JPH0489568A - ヒトｉｌ―６レセプターの免疫化学的測定法及び測定用キット - Google Patents
ヒトｉｌ―６レセプターの免疫化学的測定法及び測定用キットInfo
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- JPH0489568A JPH0489568A JP20407490A JP20407490A JPH0489568A JP H0489568 A JPH0489568 A JP H0489568A JP 20407490 A JP20407490 A JP 20407490A JP 20407490 A JP20407490 A JP 20407490A JP H0489568 A JPH0489568 A JP H0489568A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、ヒトＩＬ−６レセプターの免疫化学的測定法
及びｔす定量キットに関する。
及びｔす定量キットに関する。
［従来の技術］
インターロイキン−６（ＢＳＦ２／以下、ＩＬ−６と略
す）は、種々の重要な生理活性を有し、広く細胞の増殖
分化に関与しているタンパク質である。また、ＩＬ−６
の異常産生が種々の自己免疫疾患の病因因子である可能
性が報告されてイル（岸本、平野、Ａｎｎ、 Ｒｅｖ、
Ｉｍｍｕｎｏ、 ６． ｐ４８５゜生体内で多様な生
理活性を発揮するＩ Ｌ−６と特異的に結合し、Ｉ Ｌ
−６のシグナルを伝達するＩＬ−６レセプターの生理的
濃度を知ることは各種疾患の新しい診断マーカーとして
期待されるものである。
す）は、種々の重要な生理活性を有し、広く細胞の増殖
分化に関与しているタンパク質である。また、ＩＬ−６
の異常産生が種々の自己免疫疾患の病因因子である可能
性が報告されてイル（岸本、平野、Ａｎｎ、 Ｒｅｖ、
Ｉｍｍｕｎｏ、 ６． ｐ４８５゜生体内で多様な生
理活性を発揮するＩ Ｌ−６と特異的に結合し、Ｉ Ｌ
−６のシグナルを伝達するＩＬ−６レセプターの生理的
濃度を知ることは各種疾患の新しい診断マーカーとして
期待されるものである。
ＩＬ−６レセプターに関しては、その−次構造（Ｋ、
Ｙａｍａｓａｋｉ ら、５ｃｉｅｎｃｅ、 ２４１．
ｐ８２５（１９８８＋ ＋及びＩＬ−６レセプターに対
するモノクローナル抗体（Ｙ、 Ｈｉｒａｔａら、Ｊ、
Ｉ＋＋ｍｕｎｏｌ−。
Ｙａｍａｓａｋｉ ら、５ｃｉｅｎｃｅ、 ２４１．
ｐ８２５（１９８８＋ ＋及びＩＬ−６レセプターに対
するモノクローナル抗体（Ｙ、 Ｈｉｒａｔａら、Ｊ、
Ｉ＋＋ｍｕｎｏｌ−。
１４３、 ｐ２９００１）９８９１＋については既に報
告されている。
告されている。
しかしながら、各種疾患診断マーカーとして検体中のＩ
Ｌ−６レセプターを検出できるような低濃度レベルで
のＩＬ−６レセプターの検出方法は報告されていない。
Ｌ−６レセプターを検出できるような低濃度レベルで
のＩＬ−６レセプターの検出方法は報告されていない。
また、ＩＬ−６レセブタのＩＬ−６との結合の有無を分
析する方法も知られていない。
析する方法も知られていない。
［発明が解決しようとする課題］
従って、本発明の目的は、低濃度レベルのＩＬ−６レセ
プターを免疫化学的に測定する方法を提供するものであ
る。
プターを免疫化学的に測定する方法を提供するものであ
る。
［課題を解決するための手段］
本発明者らは、前記の課題を解決すべく種々検討した結
果、ヒトＩＬ−６レセプターに対するモノクローナル抗
体を用いて数十Ｐｇ／ａｌｌの低濃度のＩ Ｌ−６レセ
プターを測定することができる新しい測定方法を見出し
、この発明を完成した。
果、ヒトＩＬ−６レセプターに対するモノクローナル抗
体を用いて数十Ｐｇ／ａｌｌの低濃度のＩ Ｌ−６レセ
プターを測定することができる新しい測定方法を見出し
、この発明を完成した。
すなわち、本発明は、抗ヒトＩＬ−６レセプターモノク
ローナル抗体と、被検試料中に含まれるヒトＩ Ｌ−６
レセプターとを反応させて形成される抗原抗体複合物を
定量する工程を含む、ヒトＩＬ−６レセプターの免疫化
学的測定法を提供する。
ローナル抗体と、被検試料中に含まれるヒトＩ Ｌ−６
レセプターとを反応させて形成される抗原抗体複合物を
定量する工程を含む、ヒトＩＬ−６レセプターの免疫化
学的測定法を提供する。
また、本発明は、ヒトＩＬ−６レセプターに対するモノ
クローナル抗体を含むことを特徴とする、上記本発明の
測定法を行なうための測定用キットを提供する。
クローナル抗体を含むことを特徴とする、上記本発明の
測定法を行なうための測定用キットを提供する。
［発明の詳細な説明］
上述のように、本発明のヒトＩＬ−６レセプターの免疫
化学的測定方法においては、抗ヒト■Ｌ−６レセプター
モノクローナル抗体と、被検試料中に含まれるヒトＩＬ
−６レセプターとを反応させて形成される抗原抗体複合
物を定量する。
化学的測定方法においては、抗ヒト■Ｌ−６レセプター
モノクローナル抗体と、被検試料中に含まれるヒトＩＬ
−６レセプターとを反応させて形成される抗原抗体複合
物を定量する。
ここで、本発明の測定法に供される被検試料としてはヒ
ト血清、尿、その他例えば間接液等の体液、培養上清や
ヒト培養細胞、さらにはヒトＩ Ｌ−６レセプターを遺
伝子工学的に生産した時に生じるサンプル等を挙げるこ
とができる。
ト血清、尿、その他例えば間接液等の体液、培養上清や
ヒト培養細胞、さらにはヒトＩ Ｌ−６レセプターを遺
伝子工学的に生産した時に生じるサンプル等を挙げるこ
とができる。
本発明の測定法に用いられるモノクローナル抗体は、生
体内で産生されるＩ Ｌ−６レセブタ及び標準品として
使用する遺伝子工学的に作製されたＩＬ−６レセプター
に同程度の抗体価を有する抗体であればよく、このよう
なモノクローナル抗体は常法により作製することができ
る。すなわち、遺伝子工学的に作製したりコンビナンド
Ｉ Ｌ−６レセプターや培養細胞の上清から分離したＩ
Ｌ−６レセプターをマウス、例えば、Ｂａ１ｂ／ｃ等
に免疫して、抗体価が上ったところで牌細胞をミエロー
マ細胞と融合してハイブリドーマを作製することができ
る０次に、ＩＬ−６レセプターを特異的に認識するモノ
クローナル抗体を産生するハイブリドーマをスクリーニ
ングすればよい。
体内で産生されるＩ Ｌ−６レセブタ及び標準品として
使用する遺伝子工学的に作製されたＩＬ−６レセプター
に同程度の抗体価を有する抗体であればよく、このよう
なモノクローナル抗体は常法により作製することができ
る。すなわち、遺伝子工学的に作製したりコンビナンド
Ｉ Ｌ−６レセプターや培養細胞の上清から分離したＩ
Ｌ−６レセプターをマウス、例えば、Ｂａ１ｂ／ｃ等
に免疫して、抗体価が上ったところで牌細胞をミエロー
マ細胞と融合してハイブリドーマを作製することができ
る０次に、ＩＬ−６レセプターを特異的に認識するモノ
クローナル抗体を産生するハイブリドーマをスクリーニ
ングすればよい。
本発明の測定法は、抗ヒトＩ Ｌ−６レセブタ一モノク
ローナル抗体と、被検試料中に含まれるヒトＩ Ｌ−６
レセプターとを反応させて形成される抗原抗体複合物を
定量する工程を含む方法であるならば、いかなる態様の
ものであってもよい。例えば、抗原認識部位の異なる２
種のヒト■Ｌ−６レセプターに対するモノクローナル抗
体、ヒトＩＬ−６レセプターに対するモノクローナル抗
体とヒトＩ Ｌ−６レセプターに対するポリクローナル
抗体のサンドイッチ法、ヒトＩＬ−６レセプターに対す
るモノクローナル抗体とヒトＩＬ−６のサンドイッチ法
等を挙げることができる。
ローナル抗体と、被検試料中に含まれるヒトＩ Ｌ−６
レセプターとを反応させて形成される抗原抗体複合物を
定量する工程を含む方法であるならば、いかなる態様の
ものであってもよい。例えば、抗原認識部位の異なる２
種のヒト■Ｌ−６レセプターに対するモノクローナル抗
体、ヒトＩＬ−６レセプターに対するモノクローナル抗
体とヒトＩ Ｌ−６レセプターに対するポリクローナル
抗体のサンドイッチ法、ヒトＩＬ−６レセプターに対す
るモノクローナル抗体とヒトＩＬ−６のサンドイッチ法
等を挙げることができる。
以下に、これらの例として、＋１］ ヒトＩＬ６レセ
プターに対するモノクローナル抗体とポリクローナル抗
体によるサンドイッチ法及び（２）ヒトＩＬ−６を用い
、これと抗原抗体複合物との結合物を定量することによ
る測定法を説明する。
プターに対するモノクローナル抗体とポリクローナル抗
体によるサンドイッチ法及び（２）ヒトＩＬ−６を用い
、これと抗原抗体複合物との結合物を定量することによ
る測定法を説明する。
（１）ヒトＩ Ｌ−６レセプターに対するモノクローナ
ル抗体とポリクローナル抗体によるサンドイッチ法゛ まず、モノクローナル抗体を固体支持体に固定する。固
体支持体としては、マイクロタイタープレート、ポリス
チレン、ポリプロピレン等のプラスチック製あるいは金
属セラミック等の無機物質製のビーズを用いることがで
きる。抗体の固定は、常法に従って行なうことができる
。次に、固定化された一次抗体と分析検体とを反応させ
ることにより、検体中のＩＬ−６レセプターは特異的に
ＩＬ−６レセプターに対する抗体と接合することができ
る。次に、標識物質としてビオチンが結合したヒトＩＬ
−６レセプターに対するポリクローナル抗体を二次抗体
として加え、−次抗体を介して支持体に固定されたヒト
ＩＬ−６レセプターと二次抗体とを結合させることがで
きる。
ル抗体とポリクローナル抗体によるサンドイッチ法゛ まず、モノクローナル抗体を固体支持体に固定する。固
体支持体としては、マイクロタイタープレート、ポリス
チレン、ポリプロピレン等のプラスチック製あるいは金
属セラミック等の無機物質製のビーズを用いることがで
きる。抗体の固定は、常法に従って行なうことができる
。次に、固定化された一次抗体と分析検体とを反応させ
ることにより、検体中のＩＬ−６レセプターは特異的に
ＩＬ−６レセプターに対する抗体と接合することができ
る。次に、標識物質としてビオチンが結合したヒトＩＬ
−６レセプターに対するポリクローナル抗体を二次抗体
として加え、−次抗体を介して支持体に固定されたヒト
ＩＬ−６レセプターと二次抗体とを結合させることがで
きる。
検出系に用いる酵素としては、β−ガラクトシダーゼ、
アルカリフォスファターゼ、ペルオキシダーゼなどを挙
げることができるが、これらがヒトＩＬ−６レセプター
の検出に適当かどうかはりコンビナンドヒトＩＬ−６レ
セプターを標準物質として感度を調べれば良い。
アルカリフォスファターゼ、ペルオキシダーゼなどを挙
げることができるが、これらがヒトＩＬ−６レセプター
の検出に適当かどうかはりコンビナンドヒトＩＬ−６レ
セプターを標準物質として感度を調べれば良い。
β−ガラクトシダーゼを用いる場合を説明する。ストレ
プトアビジン／β−ガラクトシダーゼを添加し、前記ビ
オチンとストレプトアビジンとの結合を介してβ−ガラ
クトシダーゼが固定される。次に、β−ガラクトシダー
ゼの基質を加えて発色させ、発色強度を常法、例えば光
度計により測定する。発色性のβ−ガラクトシダーゼ基
質としては、免疫測定において一般的に用いられる４−
メチルウンベリフェリル−β−ガラクトシド、オルトニ
トロフェニルガラクトピラノシド（ＯＰＮＧ）等を用い
ることができる。
プトアビジン／β−ガラクトシダーゼを添加し、前記ビ
オチンとストレプトアビジンとの結合を介してβ−ガラ
クトシダーゼが固定される。次に、β−ガラクトシダー
ゼの基質を加えて発色させ、発色強度を常法、例えば光
度計により測定する。発色性のβ−ガラクトシダーゼ基
質としては、免疫測定において一般的に用いられる４−
メチルウンベリフェリル−β−ガラクトシド、オルトニ
トロフェニルガラクトピラノシド（ＯＰＮＧ）等を用い
ることができる。
２）ヒトＩＬ−６を用いた免疫化学的測定法この方法に
よれば、ヒトＩＬ−６レセプターがヒトＩＬ−６との結
合を保持しているかどうかを分析することができる。
よれば、ヒトＩＬ−６レセプターがヒトＩＬ−６との結
合を保持しているかどうかを分析することができる。
方法としては、前記の方法において二次抗体の代わりに
ＩＬ−６を用いる方法を挙げることができる。その際、
ＩＬ−６が一次抗体を介して支持体に固定されたＩＬ−
６レセプターと結合したかどうかを検出する方法として
ＩＬ−６に対する抗体を用いる方法や放射能標識された
ＩＬ−６を用いる方法がある。
ＩＬ−６を用いる方法を挙げることができる。その際、
ＩＬ−６が一次抗体を介して支持体に固定されたＩＬ−
６レセプターと結合したかどうかを検出する方法として
ＩＬ−６に対する抗体を用いる方法や放射能標識された
ＩＬ−６を用いる方法がある。
また、支持体にＩＬ−６を固定してＩ Ｌ−６レセプタ
ーに対する抗体とのサンドイッチ法でもよい。
ーに対する抗体とのサンドイッチ法でもよい。
本発明はさらに、上記本発明の方法を実施するためのキ
ットを提供する。明らかなように１本発明のキットはヒ
トＩＬ−６レセプターに対するモノクローナル抗体を含
む、また、上記（１）のサンドイッチ法を行なうための
キットは、ヒトＩＬ−６レセプターに対するモノクロー
ナル抗体、ビオチン標識された該ポリクローナル抗体及
びストレプトアビジン／β−ガラクトシダーゼ接合体を
含んで成る。キットとしてはさらにβ−ガラクトシダー
ゼ基質を含むこともできるが、これは分析現場において
別途調達することもできる。
ットを提供する。明らかなように１本発明のキットはヒ
トＩＬ−６レセプターに対するモノクローナル抗体を含
む、また、上記（１）のサンドイッチ法を行なうための
キットは、ヒトＩＬ−６レセプターに対するモノクロー
ナル抗体、ビオチン標識された該ポリクローナル抗体及
びストレプトアビジン／β−ガラクトシダーゼ接合体を
含んで成る。キットとしてはさらにβ−ガラクトシダー
ゼ基質を含むこともできるが、これは分析現場において
別途調達することもできる。
また、上記（２）の測定法を行なうためのキ・ントはヒ
トＩＬ−６レセプターに対するモノクローナル抗体に加
え、ヒトＩＬ−６を含む。
トＩＬ−６レセプターに対するモノクローナル抗体に加
え、ヒトＩＬ−６を含む。
本発明の方法では、下記実施例で明らかなようにリコン
ビナントＩＬ−６レセプターを数＋ｐｇ／ｍｌまで測定
が可能である。従って、本発明の方法により、ヒト血清
、尿、関節液等に含まれるＩ Ｌ−６レセプターの生理
的濃度、細胞培養上清中あるいは培養細胞上のＩＬ−６
レセプターの濃度、さらにはＩＬ−６レセプターを遺伝
子工学的に生産したときの濃度を正確かつ迅速に測定す
ることができる。
ビナントＩＬ−６レセプターを数＋ｐｇ／ｍｌまで測定
が可能である。従って、本発明の方法により、ヒト血清
、尿、関節液等に含まれるＩ Ｌ−６レセプターの生理
的濃度、細胞培養上清中あるいは培養細胞上のＩＬ−６
レセプターの濃度、さらにはＩＬ−６レセプターを遺伝
子工学的に生産したときの濃度を正確かつ迅速に測定す
ることができる。
［実施例］
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発
明の実施例はこれらに限られるものではない。
明の実施例はこれらに限られるものではない。
叉＊ｍｉ
ポリクローナル を用いたヒトＩＬ−６レセプターの
イ 、 法 コート用緩衝液ｆ０．０５Ｍ炭酸ナトリウム、ｐＨ８〜
９（に溶解した２μｇ／ｍｌの抗ＩＬ−６レセプターモ
ノクローナル抗体Ｍ ７１ Ｂ （Ｙ、 Ｈｉｒａｔａ
ら、Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、、 １４３． ｐ２９００
．１９８９年参声）を９６穴プレート（ＮＵＮＣ社製）
にウェル当たり１００μ！・入れ４℃で一晩放置した。
イ 、 法 コート用緩衝液ｆ０．０５Ｍ炭酸ナトリウム、ｐＨ８〜
９（に溶解した２μｇ／ｍｌの抗ＩＬ−６レセプターモ
ノクローナル抗体Ｍ ７１ Ｂ （Ｙ、 Ｈｉｒａｔａ
ら、Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、、 １４３． ｐ２９００
．１９８９年参声）を９６穴プレート（ＮＵＮＣ社製）
にウェル当たり１００μ！・入れ４℃で一晩放置した。
翌日、溶液を捨ててブロック用緩衝液Ａ（ＰＢＳ、０．
１％ＢＳＡ、０．２１ゼラチン、０．０５％アジ化ナト
リウム）あるいはＢ（ＰＢＳ、 １％Ｍｉｌｋ、０．０
５％ Ｔｗｅｅｎｌ をウェル当たり１５０ｔｔｆｆ加
え、３０分以上室温で放置した０次に、溶液を捨ててリ
ンス用緩衝液（ＰＢＳ、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０１で３
回以上洗った後、所定濃度のりコンビナンドＩ Ｌ−８
レセプターを加え室温で２〜３時間放置した５溶液を捨
ててリンス用緩衝液で３回以上洗った後、リンス用緩衝
液に溶解した５ＬＬｉｔ ／ｅｌのビオチン化抗ＩＬ−
６レセプターポリクローナル抗体（モルモット由来）を
加えて３７℃で１時間放置した。さらに溶液を捨ててリ
ンス用緩衝液で３回以上洗った後、］ ｍＭ ＭｇＣＬ
を含むリンス用緩衝液で１０００倍に希釈したストレプ
トアビジン−β−ガラクトシダーゼを加え３７℃で３０
分間放置した。その後、溶液を捨ててリンス用緩衝液で
３回以上洗浄した。基質用緩衝液（０，０１Ｍリン酸ナ
トリウム、０．ＩＭ ＮａＣ１、１５ＭＭｇＣＩ２．０
．１％アジ化ナトリウム、ｐＨ７，（１）に溶解した０
月ｍｇ／ｍｌの４−メチルウンベリフェリル−β−〇−
ガラクトシド（シグマ社）をウェル当たりＩＱＯｔｉＡ
加え、遊離した４−メチルウンベリフェロンの蛍光強度
を蛍光イムノリーダーでｉ＋＋定した。その結果を図１
に示す。なお、図１中、Ａ、Ｂは、それぞれブロック用
緩衝ｗｉＡ及びＢを用いて行なった測定結果を示す。
１％ＢＳＡ、０．２１ゼラチン、０．０５％アジ化ナト
リウム）あるいはＢ（ＰＢＳ、 １％Ｍｉｌｋ、０．０
５％ Ｔｗｅｅｎｌ をウェル当たり１５０ｔｔｆｆ加
え、３０分以上室温で放置した０次に、溶液を捨ててリ
ンス用緩衝液（ＰＢＳ、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０１で３
回以上洗った後、所定濃度のりコンビナンドＩ Ｌ−８
レセプターを加え室温で２〜３時間放置した５溶液を捨
ててリンス用緩衝液で３回以上洗った後、リンス用緩衝
液に溶解した５ＬＬｉｔ ／ｅｌのビオチン化抗ＩＬ−
６レセプターポリクローナル抗体（モルモット由来）を
加えて３７℃で１時間放置した。さらに溶液を捨ててリ
ンス用緩衝液で３回以上洗った後、］ ｍＭ ＭｇＣＬ
を含むリンス用緩衝液で１０００倍に希釈したストレプ
トアビジン−β−ガラクトシダーゼを加え３７℃で３０
分間放置した。その後、溶液を捨ててリンス用緩衝液で
３回以上洗浄した。基質用緩衝液（０，０１Ｍリン酸ナ
トリウム、０．ＩＭ ＮａＣ１、１５ＭＭｇＣＩ２．０
．１％アジ化ナトリウム、ｐＨ７，（１）に溶解した０
月ｍｇ／ｍｌの４−メチルウンベリフェリル−β−〇−
ガラクトシド（シグマ社）をウェル当たりＩＱＯｔｉＡ
加え、遊離した４−メチルウンベリフェロンの蛍光強度
を蛍光イムノリーダーでｉ＋＋定した。その結果を図１
に示す。なお、図１中、Ａ、Ｂは、それぞれブロック用
緩衝ｗｉＡ及びＢを用いて行なった測定結果を示す。
図１より、培地に溶解したりコンビナンドＩＬ−６レセ
プターが数十ｐｇ／ｍｌまで測定できることが分かる。
プターが数十ｐｇ／ｍｌまで測定できることが分かる。
及且皇ユ
通常の培養条件に従い、１０％ＦＣ５を含むＲＰＭＩ
１６４［）を培地として表１に示す細胞を培養した培養
細胞上清中の可溶化ヒトＩＬ−６レセプターの濃度を実
施例１と同様にして測定した。その結果を、表１に示す
。
１６４［）を培地として表１に示す細胞を培養した培養
細胞上清中の可溶化ヒトＩＬ−６レセプターの濃度を実
施例１と同様にして測定した。その結果を、表１に示す
。
表 １
化ｊソ包！厄し迭
コート用緩衝液ｔｏ、 ０５Ｍ炭酸ナトリウム、ｐＨ８
〜９）に溶解した２μｇ／ｍｌの抗Ｉ Ｌ−６レセブタ
一モノクローナル抗体Ｍ Ｔ １８ （Ｙ、 Ｈｉｒａ
ｔａら、Ｊ。
〜９）に溶解した２μｇ／ｍｌの抗Ｉ Ｌ−６レセブタ
一モノクローナル抗体Ｍ Ｔ １８ （Ｙ、 Ｈｉｒａ
ｔａら、Ｊ。
Ｉｍ＋ｎｕｎｏ１．、１４３．ｐ２９００．１９８９年
参照）を９６穴プレート（ＮＵＮＣ社製）にウェル当た
り１００μβ入れ４℃で一晩放置した。翌日、溶液を捨
ててブロック用緩衝液Ａ （ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、
０．２ｚゼラチン、００５％アジ化ナトリウム）をウェ
ル当たり１５０μ！加え、３０分以上室温で放置した。
参照）を９６穴プレート（ＮＵＮＣ社製）にウェル当た
り１００μβ入れ４℃で一晩放置した。翌日、溶液を捨
ててブロック用緩衝液Ａ （ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、
０．２ｚゼラチン、００５％アジ化ナトリウム）をウェ
ル当たり１５０μ！加え、３０分以上室温で放置した。
次に、溶液を捨ててリンス用緩衝液（ＰＢＳ、Ｏ１％Ｔ
ｗｅｅｎ ２０）で３回以上洗った後、リコンビナント
ヒトＩＬ−６レセプターを加え室温で２〜３時間放置し
た。溶液を捨てた後、ウェル当たり２００００ｃｐｍの
１２Ｊ−ＩＬ−６を加えて室温で２〜３時間放置した。
ｗｅｅｎ ２０）で３回以上洗った後、リコンビナント
ヒトＩＬ−６レセプターを加え室温で２〜３時間放置し
た。溶液を捨てた後、ウェル当たり２００００ｃｐｍの
１２Ｊ−ＩＬ−６を加えて室温で２〜３時間放置した。
リンス用緩衝液で３回以上洗った後、残存放射能を測定
した。その結果を図２に示す。
した。その結果を図２に示す。
本発明の方法により、培地に溶解したりコンビナンドＩ
Ｌ−６レセプターが数ｎ ｇ／ｗｎ ｌまで測定する
ことができることが分かる。
Ｌ−６レセプターが数ｎ ｇ／ｗｎ ｌまで測定する
ことができることが分かる。
［発明の効果］
本発明の方法によりＩＬ−６レセプターを高感度に迅速
にしかも多検体を同時に測定することが可能になった０
本発明の測定法は、ＩＬ−６レセプターの生理的濃度を
調べたり、ＩＬ−６レセプターの疾患における役割を解
明したり他の薬剤の効果を調べるのに有用なものである
。
にしかも多検体を同時に測定することが可能になった０
本発明の測定法は、ＩＬ−６レセプターの生理的濃度を
調べたり、ＩＬ−６レセプターの疾患における役割を解
明したり他の薬剤の効果を調べるのに有用なものである
。
図１は、リコンビナント可滴性ヒトＩＬ−６レセプター
の濃度と１本発明の測定法により測定された吸光度との
関係を示す図、 図２は、リコンビナント可溶性ヒトＩＬ−６レセプター
の濃度と、本発明の測定法により測定された残存放射能
との関係を示す図である。
の濃度と１本発明の測定法により測定された吸光度との
関係を示す図、 図２は、リコンビナント可溶性ヒトＩＬ−６レセプター
の濃度と、本発明の測定法により測定された残存放射能
との関係を示す図である。
Claims (6)
- （１）抗ヒトＩＬ−６レセプターモノクローナル抗体と
、被検試料中に含まれるヒトＩＬ−６レセプターとを反
応させて形成される抗原抗体複合物を定量する工程を含
む、ヒトＩＬ−６レセプターの免疫化学的測定法。 - （２）前記抗原抗体複合物の定量は、ビオチン標識抗ヒ
トＩＬ−６レセプターポリクローナル抗体を用いたサン
ドイッチ法により行なわれ、該ビオチン標識抗ヒトＩＬ
−６レセプターポリクローナル抗体の検出は、ストレプ
トアビジン／β−ガラクトシダーゼおよびその基質を用
いる酵素免疫分析により行なわれる請求項１記載の測定
法。 - （３）前記抗原抗体複合物の定量は、該抗原抗体複合物
とヒトＩＬ−６との結合物を定量することにより行なわ
れる請求項１記載の測定法。 - （４）ヒトＩＬ−６レセプターに対するモノクローナル
抗体を含むことを特徴とする、請求項１記載の測定法を
行なうための測定用キット。 - （５）ヒトＩＬ−６レセプターに対するモノクローナル
抗体、ビオチン標識抗ヒトＩＬ−６レセプターポリクロ
ーナル抗体、検出系としてのストレプトアビジン／β−
ガラクトシダーゼおよびその基質を含むことを特徴とす
る請求項４記載の測定用キット。 - （６）ヒトＩＬ−６を含むことを特徴とする請求項４記
載の測定用キット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20407490A JP3212597B2 (ja) | 1990-08-01 | 1990-08-01 | ヒトｉｌ―６レセプターの免疫化学的測定法及び測定用キット |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20407490A JP3212597B2 (ja) | 1990-08-01 | 1990-08-01 | ヒトｉｌ―６レセプターの免疫化学的測定法及び測定用キット |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0489568A true JPH0489568A (ja) | 1992-03-23 |
| JP3212597B2 JP3212597B2 (ja) | 2001-09-25 |
Family
ID=16484342
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20407490A Expired - Lifetime JP3212597B2 (ja) | 1990-08-01 | 1990-08-01 | ヒトｉｌ―６レセプターの免疫化学的測定法及び測定用キット |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3212597B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1306963C (zh) * | 1994-10-21 | 2007-03-28 | 岸本忠三 | 用于治疗il－6产生所致疾病的药物组合物 |
-
1990
- 1990-08-01 JP JP20407490A patent/JP3212597B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1306963C (zh) * | 1994-10-21 | 2007-03-28 | 岸本忠三 | 用于治疗il－6产生所致疾病的药物组合物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3212597B2 (ja) | 2001-09-25 |
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