JPH0491793A - 発酵法によるアミノ酸の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 Ｌ−スレオニンやＬ−リジンなどのアミノ酸は、医薬、
食品、飼料などに広く利用されている重要な物質である
。

従来の技術 従来、安価に大量に人手可能な発酵原料であるメタノー
ルからアミノ酸を製造する方法としては、アクロモバク
タ−属およびシュードモナス属（特公昭４５−２５２７
３号公報）、プロタミノバクタ−属（特開昭４９−１２
５５９０号公報）、プロタミノバクタ−属およびメタノ
モナス属（特開昭５０−２５７９０号公報）、ミクロサ
イクラス属（特開昭５２−１８８８６号公報）などに属
する微生物を用いる方法が知られている。しかし、いず
れの場合もアミノ酸の生産量は少なく、満足すべきもの
ではない。

発明が解決しようとする課題 本発明の目的は、医薬、食品、飼料などに有用な１、−
スレオニンやＬ−ＩＪリジンどのアミノ酸を工業的によ
り効率よく、安価に製造する方法を提供することにある
。

課題を解決するた約の手段 本発すによれば、メチロバチルス属に属し、抗生物質お
よびアミノ酸代謝拮抗物質から選ばれる少なくきも１つ
に対する感受性が向上した菌株を親株として変異処理に
より得られ、Ｌ−スレオニン、Ｌ　−リジンおよびアミ
ノ酸代謝拮抗物質から選ばれる少なくとも１つに耐性を
有し、かつアミノ酸生産能を有する微生物を、メタノー
ルを主たる炭素源として含有する培地に培養し、培養物
中にアミノ酸を生成蓄積させ、該培養物からアミノ酸を
採取することを特徴とする発酵法によるアミノ酸の製造
法を提供することができる。

以下に本発明の詳細な説明する。

本発明で用いられる微生物は、メチロバチルス属に属し
、抗生物質およびアミノ酸代謝拮抗物質から選ばれる少
なくとも１つに対する感受性が向上した菌株を親株とし
て変異処理により得られ、Ｌ−スレオニン（以下、Ｌ−
Ｔｈｒと略記する。）、Ｌ−リジン（以下、Ｌ−Ｌｙｓ
と略記する。）およびアミノ酸代謝拮抗物質から選ばれ
る少フーくとも１つに耐性を有し、メタノールを主たる
炭素源として含有する培地に生育でき、かつアミノ酸お
くにＬ−ＴｈｒやＬ−Ｌｙｓの生産能を有する微生物で
あればよい。このようフ二性質を有する変異株は、親株
に紫外線照射、Ｎ−メチル−Ｎ′−二トローＮ−二トロ
ソグアニジン（ＮＴＧ）処理などによる通常の変異処理
を施して得られる。

抗生物質としては、カナマイシン、アンピンリン、スト
レプトマイシンなどがあげられる。

アミノ酸代謝拮抗物質としては、α−アミノ−β−ヒド
ロキシ吉草酸（以下、ＡＨＶと略記する。）、５−２−
アミノエチル−Ｌ−システィン（以下、ＡＥＣと略記す
る。）およびＤＬ−４，５−トランスデヒドロリジン（
以下、Ｄ）（Ｌと略記する。）などがあげられる。

本発明で用いられる微生物の具体例を第１表に示す。

第　　　　１　　　　表 メチロバチルス・エスピーＤ＾−１９株　゛メチロバチ
ルス・エスピーＤ＾−３５株　；メチロバチルス・エス
ピーＡＬ−７６株　　・メチロバチルス・エスピーＴＲ
−２６株メチロバチルス・エスピー＾ＴＲ−８９株　；
Ｌ−Ｌｙｓ　−ＡＨν Ｄ）ＩＬ Ｌ−Ｌｙｓ　４．’　ＡＨＶ −Ｔｈｒ Ｌ−Ｔｈｒ　　−１−ＡＥ［： これらの菌株の取得方法を示す。

メチロバチルス属細菌の野生株はアミノ酸代謝拮抗物質
に対する感受性が低く、野生株にアミノ酸代謝拮抗物質
に対する耐性を付与し、代謝制御変異株を分離すること
が難しい。アミノ酸代謝拮抗物質に対する感受性が低い
のは、種々の薬剤に対する膜透過性が悪いことが原因と
して考えられる。そこで野生株からアミノ酸漏出型変異
株を透導し、得られた変異株の中から種々の薬剤に対す
る感受性が向上し、薬剤の透過性が向上したと考えられ
る株を親株として取得する。

親株としては、メチロバチルス属に属し、カナマイシン
、アンピシリン、ストレプトマイシンなどの抗生物質、
α−アミノ−β−ヒドロキシ吉草酸、５−２−了ミノエ
チルーＬ−システィンなどのアミノ酸代謝拮抗物質から
選ばれる少なくとも１つに対する感受性が向上したもの
が用いられる。

具体的には既に公知の菌株やアクロモバクタ−・メタノ
ーロフイラ（＾ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ　　ｍｅｔｈ
ａｎｏｌｏｐｈｉｌａ）ＡＴＣＣ２１４５２Ｋ、シュー
ドモナス・インスエタ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　　１
ｎｓｕｅｔａ　）ＡＴＣＣ２１，２７６株、プロタミノ
バクタ−・チアミノファーガス（Ｐｒｏｔａｍｉｎｏｂ
ａｃｔｅｒｔｈｉａｍｉｎｏｐｈａｇｕｓ　）ＡＴＣＣ
２１３７１株、メタノモナス・メチロポーラ（Ｍｅｔｈ
ａｎｏｍｏｎａｓ　　ｍｅｔｈｙｌｏｖｏｒａ　）ＡＴ
［：０２１３６９株などの野生株の、前記したような薬
剤に対する感受性を向上させた変異株が好ましい。

既に公知の菌株としては、シュードモナス・インスエタ
に−０１５（ＡＴＣＣ２１９６６株）、シュードモナス
・インスエタに−０３８（ＡＴＣ０２１９６７株）、プ
ロタミノバクタ−・チアミノファーガスに−２２４（Ａ
ＴＣＣ２１，９６９株）などがあげられる。

ＡＴ［：［”　２１．４５２ａ、ＡＴ［’（：　２１２
７６株、ＡＴ［［：　２１３７１株、ＡＴＣＣ２１３６
９株、ＡＴＣＣ２＋、９６６株、ＡＴＣＣ２１９６７株
およびＡＴＣＣ２１９６９株はいずれも、現在メチロバ
チルス（Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ）漠に分類さ
れていることがインターナンヨナル・ジャーナル・シス
テマティック・バタテリオロンー（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉ
ｏｎａｌ　Ｊ、　ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉ
ｏｌｏｇｙ）、　２７　　、　ｐ２４７−２５５．１９
７７　；　３４　。

ｐ１８８−２０Ｌ　　１９８４に記載されている。

そこで本明細書中ではＡＴＣＣ２１４５２株、ＡＴ［：
Ｃ２］、２７６株、ＡＴＣＣ２１３７１株、ＡＴＣ［：
　２１３６９株、ＡＴＣＣ２１９６６株、ＡＴＣＣ２１
９６７株およびＡＴＣＣ２１９６９株をそれぞれ、メチ
ロバチルス・エスピー１００１．１０１１．１００６．
１００３、Ｋ−０１，５、Ｋ−０３８およびに一２２４
株と呼称する。

メチロバチルス・エスピー１．０１）１　！、１０２１
！、１００６株および１００３株などの野生株に、薬剤
に対する感受性を向上させるには、前記したような野生
株にＮＴＧ処理などの通常の変異処理を施す。具体的な
菌株としては、メチロバチルス・エスピー１人１１１株
などがあげられる。以下に１Ａ１１１株の取得方法を示
す。

メチロバチルス・エスピー１０１１株を下記組成からな
るＭ１培地で３０℃、２４時間培養する。得られた菌体
を常法によりＮＴＧ処理（５００ｍｇ／　ｌ　、　３０
℃で３０分）し、カザミノ酸（デイフコ社製）０．１％
およびＬ−）　ＩＪブトファン２０ｍｇ／矛金含有るＭ
１寒天培地（Ｍｌ培地＋寒天１．５％）に塗布する。こ
れを、３０℃で３〜１４日培養し、生じたコロニーを釣
菌分離する。このようにして得られた変異株を試験管内
の３ｍｌの種培地へ植菌し、３０℃で１８時間培養する
。

得られた種培養液１１を、５０ｍ１容大型試験管中の、
メタノールを２％添加した発酵培地１０ｍ１に植え、培
養２４時間後に２％量のメタノールをさらに添加し、３
０℃で合計４８時間培養する。培養はいずれも、振盪培
養でおこなう。

以下に、それぞれの培地組成を示す。

Ｍ　１　培地組成：メタノール０．５％、硫酸アンモニ
ウム０．２％、燐酸−カリウム０．１％、燐酸二カリウ
ム０．７％、塩化ナトリウム０．０１％、チオウレアｏ
、０１％、硫酸マグネシウム０．０５％、硫酸第一鉄１
ｏ■／ｊｌ！、硫酸マンガン８ｍｇ／β、チアミン１■
／β、ビオチン０．０１．ｍｇ／　Ｒ、ｐＨ７，０種培
地（以下、種培地ａという）組成：粉末ブイヨン（極東
製薬社製）２％、酵母二キスＳ　（大五製薬社製）０．
５％、メタノール１％、ｐＨ７，０発酵培地（以下、発
酵培地すという）組成、硫酸アンモニウム０．８％、燐
酸−カリウム０．１％、燐酸二カリウム０．７％、塩化
ナトリウム０１％、硫酸マグネシウム００４％、硫酸第
一鉄１０■／β、硫酸マンガン１．Ｏｍｇ／矛、ビオチ
ン０．０５■／１、チアミン０．２■／ｉ、パントテン
酸カルシウム０，５■／Ｉ！、ニコチン酸０．５ｍｇ／
β、コ４−ン・ステイープ・リカー０．３％、カザミノ
酸０．０５％、炭酸力ルウシム２％、ｐＨ７，０ 〔ｐＨは水酸化す）　ＩＪウムまたは塩酸を用いて調整
する。いずれの培地においても、メタノール以外の成分
を溶解し、１２０℃、１５分間の蒸気滅菌をおこない、
その後、メンブレンフィルター　（ミルボア社製、０，
４５μｍ）で除菌したメタノールをそれぞれの量添加す
る。〕 培養終了後、菌体および炭酸カルシウムと培養液上清を
遠心分離する。培養液上清中に含まれるアミノ酸をアミ
ノ酸分析計（日本分光社製、高速液体クロマトグラフィ
ー、アミノ酸分析システム）で分析する。グルタミン酸
、アスパラギン酸、バリン、アラニンなどのアミノ酸が
培養液上清に検出されている菌株をアミノ酸漏出型変異
株として取得する。

つぎにこのようにして得られたアミノ酸漏出型変異株の
薬剤感受性の検定をおこなう。カナマイシン硫酸塩［Ｋ
＋ｍ）　　（明治製菓社製）、アンピシリン〔Ａρ〕　
（シグマ社製）、ストレプトマイシン硫酸塩ＣＳｍ１　
　（半井製薬社製）、α−アミノ−βヒドロキシ吉草酸
［ＡＨＶ）（シグマ社製）　、Ｓ−２アミノエチル−Ｌ
−システィン〔八ＢＣ：ｌ（シグマ社製）を種々の濃度
で添加したＭｌ寒天培地に上記で分離したアミノ酸漏出
型変異株を塗布し、３０℃で２〜５日培養し生育の有無
を調べ、親株より薬剤感受性の向上した菌株を選ぶ。

メチロバチルス・エスピー１０１１株を親株とし、該親
株より薬剤感受性の向上した菌株をメチロバチルス・エ
スピーｌ式１１１株と命名する。

第２表に代表的な菌株の生育が阻害される最少の薬剤濃
度（最少阻止濃度）を示す（但し、Ｋ−２２４株の場合
は、フェニルアラニン５０ｍｇ／Ｉを含むＭｌ寒天培地
を用い、薬剤に対する最少阻止濃度を測定した。）。

第 表 １Ａ１１１株 Ｑ ］［１ｆ）０ に−０３８株 １００６株 ２００　　２００　　５００　　　＞３０００　　　＞
３０００に一２２４株 ２０　　　５０　　　５０　　　１０００　　　１．０
００つぎに本発明で用いられる微生物の具体的取得方法
を示す。

本発明で用いられる微生物は、前記したようなメチロバ
チルス属に属する菌株に、Ｌ−Ｔｈｒ。

Ｌ−Ｌｙｓおよびアミノ酸代謝拮抗物質から選ばれる少
なくとも１つに耐性を付与させた変異株である。このよ
うな変異株は、ＮＴＧ処理などの通常の変異処理により
得られる。変異処理後、その親株が生育できないような
濃度のＬ−Ｔｈｒ。

Ｌ−Ｌｙｓおよびアミノ酸代謝拮抗物質から選ばれる少
なくとも１つを含有する培地中または培地上に生育でき
るような変異株を分離すればよい。

以下に本発明の変異株の取得方法を具体的に示す。

（１）メチロバチルス・エスピーＴＡ−４７株の取得方
法メチロバチルス・エスピー１＾１１１株をカザミノ酸
０，１％およびＬ−）ＩＪブトファン２０■／βを含む
Ｍ１培地で３０℃、２４時間培養する。得られた菌体を
、常法によりＮＴＧ処理（５００ｍｇ／　ｉ’、３０℃
で３０分）し、Ｌ−Ｔ　ｈ　ｒ　　５０００　ｍｇ／　
１を添加したＭ１寒天培地に塗布する。これを、３０℃
で３〜１４日培饗し、生じたコロニーを約菌分離して、
Ｌ−Ｔｈｒ耐性株を取得し、Ｌ−ＴｈｒおよびＬ−Ｌｙ
ｓ生産試験にかける。親株よりＬ−ＴｈｒおよびＬ−Ｌ
ｙｓ生産能が向上した菌株を選び、メチロバチルス・エ
スピーＴＡ−４７株と命名する。

（２）メチロバチルス・エスピー１０１１株の取得方法 Ｌ　−Ｔ　ｈ　ｒ　　５０００ｍｇ／　１のかわりにＬ
−Ｌｙｓ１０００ｍｇ／　ｌおよびＡ　ＨＶ　　１００
０ｍｇ／　ｌをＭ１寒天培地に添加する以外は、前記（
１）と同様にしておこない、Ｌ−ＬｙｓおよびＡＨＶに
耐性な変異株を取得した。親株よりＬ−Ｔｈｒ生産能の
向上した菌株を選び、メチロバチルス・エスピー１０１
１株と命名する。

（３）　　メチロバチルス・エスピーＤＡ−３！Ｍ５ｋ
（７）取得方法 Ｌ　−Ｔ　ｈ　ｒ　　５０００ｍｇ／　ｉのかわりにＤ
ＨＬ５０００■／ｌをＭ１寒天培地に添加する以外は、
前記（１）と同様にしておこない、ＤＨＬ耐性株を取得
した。

親株よりＬ−Ｌｙｓ生産能の向上した菌株を選び、メチ
ロバチルス・エスピーＤΔ−３５株ト命名スる。

ＤＨＬはジャーナル・オブ・バイオケミストリー　（Ｊ
ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　１
９８６年）、１００巻、２１〜２５頁に記載された方法
により、ジャーナル・オブ・ザ・アメリカンケミカル・
ソサイエテイ　−（Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　　ｔｈｅ
　　Ａｍｅｒｉｃａｎ　　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　　５ｏｃ
ｉｅｔｙ。

１９６１年）、８３巻、２２７９〜２２８１頁の言己載
を参考に合成し９７％以上純度の標品を精製して用いた
。

（４〕　　メチロバチルス・エスピーＡＬ−７６株の取
得方法 Ｌ　−Ｔ　ｈ　ｒ　　５０００ｍｇ／　１のかわりにＡ
ＨＶ２０００ｍｇ／　ｌおよびＬ　−Ｌ　ｙ　ｓ　　５
０００ｍｇ／　ｊ！をＭ１寒天培地に添加する以外は、
前記（１）と同様にしておこフヨい、ＡＨＶおよびＬ−
Ｌｙｓに耐性な変異株を取得した。親株よりＬ−Ｌｙｓ
生産能の向上した菌株を選び、メチロバチルス・エスピ
ーＡＬ−７６株と命名する。

（５）　　メチロバチルス・エスピーＴＲ−２６株の取
得方法 １Δ１１１株のかわりにに一２２４株を親株として用い
、Ｌ−Ｔｈ　ｒ　　　５０００　ｍｇ／ｆのかわりにＬ
　−Ｔ　ｈ　ｒ　　１０００ｍｇ／　ｊ！を、フェニル
アラニン５０ｍｇ／　Ａを含むＭ１寒天培地に添加する
以外は、前記（１）と同様にしておこない、Ｌ−Ｔｈｒ
ｉｔｔ株を取得した。親株よりＬ−Ｔｈｒ生産能の向上
した菌株を選び、メチロバチルス・エスピーＴＲ−２６
株と命名する。

（６）　　メチロバチルス・エスピーＡＴＲ−８９株の
取得方法 ｌΔ１１１株のかわりにに一２２４株を親株として用い
、Ｌ−Ｔ　ｈ　ｒ　　　５０００　ｍｇ／　１のかわり
にＬ　−Ｔ　ｈ　ｒ　１０００ｍｇ／　１およびＡＥＣ
１０００ｍｇ／ｌを、フェニルアラニン５０■／ｌを含
む旧寒天培地に添加する以外は、前記〔１）と同様にし
ておこない、Ｌ−ＴｈｒおよびＡＥＣに耐性な変異株を
取得した。親株よりＬ−Ｔｈｒ生産能およびＬ−Ｌｙｓ
生産能の向上した菌株を選び、メチロバチルス・エスピ
ーＡＴＲ−８９株と命名する。

得られた変異株は、各々ブダペスト条約に基づいて平成
２年６月２２日付で工業技術院微生物工業技術研究所に
寄託されている。各々の菌株の寄託番号を第３表に示す
。

第　　　３　　　表 得られた変異株と親株を、前記した薬剤を含むＭ１寒天
培地上で３０℃、４８時間培養したときの生育度の程度
を比較した結果を第４表に示す。

第 表 十二よくビニＩ＝ニジｒｎ−る 二住冑し＝） 本発明で用いられる微生物は、通常メタノール資化性微
生物の培養に用いられる方法で培養される。

本発明におけるアミノ酸生産用の培地は、炭素源、窒素
源、無機イオンおよび必要に応じてその他の有機微量成
分を含む培地であれば、天然培地、合成培地のいずれで
も用いられる。

炭素源としてはメタノールを主に用い、培地中に０．０
５〜３０％添加する。菌の生育、Ｌ−ＴｈｒやＬ−Ｌｙ
ｓの生産性が向上する場合には、ピルビン酸、２−ケト
グルタル酸などの有機酸、酵母エキス、ペプトン、コー
ン・ステイープ・リカーなどの天然有機成分などを０．
０１〜４％程度培地に添加してもよい。窒素源としては
、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、酢酸アンモニ
ウム、硝酸アンモニウム、燐酸アンモニウム、アンモニ
アガス、アンモニア水、尿素などを０．１〜８％培地に
添加して用いる。これらのほかに、通常、リン酸カリウ
ム、リン酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄
、硫酸マンガンなどの微量成分が少量添加される。

培養は振盪培養または通気攪拌培養などの好気的条件下
、ｐＨ５〜９、温度２４〜３７℃に保持しておこなわれ
、通常２４〜１２０時間で終了する。

培養物よりＬ−ＴｈｒやＬ−Ｌｙｓなどのアミノ酸を採
取するには、培養物から菌体などの沈澱物を除去し、得
られた培養液を通常の方法たとえば、イオン交換処理法
、濃縮法、塩析法などに付すことによりアミノ酸を採取
することができる。

たとえば、Ｌ−Ｔｈｒを採取するには菌体を除去した培
養液上清を塩酸でｐＨ２に調整した後、強酸性カチオン
交換樹脂に通液後、希アンモニア水で吸着成分を溶出し
、脱アンモニア後濃縮する。これにアルコールを添加し
、冷却保存下で生成した結晶を集めるこきによりＬ−Ｔ
ｈｒを得ることができる。

また、Ｌ−Ｌｙｓを採取するには、菌体を除去した培養
液上清を水酸化ナトＩＪウム水溶液でｐＨ７０に調整し
た後、カチオン交換樹脂に通液後、希塩酸で吸着成分を
溶出し、Ｌ−Ｌｙｓに相当する画分を集め、濃縮する。

これにアルコールを添加し、冷却保存下で生成した結晶
を集約ることによりＬ−Ｌｙｓを得ることができる。

以下に本発明の実施例を示す。

実施例１．Ｌ−Ｔｈｒの製造 メチロバチルス・エスピー１０１１株を試験管内の３ｍ
ｌの種培地ａへ植菌し、３０℃で１８時間培養した。得
られた培饗液ｌゴを、５０ｍ容大型試験管中のメタノー
ルを２％添加した発酵培地ｂ　　１０ｍｆ！に加え、培
養２４時間後に２％量のメタツルをさらに添加し、３０
℃で合計４８時間培養した。

培養は、いずれも振盪培養でおこなった。

培養終了後、菌体、炭酸カルシウムを遠心で除去し、培
養液上清中に含まれているＬ−Ｔｈｒｍ度をアミノ酸分
析計（日本分光社製、高速液体クロマトグラフィー、ア
ミノ酸分析システム）で定量した。

ＴＡ−４７株のかわりに１０１１株、１００６株、１＾
１１１株、Ｋ−２２４株、ＤＡ−１９株、Ｔｅ１−２６
株およびＡＴＲ−８９株を各々用いる以外は前記と同様
にして培養し、培養液上清中に含まれるＬ−Ｔｈｒ　９
度を定量した。

結果を第５表に示す。

第　　　　５　　　　表 １０１１株　　　　　　　　０．０１以下１Ａ１１１株
　　　　　０．０２ ＴＡ−４７株　　　　　　２．０ ＤＡ−１９株　　　　　　１．８１ １００６株　　　　　　　　０．０１ＪＪ下に−２２４
株　　　　　　０．０４ ＴＲ−２６株　　　　　　０．４３ Ｌ−Ｔｈｒ画分を集め、減圧濃縮した。これにエタノー
ルを加え、４℃に冷却し、生成した結晶を集めて乾燥し
た結果、純度９８％以上のＬ−Ｔｈｒの結晶が１．２５
ｇ得られた。

実施例３Ｌ−Ｌｙｓの製造 メチロバチルス・エスピー１０１１株、ｉへ１１１　株
、ＴＡ−４７株、　ＤＡ−３５株、ＡＬ−７６株、１０
０６株、Ｋ−２２４株および＾ＴＲ−８９株を用い、実
施例１と同様に各々培１【　しプこ。

培養終了後、培養液上清中に含まれているＬＪ、ｙｓ濃
度をアミノ酸分析計で定量した。結果を第６表に示す。

第６表 実施例２Ｌ−Ｔｈｒの採取 実施例１に示したと同様の方法でＴＡ−４７株を培養し
た。培養液上ｉ　８００−を集め、塩酸でｐＨ２に調整
した後、強力チオン交換樹脂ダイヤイオン５ＫＩＢ（Ｉ
Ｉ型）のカラムに通塔した。カラムを水洗後、２Ｎアン
モニア水でカラムの吸着成分を溶出し、実施例４Ｌ−Ｌ
ｙｓの製造 メチロバチルス・エスピーＡＬ−７６株を種培地８２５
ｍ１の入った３００ｍ１容三角フラスコに２白金耳量植
菌し、３０℃、１８時間振盪培養した。得られた種培養
液全量を種培地ａ２２５ｍ＆の入った２β容三角フラス
コに加え、さらに、３０℃、１８時間振盪培養した。

つぎに、５１容培養槽（ミツワバイオシステム社製）に
発酵培地ｂ　　２．２５βを調製し、上記２５０ｍ１の
種培養液全量を植菌し３０℃、２．５に／分の通気量、
６００ｒｐｍの条件で攪拌しながら培養した。また、培
養中、培養液のｐＨを６規定Ｎ［（、叶液で６８に自動
調節した。メタノールは培養開始時に０５％添加し、そ
の後０．５％を越えない量のメタノールをペリスタポン
プ（アト−社製）で連続的に添加した。

その結果、培養７２時間でＬ−Ｌｙｓが培地中に３．０
２ｇ／Ｉ！蓄積した。

実施例５Ｌ−Ｌｙｓの採取 実施例１で示した方法でＡＬ−７６株を培養した。培養
液上清１２００　ｍを遠心分離で集め、水酸化す）　Ｉ
Ｊウムでｐｆ１７．０に調整した後、強力チオン交換樹
脂ダイヤイオン５ＫＩＢ（ＮＨ３型）のカラムに通した
。カラムを水洗後、ＩＮ塩酸でカラムの吸着成分を溶出
し、Ｌ−Ｌｙｓに相当する画分を集約、減圧濃縮した。

これにエタノールを加え、４℃に冷却し、精製した結晶
を集約で乾燥した結果、純度９６％以上のＬ−Ｌｙｓの
結晶を塩酸塩として１．８８ｇを得た。

発胡の効果 本発明の方法によれば、Ｌ−ＴｈｒやＬ−Ｌｙｓなどの
アミノ酸を安価な原料から効率よく生産することができ
る。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）メチロバチルス（Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｉｌｌｕ
   ｓ）属に属し、抗生物質およびアミノ酸代謝拮抗物質か
   ら選ばれる少なくとも１つに対する感受性が向上した菌
   株を親株として変異処理により得られ、Ｌ−スレオニン
   、Ｌ−リジンおよびアミノ酸代謝拮抗物質から選ばれる
   少なくとも１つに耐性を有し、かつアミノ酸生産能を有
   する微生物を、メタノールを主たる炭素源として含有す
   る培地に培養し、培養物中にアミノ酸を生成蓄積させ、
   該培養物からアミノ酸を採取することを特徴とする発酵
   法によるアミノ酸の製造法。
2. （２）抗生物質が、カナマイシン、アンピシリンおよび
   ストレプトマイシンである請求項（１）記載の発酵法に
   よるアミノ酸の製造法。
3. （３）アミノ酸代謝拮抗物質が、α−アミノ−β−ヒド
   ロキシ吉草酸、Ｓ−２−アミノエチル−Ｌ−システイン
   およびＤＬ−４，５−トランスデヒドロリジンから選ば
   れる物質である請求項（１）記載の発酵法によるアミノ
   酸の製造法。
4. （４）アミノ酸がＬ−スレオニンである請求項（１）記
   載の発酵法によるアミノ酸の製造法。
5. （５）アミノ酸がＬ−リジンである請求項（１）記載の
   発酵法によるアミノ酸の製造法。