JPH05194592A - ペプチド誘導体およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】エンドセリン受容体拮抗作用を有する新規なペ
プチド誘導体の創製。 【構成】一般式 【化１】 ［式中、ＡはD-酸性-α-アミノ酸残基を、ＢはD-中性-
α-アミノ酸残基を、ＣはL-α-アミノ酸残基を、Ｄは芳
香環基を有するD-α-アミノ酸残基を、 R₁は水素原子ま
たは置換されていてもよいアミノ基を、R₂はアミド化も
しくはエステル化されていてもよいカルボキシル基を、
mおよびnはそれぞれ１または２を示す］で表されるペプ
チド誘導体またはその塩。 【効果】顕著なエンドセリン受容体拮抗作用を有し、た
とえば高血圧治療剤、心・脳循環疾患治療剤、腎疾患治
療剤等の医薬として有用。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、高血圧治療剤、心・脳
循環疾患治療剤、腎疾患治療剤、ぜんそく治療剤等、医
薬として有用性なエンドセリン受容体拮抗作用を有する
新規なペプチド誘導体およびその用途に関する。

【０００２】

【従来の技術】エンドセリン(ET)は1988年、柳沢らによ
りブタ大動脈内皮細胞の培養上清から単離され構造決定
された21個のアミノ酸からなる血管収縮性ペプチドであ
る[柳沢ら、ネイチャー(Nature)，332巻、411〜412
頁]。 その後、エンドセリンをコードする遺伝子の研
究から、エンドセリンに構造の類似したペプチドが存在
することが明らかにされ、それぞれエンドセリン-１(ET
-１)、エンドセリン-２(ET-2)、エンドセリン-３(ET-
３)と命名されている。 これらエンドセリン類の構造
は以下の通りである(ＥＴ-１,２,３における構成アミノ
酸はすべてL体である)[井上ら、プロシージング オブ
ザ ナショナル アカデミー オブ サイエンス ユーエス
エー(Proc. Natl. Acad. Sci. USA)，86巻、2863〜2867
頁]。

【０００３】

【化２】

【０００４】上記のエンドセリン類は生体内に存在し血
管収縮作用を有していることから、循環系調節に関与す
る内因性因子であると予想され、高血圧症、心・脳循環
疾患(たとえば心筋梗塞)、腎疾患(たとえば急性腎不全)
との関係が推定されている。また、気管支平滑筋収縮作
用も有しており、ぜんそくとの関係も推定されている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】上記のエンドセリン類
の受容体に対する拮抗剤が得られれば該エンドセリン類
の作用機作の解明に役立つのみならず、上記の疾患の有
効な治療薬になる可能性が大きいと考えられる。 これ
まで、発酵生産物より得られたエンドセリン受容体拮抗
作用を有する環状ペンタペプチド類について特許出願が
なされている(特願平2-413828および特願平3-126160)
が、それと同様のあるいはそれ以上の効果を有する新規
ペプチドを提供することが本発明の課題である。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、エンドセ
リン類による強力な血管平滑筋収縮活性を抑制する作用
を指標として鋭意研究を進め、顕著なエンドセリン受容
体拮抗作用を有する新規なペプチド誘導体を創製し、さ
らに検討を加えて本発明を完成した。

【０００７】すなわち本発明は、 １．式［I］

【０００８】

【化３】

【０００９】［式中、ＡはD-酸性-α-アミノ酸残基を、
ＢはD-中性-α-アミノ酸残基を、ＣはL-α-アミノ酸残
基を、Ｄは芳香環基を有するD-α-アミノ酸残基を、 R₁
は水素原子または置換されていてもよいアミノ基を、R₂
はアミド化もしくはエステル化されていてもよいカルボ
キシル基を、mおよびnはそれぞれ１または２を示す］で
表されるペプチド誘導体またはその塩、および、 ２．式［Ｉ］で表されるペプチド誘導体またはその薬理
学的に許容される塩を含有してなるエンドセリン受容体
拮抗剤に関する。

【００１０】上記式［I］は５つのアミド結合とひとつ
のＳ−Ｓ結合が存在することにより分子全体として環を
形成していることを示す。

【００１１】上記式［Ｉ］において、Ａで表されるD-酸
性-α-アミノ酸残基の母体となるアミノ酸としては、た
とえば、側鎖にカルボキシル基、スルホニル基またはテ
トラゾリル基のような酸性基を有するアミノ酸があげら
れる。 その具体例としては、D-グルタミン酸、D-アス
パラギン酸、D-システイン酸、D-ホモシステイン酸、D-
β-(５-テトラゾリル)アラニン、D-２-アミノ-４-(５-
テトラゾリル)酪酸などがあげられるが、特にD-グルタ
ミン酸、D-アスパラギン酸、D-システイン酸が好まし
い。

【００１２】上記式［Ｉ］において、Ｂで表されるD-中
性-α-アミノ酸残基の母体となるアミノ酸としては、た
とえば、D-アラニン、D-バリン、D-ノルバリン、 D-ロイ
シン、D-イソロイシン、D-アロイソロイシン、D-ノルロ
イシン、D-ターシャリーロイシン、D-ガンマメチルロイ
シン、D-フェニルグリシン、D-フェニルアラニンなどの
D-α-アミノ酸があげられ、特にD-ロイシン、D-アロイ
ソロイシン、D-ターシャリーロイシン、D-ガンマメチル
ロイシン、D-フェニルグリシンが好ましい。

【００１３】上記式［Ｉ］において、Ｃで表されるL-α
-アミノ酸残基の母体となるアミノ酸としては、たとえ
ば、グリシン、L-アラニン、L-バリン、L-ノルバリン、
L-ロイシン、L-イソロイシン、L-ターシャリーロイシ
ン、L-ノルロイシン、L-メチオニン、L-２-アミノ酪
酸、L-セリン、L-スレオニン、L-フェニルアラニン、L-
アスパラギン酸、L-グルタミン酸、L-アスパラギン、L-
グルタミン、L-リジン、L-トリプトファン、L-アルギニ
ン、L-チロシン、L-プロリンなど、通常一般に知られて
いるL-α-アミノ酸があげられ、特にL-ロイシン、L-ノ
ルロイシン、L-トリプトファンが好ましい。

【００１４】上記式［Ｉ］において、Ｄで表される芳香
環基を有するD-α-アミノ酸残基の母体となるアミノ酸
としては、たとえば、側鎖に芳香環基を有するD-α-ア
ミノ酸があげられる。 その具体例としては、D-トリプ
トファン、D-５-メチルトリプトファン、D-フェニルア
ラニン、D-チロシン、D-１-ナフチルアラニン、D-２-ナ
フチルアラニンなどがあげられ、特にD-トリプトファ
ン、D-５-メチルトリプトファンが好ましい。

【００１５】上記式［I］においてR₁は水素原子または
置換されていてもよいアミノ基を示す。 アミノ基の置
換基としてはたとえばアルキル基またはアシル基があげ
られる。 ここでアルキル基としてはたとえば芳香環基
で置換されていてもよい低級アルキル基[芳香環基はた
とえば、フェニル、ナフチルなどで、さらにハロゲン原
子、低級アルキル基、低級アルコキシ基で置換されてい
てもよい；低級アルキル基はたとえばＣ_1-3アルキル基
で、メチル、エチル、プロピルなど；ハロゲン原子はた
とえばフルオロ、クロル、ブロムなど；低級アルコキシ
基はたとえばＣ_1-3アルコキシ基で、メトキシ、エトキ
シ、プロポキシなど]が、また、アシル基としてはたと
えば芳香環基で置換されていてもよい低級アルカノイル
基[芳香環基はたとえば、フェニル、ナフチルなどで、
さらにハロゲン原子、低級アルキル基、低級アルコキシ
基で置換されていてもよい；低級アルキル基はたとえば
Ｃ_1-3アルキル基で、メチル、エチル、プロピルなど；
ハロゲン原子はたとえばフルオロ、クロル、ブロムな
ど；低級アルコキシ基はたとえばＣ_1-3アルコキシ基
で、メトキシ、エトキシ、プロポキシなど；低級アルカ
ノイル基はたとえば、Ｃ_1-4アルカノイル基で、アセチ
ル、プロピオニル、ブチリルなど]や置換されていても
よいアロイル基[アロイル基はたとえばベンゾイル、ナ
フトイルなどで、さらにハロゲン原子、低級アルキル
基、低級アルコキシ基で置換されていてもよい；低級ア
ルキル基はたとえばＣ_1-3アルキル基で、メチル、エチ
ル、プロピルなど；ハロゲン原子はたとえばフルオロ、
クロル、ブロムなど；低級アルコキシ基はたとえばＣ
_1-3アルコキシ基で、メトキシ、エトキシ、プロポキシ
など]のほか、α-アミノ酸のα-カルボキシル基の水酸
基を取り除いてできる基[α-アミノ酸はグリシン、アラ
ニン、バリン、ノルバリン、ロイシン、イソロイシン、
ターシャリーロイシン、ノルロイシン、メチオニン、２
-アミノ酪酸、セリン、スレオニン、フェニルアラニ
ン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グ
ルタミン、リジン、トリプトファン、アルギニン、チロ
シン、プロリンなど、通常一般に知られているα-アミ
ノ酸で、D、L、DLのいずれでもよい]があげられる。 置
換されたアミノ基の具体例としては、Ｎ-メチルアミ
ノ、Ｎ-エチルアミノ、Ｎ,Ｎ-ジメチルアミノ、Ｎ-ベン
ジルアミノ、Ｎ-パラクロルベンジルアミノ、Ｎ-パラメ
チルベンジルアミノ、Ｎ-パラメトキシベンジルアミ
ノ、アセトアミド(-NHCOCH₃)、プロピオンアミド(-NHCO
C₂H₅)、フェニルアセトアミド(-NHCOCH₂C₆H₅)、パラメ
パラメチルフェニルアセトアミド(-NHCOCH₂C₆H₄-p-C
H₃)、ベンズアミド(-NHC₆H₅)、パラクロルベンズアミド
(-NHCOC₆H₄-p-Cl)、-NHCOCH₂NH₂、 -NHCOCH(CH₃)NH₂、-N
HCOCH(CH₂C₆H₅)NH₂などがあげられる。

【００１６】上記式［I］において、R₂はアミド化もし
くはエステル化されていてもよいカルボキシル基を示
す。 ここでアミド化されたカルボキシル基としてはた
とえば-CONR₃R₄[R₃,R₄はそれぞれ水素原子または芳香環
基で置換されていてもよい低級アルキル基；芳香環基は
たとえば、フェニル、ナフチルなどで、さらにハロゲン
原子、低級アルキル基、低級アルコキシ基で置換されて
いてもよい；低級アルキル基はたとえばＣ_1-3アルキル
基で、メチル、エチル、プロピルなど；ハロゲン原子は
たとえばフルオロ、クロル、ブロムなど；低級アルコキ
シ基はたとえばＣ_1-3アルコキシ基で、メトキシ、エト
キシ、プロポキシなど]や-COR₅[R₅はα-アミノ酸のα-
アミノ基の水素原子を１個取り除いてできる基；α-ア
ミノ酸はグリシン、アラニン、バリン、ノルバリン、ロ
イシン、イソロイシン、ターシャリーロイシン、ノルロ
イシン、メチオニン、２-アミノ酪酸、セリン、スレオ
ニン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン
酸、アスパラギン、グルタミン、リジン、トリプトファ
ン、アルギニン、チロシン、プロリンなど、通常一般に
知られているα-アミノ酸で、D、L、DLのいずれでもよい]
などが、また、エステル化されたカルボキシル基として
はたとえば-COOR₆[R₆は芳香環基で置換されていてもよ
い低級アルキル基；芳香環基はたとえば、フェニル、ナ
フチルなど；低級アルキル基はたとえばＣ_1-3アルキル
基で、メチル、エチル、プロピルなど]などがあげられ
る。 アミド化されたカルボキシル基の具体例として
は、カルバモイル、Ｎ-メチルカルバモイル、Ｎ,Ｎ-ジ
メチルカルバモイル、Ｎ-ベンジルカルバモイル、 Ｎ-パ
ラクロルベンジルカルバモイル、Ｎ-パラメチルベンジ
ルカルバモイル、Ｎ-パラメトキシベンジルカルバモイ
ル、-CONHCH₂COOH、 -CONHCH(CH₃)COOH、 -CONHCH(CH₂C₆H
₅)COOHなどが、また、エステル化されたカルボキシル基
(-COOＲ')の具体例としては、メトキシカルボニル、エ
トキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニルなどがあ
げられる。

【００１７】上記式［I］においてmおよびnはそれぞれ
１または２を示す。 また、R₁が結合している炭素原子
はR₁＝Hの場合を除いて不斉炭素であるが、D、L、DLのい
ずれでもよい。 他方、R₂が結合している炭素原子も不
斉炭素であって、D、L、DLのいずれでもよいが、Dがより
好ましい。

【００１８】本発明のペプチド誘導体［Ｉ］の薬理学的
に許容される塩としてはナトリウム塩、カリウム塩、カ
ルシウム塩、マグネシウム塩などの金属塩、塩酸塩、硫
酸塩、リン酸塩などの無機酸付加塩、酢酸塩、プロピオ
ン酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、蓚酸塩な
どの有機酸塩などがあげられる。

【００１９】本発明のペプチド誘導体［I］は以下に詳
述するペプチド合成の最終段階で得られる次式のペプチ
ド［II］を酸化することにより製造するのが一般的であ
る。

【００２０】

【化４】

【００２１】［式中の記号は前記に同じ］上記ペプチド
［II］はペプチド合成の常套手段で製造しうる。 すな
わち、液相合成法、固相合成法のいずれによってもよい
が、液相合成法が好ましい場合もある。 そのようなペ
プチド合成の手段は、任意の公知の方法に従えばよく、
たとえば、M. Bodansky および M. A. Ondetti 著、ペ
プチド シンセシス(PeptideSynthesis)、インターサイ
エンス、ニューヨーク、1966年；F. M. Finn およびK.
Hofmann 著、ザ プロテインズ(The Proteins)、第２
巻、H. Nenrath、R. L.Hill 編集、アカデミック プレ
ス インク、ニューヨーク、1976年；泉屋信夫他著「ペ
プチド合成の基礎と実験」丸善(株) 1985年；矢島治
明、榊原俊平他著、生化学実験講座１、日本生化学会
編、東京化学同人 1977年；木村俊他著、続生化学実験
講座２、日本生化学会編、東京化学同人 1987年；J. M.
Stewart および J. D. Young 著、ソリッド フェイズ
ペプチド シンセシス(Solid Phase Peptide Synthesi
s)、ピアス ケミカル カンパニー、イリノイ、1984年な
どに記載された方法、たとえばアジド法、クロリド法、
酸無水物法、混酸無水物法、DCC法、活性エステル法、
ウッドワード試薬Ｋを用いる方法、カルボニルイミダゾ
ール法、酸化還元法、DCC/HONB法、BOP試薬を用いる方
法などがあげられる。

【００２２】上記ペプチド［II］は、そのペプチド結合
の任意の位置で２分される２種のフラグメントの一方に
相当する反応性カルボキシル基を有する原料と、他方の
フラグメントに相当する反応性アミノ基を有する原料を
ペプチド合成の常套手段で縮合させ、生成する縮合物が
保護基を有する場合はその保護基を常套手段で脱離させ
ることにより製造しうる。

【００２３】特に固相合成法においては、反応に関与す
べきでない官能基を保護したアミノ酸とパム(Pam)樹脂
などの不溶性担体をアミノ酸のカルボキシル基を通して
結合させ、このアミノ保護基を脱離したのち、これに関
与すべきでない官能基を保護したアミノ酸を縮合し、目
的とする保護ペプチドとなるまでこの操作をくり返し、
次いでフッ化水素処理，トリフルオロメタンスルホン酸
処理，トリフルオロ酢酸処理などの常套手段により保護
基を脱離すると同時に不溶性担体との結合を切断するこ
とにより製造しうる。

【００２４】原料の反応に関与すべきでない官能基の保
護および保護基，ならびにその保護基の脱離、反応に関
与する官能基の活性化などもまた公知のものあるいは手
段から適宜選択しうる。

【００２５】原料のアミノ基の保護基としては、たとえ
ばベンジルオキシカルボニル、ターシャリーブチルオキ
シカルボニル、ターシャリーアミルオキシカルボニル、
イソボルニルオキシカルボニル、４-メトキシベンジル
オキシカルボニル、２-クロルベンジルオキシカルボニ
ル、アダマンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセ
チル、フタロイル、ホルミル、２-ニトロフェニルスル
フェニル、ジフェニルホスフィノチオイル、９-フルオ
レニルメチルオキシカルボニルなどがあげられる。カル
ボキシル基の保護基としては、たとえばアルキルエステ
ル(たとえば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、タ
ーシャリーブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、
シクロヘプチル、シクロオクチル、２-アダマンチルな
どのエステル基)、ベンジルエステル、４-ニトロベンジ
ルエステル、４-メトキシベンジルエステル、４-クロル
ベンジルエステル、ベンズヒドリルエステル、フェナシ
ルエステル、ベンジルオキシカルボニルヒドラジド、タ
ーシャリーブチルオキシカルボニルヒドラジド、トリチ
ルヒドラジドなどがあげられる。

【００２６】システインのチオール保護基としては、た
とえば４-メトキシベンジル、 ４-メチルベンジル、 ベン
ジル、ターシャリーブチル、アダマンチル、トリチル、
アセトアミドメチル、カルボメトキシスルフェニル、３
-ニトロ-２-ピリジンスルフェニル、トリメチルアセト
アミドメチルなどがあげられる。

【００２７】セリンの水酸基は、たとえばエステル化ま
たはエーテル化によって保護することができる。 この
エステル化に適する基としてはたとえばアセチル基など
の低級アルカノイル基、ベンゾイル基などのアロイル
基、ベンジルオキシカルボニル基、エチルオキシカルボ
ニル基などの炭酸から誘導される基などがあげられる。
またエーテル化に適する基としては、たとえばベンジル
基、テトラヒドロピラニル基、ターシャリーブチル基な
どである。 しかしながら、セリンの水酸基は必ずしも
保護する必要はない。

【００２８】チロシンのフェノール性水酸基の保護基と
しては、たとえば、ベンジル、２,６-ジクロルベンジ
ル、２-ニトロベンジル、２-ブロムベンジルオキシカル
ボニル、ターシャリーブチルなどがあげられるが、必ず
しも保護する必要はない。メチオニンはスルホキシドの
形で保護しておいてもよい。

【００２９】ヒスチジンのイミダゾールの保護基として
は、パラトルエンスルホニル、４-メトキシ-２,３,６-
トリメチルベンゼンスルホニル、２,４-ジニトロフェニ
ル、ベンジルオキシメチル、ターシャリーブトキシメチ
ル、ターシャリーブトキシカルボニル、トリチル、９-
フルオレニルメチルオキシカルボニルなどがあげられる
が、必ずしも保護する必要はない。

【００３０】トリプトファンのインドールの保護基とし
ては、ホルミル、２,４,６-トリメチルベンゼンスルホ
ニル，２,４,６-トリメトキシベンゼンスルホニル，４-
メトキシ-２,３,６-トリメチルベンゼンスルホニル，
２,２,２-トリクロルエチルオキシカルボニル，ジフェ
ニルホスフィノチオイルなどがあげられるが、必ずしも
保護する必要はない。

【００３１】原料のカルボキシル基の活性化されたもの
としては、たとえば対応する酸無水物、アジド、活性エ
ステル［アルコール(たとえば、ペンタクロルフェノー
ル、２,４,５-トリクロルフェノール、 ２,４-ジニトロ
フェノール、 シアノメチルアルコール、パラニトロフェ
ノール、Ｎ-ヒドロキシ-５-ノルボルネン-２,３-ジカル
ボキシイミド、 Ｎ-ヒドロキシスクシミド、Ｎ-ヒドロキ
シフタルイミド、Ｎ-ヒドロキシベンズトリアゾール)と
のエステル］などがあげられる。 原料のアミノ基の
活性化されたものとしては、たとえば対応するリン酸ア
ミドがあげられる。

【００３２】縮合反応は溶媒の存在下に行うことができ
る。 溶媒としては、ペプチド縮合反応に使用しうるこ
とが知られているものから適宜選択されうる。 たとえ
ば無水または含水のジメチルホルムアミド、ジメチルス
ルホキシド、ピリジン、クロロホルム、ジオキサン、ジ
クロルメタン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、
酢酸エチル、Ｎ-メチルピロリドンあるいはこれらの適
宜の混合物などがあげられる。

【００３３】反応温度は、ペプチド結合形成反応に使用
されうることが知られている範囲から適宜選択され、通
常約−20℃〜30℃の範囲から適宜選択される。

【００３４】保護基の脱離方法としては、たとえばPd黒
あるいはPd-炭素などの触媒の存在下での水素気流中で
の接触還元や、また、無水フッ化水素、メタンスルホン
酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸
あるいはこれらの混合液などによる酸処理や、また液体
アンモニア中ナトリウムによる還元などもあげられる。
上記酸処理による脱離反応は、一般に−20℃〜40℃の
温度でおこなわれるが、酸処理においては、アニソー
ル、フェノール、チオアニソール、メタクレゾール、パ
ラクレゾール、ジメチルスルフィド、１,４-ブタンジチ
オール、１,２-エタンジチオールのようなカチオン補足
剤の添加が有効である。 また、ヒスチジンのイミダゾ
ール保護基として用いられる２,４-ジニトロフェニル基
はチオフェノール処理により除去され、トリプトファン
のインドール保護基として用いられるホルミル基は上記
の１,２-エタンジチオール、１,４-ブタンジチオールな
どの存在下の酸処理による脱保護以外に、希水酸化ナト
リウム、希アンモニアなどによるアルカリ処理によって
も除去される。

【００３５】このようにして保護ペプチドの保護基を除
去して得られるペプチド［II］を酸化反応に付して本発
明の目的化合物［I］を得る。 ［II］を［I］へ酸化す
る方法としては、たとえば水などの溶媒中、空気、フェ
リシアン化カリウム、ヨー素、ジヨードエタンなどで酸
化する方法があげられる。 上記酸化反応は、一般に約
０℃〜約40℃の温度で、pH約6−8.5において、高度希釈
法で行われるのが望ましい。 本発明のペプチド［I］
は空気酸化で容易に［II］から得られる場合が多い。

【００３６】このようにして製造されたペプチド誘導体
［Ｉ］は反応終了後、ペプチドの分離精製手段、たとえ
ば、抽出、分配、再沈殿、再結晶、カラムクロマトグラ
フィー、高速液体クロマトグラフィーなどによって採取
される。

【００３７】本発明のペプチド誘導体［Ｉ］は自体公知
の方法により金属塩（たとえばナトリウム塩、カリウム
塩、カルシウム塩、マグネシウム塩など）、 塩基または
塩基性化合物との塩（たとえばアンモニウム塩、アルギ
ニン塩など）、酸付加塩、とりわけ薬理学的に許容され
る酸付加塩としても得ることができ、たとえば、無機酸
(たとえば、塩酸、硫酸、リン酸)あるいは有機酸(たと
えば、酢酸、プロピオン酸、クエン酸、酒石酸、リンゴ
酸、蓚酸、メタンスルホン酸)などの塩があげられる。

【００３８】本明細書において、アミノ酸およびペプチ
ドなどを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ-ＩＵＢ Com
mission on Biochemical Nomenclature による略号ある
いは当該分野における慣用略号に基づくものであり、そ
の例を下記する。

【００３９】 Gly ：グリシン Ala ：アラニン Val ：バリン Nva ：ノルバリン Ile ：イソロイシン aIle ：アロイソロイシン Leu ：ロイシン tLeu ：ターシャリーロイシン γMeLeu ：ガンマメチルロイシン Met ：メチオニン Arg ：アルギニン Lys ：リジン His ：ヒスチジン Asp ：アスパラギン酸 Glu ：グルタミン酸 Ser ：セリン Thr ：スレオニン Phe ：フェニルアラニン Tyr ：チロシン Trp ：トリプトファン Cys ：システイン Cyt ：シスチン mTrp ：５-メチルトリプトファン Phg ：フェニルグリシン Nal(1) ：１-ナフチルアラニン Nal(2) ：２-ナフチルアラニン βAla ：ベータアラニン γAbu ：ガンマアミノ酪酸 また本明細書中で常用される保護基および試薬を下記の
略号で表記する。

【００４０】 Boc ：ターシャリーブトキシカルボニル Bzl ：ベンジル BrZ ：２-ブロムベンジルオキシカルボニル ClZ ：２-クロルベンジルオキシカルボニル Tos ：パラトルエンスルホニル For ：ホルミル OBzl ：ベンジルエステル OPac ：フェナシルエステル ONB ：HONBエステル TFA ：トリフルオロ酢酸 TEA ：トリエチルアミン IBCF ：イソブチルクロルホルメート DMF ：Ｎ,Ｎ-ジメチルホルムアミド DCC ：Ｎ,Ｎ'-ジシクロヘキシルカルボジイミド DCU ：Ｎ,Ｎ'-ジシクロヘキシルウレア HONB ：Ｎ-ヒドロキシ-５-ノルボルネン-２,３-ジカ
ルボキシイミド HOBt ：１-ヒドロキシベンゾトリアゾール DCM ：ジクロルメタン THF ：テトラヒドロフラン MeBzl ：４-メチルベンジル Acm ：アセトアミドメチル MBzl ：４-メトキシベンジル 次に、本発明のペプチド誘導体［I］の薬理作用につい
て述べる。

【００４１】

【実験例】レセプター結合アッセイ ブタの心臓より調製した膜画分をアッセイ用緩衝液を用
いて0.15mg/mlに 希釈し、これを100μlずつアッセイチ
ューブに分注しアッセイに用いる。 この膜画分懸濁液
に、５μMの放射性ヨードで標識したエンドセリン-１溶
液を２μl、さらに被検ペプチド溶液を３μl加えて、１
時間25℃で保温した。 次に膜画分懸濁液を氷冷したア
ッセイ用緩衝液900μlで希釈したのち、12,000×gで10
分間遠心して上清と沈さに分離した。 沈さには細胞膜
とこれに埋め込まれたエンドセリン受容体が含まれ、受
容体に結合した放射性ヨード標識エンドセリンも沈さに
回収される。 従って、この沈さの放射性ヨードをガン
マ線計測機により測定することにより、エンドセリン受
容体に結合した放射性ヨード標識エンドセリン量を定量
した。 結果は以下のとおり。 なお、対照化合物は特
願平2-413828に記載の化合物である。

【００４２】 実施例番号 結合活性(＊1) 対照(＊3) 1.0(＊2) １ 6.2 ２ 3.5 ５ 14 ６ 12 ７ 6 ８ 10 ９ 4.6 ＊1 ブタ心筋膜画分 ＊2 IC₅₀＝1.10×10^-6M ＊3 対照化合物は

【００４３】

【化５】

【００４４】以上のように本発明の新規ペプチド誘導体
[Ｉ]またはその薬理学的に許容される塩はエンドセリン
受容体拮抗剤としての性質を有し、循環機能改善剤、血
管拡張剤またはぜんそく治療剤として用いることができ
る。

【００４５】

【作用・効果】本発明の新規なペプチド誘導体［I］
は、エンドセリン受容体拮抗剤としてエンドセリンの血
管収縮活性の抑制に顕著な効果を奏する。 そのため本
発明の新規なペプチド誘導体もしくはその塩は、循環機
能改善剤または心筋梗塞・急性腎不全等の治療剤または
ぜんそく治療剤として用いることができる。

【００４６】本発明のペプチド誘導体を上記治療薬とし
て用いる場合、そのままあるいは薬理学的に許容される
担体、賦形剤、希釈剤と混合し、粉末、顆粒、錠剤、カ
プセル剤、注射剤、座剤、軟膏剤、徐放型製剤などの剤
型で経口的または非経口的に安全に投与することができ
る。 本発明のペプチド誘導体は主として非経口的に投
与(たとえば、静脈あるいは皮下注射、脳室内あるいは
脊髄内投剤、経鼻投与、直腸投与)されるが、場合によ
っては経口投与されることもある。

【００４７】本発明のペプチドは物質として安定である
ため生理食塩水の溶液として保存できるが、マンニトー
ル、ソルビトールを添加して凍結乾燥アンプルとし、使
用時に溶解することもできる。 本発明のペプチド誘導
体は、遊離体としてあるいはその塩基塩または酸付加塩
として投与され得る。 その投与量は、ペプチド誘導体
の遊離体、塩基塩、酸付加塩ともに、遊離体の量とし
て、一般に体重１kg当り１μg〜100mgの範囲が適量であ
る。 さらに詳述すれば、投与量は対象疾患、症状、投
与対象、投与方法などによっても異なるが、たとえば成
人の高血圧症患者に対して注射で投与する場合、通常薬
効成分(ペプチド［１］)１回量として１μg/kg〜100mg/
kg体重程度、より好ましくは100μg/kg〜20mg/kg体重程
度を１日１回〜３回程度投与するのが好都合である。
また、点滴でも効果があり、点滴の場合の全投与量は注
射の場合と同じである。

【００４８】このペプチド誘導体を治療剤として用いる
場合には、注意深く精製を行ない細菌や発熱物質が存在
しないように注意しなければならない。

【００４９】

【実施例】以下に実施例をあげて本発明をさらに具体的
に説明する。 なお、実施例中のα-アミノ酸のD、Lは特
記されているもの以外はL体である。

【００５０】実施例で用いた薄相クロマトグラフィーの
プレートはメルク社製品(SILICAGEL60F-254)を用い、展
開溶媒としては、Ｒf₁：クロロホルム-メタノール(19：
１)、Ｒf₂：クロロホルム-メタノール-酢酸(９：１：0.
5)を用いた。

【００５１】実施例１

【００５２】

【化６】

【００５３】Boc-D-Cys(MeBzl)-メリフィールド樹脂(0.
5ミリモル、渡辺化学社製)を出発原料とし、アプライド
・バイオシステムズ社のBoc-アミノ酸誘導体カートリッ
ジおよびBoc-D-Leu、Boc-D-Trp(CHO)、 Boc-D-Glu(OBzl)
については(株)ペプチド研究所製の粉末を専用カートリ
ッジに封入したもの(2.0ミリモル)を用い、トリフルオ
ロ酢酸によるBoc基の脱離後、HOBt活性エステル法にて
順次Ｃ末端側からペプチド鎖を延長した。 このように
して Boc-Cys(MeBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp(CHO)-D-Glu(OBz
l)-D-Cys(MeBzl)-樹脂 で表される保護ペプチド樹脂を
得た。 このペプチド樹脂を0.1%のインドールを含む50
%TFA/ジクロルメタンで室温20分間処理することによりB
oc基を脱離した。 このようにして得られたペプチド樹
脂(500mg)をパラクレゾール(500mg)、１,４-ブタンジオ
ール(0.75ml)の存在下、無水フッ化水素(5ml)で、０
℃、１時間処理し全保護基を除去するとともに、ペプチ
ドを樹脂より切断した。 フッ化水素を減圧留去し、残
留物にエチルエーテルを加えて沈殿をろ取した。 これ
にTFA(30ml)を加えて溶解し、樹脂をろ別し、ろ液を濃
縮し、残留物にエチルエーテルを加えて沈殿をろ取し減
圧乾燥した。 これを25%エタノール、25%ノルマルブタ
ノールを含む0.1M酢酸アンモニウム水(pH 8.5、 500ml)
に溶かし、室温で15時間撹拌し、空気酸化した。 その
後、酢酸を加えてpH5.0として溶媒を減圧で留去し、残
留物を凍結乾燥した。 これを60%酢酸(20ml)に溶か
し、セファデックスG-25のカラム(２cm×100cm)に付
し、60%酢酸で溶出し、目的の分画を集め凍結乾燥し
た。 最後にこれをYMC-D-ODS-５(２cm×25cm)のカラム
(ワイエムシイ社製)を用いた分取液体クロマトグラフィ
ーで精製し、目的物を得た。

【００５４】アミノ酸分析値[6N-HCl、 110℃、24時間加
水分解; ()内は理論値を示す]: Glu 1.00(1); Cyt 0.37
(1); Leu 2.07(2) ＬＳＩＭＳ(M+H⁺)＝763 (理論値＝763) 実施例２

【００５５】

【化７】

【００５６】実施例１と同様の操作により Boc-D-Cys(M
eBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp(CHO)-D-Glu(OBzl)-D-Cys(MeBz
l)-樹脂 を得た。 ただし、Boc-D-Cys(MeBzl)は(株)ペ
プチド研究所製の粉末を専用カートリッジに封入後使用
した。 これをさらに実施例１と同様の脱保護・酸化・
精製により目的物を得た。

【００５７】アミノ酸分析値[6N-HCl、 110℃、24時間加
水分解; ()内は理論値を示す]: Glu 1.00(1); Cyt 0.35
(1); Leu 2.01(2) ＬＳＩＭＳ(M+H⁺)＝763 (理論値＝763) 実施例３

【００５８】

【化８】

【００５９】Boc-Cys(MeBzl)-OCH₂-パム樹脂(0.5ミリモ
ル)を出発原料とし、実施例１と同様の操作により Boc-
Cys(MeBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp(CHO)-D-Glu(OBzl)-Cys(Me
Bzl)-OCH₂-パム樹脂 を得た。 これをさらに実施例１
と同様の脱保護・酸化・精製により目的物を得た。

【００６０】アミノ酸分析値[6N-HCl、 110℃、24時間加
水分解; ()内は理論値を示す]: Glu 1.00(1); Cyt 0.45
(1); Leu 1.97(2) ＬＳＩＭＳ(M+H⁺)＝763 (理論値＝763) 実施例４

【００６１】

【化９】

【００６２】実施例３と同様の操作により Boc-D-Cys(M
eBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp(CHO)-D-Glu(OBzl)-Cys(MeBzl)-
OCH₂-パム樹脂 を得た。 ただし、Boc-D-Cys(MeBzl)は
(株)ペプチド研究所製の粉末を専用カートリッジに封入
後使用した。 これをさらに実施例１と同様の脱保護・
酸化・精製により目的物を得た。

【００６３】アミノ酸分析値[6N-HCl、 110℃、24時間加
水分解; ()内は理論値を示す]: Glu 1.00(1); Cyt 0.44
(1); Leu 2.02(2) ＬＳＩＭＳ(M+H⁺)＝763 (理論値＝763) 実施例５ 実施例１と同様の操作によって以下の化合物を合成し
た。

【００６４】（１）

【００６５】

【化１０】

【００６６】ＬＳＩＭＳ(M+H⁺)＝750 (理論値＝750) （２）

【００６７】

【化１１】

【００６８】ＬＳＩＭＳ(M+H⁺)＝750 (理論値＝750) （３）

【００６９】

【化１２】

【００７０】ＬＳＩＭＳ(M+H⁺)＝764 (理論値＝764) （４）

【００７１】

【化１３】

【００７２】ＬＳＩＭＳ(M+H⁺)＝823 (理論値＝823) （５）

【００７３】

【化１４】

【００７４】ＬＳＩＭＳ(M+H⁺)＝790 (理論値＝７９
０）

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ０７Ｋ 99:00

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】式 【化１】 ［式中、ＡはD-酸性-α-アミノ酸残基を、ＢはD-中性-
   α-アミノ酸残基を、ＣはL-α-アミノ酸残基を、Ｄは芳
   香環基を有するD-α-アミノ酸残基を、 R₁は水素原子ま
   たは置換されていてもよいアミノ基を、R₂はアミド化も
   しくはエステル化されていてもよいカルボキシル基を、
   mおよびnはそれぞれ１または２を示す］で表されるペプ
   チド誘導体またはその塩。
2. 【請求項２】請求項１記載のペプチド誘導体またはその
   薬理学的に許容される塩を含有してなるエンドセリン受
   容体拮抗剤。