JPH0499800A - 組換えマウスｉｌ―６レセプターの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野〕 本発明は可溶性のマウスインターロイキン−６（マウス
ＩＬ−６）レセプター、及び遺伝子組換法によるその製
造方法、並びにこの方法に使用するための遺伝子及び発
現ベクターに関する。

〔従来の技術〕

インターロイキン−６（ＢＳＦ２／以下Ｉ　Ｌ−６と略
す）は、種々の重要な生理活性を有し、広く細胞の増殖
分化に関与しているタンパク質である。

さらにＩ　Ｌ−６の異常産生が種々の自己免疫疾患の病
因因子である可能性が報告されている（岸本、平野、Ａ
ｎｎ、Ｒｅｖ、ｌｍｌ１ｌｕｎｏ１．、６．　ｐ４８５
．１９８８年参照）。

〔発明が解決しようとする課題］ Ｉ　Ｌ−６の阻害剤として、細胞膜上のヒ）ＩＬ−６レ
セプターあるいは細胞表層より離脱している（以下、可
溶性と呼ぶ、）ヒ）　Ｉ　Ｌ−６レセプター、及びヒト
Ｉ　Ｌ−６レセプターに対する抗体が期待されるが、こ
れらをマウス等の実験動物に投与して、その効果を調べ
ることが必須となる。

しかし、可溶性ヒトＩ　Ｌ−６レセプターあるいはヒト
Ｉ　Ｌ−６レセプターに対する抗体をマウス等の実験動
物に投与しても、実験動物のＩ　Ｌ−６作用を抑制する
ことが期待できない。実験動物の中では、マウスが、取
り扱いの容易さにおいて、さらにはｒ　＞６過剰産生に
より自己免疫疾患になるストレインが確立されていると
いう点において、最もその使用が望まれる。従って、可
溶性ヒトＩＬ−６レセプターあるいはヒトＩＬ−６レセ
プターに対する抗体を薬剤として開発するには、可溶性
マウスＩ　Ｌ−６レセプターあるいはマウスＩ　Ｌ−６
レセプターに対する抗体をマウスに投与してその薬効を
調べることが重要になる。

Ｉ　Ｌ−６レセプターの様な生体内の存在量が極めて微
量な蛋白質を大量に生産するためには、遺伝子工学的な
手法が一般に用いられる。この手法では、目的とする蛋
白質をコードするＤＮＡ配列を発現させるためのプロモ
ーター等のＤＮＡ配列を、翻訳時に該ＤＮＡから目的蛋
白質が生産されるように読取り可能に結合させ、このＤ
ＮＡ配列を宿主として選定された微生物または培養細胞
を形質転換可能なベクターに導入し、このベクターで宿
主を形質転換した後該ＤＮＡ配列を発現させる方法であ
る。しかし、ＩＬ−６レセプターの様な本来膜上に存在
する蛋白質を可溶型で発現させる場合、ＩＬ−６レセプ
ター遺伝子に適当な変異を挿入し、該遺伝子からＴＬ−
６と結合能を有する可溶性Ｉ　Ｌ−６レセプターが発現
されなければならない。さらに発現されたＩＬ−６レセ
プターを同定し、ＩＬ−６との結合能を有する蛋白質を
分離回収しなければならない。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者は、ＩＬ−６レセプターについて鋭意研究を行
った結果、マウスＩＬ−６レセプター遺伝子に適当な変
異を挿入し、該遺伝子からＩＬ−６と結合能を有する可
溶性ＩＬ−６レセプターを適当な宿主−ベクター基で発
現させ、発現した該蛋白質を同定し、遺伝子工学的に大
量に該蛋白質を生産し、さらにＩＬ−６との結合能を有
した状態で効率良く該蛋白質を分離回収する方法を確立
した。

従って本発明は、可溶性のマウスインターロイキン−６
（マウスＩ　Ｌ−６）レセプター、及びそれをコードす
る遺伝子を含有する発現ベクターにより形質転換された
宿主を培養し、そして当該培養物からマウスＩＬ−６レ
セプター又はその誘導体を採取することを特徴とする可
溶性マウスＩＬ６レセプターの製造方法、並びにこの方
法において使用するための遺伝子及び発現ベクターを提
供するものである。

〔発明の詳細な説明〕

１、　可　性マウスｆ　Ｌ−６レセブタ一本発明は、可
溶性マウスＩ　Ｌ−６レセプターに関する。第７図には
マウスＩ　Ｌ−６レセプターをコードするｃＤＮＡの塩
基配列、及びそれに対応するアミノ酸配列が示されてお
り、このアミノ酸配列は４６０アミノ酸残基からなり、
Ｎ末端側から第２番目に位置するロイシンから第１９番
目に位置するアラニンにかけてと、第３５８番目に位置
するセリンから第３８５番目に位置するロイシンにかけ
ての部分に疎水性アミノ酸残基が位置している、この２
つの疎水性領域は、前者がシグナルペプチド領域、後者
が膜貫ｉ！ｉ領域であると考えられる。

そこで、本発明においてはアミノ酸位置第３２３位の次
に部位特異的変異により翻訳終止コドンを挿入し、この
変異ＤＮＡを発現させることにより第３２３位で終るア
ミノ酸配列を有する蛋白質が宿主細胞から分泌される可
溶性であり且つＩ　Ｌ−６に結合する能力を有すること
を見出した。この結果、少なくとも３２３位のアミノ酸
までのアミノ酸配列を含み、且つ第３５８位のセゾンか
ら始まると予想される膜貫通領域を含有しない蛋白質は
可溶性マウスＩ　Ｌ−６レセプターであることが明らか
にされた。従って本発明は、第２位のロイシンから第３
２３位のイソロイシンまでのアミノ酸配列を有する可溶
性マウスＩ　Ｌ−６レセプターを提供する。本発明はさ
らに上記アミノ酸配列に１〜少数個のアミノ酸が付加さ
れているか、又は上記アミノ酸から１〜少数個のアミノ
酸が欠失しているアミノ酸配列を有しなおＩＬ−６に結
合することができる蛋白質を包含する。

２．１Ｌ−６レセプターをコードするＤＮＡ本発明で提
供される遺伝子工学的にマウスＩＬ６レセプターを生産
するために用いるＩＬ−６レセプターをコードするＤＮ
Ａ配列とは、前記１゜において記載した塩基配列を有す
るＤＮＡ、または、該配列中の１個あるいは複数個のヌ
クレオチドが他のヌクレオチド配列に置換されており、
そして／または１個あるいは複数個、のヌクレオチドが
欠失しており、そして／または１個あるいは複数個のヌ
クレオチドが付加されているＤＮＡ配列である。１ＤＮ
Ａ配列はマウスＩＬ−６レセプターｃＤＮＡ等を出発材
料として作製してもよいし、化学的に合成してもよい。

前記のごとき種々のＤＮＡ配列は、特願平１２９２２３
０並びに本明細書の参考例１及び第８図に記載されてお
り、この記載に基づいて本発明のマウスＩ　Ｌ−６レセ
プターをコードするＤＮＡを得ることができる。

３、　発Ｊヒシ託汐二 本発明で提供されるマウスＩ　Ｌ＝６レセプターをコー
ドするＤＮＡ配列を発現、即ちＩ　Ｌ−６レセプターを
生産しうる複製可能な発現ベクターは、前項で説明した
Ｉ　Ｌ−６レセプターをコードするＤＮＡ配列、該ＤＮ
Ａ配列を発現させるためのＤＮＡ配列、及び宿主中でベ
クターＤＮＡを複製するための複製起点等ををし、選定
した宿主を形質転換できるものであれば、制限無く適宜
選定して使用できる。該ＤＮＡ配列を発現させるための
ＤＮＡ配列としてはプロモーター系が重要であり、乳糖
プロモーター系、トリプトファンプロモーター系、ＧＡ
Ｌ４プロモーター系、ＳＶ４０プｔｌ−Ｅ−一ター系、
アデノウィルスプロモーター系等が例示できるが宿主と
の関係において適宜選定する必要がある。

またこれらベクターは、これらベクターを用いて選定さ
れた宿主を形質転換させる操作に当たり、ベクターが導
入されなかった宿主と導入された宿主との選別を可能に
するため例えば、アンピシリン等の薬剤に対する耐性を
宿主に付与するためのＤＮＡ配列を含んでいることが望
ましい。

４、ｉｆ 本発明では、特別の制限なしに通常の遺伝子工学的に蛋
白質を生産するために用いられる微生物または培養細胞
が使用できる。微生物としてはに−１２等の種々の大腸
菌類、枯草菌類、酵母等を例示できる。培養細胞として
は、ＣＯ３細胞（猿の腎臓線維芽細胞）、ＣＨＯ細胞（
チャイニーズハムスターの卵巣細胞）　、Ｃ１２７細胞
（マウス癌細胞）等を例示することができる。

５、　マウスＩＬ−６レセプターの 本発明で提供されるマウスＩＬ−６レセプターの遺伝子
工学的生産法により生産されたＩ　Ｌ−６レセプターは
、生産に用いた微生物あるいは培養細胞中から、あるい
はその培養液中から、通常の生理活性蛋白質回収法によ
って分離回収することができる。この方法としては、市
販の各種ＨＰＬＣ、カラムを用いたクロマトグラフィー
等を例示できる。また培養液中から該蛋白質を分離回収
するためには、培養液中の他の蛋白質量の減少、例えば
培養細胞を無血清培地で培養して該蛋白質を発現させる
ことにより、効率を高めることができる。

〔実施例〕

以下本発明をさらに詳細に説明するために実施例を示す
が、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。

Ｘ隻班玉　ＣＨＯでのマウスＩ　Ｌ−６レセプ可溶性マ
ウスＩ　Ｌ−６レセプターを製造するため、マウスＩ　
Ｌ−６レセプター蛋白質のＣ末端側の膜貫通領域及び細
胞内領域が除去されたマウスＩＬ−６レセプターをＣｆ
（Ｏ細胞で発現することができるプラスミドｐＥｃＥｄ
ｈｆｒｍ３２３を作製した。

まず、Ｌａｍｂｄａ　Ｐｉ　（特願平１−（平成１年１
１月１３日出願）、及び本明細書の参考例１を参照のこ
と〕よりマウスＩ　Ｌ−６レセプターをコードするｃＤ
ＮＡを含むＥｃｏＲＩ　−ＥｃｏＲＩ断片を切りだし、
Ｍ１３ｍｐ１８のＥｃｏＲＩサイトに挿入した。次に、
オリゴヌクレオチド５　’　−ＡＡＴＣＣＴＣＴＡＧＡ
ＡＣＣＣＣＡ　−３’を用いて、オリゴヌクレオチドを
用いた部位特異的ｉｎ　ｖｉｔｒｏ変異体作製システム
（アマ−ジャム）により、３２３番目のアミノ酸をコー
ドするＤＮＡの直後に終止コドンを挿入し、ｍｐ１８　
　ＭＩＬ６Ｒ３２３を作製した。

次に、ＳＶ４０初期プロモーター及び後期プロモーター
を有するプラスミドｐＥＣＥ（Ｌ、Ｅｌｌｉｓら、Ｃｅ
１ｌ。

４５、　ｐ７２１．１９８６年参照）のＰｖｕ　Ｕ部位
に、■−Ｂ−ｂ−３−４由来のｄｈｆｒ遺伝子を発現可
能な方向に挿入し、新しいプラスミドｐＥＣＥｄｈｆｒ
を作製した。

さらこれをＫｐｎ　Ｉ及びＸｂａ　Ｉにより切断し、■
ｐｌＢ−ＭＩＬ６Ｒ３２３の２本鎖ＤＮＡをＫｐｎ　Ｉ
及びＸｂａ　Ｉで切断することにより得られるＩ　Ｌ−
６レセプターｃＤＮＡを含む断片をこの部位に挿入し、
ｐＥｃＥｄｈｆｒｍ３２３を作製した。第１図にｐＥｃ
Ｅｄｈｆｒｍ３２３の作製法を示し、第２図にｐＥｃＥ
ｄｈｆｒｍ３２３の構造を示す。

ｐＥｃＥｄｈｆｒ＋ｗ３２３をＣｈｅｎらの方法（Ｍｏ
１．Ｃｅ１１．Ｂｉｏｌ、。

７、　ｐ２７４５．１９８７年参照）により、ｄｈｆｒ
遺伝子欠損ＣＨＯ細胞株ＤＸＢ−１１（Ｇ、Ｕｒｌａｎ
ｄら、Ｐｒｏｃ、Ｎ、Ａ、Ｓ。

７７、　ｐ４２１６．１９８０年参照）に導入し、ＭＴ
Ｘ　（メソトレキセート；シグマ社製）でスクリーニン
グをし、可溶性マウスＩ　Ｌ−６レセブタ一高産生株Ｍ
Ｒ２５を作製した。

培養上清中の可溶性Ｉ　Ｌ−６レセプターの検出は以下
の方法により行った。すなわち２　Ｉｒｇ／　ｄのＭＴ
１８抗体（抗ヒトＩ　Ｌ−６レセプタ一モノクローナル
抗体、特願昭６３第１９４８８５号参照）を含むＰＢＳ
を９６穴のマイクロタイタープレートにｌウェルあたり
１００Ｊ１！加え、１晩４°Ｃで放置した。洗浄後、１
ウエルあたり１００ｍの１％ＢＳＡ　−ＰＢＳを加え、
２時間室温で放置した。洗浄後、１００ｍの可溶性ヒト
Ｉ　Ｌ−６レセプターを発現しているＣＨＯ細胞の培養
上清（特願昭６３第１９４８８５号参照）を加え、２時
間室温で放置することにより該ＩＬ−６レセプターをプ
レートに固定した。洗浄後、″５Ｉ〜ヒトＩ　Ｌ　−６
（２０、０００ｃｐａ＋）と、可溶性マウスＩ　Ｌ−６
レセプターを発現している細胞培養上清の濃縮液とをそ
れぞれ５０ｉｄづつ加え、２時間室温で放置した。洗浄
後、各ウェルを切断し、プレートに固定された放射能を
γ−カウンターで測定した［第３図（ａ））。対照とし
てｐＥＣＥｄｈｆｒｍ３２３が導入されていない細胞株
ＤＸＢ−１１を同様に処理し放射能を測定した〔第３図
（ｂ）〕。

第３図はＭＲ２５が可溶性マウスＩ　Ｌ−６レセプター
を産性していることを示している。

Ｍ　　可　　マウスＩ　Ｌ−６レセプタ−ＭＲ２５をｌ
Ｏ層層線細胞培養装置Ｎｕｒ＋ｓ社、セルフアクドリー
）を用いて、１０％牛脂児血清人α−ＭＥＭ培地２リッ
トルで密な状態まで培養後、培地を除き、ＰＢＳで洗浄
後、ＭＥＭ　ｎｏｎ−ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ａｍｉｎ。

ａｃｉｄ　５ｏｌｕｔｉｏｎ　（Ｓｉｇｍａ社）及びＬ
−グルタミン（Ｓｉｇｍａ社）を含むニスクロン５Ｆ−
０無血清培地（三光純薬社）２リツトルに置換し培養し
た。３日後、培養上清を回収し、新たな２リツトルのニ
スクロン５Ｆ−０培地でさらに４日間培養した。

こうして計４リットルの可溶性ＩＬ−６レセプター含有
無血清培養上清を得た。

尖施±土　可　　■Ｌ−６レセプターの実施例３に記載
の４リツトルの可溶性Ｉ　Ｌ−６レセプター含有培養上
清を遠心分離機５０００ｇ　、　１０分間遠心し沈澱を
除き、０．２２１Ｍのフィルターで濾過した。濾過液を
排除分子量１万の中空糸型限外濾過システム（東ソー）
を用いて５００−まで濃縮した。さらに、排除分子量１
万の簡易型窒素加圧成膜濃縮装置を用いて５０Ｍ１まで
濃縮した。濃縮液を、２０−Ｍリン酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ７，４）　、０．１５ＭＮａＣ１で透析した後、
ＴＳＫ　ｇｅｌ　Ｂｌｕｅ−５Ｐ−カラム（東ソー、２
１．５謹Ｘ１５Ｃ１＋）にかけ、０から３Ｍのチオシア
ン酸カリウムの直線濃度勾配法により溶出した。各フラ
クションを実施例２に記載の方法、すなわち固相化した
抗Ｉ　Ｌ−６レセプタ一モノクローナル抗体ＭＴ１８に
結合した可溶性ヒ）　Ｉ　Ｌ−６レセプターへの１２５
１−ヒトＩ　Ｌ−６の結合に対する、溶出画分の阻害活
性を指標として、可溶性マウスＩ　Ｌ−６レセプターを
含む両分を得た。

この画分を１０ｍＭ　）リス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）
で透析し、同波で平衡化したＴＳＫ　ｇｅｔ　ＤＥＡＥ
カラム（東ソー、２１．５＋ａｍＸ１５Ω）にかけた。

上記の方法で可溶性マウスＩＬ−６レセプターを含む画
分を集め、さらに濃縮した。これを２０ｓ＋Ｍリン酸ナ
トリウム緩衝液（ｐＨ７，４）、　０．１５Ｍ　ＮａＣ
ｌ１で平衡化したＴＳＫ　ｇｅｌ　Ｇ３０００Ｓ−カラ
ム（東ソー、２１．５ｍｍ　Ｘ６０ｃｍ）にかけ、可溶
性マウスＩ　Ｌ−６レセプタ一精製標品を得た。

第４図は、各種カラムクロマトグラフィーのパターンを
、そして第５図は可溶性マウスＩ　Ｌ−６レセブタ一精
製標品のＳＤＳ／ＰＡＧＥのパターンを示す。

〔発明の効果〕

本発明で提供されるマウスＩ　Ｌ−６レセプターの遺伝
子工学的生産法、及び該蛋白質の分離回収法により、自
然状態では極めて微量にしか生産されないＩ　Ｌ−６レ
セプターを大量に生産することが可能である。また本発
明で提供される該蛋白質を生産および分離回収する方法
に基づくことにより、種々の変異を挿入したマウスＩＬ
−６レセプターを短期間で大量に生産することが可能と
なる。

このように本発明はＩ　Ｌ−６作用を調節する新しい治
療薬として期待の大きい可溶性Ｉ　Ｌ−６レセプターの
開発、及びＩ　Ｌ−６のシグナル伝達機構の研究に大き
な意義をもつ。

」自ミＬ！却女ニモ？１−」ユ　マウスＩ　Ｌ−６レセ
プターｃＤＮへの一連の遺伝子組み換え操作方法（ａ＋
−ＲＮＡの抽出、ＤＮＡの制限酵素による切断等）は、
マニアティスらの方法（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎ
ｉｎｇ＋　Ｃｏ１ｄ　ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ　Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ　１９８２年参照）、バーウィンらの
方法（ＤＮＡ　ｃｌｏｎｉｎｇ、　ａ　Ｐｒａｃｔｉｃ
ａｌ　Ａｐｐｒｏａｃｈ　ｖｏｌ。

１　、　ｐ４９．　ＩＲＬ、　０ｘｆｏｒｄ、　１９８
５年参照）を参考にして行った。

まず、マウス・ミエローマ細胞株Ｐ３Ｕ１　（ＡＴ　Ｃ
ＣＣＲＬ　１９５７）からｍＲＮＡを抽出し、ラムダフ
ァージｇｔｌＯ（アマ−ジャム）を用いてｃＤＮＡライ
ブラリーを作製した。次にｐＢＳＦ２Ｒ，２３６（Ｋ、
Ｙａｍａｓａｋｉら、５ｃｉｅｎｃｅ、　２４１．　ｐ
８２５．１９８８年参照）のインサートｃＤＮＡのＦｓ
ｐ　１−Ｂａｎ　Ｉ断片をプローブとして用い、７．３
Ｘ１０’クローンを以下の条件でスクリーニングした。

プラークをプロットするフィルターにはナイロンフィル
ターであるシーンスクリーンプラス（ＮＥＮ社）を用い
た、ハイブリーダイゼーションは、１％ＳＯＳ　、　Ｉ
Ｍ　ＮａＣ１、０，０５Ｍ　Ｔｒｉｓ　ＨＣｊ２　　（
ｐＨ７，５）、５Ｘデンハルト溶液、２００眉／ｄサケ
精子ＤＮＡ存在下で、６５°Ｃで１６時間行った。その
後、２ＸＳＳＣ，１％ＳＤＳで、６０°Ｃにてフィルタ
ーを洗って非特異的にフィルターに結合したプローブを
分離させ、乾燥後、オートラジオグラフィーを行った。

なお、前記プラスミドρＢＳＦ２Ｒ，２３６を制限酵素
Ｘｈｏ　Ｉで部分消化し、Ｂ５Ｆ２レセプターをコード
する塩基配列をすべて含有するＤＮＡ断片を得、これを
市販のベクターｐＩＢ１７６（１８１社）の５ａ１１部
位に挿入してプラスミドｐｌＢＩＢｓＦ２Ｒを作製した
。このプラスミドｐｌＢＩＢｓＦ２Ｒを含有する大腸菌
８８１０１ｐｌＢＩＢｓＦ２Ｒは、工業技術院微生物工
業技術研究所に微工研条寄第２２３２号（ＦＥＩ？Ｍ　
ＢＰ−２２３２）として寄託されている。このプラスミ
ドから、常法に従って適当な制限酵素によりＢ５Ｆ２レ
セプター蛋白質をコードするＤＮＡ断片を切り出し、本
発明で用いるプローブを作製することができる。

このようにして単離された１つのクローンをラムダＰ　
１　（ｌａｍｂｄａ　ＰＩ）と名付けた。第６図にラム
ダＰ１の制限酵素地図および対応するＩ　Ｌ−６レセプ
ター蛋白質の模式図を示す。しかしながら、ラムダＰ１
のインサートｃＤＮＡの塩基配列を決定した結果、ヒト
ＩＬ−６レセプターとの比較より、完全長のマウスＩＬ
−６レセプターがコードされていないことが判明した。

そこで、完全長のマウスＩ　Ｌ−６レセプターｃＤＮＡ
を単離する目的で、上記方法でＢＡＬＢ／ｃの肺臓から
ｍＲＮＡを抽出し、ｇｔｌｏを用いてｃＤＮＡライブラ
リーを作製した。プローブとして第６図のプローブを用
い、通常の方法でスクリーニングした結果、１つのクロ
ーン、ラムダ３０１（ｌａｍｂｄａ　３０１）を単離し
た。ラムダ３０１のインサートｃＤＮＡの塩基配列を決
定した結果、ヒトＩ　Ｌ−６レセプターとの比較より、
完全長のマウスＩ　Ｌ−６レセプターがコードされてい
ることが判明した。

ラムダＰ１とラムダ３０１のそれぞれコードするマウス
ＩＬ−６レセプターｃＤＮＡ塩基配列を比較したところ
、第１番目のメチオニンから第３８５番目のロイシンま
でをコードするＤＮＡ配列は一致したが、それ以降のア
ミノ酸をコードするＤＮＡ配列は全く異なっていた。さ
らに詳細な塩基配列の解析を行ったところ、ラムダＰ１
の第３８６番目以降のアミノ酸をコードするＤＮＡ配列
は、１ｎｔｒａｃｙｓｔｅｒｎａｌ　Ａ−ｐａｒｔｉｃ
ｌｅ（ＩＡＰ）遺伝子由来であることが判明した。

第６図に、ラムダ３０１の制限酵素地図および対応する
Ｉ　Ｌ−６レセプター蛋白質の模式図を示す。

第７図に、ラムダ３０１のインサートｃＤＮＡの塩基配
列および塩基配列から推定されるマウスＩ　Ｌ−６レセ
プターのアミノ酸配列を示す。

【図面の簡単な説明】

第１図は、プラスミドｐＥｃＥｄｈｆｒｍ３２３の作製
過程を示す。図中、Ｂ、Ｅ、Ｆ、Ｈ，に、Ｐ、及びＳは
、ＢａｍＨＩ　、　ＥｃｏＲＩ　、　　ＦｏｋＩ　、　
ＨｉｎｄＩ［［、ＫｐｎＩ　。 Ｐ　ｓ　ｔ　Ｉ　ｓ及びＳｍａ　Ｉサイトをそれぞれ示
す。 第２図は、プラスミドｐＥｃＥｄｈｆｒａ＋３２３の構
造を示す。 第３図は、（ａ　）　ＭＲ２５細胞及び（ｂ）ＤＸＢ−
１１細胞の無血清培養上清を１０倍に濃縮したもののＩ
Ｌ６結合活性を、実施例２に示す方法で測定したのプレ
ートの残存放射能を示す。 第４図は、（Ａ）群特巽性アフィニティーカラムクロマ
トグラフィー　（Ｂ）陰イオン交換カラムクロマトグラ
フィー、及び（Ｃ）ゲル濾過カラムクロマトグラフィー
の溶出パターン（実線が０Ｄ２８Ｇ、矢印が可溶性マウ
ス■Ｌ−６レセプター分画を示す。）を示す。 第５図は、精製された可溶性マウスＩ　Ｌ−６レセプタ
ーの５０５／ＰＡＧＥのパターンを示す。 第６図は、ラムダＰ１及びラムダ３０１のｃＤＮＡの制
限酵素地図並びにマウスＩＬ−６レセプター蛋白質の模
式図、さらにはプローブｌの位置を示す。 ＢはＢａｍＨＩサイト、ＥはＥｃｏＲｒサイト、ＦはＦ
ｏｋ　１サイト、Ｈは旧ｎｄＩＩ［サイト、ＫはＫｐｎ
　Ｉサイト、ＰはＰｓｔｌサイト、ＳはＳｍａ　Ｉサイ
トをそれぞれ示す。また、ＳＳはシグナル配列、ＥＣは
細胞外領域、ＴＭは膜貫通領域、Ｃは細胞内領域を示す
。 第７図は、ラムダ３０１のインサートｃＤＮＡ、すなわ
ちマウスＩ　Ｌ−６レセプターをコードするＤＮＡ配列
についてその塩基配列を解析した結果、およびこのＤＮ
Ａ配列が発現された場合に生産される蛋白質すなわちマ
ウスＩ　Ｌ−６レセプターの推定されるアミノ酸配列を
示す。下線部分はＮ末端側の疎水性アミノ酸領域を示し
、二重下線部分はＣ末端側の疎水性アミノ酸領域を示す
。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、マウスインターロイキン−６（マウスＩＬ−６）と
   特異的に結合することができ、細胞内領域を有しない可
   溶性マウスＩＬ−６レセプター蛋白質。 ２、第７図中の第２位のロイシンから第３２３位のイソ
   ロイシンまでのアミノ酸配列、あるいはこのアミノ酸配
   列中の１又は複数個のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基
   により置換されているか又は前記アミノ酸配列に１又は
   複数個のアミノ酸残基が付加されているか又は前記アミ
   ノ酸配列から１又は複数個のアミノ酸残基が欠失してい
   る、アミノ酸配列を有する請求項１に記載のマウスＩＬ
   −６レセプター蛋白質。 ３、請求項１に記載の蛋白質をコードするＤＮＡ。 ４、請求項２に記載の蛋白質をコードするＤＮＡ。 ５、請求項３又は４に記載のＤＮＡが該ＤＮＡを発現さ
   せ得る制御配列と連結されているＤＮＡ。 ６、請求項５に記載のＤＮＡを含んで成る発現ベクター
   。 ７、請求項６に記載の発現ベクターにより形質転換され
   た宿主を培養し、そして培養物から可溶性マウスＩＬ−
   ６レセプター蛋白質を採取することを特徴とする可溶性
   マウスＩＬ−６レセプター蛋白質の製造方法。