JPH05146232A - ラヴエンダーの胚軸からのカルス誘導と植物体の再生方法 - Google Patents
ラヴエンダーの胚軸からのカルス誘導と植物体の再生方法Info
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- JPH05146232A JPH05146232A JP3310505A JP31050591A JPH05146232A JP H05146232 A JPH05146232 A JP H05146232A JP 3310505 A JP3310505 A JP 3310505A JP 31050591 A JP31050591 A JP 31050591A JP H05146232 A JPH05146232 A JP H05146232A
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Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 容易・確実にラヴェンダーの幼苗を得ること
ができる、カルス誘導と植物体の再生方法の提供。 【構成】 ラヴェンダー属植物の子葉展開直後の胚軸を
２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）を添加
した無機塩類，ビタミン類，sucrose からなる基本培地
に置床してカルスを誘導したのち、該カルスを６−ベン
ジルアミノプリン（ＢＡＰ）を添加した基本培地に置床
し不定芽を得る。そして該不定芽はカルスをつけないよ
うに切り離し、３−インドール酪酸（ＩＢＡ）を添加し
た基本培地に置床して発根を促し幼植物体を得ることを
特徴とするラヴェンダーの胚軸からのカルス誘導と植物
体の再生方法。
ができる、カルス誘導と植物体の再生方法の提供。 【構成】 ラヴェンダー属植物の子葉展開直後の胚軸を
２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）を添加
した無機塩類，ビタミン類，sucrose からなる基本培地
に置床してカルスを誘導したのち、該カルスを６−ベン
ジルアミノプリン（ＢＡＰ）を添加した基本培地に置床
し不定芽を得る。そして該不定芽はカルスをつけないよ
うに切り離し、３−インドール酪酸（ＩＢＡ）を添加し
た基本培地に置床して発根を促し幼植物体を得ることを
特徴とするラヴェンダーの胚軸からのカルス誘導と植物
体の再生方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、ラヴェンダー属植物
の幼苗が大量に得られるカルス誘導と植物体の再生方法
に関するものである。
の幼苗が大量に得られるカルス誘導と植物体の再生方法
に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ラヴェンダー（Lavandula vera DC.）な
どのラヴェンダー属植物の花は、鑑賞用のほか鎮痛・睡
眠作用等を有する生薬としても利用されている。しか
し、ラヴェンダー属植物は増殖率が極めて低く、通常そ
の種子から発芽させることが難しいため、挿し木などの
方法により幼苗を得ている。また幼苗からの成長も比較
的遅い。
どのラヴェンダー属植物の花は、鑑賞用のほか鎮痛・睡
眠作用等を有する生薬としても利用されている。しか
し、ラヴェンダー属植物は増殖率が極めて低く、通常そ
の種子から発芽させることが難しいため、挿し木などの
方法により幼苗を得ている。また幼苗からの成長も比較
的遅い。
【０００３】このため、ラヴェンダー属植物の幼苗を短
期間で大量に得る方法が求められており、特開昭６２−
９１１２２号公報に、その一方法が開示されている。
期間で大量に得る方法が求められており、特開昭６２−
９１１２２号公報に、その一方法が開示されている。
【０００４】上記公報に開示された育苗方法は、ラヴェ
ンダーの葉を適当な大きさに切取りカルス誘導用培地を
用いて培養しカルスを誘導し、該カルスを増殖用培地で
増殖させ、該カルスを再分化用培地で光を照射して分化
させ幼苗とする工程よりなっている。
ンダーの葉を適当な大きさに切取りカルス誘導用培地を
用いて培養しカルスを誘導し、該カルスを増殖用培地で
増殖させ、該カルスを再分化用培地で光を照射して分化
させ幼苗とする工程よりなっている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、従来の
挿し木などの方法により幼苗を得る方法による大量生産
は困難であり、また前記公報に開示された方法での幼苗
の大量育成そして栽培を実際に大規模に実施するには、
なお不明部分もあった。
挿し木などの方法により幼苗を得る方法による大量生産
は困難であり、また前記公報に開示された方法での幼苗
の大量育成そして栽培を実際に大規模に実施するには、
なお不明部分もあった。
【０００６】細胞育種技術を利用するにはプロトプラス
トからの植物体再分化系の確立が必要であるが、ラヴェ
ンダーでは未だプロトプラストからの植物体再生の発表
はない。
トからの植物体再分化系の確立が必要であるが、ラヴェ
ンダーでは未だプロトプラストからの植物体再生の発表
はない。
【０００７】この発明は、上記従来技術の問題点を解消
するために成されたもので、より容易・確実にラヴェン
ダーの幼苗を得ることができる、カルス誘導と植物体の
再生方法を提供することを目的とするものである。
するために成されたもので、より容易・確実にラヴェン
ダーの幼苗を得ることができる、カルス誘導と植物体の
再生方法を提供することを目的とするものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】このため、この発明に係
るラヴェンダーの胚軸からのカルス誘導と植物体の再生
方法は、ラヴェンダー属植物の子葉展開直後の胚軸を
２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）を添加
した無機塩類，ビタミン類，sucrose からなる基本培地
に置床してカルスを誘導したのち、該カルスを６−ベン
ジルアミノプリン（ＢＡＰ）を添加した基本培地に置床
し不定芽を得る。そして該不定芽はカルスをつけないよ
うに切り離し、３−インドール酪酸（ＩＢＡ）を添加し
た基本培地に置床して発根を促し幼植物体を得ることに
よって、前記の目的を達成しようとするものである。
るラヴェンダーの胚軸からのカルス誘導と植物体の再生
方法は、ラヴェンダー属植物の子葉展開直後の胚軸を
２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）を添加
した無機塩類，ビタミン類，sucrose からなる基本培地
に置床してカルスを誘導したのち、該カルスを６−ベン
ジルアミノプリン（ＢＡＰ）を添加した基本培地に置床
し不定芽を得る。そして該不定芽はカルスをつけないよ
うに切り離し、３−インドール酪酸（ＩＢＡ）を添加し
た基本培地に置床して発根を促し幼植物体を得ることに
よって、前記の目的を達成しようとするものである。
【０００９】
【作用】本発明方法では、ラヴェンダー属植物の子葉展
開直後の胚軸を２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，
４−Ｄ）を添加した無機塩類，ビタミン類，sucrose か
らなる基本培地に置床し、明光または暗黒条件下でカル
スを誘導して継代培養材料とすることができ、該カルス
を６−ベンジルアミノプリン（ＢＡＰ）を添加した基本
培地に置床し不定芽を得ることができる。そして該不定
芽はカルスをつけないように切り離し、３−インドール
酪酸（ＩＢＡ）を添加した基本培地に置床して発根を促
すことができ、こうして得た幼植物体は充分に根を伸長
し種々の条件下で活着させることができる。
開直後の胚軸を２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，
４−Ｄ）を添加した無機塩類，ビタミン類，sucrose か
らなる基本培地に置床し、明光または暗黒条件下でカル
スを誘導して継代培養材料とすることができ、該カルス
を６−ベンジルアミノプリン（ＢＡＰ）を添加した基本
培地に置床し不定芽を得ることができる。そして該不定
芽はカルスをつけないように切り離し、３−インドール
酪酸（ＩＢＡ）を添加した基本培地に置床して発根を促
すことができ、こうして得た幼植物体は充分に根を伸長
し種々の条件下で活着させることができる。
【００１０】
【実施例】以下、この発明に係るラヴェンダーの胚軸か
らのカルス誘導と植物体の再生方法を実施例により説明
する。まず、本実施例の要旨について説明する。無菌播
種により得たラヴェンダー（Lavandula vera DC.）の子
葉展開直後の胚軸は、０〜５．０ｍｇ／ｌ ２，４−Ｄ
を添加したＭＳ培地に置床し、明光または暗黒条件下で
カルスを誘導する。その結果、０．０４〜１．０ｍｇ／
ｌ ２，４−Ｄを含む培地では、明光および暗黒下共に
４０％以上のカルス形成率を得ることができる。
らのカルス誘導と植物体の再生方法を実施例により説明
する。まず、本実施例の要旨について説明する。無菌播
種により得たラヴェンダー（Lavandula vera DC.）の子
葉展開直後の胚軸は、０〜５．０ｍｇ／ｌ ２，４−Ｄ
を添加したＭＳ培地に置床し、明光または暗黒条件下で
カルスを誘導する。その結果、０．０４〜１．０ｍｇ／
ｌ ２，４−Ｄを含む培地では、明光および暗黒下共に
４０％以上のカルス形成率を得ることができる。
【００１１】フライアブルな形態を示し、しかも比較的
２，４−Ｄ濃度の低い０．２ｍｇ／ｌ ２，４−Ｄ、暗
黒下で得られたカルスを継代培養の材料とすることが望
ましい。胚軸由来カルスは、２．０ｍｇ／ｌ ＢＡＰ，
２．０ｍｇ／ｌ ＮＡＡを添加したＭＳ培地で少なくと
も３回以上継代（２週間周期）し、ＢＡＰを無添加ある
いは０．０８，０．４，２．０，１０．０ｍｇ／ｌ添加
したＭＳ培地上で６週間培養する。
２，４−Ｄ濃度の低い０．２ｍｇ／ｌ ２，４−Ｄ、暗
黒下で得られたカルスを継代培養の材料とすることが望
ましい。胚軸由来カルスは、２．０ｍｇ／ｌ ＢＡＰ，
２．０ｍｇ／ｌ ＮＡＡを添加したＭＳ培地で少なくと
も３回以上継代（２週間周期）し、ＢＡＰを無添加ある
いは０．０８，０．４，２．０，１０．０ｍｇ／ｌ添加
したＭＳ培地上で６週間培養する。
【００１２】その結果、２．０および１０．０ｍｇ／ｌ
ＢＡＰ区において不定芽の再分化ができ（表２）。さ
らに２．０ｍｇ／ｌ ＢＡＰ，１．０ｍｇ／ｌ ＧＡ3
を添加したＭＳ培地で継代し、その後２．０ｍｇ／ｌ
ＢＡＰと１．０，１０．０，１００．０ｍｇ／ｌ ＧＡ
3 を組み合わせ添加したＭＳ培地上で不定芽の伸長を促
す。このとき２．０ｍｇ／ｌ ＢＡＰ，１００ｍｇ／ｌ
ＧＡ3 を組み合わせた区で最も多くの正常に伸長した
不定芽が得られる（後記の表４参照）。
ＢＡＰ区において不定芽の再分化ができ（表２）。さ
らに２．０ｍｇ／ｌ ＢＡＰ，１．０ｍｇ／ｌ ＧＡ3
を添加したＭＳ培地で継代し、その後２．０ｍｇ／ｌ
ＢＡＰと１．０，１０．０，１００．０ｍｇ／ｌ ＧＡ
3 を組み合わせ添加したＭＳ培地上で不定芽の伸長を促
す。このとき２．０ｍｇ／ｌ ＢＡＰ，１００ｍｇ／ｌ
ＧＡ3 を組み合わせた区で最も多くの正常に伸長した
不定芽が得られる（後記の表４参照）。
【００１３】この不定芽をカルスを付けないように切り
取り、０．１ｍｇ／ｌ ＩＢＡを添加した１／２ＭＳ培
地に置床し発根を促す。その結果、概ね１５．８％程度
の外植体より発根させることが可能である。十分に根を
伸長させた幼植物体は種々の条件下で活着させることが
できる。
取り、０．１ｍｇ／ｌ ＩＢＡを添加した１／２ＭＳ培
地に置床し発根を促す。その結果、概ね１５．８％程度
の外植体より発根させることが可能である。十分に根を
伸長させた幼植物体は種々の条件下で活着させることが
できる。
【００１４】上記のように、数代に渡って継代した胚軸
由来のカルスから不定芽を再分化させることができ、し
かも容易に植物体再生ができる。即ち、本実施例の方法
はカルスからの植物体再生系として、ラヴェンダーの細
胞育種に大きな効果を有するものである。
由来のカルスから不定芽を再分化させることができ、し
かも容易に植物体再生ができる。即ち、本実施例の方法
はカルスからの植物体再生系として、ラヴェンダーの細
胞育種に大きな効果を有するものである。
【００１５】次に、本実施例の効果確認のため行なった
試験例について以下説明する。
試験例について以下説明する。
【００１６】（Ａ）材料および方法 （無菌播種）カルス誘導の供試材料である子葉展開直後
の胚軸を得るために、完熟種子を用いて無菌播種した。
完熟種子の表面殺菌は２％次亜塩素酸ナトリウムにTwee
n ２０を数滴加えた溶液中に１５分間浸漬し、滅菌水で
３回洗浄した。表面殺菌の終了した種子は１／２ＭＳ培
地（無機塩類を１／２に調整）に３０ｇ／ｌ sucrose，
pH５．７，８ｇ／ｌ agar に調整した培地に各々２粒播
種した。また、培養は２５℃、暗黒下の条件で１カ月間
行った。
の胚軸を得るために、完熟種子を用いて無菌播種した。
完熟種子の表面殺菌は２％次亜塩素酸ナトリウムにTwee
n ２０を数滴加えた溶液中に１５分間浸漬し、滅菌水で
３回洗浄した。表面殺菌の終了した種子は１／２ＭＳ培
地（無機塩類を１／２に調整）に３０ｇ／ｌ sucrose，
pH５．７，８ｇ／ｌ agar に調整した培地に各々２粒播
種した。また、培養は２５℃、暗黒下の条件で１カ月間
行った。
【００１７】なお、培地は１２０×２５mmφ試験管に各
々１０ｍｌを分注し、プラスチック・キャップで封をし
た後、オートクレーブで１２１℃、１５分間の滅菌処理
をした。以後、特に明記がないときは試験管，キャッ
プ，分注量，滅菌方法は上記に準ずる。
々１０ｍｌを分注し、プラスチック・キャップで封をし
た後、オートクレーブで１２１℃、１５分間の滅菌処理
をした。以後、特に明記がないときは試験管，キャッ
プ，分注量，滅菌方法は上記に準ずる。
【００１８】（カルス誘導試験）無菌播種１カ月後の子
葉展開直後の胚軸は５〜１０mm長に調整し、カルス誘導
に供試した。カルス誘導は植物生長調節物質である２，
４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）を無添加あ
るいは０．０４，０．２，１．０，５．０ｍｇ／ｌ添加
したＭＳ培地（３０ｇ／ｌ sucrose，pH５．７，８ｇ／
ｌ agar)に置床した。
葉展開直後の胚軸は５〜１０mm長に調整し、カルス誘導
に供試した。カルス誘導は植物生長調節物質である２，
４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）を無添加あ
るいは０．０４，０．２，１．０，５．０ｍｇ／ｌ添加
したＭＳ培地（３０ｇ／ｌ sucrose，pH５．７，８ｇ／
ｌ agar)に置床した。
【００１９】培養は２５℃，約５０００Ｌｕｘ，１６Ｈ
ｒ日長、および２５℃，暗黒下の２条件で行った。培養
結果は培養開始６週間後にカルスの形成状況を観察し、
集計した。なお、植物ホルモンとしてのサイトカイニン
を添加しての試験も併せて実施した。
ｒ日長、および２５℃，暗黒下の２条件で行った。培養
結果は培養開始６週間後にカルスの形成状況を観察し、
集計した。なお、植物ホルモンとしてのサイトカイニン
を添加しての試験も併せて実施した。
【００２０】（カルス継代）子葉胚軸より誘導したカル
スは増殖を図るために予備試験で良好な結果が得られた
２．０ｍｇ／ｌ ６−ベンジルアミノプリン（ＢＡ
Ｐ），２．０ｍｇ／ｌジベレリン酸（ＧＡ3 ）を添加し
たＭＳ培地（３０ｇ／ｌ sucrose，pH５．７，８ｇ／ｌ
agar)に移植した。
スは増殖を図るために予備試験で良好な結果が得られた
２．０ｍｇ／ｌ ６−ベンジルアミノプリン（ＢＡ
Ｐ），２．０ｍｇ／ｌジベレリン酸（ＧＡ3 ）を添加し
たＭＳ培地（３０ｇ／ｌ sucrose，pH５．７，８ｇ／ｌ
agar)に移植した。
【００２１】その後、同組成の新鮮培地に２週間周期で
継代をおこなった。継代培養は２５℃，約５０００Ｌｕ
ｘ，１６Ｈｒ日長の条件でおこなった。なお、以後の培
養条件は特に明記ない場合、本条件に準じる。
継代をおこなった。継代培養は２５℃，約５０００Ｌｕ
ｘ，１６Ｈｒ日長の条件でおこなった。なお、以後の培
養条件は特に明記ない場合、本条件に準じる。
【００２２】（カルスからの再分化試験）３回以上継代
を繰り返したカルスはＢＡＰを無添加あるいは０．０
８，０．４，２．０，１０．０ｍｇ／ｌ添加したＭＳ培
地（３０ｇ／ｌ sucrose，pH５．７，８ｇ／ｌ agar)に
置床し、不定芽の再分化の有無について検討した。培養
開始から６週間後にカルスの生存数、不定芽再分化の有
無について観察・集計をおこなった。
を繰り返したカルスはＢＡＰを無添加あるいは０．０
８，０．４，２．０，１０．０ｍｇ／ｌ添加したＭＳ培
地（３０ｇ／ｌ sucrose，pH５．７，８ｇ／ｌ agar)に
置床し、不定芽の再分化の有無について検討した。培養
開始から６週間後にカルスの生存数、不定芽再分化の有
無について観察・集計をおこなった。
【００２３】培養開始６週間後の各試験区由来のカルス
は不定芽再分化の有無に関係なく２．０ｍｇ／ｌ ＢＡ
Ｐ，１．０ｍｇ／ｌ ＧＡ3 を添加したＭＳ培地（３０
ｇ／ｌ sucrose，pH５．７，８ｇ／ｌ agar)に置床し、
不定芽の形成および生長にどのような影響をおよぼすか
検討した。なお、培養結果は置床後６週間目に観察をお
こない、不定芽形成が観察されたカルス数および不定芽
数を集計した。
は不定芽再分化の有無に関係なく２．０ｍｇ／ｌ ＢＡ
Ｐ，１．０ｍｇ／ｌ ＧＡ3 を添加したＭＳ培地（３０
ｇ／ｌ sucrose，pH５．７，８ｇ／ｌ agar)に置床し、
不定芽の形成および生長にどのような影響をおよぼすか
検討した。なお、培養結果は置床後６週間目に観察をお
こない、不定芽形成が観察されたカルス数および不定芽
数を集計した。
【００２４】（不定芽の伸長試験）カルスからの再分化
試験後、ＧＡ3 の濃度が不定芽の生長におよぼす影響を
検討するため、不定芽を含むカルスは２．０ｍｇ／ｌ
ＢＡＰと１．０，１０．０，１００．０ｍｇ／ｌ ＧＡ
3 を各々組み合わせたＭＳ培地（３０ｇ／ｌ sucrose，
pH５．７，８ｇ／ｌ agar)に置床した。
試験後、ＧＡ3 の濃度が不定芽の生長におよぼす影響を
検討するため、不定芽を含むカルスは２．０ｍｇ／ｌ
ＢＡＰと１．０，１０．０，１００．０ｍｇ／ｌ ＧＡ
3 を各々組み合わせたＭＳ培地（３０ｇ／ｌ sucrose，
pH５．７，８ｇ／ｌ agar)に置床した。
【００２５】キャップはキャップ天面に通気口径７mmφ
を設け、通気性フィルター（サン・バイオフィルター：
最大口径０．０２ミクロン）を貼り通気性を高めたもの
を使用した（以後、通気性フィルターを使用したキャッ
プを『フィルターキャップ』と呼ぶ）。培養結果は置床
後６週間目に不定芽の伸長状況を観察し集計した。
を設け、通気性フィルター（サン・バイオフィルター：
最大口径０．０２ミクロン）を貼り通気性を高めたもの
を使用した（以後、通気性フィルターを使用したキャッ
プを『フィルターキャップ』と呼ぶ）。培養結果は置床
後６週間目に不定芽の伸長状況を観察し集計した。
【００２６】（発根試験）５mm以上に伸長した不定芽は
発根を促すため、カルスが付着しないように切り取り、
インドール−３−酪酸（ＩＢＡ）を０．１ｍｇ／ｌ添加
した１／２ＭＳ培地（３０ｇ／ｌ sucrose，pH５．７，
８ｇ／ｌ agar)に移植した。移植後、５週間目に発根状
況を観察した。キャップはフィルターキャップを使用し
た。
発根を促すため、カルスが付着しないように切り取り、
インドール−３−酪酸（ＩＢＡ）を０．１ｍｇ／ｌ添加
した１／２ＭＳ培地（３０ｇ／ｌ sucrose，pH５．７，
８ｇ／ｌ agar)に移植した。移植後、５週間目に発根状
況を観察した。キャップはフィルターキャップを使用し
た。
【００２７】（順化試験）発根が認められた幼植物体は
試験管から抜き取り、根部の培地を洗い流した後、市販
の培養土に移植した。
試験管から抜き取り、根部の培地を洗い流した後、市販
の培養土に移植した。
【００２８】順化の難易度および順化方法の適正状況を
検討するため、順化方法として植物体および鉢全体を
透明なシートで覆い徐々に湿度を低減させる。植物体
だけを透明シートで覆い徐々に湿度を低減させる。湿
度の低減処理は実施しない。の３通りでおこなった。順
化試験は２５℃，約５０００Ｌｕｘ，１６Ｈｒ日長に調
節したインキュベーター内で実施した。なお、順化開始
２週間目に活着状況を観察した。
検討するため、順化方法として植物体および鉢全体を
透明なシートで覆い徐々に湿度を低減させる。植物体
だけを透明シートで覆い徐々に湿度を低減させる。湿
度の低減処理は実施しない。の３通りでおこなった。順
化試験は２５℃，約５０００Ｌｕｘ，１６Ｈｒ日長に調
節したインキュベーター内で実施した。なお、順化開始
２週間目に活着状況を観察した。
【００２９】以下、上記の材料・方法により行なった試
験例の結果について説明する。
験例の結果について説明する。
【００３０】（無菌播種）無菌播種は１５０試験管、３
００粒おこなった。その結果、コンタミ率は０％、発芽
数は２１本／３００粒、発芽率は７．０％であった。な
お、発芽率は７．０％と低かったが、通常の播種におい
ても発芽率は低く、このことから、低発芽率は殺菌条件
の影響ではなく、本来ラヴェンダー（L.vera DC.）が持
つ発芽特性であると考えられる。
００粒おこなった。その結果、コンタミ率は０％、発芽
数は２１本／３００粒、発芽率は７．０％であった。な
お、発芽率は７．０％と低かったが、通常の播種におい
ても発芽率は低く、このことから、低発芽率は殺菌条件
の影響ではなく、本来ラヴェンダー（L.vera DC.）が持
つ発芽特性であると考えられる。
【００３１】（カルス誘導試験）光条件および２，４−
Ｄの濃度が異なる、計１０試験区でおこなったカルスの
誘導結果は表１に示したとおりである。
Ｄの濃度が異なる、計１０試験区でおこなったカルスの
誘導結果は表１に示したとおりである。
【００３２】即ち、カルス形成率は各試験区共に暗黒下
より明光下条件の方が良好であった。光条件別、２，４
−Ｄ濃度区別においてカルス形成率が最も良好な試験区
は、明光下で０．２ｍｇ／ｌ区、暗黒下で０．０４ｍｇ
／ｌ区であった。またカルスの形成率は前述の最も良好
な試験区を境に、２，４−Ｄ濃度が高くなるにしたがっ
て低下していった。
より明光下条件の方が良好であった。光条件別、２，４
−Ｄ濃度区別においてカルス形成率が最も良好な試験区
は、明光下で０．２ｍｇ／ｌ区、暗黒下で０．０４ｍｇ
／ｌ区であった。またカルスの形成率は前述の最も良好
な試験区を境に、２，４−Ｄ濃度が高くなるにしたがっ
て低下していった。
【００３３】光条件別における代表的なカルスの形態、
色調は明光下でコンパクト，グリーンを呈し、暗黒下で
フライアブル，ホワイトであった。なお、明光下０．０
４およひ０．２ｍｇ／ｌ ２，４−Ｄ区、並びに暗黒下
０．０４ｍｇ／ｌ２，４−Ｄ区の低濃度２，４−Ｄ試験
区から不定根の形成が観察された。
色調は明光下でコンパクト，グリーンを呈し、暗黒下で
フライアブル，ホワイトであった。なお、明光下０．０
４およひ０．２ｍｇ／ｌ ２，４−Ｄ区、並びに暗黒下
０．０４ｍｇ／ｌ２，４−Ｄ区の低濃度２，４−Ｄ試験
区から不定根の形成が観察された。
【００３４】
【表１】
【００３５】カルスの形態は以後の試験項目であるカル
スの継代、カルスからの再分化、サスペンジョンの誘
導、プロトプラストの単離等を考慮した場合、不定根等
の器官分化がなく、しかもフライアブルなものが適当と
考える。
スの継代、カルスからの再分化、サスペンジョンの誘
導、プロトプラストの単離等を考慮した場合、不定根等
の器官分化がなく、しかもフライアブルなものが適当と
考える。
【００３６】また、高濃度の２，４−Ｄは遺伝子レベル
での奇形を誘発する危険性が高いことから、できるだけ
低濃度の２，４−Ｄ試験区から誘導したカルスを使用す
ることが適当と考える。このことから、以降の試験には
暗黒下、０．２ｍｇ／ｌ ２，４−Ｄを含むＭＳ培地で
誘導したフライアブルなカルスを供試することとした。
なお、植物ホルモンとしてのサイトカイニンの添加も有
効と認められた。
での奇形を誘発する危険性が高いことから、できるだけ
低濃度の２，４−Ｄ試験区から誘導したカルスを使用す
ることが適当と考える。このことから、以降の試験には
暗黒下、０．２ｍｇ／ｌ ２，４−Ｄを含むＭＳ培地で
誘導したフライアブルなカルスを供試することとした。
なお、植物ホルモンとしてのサイトカイニンの添加も有
効と認められた。
【００３７】（カルスの継代）子葉展開直後の胚軸より
得られたカルスの継代時期を決定するため予備試験を行
った結果、３週間を過ぎる当たりからカルスは褐変しは
じめ、次第に枯死してしまった。このことから、３週間
を越えての培養は好ましくないと判断した。そこで継代
培養開始からのカルスの形態と増殖量を調べた。その結
果、継代培養開始時の置床カルス生重量は０．５ｇ・ｆ
ｗで培養２週間目には１．９ｇ・ｆｗと３．８倍に増殖
した。また、このカルスは褐片現象も観察されず、活発
に増殖していた。
得られたカルスの継代時期を決定するため予備試験を行
った結果、３週間を過ぎる当たりからカルスは褐変しは
じめ、次第に枯死してしまった。このことから、３週間
を越えての培養は好ましくないと判断した。そこで継代
培養開始からのカルスの形態と増殖量を調べた。その結
果、継代培養開始時の置床カルス生重量は０．５ｇ・ｆ
ｗで培養２週間目には１．９ｇ・ｆｗと３．８倍に増殖
した。また、このカルスは褐片現象も観察されず、活発
に増殖していた。
【００３８】このように、継代培養２週間目のカルスは
新たに継代するのに十分なまで増殖しており、このこと
から、培養２週間目をカルスの継代時期と決定した。継
代を繰り返したカルスはフライアブルな形態を維持し、
乳白色から乳黄色を呈していた。
新たに継代するのに十分なまで増殖しており、このこと
から、培養２週間目をカルスの継代時期と決定した。継
代を繰り返したカルスはフライアブルな形態を維持し、
乳白色から乳黄色を呈していた。
【００３９】（カルスからの再分化試験）継代２週間目
のカルスをＢＡＰ無添加あるいは０．０８，０．４，
２．０，１０．０ｍｇ／ｌ添加したＭＳ培地に置床した
ところ、培養６週間目には２．０および１０．０ｍｇ／
ｌ ＢＡＰ添加区で不定芽の再分化が観察された。この
ときのカルスからの不定芽形成率は３．３〜１０．０
％、１カルス当たりの不定芽数は０．１〜０．２本であ
った（表２）。
のカルスをＢＡＰ無添加あるいは０．０８，０．４，
２．０，１０．０ｍｇ／ｌ添加したＭＳ培地に置床した
ところ、培養６週間目には２．０および１０．０ｍｇ／
ｌ ＢＡＰ添加区で不定芽の再分化が観察された。この
ときのカルスからの不定芽形成率は３．３〜１０．０
％、１カルス当たりの不定芽数は０．１〜０．２本であ
った（表２）。
【００４０】
【表２】
【００４１】上記の試験結果から、カルスからの不定芽
再分化に対して２．０ｍｇ／ｌ以上のＢＡ濃度が有効で
あるといえた。さらに各試験区で生存しているカルスは
２．０ｍｇ／ｌ ＢＡＰ，１．０ｍｇ／ｌ ＧＡ3 を添
加したＭＳ培地に置床し、培養を継続したところ、培養
６週間目に２．０および１０．０ｍｇ／ｌ ＢＡＰ添加
区由来カルスからだけに不定芽の再分化と伸長が観察さ
れた。
再分化に対して２．０ｍｇ／ｌ以上のＢＡ濃度が有効で
あるといえた。さらに各試験区で生存しているカルスは
２．０ｍｇ／ｌ ＢＡＰ，１．０ｍｇ／ｌ ＧＡ3 を添
加したＭＳ培地に置床し、培養を継続したところ、培養
６週間目に２．０および１０．０ｍｇ／ｌ ＢＡＰ添加
区由来カルスからだけに不定芽の再分化と伸長が観察さ
れた。
【００４２】このときの１カルス当たりの不定芽数は
０．３〜０．７本、全不定芽数は２９本であり、初期の
再分化試験に対し、約３倍の不定芽が得られた（表
３）。
０．３〜０．７本、全不定芽数は２９本であり、初期の
再分化試験に対し、約３倍の不定芽が得られた（表
３）。
【００４３】
【表３】
【００４４】初期の再分化試験後に行った再分化継代試
験は２．０ｍｇ／ｌ ＢＡＰ，１．０ｍｇ／ｌ ＧＡ3
を添加したＭＳ培地を使用した。この再分化継代試験で
は植物生長調節物質であるＢＡＰの他にＧＡ3 を組み合
わせたが、ＧＡ3 を含む広義でのジベレリンは植物界に
広く分布し、植物生長調節に重要な役割を果たしている
ことが知られている。その生理作用は植物の生長を促進
することである。そこでＧＡ3 が不定芽の伸長および生
長におよぼす影響を検討するため、次の不定芽の伸長試
験をおこなった。
験は２．０ｍｇ／ｌ ＢＡＰ，１．０ｍｇ／ｌ ＧＡ3
を添加したＭＳ培地を使用した。この再分化継代試験で
は植物生長調節物質であるＢＡＰの他にＧＡ3 を組み合
わせたが、ＧＡ3 を含む広義でのジベレリンは植物界に
広く分布し、植物生長調節に重要な役割を果たしている
ことが知られている。その生理作用は植物の生長を促進
することである。そこでＧＡ3 が不定芽の伸長および生
長におよぼす影響を検討するため、次の不定芽の伸長試
験をおこなった。
【００４５】（不定芽の伸長試験）ＧＡ3 の濃度（１．
０，１０，１００．０ｍｇ／ｌ）が不定芽伸長におよぼ
す影響を検討した結果、２．０ｍｇ／ｌ ＢＡＰ，１０
０．０ｍｇ／ｌ ＧＡ3 区において正常に伸長した不定
芽が最も多く観察された（正常不定芽数３２本）。この
とき不定芽の伸長と同時に、多くの新たな不定芽の再分
化も観察された（５mm以上の全不定芽数１１１本）。
０，１０，１００．０ｍｇ／ｌ）が不定芽伸長におよぼ
す影響を検討した結果、２．０ｍｇ／ｌ ＢＡＰ，１０
０．０ｍｇ／ｌ ＧＡ3 区において正常に伸長した不定
芽が最も多く観察された（正常不定芽数３２本）。この
とき不定芽の伸長と同時に、多くの新たな不定芽の再分
化も観察された（５mm以上の全不定芽数１１１本）。
【００４６】しかし、不定芽の再脱分化傾向も顕著に観
察された。この再脱分化が観察された不定芽はもともと
水浸状の形態を示したものと推察した。すなわち、健全
な不定芽はＧＡ3 の影響を受けて生長を続け、水浸状の
不完全な不定芽は再脱分化していくものと考えられた。
察された。この再脱分化が観察された不定芽はもともと
水浸状の形態を示したものと推察した。すなわち、健全
な不定芽はＧＡ3 の影響を受けて生長を続け、水浸状の
不完全な不定芽は再脱分化していくものと考えられた。
【００４７】ＧＡ3 の１．０および１０．０ｍｇ／ｌ添
加区でも新たな不定芽の再分化が観察された。しかし、
正常に伸長している不定芽はほとんどなく、多くの不定
芽は水浸状の形態を示した（表４）。なお、水浸状の不
定芽は１００．０ｍｇ／ｌ区程度の再脱分化傾向は認め
られなかった。
加区でも新たな不定芽の再分化が観察された。しかし、
正常に伸長している不定芽はほとんどなく、多くの不定
芽は水浸状の形態を示した（表４）。なお、水浸状の不
定芽は１００．０ｍｇ／ｌ区程度の再脱分化傾向は認め
られなかった。
【００４８】
【表４】
【００４９】（発根および順化試験）５mm以上に伸長し
た不定芽は０．１ｍｇ／ｌ ＩＢＡを添加した１／２Ｍ
Ｓ培地に移植し、発根を促した。その結果、培養５週間
後には１５．８％（６／３８本）に発根が認められた。
た不定芽は０．１ｍｇ／ｌ ＩＢＡを添加した１／２Ｍ
Ｓ培地に移植し、発根を促した。その結果、培養５週間
後には１５．８％（６／３８本）に発根が認められた。
【００５０】その後、十分に発根を促した幼植物体は３
つの異なる条件で順化試験を行った。そうしたところ、
すべての条件下で活着させることができた。この順化試
験では培養土に移植後、全く湿度低減処理しない試験区
を含んでいる。このことは、本法で得られた幼植物体は
全く順化処理をおこなわなくても容易に活着することを
示したものであった。
つの異なる条件で順化試験を行った。そうしたところ、
すべての条件下で活着させることができた。この順化試
験では培養土に移植後、全く湿度低減処理しない試験区
を含んでいる。このことは、本法で得られた幼植物体は
全く順化処理をおこなわなくても容易に活着することを
示したものであった。
【００５１】上記のように、順化処理を省いても容易に
活着することができる理由として、不定芽の伸長試験以
降に使用したフィルターキャップが、試験管内の湿度の
低減とガス換気回数の向上を図り、外植体の健全なシュ
ート形成と順化の役割を果たしたものと考えられる。
活着することができる理由として、不定芽の伸長試験以
降に使用したフィルターキャップが、試験管内の湿度の
低減とガス換気回数の向上を図り、外植体の健全なシュ
ート形成と順化の役割を果たしたものと考えられる。
【００５２】上記の試験から、前記実施例の効果が実証
でき、また効果的な実施のためのデーターを得ることが
できた。
でき、また効果的な実施のためのデーターを得ることが
できた。
【００５３】
【発明の効果】以上説明したように、この発明によれ
ば、ラヴェンダー属植物の子葉展開直後の胚軸を２，４
−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）を添加した無
機塩類，ビタミン類，sucrose からなる基本培地に置床
してカルスを誘導したのち、該カルスを６−ベンジルア
ミノプリン（ＢＡＰ）を添加した基本培地に置床し不定
芽を得る。そして該不定芽はカルスをつけないように切
り離し、３−インドール酪酸（ＩＢＡ）を添加した基本
培地に置床して発根を促し容易・確実に幼苗を得ること
ができ、ラヴェンダー属植物の工業的な大量生産が可能
である。
ば、ラヴェンダー属植物の子葉展開直後の胚軸を２，４
−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）を添加した無
機塩類，ビタミン類，sucrose からなる基本培地に置床
してカルスを誘導したのち、該カルスを６−ベンジルア
ミノプリン（ＢＡＰ）を添加した基本培地に置床し不定
芽を得る。そして該不定芽はカルスをつけないように切
り離し、３−インドール酪酸（ＩＢＡ）を添加した基本
培地に置床して発根を促し容易・確実に幼苗を得ること
ができ、ラヴェンダー属植物の工業的な大量生産が可能
である。
Claims (1)
- 【請求項１】 ラヴェンダー属植物の子葉展開直後の胚
軸を２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）を
添加した無機塩類，ビタミン類，sucrose からなる基本
培地に置床してカルスを誘導したのち、該カルスを６−
ベンジルアミノプリン（ＢＡＰ）を添加した基本培地に
置床し不定芽を得る。そして該不定芽はカルスをつけな
いように切り離し、３−インドール酪酸（ＩＢＡ）を添
加した基本培地に置床して発根を促し幼植物体を得るこ
とを特徴とするラヴェンダーの胚軸からのカルス誘導と
植物体の再生方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3310505A JPH05146232A (ja) | 1991-11-26 | 1991-11-26 | ラヴエンダーの胚軸からのカルス誘導と植物体の再生方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3310505A JPH05146232A (ja) | 1991-11-26 | 1991-11-26 | ラヴエンダーの胚軸からのカルス誘導と植物体の再生方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05146232A true JPH05146232A (ja) | 1993-06-15 |
Family
ID=18006035
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3310505A Withdrawn JPH05146232A (ja) | 1991-11-26 | 1991-11-26 | ラヴエンダーの胚軸からのカルス誘導と植物体の再生方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05146232A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105340748A (zh) * | 2015-11-30 | 2016-02-24 | 海南大学 | 一种可共用于阔叶薰衣草愈伤组织和不定芽诱导的培养基 |
| WO2020196388A1 (ja) * | 2019-03-28 | 2020-10-01 | カゴメ株式会社 | アブラナ科属間雑種の苗の生産方法及びアブラナ科属間雑種の不定芽の水浸状化抑制方法 |
| CN119631889A (zh) * | 2024-12-02 | 2025-03-18 | 新疆农业大学 | 一种薰衣草花药培养的方法 |
-
1991
- 1991-11-26 JP JP3310505A patent/JPH05146232A/ja not_active Withdrawn
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105340748A (zh) * | 2015-11-30 | 2016-02-24 | 海南大学 | 一种可共用于阔叶薰衣草愈伤组织和不定芽诱导的培养基 |
| WO2020196388A1 (ja) * | 2019-03-28 | 2020-10-01 | カゴメ株式会社 | アブラナ科属間雑種の苗の生産方法及びアブラナ科属間雑種の不定芽の水浸状化抑制方法 |
| JPWO2020196388A1 (ja) * | 2019-03-28 | 2021-12-02 | カゴメ株式会社 | アブラナ科属間雑種の苗の生産方法及びアブラナ科属間雑種の不定芽の水浸状化抑制方法 |
| JP2023010775A (ja) * | 2019-03-28 | 2023-01-20 | カゴメ株式会社 | アブラナ科属間雑種の苗の生産方法及びアブラナ科属間雑種の不定芽の水浸状化抑制方法 |
| CN119631889A (zh) * | 2024-12-02 | 2025-03-18 | 新疆农业大学 | 一种薰衣草花药培养的方法 |
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