。

以上の菌学的性質に関する検討に基づき、バーシーズ・
マニュアル・オブ・ディタミネイティブ／（タテリオロ
ジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｎｕａｌ　ｏｆＤｅｔ
ｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｇｙ）第８
版及びザ・ジーナス・バチルス（”Ｔｈｅ　Ｇｅｎｕｓ
Ｓａｃ目Ｉｕｓ″Ｒｕｔｈ。

Ｂ、Ｇｏｒｄｏｎ、Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　Ｈａｎｄ
ｂｏｏｋ　　Ｎａ　４２７゜Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　５ｅｒｖｉｃｅ、　Ｕ、Ｓ。

Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ
　Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ　Ｄ、Ｃ０゜（Ｉ９７３））を
参照し、比較検索した結果、本菌株は有胞子桿菌である
バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属の一種であると認めら
れる。しかし、本菌株は中性領域では生育できず、専ら
高ｐ）ｌ領域で良好な生育を示すことから、最近、Ｈｏ
ｒｉｋｏｓｈｉとＡｋｉｂａ（”Ａｌｋａｌｏｐｈｉｌ
ｉｃ　Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ　　、　　Ｊａｐａ
ｎＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　５ｏｃｉｅｔｙ　Ｐｒｅｓｓ
　、（Ｔｏｋｙｏ）、　　１９８２年刊）の主張してい
る、所謂好アルカリ性 （Ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｉｃ）微生物に属し、暫定的に
、従来の中性で生育するバチルス属細菌とは区別される
。

更に、本菌株の菌学的性質は公知の好アルカリ性バチル
スのいずれとも一致しないので、これを新規菌株と判断
してバチルス　エスピー　ＫＳＭ−ＡＰ１８７６と命名
し、微工研菌寄第１０８８７号（ＦＩＥＲ）４　Ｐ１０
８８７）として通産省工業技術院微生物工業技術研究所
に寄託した。

上記の微生物を用いて本発明に使用される（ｄ）成分の
アルカリプルラナーゼを得るには、培地に微生物を接種
し、常法に従って培養すればよい。また、培地中には、
資化し得る炭素源及び窒素源を適当量含有せしめておく
ことが好ましい。この炭素源及び窒素源は特に制限され
ないが、例えば、窒素源としては、コーングルテンミー
ノ１大豆粉、コーンスチープリカー、カザミノ酸、酵母
エキス、ファーマメディア、肉エキス、トリプトン、ソ
イトン、バイブロ、アジパワー、ソイビーンミール、綿
実油粕、カルチベーター、アジブロン、ゼストなどの有
機窒素源及び硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、リ
ン酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、硝酸ナトリウム
、酢酸アンモニウム等の無機室Ｓ源が挙げられる。また
炭素源としては、可溶性澱粉、不溶性澱粉、アミロペク
チン、グリコーゲン、プルラン及びこれらの部分分解に
より生じた分岐オリゴ糖に加え、資化し得る炭素源、例
えばグリコース、マルトース、アラビノース、キシロー
ス、リボース、マンノース、フラクトース、ガラクトー
ス、麦芽糖、ショ糖、乳糖、トレハロース、マンニット
、ソルビット、グリセリンや資化し得る有機酸、例えば
酢酸などが挙げられる。

またその他、リン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩
、マンガン塩、亜鉛塩、コバルト塩、ナトリウム塩、カ
リウム塩等の無機塩や、必要であれば、無機、有機微量
栄養源を培地中に適宜添加することもできる。

斯くして得られた培養物中からの目的物質であるアルカ
リプルラナーゼの採取及び精製は、一般の酵素の採取及
び精製の手段に準じて行うことができる。即ち、遠心分
離または濾過等の通常の固液分離手段により菌体を培養
液から除去すれば、粗酵素液を得ることができる。この
粗酵素液は、そのまま使用することもできるが、必要に
応じて、塩析法、沈澱法、限外濾過法等の分離手段によ
り粗酵素を得、更に公知の方法により精製結晶化するこ
とにより精製酵素として使用することも可能である。

以下、本発肋に使用されるアルカリプルラナーゼの精製
法の一例を挙げ、更に詳しく説明する。

アルカリ性バチルス属細菌ＫＳＭ−へＰ１８７６株を、
１％プルラン、０．２％トリプトン、０．１％酵母エキ
ス、０．０３％に８２ＰＯ，，０，０２％ＣａＣＡ　２
−２Ｈ２０，０，１％（ＮＨ，）　、ＳＯ，，０，００
１％Ｆｅ５０＜’７ＬＤ。

０　０００１％ＭｎＣ１、・４Ｈ−０、０，０２％Ｍｇ
５Ｏ−４ＨＪ及び０．５％炭酸す）　ＩＪウムを含む培
地で、３０℃にて３日間好気的に振盪培養し、得られる
培養液から菌体を除き、上澄液を得る。次いで、該上澄
液にＤＢＡＢ−セルロース粉末を加え、上澄液中のプル
ラナーゼを完全にＤＥＡＥ−セルロースに吸着させる。

次いで、１０ｍＭ）ＩＪスス−酸緩衝液（ｐＨ８）で樹
脂を洗浄した後、０．６Ｍの食塩を含む同緩衝液で酵素
を溶出する。更に、１０ｍＭ）！Ｊスス−酸緩衝液（ｐ
Ｈ８）に対して透析ａ縮径、同緩衝液で平衡化したＤＥ
ＡＦ−セルロースＤＥ５２に吸着させ、同緩衝液を用い
−て０ｍｌＭの食塩の濃度勾配により溶出し、その活性
画分を集め、平均分画分子量１０，０００の限外濾過膜
を用いて濃縮した後、０．１Ｍ食塩を含む同緩衝液を用
いて一夜透析する。これを濃縮し、次いで透析後、０．
１Ｍ食塩を含む同緩衝液で平衡化したセファクリルＳ−
２００カラムに吸着後、０．１Ｍ食塩を含む同緩衝液で
溶出し、その活性画分を集約、更にＤＲＡＢ　）コバー
ル６５０８カラムに吸着させる。吸着した酵素を、１０
ｍＭ　）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ８）中、０．１ｍｌＭ
の食塩の濃度勾配により溶出し、その活性画分を集約る
。集約られた活性画分を、限外濾過膜を用いてａ縮した
後、２！４硫酸アンモニウムを含む同緩衝液で平衡化し
たブチル　トヨバール６５０８カラムに吸着させ、ｌＯ
ｍＭ）’Ｊスス−酸緩衝液（ｐＨ８）を用いて２〜ＯＭ
の硫酸アンモニウムの濃度勾配により溶出し、その活性
画分を集める。集められた活性画分を、限外濾過膜を用
いて濃縮した後、同緩衝液を用いて一夜透析する。斯く
して得られる精製酵素はポリアクリルアミドゲル電気泳
動（ゲル濃度１５％）及びソデイウムドデンル硫酸（Ｓ
Ｏ８）電気泳動で単一のバンドを与え、活性収率は約４
％であった。

斯くして得られる、アルカリプルラナーゼの酵素化学的
諸性質について、以下に説明する。

尚、酵素活性の測定は次の緩衝液（各々１０ｍＭ宛）を
用い、以下の方法に従って行った。

ρ［１４〜６　　酢酸緩衝液 ｐＨ６〜８　　リン酸緩衝液 ｐＨ８〜１１　　　グリシン−食塩−水酸化ナトリウム
緩衝液 ｐＨ１１〜１２　　　塩化カリウム−水酸化ナトリウム
緩衝液 酵素活性測定法 各種緩衝液中にプルラン（反応系に於ける最終濃度は０
．２５％）を溶解させた基質溶液０．９ｍｌに、酵素液
０．１ｍｌを加え、４０℃で、３０分間反応させた。

反応後、３．５−ジニトロサリチル酸（３，５ｄｉｎｉ
ｔｒｏｓａｌｉｃｙｌｉｃ　ａｃｉｄ　（ＤＮＳ））法
にて、還元糖の定量を行った。即ち、反応液１．０ｒｎ
１．にＤＮＳ試薬１．０−を加え、５分間、　１００℃
で加熱発色させ、冷却後、４．０ｍ１ｌ！の脱イオン水
を加えて希釈し、波長５３５ｎｍで比色定量した。酵素
の力価は、１分間に１μ（Ｔｌｏβのグルコースに相当
する還元糖を生成する酵素量を１単位（ＩＵ）とした。

（酵素学的諸性質） ■　作用 プルランのα−１，６グルコシド結合を分解してマルト
トリオースを生成する。また、澱粉、アミロペクチン、
グリコーゲン又はこれらの部分分解物のα−１，６グル
コシド結合も加水分解する。

■　基質特異性 α−１，６グルコシド結合で分岐した枝分かれ糖のうち
、マルトース以上の重合度を有する枝分かれ構造を加水
分解する（表１）。

以下余白 ■　作用ｐ＋及び至適ｐＨ 作用ｐＨをｐＨ１１〜１２の範囲に有し、至適ｐＨを９
．５〜１１の範囲に有する。

尚、各ｐａｌにおけるプルラナーゼ活性を、０．２５％
プルラン、１０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４〜６）、リン酸
緩衝液（ｐＨ６〜８．５）、グリシン−食塩−水酸化す
）　ＩＪウム緩衝液（ｐＨ８，５〜１１）及び塩化カリ
ウム−水酸化す）　ＩＪウム緩衝液（ｐＨ１１〜１２）
の反応系を用い、４０℃で３０分間反応させて測定した
結果を第１図に示す。

■　ｐＨ安定性 ｐ）１８〜１０で極とて安定であり、ｐＨ７〜１０．５
に於いても、約５０％辺上の活性を維持する。

尚、各ｐＨにおけるプルラナーゼ活性を、０．２５％プ
ルラン、１０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐｆ１４〜６）、リン酸
緩衝液（ｐｆ１６〜８．５）、グリシン−食塩−水酸化
す）　ＩＪウム緩衝液（ｐＨ８，５〜１１）及び塩化カ
リウム−水酸化す）　ＩＪウム緩衝液（ｐＨ１１〜１２
）の反応系を用い、４５℃で１０分間反応させて測定し
た結果を第２図に示す。

■　作用温度範囲及び最適温度 １０℃〜６０℃の広範囲で作用し、その最適作用温度は
約５０℃に認められる（第３図）。

■　温度安定性 本酵素についてｐＨ９，５の条件で温度を変化させ、各
温度で３０分間処理することにより失活の条件を調べる
と、４０℃までは極約で安定であり、また、５０℃に於
いても約５０％以上の残存活性を有する（第４図）。

■　分子量 ＳＯ３電気泳動法（ゲル濃度７．５％）による分子量は
約１２０．０００±５００１）である。

■　金属イオンの影響 １ｍＭのＨｇ２−１［ｄ２゛、及びＭｎ’＋で強く阻害
され、Ｐｂ２＋で若干疎外された。

■　界面活性剤の影響 直鎖アルキルベンゼンスルフォン酸ナトリウム、アルキ
ル硫酸エステルナトリウム塩、ポリオキシエチレンアル
キル硫酸エステルナトリウム塩、αオレフインスルフオ
ン酸ナトリウム、α−スルフォン化脂肪酸エステルナト
リウム、アルキルスルフォン酸ナトリウム、ＳＤＳ、石
鹸、ソフタノール（登録商標）等の各種界面活性剤の０
．０５％溶液で４０℃にて１５分間処理しても殆ど活性
阻害を受けない。

■　キレート剤の影響 キレート剤であるＢＤＴＡ　（Ｉ０ｍＭ＞　、ＥＧＴＡ
　（Ｉ０ｍＭ）、クエン酸（０，０５％）及びゼオライ
ト　（０，０５％）は殆ど活性を阻害しない。

■　プロテアーゼ耐性 ＡＰＩ−２１（昭和電工社製）、マクサターゼ（ＩＢＩ
Ｓ社製）、サビナーゼ、アルカラーゼ、エスペラーゼ（
ノボ社製）等のアルカリプロテアーゼを活性測定時に共
存（０，２ＡＩ／β）させても、何れのプロテアーゼに
対しても強い耐性を有する。

上記アルカリプルラナーゼは、本発明自動食器洗浄機用
洗浄剤組成物中に、通常０．１〜１０％配合される。

なお、アルカリ又はアルカリ耐性プルラナーゼは、精製
酵素を用いてもよいし、培養液をそのまま粗製酵素とし
て用いてもよい。

本発明の自動食器洗浄機用洗浄剤組成物には、上記の必
須成分に加え、目的とする性能を損なわない範囲で、必
要に応じて種々の任意成分を添加することができる。

その様な成分としては、カルボキシメチルセルロース、
ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリエ
チレングリコール等の再汚染防止剤、炭酸ナトリウム、
炭酸水素ナトリウム、ホウ砂、珪酸塩等のアルカリ剤、
芒硝等の増量剤、香料、色素、過炭酸ナトリウム、過ホ
ウ酸ナトリウム等の漂白剤、シリコーン等の消泡剤、液
体洗浄剤の場合はエタノール、イソプロパツール、プロ
ピレングリコール等のハイドロトロープ剤、防腐・防黴
剤等が挙げられる。

本発明の自動食器洗浄機用洗浄剤組成物は、その０．２
％水溶液におけるｐＨが７〜１０の範囲内である必要が
あり、ｐＨ７未満では油性汚れに対する洗浄力が低下す
る為好ましくなく、またｐＨｌ０を超えると、酵素活性
が失われるか、或いは著しく低下し充分な洗浄効果を得
られない。特に好ましいｐＨの範囲は８５〜９．５であ
る。

〔実施例〕

以下、実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが
、本発明はこれらの実施例により限定されるものではな
い。

なお、本発明に用いるリパーゼ及びプルラナーゼの活性
は次の如くして測定した。

くリパーゼの活性測定方法〉 本発明におけるリパーゼ活性は、反応基質としてオリー
ブ油を用い、１分間に１μｍｏβの脂肪酸を遊離する酵
素量を１単位と定約、以下の方法で測定した。

（Ｉ）　　サンプルの測定 オリーブ油４ｍ１．と０．ＩＭリン酸Ｍ衝液（ｐ）１７
．０）　４ｍｌとを５０証容共栓三角フラスコに正確に
取り、よく混合し、３７℃の恒温水槽中で１０分間予熱
する。

これに試料溶液１記を正確に加え、よく混合し、正確に
２０分径径セトン・エタノール混合液２０艶を注ぎ、つ
いでフェノールフタレイン試液５滴を指示薬として、０
．０５Ｎ水酸化ナトリウム試液で滴定する。

（２）　　ブランクの測定 オリーブ油５雁と０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）
　４−とを５０ｍ１容共栓三角フラスコに正確に取り、
３７℃の恒温水槽中で３０分間加熱後、アセトン・エタ
ノール混合液２ｈｔｆ！を注ぎ、ついで水１証を正確に
加え、フェノールフタレイン試液５滴を指示薬として、
０．０５Ｎ水酸化す）　ＩＪウム試液で滴定する。

（３〕　　リパーゼ活性の算出 以下の式により活性を算出する。

活性（単位／　ｇ　） くプルラナーゼの活性測定方法〉 １０ｍＭグリシン−食塩−水酸化す）　ＩＪウム緩衝液
（ｐＨ９，０＞中にプルラン（反応系における最＃濃度
は０．２５％）を溶解させた基質溶液０．９ｍｌに、酵
素液０．１ｍｌを加え４０℃で３０分間反応させる。反
応後、３．５−ジニトロサリチル酸く３．５ ｃｌｉｎｉｔｒｏｓａｌｉｃｙｌｉｃ　ａｃｉｄ（ＤＮ
Ｓ））法にて、還元糖の定量を行った。即ち、反応液１
．０−にＤＮＳ試薬１．０−を加え、５分間、１００℃
で加熱発色させ、冷却後、４．０−の脱イオン水を加え
て希釈し、波長５３５ｎｍで什色定量した。酵素の力価
は、１分間に１μｍＯβのグルコースに相当する還元糖
を生成する酵素量を１単位（ＩＵ）とした。

製造例１ （Ｉ）神奈川県横浜市の土壌を薬匙−杯（約０．５ｇ）
、滅菌生理食塩水に懸濁し、８０℃で１５分間熱処理し
た。この熱処理液の上滑を適当に希釈して、分離用寒天
培地（培地Ａ）に塗布した。次いで、これを３０℃にて
３日間培養し、集落を形成させた。集落の周囲にプルラ
ンの溶解に基づく透明帯を形成するものを選出し、プル
ラナーゼ生産菌を取得した。更に、取得菌を培地Ｂの液
体培地に接種し、３０℃で３日間振盪培養した。培養後
、遠心分離した上滑液について、プルラナーゼ活性をｐ
）１１０にて測定し、アルカリプルラナーゼ生産菌をス
クリーニングした。

上述の方法により、アルカリプルラナーゼ生産菌バチル
ス　エスピー　ＫＳＭ−ＡＰ１８７６（ＰＢＲＭ　Ｐ１
０８８７）を取得することが出来た。

培地Ａ、プルラン 着色プルラン ポリペプトン 酵母エキス ＫＨ２ＰＯ。

（ＮＨ４）２ＳＯ。

λ１ｇ５Ｌ・７Ｈ２０ ＣａＣＡ　２’２Ｈ２０ ＦｅＳ０．４ｆｔ、Ｏ Ｍｎ［：ｊ！　２・４ｆ１２０ 寒天 ０．８％ ０．２％ ０．２％ ０．１％ ００３％ ０．１％ ０．０２％ ００２　％ ０．００１％ ０．０００１％ １．５％ ｐＨ１０，０ 培地Ｂ、プルラン Ｙリブトン 酵母エキス Ｋｌｌ、ＰＯ。

１％ ０．２％ ０．１％ ０．０３％ （ＮＨ，）、Ｓｏ、　　　　　　　　　　　　　０．１
％Ｍｇ５Ｄ４・７１１．０　　　　　　　　　　０．０
２％ＣａＣｊｌ！　２・２Ｈ２００，０２％ＦｅＳＯ４
・７）Ｉｓｏ　　　　　　　　　　　　０．００１％Ｍ
ｎＣ１ｚ・４）１２０　　　　　　　　　　　　　　　
０．０００１％ｐＨ１０，０ （２）　　アルカリプルラナーゼ生産菌であるバチルス
エスピー　ＫＳＭ−へＰ１８７６株を参考例１の液体培
地已に接種し、３０℃で３日間振盪培養した。培養後、
菌体を遠心分離して除き、粗プルラナーセ酵素液とした
。更に、通常の方法に従って、エタノール乾燥粉末とし
、′以下の表２に示す粗酵素標品を得た。なお、表２の
酵素活性はｐｆ１９に於ける測定値である。

表　　２ ０−ス吸着、■ＤεＡＥセルロース　（ワットマン社製
）クロマトグラフィー、■セファクリル（ファルマシア
社製）クロマトグラフィー、■叶ＡＨ）ヨパール（東洋
曹達社製）クロマトグラフィー、■ブチル　トヨバール
（東洋曹達社製）クロマトグラフィーをすることによっ
て精製を行い、アルカリプルラナーゼを得た。

得られたアルカリプルラナーゼについてテ′−ビス（Ｄ
ａｖｉｓ　Ｄ、　Ｊ、、　Ａｎｎ、　Ｎ、　Ｙ、　Ａｃ
ａｄ、　Ｓｃｉ、、　１２１゜４０４　（Ｉ９６４））
の方法に従って電気泳動を行った後、コマシー・ブＩＪ
　ＩＪアント・ブルーで染色して単一のバンドを与える
ことを確認した（第５図）。

（４）　　（３）で得られたアルカリプルラナーゼにつ
いて常法に従い、ＳＯ３電気泳動を行った（第６図）。

この結果から、本酵素の分子量は１２０．０００±５、
０００であった。

実施例１ 下記の第３表及び第４表の組成の自動食器洗浄機用洗浄
剤組成物を調製し、その洗浄力の測定を行った。結果を
第４表に示す。尚、洗浄力の測定（３）　　（２）で得
られた粗酵素液について、■ＤＢＡＥセルは以下に示す
試験法により行った。

洗浄条件 使用機種；松下電器鞠製全自動食器洗い機ｒ　ＮＰ−６
００Ｊ 洗浄温度；５℃から５５℃まで徐々に上昇する。

使用水：硬度３．５°ＤＨの水 洗浄剤濃度；０．２％ 洗浄時間；洗浄２０分−すすぎ２０分 洗浄時の循環水量；約２．５ｐ 〔米飯汚れ洗浄力測定法〕 汚染皿の調製 軟質の炊き上がり米飯を３０分間室温にて放置し、３ｇ
を直径２５ｃｍの磁性の皿に引き伸ばして塗布し、室温
で１昼夜風乾したのもを６枚洗浄に供した。

米飯汚れ洗浄力評価方法 洗浄後の皿の米飯の残留を沃素の呈色反応によって生じ
た青色部分の面積（Ｐ）を写真判定によって測り、初期
の汚染面積（Ｓ）から容器の洗浄率を下式によって求袷
た。更に、６枚の皿の洗浄率を平均し、平均洗浄率とし
た。

皿−枚の洗浄率＝　［（Ｓ−Ｐ）／Ｓ］　Ｘ１００〔複
合汚れ洗浄力測定法〕 汚染皿の調製 ホワイトソース（ハインッ社製の缶詰）　１００ｇにマ
ーガリン（官印社製ｒネオソフ）Ｊ）１０ｇを加え、６
０℃に加温し良く混合し複合汚れとする。

直径２５ｃｍの磁性の皿−枚当たりに、上記の複合汚れ
５ｇを塗布し、１２０℃で１５分間焼き付ける。

これを−昼夜放置した後洗浄に供した。

洗浄試験と洗浄力評価方法 汚染皿５枚を洗浄機に入れ、上記の洗浄条件にて洗浄を
行った。洗浄後の皿は一枚づつ下記の判断基準により判
定し、下式により洗浄評価点を算出した。

完全に洗浄された。　　　　　　　　５点少量の汚れの
残留が５忍められる。　　　３点全く洗浄されなかった
。　　　　　　　０点洗浄評価点＝〔各汚染皿の評価点
の和〕×４表　　３ 表　　４ ソフタノールＢＰ−７０８５”　’ クエン酸三ナトリウム塩 ５ｏｋａｌａｎ　ＣＰ−５Ｐｏｗｄｅｒ”４．５ ５．０ 炭酸水素ナトリウム ５０．０ 本１　ソフタノールＥＰ−７０８５；　５ｅｃ−アルコ
ールチレンオキサイド７モル及びプロピレンオキサイド
８．５モル付加物 （日本触媒化学工業製） 峠Ｓｏｋａｌａｎ　ＣＰ−５　Ｐｏｗｄｅｒ；アクリル
酸と無水マレイン酸の共重合体の塩 分子量＝約７００００　（ＢＡＳＦ社製）本３　リパー
セへＫＧ，天野製薬 本４　アルカリプルラナーゼ；製造例１で得られたもの 注）表中の数字は洗浄剤１ｇ中に含まれる活性量（単位
７ｇ洗剤） 実施例２ 第５表の組成の自動食器洗浄機用洗剤を調製し、その洗
浄力を実施例１と同様に測定した。

〔発明の効果〕

本発明の自動食器洗浄機用洗浄剤組成物は澱粉質汚れの
みならず、澱粉質、油脂及び蛋白質汚れ等が混じり合っ
た複合汚れに対しても優れた洗浄力を有する。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明に使用されるアルカリプルラナーゼの
反応ｐ）Ｉと相対活性との関係を示す図面である。 第２図は、本発明に使用されるアルカリプルラナーゼの
処理ｐＨと残存活性との関係を示す図面である。 第３図は、本発明に使用されるアルカリプルラナーゼの
反応温度（ｐＨ９，５）と相対活性との関係を示す図面
である。 第４図は、本発明に使用されるアルカリプルラナーゼの
処理温度（ｐＨ９，５）と残存活性との関係を示す図面
である。 第５図は、本発明に使用されるアルカリプルラナーゼの
電気泳動の結果を示す図面である。 第６図は、本発明に使用されるアルカリプルラナーゼの
ＳＯ３電気泳動の結果を示す図面である。 以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の成分（ａ）〜（ｄ） （ａ）非イオン性界面活性剤　１〜３０重量％ （ｂ）カルシウムイオン捕捉キレート剤１〜５０重量％ （ｃ）リパーゼ （ｄ）次の酵素学的性質を有するアルカリプルラナーゼ １）作用 プルランのα−１，６グルコシド結合を分解してマルト
   トリオースを生成する。また、澱粉、アミロペクチン、
   グリコーゲン又はこれらの部分分解物のα−１，６グル
   コシド結合を加水分解する。 ２）基質特異性 α−１，６グルコシド結合で分岐した枝分かれ構造を有
   する糖のうち、マルトース以上の重合度を有する枝分か
   れ構造を加水分解する。 ３）作用ｐＨ及び至適ｐＨ 作用ｐＨはｐＨ５〜１１の範囲であり、至適ｐＨは９．
   ５〜１１の範囲である。 ４）ｐＨ安定性 ｐＨ８〜１０の範囲で極めて安定であり、ｐＨ７〜１０
   ．５の範囲に於いても、５０％以上の相対活性を有する
   （４５℃、１０分間処理による）。 ５）作用温度範囲及び最適温度 １０〜６０℃の範囲で作用し、その最適作用温度は約５
   ０℃である。 ６）温度安定性 ４０℃までは極めて安定である（ｐＨ９．５の１０ｍＭ
   グリシン−食塩−水酸化ナトリウム緩衝液中、３０分間
   処理による）。 ７）分子量 ソディウムドデシル硫酸電気泳動法による分子量は１２
   ０，０００±５，０００である。８）金属イオンの影響 Ｈｇ＾２＾＋、Ｃｄ＾２＾＋、Ｍｎ＾２＾＋及びＰｄ＾
   ２＾＋で阻害される。 ９）界面活性剤の影響 直鎖アルキルベンゼンスルフォン酸ナトリウム、アルキ
   ル硫酸エステルナトリウム塩、ポリオキシエチレンアル
   キル硫酸エステルナトリウム塩、α−オレフィンスルフ
   ォン酸ナトリウム、α−スルフォン化脂肪酸エステルナ
   トリウム、アルキルスルフォン酸ナトリウム、ソディウ
   ムドデシル硫酸、石鹸及びソフタノール等の界面活性剤
   によって殆ど活性阻害を受けない。 １０）キレート剤の影響 ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、クエン酸及びゼオライトで殆ど活
   性阻害を受けない。 １１）プロテアーゼ耐性 アルカリプロテアーゼに対して強い耐性を有する。 を含有し、０．２重量％水溶液のｐＨが７〜１０である
   自動食器洗浄機用洗浄剤組成物。２、（ａ）成分が、次
   の一般式（ I ） Ｒ＾１Ｏ（Ｃ＿２Ｈ＿４Ｏ）＿ｍ（Ｃ＿３Ｈ＿７Ｏ）＿
   ｎＨ（ I ）（式中、Ｒ＾１は炭素数８〜２０のアルキ
   ル又はアルケニル基を示し、ｍは平均付加モル数で５〜
   １５の数を示し、ｎは平均付加モル数で３〜１５の数を
   示す） で表わされる高級アルコールのエチレンオキシドとプロ
   ピレンオキシド付加体、分子量１，０００〜１０，００
   ０のポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック
   共重合体並びに１，０００〜１０，０００の分子量を有
   するエチレンジアミンのポリオキシエチレンポリオキシ
   プロピレン付加体より選ばれる一種又は二種以上の混合
   物である請求項１記載の自動食器洗浄機用洗浄剤組成物
   。 ３、（ｂ）成分が、クエン酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩
   、ポリ了クリル酸塩、アクリル酸と無水マレイン酸との
   共重合体の塩、無水マレイン酸とメチルビニルエーテル
   との共重合体の塩、無水マレイン酸とオレフィンとの共
   重合体の塩、アクリル酸とメタクリル酸との共重合体の
   塩、無水マレイン酸と酒石酸の縮合物及びゼオライトか
   らなる群より選ばれる一種又は二種以上のカルシウムイ
   オン捕捉キレート剤である請求項１記載の自動食器洗浄
   機用洗浄剤組成物。