JPH0472807B2 - - Google Patents

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JPH0472807B2
JPH0472807B2 JP58078300A JP7830083A JPH0472807B2 JP H0472807 B2 JPH0472807 B2 JP H0472807B2 JP 58078300 A JP58078300 A JP 58078300A JP 7830083 A JP7830083 A JP 7830083A JP H0472807 B2 JPH0472807 B2 JP H0472807B2
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JP
Japan
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medium
molecular weight
cultured
human
malignant tumor
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JP58078300A
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JPS59204122A (ja
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Tomoyuki Tajima
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Koken Co Ltd
Original Assignee
Koken Co Ltd
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Publication date
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/13—Tumour cells, irrespective of tissue of origin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
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Description

【発明の詳細な説明】 この発明は、人の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤の製
造方法に関する。 特願昭57−143340号のヒト腎細胞癌由来樹立株
細胞、ヒト腎癌由来樹立株細胞、ヒト肺癌由来樹
立株細胞、ヒト口腔底癌由来樹立株細胞およびヒ
ト筋原性肉胚樹立株細胞から選ばれた人の悪性腫
瘍細胞を血清無添加の培地中で３〜４日間培養
し、その培地より前記腫瘍細胞並びに分子量1000
以上のものを除外してなる人の悪性腫瘍細胞増殖
抑制剤の発明は、正常細胞に対しても多少の増殖
抑制が認められるが、悪性腫瘍細胞に対して著し
い増殖抑制力がある。 前記発明は、分子量500〜1000のものを含んで
いるが、培地を例えばアミコン社製UM05、また
はYA05などの分子量500で分画する限定濾過膜
で限定濾過を行い、分子量500以上の分画と500未
満の分画とに分け、その各々の分画について培養
癌細胞の増殖抑制効果を調べると、分子量500以
上の分画により採取した物質は、500未満の濾過
液と比べ、より著しい増殖抑制力があり、希釈し
てもなお高率の増殖抑制力を示し、分子量500未
満のものより、有効成分が濃縮されていることが
解かつた。 また、この製造方法により得られた悪性腫瘍細
胞増殖抑制剤は、従来の抗腫瘍剤のような副作用
がほとんどないと考えられる。 本発明の人の悪性腫瘍細胞の増殖抑制剤の製造
方法は、前記の点を鑑み、ヒト腎細胞癌由来樹立
株細胞を培地ベイサル メデイアム イーグル
（Basal Medium Eagle）で培養し、別の無血清
培地に移し、30℃〜37℃で一週間培養し、次いで
培地から悪性腫瘍細胞を除去し、該培地を分子量
500で分画する限外濾過膜で限外濾過し、分子量
500以上の分画の物質を採取することを特徴とす
るものである。 次のこの発明の実施例について述べる。 (1) 実験材料とした細胞 (2) 培養 成長用培地には10％牛新生児血清を添加した
ベイサル メデイアム イーグル（Basal
Medium Eagle）（BME）および５％牛新生児
血清を添加したRPMI1640を成長用培地
（growth medium）として用い、抽出用の培
地としては、血清無添加のBMEを使用した。 まず成長用培地を用い、培養器に飽和状態に
なるまでヒト腎細胞癌由来樹立株HRC細胞を
増殖し、その後１回洗つて血清を除く。 次に、これを抽出用培地として150cm2の底面
積を持つ培養壜に50mlの無血清のBMEと共に
２×107個以上の前記ヒト腎細胞由来株化細胞
HRCを加え、30℃〜37℃で一週間培養する。
次に前記のヒト腎細胞由来樹立株細胞を除去
し、その後、例えばアミコン社製のUM05、ま
たはYAO5等の分子量500で分画する限外濾過
膜で限外濾過を行い、分子量500以上の分画と
500未満の分画とに分け、各々の物質を採取す
る。 次に、この発明の効果を確認するための実験に
ついて述べる。 (1) 悪性腫瘍細胞増殖抑制剤の検定法 15mm径のプラスチツクシヤーレにヒト腎細胞由
来株化細胞HRC104個を植え込み、通常のごと
く、10％牛血清添加BMEにて24週間培養する。
次に、前記実施例の方法で採取した分子量500以
上の分画の物質をfr.1とし、500未満の分画の物
質をfr.2とし、これら各群の培地に新たに最初の
BMEと同量のアミノ酸類、ビタミン類、グルコ
ースを添加し、先の24時間培養した培地と、これ
らの採取した物質を含む培地を培地交換し、６日
間５％CO2，100％湿度の中、37℃で培養を行い、
ヒト腎細胞由来株化細胞HRCの増殖を調べた。 (2) 実験結果 表は、悪性腫瘍細胞の増殖阻止率を表わしたも
ので、加えたヒト腎細胞由来株化細胞HRCから
各々の生存数を引いた増殖阻止数とし、分子量
500以上の分画より得た物質を含むものの増殖阻
止数とに対して500未満の分画より得た物質を含
むものの増殖阻止数と限定濾過膜にかけずに得た
もの（whole）の増殖阻止数を百分比（％）にし
て算出した。 この結果、分子量500以上の分画fr.1に著しい
増殖抑制効果が見られ、希釈しても高率の増殖抑
制効果が見られ、他の群より有効成分が濃縮され
ていることが解り、しかも二つのロツトに共通の
結果が得られ、再現性が確認された。 【表】

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. １ ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞を培地ベイサル
    メデイアム イーグル（Basal Medium Eagle）
    培養し、別の無血清培地に移し30℃〜37℃で一週
    間培養し、次いで培養から悪性腫瘍細胞を除去
    し、該培地を分子量500で分画する限外濾過膜で
    限外濾過し、分子量500以上の分画の物質を採取
    することを特徴とする人の悪性腫瘍細胞増殖抑制
    剤の製造方法。
JP58078300A 1983-05-06 1983-05-06 人の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤の製造方法 Granted JPS59204122A (ja)

Priority Applications (3)

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JP58078300A JPS59204122A (ja) 1983-05-06 1983-05-06 人の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤の製造方法
US06/583,011 US4595657A (en) 1983-05-06 1984-02-23 Process for preparing an inhibiting agent against proliferation of animals malignant tumor cells
EP84303035A EP0125125A3 (en) 1983-05-06 1984-05-04 An agent for inhibiting the proliferation of malignant tumour cells and a process for the preparation thereof

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JPS59204122A JPS59204122A (ja) 1984-11-19
JPH0472807B2 true JPH0472807B2 (ja) 1992-11-19

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EP (1) EP0125125A3 (ja)
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US4595657A (en) 1986-06-17
JPS59204122A (ja) 1984-11-19
EP0125125A2 (en) 1984-11-14
EP0125125A3 (en) 1986-10-08

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