JPH05207889A - 抗生物質ｌｌ−ｅ１９０２０アルフアおよびベータの改良された回収方法 - Google Patents

抗生物質ｌｌ−ｅ１９０２０アルフアおよびベータの改良された回収方法

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JPH05207889A
JPH05207889A JP4264178A JP26417892A JPH05207889A JP H05207889 A JPH05207889 A JP H05207889A JP 4264178 A JP4264178 A JP 4264178A JP 26417892 A JP26417892 A JP 26417892A JP H05207889 A JPH05207889 A JP H05207889A
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solvent mixture
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alpha
antibiotic
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JP4264178A
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Guy Thomas Carter
ガイ・トーマス・カーター
David R Williams
デイビツド・アール・ウイリアムズ
Fernando Pinho
フエルナンド・ピノ
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American Cyanamid Co
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    • C07H15/26—Acyclic or carbocyclic radicals, substituted by hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 本発明は、微生物ストレプトミセス・リジク
ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｙｄｉｃｕｓ）種ｔ
ａｎｚａｎｉｕｓ ＮＲＲＬ １８０３６から誘導され
るＬＬ−Ｅ１９０２０アルファおよびベータと表示され
る抗生物質の改良された分離および精製方法を提供す
る。 【構成】 微生物ストレプトミセス・リジクス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｙｄｉｃｕｓ）種ｔａｎｚａｎ
ｉｕｓ ＮＲＲＬ １８０３６から誘導されるＬＬ−Ｅ
１９０２０アルファおよびベータと表示される抗生物質
の粗製の溶液から樹脂吸着法及び高速液体クロマトグラ
フイにより前記抗生物質を回収、濃縮又は精製する方
法。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】本発明は、粗製の溶液から抗生物質ＬＬ−
Ｅ１９０２０アルファおよびＬＬ−Ｅ１９０２０ベータ
を回収および精製する新規な方法およびそれらの精製方
法に関する。
【０００２】抗生物質ＬＬ−Ｅ１９０２０アルファおよ
びＬＬ−Ｅ１９０２０ベータは、米国特許第４，７０
５，６８８号、ザ・ジャーナル・オブ・アンチビオチク
ス（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔ
ｉｃｓ）、４２（１０）、１４８９−１４９３（１９８
９）、およびザ・ジャーナル・オブ・アンチビオチクス
（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉ
ｃｓ）、４２（１０）、１４８９−１４９３（１９８
９）。抗生物質ＬＬ−Ｅ１９０２０アルファはＣ−２３
に結合したフェニル酢酸エステルを有し、そして構造
式：
【０００３】
【化１】
【０００４】を有する。
【０００５】抗生物質ＬＬ−Ｅ１９０２０ベータはＣ−
２４に結合したフェニル酢酸エステルを有し、そして構
造式：
【０００６】
【化２】
【０００７】を有する。
【０００８】抗生物質ＬＬ−Ｅ１９０２０アルファを逆
相ＨＰＬＣ精製により精製方法は、ジャーナル・オブ・
クロマトグラフィー（Ｊ．ｏｆ Ｃｈｒｏｍ．）に記載
されている。抗生物質ＬＬ−Ｅ１９０２０アルファおよ
びＬＬ−Ｅ１９０２０ベータは、また、米国特許第４，
７０４，２７６号および米国特許第４，９６８，４９３
号肉を生産する動物の成長速度を増加しそして呼吸器の
病気、家畜コレラおよび壊死性腸炎の処置に有用であ
る。
【０００９】化合物の関係する族、フェネルマミシンス
は、次の文献に報告されている：ザ・ジャーナル・オブ
・アンチビオチクス（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）、４１（１０）、１２３９−
１２９９（１９８８）；ザ・ジャーナル・オブ・アンチ
ビオチクス（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉ
ｂｉｏｔｉｃｓ）、４１（１０）、１３００−１３１５
（１９８８）；ザ・ジャーナル・オブ・アンチビオチク
ス（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔ
ｉｃｓ）、３９（１０）、１３６１−１３６７（１９８
６）；ザ・ジャーナル・オブ・アンチビオチクス（Ｔｈ
ｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ
ｓ）、４２（１）、９４−１０１（１９８９）；アンチ
ミクロビロル・エイジェント・アンド・ケモセラピー
（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ
Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）、３３（３）、３２２−
３２５（１９８９）；抗微生物剤の化学療法についての
第２７回インターサイエンス会議のプログラムおよびア
ブストラクツ（Ｐｒｏｇｒａｍ ａｎｄ Ａｂｓｔｒａ
ｃｔｓ Ｏｆ Ｔｈｅ ２７ｔｈ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅ
ｎｃｅ Ｃｏｎｆｅｒｎｃｅ ｏｎ Ａｎｔｉｍｉｃｏ
ｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐ
ｙ）、Ｎｏ．９９５、ｐ．２７０、ニューヨーク、１９
８７年４−７日。
【００１０】ＬＬ−Ｅ１９０２０アルファおよびＬＬ−
Ｅ１９０２０ベータの分離および精製の方法は、前述の
参考文献に記載されているように、小さい規模では有効
であるが、この出願に記載されている、新規な方法は、
わずかの操作工程を設けることによって大規模で非常に
よりく働き、そしてより高い純度の産生を与える。
【００１１】本発明は、ＬＬ−Ｅ１９０２０アルファお
よびＬＬ−Ｅ１９０２０ベータの大規模の回収における
改良を提供する。この改良は、（１）抗生物質が産生さ
れた発酵培地から抗生物質を非イオン性樹脂（高い多孔
質のコポリマー）上に吸着させる、その樹脂の典型的な
例は、次のものを包含する：スチレン−ジビニルベンゼ
ン型コポリマー、置換スチレン−ジビニルベンゼン型コ
ポリマー；メタクリル酸型ポリマー、スチレン−アリル
アクリレート型コポリマー、他のビニルのポリマーまた
はコポリマーなどの粒体に形成されたポリマー；（２）
バッチのモードで発酵ブロスから樹脂を分離するか、あ
るいは樹脂カラムを通してブロスの水性有機溶媒溶液を
濾過する；（３）樹脂からの抗生物質を溶離する、およ
び（４）分画を方法、例えば、クロマトグラフィー、沈
澱、結晶化または凍結乾燥により精製する。この改良さ
れた方法の利点は、（１）操作工程の数が減少するこ
と、および（２）得られた物質が高い純度であることで
ある。
【００１２】発酵ブロスからの純粋なキログラム量のＬ
Ｌ−Ｅ１９０２０アルファおよびＬＬ−Ｅ１９０２０ベ
ータの分離は容易な仕事ではない。発酵培地は多数の不
必要な物質の複雑な混合物である。研究の目的に必要な
分離された産生物に対してよく働く条件は大量を受け入
れることはできない。非イオン性吸着樹脂（高い多孔質
のポリマー）を使用して、発酵培地から抗生物質ＬＬ−
Ｅ１９０２０アルファおよびＬＬ−Ｅ１９０２０ベータ
を回収および精製する新規な方法が発見された。この樹
脂の使用はこれらの抗生物質に対して新規ではない。こ
の樹脂は発酵培地から回収可能な抗生物質の量を最適化
し、そしてカラムを水で洗浄することによって、産生物
を除去しないで、微量の不純物の除去を可能とする。さ
らに、アセトン−水の段階的勾配でカラムを溶離するこ
とは、大規模で抗生物質の部分的精製を可能とする。集
めた分画は、さらに、高圧液体クロマトグラフィー（Ｈ
ＰＬＣ）により精製することができる。
【００１３】抗生物質ＬＬ−Ｅ１９０２０アルファおよ
びＬＬ−Ｅ１９０２０ベータは、ストレプトミセス・リ
ジクス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｙｄｉｃｕｓ）
種ｔａｎｚａｎｉｕｓ ＮＲＲＬ １８０３６の菌株
を、炭素および窒素の同化可能な源を含有する水性栄養
培地中で、深部好気的条件下に、発酵することによって
産生される。この微生物は、アメリカン・サイアナミド
・カンパニーの医学研究部（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅ
ａｒｃｈ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ，ＡｍｅｒｉｃａｎＣｙａ
ｎａｍｉｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｅａｒｌ ｒｉｖｅ
ｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）に培養Ｎｏ．ＬＬ−Ｅ１９０２
０として維持されている。この新規な微生物の成育可能
な培養物は、アメリカ農務省の北部領域研究センターの
特許菌株保存機関（Ｐａｔｅｎｔ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃ
ｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｏｒｔ
ｈｅｒｎ Ｒｅｇｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅ
ｎｔｅｒ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｇ
ｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｐｅｏｒｉａ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ
６１６０４）に受託され、そしてその永久的保存菌株
に加えられている。それは菌株表示ＮＲＲＬ １８０３
６が前記受託により割り当てられた。
【００１４】これらの抗バクテリア剤の産生について、
本発明はこの特定の有機体または例示の目的でのみ前述
した上の特性に完全に答える有機体に限定されない。事
実、この有機体から種々の手段、例えば、Ｘ線、紫外
線、Ｎ’−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニ
ジン、アクチノファージなどへの暴露により産生される
突然変異体の使用を包含する。
【００１５】ストレプトミセス・リジクス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ｌｙｄｉｃｕｓ）種ｔａｎｚａｎｉｕ
ｓ ＮＲＲＬ １８０３６の培養は、広範な種類の液体
培地中で実施することができる。ＬＬ−Ｅ１９０２０ア
ルファおよびＬＬ−Ｅ１９０２０ベータの産生に有用で
ある培地は、次のものを含む：炭素の同化可能な源、例
えば、デキストリン、スクロース、糖蜜、グリセロール
など；窒素の同化可能な源、例えば、タンパク質、タン
パク質加水分解物、ポリペプチド、アミノ酸、トーモロ
コシ滲出液など；および無機イオンおよびカチオン、例
えば、カリウム、ナトリウム、アンモニウム、カルシウ
ム、硫酸塩、炭酸塩、リン酸塩、塩化物など。微量元
素、例えば、ホウ素、モリブデン、銅などを培地の他の
構成成分の不純物として供給する。槽およびびんの中の
通気は、発酵培地の表面を通してまたはその上に無菌の
空気を強制的に通すことによって供給される。槽の中の
それ以上の撹拌は機械的羽根車により提供される。消泡
剤、例えば、シリコーン油は必要に応じて添加すること
ができる。
【００１６】こうして、本発明の好ましい実施態様にお
いて、本発明はＬＬ−Ｅ１９０２０アルファおよびＬＬ
−Ｅ１９０２０ベータを不純物と混合したその水溶液か
ら分離する方法を提供し、この方法は抗生物質を発酵ブ
ロスから、ｐＨを酸で調節し、次いでこのブロスを溶
媒、例えば、メチルアルコールで希釈し、ケイ藻土を通
して濾過し、水で洗浄し、そして一緒にした濾液および
洗浄液をポリスチレンジビニルベンゼン樹脂のカラムを
通して濾過するすることによって、回収する工程からな
る。吸着剤への吸着はカラムの方法によるか、あるいは
バッチ式方法により達成することができ、前者は好まし
い。適当な非イオン性吸着樹脂（高い多孔質のコポリマ
ー）、例えば、ミツビシ・ケミカル（Ｍｉｔｓｕｂｉｓ
ｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）、ニューヨーク州ニューヨー
ク、パークアベニュー２７７、により製造されるＨＰ−
２０樹脂は好ましい。次いで、ＨＰ−２０カラムを水で
洗浄し、そして２０、４０、６０および８０％のアセト
ンで洗浄し、次いで１００％のアセトンで洗浄する。分
画を集める。揮発性物質を各分画から蒸発させ、そして
生ずる濃縮物を凍結乾燥する。この凍結乾燥した物質は
典型的には５０％の純度のＬＬ−Ｅ１９０２０アルファ
またはベータであり、そしてそれ自体引き続く精製工程
において使用すべきより高い品質の中間体を表す。典型
的には、これはより高い生産量の物質を生じ、そして純
粋な成分のよりよい全体の収率を生ずる。
【００１７】この物質のそれ以上の精製は、高圧液体ク
ロマトグラフィーにより１２〜１５リットルの逆相カラ
ム（Ｃ18結合した相、公称８０ミクロン）を使用し、
（３５〜６５％）の０．１モルの酢酸アンモニウムｐＨ
４．５／アセトニトリルまたは０．１％〜１％の水性酢
酸（３５〜６５％）で溶離するか、あるいは他の適当な
クロマトグラフィーの方法により達成することができ
る。これはクロマトグラフィーの系は、８０〜８５％の
純粋なＬＬ−Ｅ１９０２０アルファおよび純粋なＬＬ−
Ｅ１９０２０ベータを産生する。
【００１８】われわれは、本発明による方法はＬＬ−Ｅ
１９０２０アルファおよびベータとともに使用のにこと
に適当であることを発見した。
【００１９】本発明において、非イオン性吸着樹脂（高
い多孔質のポリマー）を産生物の吸着として使用する。
その樹脂の典型的な例は、次のものを包含する：スチレ
ン−ジビニルベンゼン型コポリマー、置換スチレン−ジ
ビニルベンゼン型コポリマー；メタクリル酸型ポリマ
ー、スチレン−アリルアクリレート型コポリマー、他の
ビニルのポリマーまたはコポリマーなどの粒体に形成さ
れたポリマー。非イオン性吸着樹脂の多孔度の指数とし
て、比表面積を使用する。３０〜２，０００ｍ2／ｇの
比表面積を有する非イオン性吸着樹脂を適当に使用し、
そして１００〜１，０００ｍ2／ｇの比表面積を有する
ものはとくに好ましい。非イオン性吸着樹脂へのＬＬ−
Ｅ１９０２０アルファおよびＬＬ−Ｅ１９０２０ベータ
の吸着は、主としてファンデルワールス力により引き起
こされると推定される。このような吸着の特定の例とし
て、ダイアイオン（Ｄｉａｉｏｎ）ＨＰ−１０、ＨＰ−
２０、ＨＰ−２１、ＨＰ−３０、ＨＰ−４０、ＨＰ−５
０、ＳＰ−２０６、ＳＰ−８００、ＳＰ−９００、ＨＰ
−ＭＧ１ＭＧおよびＨＰ−ＭＧ２ＭＧ［すべてはミツビ
シ・ケミカル・インダストリーズ・リミテッド製であ
る］およびアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）ＸＡ
Ｄ−１、ＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４、ＸＡＤ−５およびＸ
ＡＤ−７［すべてはローム・アンド・ハース・カンパニ
ー（Ｒｏｈｍ ａｎｄ Ｈａａｓ Ｃｏ．製である］お
よびアーンバークロム（Ａｍｂｅｒｃｈｒｏｍ）ＣＧ１
６１Ｍ［トソ−ハース（Ｔｏｓｏ−Ｈａａｓ）製］をの
べることができるが、これらに限定されない。本発明の
方法において適当に使用される非イオン性吸着樹脂に関
すると、次の参考文献に詳細に記載されている：アイ・
アンド・プロダクト・リサーチ・アンド・ディベロップ
メント（Ｉ ＆ＥＣ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｒｅｓｅａｒｃ
ｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、７、１０７
（１９６８）；「アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔ
ｅ）ＸＡＤ」、ジャパン・オルガノ・カンパニー・リミ
テッド（Ｊａｐａｎ Ｏｒｇａｎｏ Ｃｏ．，Ｌｄｔ）
発行；米国特許第３，７２５，４００号。
【００２０】スチレン−ジビニルベンゼンの高度に多孔
質のコポリマー、例えば、ミツビシ・ケミカル（Ｍｉｔ
ｓｕｂｉｓｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）、ニューヨーク州
ニューヨーク、パークアベニュー２７７、により製造さ
れるＨＰ−２０樹脂は好ましい。
【００２１】われわれは、本発明による方法を使用し
て、ＬＬ−Ｅ１９０２０アルファおよびＬＬ−Ｅ１９０
２０ベータを産生するストレプトミセス・リジクス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｙｄｉｃｕｓ）種ｔａｎｚ
ａｎｉｕｓ ＮＲＲＬ １８０３６の菌株から得られた
発酵ブロスの中に存在する抗生物質ＬＬ−Ｅ１９０２０
アルファおよびベータの精製に適当な方法を開発した。
この新規な方法は、ｐＨの調節、溶媒の希釈およびスチ
レンジビニルベンゼン樹脂のクロマトグラフィーによる
吸着および引き続くＨＰＬＣの最後の精製による、発酵
した抗生物質の初期の部分的精製を包含する。
【００２２】この方法は、ＬＬ−Ｅ１９０２０アルファ
およびＬＬ−Ｅ１９０２０ベータが実験の研究で非常に
大規模で頻繁に産生されるために、ＬＬ−Ｅ１９０２０
アルファおよびＬＬ−Ｅ１９０２０ベータにとくに適当
である。
【００２３】それ以上の苦心しないで、当業者は、上の
説明を使用して、本発明を完全に利用することができる
と信じられる。したがって、次の好ましい特定の実施態
様は、単に例示であり、そしてこの開示の残部をまった
く限定しないと解釈すべきである。
【００２４】
【実施例】実施例１ 接種物の調製 一次接種物の成長に使用した典型的な培地を、次の処方
に従い調製する： デキストロース １．０％ デキストリン ２．０％ 酵母エキス ０．５％ ＮＺ Ａｍｉｎｅ Ａ ０．５％ 炭酸カルシウム ０．１％ 水 適量 １００．０％ 注：ＮＺ Ａｍｉｎｅ Ａは、カゼインの膵臓消化物に
ついてのシェフィールド・ケミカル（Ｓｃｈｅｆｆｉｅ
ｌｄ Ｃｈｍｅｍｉｃａｌ、ニューヨーク、ノーウィッ
チ）の登録商標である。
【００２５】この培地を滅菌し、そして１００ｍｌを５
００ｍｌのフラスコ内でストレプトミセス・リジクス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｙｄｉｃｕｓ）種ｔａ
ｎｚａｎｉｕｓ ＮＲＲＬ １８０３６で接種する。次
いでこの培地を回転震盪器上に配置し、そして２８℃に
おいて４８時間インキュベーションして一次接種物を調
製する。次いでこの一次培養物を使用して、撹拌しかつ
通気したびんの中の１０リットルの同一の無菌の接種物
を接種するが、ただし０．３％ｖ／ｖのシリコーン消泡
剤をまた添加する。次いで、この二次接種物を使用し
て、槽の中の３００リットルの同一の無菌の培地を接種
する。この培地を３２℃において、２００リットル／分
の無菌の空気の流れを使用して２００ｒｐｍの羽根車で
撹拌しながら４４時間成長させ、三次接種物を得る。
【００２６】実施例２ 発酵 次の処方の発酵培地を調製する： デキストリン ７．０％ デキストロース ０．５％ 大豆粉末 １．５％ トーモロコシ滲出液 ０．５％ 炭酸カルシウム ０．５％ シリコーン消泡剤 ０．３％ 水 適量 １００．０％ この培地を滅菌し、次いで１５０リットルの実施例１か
らの三次接種物で１５００リットルの最終体積に接種す
る。発酵を３０℃において、０．６リットルの空気／リ
ットルのマッシュ／分の無菌の空気の流れを使用して１
００〜１１０ｒｐｍの羽根車で撹拌しながら１２３時間
の間、発酵を実施し、このときマッシュを収穫する。
【００２７】実施例３ 次の処方の発酵培地を調製する： デキストリン ７．０％ デキストロース ０．５％ 大豆粉末 １．５％ トーモロコシ滲出液 ０．５％ 炭酸カルシウム ０．５％ シリコーン消泡剤 ０．３％ 水 適量 １００．０％ この培地を滅菌し、次いで３００リットルの実施例１に
おけるように調製したの三次接種物で３０００リットル
の最終体積に接種する。発酵を２８℃において、０．６
５リットルの空気／リットルのマッシュ／分の無菌の空
気の流れを使用して１００〜１１０ｒｐｍの羽根車で撹
拌しながら８９時間の間、発酵を実施し、このときマッ
シュを収穫する。
【００２８】実施例４ ＬＬ−Ｅ１９０２０アルファおよびベータの分離および
精製 実施例２および実施例３に記載するように実施した２回
の発酵からの収穫マッシュを、２５７０リットルの合計
の体積にし、２８リットルのトルエンで希釈する。１１
リットルの濃塩酸でｐＨ４．５にする。撹拌しながら、
１９５０リットルのメチルアルコールを添加する。６時
間撹拌し、そしてｐＨを連続的にモニターする。この混
合物に２５０ポンドのケイ藻土を添加し、次いで１５分
間撹拌する。この混合物をフィルタープレスを通して濾
過し、もとのマッシュ体積に基づいて１５％の体積のメ
チルアルコールで洗浄する。集められる合計の体積は４
２６５リットルである。樹脂を６００リットルのアセト
ンおよび９００リットルの脱イオン水で洗浄することに
よって前以て調製し、引き続いて使用直前に３００リッ
トルの脱イオン水で２〜３リットル／分の速度でフラッ
シュした、８０ガロンのＨＰ−２０カラムに、上の４２
６５リットルの溶離液を３〜４リットル／分の速度で添
加する。合計の集められた流出液は４４００リットルで
ある。このカラムを６００リットルの脱イオン水で４〜
５リットル／分の速度で洗浄する。このカラムは４８０
リットルの脱イオン水および１２０リットルのアセトン
からつくった溶液で２〜３リットル／分の速度で洗浄し
て、１５０リットルの分画が得られ、これをらを集めそ
してＦ１〜Ｆ４と表示する。このカラムは２４０リット
ルの脱イオン水および２４０リットルのアセトンからつ
くった溶液で２〜３リットル／分の速度で洗浄する。集
められた４つの１５０リットルの分画をＦ５〜Ｆ８と表
示する。このカラムを２４０リットルの水および３６０
リットルのアセトンからつくった溶液でさらに洗浄し
て、４つの１５０リットルの集められた分画をＦ９〜Ｆ
１２と表示する。このカラムを１２０リットルの水およ
び４８０リットルのアセトンからつくった溶液でさらに
洗浄して、４つの１５０リットルの集められた分画をＦ
１３〜Ｆ１６と表示する。このカラムを最後に６００リ
ットルのアセトンで洗浄し、そして４つの１５０リット
ルの集められた分画をＦ１７〜Ｆ２０と表示する。活性
な１５０リットルの分画の各を５０ガロンのかまを使用
して３０〜４０リットルに分離し、そしてさらに回転蒸
発器で６〜８リットルに蒸発させる。分画Ｆ１０〜Ｆ１
５を凍結乾燥して、次の固体が得られる： Ｆ１０ ４２０．９ｇ Ｆ１１ １４２．５ｇ Ｆ１２ ６２４．５ｇ Ｆ１３ ３８．９ｇ Ｆ１４ ４６４．１ｇ Ｆ１５ １１１．３ｇ 分画１１〜１５はほぼ５０重量％のＬＬ−Ｅ１９０２０
アルファであり、こうしてもとの方法において得られた
中間体より少なくとも２倍の純度の改良を表す。
【００２９】分画Ｆ１１、Ｆ１３、Ｆ１５を一緒にし、
そして１２リットルの逆相カラム（Ｃ18結合相５５〜１
０５ミクロン、８０公称粒子サイズ）に適用し、そして
１％の酢酸の中の４１％のアセトニトリルで溶離する。
２５の２０リットルの分画を集め（Ｆ１〜Ｆ２５）次い
でカラムを３×２０リットルのメタノールで洗浄する。
洗浄液を蒸発すると、Ｅ１９０２０ベータが得られる。
分画Ｆ１４〜Ｆ２５を一緒にし、そして１２０リットル
の塩化メチレンで抽出する。有機層を分離し、蒸発さ
せ、そして９つの他の同一サイズのランと一緒にする。
濃縮物をさらに濃縮物してシロップにし、そしてｔ−ブ
タノール中に溶解し、そして凍結乾燥すると、９９９．
９ｇのＥ１９０２０アルファ、ＨＰＬＣにより決定して
８５％の純度、が得られる。
【００３０】本発明の主な特徴および態様は、次の通り
である。
【００３１】１、ストレプトミセス・リジクス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｙｄｉｃｕｓ）種ｔａｎｚａｎ
ｉｕｓ ＮＲＲＬ １８０３６の菌株を、炭素および窒
素の同化可能な源を含有する水性栄養培地中で、深部好
気的条件下に、発酵することによって産生された産生物
を、（ａ）非イオン性樹脂上に抗生物質ＬＬ−Ｅ１９０
２０アルファおよびＬＬ−Ｅ１９０２０ベータを吸着さ
せ、（ｂ）水性培地から樹脂を分離し、（ｃ）抗生物質
を樹脂から適当な溶媒混合物で溶離し、（ｄ）工程ｃに
おいて集めた分画を適当な支持体の高圧液体クロマトグ
ラフィーにより適当な溶媒混合物で精製する、ことによ
って、回収ことからなる、抗生物質ＬＬ−Ｅ１９０２０
アルファおよびＬＬ−Ｅ１９０２０ベータを産生する方
法。
【００３２】２、ストレプトミセス・リジクス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｙｄｉｃｕｓ）種ｔａｎｚａｎ
ｉｕｓ ＮＲＲＬ １８０３６の菌株を、炭素および窒
素の同化可能な源を含有する水性栄養培地中で、深部好
気的条件下に、発酵することによって産生された産生物
を、（ａ）非イオン性樹脂カラム上に抗生物質ＬＬ−Ｅ
１９０２０アルファおよびＬＬ−Ｅ１９０２０ベータを
適当な溶媒混合物で吸着させ、（ｂ）樹脂カラムを適当
な溶媒混合物で溶離し、そして分画を集め、（ｃ）工程
ｂにおいて集めた分画を適当な支持体の高圧液体クロマ
トグラフィーにより適当な溶媒混合物で精製する、こと
によって、回収ことからなる、抗生物質ＬＬ−Ｅ１９０
２０アルファおよびＬＬ−Ｅ１９０２０ベータを産生す
る方法。
【００３３】３、吸着に吸着された抗生物質を水混和性
有機溶媒で溶離する、上記第１項記載の方法。
【００３４】４、抗生物質以外の不純物および副生物を
水で溶離除去した後、抗生物質の前記溶離液を吸着剤に
吸着させる、上記第１項記載の方法。
【００３５】５、工程ｃにおける適当な溶媒混合物はア
セトン−水である、上記第１項記載の方法。
【００３６】６、工程ｄにおける適当な支持体は逆相カ
ラム（Ｃ18結合相５５〜１０５ミクロン［８０ミクロン
公称］粒子サイズ）である、上記第１項記載の方法。
【００３７】７、工程ｄにおける適当な混合物は水性酢
酸アンモニウム−アセトニトリルｐＨ４．５であるか、
あるいは０．１％または１％の水性酢酸−アセトニトリ
ルである、上記第１項記載の方法。
【００３８】８、吸着剤に吸着された抗生物質を水混和
性有機溶媒で溶離する、上記第２項記載の方法。
【００３９】９、抗生物質以外の不純物および副生物を
水で溶離除去した後、抗生物質の前記溶離液を吸着剤に
吸着させる、上記第２項記載の方法。
【００４０】１０、工程ｂにおける適当な溶媒混合物は
アセトン−水である、上記第２項記載の方法。
【００４１】１１、工程ｂにおける適当な支持体は逆相
カラム（Ｃ18結合相５５〜１０５ミクロン［８０ミクロ
ン公称］粒子サイズ）である、上記第２項記載の方法。
【００４２】１２、工程ｃにおける適当な混合物は水性
酢酸アンモニウム−アセトニトリルｐＨ４．５である
か、あるいは０．１％または１％の水性酢酸−アセトニ
トリルである、上記第２項記載の方法。
フロントページの続き (72)発明者 デイビツド・アール・ウイリアムズ アメリカ合衆国ニユーヨーク州10980スト ーニーポイント・フラドコート５ (72)発明者 フエルナンド・ピノ アメリカ合衆国ニユーヨーク州10989バレ イコテージ・ローリングウツドウエイ676

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ストレプトミセス・リジクス（Ｓｔｒｅ
    ｐｔｏｍｙｃｅｓｌｙｄｉｃｕｓ）種ｔａｎｚａｎｉｕ
    ｓ ＮＲＲＬ １８０３６の菌株を、炭素および窒素の
    同化可能な源を含有する水性栄養培地中で、深部好気的
    条件下に、発酵することによって産生された産生物を、 （ａ）非イオン性樹脂上に抗生物質ＬＬ−Ｅ１９０２０
    アルファおよびＬＬ−Ｅ１９０２０ベータを吸着させ、 （ｂ）水性培地から樹脂を分離し、 （ｃ）抗生物質を樹脂から適当な溶媒混合物で溶離し、 （ｄ）工程ｃにおいて集めた分画を適当な支持体の高圧
    液体クロマトグラフィーにより適当な溶媒混合物で精製
    する、ことによって回収ことを特徴とする抗生物質ＬＬ
    −Ｅ１９０２０アルファおよびＬＬ−Ｅ１９０２０ベー
    タの産生方法。
  2. 【請求項２】 ストレプトミセス・リジクス（Ｓｔｒｅ
    ｐｔｏｍｙｃｅｓｌｙｄｉｃｕｓ）種ｔａｎｚａｎｉｕ
    ｓ ＮＲＲＬ １８０３６の菌株を、炭素および窒素の
    同化可能な源を含有する水性栄養培地中で、深部好気的
    条件下に、発酵することによって産生された産生物を、 （ａ）非イオン性樹脂カラム上に抗生物質ＬＬ−Ｅ１９
    ０２０アルファおよびＬＬ−Ｅ１９０２０ベータを適当
    な溶媒混合物で吸着させ、 （ｂ）樹脂カラムを適当な溶媒混合物で溶離し、そして
    分画を集め、 （ｃ）工程ｂにおいて集めた分画を適当な支持体の高圧
    液体クロマトグラフィーにより適当な溶媒混合物で精製
    する、ことによって回収ことを特徴とする抗生物質ＬＬ
    −Ｅ１９０２０アルファおよびＬＬ−Ｅ１９０２０ベー
    タの産生方法。
JP4264178A 1991-09-09 1992-09-08 抗生物質ｌｌ−ｅ１９０２０アルフアおよびベータの改良された回収方法 Pending JPH05207889A (ja)

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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4029548A (en) * 1976-05-07 1977-06-14 The Upjohn Company Process for producing antibiotics U-50,147 and U-51,738
US4252971A (en) * 1979-07-30 1981-02-24 The Upjohn Company Chromatographic process
DE3000841A1 (de) * 1980-01-11 1981-07-16 Bayer Ag, 5090 Leverkusen Isolierung und reinigung von aminoglycosid-antibiotiaka
US4399274A (en) * 1981-07-02 1983-08-16 Merck & Co., Inc. Isolation of non-ionic lipophilic materials on macroreticular polymeric absorbents
IT1155446B (it) * 1982-12-23 1987-01-28 Erba Farmitalia Procedimento per la purificazione di glucosidi antraciclinonici mediante adsobimento selettivo su resine
IT1194181B (it) * 1983-03-30 1988-09-14 Erba Farmitalia Procedimento migliorato per la purificazione della tilosina
US4704276A (en) * 1986-06-30 1987-11-03 American Cyanamid Company Compositions and methods for increasing the growth rate of meat producing animals, improving the efficiency of feed utilization thereby and enhancing lactation in lactating ruminants
US4705688A (en) * 1986-06-30 1987-11-10 American Cyanamid Company Antibiotic LL-E19020 α and β
US5077277A (en) * 1989-09-05 1991-12-31 American Cyanamid Company Chemical derivatives of antibiotics ll-e19020 alpha and beta

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ZA926826B (en) 1993-03-15
IE922641A1 (en) 1993-03-10
IL103084A0 (en) 1993-02-21
NZ244197A (en) 1995-06-27
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