JPH05148137A

JPH05148137A - リポソーム

Info

Publication number: JPH05148137A
Application number: JP4138517A
Authority: JP
Inventors: David Bodmer; ダーフイト・ボードマー; Thomas Kissel; トーマス・キツセル; Friedrich Richter; フリードリツヒ・リヒター; Harry Tiemessen; ハリー・テイーメセン
Original assignee: Sandoz AG
Current assignee: Sandoz AG
Priority date: 1991-05-30
Filing date: 1992-05-29
Publication date: 1993-06-15
Anticipated expiration: 2017-01-15
Also published as: GB9111611D0; GB2256139A; IT1260442B; ITRM920383A0; US6623753B1; GB9211323D0; GB2256139B; BE1005952A4; FR2676925B1; ITRM920383A1; FR2676925A1; DE4216644B4; JP3245955B2; DE4216644A1; CH684308A5

Abstract

(57)【要約】（修正有）【構成】本発明は、遊離塩基型または酸付加塩型の式
Ｉ：【化１】の化合物を活性物質として含むリポソーム調製物、およ
び、適当なリポソーム形成材料を用いて式Ｉの化合物を
充填することによる、係るリポソーム調製物の製造方
法、対応する医薬組成物に関するものである。【効果】全身性、局所及び肺真菌感染症の処置に有用
である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、アリルアミン含有リポ
ソーム、即ち、薬理学的に活性な物質としてアリルアミ
ン化合物を充填したリポソームに関するものである。

【０００２】

【発明の構成】本発明は、１つの態様において、式Ｉ：

【化２】で示される化合物を含むリポソームを提供するものであ
る。式Ｉの化合物は、例えば遊離型または酸付加塩型で
使用することができる。酸付加塩型は常法によって遊離
塩基型から製造することができ、その逆も可能である。
好適な酸付加塩型の例は、塩酸塩、乳酸塩及びアスコル
ビン酸塩である。

【０００３】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】式Ｉ
の化合物は例えばＢＥ−ＰＳ−８５３’９７６及びＥＰ
−Ａ−２４’５８７から知られる。これはアリルアミン
抗真菌薬の部類に属する。これは当分野では一般名テル
ビナフィンとして知られており、商標ラミシルの下で市
販されている。テルビナフィンは局所及び経口投与の両
方で高度に活性であるが、インビトロの血清は、ある程
度その抗真菌活性に拮抗することができる。したがっ
て、血清との結合を克服し、そして／または薬動力学及
び組織分布のようなパラメータに好ましい影響を及ぼ
し、そして／または副作用及び毒性を低下させるため
に、式Ｉの化合物の生物学的利用可能性を改善させるド
ラッグデリバリーシステムの発見が望まれる。薬物の活
性及び治療有効性を維持または増加させつつ副作用及び
毒性を低下させることが追求される。

【０００４】

【課題を解決するための手段】上記の基準に合致する有
望な試みが、活性物質として式Ｉの化合物を含有するリ
ポソームの形においてここに発見された。即ち、式Ｉの
親油性化合物のための薬学上許容し得る、例えば非経口
投与剤型が、リポソーム調製物によって得られた。これ
により界面活性物質（界面活性剤）は必要なく、よっ
て、界面活性剤の使用に通常伴うさらなる副作用の問題
が回避される。式Ｉの化合物を含有するリポソームの、
例えば計量用量吸入器（ＭＤＩ）、水性または粉末エア
ロゾルによる肺への適用は、リポソームの組成により、
直ちにまたは持続的に式Ｉの化合物を放出して抗真菌活
性を生み出すことへとつながり得る。式Ｉの化合物を含
有するリポソームの局所適用は、投与部位への薬物の蓄
積を促進し、非リポソーム適用剤型と比較して式Ｉの化
合物の有効性を向上させることにつながり得る。肺への
適用において、式Ｉの化合物を含有するリポソームは、
カンジダ症及び種々の型のアスペルギルス症、例えばア
スペルギルス・フミガトゥス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）及び非フミガトゥスのアスペル
ギウス属緒菌による感染症のような肺の真菌性疾患に有
効である。本発明に係るリポソームの注射による適用
は、従来の注射用剤型で注射した場合の同量の同物質に
比較して、活性化合物の有効性が改善され得る。一方、
式Ｉの化合物を有するリポソームの剤型で投与した場
合、より少量の活性化合物によって式Ｉの化合物の同等
の有効性が達成され得る。このように、真菌症の処置の
ための式Ｉの化合物の必要量を実質的に減少させること
ができる。

【０００５】リポソームは、水溶液を燐脂質の乾燥した
膜に添加する時に、例えば、必要ならばエネルギーの添
加と共に、またはある程度までは自然に形成される、脂
質の小胞である。最も広く使用される脂質はホスファチ
ジルコリンである。リポソームの脂質の組成、大きさ、
電荷及び膜の流動性を変えることは、その体内分布に大
きな影響を及ぼし得る。薬物の分子は水性の空間に充填
されるか、または二層の間に入るかのいずれかとするこ
とができる。この二十年間にリポソームは、薬理学、医
学、遺伝子工学並びに化粧品及び食品工業において、生
きている細胞及びその他の疎水性障壁中への運搬手段と
して、様々な薬物のみならず遺伝学的材料、酵素及びそ
の他の（マクロ）分子に適用されてきた。全身性真菌感
染症の処置において、この小胞は、アムホテリシンＢ及
びナイスタチンの担体としても有効に使用されてきた。

【０００６】略語ＡＭＢ：アムホテリシン−ＢＤＭＰＣ：ジミリストイル−ホスファチジル−コリンＤＭＰＧ：ジミリストイル−ホスファチジル−グリセリ
ンＤＯＰＣ：ジオレオイル−ホスファチジル−コリンＤＯＰＧ：ジオレオイル−ホスファチジル−グリセリンＤＯＰＳ：ジオレオイル−ホスファチジル−セリンＤＰＰＣ：ジパルミトイル−ホスファチジル−コリンＤＳＰＣ：ジステアロイル−ホスファチジル−コリンＤＳＰＧ：ジステアロイル−ホスファチジル−グリセリ
ンＧＰＣ：ゲル浸透クロマトグラフィーＨＥＰＥＳ：ヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホ
ン酸ＨＰＣ：水素化ホスファチジルコリンＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィーＩＲ／ＡＴＲ：赤外−減衰全反射分光法ＭＤＩ：計量用量吸入器ＭＬＶ：多重膜小胞ＰＣ：ホスファチジル−コリンＰＥ−ＰＥＧ：ホスファチジルエタノールアミンポリエ
チレングリコールＰＧ：ホスファチジル−グリセリンＰＯＰＣ：パルミトイル−オレオイル−ホスファチジル
−コリンＰＯＰＧ：パルミトイル−オレオイル−ホスファチジル
−グリセリンＰＳ：ホスファチジル−セリンＴＣ：相転移温度

【０００７】図面の説明図１：式Ｉの遊離化合物０．４ｍｇ及び本発明のリポソ
ーム１．０ｍｇの混合物の溶出プロフイル［実施例１、
ａ）参照］。図２：式Ｉの化合物及びＰＯＰＣの多重−二層膜内での
位置を示すコンピューターモデル［実施例１、ｈ）参
照］。図３：リポソーム懸濁液の噴霧後の様々なツイン・イン
ピンジャーのコンパートメントにおける式Ｉの化合物の
析出。図４：噴霧器内部のリポソームの粒子サイズ。

【０００８】本発明に係るリポソームは、式Ｉの化合物
を、適当なリポソーム形成材料を用いて充填することか
らなる工程によって得ることができる。この工程は、本
発明のまた別の側面を形成する。本発明に係る方法は常
法によって、例えば、Ｆ．スゾーカ及びＤ．パパハジョ
プーロス、「リポソームズ・アンド・ゼア・ユーシズ・
イン・バイオロジー・アンド・メディスン」、アナルス
・オブ・ザ・ニュー・ヨーク・アカデミー・オブ・サイ
エンシズ（Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．）第３
０８巻（１９７８）１−４６２頁、Ｒ．Ｌ．ジュリアー
ノ及びＤ．レイトン、「リポソームズ・アズ・ア・ドラ
ッグ・デリバリー・システム」、ドラッグ・デリバリー
・システムズ（ＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＳｙｓｔ
ｅｍｓ）、オクスフォード・ユニバーシティ・プレス・
Ｉｎｃ．、ニューヨーク（１９８０）１８９−２３６
頁、Ｍ．Ｊ．オストロ、リポソームズ（Ｌｉｐｏｓｏｍ
ｅｓ）、Ｍ．デッカー・Ｉｎｃ．、ニューヨーク（１９
８３）及びＧ．ロペス−ベレンシュタイン及びＩ．Ｊ．
フィドラー、リポソームズ・イン・ザ・セラピー・オブ
・インフェクシャス・ディジージズ・アンド・キャンサ
ー（ＬｉｐｏｓｏｍｅｓｉｎｔｈｅＴｈｅｒａｐ
ｙｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＤｉｓｅａｓｅｓ
ａｎｄＣａｎｃｅｒ）、Ａ．Ｒ．リス・Ｉｎｃ．、ニ
ューヨーク（１９８９）；Ｒ．Ｒ．Ｃ．ニュー、リポソ
ームズ − ア・プラクティカル・アプローチ（Ｌｉｐ
ｏｓｏｍｅｓ − ａｐｒａｃｔｉｃａｌａｐｐｒ
ｏａｃｈ）、ＩＲＬプレス、オクスフォード、ニューヨ
ーク、トーキョー（１９９０）に記載の方法と同様にし
て実施することができる。リポソーム及びその使用につ
いてのさらなる文献は、Ｉ．Ｗ．ケラウェイ及びＳ．
Ｊ．フェア、アドバンシズ・イン・ドラッグ・デリバリ
ー・レビューズ（Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙ
Ｒｅｖｉｅｗｓ）第５巻［１９９０］１４９頁、Ｆ．
マーティン、ジャーナル・オブ・リポソーム・リサーチ
（Ｊ．ＬｉｐｏｓｏｍｅＲｅｓ．）第１巻［１９９
０］４０７頁、Ｋ．エグバリア及びＮ．ワイナー、アド
バンシズ・イン・ドラッグ・デリバリー・レビューズ
（Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＲｅｖｉｅｗ
ｓ）第５巻［１９９０］２８７頁、Ａ．クリバノフ等、
ＦＥＢＳ第２６８巻（１９９０）２３５頁、である。

【０００９】リポソームを形成する材料は、本質的には
燐脂質または燐脂質の混合物である。活性物質は、好ま
しくは燐脂質の二重層の間に入り、ここに位置する。リ
ポソーム形成の好ましい方法は、ａ）有機溶媒中の式Ｉの化合物及び脂質の溶液を作成
し、ｂ）この溶液から溶媒を除去して残留物を得、ｃ）この残留物を緩衝剤の溶液に懸濁し、ｄ）この懸濁液を、リポソームが形成されるまで攪拌及
びホモジナイズに付し、ｅ）このリポソームを分離する、ことからなる。

【００１０】工程ａ）において、「溶液」という語は、
エマルジョンのような「擬似」溶液を包含するが、均一
な、透明な溶液を作成することが好ましい。式Ｉの化合
物及び脂質を溶解または可溶化する任意の溶媒系を使用
することができる。この系は、単一の溶媒または溶媒の
混合物であってよい。これは例えば１５％までの水を含
有させることができる。所望ならば界面活性剤を存在さ
せることができる。溶媒系は、蒸発により脂質から除去
できる任意の適当な有機溶媒を含んでいてよい。ジエチ
ルエーテル及びジイソプロピルエーテルのような広範囲
のエーテル類、酢酸エチルのようなエステル類、メタノ
ール、エタノール及びｔｅｒｔ−ブタノールのようなア
ルコール類、並びに塩化メチレン及びクロロホルムのよ
うなハロゲン化炭化水素を使用することができる。所望
ならば酢酸を存在させてよい。塩化メチレン、メタノー
ルまたはｔｅｒｔ−ブタノールの使用が好ましい。

【００１１】工程ｂ）において、溶媒は多くの常套的手
段によって除去できる。好ましい手段は、低真空下、例
えば１０ないし５０ｍｍＨｇにおける蒸発、または高真
空下、例えば５ｍｍＨｇ以下、例えば０．１ｍｍＨｇで
の凍結乾燥を包含する。溶媒及び水性緩衝剤（工程ｃ）
両者の体積を増やさずに乾燥脂質の表面積を増大させる
こともできる。このような脂質表面積の増大は、微粉砕
した担体（例えば塩化ナトリウム、乳糖またはその他の
多糖類の結晶）上に脂質を乾燥させ、またはガラスビー
ズ上に脂質を乾燥させることによって得られる（Ｒ．
Ｒ．Ｃ．ニュー、リポソームズ − ア・プラクティカ
ル・アプローチ（Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ −ａｐｒａｃ
ｔｉｃａｌａｐｐｒｏａｃｈ）、ＩＲＬプレス、オク
スフォード、ニューヨーク、トーキョー（１９９
０））。凍結乾燥法を使用する場合、この工程は室温以
下の温度で実施するのが適当であり、真空度及び温度
は、蒸発する混合物が周囲より約１−３℃低くなるよう
管理する。このような管理は常法により実施できる。凍
結乾燥のための典型的な計画は、約−６０℃で開始し１
２時間かけて−１５℃に昇温する。次いで温度を＋１０
℃に上げ、２時間保持する。リポソームの実用的規模の
生産において溶媒を除去する別の方法は、例えばＨ．キ
クチ等、ケミカル・アンド・ファーマシューティカル・
ブリトゥン（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．）第３
５巻１５２２頁（１９９１）により記載されているよう
なスプレードライ法である。この方法によると、脂質及
び薬物を、核となる物質、例えば塩化ナトリウムまたは
サッカロースが懸濁できる揮発性有機溶媒中に溶解す
る。次いで、得られた溶液または懸濁液を、常法、例え
ばビュッヒ１９０ミニスプレードライヤー中でスプレー
ドライする。

【００１２】工程ｃ）において使用される緩衝液は、好
ましくは例えばｐＨ４−８、例えばｐＨ５−６．８の燐
酸塩緩衝液である。好ましくは水相は低張、例えば３０
０ｍｏｓｍｏｌ／ｌ以下である。得られる懸濁液は好ま
しくは約０．００１ないし約０．２ｇ／ｍｌの脂質を含
有する。

【００１３】工程ｄ）においては、好ましくは、例えば
攪拌またはスーパーディスパックス（ＩＫＡラボテクニ
ック、シュタウフェン、ドイツ）もしくはマイクロフル
イダイザー（マイクロフルイディクス・Ｃｏｒｐ．、ニ
ュートン、マサチューセッツ、ＵＳＡ）のようなホモジ
ナイザーによる機械的処置を使用する。ホモジナイズは
超音波照射によっても提供される。係る照射の好適な周
波数は、例えば３０ないし８０ｋＨｚである。約１０ｍ
ｌの混合物がホモジナイズまたは攪拌されるための典型
的な電力は２００ないし４００ワットである。当然の事
ながら、ホモジナイズされる混合物は、金属の混入を避
けるために、超音波照射発生機に付随するチタニウムま
たは他の金属から離しておくことが好ましい。温度は好
ましくは約１０゜ないし約７０℃である。不飽和脂質に
対しては室温が好ましく、飽和脂質には６０゜−７０゜
が好ましい。所望ならば、超音波照射の後に、例えば１
００００ないし２７０００ｒｐｍで、高速スターラーに
よる攪拌を行なうことができる。

【００１４】工程ｅ）において、リポソームは、例えば
限外濾過、遠沈、イオン交換またはゲルクロマトグラフ
ィー、透析などによる常套の技術に従って分離すること
ができる。薬物が燐脂質の二重層の中に大部分取り込ま
れているならば、小胞の分離は不必要である。これは、
例えば化合物１の濃度が１ｍｇ／ｍｌ以下の場合であ
る。リポソームは、適度に小さな、例えば０．１ないし
１ミクロンの開口部を有するフィルターを通して濾過及
び滅菌することができる。所望ならばこの濾過は、その
脂質の相転移点以上、例えば３０゜ないし７０゜で実施
できる。長期安定性を改善するため、この調製物は凍結
乾燥に付す。

【００１５】別の態様において、本発明は、式Ｉの化合
物を燐脂質と組み合わせて含む組成物を提供する。これ
は、例えば上記工程ａ）に記載されるようなリポソーム
の形成のために特に有用である。式Ｉの化合物を含むリ
ポソームの大規模製造のための、さらなる好ましい一段
階リポソーム製造法は、Ｍ．ブランドル等、ドラッグ・
ディベロップメント・アンド・インダストリアル・ファ
ーマシー１６（１９９０）２１６７に記載の通りであ
り、これによると、燐脂質及び薬物を直接水相に分散さ
せ、次いで例えば適当なホモジナイザー、例えば商標ミ
クロフルイダイザーとして市販されているホモジナイザ
ー中でホモジナイズする。形成された小胞は単層または
多層であり得る。これらの大きさは、平均直径が約２０
ｎｍないし約１０μｍまで相違し得る。これらは好まし
くは約２００ｎｍ以下の直径である。式Ｉの化合物は好
ましくは燐脂質薄層の一部であり、少量のみがリポソー
ム内部の流体の一部または両者である。燐脂質二重層へ
の取り込みは、少なくとも１ｍｇ／ｍｌまでの濃度であ
り得る。リポソームは、１またはそれ以上の脂質、好ま
しくは燐脂質、例えばホスホモノグリセリド、ホスファ
チジン酸及びスフィンゴリピド、好ましくはホスファチ
ジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグ
リセロール、スフィンゴミエリン、ホスファチジルエタ
ノールアミン、ステアリルアミンまたはホスファチジン
酸；特にジミリストイルホスファチジルコリン、ジミリ
ストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイル
ホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジル
グリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジル
グリセロール及びホスファチジルセリンを含む。リポソ
ームは、コレステロールのようなステロールを含むこと
ができる。

【００１６】さらに、ホスファチジルエタノールアミン
ポリエチレングリコール（ＰＥ−ＰＥＧ）をリポソーム
中に取り入れて静脈内適用後のリポソームの血漿半減期
を延長し、その結果、式Ｉの化合物の持続放出またはリ
ポソームによる式Ｉの化合物の標的への運搬が達成でき
る。注射の目的のためには、４２℃以上の融点を持つ水
素化燐脂質、例えばＤＳＰＣ、ＤＳＰＧまたはＨＰＣが
好ましい。燐脂質の総濃度は約１ｍｇ／ｍｌないし約２
００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１５ｍｇ／ｍｌ及び１００
ｍｇ／ｍｌの間である。式Ｉの化合物の濃度は、例えば
約０．１ｍｇ／ｍｌないし約２０ｍｇ／ｍｌ、好ましく
は約０．３ｍｇ／ｍｌないし約１０ｍｇ／ｍｌ、特に約
５ｍｇ／ｍｌである。総燐脂質に対する式Ｉの化合物の
重量比は、例えば約１：１ないし約１：２０００、好ま
しくは約１：１０である。リポソームは常法によって分
離及び滅菌できる。有利に使用できるさらなる合成燐脂
質は、ホスファチジルエタノールアミンポリエチレング
リコール（ＰＥ−ＰＥＧ）のような合成燐脂質であっ
て、これは特に中性の小型リポソームに導入された場合
に、血漿半減期を延長させる。

【００１７】中性、即ち荷電のない燐脂質によって構成
される幾らかのリポソームは、数日間の保存後に凝集及
び沈澱のようなある程度の不安定性を示し得る。これ
は、リポソームを凍結乾燥し、使用直前に再懸濁するこ
とにより防止できる。もし均一な生成物を得るために乳
糖を凍結防止剤として用いるならば、３０分以内にリポ
ソームを共融温度以下、例えば−２８℃、好ましくは−
４０℃まで冷却することが望ましい。望ましい凍結防止
剤は、例えばシュクロース、トレハロース、乳糖、マン
ニトール、マルトース、フルクトース、グルコース、ガ
ラクトース、マンノース、キシリット及びソルビット、
好ましくは乳糖、マルトース、シュクロース及びトレハ
ロース、特に乳糖及びマルトース、とりわけ９％乳糖で
ある。凍結乾燥中、約１０％ないし４０％の直径の縮小
が起こり得る。一般に、凍結乾燥後５℃の保存で最初の
２週間では大きさ及び含量の著明な変化は起こらない。
１カ月後、小胞の大きさの１５％の縮小が、幾らかのリ
ポソームで観察され得る。凍結防止剤の濃度は重要でな
く、約２％ないし約１０％の範囲である。保存は好まし
くは５℃付近で行なう。

【００１８】再構成後のリポソームの浸透圧モル濃度
は、例えば非経口適用に好適であり、典型的には約２５
０ないし約５００、例えば２９０ないし３５０ｍｏｓｍ
ｏｌ／ｌである。再構成は、水を加えて元の容量とする
ことによって実施する。好ましくは、これは使用の直前
に行なう。式Ｉの化合物及び燐脂質の分析測定のために
は、再構成した水性試料は、好ましくは５０％メタノー
ルのようなアルコールで１：１に希釈する。無菌的充填
及び凍結乾燥に先立ち、リポソームの無菌濾過（０．２
μｍ孔径）により滅菌を行なうことができる。大規模製
造のためには、水相における工程処理中に、保存剤とし
て１％ベンジルアルコールを使用することが好ましい。
ベンジルアルコールは最終的凍結乾燥段階中に、再び完
全に除去することができる。驚くべき事に、脂質膜中に
取り込まれると式Ｉの化合物は通常、リポソームが遊離
塩基から出発して製造された場合でも、プロトン化され
る。

【００１９】

【実施例】以下の実施例により本発明を例示する（以
後、式Ｉの化合物は簡潔に化合物１と称する）：実施例１リポソームの製造（化合物１；小規模）遊離塩基型の化合物１１０ｍｇ
をメタノールに可溶化し、それぞれ１：４：２のモル
比、即ち１：７：３の重量／重量比で大豆ホスファチジ
ル−コリン（ＰＣ）及びジミリストイル−ホスファチジ
ル−グリセロール（ＤＭＰＧ）のメタノール溶液と混合
する。この混合物をロータリーエバポレーターを用いて
丸底フラスコ中で減圧乾燥し、脂質／化合物１の膜を形
成させる。乾燥した膜を、９％の凍結防止剤乳糖を含む
２０ｍＭ燐酸塩緩衝液（ｐＨ６．８）１０ｍｌと共に振
盪することにより水和する。形成されたリポソームは、
約５０ミクロンまでの不均一な大きさを持つ多重膜の小
胞（ＭＬＶ）である。このＭＬＶ懸濁液を攪拌によりホ
モジナイズし、１、０．４及び０．２ミクロンの孔径の
ヌクレオポア・ポリカーボネート膜から二回順次押し出
すことにより、大きさで分類する。続いてリポソーム調
製物を凍結乾燥し、分離したリポソームを５℃で保存す
る。

【００２０】実施例１の変法において、マルトース、シ
ュクロースまたは各々トレハロースが凍結防止物質とし
て使用される。さらなる変法において、ＭＬＶのホモジ
ナイズを超音波処理によって実施する。さらなる変法に
おいて、ＭＬＶのホモジナイズをスーパーディスパック
スホモジナイザー（ＩＫＡラボテクニック、シュタウフ
ェン、ドイツ）を用いる処理によって実施する。さらな
る変法において、ＭＬＶのホモジナイズをマイクロフル
イダイザーホモジナイザー（マイクロフルイディクス・
Ｃｏｒｐ．、ニュートン、マサチューセッツ、ＵＳＡ）
を用いる処理によって実施する。さらなる変法におい
て、大豆ＰＣおよびＤＭＰＧを以下の燐脂質に置き換え
る：ジミリストイル−ＰＣ（ＤＭＰＣ）；ジパルミトイル−ＰＣ（ＤＰＰＣ）；ジオレオイル−ＰＣ（ＤＯＰＣ）；ジオレオイル−ＰＧ（ＤＯＰＧ）；パルミトイル−オレイル−ＰＣ（ＰＯＰＣ）；パルミトイル−オレイル−ＰＧ（ＰＯＰＧ）；ジオレオイル−ホスファチジル−セリン（ＤＯＰＳ）；牛の脳由来のホスファチジル−セリン（ＰＳ）；及び、ホスファチジルエタノールアミンポリエチレングリコー
ル（ＰＥ−ＰＥＧ）。さらなる変法において、塩酸付加塩型の式Ｉの化合物を
使用する。

【００２１】

【表１】第１表化合物１のリポソームの例バッチ化合物１燐脂質比（モル）小胞の大 No. [mg/ml] 比濃度 [化合物／燐脂質] きさ＊ [w/w] [mg/ml] (nm) 1 1(塩基) PC/DMPG 7/3 15 1/6 215 2 1(HCl塩) PC/DMPG 7/3 15 1/6 223 3 0.3-3.0 PC/DMPG 7/3 15 1/2-1/20 (塩基) 4 1(塩基) POPC/DOPS 7/3 15 1/6 240 5 3(塩基) POPC/DOPS 7/3 30 1/4 171 6 3(塩基) POPC/DOPS 7/3 30 1/4 250 7 3(塩基) POPC/DOPS 7/3 30 1/4 250 ＊流体力学的パラメータとして

【００２２】特性決定：ａ）最大充填容量リポソーム調製物は、流体の状態で数日間安定な、乳状
の外観を有する小胞（直径が１００−２５０ｎｍの間の
大きさ）の懸濁液である。小胞内に充填された式Ｉの化
合物の量を評価するために、試料を、ガラスカラムに詰
めたセファデックスＧ２５１０ｍｌ、または、セファ
デックスＧ２５９．１ｍｌが予め充填されたすぐに使
用できるｐｄ１０カラム（ファルマシア）のいずれかを
用いたＧＰＣに付す。カラムは全て使用前にカラムの中
空容量の溶離液で３回洗浄する。カラムに試料（１ｍ
ｌ）を適用し、リポソーム画分を水中０．１５Ｍ塩化ナ
トリウム（０．９％）で溶出する。１０ないし１５ｍｌ
溶出後、小胞に充填されていない式Ｉの化合物（遊離化
合物１）を溶出するために、溶離液を１０ｍＭ酢酸塩緩
衝液（ｐＨ３）に置き換える。画分をＨＰＬＣ分析によ
り化合物１について検定する［ｉ）参照］。

【００２３】燐脂質濃度１５ｍｇ／ｍｌにおいて、化合
物１は、燐酸塩緩衝液（ｐＨ６．８）中１ｍｇ／ｍｌの
濃度まで小胞中に完全に充填され得る。これは、薬物が
過剰に加えられた時に形成される化合物１の結晶の視覚
化（顕微鏡）、または、セファデックスＧ２５を用いた
ＧＰＣによる充填されなかった化合物１のリポソーム性
化合物１からの分離、のいずれかによって検定できる。
図１は、遊離の化合物１を０．４ｍｇ及び化合物１のリ
ポソーム１．０ｍｇの混合物の溶出プロファイルを表わ
す。カラムに適用された式Ｉの化合物の１００％が回収
されている。リポソーム画分は０．９％塩化ナトリウム
（１２ｍｌ）で溶出し、遊離の化合物１は１０ｍＭ酢酸
塩緩衝液（ｐＨ３．０）で溶出する。連続した線は単一
の画分における化合物１の量を表わし、破線は溶出した
化合物１の累積量を示す。充填容量は水和に使用される
緩衝液の組成に影響を受ける：燐酸塩緩衝液及びＨＥＰ
ＥＳ緩衝液では１ｍｇ／ｍｌしか充填されない。化合物
１は、この二種類の緩衝液によりある程度沈澱すること
が観察できる。脱塩水を使用すると、２．５ｍｇ／ｍｌ
までの取り込みが達成される（第２表）：大豆ホスファ
チジルコリン及びジミリストイル−ホスファチジル−グ
リセリン（ＤＭＰＧ）を総濃度１５ｍｇ／ｍｌ、７：３
の比率で使用して、化合物１のリポソームを上記のよう
に製造した。分析用試料をゲル浸透クロマトグラフィー
（ＧＰＣ）カラムに適用し、リポソームに充填された化
合物１及び遊離の化合物１について検定する：

【００２４】

【表２】第２表異なった緩衝液を用いた化合物１に対するリポソームの取り込み容量濃度モル比¹⁾ 結晶のＧＰＣ画分小胞の大きさ³⁾ 損失⁴⁾ (mg/ml) 観察²⁾ (%) (%) 理論値実測値理論値遊離リホ゜ソーム d(nm) pD 実測値燐酸塩緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ６．８）： 1 0.93 1:6.5 - 0 >91 141 2 5 1.5 1.39 1:4.3 + <1 >76 149 4 14 2 1.30 1:3.3 + 0 >80 143 2 26 2.5 1.25 1:2.6 + 0 78 196 6 35 3 1.23 1:2.2 + <1 83 139 2 32 ＨＥＰＥＳ緩衝液（３５ｍＭ、ｐＨ６．８）： 1 0.90 1:6.5 - 0 86 131 3 4 1.5 1.53 1:4.3 (+) <1 >80 147 3 6 2 1.50 1:3.3 + 14 52 166 4 17 2.5 1.43 1:2.6 + <1 54 161 2 25 3 2.23 1:2.2 + >1 >67 147 2 17 水： 1 0.99 1:6.5 - 0 82 99 2 5 1.5 1.58 1:4.3 - 0 91 121 2 5 2 1.99 1:3.3 - 0 90 131 2 4 2.5 1.47 1:2.6 - <1 86 124 3 11 3 2.46 1:2.2 (+) <1 83 126 3 10

【００２５】1)燐脂質に対する化合物１のモル比 2)顕微鏡による観察（アキオスコープ、ツァイス） 3)小胞の大きさ：ｄ＝直径、ｐＤ＝多分散性（１＝単分
散、１０＝多分散） 4)損失＝製造後のフラスコ及びフィルター上の残留物高濃度、即ち２及び４ｍｇ／ｍｌの化合物１、及び種々
の燐脂質（第３表）を用いてリポソームを製造すること
により、燐脂質濃度１５ｍｇ／ｍｌにおける化合物１の
およその限度１ｍｇ／ｍｌ、即ち薬物／脂質のおよその
モル比１：６が確認された。充填は、使用される種々の
燐脂質に対し独立している：

【００２６】

【表３】第３表濃度２及び４ｍｇ／ｍｌの化合物１、及び種々の燐脂質を用いた充填燐脂質実測された化合物１の濃度(mg/ml) 理論値2mg/ml 理論値4mg/ml PC 1.0±0.5 1.2±0.7 PC/DOPG 1.8±0.1 2.2±1.0 PC/DOPS 1.6±0.2 3.0±0.6 HPC 2.0±0.2 3.5±0.4 HPC/DOPG 1.7±0.3 2.2±0.2 HPC/DOPS 2.0±0.3 3.2±0.6 POPC 1.8±0.2 3.4±0.4 POPC/DOPG 1.9±0.1 2.5±0.3 POPC/DOPS 1.4±0.2 2.8±0.4 DOPC/DOPG 1.6±0.3 3.4±0.4 DMPC 1.8±0.4 1.5±1.0 DMPC/DMPG 2.0±0.3 3.0±1.2 水和には燐酸塩緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ６．８）を使用
した。燐脂質の濃度は１５ｍｇ／ｍｌとした。化合物１
は０．２μｍ膜での濾過の後測定した。各濃度につき３
つの調製物を調べた（平均値±ＳＤ、ｎ＝３）。

【００２７】ｂ）充填効率含量１ｍｇ／ｍｌまでの濃度の化合物１（遊離塩基型）
において、効率は９０％以上である。高濃度において
は、過剰の化合物１の沈澱（充填されない）のため、効
率は低下する。ｃ）収率１０ｍｌまでのバッチサイズ（１０ｍｇの化合物１）に
おいては収率は７０−８０％の範囲である。１００ｍｌ
（１００ｍｇの化合物１）においては収率は９０％であ
り、１ｌ（１ｇの化合物１）では９０％以上である。ｄ）不純物及び安定性凍結乾燥した化合物１のリポソーム（組成：第１表のバ
ッチ１及び２参照）２種を、異なった温度及び周囲湿度
で安定性試験に供した：相対湿度７５％において−２５
℃、５℃、２５℃及び３０℃。０．２μｍの膜での濾過
及び無菌作業台での無菌的充填により、滅菌を行なう。
結果を第４表にまとめる。製造後の化合物１の分解は殆
ど無かった。１ヶ月後、不純物のレベルは３０℃におい
てさえ２％以下であることがわかった。３ヶ月の安定性
のデータは、１ヶ月後に僅かな分解生成物の増加が、特
に高い温度において起こることを示している。５℃で３
ヶ月保存した後の不純物は１％以下であった。５℃にお
ける保存が適当である。

【００２８】

【表４】第４表化合物１のリポソームの安定性保存条件化合物１の充填（％）化合物１の分解生成物（％）バッチ２バッチ１バッチ２バッチ１初期１００１０００．２０．１ −２５℃ １ヶ月９５．７９４．９０．３０．３３ヶ月９５．６９６．８０．４０．５５℃ １ヶ月９６．１９５．１０．９０．７３ヶ月９５．６９６．１０．９１．０２５℃ １ヶ月９５．７９４．５１．４１．５３ヶ月９５．２９５．１２．７２．９３０℃／７５％ｒ．ｈ．１ヶ月９５．２９４．７１．５１．９３ヶ月９５．７９４．５３．１３．９ｒ．ｈ．＝相対湿度

【００２９】ｅ）残留溶媒化合物１のリポソームの製造及び凍結乾燥によって導か
れたメタノールのレベルは０．１％以下であった。クロ
ロホルムは検出されなかった（限度＝０．０５％）。ｆ）小胞の大きさリポソームの小胞の大きさは通常レーザー光の散乱によ
って測定され、粒子サイズの分布がほぼ単峰形である限
り、平均の流体力学的直径として表現される。化合物１
のリポソームの平均直径は、製造及び０．２μｍの膜に
よる濾過の後に、約２００−３００ｎｍである。凍結乾
燥及び水への再分散の後には、小胞の大きさは、より小
さくなる（１５０−２５０ｎｍ）。保存中、小胞はさら
に小さくなる：３ヶ月後に１０％の縮小が観察される
（第５表）：

【００３０】

【表５】第５表凍結乾燥、保存及び再構成後の化合物１リポソームの粒子サイズバッチ流体力学的半径流体力学的直径分布[φ(nm)] Rh(nm) PDC % Dh(nm) min. max. ２初期 111.5 50 223 147 500 １ヶ月、５℃ 96.8 48 194 126 434 ３ヶ月、５℃ 99.3 49 199 132 454 １初期 108 47 216 140 546 １ヶ月、５℃ 93.2 48 186 120 468 ３ヶ月、５℃ 95.3 49 191 124 498 Ｄｈ＝流体力学的直径ＰＤＣ＝多分散係数Ｒｈ＝流体力学的半径ｇ）物理的安定性１１の凍結防止剤をそれらの適性についてスクリーニン
グした。結果を第６表．１及び第６表．２にまとめる：

【００３１】

【表６】第６表．１化合物１リポソームの凍結乾燥凍結防止剤共融温度外観シュクロース −３０白色、緻密、幾らかの小さな亀裂トレハロース −２８白色、緻密、滑らかな表面乳糖 −２８白色、緻密、滑らかな表面マンニトール −３０白色、緻密、個々の円板の分離マルトース −２７白色、緻密、破断した縁糖無し − 多孔性、亀裂フルクトース −３６白色、緻密、粗い表面グルコース −３８白色、小孔ガラクトース −３６白色、小孔マンノース −３７不均質キシリット −３８不均質ソルビット −３３白色、多孔性

【００３２】

【表７】第６表．２化合物１リポソームの粒子サイズ：凍結乾燥の影響凍結防止剤粒子サイズ[平均直径(nm)±SD(n=3)] 商凍結乾燥前(b) 凍結乾燥後(a) (a/b) シュクロース 597(±174) 205(±29) 0.3(±0.1) トレハロース 407(±58) 250(±35) 0.6(±0.1) 乳糖 381(±52) 217(±19) 0.6(±0.1) マンニトール 224(±15) 187(±12) 0.8(±0.1) マルトース 209(±8) 188(±16) 0.9(±0.1) 糖無し 274(±15) 338(±31) 1.2(±0.1) グルコース 377(±60) 200(±32) 0.5(±0.2) ガラクトース 391(±15) 265(±60) 0.7(±0.1) フルクトース 304(±40) 241(±30) 0.8(±0.1) マンノース 398(±50) 331(±30) 0.8(±0.1) キシリット 320(±4) 250(±16) 0.8(±0.1) ソルビット 373(±57) 139(±10) 0.4(±0.1) 化合物１のリポソームは、化合物１＝１．５ｍｇ／ｍｌ、大豆レシチン＝１５ｍｇ／ｍｌ、凍結防止剤＝４％、の濃度で製造した。

【００３３】ｈ）ＩＲ／ＡＴＲ分光法化合物１／脂質の比が１：２で、高濃度の電解質を含む
緩衝液を使用せずに、多−二重層膜でエクス・サイト実
験を行なった。これらのリポソームにおいて、脂質に対
する化合物１の化学量論的比率を実験的に定めた。即
ち、薬物及び燐脂質の均質な分散を二重層膜内に維持す
る。意外な発見は、塩基型で使用されたにもかかわら
ず、化合物１が、脂質膜に取り込まれた際にプロトン化
されることであった。実験的に定められた二色比に基づ
き、化合物１の分子の軸と膜の面に対する垂線との角度
を分析した。化合物１は、高い確率をもって、垂線から
０°−３０°の偏差で脂質の炭化水素鎖に平行に位置し
ている。化合物１及びＰＯＰＣの位置付けをコンピュー
ターモデル作成により図２に例示する。

【００３４】ｉ）ＨＰＬＣ分析薬物の充填、即ちリポソーム１ｍｌ当りの化合物１の濃
度をＨＰＬＣによって測定した（ブラウンリー・ラブズ
製スフェリ−５ＲＰ１８カラム；コントロン製ポン
プ、Ｕ．Ｖ．検出器およびオートサンプラー）。移動相
はアセトニトリル／水／トリエチルアミン（８００／２
００／１）とした。カラムへの適用前の試料調製には配
慮を必要とした：中性のリポソーム（荷電が無い）は物
理的に不安定である。したがって、試料を５０％メタノ
ールで１：１に希釈することにより、凝集及び沈澱が防
止できる。

【００３５】実施例２リポソームの製造（化合物１；室温より高い相転移温度）ＰＣおよびＤＭ
ＰＧの代わりにジステアロイル−ＰＣ（ＤＳＰＣ）及び
ジステアロイル−ＰＧ（ＤＳＰＧ）を使用する外は実施
例１に記載のようにして、室温より高い相転移温度（Ｔ
ｃ）を有するリポソームを製造する。さらなる変法にお
いて、ＤＳＰＣ及びＤＳＰＧを水素化ホスファチジルコ
リン（ＨＰＣ）に置き換える。水和、ホモジナイズ及び
濾過の工程はＴｃより高い温度で行なう。実施例１に記
載のようにして比較結果を得る。

【００３６】実施例３カンジダ症に対するリポソーム
の生物学的効果（化合物１；インビボ、全身性カンジダ症）全身性カン
ジダ症に対する深部真菌感染症のマウスのモデルにおい
て、化合物１リポソーム（ＰＯＰＣ／ＰＳ、７：３ｗ／
ｗ）を調べた：マウス（Ｂａｌｂ／Ｃ）を、尾静脈から
４ｘ１０⁵細胞濃度のカンジダ・アルビカンスＮＲＢ
（ＣａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓＮＲＢ）を用い
て静脈内経路により感染させる。感染後３及び４日目
に、０．５ｍｇ／ｋｇのリポソーム性化合物１で２回の
ｉ．ｖ．処置を施す。生存を２１日目まで観察する。臓
器のカンジダ計数を肝臓及び腎臓において行なう。驚く
べき事に、２０匹のうち１０匹の動物が２１日目まで生
存した。感染させ、処置をしなかった動物は８日目まで
に全て死亡した。このように、０．５ｍｇ／ｋｇという
低用量において、カンジダモデルの５０％の動物の生存
が、９日から少なくとも２１日まで延長される。感染後
５及び１０日目にリポソーム性化合物１で処理したマウ
スの肝臓及び腎臓において、臓器のカンジダの計数を行
なった。結果を第７表に示す：

【００３７】

【表８】第７表肝臓及び腎臓における臓器カンジダの計数日肝臓腎臓５１６０±７４３０２±６８１０６２±３２１２６±９３１０日目において著明な減少が認められる。これに代わ
る試験は、５ｘ１０⁵細胞の濃度のカンジダを使用する
外は上記の通りである。リポソームは１、３及び５日目
に投与する。

【００３８】実施例４リポソームの製造（化合物１；大規模）上記実施例１及び２に述べた物と
同じ組成のリポソームを、スーパーディスパックスホモ
ジナイズ、続いてマイクロフルイダイザー処理を用い
て、Ｍ．ブランドル等、ドラッグ・ディベロップメント
・アンド・インダストリアル・ファーマシー（Ｄｒｕｇ
Ｄｅｖ．ａｎｄＩｎｄ．Ｐｈａｒｍ．第１６巻［１
９９０］２１６７）の一段階製造法によって製造する。
この方法に従って、４．５％乳糖を含有する２０ｍＭ燐
酸塩緩衝液（ｐＨ６．５）１ｌを、スーパーディスパッ
クスホモジナイザー中でホモジナイズする。ＰＣ３５
ｇ、ＤＭＰＧ１５ｇ及び化合物１５ｇを、最大分散速
度（１５．０００ＲＰＭ）で溶液に分散して、０．５時
間後に平均粒子サイズ２００ｎｍを得る。次にこのリポ
ソームをマイクロフルイダイザーに移し、さらにホモジ
ナイズする。この操作は、リポソームの粒子サイズを９
０±１０ｎｍに縮小する。上の実施例において、ＰＣ及
びＤＭＰＧの代わりにＨＰＣ及びＤＳＰＧを使用し、工
程中の温度を７０℃まで上げると、平均粒子サイズ１３
５ｎｍを持つリポソームが得られる。

【００３９】実施例５リポソームゲルの製造（化合物１）化合物１（遊離塩基型）２ｇを、大豆ホス
ファチジルコリン（ＰＣ）２０ｇ、コレステロール４ｇ
及びα−トコフェロール０．２ｇと共に、プロピレング
リコール１０ｇに５０゜で可溶化する（有機溶液Ａ）。
有機溶液Ａを２５゜に冷却する。２０ｍＭの等張燐酸塩
緩衝液（ｐＨ６．５）６２ｇの溶液をスーパーディスパ
ックスホモジナイザー中で攪拌し、ｐ−ヒドロキシ安息
香酸メチル０．２ｇ、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル
０．０２ｇ及びＮａ−ＥＤＴＡ０．１５ｇをここに可溶
化する（水溶液Ｂ）。水溶液Ｂを３０００ｒｐｍの速さ
で混合する。次いで有機溶液Ａをこの攪拌水溶液中に、
１．０ｍｌ／分の速さで導入する。粒子サイズ１０００
ｎｍ以下のリポソームが形成される。速度を落としてヒ
ドロキシプロピルメチルセルロース０．５ｇをこのリポ
ソーム性懸濁液に添加してゲルを形成させる。このゲル
は管に詰めることができる。

【００４０】実施例６噴霧器による肺への適用（化合物１）この実験は、タイプ１１ツイン・インピン
ジャーとしてホールワース等、ジャーナル・オブ・ファ
ーマシー・アンド・ファーマコロジー（Ｊ．Ｐｈａｒ
ｍ．Ｐｈａｒｍａ）第３９巻９６６−９７２頁（１９８
７）に、そして「グラス・インピンジャー」という語で
ブリティッシュ・ファーマコペア（ＢｒｉｔｉｓｈＰ
ｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）１９８８、第１１巻追補Ｘ
ＶＩＩＣ（Ａ２０４−Ａ２０７）に記載されている、
ツイン・インピンジャー装置を使用して実施する。共に
平均粒子サイズが１００ｎｍおよび２００ｎｍの間であ
る、塩基型化合物１を燐脂質組成物ＰＣ（１０．５ｍｇ
／ｍｌ）及びＤＭＰＧ（４．５ｍｇ／ｍｌ）と共に含有
するリポソーム懸濁液、並びに、塩基型化合物１を燐脂
質組成物Ｈ（水素化）（ＨＰＣ）（１０．５ｍｇ／ｍｌ
ＰＢＳＬ）及びＤＳＰＧ（４．５ｍｇ／ｍｌＰＢＳＬ）
と共に含有するリポソーム懸濁液を、霧状にし、６０ｌ
／分で空気を流しつつ３０分間ツイン・インピンジャー
内へ導く。ツイン・インピンジャーの各部分から回収さ
れた量を、分光測光法を用いて測定する。結果は、異な
った燐脂質の組成（及び異なった転移温度）を有するリ
ポソーム懸濁液の分布に有意な差異は無いことを示して
いる。両方の場合において、５０％以上が下部インピン
ジャー室から回収され、これは肺胞への高い運搬性に相
当する（図３参照）。

【００４１】粒子サイズに及ぼす噴霧の影響：異なった
燐脂質の組成及び異なった転移温度を有するリポソーム
の粒子サイズに及ぼす噴霧の影響を調査するために、懸
濁液を「パリ・インハレーション・スタンダード・ゲレ
ート」を用いて噴霧する。上記のリポソーム組成を用い
るが、平均粒子サイズは５００ｎｍ以上である。様々な
時刻に試料を噴霧器の容器から取り、レーザー光の散乱
を用いて測定する。リポソームの大きさは、両方の場合
において１０分以内に迅速に縮小し、１２分後には約１
５０ｎｍないし２００ｎｍの大きさに達すると思われる
（図４）。続いて、噴霧器から出るリポソームの平均の
大きさを、レーザー光の散乱を用いて測定する。噴霧器
から出る全リポソームはおよそ９０ｎｍ及び１４０ｎｍ
の間の平均サイズを有すると思われる。エアロゾル化さ
れる両組成物のリポソームは小型であるという事、そし
てその粒子サイズは噴霧器の容器中に導入されるリポソ
ームの粒子サイズに直接の関与をしないという事を結論
付けることができる。驚くべき事に、噴霧は、ゲル状態
のリポソームのゲルから液体状態への相転移温度よりは
るかに低い室温において起こるにもかかわらず、ゲル状
態のＭＬＶ（ＨＰＣ／ＤＳＰＣ）の大きさは、液体状態
のＭＬＶ（ＰＣ／ＤＭＰＣ）の大きさと同じ位迅速に縮
小する。

【００４２】実施例７アスペルギルス症に対するリポ
ソームの生物学的効果前記実施例４から得られた２種のリポソームの生物学的
効力を、コーチゾンで免疫抑制を誘発した、アスペルギ
ルス症に対する肺の真菌感染症のモデルマウスにおいて
調べる：２０ｇの雌のＩＣＲマウスを、チャレンジの１
日前から３日間酢酸コーチゾン２．５ｍｇで皮下的処理
を行なって、免疫抑制を創出する。マウスを、軽微なペ
ントバルビタールの麻酔下で、トゥイーン８０を含む食
塩水６０μｌ中に懸濁したアスペルギルス・フミガトゥ
ス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｕｍｉｇａｔｕｓ）−
ＡＴＣＣ１３０７３の胞子１．２５ｘ１０⁶で経鼻的に
チャレンジする。リポソームによる処置は、チャレンジ
の５日前に始め、１日おきに１１回の処置を続ける。１
日に３０分間、噴霧したリポソームに鼻のみを暴露する
ことにより、化学療法を行なう。各実験群は、非チャレ
ンジ／非処置、チャレンジ／非処置及びチャレンジ／プ
ラシーボ処置対照を含む１５匹の動物から成る。この試
験の評価を、被験動物の生存率および体重を調べること
により、チャレンジの２０日後に行なう。適用された式
Ｉの化合物のリポソームの日用量、例えば０．０１ない
し１ｍｇ／ｋｇは、処置されたマウスの生存を延長し、
またはアスペルギルス症の病態の改善が観察できる。こ
の試験方法は、Ｓ．アレン等により、第９回化学療法の
将来の傾向に関する国際シンポジウム（ジュネーブ、ス
イス（１９９０））における「エアロゾル・アムホテリ
シンＢケモセラピー・イン・アン・イミューン・コンプ
ロマイズド・ミュアライン・モデル（Ａｅｒｏｓｏｌ
ＡｍｐｈｏｔｅｒｉｃｉｎｅＢＣｈｅｍｏｔｈｅｒ
ａｐｙｉｎａｎＩｍｍｕｎｅＣｏｍｐｒｏｍｉ
ｓｅｄＭｕｒｉｎｅＭｏｄｅｌ）」に記載されてい
る、肺アスペルギルス症のモデルマウスに基づいてい
る。

【００４３】本発明に係るリポソームを含有するリポソ
ーム調製物は、薬理活性を示し、故に医薬として有用で
ある。特に、これらは全身性真菌感染症の処置を適応と
する。この活性は、例えばカンジダに全身性感染したマ
ウスにおいて、本発明に係るリポソームを、例えば実施
例３に記載の式Ｉのリポソーム性化合物約０．１ｍｇ／
ｋｇないし約２ｍｇ／ｋｇの用量で投与した時に、現わ
れる。上記の適応において、適当な用量は、無論、例え
ば使用する化合物の型、宿主、投与方法並びに処置され
る状態の性格及び重篤度によって変わるであろう。しか
しながら一般に、日用量で約１μｇ／ｋｇないし約１０
ｍｇ／ｋｇ、特に０．０５ｍｇ／ｋｇないし１ｍｇ／ｋ
ｇ、または例えば０．１ないし１ｍｇ／ｋｇ（動物の体
重）のリポソーム型の式Ｉの化合物によって、満足すべ
き結果が動物において得られることが指摘される。人間
において指示される日用量は、簡便には例えば日に４回
までの分割用量として投与される、約０．１ｍｇないし
約５００ｍｇの範囲のリポソーム型の式ＩのＩの化合物
である。好ましくは、日用量は、１日につき約５ｍｇな
いし約５０ｍｇの式Ｉの化合物である。

【００４４】特に、このリポソーム調製物はさらに、肺
の真菌感染症の処置を適応とする。この活性は、例えば
アスペルギルスに肺感染したマウスにおいて、例えば実
施例７に記載のように、霧状にしたリポソーム調製物を
１日に３０分間吸入することによって、本発明に係るリ
ポソームを投与する時に、現われる。上記の適応のため
の、好適な用量は無論、例えば宿主並びに処置される状
態の性格及び重篤度によって変わるであろう。しかしな
がら一般に、約０．１ｍｇ／ｋｇないし約１０ｍｇ／ｋ
ｇ（動物の体重）の吸入用量での、霧状にしたリポソー
ム型の式Ｉの化合物による毎日の処置によって、満足す
べき結果が動物において得られることが指摘される。人
間において指示される日用量は約１０ｍｇないし約１０
００ｍｇ／日の範囲にあり、簡便には例えば日に４回ま
での分割用量として投与される、。好ましい日用量は約
２０ｍｇないし約４００ｍｇ、例えば約１００ｍｇない
し約２００ｍｇ／日である。特に、このリポソーム調製
物はさらに、皮膚の真菌感染症の局所的処置を適応とす
る。最も好適な適用型は、例えば他の局所用組成物に対
して知られるのと同じ適応、例えば真菌感染のための、
例えば標準臨床試験によって確認されるのと同じ用量
の、式Ｉの化合物のリポソーム調製物を含有するゲル、
クリーム及びローション、例えば実施例５に従って製造
されたリポソーム性ゲルである。典型的な有効用量は、
処置される皮膚組織における活性物質の濃度が１０及び
１００００ｎｇ／ｃｍ²の間である時に達成される。好
ましい皮膚組織濃度は、例えば標準薬理試験によって指
示される５００及び２０００ｎｇ／ｃｍ²、例えば１０
００ｎｇ／ｃｍ²である。しかしながらこれより高いま
たは低い用量が有効であることもあり、これらが標準試
験によって定められることもある。例えば、処置される
皮膚における有効濃度は、例えば本発明に係る２％リポ
ソーム性ゲルの型の例えば式Ｉの化合物を、例えば約１
００ｃｍ²の皮膚面積に対し、活性物質５ｍｇ／日で感
染領域上に適用する場合に達成される。

【００４５】投与は、経口、局所または非経口的とする
ことができる。好ましくは局所または非経口的、特に非
経口的、とりわけ肺になされるのが良い。非経口投与は
好ましくは無菌等張水溶液のような薬学上許容し得る溶
液中の懸濁液の形である。このような溶液は、完全に調
製済みの物を取得するか、または予め作成されてある構
成因子から調製することができる。経口投与は、好まし
くはカプセル化されたリポソームを包含し、これによっ
てリポソームは、リポソームから放出される前の胃及び
腸での消化からほぼ保護される。局所投与は、ローショ
ン、ゲル、クリームまたは軟膏のようなリポソーム調製
物によって行なう。局所投与は、例えば適当な噴霧器ま
たはスプレー装置を用いる、特に肺への吸入経路によっ
ても達成することができる。リポソーム性懸濁液の噴霧
は、圧縮空気または超音波によって作動する標準的噴霧
器をもって実施できるが、例えば適当な装置による加圧
したエアロゾルの用量または乾燥粉末剤のようなその他
の噴霧方法を使用することもできる。さらに、本リポソ
ーム懸濁液は、凍結乾燥またはスプレードライによって
乾燥することができ、そして得られた粉末を、フルオロ
クロロ炭化水素のような適当な推進剤中に懸濁、または
粉末吸入装置で吸入することができる。式Ｉの化合物を
リポソーム中に充填するならば、呼吸器系に限定された
作用が得られ、全身性の不都合な反応が回避できる。係
る調製物は常法によって製造することができる。単位用
量型は、例えば約０．０２５ｍｇないし約２５０ｍｇの
式Ｉの化合物をリポソーム型で含有する。さらに本発明
は、係る処置を必要とする対象に、前記定義の式Ｉの化
合物を活性物質として含有するリポソームの薬学的有効
量を投与することからなる、全身性真菌感染症の処置の
ための方法を提供するものである。

【図面の簡単な説明】

【図１】式Ｉの遊離化合物０．４ｍｇ及び本発明のリ
ポソーム１．０ｍｇの混合物の溶出プロフイルを示すグ
ラフである。

【図２】式Ｉの化合物及びＰＯＰＣの多重−二層膜内
での位置を示すコンピューターモデルの図である。

【図３】リポソーム懸濁液の噴霧後の様々なツイン・
インピンジャーのコンパートメントにおける式Ｉの化合
物の析出を示すグラフである。

【図４】噴霧器内部のリポソームの粒子サイズを示す
グラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者トーマス・キツセルドイツ連邦共和国デー−7813シユタウフエン、グリユネルン、イム・シユタイナー９番 (72)発明者フリードリツヒ・リヒタースイス、ツエーハー−3322シエーンビユール、マツテンヴエーク４番 (72)発明者ハリー・テイーメセンスイス、ツエーハー−4102ビンニンゲン、ホレーホルツヴエーク63番

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式Ｉ：【化１】の化合物を含むリポソーム。
【請求項２】請求項１に記載のリポソームを含有する
リポソーム製剤。
【請求項３】請求項１に定義の式Ｉの化合物を燐脂質
と組み合わせて含む組成物。
【請求項４】燐脂質を約１ｍｇ／ｍｌないし約２００
ｍｇ／ｍｌの濃度で含有する、請求項１、２または３に
記載の組成物。
【請求項５】式Ｉの化合物を約０．１ｍｇ／ｍｌない
し約１０ｍｇ／ｍｌの濃度で含有する、前記請求項のい
ずれかに記載の組成物。
【請求項６】ＰＯＰＣ、またはＰＯＰＣ及びＰＯＰＧ
もしくはＤＯＰＧもしくはＤＯＰＳの混合物である燐脂
質成分を含有する、請求項１ないし５のいずれか１項に
記載の組成物。
【請求項７】ＤＭＰＣ、またはＤＭＰＣ及びＤＭＰＧ
の混合物である燐脂質成分を含有する、請求項１ないし
５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】＋４２℃以上の融点を有する水素化燐脂
質である燐脂質成分を有する、請求項１ないし５のいず
れか１項に記載のリポソーム調製物。
【請求項９】中性及び陰性に荷電した燐脂質の重量／
重量比が約７：３である、前記請求項のいずれかに記載
の組成物。
【請求項１０】活性物質対中性燐脂質対陰性荷電燐脂
質の重量／重量比が約１／１０．５／４．５である、前
記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】請求項１に定義の式Ｉの化合物を遊離
塩基型または酸付加塩型で含むリポソーム製剤。
【請求項１２】凍結乾燥された形の前記請求項のいず
れかに記載の組成物。
【請求項１３】請求項１に定義の型の式Ｉの化合物
を、適当なリポソーム形成材料と混合することからな
る、請求項１に記載の組成物を製造する方法。
【請求項１４】活性物質としての請求項１に定義の式
Ｉの化合物の遊離塩基型または薬学上許容し得る酸付加
塩型を、少なくとも一つの薬学上許容し得る担体または
希釈剤と組み合わせて有するリポソーム調製物を含む、
医薬組成物。
【請求項１５】ＰＥ−ＰＥＧを含有する、前記請求項
のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】請求項１ないし１５のいずれか１項に
記載の組成物の薬学的有効量を、処置を必要とする対象
に投与することからなる、全身性真菌感染症の処置方
法。
【請求項１７】請求項１ないし１５のいずれか１項に
記載の組成物の薬学的有効量を、処置を必要とする対象
に投与することからなる、肺真菌感染症の処置方法。