JPS61500809A - ヘモグロビン変種を分離するための電気泳動方法及びこれに使用する電気泳動ゲル - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ヘモグロビン変種を分離するための電気泳動技術及びこれに使用する電気泳動グ ル本発明は、ヘモグロビン変種を分離するための電気法ヘモグロビン変種（マａ ｒｉａｎｔａ）を分離する技術及びこれに使用するための電気泳動グル（ａｌｅ ｅｔｒｏｐｈｏｒ＠ｔｉｅｇｅ１ｍ）は１本技術分野（１−４）において通常の 知識を有する者にとりて周知である。一般に、ヘモグロビン変種を分離するのに 使用される電気泳動グルは、寒天と。

約６乃至約６．５のｐＨｔ有する緩衝剤とからなるタイプのものであり、緩衝剤 は、シトレート及びエチレンシアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）よりなる群から選ばれ る。

残念なことに、シトレート及びＥＤＴＡは、幾つかの不利益を有している。例え ば、シトレートとＥＤＴＡは、長時間に亘りて−のドリフト（ｄｒＨｔ　）　ｔ −生じる。従って。

シトレートもＥＤＴＡも、室温で貯蔵することができる原液の形態で使用するこ とができず、新鮮に作るか、冷凍しなければならない。□ 従りて、上記した問題点の１つ以上が緩和されるか、又は除去される、ヘモグロ ビン変種の分離のための電気泳動技術において使用する緩衝剤を有することが特 に望まれるところである。

発明の概要 本発明によれば、上記した問題点の１つ以上が！ｌｌ和され又は除去される、ヘ モグロビン変種を分離するための電気泳動技術が提供されている。本発明の電気 泳動技術は、（ａ）分析されるべき少なくとも１つのサンプルを電気泳動グルに 適用し、（ｂｌ工程（ａｔの電気゛泳動グルを電気泳動処理し、（Ｃ）工程（ｂ ｌの電気泳動され几グルを固定し、（ｄｉｌ工程ｃｌの固定された電気泳動グル を乾燥させるタイプのものである。本発明の改良された電気泳動技術は、新規な 電気泳動グルを使用することに特徴がある。新規な電気泳動グルは、体）ロドフ ィセア（Ｒｏｄｏｐｈｙｃｅａ）の類から処理された少なくとも１つのマリン・ ヒドロコロイド（ｍａｒｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄ　）と（ｂｌ緩衝剤 （ｂｕｆｆｅｒ）とからなるタイプのものである。電気泳動グルは、緩衝剤が（ １）アジピン酸、グルタル酸、イタコン酸、マレイン酸、りんご酸、マロン酸、 こはく酸、スクシナミン酸（ｓｕｅｃｉｎａｍｉｃａｃｉｄ）及びトリカルバリ ル酸よりなる群から選ばれ、かつ、　Ｔｆｉｌ約０．０５乃至約０．０９　Ｍの 濃度で存在することに特徴がある。この種の緩衝剤が電気泳動グルに存在すると 、上記１７た問題点の少なくとも１つ′ｔ−緩和し、又は除去することができる 。

本発明の更に別の特徴とこれに伴なう利点は、好ましい実施例についての以下の 詳細な記載を読めば、当業者にとって明らかになるものである。

好ましい実施態様の説明 好ましくは、緩衝剤は、約０゜０６乃至約０．０８　Ｍの濃度で存在する・ クラス・ロドフィｔアから処理されたマリン・ヒドロコロイドは、寒天、アガロ ース（ａｇａｒｏｓｅ　）　、フルセララン（ｆｕｒｃ＊１１ａｒａｎ　）及び カラグーナンを包含するが。

これらに限定されるものではない。好ましくは、本発明において使用されるマリ ン・ヒドロコロイドは、寒天及び寒天とアがロースとの混合物よりなる群から選 ばれる。

アガロースは、低い電気浸透（ｅｌａｅｔｒｏａｎｄｏｓｍｏｓｉｓ　）のアガ ロース中程度の電気浸透のアガロース又は高い電気浸透のアガロースとすること ができる。より好ましくは。

アガロースは、低い電気浸透のアガロースである。

本発明の電気泳動グルは更に、任意に保存剤を含むことができる。代表的な保存 剤は、抗・生物質、ハロゲン化有機化合物及び無機化合物を包含するが、これら に限定されない。本発明において使用することができ、容易に入手することがで きる保存剤は、アジ化す）　ＩＪウム及びエチルメルクリチオサリチル酸（ｅｔ ｈｙｌ　ｍｅｒｃｕｒｉ　ｔｈｉ。

ａａｌｉｃｙｌｉｃ　ａｃｉｄ　）　、ナトリウム塩である。

本発明の電気泳動グルはまた。２乃至６個の炭素原子と２乃至４個のヒドロキシ ル基を有するアルキルポリオールを任意代金むことができる。本発明において使 用することができる適宜のアルキルポリオールは、エチレングリコール、グロ／ ４’ンジオール、ブタンジオール％インタンジオール及びグリセロールを包含す るが、これらに限定されない。好ましくは、アルキルポリオールは、２乃至４個 の炭素原子を有する。。

本発明の電気泳動グルにおいて使用される檜々の成分の正確な濃度は臨界的でな い。しかしながら１本発明の電気泳動グルは、好ましくは、約０．３乃至約１． ２　／＃−セントの低い電気浸透のアガロースと、約０，３乃至約１．２パーセ ン−トの寒天と、有効量の保存剤と、安定化量のアルキルポリオールとからなる 。より好ましくは１本発明の電気泳動グルは、約０．４乃至約１ノ等−セントの 低い電気浸透のアガロースと、約０．４乃至約１／＃−セントの寒天とからなる 。最適には１本発明の電気泳動グルは、約０５パーセントの低い電気浸透のアガ ロースと、約０．５／４’−セントの寒天と、約０．０１／譬−セントのエチル メレウリチオサリチル酸（５ｔｈｙｌ　ｍ＠ｒ＊ｖｒｉｔｈｉｏ　５ｍ１ｉｃｙ ｌｉｅンジオールと、並びに　０．２　／＃−セントのマレイン酸及び約１）臂 −セントのマレイン酸、二ナトリウム塩からなる０、　０５　Ｍの緩衝剤とから なる。

本発明の電気体動グルは、当業者にとって周知の技術により、調製することがで きる。一般には１種々の成分の混合物を約８０乃至約１００℃の温度に加熱しな がら。

種々の成分を溶液中で混合することにより、グル浴液がつくられる。電気泳動グ ルは、通常の成型又は注型技術によりつくることができる。グルは、都合のよい 温度。

例えば、約２°乃至約４０℃、好ましくは約１８°乃至約２６℃で貯蔵すること ができる。電気泳動グルは、使用に供するまでは、密封したプラスチックのトレ イに貯蔵するのが好ましい。

サンプルは、先行技術において使用されている技術。

例えば、マイクロリットルの注射器により１本発明の電気泳動グルに適用するこ とができる。電気泳動グルは。

５０メルトで３０分間電気泳動処理される。所望の場合には、試薬アルコール６ ０／＃−セントと、脱イオン水３０ノや一セントと、氷酢酸ｌＯパーセントとの ようなアルコール：酢酸混合物において固定することができる。更に。

グルは、約８０乃至約９０℃で任意に乾燥することができる。

下記の実施例は、更に説明する目的のためにのみ挙げるものであり、開示されて いる発明を限定しようとするものではない。

実施例１乃至９ ０．５４の低い電気浸透のアガロースと、０．５１のディツー・ラゲラトリーズ ・バクトーアガ−（Ｄｉｆｅ。

Ｌａｂｏｒａｔｏｒ％＠Ｉ　Ｂａｃｔｏ−ａｇｍｒ　）なる銘柄の寒天と、０． １％のアジ化ナトリウムと、５チの１．２−プロパンジオールとからなるグルを 調製し念。各グルはまた。第１表に掲げる０、０５Ｍ０ｍ度の緩衝剤を使用した 。

第　■　表 １　イタコン酸 ２　マレイン酸 ３　りんご酸 ４　マロン酸 ５　こはく酸 ６　スクシナミン酸 ７　トリカルバリル酸 下記の電気泳動の手ＩＩＩＩを使用し几・１、　電気泳動セルの各サイドに０． ０５　Ｍ緩衝剤４５−を充填する。

２、グルの表面をグル吸取紙で静かに吸取る。２１７ｄｌノヘモクロビン濃度を 有する溶血物（ｈ＊ｍｏｌｙｓａｔｓ　）　５ｔｔｔ各サンプルの溝にピペット で注入する。最後のサンプルを適用した後、５分待ち、過剰のサンプルをテング レート吸取紙（ｔｅｍｐｌａＬ＠ｂｌｏｔｔ＠ｒ）で除去する。

吸取紙を廃棄する。テンプレートを取外し廃棄する。

１　グルをグルブリッジ（ｇｓｌ　ｂｒｉｄｇ・）の上及び電気泳動セルの中に 置き、ブリッジ上の十及び−をグルのそれらと調和させる。カバーし、電源の中 へ案内する。

４．５０＆ルトで３５分間電気泳動処理する。

＆　電気泳動の終了後、グルを電気泳動セルから除去し、Ｉｆｋ　７１／　−Ａ 　（ｇ＠ｌ　ｆｒａｍｅ　）内に置き１次にＩ＝にホルダー内に置く。

６、固定液の中に５分間置く。

７、　固定液から取出し、７０ｃ’：ｅ’約２０分間乾燥する。

＆　乾燥しｔグルｔ−８−アミノ−７−（３−ニトロフェニルア／）−２−（フ ェニルアゾ）−１−ナフトール−３，６−ジスルホン酸二ナトリウム塩の宵い染 料の中に約３分間置く、。

９、約３分間スティンの除去を行なう・１Ｇ、約５分間乾燥する。

１１、Ｉ＊ターンｔ−目視観察する。

スクシナミン酸及びトリカルバリル酸は、シトレートと匹敵し得るＨｂム及びＦ の分離を行ない、イタコン酸。

マレイン酸、りんご酸、マロン酸及びこはく酸は、シトレートで得られるよりも 良好なＨｂ　Ａ及びＢの分離を行なった。更にまた。シトレート及びＥＤＴＡの 場合と異なり、本発明の範囲内の緩衝剤はいずれも、こは＜ａｉｒ除き。

室温で貯蔵すると充分な貯蔵寿命を発揮し、即ち、４力月以上の期間に亘ってバ クテリアの生育４ＰＨのドリフト。

も示さなか−）　ｆｔ　。

この開示に基つき、ａ多くの他の修正と変更が当業者にとって、当然に思いりく ものである。これらは１本発明の範囲内にあるように意図される。

参考文献 １ｏ　グラッツア（Ｇｒａｔｚ蕾ｒ　）等、ジャーナル・オフ・りＯｆｆトゲラ フ４　（Ｊ、ｏｔ　ＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈＦ　）　、　５Ｇ　５巻、第３ １５乃至３２９頁（１９６１年） ２、　ロビンソン（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ　）等、ジャーナル・オフ・ラデラトリー ・アンド・クリニカル・メデイシン（Ｊ。

Ｌｍｂ　＆Ｃｌ１ｎ、Ｍｅｄ、　）　、第５０巻、　第６４５乃至７５２頁（１ ９５７年） ３、　パーウィック（Ｂａｒｖｉｅｋ　）等、バイオシミ力・ニド・パイオフ、 イジカーアクタ（Ｂｉｏｅ塾１ｒｎｉｃａ　ａｔ　ＢｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｅｔ ａ）　、　ＴＩＥ　６６８巻、第４８５乃至４２９頁（１９８１年） ４、　シュミット（Ｓｃｂｍｉｄｔ　）等、「ベーシック・ラデラトリー・メン ッズ・オフ・ヘモグロビン／やり−・ディタクシ１ンＪ　（＠Ｂａｇ％ｅ　Ｌｉ ｂｏｒ’ａｔｏｒｙ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆＨ＊ｍｏｇｌｏｂｉｎｏｐａｔｈｙ 　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ″ンヒ！−・”プリターフ１ン・ナンバー（シープイージ ー）　Ｃｌ１ＥＷ　Ｐｕｂ、　Ａ（ＣＤＣ））７＠−８２６６（１９７４年）独 占的所有権すなわち種別が主張される本発明の実施態様は１次の通り規定される 。

手続補正書 昭和６０年１１月２６日 特許庁長官　宇　賀　道　部　殿 １、事件の表示 国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ８５１００４０８２、発明の名称 ヘモグロビン変種を分離するための電気泳動技術及びこれに使用する電気泳動ゲ ル ３、補正をする者 事件との関係　出願人 名称　ベックマン　インスツルメンツ インニーポレーテッド ４、代理人 住　所　〒１０５東京都港区虎ノ門三丁目４番１７号鹿友ビル　電話（４３４） ０８６７番（代）氏名　（７００２）弁理士松永宣行 ６、補正の射像 明細書及び請求の、範囲の翻訳文 ７、補正の内容 別紙のとお・り浄書した・明細書及び請求の範囲の翻訳文を補充する。（但し１ 、内□容に変更なし）８、添付書類の目録 浄書した明細ｓ′９．び請求の範囲の翻訳文　各１通国際調査報告 八Ｎ）ＩＥＸ　ＴＯτｈ二　ｆＮＴＥＲＢＩＡＴｒＯＮＡＬ　５ＥＡＲＣＨＲＥ ＰＯＲＴ　０ｉｑＡＵ−Ａ−５３５９００Ｌ２１０４／８４　ＡＵ−Ａ−５６２ ０４’ｌＯＬＯ１０９／８１

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. １．（ａ）クラス・ロドフィセアから処理される少なくとも１つのマリン・ヒド ロコロイドと、 （ｂ）緩衝剤とからなるタイプの電気泳動ゲルにおいて、前記緩衝剤は（ｉ）ア ジピン酸、グルタル酸、イタコン酸、マレイン酸、りんご酸、マロン酸、こはく 酸、スクシナミン酸及びトリカルバリル酸よりなる詳から選ばれ、かつ、（ｉｉ ）約０．０５乃至約０．０９Ｍの濃度で存在することを特徴とする電気泳動ゲル 。
2. ２．有効量の保存剤を更に含む請求の範囲第１項の電気泳動ゲル。
3. ３．２乃至６個の炭素原子と２乃至４個のヒドロキシル基とを有する安定化量の アルキルポリオールを更に含む請求の範囲第１項の電気泳動ゲル。
4. ４．（ａ）有効量の保存剤と、 （ｂ）２乃至６個の炭素原子及び２乃至４個のヒドロキシル基を有する安定化量 のアルキルポリオールとを更に含む請求の範囲第１項の電気泳動グル。
5. ５．前記緩衝剤は約０．０６乃至約０．０８Ｍの濃度で存在する請求の範囲第１ 項の電気泳動ゲル。
6. ６．前記マリンヒドロコロイドは寒天と、寒天及びアガロースの混合物とからな る群より選ばれる請求の範囲第１項の電気泳動ゲル。
7. ７．有効量の保存剤を更に含む請求の範囲第６項の電気泳動ゲル。
8. ８．２乃至６個の炭素原子と２乃至４個のヒドロキシル基とを有する安定化量の アルキルポリオールを更に含む請求の範囲第６項の電気泳動ゲル。
9. ９．（ａ）有効量の保存剤と、 （ｂ）２乃至６個の炭素原子及び２乃至４個のヒドロキシル基を有する安定化量 のアルキルポリオールとを更に含む請求の範囲第６項の電気泳動ゲル。
10. １０．前記緩衝剤は約０．０６乃至約０．０８Ｍの濃度で存在する請求の範囲第 ６項の電気泳動ゲル。
11. １１．（ａ）少なくとも１つのサンプルをゲルに適用し、（ｂ）工程（ａ）の前 記ゲルを電気泳動処理し。 （ｃ）工程（ｂ）の前記電気泳動処理したゲルを固定し、（ｄ）工程（ｃ）の固 定されたゲルを乾燥する工程を備えるタイプの電気泳動方法において、ゲルは請 求の範囲第１項の前記電気泳動ゲルであることを特徴とする電気泳動方法。
12. １２．前記ゲルは有効量の保存剤を更に含む請求の範囲第１１項の電気泳動方法 。
13. １３．前記ゲルは２乃至６個の炭素原子と２乃至４個のヒドロキシル基とを有す る安定化量のアルキルポリオールを更に含む請求の範囲第１１項の電気泳動方法 。
14. １４．前記ゲルは更に （ａ）有効量の保存剤と （ｂ）２乃至６個の炭素原子及び２乃至４個のヒドロキシル基を有する安定化量 のアルキルポリオールとを含む請求の範囲第１１項の電気泳動方法。
15. １５．前記緩衝剤は約０．０６乃至約０．０８Ｍの濃度で存在する請求の範囲第 １１項の電気泳動方法。
16. １６．前記マリン・ヒドロコロイドは寒天と、寒天及びアガロースの混合物とか らなる群より選ばれる請求の範囲第１１項の電気泳動方法。
17. １７．前記ゲルは有効量の保存剤を更に含む請求の範囲第１６項の電気泳動方法 。
18. １８．前記ゲルは２乃至６個の炭素原子と２乃至４個のヒドロキシル基とを有す る安定化量のアルキルポリオールを更に含む請求の範囲第１６項の電気泳動方法 。
19. １９．前記ゲルは更に （ａ）有効量の保存剤と、 （ｂ）２乃至６個の炭素原子及び２乃至４個のヒドロキシル基を有する安定化量 のアルキルポリオールとを含む請求の範囲第１６項の電気泳動方法。
20. ２０．前記緩衝剤は約０．０６乃至約０．０８Ｍの濃度で存在する請求の範囲第 １６項の電気泳動方法。