JPH05103699A - コレステリンの検出のための診断剤、コレステリンの検出のための試薬フイルムの製法およびコレステリンの検出のための試験条片 - Google Patents

コレステリンの検出のための診断剤、コレステリンの検出のための試薬フイルムの製法およびコレステリンの検出のための試験条片

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JPH05103699A
JPH05103699A JP3002605A JP260591A JPH05103699A JP H05103699 A JPH05103699 A JP H05103699A JP 3002605 A JP3002605 A JP 3002605A JP 260591 A JP260591 A JP 260591A JP H05103699 A JPH05103699 A JP H05103699A
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JP
Japan
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cholesterin
detecting
hard protein
film
reagent film
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JP3002605A
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English (en)
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Anselm Rothe
ロテ アンゼルム
Heino Eikmeier
アイクマイヤー ハイノ
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Roche Diagnostics GmbH
Original Assignee
Boehringer Mannheim GmbH
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    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 コレステリンを温度に依存せずに測定する診
断剤。 【構成】 検出のために必要な酵素と同時に硬タンパク
質または硬タンパク質加水分解物を含有する診断剤、こ
れを含有する反応試薬フィルムおよび試験条片。 【効果】 酵素安定性および温度非依存性が高まる。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明の対象はコレステリンの酵
素検出のための診断剤、コレステリンの検出のための試
薬フィルムの製法、診断剤の改良のための硬タンパク質
または硬タンパク質加水分解物の使用およびコレステリ
ンの測定法に関する。
【0002】
【従来の技術】患者の血液中の分析質の測定は医師の対
診なしに自分自身で実施することがますます多くなって
きている。この際試験条片の使用が特に好適である。こ
のような患者システムの成功のための前提条件は使用条
片の申し分のない機能ならびに簡単な取り扱いである。
測定を実施する人に依存しない、客観的な結果は実際測
定装置を用いてのみ得られる。
【0003】脂質収支の監視の際患者による直接のコレ
ステリン濃度の測定がさらに実施された。そのために一
般に、検出のために必要な反応試薬がフィルムの形で試
験条片上に含まれている、診断剤を使用する。このよう
な反応試薬フィルムの製造はたとえばヨーロッパ特許第
0016387号明細書に記載されている。
【0004】生化学反応の強い温度依存性のために、し
かし臨床化学のたいていの検出反応は環境温度にはっき
りと依存している。分析結果の温度に条件づけられた偽
和を避けるために、従って一般に、たとえば測定装置の
温度調節されたアダプターにより一定に保たれた温度で
作業する。このような患者システムの成功のためにしか
しできるかぎり小さくかつ値ごろな測定装置が所望され
る。このような小さな装置ではしかし被験者の非常に大
まかで不十分な温度調節のみが可能である。
【0005】
【発明が解決しようとする問題点】本発明の課題は従っ
てコレステリンのさらに温度に依存しない測定のための
診断剤を製造することであった。
【0006】
【問題点を解決するための手段】この課題は本発明によ
り解決する。
【0007】本発明の対象は必要な酵素と同時に硬タン
パク質または硬タンパク質加水分解物を含有する、コレ
ステリンの酵素的検出のための診断剤である。コレステ
リンの酵素的検出のための診断剤はたとえばヨーロッパ
特許第0016387号明細書から公知である。この剤
は有利にコレステリンの酸化のための酵素レドックス系
を含有する。コレステリンの酸化の程度は色形成反応に
よりまたは電気化学的に確定される。コレステリンオキ
シダーゼおよびコレステリンステアラーゼ含有フィルム
材料を含有する、診断剤の有利な主成分はヨーロッパ特
許第0016387号明細書にみてとれる。
【0008】本発明による診断剤は通常の反応試薬と同
時に硬タンパク質または硬タンパク質加水分解物を含有
する。約1000〜15000の分子量を有するコラー
ゲンまたはエラスチンから成る硬タンパク質加水分解物
が有利である。約10000の分子量を有するクロテイ
ンCが特に有利である。
【0009】本発明による診断剤の特に有利な実施形は
膜形成剤、たとえばポリビニルプロピオネート、シリカ
ゲルおよび二酸化チタンのような鉱物性担持物質、好適
なpH−緩衝液、コレステリンオキシダーゼ、コレステ
リンエステラーゼ、ペルオキシダーゼおよびレドックス
活性色素体、たとえばテトラメチルベンチジンを含有す
る。この組成を有する反応試薬フィルムは有利に反応試
薬フィルムとして西ドイツ国特許出願公開第31307
49号明細書およびヨーロッパ特許出願公開第3130
749号明細書で使用されている。試験条片中反応試薬
フィルムは有利にプラスチックシート上に設けられる。
【0010】反応試薬フィルムの製造のために、たとえ
ばヨーロッパ特許第0016387号明細書から公知で
あるような、粗フィルム材料の硬タンパク質または硬タ
ンパク質加水分解物を全材料に対し1〜5重量%、有利
に2〜3重量%の濃度で添加する。引続き材料を有利に
プラスチックシート上へべったり塗りかつ乾燥させる。
【0011】コレステリンの検出のための酵素含有診断
剤中での硬タンパク質または硬タンパク質加水分解物の
使用が酵素安定性を高めることが明らかになった。殊に
しかし硬タンパク質または硬タンパク質加水分解物の使
用によりさらに酵素含有診断剤中でのコレステリン検出
の温度非依存性が達成される。これは少なくとも測定装
置中での価格的に有利な大まかな温度設定への制限を許
容する。
【0012】同様に本発明の対象は反応試薬フィルムの
使用下のコレステリンの確定法であり、その際反応試薬
フィルムは上記の硬タンパク質または硬タンパク質加水
分解物を含有する。そのために、血液、尿、血清または
唾液のような液状試料、有利に血清を、測定のために必
要な反応試薬および本発明による添加物を含有する、反
応試薬フィルムと接触させる。反応試薬によりコレステ
リンを遊離しかつ酸化しかつその際形成された還元剤を
呈色反応により検出する。ここではペルオキシダーゼお
よびテトラメチルベンチジンとの反応が特に有利であ
る。試料中に含有されたコレステリンはその強度がコレ
ステリン量に対し相対的である、呈色反応により視覚的
に、しかし有利に測定装置を用いて定量的に測定され
る。
【0013】測定はまたヨーロッパ特許出願公開第00
75766号明細書に記載されているように、規約反射
率測光で行うこともできる。
【0014】図1は透明な担体フィルム2上に本発明に
よる反応試薬フィルム1を含有する、コレステリンの測
定のための試験条片を示す。試料は試験条片上右側に装
入され、そこでこれは赤血球分離フリース3を流れ過
ぎ、運搬フリース4中で集められる。測定反応は反応試
薬フィルムを有する担体シートを運搬フリース上へ押し
つけることによりスタートさせられる。担体シートを通
して反応試薬フィルムの呈色が観察される。
【0015】次の実施例につき本発明を詳述する。
【0016】
【実施例】
例1:フィコル(Ficoll)70D−添加を有する
コレステリン−試験の温度依存性 1) 反応試薬フィルムの製造 西ドイツ国特許出願公開第0016387号明細書と同
様に、次の成分を有するフィルム被覆材料を製造する: ポリビニルプロピオネート分散液50% (Propiofan 70D, BASF) 20g シリカゲル(Eagle−Pichler−Industries, USA) 20g 二酸化チタン(Kronos−Titan,Leverkusen) 3g ケルツァン(Kelzan)−溶液、1% (Alginate Industries,Hamburg) 10g リン酸塩緩衝液 pH 6.4 20g 水 10g テトラメチルベンチジン (Boehringer Mannheim) 0.5g ジオクチルナトリウムスルホスクシネート (Sigma−Chemie,Deisenhofen) 1.0g メタノール中2.5%のガルス酸−溶液 (Merck,Darmstadt) 0.25g テトラヒドロフランp.A.(Merck,Darmstadt) 5g コレステリンオキシダーゼEC1.1.3.6 (Boehringer Mannheim) 10KU コレステリンエステラーゼEC3.1.1.13 (Boehringer Mannheim) 40KU ペルオキシダーゼEC1.11.1.7 (Boehringer Mannheim) 250KU フィコル(Ficoll)70D (スクロースおよびエピクロルヒドリンから成る コポリマー、Firma Serva) 2.5g フィルム材料を0.2mmの湿フィルム厚さで、透明
な、0.2mm厚さのポリカーボネートシート(Lon
za,Whyl)上に塗布しかつ60℃で乾燥させる。
【0017】2) 試験条片の構成 反応試薬フィルムは第1図による試験条片中へ組み込ま
れる。
【0018】3) 測定 測定はコレステリン−試験条片用の反射測光計、たとえ
ばレフロトロン(Reflotron)(Boehri
nger Mannheim GmbH)で、ヨーロッ
パ特許第075766号明細書に記載されているように
行なわれる。
【0019】測定波長は660nm、試験条片アダプタ
ーの変化可能な温度調節は30〜50℃。
【0020】測定サイクル: 第1相:60秒 プラズマ取得および温度調節 第2相:40秒 反応試薬フィルム1を有するふた2を
運搬フリース4上に押しつける、湿潤、反応スタート 第3相:80秒 開放、脱気、反応 第4相: 4秒 押しつけ、規約反射率測定 4) 結果 測定結果を表1にまとめる。測定信号の、温度へのほぼ
(相関的な)線状の依存性が認められる。
【0021】
【表1】
【0022】変化係数(VK)は温度および濃度当り1
0回の測定により確定した。
【0023】例2:クロテインC−添加でのコレステリ
ン試験の温度依存性 1) 反応試薬フィルムの製造 例1に記載されているようなフィルム被覆材料の処方、
しかしフィコル70Dの代わりにクロテインC(Cro
da,Nettetal)2.5gを用いる。 2) 試験条片の構成 例1と同様。
【0024】3) 測定 例1と同様。
【0025】4) 結果 測定結果は表2にまとめる。
【0026】測定値の温度への依存は約40℃より上で
初めて生じる。
【0027】30〜40℃の範囲で影響はない。
【0028】結果は測定装置中での価格的に有利な大ま
かな温度調節への制限を許容する。
【0029】
【表2】
【0030】VKはここではフィコルの使用の際より良
好である。
【図面の簡単な説明】
【図1】本発明の1実施態様を示す図。
【符号の説明】 1 反応試薬フィルム 2 担体フィルム 3 分離フリース 4 運搬フリース
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ハイノ アイクマイヤー ドイツ連邦共和国 ロルシユ ビスマルク シユトラーセ8

Claims (7)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 必要な酵素と同時に硬タンパク質または
    硬タンパク質加水分解物を含有することを特徴とする、
    コレステリンの酵素検出のための診断剤。
  2. 【請求項2】 コレステリンオキシダーゼ−およびコレ
    ステリンエステラーゼ含有フィルム材料中に硬タンパク
    質または硬タンパク質加水分解物を含有する、請求項1
    記載の診断剤。
  3. 【請求項3】 粗フィルム材料から、コレステリンを検
    出するための試薬フィルムを製造する方法において、粗
    フィルム材料が試薬フィルムの製造の際硬タンパク質ま
    たは硬タンパク質加水分解物1〜5重量%を添加される
    ことを特徴とする、コレステリンの検出のための試薬フ
    ィルムの製法。
  4. 【請求項4】 コレステリンの検出のための診断剤中で
    酵素安定性の向上のために硬タンパク質または硬タンパ
    ク質加水分解物を使用することを特徴とする、コレステ
    リンの検出のための診断剤中で酵素安定性を高める方
    法。
  5. 【請求項5】 診断剤でのコレステリンの検出の温度非
    依存性を高めるために、硬タンパク質または硬タンパク
    質加水分解物を使用することを特徴とする、診断剤での
    コレステリンの検出の温度非依存性を高める方法。
  6. 【請求項6】 試薬フィルムが硬タンパク質または硬タ
    ンパク質加水分解物を含有することを特徴とする、試薬
    フィルムの使用下にコレステリンを確定する方法。
  7. 【請求項7】 反応フィルムが硬タンパク質または硬タ
    ンパク質加水分解物を含有することを特徴とする、コレ
    ステリンオキシダーゼ−およびコレステリンエステラー
    ゼ含有試薬フィルムを有する、コレステリンの検出のた
    めの試験条片。
JP3002605A 1990-01-17 1991-01-14 コレステリンの検出のための診断剤、コレステリンの検出のための試薬フイルムの製法およびコレステリンの検出のための試験条片 Pending JPH05103699A (ja)

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Application Number Priority Date Filing Date Title
DE4001155A DE4001155A1 (de) 1990-01-17 1990-01-17 Diagnostisches mittel zum nachweis von cholesterin
DE4001155.0 1990-01-17

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPH05103699A true JPH05103699A (ja) 1993-04-27

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ID=6398220

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US (1) US5268269A (ja)
EP (1) EP0437773B1 (ja)
JP (1) JPH05103699A (ja)
AT (1) ATE125574T1 (ja)
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Families Citing this family (1)

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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6821410B2 (en) * 2001-03-07 2004-11-23 Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. Biosensor and method of substrate quantification

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DE2937012A1 (de) * 1978-09-18 1980-04-03 Henkel Kgaa Mittel zur stabilisierung von enzymen und deren verwendung
JPS55125453A (en) * 1979-03-15 1980-09-27 Boehringer Mannheim Gmbh Diagnosing material for detecting liquid constituent and method of producing said material

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EP0437773A3 (en) 1993-03-24
ATE125574T1 (de) 1995-08-15
US5268269A (en) 1993-12-07
DE4001155A1 (de) 1991-07-18
EP0437773A2 (de) 1991-07-24
DE59009438D1 (de) 1995-08-31
EP0437773B1 (de) 1995-07-26

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