JPH0518969A - 免疫分析方法における検量線の設定方法 - Google Patents
免疫分析方法における検量線の設定方法Info
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- JPH0518969A JPH0518969A JP17514291A JP17514291A JPH0518969A JP H0518969 A JPH0518969 A JP H0518969A JP 17514291 A JP17514291 A JP 17514291A JP 17514291 A JP17514291 A JP 17514291A JP H0518969 A JPH0518969 A JP H0518969A
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【構成】免疫反応を利用して検知可能な信号を得て生物
体液中の特定物質の定量を行う免疫分析方法において、
検量線の座標軸の設定を一方を前記検知可能な信号値の
逆数で、そしてもう一方を特定物質の濃度値の真数で行
うことを特徴とする免疫分析方法における検量線の設定
方法。 【効果】均一系酵素免疫分析方法を適応した乾式分析要
素の検量線を、測定結果の正確度を十分保ちながら、少
ないキャリブレータ液の濃度レベル数で簡単な回帰式と
して得ることができる。
体液中の特定物質の定量を行う免疫分析方法において、
検量線の座標軸の設定を一方を前記検知可能な信号値の
逆数で、そしてもう一方を特定物質の濃度値の真数で行
うことを特徴とする免疫分析方法における検量線の設定
方法。 【効果】均一系酵素免疫分析方法を適応した乾式分析要
素の検量線を、測定結果の正確度を十分保ちながら、少
ないキャリブレータ液の濃度レベル数で簡単な回帰式と
して得ることができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、免疫反応を利用して生
物体液中たとえば血液中とか尿中の特定物質の定量を行
う免疫分析方法における検量線の設定方法に関する。
物体液中たとえば血液中とか尿中の特定物質の定量を行
う免疫分析方法における検量線の設定方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】生物体液たとえば血液や尿などに含まれ
る生体成分、薬物等の分析は、病態の診断や治療経過の
判定に非常に有用であり、臨床検査の分野で重要な役割
を果たしている。このような生物体液中の微量成分の分
析方法として、酵素免疫分析方法（ＥＩＡ）がある。酵
素免疫分析方法には、Ｂ／Ｆ分離が必要な非均一系とＢ
／Ｆ分離が不必要な均一系がある。均一反応系は抗体と
抗原が結合すると、標識酵素の酵素活性が何らかの干渉
を受けることに基づくもので、一般には抗原と抗体の結
合による阻害作用を利用する。
る生体成分、薬物等の分析は、病態の診断や治療経過の
判定に非常に有用であり、臨床検査の分野で重要な役割
を果たしている。このような生物体液中の微量成分の分
析方法として、酵素免疫分析方法（ＥＩＡ）がある。酵
素免疫分析方法には、Ｂ／Ｆ分離が必要な非均一系とＢ
／Ｆ分離が不必要な均一系がある。均一反応系は抗体と
抗原が結合すると、標識酵素の酵素活性が何らかの干渉
を受けることに基づくもので、一般には抗原と抗体の結
合による阻害作用を利用する。
【０００３】均一系酵素免疫分析方法の検量線は従来の
臨床化学検査のそれとは大きく異なり、一般に直線とな
らずほとんどの場合Ｓ字（シグモイダル）になる。この
ような検量線については、放射線免疫分析方法（ＲＩ
Ａ）についてこれまで十分な検討がなされている。酵素
免疫分析方法の場合も本質的に放射線免疫分析方法の検
量線の設定方法を適用することができ、その回帰方法
は、logistic曲線、logit−log変換式などとして知られ
ており、石川榮治ほか編、「酵素免疫測定法」、第２版
（医学書院、1982年発行(153〜164頁))などに紹介され
ている。
臨床化学検査のそれとは大きく異なり、一般に直線とな
らずほとんどの場合Ｓ字（シグモイダル）になる。この
ような検量線については、放射線免疫分析方法（ＲＩ
Ａ）についてこれまで十分な検討がなされている。酵素
免疫分析方法の場合も本質的に放射線免疫分析方法の検
量線の設定方法を適用することができ、その回帰方法
は、logistic曲線、logit−log変換式などとして知られ
ており、石川榮治ほか編、「酵素免疫測定法」、第２版
（医学書院、1982年発行(153〜164頁))などに紹介され
ている。
【０００４】一方、多数の検体試料を取扱いルーティン
化している臨床検査では、簡便、迅速に分析できること
が望まれている。このような観点から、均一系酵素免疫
反応を適用した乾式分析要素が提案されている（特開平
１−321360）。これは、多層乾式分析要素（たとえば、
特開昭49−53888、同59−77356、同59−102388、米国特
許4,459,358)の同一層或いは別々の層に水不溶性の高分
子基質と、その基質に対する酵素と特定物質に対する抗
体との結合物を含有させたものである。
化している臨床検査では、簡便、迅速に分析できること
が望まれている。このような観点から、均一系酵素免疫
反応を適用した乾式分析要素が提案されている（特開平
１−321360）。これは、多層乾式分析要素（たとえば、
特開昭49−53888、同59−77356、同59−102388、米国特
許4,459,358)の同一層或いは別々の層に水不溶性の高分
子基質と、その基質に対する酵素と特定物質に対する抗
体との結合物を含有させたものである。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】均一酵素免疫分析方法
を適応した乾式分析要素で得られる反射光学濃度と測定
物質濃度の関係をこれまで用いられているlogistic曲
線、logit−log変換式や直角双曲線法を用いて回帰する
ことは可能である。しかしながら、このような回帰式を
用いる場合は設定すべき回帰係数が多いために、設定に
必要なキャリブレータ液の濃度レベル数が多くなってし
まう。また、回帰が複雑なために計算に多くの時間を必
要としてしまう。このようなことは、乾式分析要素の簡
便性、迅速性といった特徴を半減させてしまう欠点とな
っている。
を適応した乾式分析要素で得られる反射光学濃度と測定
物質濃度の関係をこれまで用いられているlogistic曲
線、logit−log変換式や直角双曲線法を用いて回帰する
ことは可能である。しかしながら、このような回帰式を
用いる場合は設定すべき回帰係数が多いために、設定に
必要なキャリブレータ液の濃度レベル数が多くなってし
まう。また、回帰が複雑なために計算に多くの時間を必
要としてしまう。このようなことは、乾式分析要素の簡
便性、迅速性といった特徴を半減させてしまう欠点とな
っている。
【０００６】均一酵素免疫分析方法を適応した乾式分析
要素における検量線の設定では、必要なキャリブレータ
液の濃度レベル数はできるだけ少なく、そして検量線の
回帰式はできるだけ単純なものであるのがよい。それに
よって検量線を設定するための操作の簡便化と迅速化を
達成することができる。そのためには、検量線が直線で
あるのが理想的であるが、均一系酵素免疫分析方法の検
量線は一般に直線とならず、ほとんどの場合Ｓ字（シグ
モイダル）になってしまう。しかしながら、測定物質に
よっては、測定したい濃度範囲がＳ字（シグモイダル）
の全領域に渡らず、Ｓ字の一部分で納まってしまう場合
がある。また、検量線の形は座標軸の設定の仕方によっ
ても大きく変わり、意外にも座標軸の設定の仕方によっ
て測定濃度範囲の検量線を直線で表現できることがわか
った。測定濃度範囲で検量線を直線に表現できること
は、検量線を直線回帰するときはもとより、整次多項式
で回帰するときも、より正確に回帰できるというメリッ
トがある。また、これまで知られている各点間直線補間
法で回帰する場合も、この方法の欠点である各直線間の
不連続性を軽減できるというメリットもある。
要素における検量線の設定では、必要なキャリブレータ
液の濃度レベル数はできるだけ少なく、そして検量線の
回帰式はできるだけ単純なものであるのがよい。それに
よって検量線を設定するための操作の簡便化と迅速化を
達成することができる。そのためには、検量線が直線で
あるのが理想的であるが、均一系酵素免疫分析方法の検
量線は一般に直線とならず、ほとんどの場合Ｓ字（シグ
モイダル）になってしまう。しかしながら、測定物質に
よっては、測定したい濃度範囲がＳ字（シグモイダル）
の全領域に渡らず、Ｓ字の一部分で納まってしまう場合
がある。また、検量線の形は座標軸の設定の仕方によっ
ても大きく変わり、意外にも座標軸の設定の仕方によっ
て測定濃度範囲の検量線を直線で表現できることがわか
った。測定濃度範囲で検量線を直線に表現できること
は、検量線を直線回帰するときはもとより、整次多項式
で回帰するときも、より正確に回帰できるというメリッ
トがある。また、これまで知られている各点間直線補間
法で回帰する場合も、この方法の欠点である各直線間の
不連続性を軽減できるというメリットもある。
【０００７】本発明は、均一系酵素免疫反応を適用した
乾式分析要素を用いた免疫分析方法において、簡便でし
かも正確度の高い測定結果を与える検量線の設定方法
（新たに検量線を作成する方法）を提供することを目的
とする。
乾式分析要素を用いた免疫分析方法において、簡便でし
かも正確度の高い測定結果を与える検量線の設定方法
（新たに検量線を作成する方法）を提供することを目的
とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】このような目的は、免疫
反応を利用して検知可能な信号を得て生物体液中の特定
物質の定量を行う免疫分析方法において、検量線の座標
軸の設定を一方を前記検知可能な信号値の逆数で、そし
てもう一方を特定物質の濃度値の真数で行うことを特徴
とする免疫分析方法における検量線の設定方法によって
達成することができた。
反応を利用して検知可能な信号を得て生物体液中の特定
物質の定量を行う免疫分析方法において、検量線の座標
軸の設定を一方を前記検知可能な信号値の逆数で、そし
てもう一方を特定物質の濃度値の真数で行うことを特徴
とする免疫分析方法における検量線の設定方法によって
達成することができた。
【０００９】免疫分析方法は、抗原抗体反応を利用して
抗原または抗体を分析する方法であり、検出手段により
酵素免疫分析方法、ラジオイムノアッセイ、蛍光イムノ
アッセイ、レーザイムノアッセイ等がある。また、反応
形態により競合法と非競合法に分けられ、さらにＢ／Ｆ
分離が必要な非均一系とＢ／Ｆ分離が不要な均一系に分
けられる。本発明の方法は、免疫分析法の種類を問わず
適用できるが、酵素免疫分析方法に好ましく適用でき、
特に均一系酵素免疫分析方法を適用した乾式分析要素を
用いた分析法に有用である。
抗原または抗体を分析する方法であり、検出手段により
酵素免疫分析方法、ラジオイムノアッセイ、蛍光イムノ
アッセイ、レーザイムノアッセイ等がある。また、反応
形態により競合法と非競合法に分けられ、さらにＢ／Ｆ
分離が必要な非均一系とＢ／Ｆ分離が不要な均一系に分
けられる。本発明の方法は、免疫分析法の種類を問わず
適用できるが、酵素免疫分析方法に好ましく適用でき、
特に均一系酵素免疫分析方法を適用した乾式分析要素を
用いた分析法に有用である。
【００１０】他の免疫分析方法においても一般にそうで
あるが、均一系酵素免疫分析方法を適用した乾式分析要
素を用いて生物体液たとえば血液中、尿中の特定物質の
定量をおこなうには、予め測定により得られる検知可能
な信号と測定物質の濃度との関係を検量線として得てお
く必要がある。この操作は、例えば以下のように行われ
る。いくつかの濃度レベルの測定物質の濃度既知溶液
（キャリブレータ液）をそれぞれ乾式分析要素上に一定
量点着する。点着された液は乾式分析要素中で免疫反
応、発色反応をし、液中の測定物質の濃度に応じた発色
濃度を与える。実際には、点着後乾式分析要素を一定時
間、一定温度に保って（インクベーション）発色反応を
進行させた後、照射光を乾式分析要素に照射し、特定波
長域で反射光量を測定してキャリブレータ液の測定物質
濃度に応じた反射光学濃度を求める。得られた反射光学
濃度と測定物質濃度の関係を回帰式として求め、測定物
質定量のための検量線とする。
あるが、均一系酵素免疫分析方法を適用した乾式分析要
素を用いて生物体液たとえば血液中、尿中の特定物質の
定量をおこなうには、予め測定により得られる検知可能
な信号と測定物質の濃度との関係を検量線として得てお
く必要がある。この操作は、例えば以下のように行われ
る。いくつかの濃度レベルの測定物質の濃度既知溶液
（キャリブレータ液）をそれぞれ乾式分析要素上に一定
量点着する。点着された液は乾式分析要素中で免疫反
応、発色反応をし、液中の測定物質の濃度に応じた発色
濃度を与える。実際には、点着後乾式分析要素を一定時
間、一定温度に保って（インクベーション）発色反応を
進行させた後、照射光を乾式分析要素に照射し、特定波
長域で反射光量を測定してキャリブレータ液の測定物質
濃度に応じた反射光学濃度を求める。得られた反射光学
濃度と測定物質濃度の関係を回帰式として求め、測定物
質定量のための検量線とする。
【００１１】従来、この検量線の座標軸に検知された信
号値の真数とアナライトの濃度値の対数が用いられてい
たが、本発明の方法においては検知された信号値の逆数
と定量しようとする特定物質の濃度値の真数を座標軸と
して用いるところに特徴がある。検知される信号値は各
分析系と測定機器の種類等に応じて定まるものであり、
例えば、酵素免疫分析方法で発色系を利用した場合には
光学濃度、反射光学濃度等（一般にはバックグラウンド
の影響を排除するため濃度差）である。ラジオイムノア
ッセイでは放射線強度、蛍光イムノアッセイでは蛍光強
度等がそれに該当する。
号値の真数とアナライトの濃度値の対数が用いられてい
たが、本発明の方法においては検知された信号値の逆数
と定量しようとする特定物質の濃度値の真数を座標軸と
して用いるところに特徴がある。検知される信号値は各
分析系と測定機器の種類等に応じて定まるものであり、
例えば、酵素免疫分析方法で発色系を利用した場合には
光学濃度、反射光学濃度等（一般にはバックグラウンド
の影響を排除するため濃度差）である。ラジオイムノア
ッセイでは放射線強度、蛍光イムノアッセイでは蛍光強
度等がそれに該当する。
【００１２】本発明の検量線の設定方法をモデル図（図
１）にもとづいて説明する。縦軸に特定物質（分析対象
物質、すなわちアナライト（analyte)）濃度値の対数、
横軸に検知される信号値（又は信号値からバックグラウ
ンド値を差引いた値）の真数をとったとき免疫分析法、
ことにＥＩＡでは一般に図１のモデル図、図１Ｂ又は図
１Ｃの実線のように検量線はシグモイダル曲線で表され
る。
１）にもとづいて説明する。縦軸に特定物質（分析対象
物質、すなわちアナライト（analyte)）濃度値の対数、
横軸に検知される信号値（又は信号値からバックグラウ
ンド値を差引いた値）の真数をとったとき免疫分析法、
ことにＥＩＡでは一般に図１のモデル図、図１Ｂ又は図
１Ｃの実線のように検量線はシグモイダル曲線で表され
る。
【００１３】シグモイダル検量線の場合には、次のよう
になる。例えば図１の縦軸のアナライトの定量範囲のほ
ぼ上限値（Ｈ）と下限値（Ｉ）に対応する２点を検量線
の上にとり（○印の２点）、この２点を通る直線（図１
Ｂ、図１Ｃの２点鎖線）を引く。アナライトの定量範囲
内では、この直線はシグモイド検量線と２点又は３点で
一致するだけであって、大部分の定量範囲ではこの直線
はシグモイド検量線から大きくはなれている。従って、
この直線を検量線として用いることができないことは明
らかである。
になる。例えば図１の縦軸のアナライトの定量範囲のほ
ぼ上限値（Ｈ）と下限値（Ｉ）に対応する２点を検量線
の上にとり（○印の２点）、この２点を通る直線（図１
Ｂ、図１Ｃの２点鎖線）を引く。アナライトの定量範囲
内では、この直線はシグモイド検量線と２点又は３点で
一致するだけであって、大部分の定量範囲ではこの直線
はシグモイド検量線から大きくはなれている。従って、
この直線を検量線として用いることができないことは明
らかである。
【００１４】本発明の検量線の設定方法においては、例
えば縦軸にアナライト濃度の対数、横軸に検知される信
号値の逆数をとる。このように２軸をとると図１Ａのよ
うに、検量線は直線に近い、ゆるい曲率の曲線状検量線
（実線）になる。アナライトの定量範囲のほぼ上限値
（Ｈ）と下限値（Ｉ）に対応する２点を検量線の上にと
り（○印の２点）、この２点を通る直線（図１Ａの２点
鎖線）を引く。アナライトの定量範囲内で、この直線は
ゆるい曲率の曲線状検量線の近傍に位置する。従って、
この直線を検量線として用いた場合に、得られるアナラ
イトの濃度値は真の値と推定される値からの誤差は小さ
いことは明らかである。
えば縦軸にアナライト濃度の対数、横軸に検知される信
号値の逆数をとる。このように２軸をとると図１Ａのよ
うに、検量線は直線に近い、ゆるい曲率の曲線状検量線
（実線）になる。アナライトの定量範囲のほぼ上限値
（Ｈ）と下限値（Ｉ）に対応する２点を検量線の上にと
り（○印の２点）、この２点を通る直線（図１Ａの２点
鎖線）を引く。アナライトの定量範囲内で、この直線は
ゆるい曲率の曲線状検量線の近傍に位置する。従って、
この直線を検量線として用いた場合に、得られるアナラ
イトの濃度値は真の値と推定される値からの誤差は小さ
いことは明らかである。
【００１５】このように、アナライトの測定濃度範囲で
検量線を直線で表現できることにより、検量線を直線回
帰する場合にも整次多項式で回帰する場合にも、より正
確に回帰できるメリットがある。また、これまで知られ
ている各点間直線補間法で回帰する場合も、この方法の
欠点である各直線間の不連続性を軽減又は排除できるメ
リットもある。さらに、免疫分析試薬のロットのちがい
による差違又は乾式分析要素のロットのちがいによる差
違（ロット間差又はバッチ間差）を補正するための検量
線の補正作業が、より少ないキャリブレータ液濃度レベ
ル数で実施できる（濃度レベル数が１、２で実施でき
る）というメリットがある。さらに、またロット間差を
補正するための検量線の補正そのものをきわめて簡単な
数式処理又は数値処理で実施できるというメリットもあ
る。
検量線を直線で表現できることにより、検量線を直線回
帰する場合にも整次多項式で回帰する場合にも、より正
確に回帰できるメリットがある。また、これまで知られ
ている各点間直線補間法で回帰する場合も、この方法の
欠点である各直線間の不連続性を軽減又は排除できるメ
リットもある。さらに、免疫分析試薬のロットのちがい
による差違又は乾式分析要素のロットのちがいによる差
違（ロット間差又はバッチ間差）を補正するための検量
線の補正作業が、より少ないキャリブレータ液濃度レベ
ル数で実施できる（濃度レベル数が１、２で実施でき
る）というメリットがある。さらに、またロット間差を
補正するための検量線の補正そのものをきわめて簡単な
数式処理又は数値処理で実施できるというメリットもあ
る。
【００１６】この検量線を用いて各試料について得られ
た信号値から特定物質の濃度を算出する方法は従来と同
様でよい。
た信号値から特定物質の濃度を算出する方法は従来と同
様でよい。
【００１７】本発明の好ましい態様は、次の態様を含
む。免疫分析方法が酵素免疫分析方法である請求項１の
検量線の設定方法。免疫分析方法が乾式分析要素を用い
た免疫分析方法である請求項１の検量線の設定方法。酵
素免疫分析方法が均一系酵素免疫分析方法である請求項
１の検量線の設定方法。
む。免疫分析方法が酵素免疫分析方法である請求項１の
検量線の設定方法。免疫分析方法が乾式分析要素を用い
た免疫分析方法である請求項１の検量線の設定方法。酵
素免疫分析方法が均一系酵素免疫分析方法である請求項
１の検量線の設定方法。
【００１８】
【実施例】ＣＲＰ分析用多層乾式スライドの作製 ゼラチン下塗層が設けられている厚さ180μｍの無色透
明ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）シート（支持
体）上に、下記の被覆量になるように架橋剤含有試薬溶
液を塗布し、乾燥して試薬層を設けた。 アルカリ処理ゼラチン 14.5g/m2 ノニルフェノキシポリエトキシエタノール 0.2g/m2 （オキシエチレン単位平均９〜10含有） グルコースオキシダーゼ 5000u/m2 ペルオキシダーゼ 15000u/m2 グルコアミラーザ 5000u/m2 2-（4-ヒドロキシ-3,5-ジメトキシフェニル）-4-〔-4-(ジメチルアミノ）フェ ニル〕-5-フェネチルイミダゾール(ロイコ色素）酢酸塩 0.38g/m2 ビス〔（ビニルスルホニルメチルカルボニル）アミノ〕メタン 0.1g/m2
明ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）シート（支持
体）上に、下記の被覆量になるように架橋剤含有試薬溶
液を塗布し、乾燥して試薬層を設けた。 アルカリ処理ゼラチン 14.5g/m2 ノニルフェノキシポリエトキシエタノール 0.2g/m2 （オキシエチレン単位平均９〜10含有） グルコースオキシダーゼ 5000u/m2 ペルオキシダーゼ 15000u/m2 グルコアミラーザ 5000u/m2 2-（4-ヒドロキシ-3,5-ジメトキシフェニル）-4-〔-4-(ジメチルアミノ）フェ ニル〕-5-フェネチルイミダゾール(ロイコ色素）酢酸塩 0.38g/m2 ビス〔（ビニルスルホニルメチルカルボニル）アミノ〕メタン 0.1g/m2
【００１９】この試薬層の上に、下記の被覆量になるよ
うに接着層を塗布し、乾燥して設けた。 アルカリ処理ゼラチン 14.5g/m2 ビス〔（ビニルスルホニルメチルカルボニル）アミノ〕メタン 0.1g/m2
うに接着層を塗布し、乾燥して設けた。 アルカリ処理ゼラチン 14.5g/m2 ビス〔（ビニルスルホニルメチルカルボニル）アミノ〕メタン 0.1g/m2
【００２０】ついで接着層の表面に下記の被覆量になる
ように下記試薬含有水溶液を塗布し、ゼラチン層を膨潤
させ、その上に50デニール相当のＰＥＴ紡績糸36ゲージ
編みした厚さ約250μｍのトリコット編物布地をほぼ一
様に軽く圧力をかけてラミネートして多孔性展開層を設
けた。 ノニルフェノキシポリエトキシエタノール 0.15g/m2 （オキシエチレン単位平均９〜10含有） ビス〔（ビニルスルホニルメチルカルボニル）アミノ〕メタン 0.4g/m2
ように下記試薬含有水溶液を塗布し、ゼラチン層を膨潤
させ、その上に50デニール相当のＰＥＴ紡績糸36ゲージ
編みした厚さ約250μｍのトリコット編物布地をほぼ一
様に軽く圧力をかけてラミネートして多孔性展開層を設
けた。 ノニルフェノキシポリエトキシエタノール 0.15g/m2 （オキシエチレン単位平均９〜10含有） ビス〔（ビニルスルホニルメチルカルボニル）アミノ〕メタン 0.4g/m2
【００２１】次に、下記の被覆量になるように基質を塗
布、乾燥して基質層を設けた。 カルボキシメチル化澱粉 4g/m2 ノニルフェノキシポリエトキシエタノール 0.2g/m2 （オキシエチレン単位平均９〜10含有）
布、乾燥して基質層を設けた。 カルボキシメチル化澱粉 4g/m2 ノニルフェノキシポリエトキシエタノール 0.2g/m2 （オキシエチレン単位平均９〜10含有）
【００２２】さらに、基質層兼展開層であるトリコット
編物布地層にアミラーゼ−抗ＣＲＰ・IgＧ結合物を3mg/
m2の被覆量となるようにしてエタノール溶液を塗布し、
含浸させ乾燥させてＣＲＰ分析用多層乾式分析要素を得
た。
編物布地層にアミラーゼ−抗ＣＲＰ・IgＧ結合物を3mg/
m2の被覆量となるようにしてエタノール溶液を塗布し、
含浸させ乾燥させてＣＲＰ分析用多層乾式分析要素を得
た。
【００２３】得られた分析要素を15mm四方のチップに裁
断し、特開昭57−63452に記載のスライドの枠に収め
て、ＣＲＰ分析用多層乾式分析スライドとした。
断し、特開昭57−63452に記載のスライドの枠に収め
て、ＣＲＰ分析用多層乾式分析スライドとした。
【００２４】検量線の作製 ＣＲＰ濃度が既知の２種のＣＲＰ標準血清のそれぞれ10
μｌを緩衝液(0.2ＭＭＥＳバッファー、pH6.0) 200μｌ
で希釈したＣＲＰ緩衝溶液を上記分析スライドのトリコ
ット編物布地層上にそれぞれ10μｌ点着し、各分析スラ
イドを密閉容器中で37℃に保って、中心波長650nmの可
視光でＰＥＴ支持体側から反射光学濃度を測定した。点
着から４分後および６分後の反射光学濃度の差（ΔＯＤ
r6-4）をＣＲＰ標準血清の既知濃度とともに表１に示
す。
μｌを緩衝液(0.2ＭＭＥＳバッファー、pH6.0) 200μｌ
で希釈したＣＲＰ緩衝溶液を上記分析スライドのトリコ
ット編物布地層上にそれぞれ10μｌ点着し、各分析スラ
イドを密閉容器中で37℃に保って、中心波長650nmの可
視光でＰＥＴ支持体側から反射光学濃度を測定した。点
着から４分後および６分後の反射光学濃度の差（ΔＯＤ
r6-4）をＣＲＰ標準血清の既知濃度とともに表１に示
す。
【００２５】
【表１】
【００２６】表１のＣＲＰ濃度（Ｃ）とΔＯＤr6-4につ
いて、表２に示す設定の座標軸でそれぞれをプロット
し、２つのプロットを通る直線をもとめることで検量線
を得た。
いて、表２に示す設定の座標軸でそれぞれをプロット
し、２つのプロットを通る直線をもとめることで検量線
を得た。
【００２７】
【表２】
【００２８】常用法と相関 ＣＲＰ測定の常用法である免疫比濁法によりＣＲＰ濃度
が測定されている50の検体（ＣＲＰ濃度は、０〜10.2mg
/dL)のそれぞれ10μｌを緩衝液(0.2Ｍ ＭＥＳバッファ
ー、pH6.0) 200μｌで希釈した溶液を上記分析スライド
のトリコット編物布地層上にそれぞれ10μｌ点着し、各
分析スライドを密閉容器中で37℃に保って、中心波長65
0nmの可視光でＰＥＴ支持体側から反射光学濃度を測定
し、点着から４分後および６分後の反射光学濃度の差
（ΔＯＤr6-4）を求めた。
が測定されている50の検体（ＣＲＰ濃度は、０〜10.2mg
/dL)のそれぞれ10μｌを緩衝液(0.2Ｍ ＭＥＳバッファ
ー、pH6.0) 200μｌで希釈した溶液を上記分析スライド
のトリコット編物布地層上にそれぞれ10μｌ点着し、各
分析スライドを密閉容器中で37℃に保って、中心波長65
0nmの可視光でＰＥＴ支持体側から反射光学濃度を測定
し、点着から４分後および６分後の反射光学濃度の差
（ΔＯＤr6-4）を求めた。
【００２９】それぞれの検体について得られたΔＯＤr
6-4を、上記の本発明の検量線と比較例１、２の検量線
を用いてＣＲＰ濃度に換算した。
6-4を、上記の本発明の検量線と比較例１、２の検量線
を用いてＣＲＰ濃度に換算した。
【００３０】常用法の免疫比濁法で測定されたＣＲＰ濃
度と表２のそれぞれの検量線を用いて得られたＣＲＰ濃
度の相関を求めた。相関係数(r)と傾き(a)を表３に示
す。
度と表２のそれぞれの検量線を用いて得られたＣＲＰ濃
度の相関を求めた。相関係数(r)と傾き(a)を表３に示
す。
【００３１】本発明の検量線で得られた相関図と比較例
１の検量線で得られた相関図をそれぞれ図２、図３に示
す。
１の検量線で得られた相関図をそれぞれ図２、図３に示
す。
【００３２】
【表３】
【００３３】表３、図２に示されているように、本発明
の座標軸にすることで、単純な直線の検量線でも正確な
ＣＲＰ測定が可能であることは明らかである。
の座標軸にすることで、単純な直線の検量線でも正確な
ＣＲＰ測定が可能であることは明らかである。
【００３４】
【発明の効果】本発明の検量線の座標軸の設定によっ
て、均一系酵素免疫分析方法を適応した乾式分析要素の
検量線を、測定結果の正確度を十分保ちながら、少ない
キャリブレータ液の濃度レベル数で簡単な回帰式として
得ることができる。
て、均一系酵素免疫分析方法を適応した乾式分析要素の
検量線を、測定結果の正確度を十分保ちながら、少ない
キャリブレータ液の濃度レベル数で簡単な回帰式として
得ることができる。
【図１】図１Ａは、本発明の検量線の設定方法を説明す
るためのモデル図である。 図１Ｂ、図１Ｃは免疫分析方法における従来の検量線を
説明するためのモデル図である。 実 線：系の持つ検量線 ２点鎖線：２つの濃度既知のアナライト溶液（アナライ
ト濃度Ｌ及びＨ）で設定した直線の検量線
るためのモデル図である。 図１Ｂ、図１Ｃは免疫分析方法における従来の検量線を
説明するためのモデル図である。 実 線：系の持つ検量線 ２点鎖線：２つの濃度既知のアナライト溶液（アナライ
ト濃度Ｌ及びＨ）で設定した直線の検量線
【図２】本発明の座標軸の検量線を用いた場合の免疫比
濁法との相関を示すグラフである。
濁法との相関を示すグラフである。
【図３】比較例１の座標軸の検量線を用いた場合の免疫
比濁法との相関を示すグラフである。
比濁法との相関を示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 【請求項１】 免疫反応を利用して検知可能な信号を得
て生物体液中の特定物質の定量を行う免疫分析方法にお
いて、検量線の座標軸の設定を一方を前記検知可能な信
号値の逆数で、そしてもう一方を特定物質の濃度値の真
数で行うことを特徴とする免疫分析方法における検量線
の設定方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3175142A JP2739615B2 (ja) | 1991-07-16 | 1991-07-16 | 乾式免疫分析要素を用いた定量方法における検量線の設定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3175142A JP2739615B2 (ja) | 1991-07-16 | 1991-07-16 | 乾式免疫分析要素を用いた定量方法における検量線の設定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0518969A true JPH0518969A (ja) | 1993-01-26 |
| JP2739615B2 JP2739615B2 (ja) | 1998-04-15 |
Family
ID=15991024
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3175142A Expired - Fee Related JP2739615B2 (ja) | 1991-07-16 | 1991-07-16 | 乾式免疫分析要素を用いた定量方法における検量線の設定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2739615B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010002398A (ja) * | 2008-06-23 | 2010-01-07 | Horiba Ltd | 分析装置 |
| JP2013096726A (ja) * | 2011-10-28 | 2013-05-20 | Kddi Corp | 着色濃度測定装置、着色濃度測定方法および着色濃度測定プログラム |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5379025A (en) * | 1976-10-01 | 1978-07-13 | Bonnierfoeretagen Ab | Quantitatively measuring of antigen |
| JPS60172596A (ja) * | 1984-02-17 | 1985-09-06 | 呉羽化学工業株式会社 | デ−タ解析用シ−ト |
| JPH0283448A (ja) * | 1988-09-20 | 1990-03-23 | Fuji Photo Film Co Ltd | 免疫測定方法 |
-
1991
- 1991-07-16 JP JP3175142A patent/JP2739615B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5379025A (en) * | 1976-10-01 | 1978-07-13 | Bonnierfoeretagen Ab | Quantitatively measuring of antigen |
| JPS60172596A (ja) * | 1984-02-17 | 1985-09-06 | 呉羽化学工業株式会社 | デ−タ解析用シ−ト |
| JPH0283448A (ja) * | 1988-09-20 | 1990-03-23 | Fuji Photo Film Co Ltd | 免疫測定方法 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010002398A (ja) * | 2008-06-23 | 2010-01-07 | Horiba Ltd | 分析装置 |
| JP2013096726A (ja) * | 2011-10-28 | 2013-05-20 | Kddi Corp | 着色濃度測定装置、着色濃度測定方法および着色濃度測定プログラム |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2739615B2 (ja) | 1998-04-15 |
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