JPH0479575B2 - - Google Patents

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JPH0479575B2
JPH0479575B2 JP60501295A JP50129585A JPH0479575B2 JP H0479575 B2 JPH0479575 B2 JP H0479575B2 JP 60501295 A JP60501295 A JP 60501295A JP 50129585 A JP50129585 A JP 50129585A JP H0479575 B2 JPH0479575 B2 JP H0479575B2
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JP
Japan
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gel
acid
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buffer
preservative
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JP60501295A
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English (en)
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JPS61500809A (ja
Inventor
Kyashii Jei Urufuerudaa
Uiriamu Ee Gaasuku
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SmithKline Beecham Corp
Original Assignee
SmithKline Beecham Corp
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Publication date
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Publication of JPS61500809A publication Critical patent/JPS61500809A/ja
Publication of JPH0479575B2 publication Critical patent/JPH0479575B2/ja
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    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416Systems
    • G01N27/447Systems using electrophoresis
    • G01N27/44704Details; Accessories
    • G01N27/44747Composition of gel or of carrier mixture

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
  • Conductive Materials (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】
発明の背景 発明の分野 本発明は、ヘモグロビン変種を分離するための
電気泳動技術及びこれに使用するための電気泳動
ゲルに関する。 先行技術の記載 ヘモグロビン変種(variants)を分離する技術
及びこれに使用するための電気泳動ゲル
(electrophoretic gels)は、本技術分野(1−
4)において通常の知識を有する者にとつて周知
である。一般に、ヘモグロビン変種を分離するの
に使用される電気泳動ゲルは、寒天と、約6乃至
約6.5のPHを有する緩衝剤とからなるタイプのも
のであり、緩衝剤は、シトレート及びエチレンジ
アミン四酢酸(EDTA)よりなる群から選ばれ
る。 残念なことに、シトレート及びEDTAは、幾
つかの不利益を有している。例えば、シトレート
とEDTAは、長時間に亘つてPHのドリフト
(drift)を生じる。従つて、シトレートもEDTA
も、室温で貯蔵することができる原液の形態で使
用することができず、新鮮に作るか、冷凍しなけ
ればならない。 従つて、上記した問題点の1つ以上が緩和され
るか、又は除去される、ヘモグロビン変種の分離
のための電気泳動技術において使用する緩衝剤を
有することが特に望まれるところである。 発明の概要 本発明によれば、上記した問題点の1つ以上が
緩和され又は除去される、ヘモグロビン変種の分
離のための電気泳動技術が提供されている。本発
明の電気泳動技術は、(a)分析されるべき少なくと
も1つのサンプルを電気泳動ゲルに適用し、(b)工
程(a)の電気泳動ゲルを電気泳動処理し、(c)工程(b)
の電気泳動されたゲルを固定し、(d)工程(c)の固定
された電気泳動ゲルを乾燥させることを含んで成
る。本発明の改良された電気泳動技術は、新規な
電気泳動ゲルを使用することに特徴がある。新規
な電気泳動ゲルは、(a)ロドフイセア綱(the
class Rhodophycea;紅藻綱)から得られた少な
くとも1つの海産のヒドロコロイド(marine
hydrocolloid)と(b)緩衝剤(buffer)とを含んで
なる。一般に「ヒドロコロイド」とは、寒天、カ
ラゲーナン及びこれに関連する多糖類のような、
水を含んでゲルを形成する物質をいい、「海産」
とはそれを得る原料が海産のものであることを言
う。電気泳動ゲルは、緩衝剤がアジピン酸、グ
ルタル酸、イタコン酸、マレイン酸、りんご酸、
マロン酸、こはく酸、スクシンアミド酸
(succinamic acid)及びトリカルバリル酸より
なる群から選ばれ、かつ、約0.05乃至約0.09M
の濃度で存在することに特徴がある。この種の緩
衝剤が電気泳動ゲルに存在すると、上記した問題
点の少なくとも1つを緩和し、又は除去すること
ができる。 本発明の更に別の特徴とこれに伴なう利点は、
好ましい実施例についての以下の詳細な記載を読
めば、当業者にとつて明らかになるものである。 好ましい実施態様の説明 好ましくは、緩衝剤は、約0.06乃至約0.08Mの
濃度で存在する。 本発明で用いられるロドフイセア綱の藻類から
得られる海産のヒドロコロイドとは、具体的には
寒天、アガロース、フルセララン
(furcellaran;紅藻類から得られる多糖類の1
種)、カラゲーナンなどを意味する。好ましくは、
本発明において使用される海産のヒドロコロイド
は、寒天及び寒天とアガロースとの混合物よりな
る群から選ばれる。アガロースは、低い電気浸透
(electroendosmosis)のアガロース中程度の電気
浸透のアガロース又は高い電気浸透のアガロース
とすることができる。より好ましくは、アガロー
スは、低い電気浸透のアガロースである。 本発明の電気泳動ゲルは更に、任意に保存剤を
含むことができる。代表的な保存剤は、抗生物
質、ハロゲン化有機化合物及び無機化合物を包含
するが、これらに限定されない。本発明において
使用することができ、容易に入手することができ
る保存剤は、アジ化ナトリウム及びエチル水銀チ
オサリチル酸(ethyl mercurithio salicylic
acid)、ナトリウム塩である。 本発明の電気泳動ゲルはまた、2乃至6個の炭
素原子と2乃至4個のヒドロキシル基を有するア
ルキルポリオールを任意に含むことができる。本
発明において使用することができる適宜のアルキ
ルポリオールは、エチレングリコール、プロパン
ジオール、ブタンジオール、ペンタンジオール及
びグリセロールを包含するが、これらに限定され
ない。好ましくは、アルキルポリオールは、2乃
至4個の炭素原子を有する。 本発明の電気泳動ゲルにおいて使用される種々
の成分の正確な濃度は臨界的でない。しかしなが
ら、本発明の電気泳動ゲルは、好ましくは、約
0.3乃至約1.2パーセントの低い電気浸透のアガロ
ースと、約0.3乃至約1.2パーセントの寒天と、有
効量の保存剤と、有効量のアルキルポリオールと
からなる。より好ましくは、本発明の電気泳動ゲ
ルは、約0.4乃至約1パーセントの低い電気浸透
のアガロースと、約0.4乃至約1パーセントの寒
天とからなる。最適には、本発明の電気泳動ゲル
は、約0.5パーセントの低い電気浸透のアガロー
スと、約0.5パーセントの低い電気浸透のアガロ
ースと、約0.5パーセントの寒天と、約0.01パー
セントのエチル水銀チオサリチル酸(ethyl
mereurithio salicylic acid)、ナトリウム塩と、
5パーセントの1.2−プロパンジオールと、並び
に、0.2パーセントのマレイン酸及び約1パーセ
ントのマレイン酸、二ナトリウム塩からなる
0.05Mの緩衝剤とからなる。 本発明の電気泳動ゲルは、当業者にとつて周知
の技術により、調整することができる。一般に
は、種々の成分の混合物を約80乃至約100℃の温
度に加熱しながら、種々の成分を溶液中で混合す
ることにより、ゲル溶液がつくられる。電気泳動
ゲルは、通常の成型又は注型技術によりつくられ
ることができる。ゲルは、都合のよい温度、例え
ば、約2°乃至約40℃、好ましくは約18℃乃至約26
℃で貯蔵することができる。電気泳動ゲルは、使
用に供するまでは、密封したプラスチツクのトレ
イに貯蔵するのが好ましい。 サンプルは、先行技術において使用されている
技術、例えば、マイクロリツトルの注射器によ
り、本発明の電気泳動ゲルに適用することができ
る。電気泳動ゲルは、50ボルトで30分間電気泳動
処理される。所望の場合には、試薬アルコール60
パーセントと、脱イオン水30パーセントと、氷酢
酸10パーセントとのようなアルコール:酢酸混合
物において固定することができる。更に、ゲル
は、約80乃至約90℃で任意に乾燥することができ
る。 下記の実施例は、更に説明する目的のためにの
み挙げるものであり、開示されている発明を限定
しようとするものではない。 実施例1乃至9 ロドフイセア綱から得られる海産のヒドロコロ
イドとして0.5%の低い電気浸透のアガロースと、
0.5%のデイフコ・ラボラトリーズ・バクトーア
ガー(Difco Lrboratories Bacto−agar)なる
銘柄の寒天とを含有させ、0.1%のアジ化ナトリ
ウムと、5%の1,2−プロパンジオールを添加
してゲルを調整した。各ゲルはまた、第1表に掲
げる0.05Mの濃度の緩衝剤を使用した。
【表】 下記の電気泳動の手順を使用した。 1 電気泳動セルの各サイドに0.05M緩衝剤45ml
を充填する。 2 ゲルの表面をゲル吸取紙で静かに吸取る。2
g/dlのヘモグロビン濃度を有する溶血液
(hemolysate;赤血球を分解し、その中のヘモ
グロビンを取り出したもの)5mlを各サンプル
の溝にピペツトで注入する。最後のサンプルを
適用した後、5分待ち、過剰のサンプルをテン
プレート吸取紙(template blotter)で除去す
る。吸取紙を廃棄する。テンプレートを取外し
廃棄する。 3 ゲルをゲルブリツジ(gelbridge)の上及び
電気泳動セルの中に置き、ブリツジ上の+及び
−をゲルのそれらと調和させる。カバーし、電
源の中へ案内する。 4 50ボルトで35分間電気泳動処理する。 5 電気泳動の終了後、ゲルを電気泳動セルから
除去し、ゲルフレーム(gelframe)内に置き、
次にゲルホルダー内に置く。 6 固定液の中に5分間置く。 7 固定液から取出し、70℃で約20分間乾燥す
る。 8 乾燥したゲルを8−アミノ−7−(3−ニト
ロフエニルアゾ)−2−(フエニルアゾ)−1−
ナフトール−3,6−ジスルホン酸二ナトリウ
ム塩の青い染料の中に約3分間置く。 9 約3分間ステインの除去を行なう。 10 約5分間乾燥する。 11 パターンを目視観察する。 スクシンアミド酸及びトリカルバリル酸は、シ
トレートと匹敵し得るHbA及びFの分離を行な
い、イタコン酸、マレイン酸、りんご酸、マロン
酸及びこはく酸は、シトレートで得られるよりも
良好なHbA及びFの分離を行なつた。更にまた、
シトレート及びEDTAの場合と異なり、本発明
の範囲内の緩衝剤はいずれも、こはく酸を除き、
室温で貯蔵すると充分な貯蔵寿命を発揮し、即
ち、4カ月以上の期間に亘つてバクテリアの生育
もPHもドリフトも示さなかつた。 この開示に基づき、数多くの他の修正と変更が
当業者にとつて、当然に思いつくものである。こ
れらは、本発明の範囲内にあるように意図され
る。 参考文献 1 グラツツア(Gratzer)等、ジヤーナル・オ
ブ・クロマトグラフイ(J.of
Chromatography)、第5巻、第315乃至329頁
(1961年) 2 ロビンソン(Robinson)等、ジヤーナル・
オブ・ラボラトリー・アンド・クリニカル・メ
デイシン(J.Lab&Clin.Med.)、第50巻、第
645乃至752頁(1957年) 3 バーウイツク(Barwick)等、バイオシミ
カ・エト・バイオフイジカ−アクタ
(Biochimica et Biophysica Acta)、第668
巻、第485乃至429頁(1981年) 4 シユミツト(Schmidt)等、「ベーシツク・
ラボラトリー・メソツズ・オブ・ヘモグロビノ
パシー・デイテクシヨン」(“Basic
Laboratory Methods of Hemoglobinopathy
Detection”)ヒユー・パブリケーシヨン・ナン
バー(シーデイーシー)〔HEWPub.No.
(CDC)〕78−8266(1974年)。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1 (a) ロドフイセア綱から得られる少なくとも
    1つの海産のヒドロコロイドと、 (b) 緩衝剤とを含んで成る電気泳動ゲルにおい
    て、前記緩衝剤はアジピン酸、グルタル酸、
    イタコン酸、マレイン酸、りんご酸、マロン
    酸、こはく酸、スクシンアミド酸及びトリカル
    バリル酸よりなる群から選ばれ、かつ、約
    0.05乃至約0.09Mの濃度で存在することを特徴
    とする電気泳動ゲル。 2 有効量の保存剤を含む特許請求の範囲第1項
    の電気泳動ゲル。 3 2乃至6個の炭素原子と2乃至4個のヒドロ
    キシル基とを有する有効量のアルキルポリオール
    を含む特許請求の範囲第1項の電気泳動ゲル。 4 有効量の保存剤と、2乃至6個の炭素原子及
    び2乃至4個のヒドロキシル基を有する有効量の
    アルキルポリオールとを含む特許請求の範囲第1
    項の電気泳動ゲル。 5 緩衝剤bが約0.06乃至約0.08Mの濃度で存在
    する特許請求の範囲第1項の電気泳動ゲル。 6 海産のヒドロコロイドaが寒天と、寒天及び
    アガロースの混合物とからなる群より選ばれるヒ
    ドロコロイドであり、緩衝剤bを含んで成る特許
    請求の範囲第1項の電気泳動ゲル。 7 有効量の保存剤を含む特許請求の範囲第6項
    の電気泳動ゲル。 8 2乃至6個の炭素原子と2乃至4個のヒドロ
    キシル基とを有する有効量のアルキルポリオール
    を含む特許請求の範囲第6項の電気泳動ゲル。 9 有効量の保存剤と、2乃至6個の炭素原子及
    び2乃至4個のヒドロキシル基を有する有効量の
    アルキルポリオールとを含む特許請求の範囲第6
    項の電気泳動ゲル。 10 緩衝剤bが約0.06乃至約0.08Mの濃度で存
    在する特許請求の範囲第6項の電気泳動ゲル。 11 (イ) (a)ロドフイセア網身ら得られる少なく
    とも1つの海産のヒドロコロイドと、 (b)緩衝剤とを含んで成るゲルにおいて、前記
    緩衝剤はアジピン酸、グルタル酸、イタコン
    酸、マレイン酸、りんご酸、マロン酸、こはく
    酸、スクシンアミド酸及びトリカルバリル酸よ
    りなる群から選ばれ、かつ、約0.05乃至約
    0.09Mの濃度で存在するゲルに少なくとも1つ
    のサンプルを適用し、 (ロ) 工程(イ)の前記ゲルを電気泳動処理し、 (ハ) 工程(ロ)の前記電気泳動処理したゲルを固定
    し、 (ニ) 工程(ハ)の固定されたゲルを乾燥する工程を含
    んで成ることを特徴とする電気泳動方法。 12 前記ゲルが有効量の保存剤を含む特許請求
    の範囲第11項の電気泳動方法。 13 前記ゲルが2乃至6個の炭素原子と2乃至
    4個のヒドロキシル基とを有する有効量のアルキ
    ルポリオールを含む特許請求の範囲第11項の電
    気泳動方法。 14 前記ゲルが有効量の保存剤と、2乃至6個
    の炭素原子及び2乃至4個のヒドロキシル基を有
    する有効量のアルキルポリオールとを含む特許請
    求の範囲第11項の電気泳動方法。 15 緩衝剤bが約0.06乃至約0.08Mの濃度で存
    在する特許請求の範囲第11項の電気泳動方法。 16 海産のヒドロコロイドaが寒天と、寒天及
    びアガロースの混合物とからなる群より選ばれる
    ヒドロコロイドであり、緩衝剤bを含んで成るゲ
    ルである特許請求の範囲第11項の電気泳動方
    法。 17 前記ゲルが有効量の保存剤を含む特許請求
    の範囲第16項の電気泳動方法。 18 前記ゲルが2乃至6個の炭素原子と2乃至
    4個のヒドロキシル基とを有する有効量のアルキ
    ルポリオールを含む特許請求の範囲第16項の電
    気泳動方法。 19 前記ゲルが有効量の保存剤と、2乃至6個
    の炭素原子及び2乃至4個のヒドロキシル基を有
    する有効量のアルキルポリオールとを含む特許請
    求の範囲第16項の電気泳動方法。 20 緩衝剤bが約0.06乃至約0.08Mの濃度で存
    在する特許請求の範囲第16項の電気泳動方法。
JP60501295A 1984-03-12 1985-03-12 ヘモグロビン変種を分離するための電気泳動方法及びこれに使用する電気泳動ゲル Granted JPS61500809A (ja)

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US58884984A 1984-03-12 1984-03-12
US588849 1984-03-12

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Publication Number Publication Date
JPS61500809A JPS61500809A (ja) 1986-04-24
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JP (1) JPS61500809A (ja)
DE (1) DE3572402D1 (ja)
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3231626T1 (de) * 1981-01-19 1983-12-01 Beckman Instruments Inc., 92634 Fullerton, Calif. Elektrophoretisches gel zur trennung von isoenzymen
US4417415A (en) * 1982-04-26 1983-11-29 Battelle Development Corporation Process for culturing a microalga, and extracting a polysaccharide therefrom

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EP0189422A1 (en) 1986-08-06
EP0189422B1 (en) 1989-08-16
JPS61500809A (ja) 1986-04-24
WO1985004252A1 (en) 1985-09-26
DE3572402D1 (en) 1989-09-21

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