JPH05238949A - 注射用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】生体内における薬理作用の持続時間の短いペプ
チドの生体内における薬理作用の持続時間を長くする医
薬組成物を提供する。 【構成】ラットにおけるクリアランスが体重１キログラ
ムあたり３０ミリリットル／時間以上である水溶性ペプ
チドと常温でワックス様固体の平均分子量２０００〜６
０００のポリエチレングリコールを配合してなる水溶性
注射用医薬組成物は、該ペプチドの生体内における薬理
作用が持続される。 【効果】本発明の組成物は、該ペプチドの生体内におけ
る薬理作用が持続される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、代謝や排泄の速いペプ
チドの生体内における薬理作用を持続させる製剤として
有用な注射用医薬組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】ペプチドは薬理効果が強いにもかかわら
ず体液内に投与された後の分解、排泄が速やかであるた
めに注射などによる頻回投与が必要な場合が多い。従っ
てこれらの物質の持続性製剤の開発は注射回数を減らせ
ることにより患者の苦痛を軽減し、また体液中濃度を持
続的に一定有効濃度範囲に保つことにより有効性を高
め、あるいは体液中濃度の急激な変動による副作用を軽
減することが必要である。このような持続性製剤を製造
する目的で、ポリエチレングリコールを用いる試みがな
されているが、未だ充分ではない。

【０００３】たとえば、イギリス特許第１３８５９１４
号公報には、カゼイン、コラーゲン、ケラチンなどの加
水分解物をアシル化（パルミトイル化、ラウロイル化、
ステアロイル化など）することにより脂溶性をあげたも
のを、ポリオキシエチレングリコールなどの両親媒性溶
媒に溶解させることにより、皮下組織へ有効に浸透させ
うる皮膚外用剤の技術が開示されているが、水溶性ペプ
チドを製剤化することについては全く示されておらず、
しかも、注射剤として使用することも全く示されていな
い。ＰＣＴ国際出願公開第ＷＯ８９／０９６１０号公報
においては腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）同士の会合、凝集を
減少せしめる目的でポリエチレングリコールなどを配合
する水分含有量の低い凍結乾燥製剤の技術が開示されて
いる。しかしながら、ポリエチレングリコールの分子
量、配合割合については具体的に示されていない。ま
た、生体に投与後の腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の生体内動
態に及ぼす配合されたポリエチレングリコールの影響に
ついても示されていない。

【０００４】ＰＣＴ国際出願公開第ＷＯ８９／０５１５
８号公報においては分子量９００〜１６００、より好ま
しくは分子量１９０〜４２０、特に好ましくは分子量２
８５〜３１５（通常ポリエチレングリコール３００と称
される）の非電解物質であるポリエチレングリコールを
５％〜５０％（ｖ／ｖ）、特に好ましくは２５％（ｖ／
ｖ）という高濃度に安定化剤または可溶化剤として含む
インターフェロンベータ（ＩＦＮ−β）蛋白質注射剤の
技術が開示されている。該公報においては常温で液状の
ポリエチレングリコールが使用されているため、ペプチ
ド、蛋白質を安定に保存できる製剤として通常採用され
る真空乾燥あるいは凍結乾燥の手法は応用することはで
きない。即ち、該出願において使用されるポリエチレン
グリコールの濃度、分子量の組み合わせでは凍結乾燥は
不可能であると記載されている。また、生体に投与後の
インターフェロンベータ蛋白質の生体内動態へのポリエ
チレングリコールの影響については示されていない。ポ
リエチレングリコールの分子量が小さいほど刺激性が強
いので、分子量の低いポリエチレングリコールを高濃度
に含む製剤は避けるのがよいと考えられる。特開昭６１
−９７２２９号公報にはポリエチレングリコールなどを
配合してなる安定なエリスロポエチン製剤の技術が開示
されている。しかしながら、ここでは単にポリエチレン
グリコール４０００を０.２５％あるいは０.５％含む製
剤が示されているものの、使用するポリエチレングリコ
ールの分子量、最終製剤中の濃度など、有効な製剤の調
整法については開示されていない。特開昭６３−１２２
６２８号公報にはインターリューキン２とポリエチレン
グリコールモノステアレート化合物とを、ＰＣＴ国際出
願公開第ＷＯ８９／０２７５０号公報にはインターフェ
ロンベータとポリエチレングリコールモノステアレート
化合物とをそれぞれ安定化剤、可溶化剤として配合する
技術が開示されている。すなわち、ここではポリエチレ
ングリコールが非イオン性界面作用を有する誘導体とし
て用いられている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】クリアランスの大きい
（すなわち、生体内における薬理作用の持続時間が短
い）水溶性ペプチドの生体内における薬理作用の持続時
間を長くすることができれば、注射による投与回数を減
らすことにより患者の苦痛が軽減され、また体液中の薬
物濃度が持続的に一定有効濃度範囲に保たれるために薬
物の有効性が高まる。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記の問題
点を解決するため鋭意研究をおこなった結果、常温でワ
ックス様固体の平均分子量２０００〜６０００のポリエ
チレングリコールを配合することにより、ラットにおけ
るクリアランスが体重１キログラムあたり３０ミリリッ
トル／時間以上である水溶性医薬活性ペプチドの薬理活
性を損なわないことはもちろんのこと、低粘度下でその
薬理作用を持続させうる凍結乾燥可能な水溶性持続性注
射製剤が得られることを見いだし、これに基づきさらに
鋭意研究をおこなった結果本発明を完成するに至った。
本発明は、(１)、ラットにおけるクリアランスが体重１
キログラムあたり３０ミリリットル／時間以上である水
溶性ペプチドと常温でワックス様固体の平均分子量２０
００〜６０００のポリエチレングリコールを配合してな
る水溶性注射用医薬組成物，(２)、さらに、生体内に注
入可能な実質的に薬理活性を持たない水溶性蛋白を配合
してなる上記(１)の医薬組成物、および(３)さらに、酸
性ムコ多糖類を配合してなる上記(１)または(２)の医薬
組成物である。

【０００７】本発明の組成物において、主薬としては、
ラットにおけるクリアランスが体重１キログラムあたり
３０ミリリットル／時間以上である水溶性ペプチドが用
いられる。上記でいう水溶性の程度としては、オクタノ
ール／水分配比が０.１以下であることが挙げられる。
本発明でいう水溶性ポリペプチドはラットにおけるクリ
アランスが体重１キログラムあたり３０ミリリットル／
時間以上で生理活性を有するペプチドであれば特に限定
されない。たとえば、抗生物質、増血剤、感染症治療
剤、抗痴呆剤、抗ウィルス剤、抗腫瘍剤、解熱剤、鎮痛
剤、消炎剤、抗潰瘍剤、抗アレルギー剤、抗欝剤、向精
神薬、強心剤、不整脈治療剤、血管拡張剤、降圧利尿剤
などの降圧剤、糖尿病治療剤、抗凝血剤、コレステロー
ル低下剤、骨粗しょう症治療剤、ホルモン剤、ワクチン
などとして用いられるものであって、上記のクリアラン
スで特定されるものが挙げられる。

【０００８】本発明で用いられる該ペプチドとしては、
２個以上のアミノ酸から構成される医薬活性を持つペプ
チドおよびその誘導体が用いられ、分子量約２００〜２
０００００のものが好ましい。また、これらペプチドの
作用機作としてアンタゴニスト、アゴニスト、またはこ
れらの可溶性リセプターおよびそれらの誘導体も挙げら
れる。また、糖鎖を有するものについては糖鎖構造の異
なるものも含まれる。また、ポリエチレングリコールな
どの合成ポリマーあるいはヒアルロン酸などの天然ポリ
マーで修飾されていてもよいし、任意の糖あるいは非ペ
プチド性化合物で修飾されていてもよい。該修飾におい
て付加される物質が任意のレセプター、抗体などへ結合
しうるものでもよい。また、本来の薬理活性を発現する
のに必要なアミノ酸構造に加えて例えば任意のレセプタ
ー、抗体などへ結合しうるペプチドを付加したハイブリ
ッドペプチドも含まれる。該ペプチドとしては天然物由
来あるいは遺伝子組換えにより製造されたインターフェ
ロン類（例えばインターフェロンアルファ類、インター
フェロンベータ類、インターフェロンガンマー類な
ど）、造血因子、例えば顆粒球コロニー刺激因子、（Ｇ
−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子
（ＧＭ−ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子
（Ｍ−ＣＳＦ）、インターリューキン類（例えばＩＬ−
１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−
６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ
−１１）などが挙げられる。また、該ペプチドとしては
天然物由来あるいは遺伝子組換えにより製造された成長
因子類、例えば神経成長因子（ＮＧＦ）、ニューロトロ
ピックファクター（ＮＴＦ）、脳神経細胞に作用を持つ
ペプチド類、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）、インスリン
様成長因子類（ＩＧＦ）、成長ホルモン（ＧＨ）、肝細
胞成長因子（ＨＧＦ）、繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）
などが挙げられる。また、該ペプチドとしては副甲状腺
ホルモン（ＰＴＨ）、エンドセリンなどが挙げられる。
また、該ペプチドとしては糖鎖を有するもの、糖鎖構造
の異なる活性を持つこれらの因子、または糖鎖を含まな
いこれらの因子、またはこれらのミューテイン、または
これらの誘導体、類縁体、またはこれらの活性フラグメ
ントが挙げられる。また、該ペプチドは血小板増殖作用
を持つ生理活性ペプチドで、糖鎖があっても無くてもよ
い。

【０００９】さらに、該ペプチドとしては、トランスフ
ォーミンググロースファクター（ＴＧＦ）、インスリ
ン、リンホトキシン、血小板由来細胞成長因子（ＰＤＧ
Ｆ），アンジオテンシンＩ、アンジオテンシンII、アン
ジオテンシンIII、アンジオテンシンＩイ ンヒビター、
ブラジキニン、ダイノルフィン、キョートルフィン、エ
ンドルフィン、エンケファリン、セクレチン、バソプレ
シン、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、黄体形成ホル
モン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）またはその誘導体、ニュ
ーロテンシン、オキシトシン、バソプレシン、バソプレ
シン誘導体｛デスモプレシン（日本内分泌学会雑誌、第
５４巻第５号第６７６−６９１頁（１９７８））参
照｝、ヒルジンまたはその誘導体、グルカゴン、ガスト
リン、カルシトニン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド
（ＣＧＲＰ）、プロラクチン、副腎皮質刺激ホルモン
（ＡＣＴＨ）、メラノサイト刺激ホルモン（ＭＳＨ），
甲状腺ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）その塩およびそ
の誘導体（特開昭５０−１２１２７３号、特開昭５２−
１１６４６５号公報参照）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳ
Ｈ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン
（ＦＳＨ）、パンクレオザイミン、コレシストキニン、
ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）、タフトシン、サ
イモシン、サイモスチムリン、モチリン、ボンベシン、
セルレイン、ブラディキニン、カリクレイン、サブスタ
ンスＰ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）またはこれらのミュー
テイン、誘導体、類縁体、活性フラグメントが挙げられ
る。また、該ペプチドとしては心房性ナトリウム利尿ホ
ルモン（ＡＮＰ）またはこれの類縁ペプチドなどが挙げ
られる。また、該ペプチドは天然物由来あるいは遺伝子
組換えにより製造された酵素でもよく、糖鎖が有っても
無くてもよく、また糖鎖構造の異なるものでもよく、ま
たこれらのミューテイン、または誘導体、または活性フ
ラグメントでもよく、例えばウロキナーゼ、スーパーオ
キサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、ティッシュータイ
ププラスミノーゲンアクチベーター（ＴＰＡ）、アスパ
ラギナーゼ、リゾティームなどが挙げられるが、これら
に限定される訳ではなく、また他の投与可能な酵素類も
含まれる。

【００１０】ワクチンは抗原となる天然物由来あるいは
合成あるいは遺伝子組換えにより製造されたペプチド、
蛋白質、あるいは天然物由来の非ペプチド性抗原物質、
あるいはこれらの混合物があげられ、これら単独あるい
はハプテンに結合、あるいはアジュヴァントとともに注
射剤として投与されるものであり、例えば杉花粉、ぶた
くさ花粉などが挙げられるが、これに限定されるもので
はない。

【００１１】なお、ヒトおよび他の温血動物における薬
物の代謝、排泄能力の指標であるクリアランスが小さい
ペプチド、例えばヒトにおけるクリアランスが体重１キ
ログラムあたり約１５ミリリットル／時間以下のペプチ
ドはもともと身体からの排出が遅く、持続は充分得られ
ている。また、副作用の発現が懸念されたり、薬理効果
が非常に強く、過剰量の投与が患者に不利益をもたらす
ようなペプチドは患者の経過観察を行ないながら慎重に
投与する必要がある。このため、これら二つの条件にあ
てはまるペプチドにおいては持続性製剤は必要ではな
い。例えば遺伝子組換えヒトエリスロポエチンのヒトに
おける通常薬用量である１０マイクログラム（１８００
国際単位）、あるいは２０マイクログラムをヒトに静脈
内投与した場合の血清中エリスロポエチン濃度を用いて
計算されたクリアランスの平均値はそれぞれ７５８ミリ
リットル／時間、あるいは７３９ミリリットル／時間と
報告されている（宇治康明ら、診療と新薬、２６巻、１
ページ〜、１９８９年）。それぞれの群の平均体重は６
５.８キログラム、あるいは６９.３キログラムであるの
で、体重１キログラムあたりのクリアランスはそれぞれ
１１.５ミリリットル／時間、あるいは１０.７ミリリッ
トル／時間と計算される。該論文においては投与量を２
マイクログラムおよび０.２マイクログラムにまで下げ
てヒトに静脈内投与されているが、血清中濃度下面積
（ＡＵＣ）は投与量に比例しており、薬物動態は線形性
が保たれていたことが報告されており、エリスロポエチ
ンのクリアランスは０.２マイクログラムから２０マイ
クログラムの投与量の範囲内では投与量依存性は無いこ
とが報告されている。ちなみに、該エリスロポエチンの
ヒトに静脈内投与した後の半減期（投与後２時間から８
時間まで）の平均値は１０マイクログラム投与群では
３.３時間、２０マイクログラム投与群では５.２時間と
非常に長く、投与後４８時間目においても血清中に数ピ
コグラム／ミリリットルから数十ピコグラム／ミリリッ
トル残存していた。これらのことから、臨床に供されて
いるエリスロポエチン製剤は週１〜３回程度の頻度での
投与でよいとされている。また、必要以上の増血となら
ないように週１回あるいは２週間に１回ヘモグロビン濃
度あるいはヘマトクリット値を測定し、必要以上の増血
を認めた場合には休薬することが求められている。この
ため、エリスロポエチンの持続性製剤を開発しても必要
以上の増血が起きた場合にはコントロールすることがで
きず、患者の利益にはならない。また、ラットを実験動
物として用いた場合のエリスロポエチンのクリアランス
は体重１キログラムあたり１９.４ミリリットル／時間
と報告されており（投与量は体重１キログラムあたり５
００国際単位）ヒトにおけると同様に代謝、排泄が遅い
（奥村一夫他、薬理と治療、第１８巻、追補、１４１ペ
ージ〜１６２ページ（１９９０年））。ラット、ヒトな
どの温血動物のクリアランスは体重の関数として表すこ
とができることが報告されており（ボクセンバウムら、
ジャーナル オブ ファルマコキネティックス アンド
バイオフォーマシューティックス、第１０巻、２０１
ページ〜２２７ページ（１９８２年）が代表的な文献と
して挙げられる）、エリスロポエチンにおけるラットと
ヒトの体重１キログラムあたりのクリアランスの関係
は、他のペプチドにおいてもほぼ成立することは明らか
である。つまり、ラットにおけるクリアランスが小さい
ペプチドはヒトにおけるクリアランスも小さいことがほ
ぼ確実に推定できる。本発明におけるクリアランスとは
身体全体が薬物を処理する速度をその時の循環血液中濃
度で除したものと定義され、単位時間あたりに身体が薬
物を処理できる体液の容積を表し、この値が大きいほど
身体の薬物処理能力が高い（ジー、アール、ウイルキン
ソン、ファーマコロジーレビュー、３９巻、１ページ
〜、１９８７年。花野学ら、ファーマコキネティックス
応用編（南山堂）、１９８９年）。血漿中（血清中）薬
物濃度を基準にした場合にはＣＬＰ、全血中薬物濃度を
基準にした場合にはＣＬＢと表記される。本発明におけ
るクリアランスは総クリアランス（ＣＬＴＯＴ）と称さ
れる場合もあるが、血漿中（血清中）あるいは全血中の
いづれを基準にするかによりＣＬＰあるいはＣＬＢと読
み換えられる。通常、これらの値は静脈内投与投与され
た薬物量を血漿中（血清中）あるいは全血中の薬物濃度
下面積（ＡＵＣ）でを除したものとして表される。ま
た、クリアランスはファーマコキネティックスの分野で
用いられる他の公知の学術用語で定義されることもある
が、その意味するところは同一である。

【００１２】本発明にあっては、ポリエチレングリコー
ルは、常温でワックス様固体であって、平均分子量２０
００〜６０００のものが用いられる。本発明でいう常温
とは日本薬局方で規定されている温度範囲であり、具体
的には１５℃〜２５℃をいう。ワックス様固体として
は、液体ではなく白色のワックスに外観が類似する固体
が挙げられる。本発明においては平均分子量２０００か
ら６０００までのポリエチレングリコールが用いられ
る。より好ましくは平均分子量が２０００〜５０００で
ある。さらに好ましくは平均分子量が２０００〜４５０
０である。また、異なる分子量のものを混合して用いて
もよい。本発明でいう分子量とは、日本薬局方に記載さ
れているマクロゴール４００の平均分子量決定試験によ
り求められる分子量をいう。該ポリエチレングリコール
の例としては、たとえば平均分子量２０００のもの，平
均分子量３０００のもの，平均分子量４０００のものな
どが挙げられる。

【００１３】ペプチド製剤の保存は常温での取り扱いが
簡便であるが、水溶液の状態では低温保存に比較して分
解が促進されることが多く、また、ペプチドなどにおい
ては液体状態で振動などの物理的刺激を受けることによ
り薬理活性を失うものがあることが知られている。そこ
でペプチドの製剤特に注射用製剤としては真空乾燥、特
に凍結乾燥による製剤化が好まれ、通常常温で流通、保
存される。本発明の水溶性医薬用組成物の水溶液を真空
乾燥あるいは凍結乾燥で製剤化をおこなう場合に常温で
液体のポリエチレングリコールを使用すると凍結乾燥後
に常温で液体が残存することになり特にペプチドなどの
薬理活性を損ねる可能性が高い。一方、常温で固体のポ
リエチレングリコールを使用すると凍結乾燥後にも常温
で固体で存在するためにペプチド特にペプチドの薬理活
性を損ねないために保存性に優れている。パーキンエル
マー社示差走査カロリメーター（ＤＳＣ７）を用いて常
温で固体のポリエチレングリコールの融点を測定したと
ころ（昇温速度は１０℃／分）、ポリエチレングリコー
ル１０００（和光一級、平均分子量１０００）は２６.
７８℃および３６.５８℃に熱移動のピークがみられ
た。ポリエチレングリコール１５４０（和光一級、平均
分子量１５００）の熱移動のピークは４７.３２℃であ
ったが、３０℃近辺から有意な熱移動が起きていること
が確認された。日本薬局方において室温は１℃〜３０℃
と規定されており、また日本国内においても盛夏時には
３０℃以上に気温が上昇することは周知のことである。
かかる条件下での冷所保存でない医薬製剤の流通、保存
においては３０℃あるいはそれ以上の温度に該医薬製剤
が暴露される機会は十分にある。従って、ポリエチレン
グリコール１０００あるいは１５４０を使用することに
より、例えば凍結乾燥製剤中でこれらのポリエチレング
リコールの融解が起きることが予想されるため、これら
の使用は好ましくない。一方、ポリエチレングリコール
２０００（和光一級、平均分子量２０００）においては
熱移動のピークは５２.３９℃であり、有意な熱移動は
４０℃近辺から起こっていた。また、ポリエチレングリ
コール４０００（和光一級、平均分子量３０００）の熱
移動のピークは５８．９４℃、ポリエチ レングリコー
ル６０００（和光一級、平均分子量７５００）の熱移動
のピークは６３.５６℃であった。これらの結果より、
平均分子量１５４０以下のポリエチ レングリコールは
真空乾燥あるいは凍結乾燥による製剤化をおこなう医薬
組成物に使用する場合には不適である。一方、平均分子
量２０００あるいはそれ以上の平均分子量で本発明にお
いて用いられている示差走査カロリメーターによる融点
測定において４０℃近辺から有為な熱移動が起きるよう
なポリエチレングリコールを使用することで常温あるい
は室温での流通、保存中のポリエチレングリコールの融
解は防止できる。

【００１４】本発明における体液内に注入しうる実質的
に薬理活性を持たない水溶性蛋白質としては血清アルブ
ミン、ポリクローナルあるいはモノクローナルの免疫グ
ロブリンあるいはこれのフラグメント、コラーゲンある
いはゼラチンなどが挙げられるが、好ましくは血清アル
ブミンである。ペプチドの配合割合としては該物質の活
性および治療上の必要量に応じて一概には決定できない
が単位投与組成物中に通常薬用量が配合される。ペプチ
ド対ポリエチレングリコールの重量比は好ましくは０.
００００１：１〜１００：１である。さらに好ましくは
０.０００１：１〜１０：１である。水溶性蛋白の配合
割合も同様に一概には決定できないが、注射用医薬組成
物に通常添加される量が添加可能であり、ペプチド対水
溶性蛋白の重量比は０.００００１：１〜１００：１が
好ましい。さらに好ましくは０.０００１〜１０：１で
ある。本発明の医薬組成物水溶液におけるポリエチレン
グリコールの濃度は好ましくは２０％（Ｗ／Ｖ）以下、
０.０１％（Ｗ／Ｖ）以上、さらに好ましくは１０％
（Ｗ／Ｖ）以下、０.０５％（Ｗ／Ｖ）以上、特に好ま
しくは５％（Ｗ／Ｖ）以下、０.１％（Ｗ／Ｖ）以上で
ある。

【００１５】本発明の組成物にさらに配合しうる酸性ム
コ多糖類としてカルボキシル基によって高い負電荷を持
つヒアルロン酸、あるいは硫酸基を有する酸性ムコ多糖
類としてコンドロイチン−４−硫酸、デルマタン硫酸、
コンドロイチン−６−硫酸、ケラタン硫酸、ヘパリン、
ヘパラン硫酸などが挙げられる。また、硫酸基を有する
天然型酸性ムコ多糖類の脱硫酸化物も挙げられる。ま
た、上記の酸性ムコ多糖類としてアミノ糖とウロン酸と
の二糖単位の繰り返し構造からなる長い直鎖状の複合多
糖類であってもよい。これらはウロン酸の一部でガラク
トースに置き換わったものも含み、硫酸基またはカルボ
キシル基によって高い負電荷を持つポリアニオンであ
る。アミノ糖残基のアミノ基は通常アセチル化されてい
るが、アセチル基の代わりに硫酸基が該アミノ基に結合
したものでもよい。または、これらの誘導体でもよい。

【００１６】上記の酸性ムコ多糖類は軟骨などの生体組
織から抽出されたものでもよく、微生物から生産された
ものでもよい。また、これらの誘導体でもよい。その分
子量としてはヒアルロン酸の場合１万〜３００万、好ま
しくは５０万〜２５０万、さらに好ましくは１００万〜
２５０万程度のものが挙げられる。硫酸基を有するムコ
多糖類の分子量としては１０００〜１００万、好ましく
は１０００〜３０万、さらに好ましくは１０００〜１０
万程度のものが挙げられる。上記硫酸基を有するムコ多
糖類としてはその硫酸基の数が、二糖単位あたり約０.
０１〜４.０個のものが挙げられ、二糖単位あたり約０.
１〜３.０個のものが好ましく用いられる。硫酸基を有
する天然型酸性ムコ多糖類は脱硫酸化してもよく、その
方法としては、酸性メタノール溶液で脱硫酸する方法
（シュバート、メソッヅインカーボハイドレートケミス
トリー、５巻、１０９頁、１９６５年）が挙げられる。
脱硫酸化された本発明のムコ多糖類における硫酸基の数
は、二糖単位あたり約０〜０.１個が挙げられ、好まし
くは約０〜０.０５個が挙げられる。

【００１７】本発明において用いられる硫酸基を有する
天然型酸性ムコ多糖類の脱硫酸化物としてはコンドロイ
チン、脱硫酸化ヘパリン、ヘパランが具体例として挙げ
られる。なかでもコンドロイチン、ヘパランが好まし
い。上記の酸性ムコ多糖類は、塩類、例えばアルカリ金
属塩またはアルカリ土類金属塩であってもよい。該アル
カリ金属塩としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩
などが挙げられる。好ましくはナトリウム塩である。該
アルカリ土類金属塩としては、マグネシウム塩、カルシ
ウム塩などが挙げられ、本発明においてはヒアルロン酸
ナトリウム塩が有利に使用される。酸性ムコ多糖類の配
合割合は、例えばムコ多糖類対ポリエチレングリコール
の重量比が約０.０００１：１〜１００：１であり、好
ましくは約０.００１：１〜１０：１、最も好ましくは
約０.０１〜１：１である。

【００１８】本発明の持続性注射用医薬組成物は、水溶
性ペプチドおよびポリエチレングリコール、必要に応じ
製剤用添加物あるいはさらに水溶性蛋白を含むものであ
るが、その調整に際してはアンプルまたはバイアル中に
滅菌水または滅菌生理食塩水に溶解または懸濁してこれ
らを存在させてもよいし、目的に応じて真空乾燥または
凍結乾燥したものでもよい。また、ペプチドと、必要に
応じ添加物、水溶性蛋白等が混在する水溶液、またはこ
れの真空乾燥または凍結乾燥粉末に滅菌水または滅菌生
理食塩水を加え再溶解したものと、ポリエチレングリコ
ールあるいはこれに製剤用添加物を添加したものに滅菌
水または滅菌生理食塩水を加え溶解させたものを混合し
てもよい。またこれらに限定されず他の調製法を採用し
てもよく、要はペプチドの活性を損なわない方法であれ
ばよい。

【００１９】また、水溶性ペプチドあるいはこれに安定
化剤として血清アルブミンを加えたものに、さらに製剤
添加物として例えばヒアルロン酸ナトリウム塩を加え、
注射用蒸留水あるいは注射用生理食塩水を添加し静かに
混和することにより得られる溶液あるいは懸濁液（I）
にポリエチレングリコールの注射用蒸留水あるいは注射
用生理食塩水溶液（II）を混合し、真空乾燥あるいは凍
結乾燥による製剤化をおこなってもよい。また（I）を
真空乾燥あるいは凍結乾燥したものを（II）に分散し、
速やかに真空乾燥あるいは凍結乾燥することによる製剤
化をおこなってもよい。また、（I）を主とし、（II）
を副とするそれぞれ別な二流体ノズルから加熱された気
流中に噴霧することにより成型脱水（スプレードライイ
ング）する製剤化をおこなってもよい。

【００２０】この場合、水溶性ペプチドあるいはこれに
血清アルブミンを加えたものとヒアルロン酸ナトリウム
塩の複合体（III）がポリエチレングリコール中に分散
された状態のもの、あるいは（III）の表面にポリエチ
レングリコールがコーティングされたものが得られる。
また、ポリエチレングリコールを加熱溶融（融点よりわ
ずかに高い温度）させたものに（I）あるいはこれを真
空乾燥あるいは凍結乾燥した粉末を分散させ、冷溶媒中
に撹拌下滴下もしくは注入後すみやかに得られた微粒子
を回収するか、または速やかに気相中に噴霧冷却（スプ
レーチリング）あるいは二流体ノズルから加熱された気
流中に噴霧することにより成型脱水（スプレードライイ
ング）する製剤化をおこなってもよい。また、公知の方
法に従い、固体のポリエチレングリコール中に水溶性ペ
プチドあるいはこれに血清アルブミンを加えたものとヒ
アルロン酸ナトリウム塩の複合体が分散された注射投与
可能な微粒子を成型する製剤化をおこなってもよい。ま
た、得られた該微粒子はさらに真空乾燥などをおこなう
ことにより脱水操作を加えられてもよい。また、該微粒
子製造時には微粒子同志の凝集を防止する目的でポリビ
ニールアルコール、マンニトール、あるいは燐酸塩など
の無機塩を微粒子表面に付着させてもよい。このように
して得られた該微粒子は通常注射用溶媒として許容され
る物質で構成される溶媒に投与直前に分散され速やかに
投与される。

【００２１】本発明の医薬組成物には核酸（ＲＮＡ、Ｄ
ＮＡ）を含んでもよく、該核酸はアンチセンスとして使
用されるものでもよい（ミンウイチアングら、ジャーナ
ルオブ ビオロジカル ケミストリー、第２６６巻、１
９１６２ページ〜１８７１ページ（１９９１年）が代表
的な文献として挙げられる）。このようにして得られる
単位投与物には従来用いられている添加物を添加しても
よい。例えばpＨ調節剤としてアルギニン、水酸化ナト
リウム、グリシン、塩酸、クエン酸、 局所麻酔剤とし
てベンジルアルコール、等張化剤として食塩などの無機
塩類、マンニトール、ソルビトールなどの炭水化物、吸
着防止剤としてTween ８０（などの界面活性剤）、溶
解補助剤としてシクロデキスト リン類、安定化剤とし
て血清アルブミン、あるいは還元剤としてグルタチオン
などが挙げられるがこれらに限定されない。

【００２２】本発明はペプチドと常温でワックス様固体
のポリエチレングリコールとを混合し、製剤を構成する
上で許容される添加物を含有させてもよい医薬組成物で
あり、通常はこれらの物質が単位組成物中に存在するよ
うに調製される。さらには、この調製物に注射用溶剤を
添加した溶液製剤、あるいはこの溶液の真空乾燥物ある
いは凍結乾燥物、およびこれらの乾燥物を薬学的に許容
される注射用溶剤で再溶解した製剤としてもよい。ま
た、該ペプチドあるいはこれに製剤を構成する上で許容
される添加物を添加した医薬組成物あるいはこれを注射
用溶剤で溶解した溶液、あるいはこの溶液の凍結乾燥
物、およびこの凍結乾燥物を薬学的に許容される注射用
溶剤で再溶解したものに、常温でワックス様固体のポリ
エチレングリコールを注射用溶剤で溶解したものあるい
はこれに薬学的に許容される添加物を添加したものある
いはこれの凍結乾燥物に注射用溶剤で再溶解したものを
混合した持続性製剤である。さらに本持続性製剤に生体
内に注入しうる実質的に薬理効果を持たない血清アルブ
ミンなどの水溶性蛋白を配合することにより作用の増強
が期待できる。

【００２３】本発明の医薬組成物は、水溶性ペプチドあ
るいは水溶性ペプチドに血清アルブミンなどの水溶性蛋
白および（または）ヒアルロン酸ナトリウム塩などの酸
性ムコ多糖類を加えて均一化し、加温溶融した常温で固
体のポリエチレングリコールに分散させてこれを溶媒中
注入または気相中に噴霧して微粒子化し、投与時に注射
用溶剤で分散して使用することもできる。本発明の医薬
組成物は真空あるいは凍結乾燥された状態で保存、流通
されるのが望ましいが、溶液状態でも保存、流通は可能
である。保存温度は常温でよいが、好ましくは冷所保存
である。本発明における冷所とは１５℃以下を指す（日
本薬局方）が、製剤によっては凍結を避けたほうが良い
場合もある。

【００２４】本発明の医薬組成物のpＨはペプチドの活
性に大きな影響を与えず、生理的に許容できる範囲内の
pＨが用いられる。好ましくは約pＨ２〜pＨ１０であ
る。さらに好ましくは約ｐＨ３〜pＨ９である。特に好
ましくはpＨ３.５〜pＨ８である。該pＨの調整は、水溶
性ペプチド，ポリエチレングリコール，各種添加物など
が存在する状態で最終的なpＨが上記の範囲内に入るよ
うに、例えば塩酸あるいは水酸化ナトリウムなどを含む
液を添加することによりおこなわれる。また、該ペプチ
ドの存在中の安定性を確保するため、pＨ調整用の液を
別容器とし、使用直前に本操作を行ってもよい。

【００２５】本発明の医薬組成物は、水溶性で持続性が
あり、その溶液の粘度が非常に低いのが一つの特徴であ
り、注射時の取り扱いは容易である。本発明における粘
度とはＥ型粘度計（東京計器製）でコーンＬＤを用いて
測定される粘度をいう。本発明の水溶性注射用組成物
は、生体に投与する際の粘度として、通常２００センチ
ポワーズ（ｃｐ）以下、好ましくは１００ｃｐ以下、さ
らに好ましくは７０ｃｐ以下となるように調製される。
該調整方法としては、例えば水溶性ペプチド、ポリエチ
レングリコール、あるいは各種添加物を上記の方法で混
合し、必要に応じて滅菌生理食塩水などの注射用溶剤で
稀釈することが行なわれる。

【００２６】本発明の医薬組成物の投与方法としては、
注射による投与が行われるが、特に皮下注射による投与
が好ましく、用途によっては他の注射ルート、例えば筋
肉内投与、静脈内投与、関節腔内投与、眼内投与、さら
には組織内投与もおこなわれる。本発明の組成物の投与
量，投与対象，投与対象疾患などは、主薬である水溶性
ペプチドのそれらを基準に定められる。本発明は有機溶
媒を使用しないため３次元構造が生理活性発現に重要な
ペプチドなどにも適応可能である。本発明の医薬組成物
は、投与された後にペプチドの薬理作用を持続させ得る
が、溶液状態での投与が可能であるため薬用量の調節が
容易であり、また細い注射針を使用できるため患者に与
える苦痛は小さい。また、本発明においては、常温で固
体の平均分子量２０００から６０００という限られた範
囲のポリエチレングリコールを使用することによりポリ
エチレングリコール共在下でのペプチドの真空乾燥また
は凍結乾燥による製剤化が可能になり、かつ薬理作用が
持続する持続性製剤が得られる。このため医療従事者に
とってはその取り扱いが容易になり、患者にとっては水
溶性組成物であるため太い針を使用する必要がなく、ま
た注射回数を減らせるために治療行為による苦痛が軽減
される。

【００２７】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的
に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。

【００２８】実施例１．インスリン持続性製剤 豚インスリン（２６.８ユニット／ミリグラム：ディオ
シンス社（オランダ），ラットにおけるクリアランス：
１４１６ml／hr／kg）の１０ミリグラムを５ミリリット
ルの０.１規定塩酸で溶解した。この溶液０.７ミリリッ
トルに平均分子量２０００のポリエチレングリコール２
０００（和光純薬）を４.２ミリグラム溶 解させた注射
用生理食塩水０.７ミリリットルを加え、混合した。

【００２９】実施例２．インスリン持続性製剤 豚インスリン（２６.８ユニット／ミリグラム：ディオ
シンス社（オランダ））の１０ミリグラムを５ミリリッ
トルの０.１規定塩酸で溶解した。この溶液０.７ミリリ
ットルに平均分子量２０００のポリエチレングリコール
２０００（和光純薬）を２％（Ｗ／Ｖ）の濃度で溶解さ
せた注射用生理食塩水０.７ミリリットル を加え、混合
した。さらに、これにクエン酸水和物１７ミリグラム、
クエン酸ナトリウム１７ミリグラム、マンニトール２８
ミリグラムを加えて溶解させた。本製剤の１ミリリット
ルをガラス製バイアルに移し、公知の凍結乾燥操作をお
こなった（凍結乾燥装置：ライオバックＧＴ−３、リー
ボールド社）。

【００３０】実施例３．インスリン持続性製剤 豚インスリン（２６.８ユニット／ミリグラム：ディオ
シンス社（オランダ））の１０ミリグラムを５ミリリッ
トルの０.１規定塩酸で溶解した。この溶液０.７ミリリ
ットルに平均分子量３０００のポリエチレングリコール
４０００（和光純薬）を２％（Ｗ／Ｖ）の濃度で溶解さ
せた注射用生理食塩水０.７ミリリットル を加え、混合
した。さらに、これにクエン酸水和物１７ミリグラム、
クエン酸ナトリウム１７ミリグラム、マンニトール２８
ミリグラムを加えて溶解させた。本製剤の１ミリリット
ルをガラス製バイアルに移し、公知の凍結乾燥操作をお
こなった（凍結乾燥装置：ライオバックＧＴ−３、リー
ボールド社）。

【００３１】実施例４．インスリン持続性製剤 豚インスリン（２６.８ユニット／ミリグラム：ディオ
シンス社（オランダ））の１０ミリグラムを５ミリリッ
トルの０.１規定塩酸で溶解した。この溶液０.７ミリリ
ットルに平均分子量２０００のポリエチレングリコール
２０００（和光純薬）を１０％（Ｗ／Ｖ）の濃度で溶解
させた注射用生理食塩水０.７ミリリット ルを加え、混
合した。さらに、これにクエン酸水和物１７ミリグラ
ム、クエン酸ナトリウム１７ミリグラム、マンニトール
２８ミリグラムを加えて溶解させた。本製剤の１ミリリ
ットルをガラス製バイアルに移し、公知の凍結乾燥操作
をおこなった（凍結乾燥装置：ライオバックＧＴ−３、
リーボールド社）。

【００３２】実施例５．インスリン持続性製剤 豚インスリン（２６.８ユニット／ミリグラム：ディオ
シンス社（オランダ））の１０ミリグラムを５ミリリッ
トルの０.１規定塩酸で溶解した。この溶液０.７ミリリ
ットルに平均分子量３０００のポリエチレングリコール
４０００（和光純薬）を１０％（Ｗ／Ｖ）の濃度で溶解
させた注射用生理食塩水０.７ミリリット ルを加え、混
合した。さらに、これにクエン酸水和物１７ミリグラ
ム、クエン酸ナトリウム１７ミリグラム、マンニトール
２８ミリグラムを加えて溶解させた。本製剤の１ミリリ
ットルをガラス製バイアルに移し、公知の凍結乾燥操作
をおこなった（凍結乾燥装置：ライオバックＧＴ−３、
リーボールド社）。

【００３３】実施例６．インスリン持続性製剤 豚インスリン（２６.８ユニット／ミリグラム：ディオ
シンス社（オランダ））の１０ミリグラムを５ミリリッ
トルの０.１規定塩酸で溶解した。この溶液０.７ミリリ
ットルに平均分子量２０００のポリエチレングリコール
２０００（和光純薬）を２０％（Ｗ／Ｖ）の濃度で溶解
させた注射用生理食塩水０．７ミリリットルを加え、混
合した。さらに、これにクエン酸水和物１７ミリグラ
ム、クエン酸ナトリウム１７ミリグラム、マンニトール
２８ミリグラムを加えて溶解させた。本製剤の１ミリリ
ットルをガラス製バイアルに移し、公知の凍結乾燥操作
をおこなった（凍結乾燥装置：ライオバックＧＴ−３、
リーボールド社）。

【００３４】実施例７．インスリン持続性製剤 豚インスリン（２６.８ユニット／ミリグラム：ディオ
シンス社（オランダ））の１０ミリグラムを５ミリリッ
トルの０.１規定塩酸で溶解した。この溶液０.７ミリリ
ットルに平均分子量３０００のポリエチレングリコール
４０００（和光純薬）を２０％（Ｗ／Ｖ）の濃度で溶解
させた注射用生理食塩水０.７ミリリットルを加え、混
合した。さらに、これにクエン酸水和物１７ミリグラ
ム、クエン酸ナトリウム１７ミリグラム、マンニトール
２８ミリグラムを加えて溶解させた。本製剤の１ミリリ
ットルをガラス製バイアルに移し、公知の凍結乾燥操作
をおこなった（凍結乾燥装置：ライオバックＧＴ−３、
リーボールド社）。

【００３５】実施例８．インスリン持続性製剤 豚インスリン（２６.８ユニット／ミリグラム：ディオ
シンス社（オランダ））の１０ミリグラムを５ミリリッ
トルの０.１規定塩酸で溶解した。この溶液０.７ミリリ
ットルに平均分子量２０００のポリエチレングリコール
２０００（和光純薬）を４.２ミリグラム溶解させた注
射用生理食塩水０.７ミリリットルを加え、混合した。

【００３６】実施例９．インスリン持続性製剤 豚インスリン（２６.８ユニット／ミリグラム：ディオ
シンス社（オランダ））の１２ミリグラムを１ミリリッ
トルの０.１規定の塩酸に溶解し、さらに５ミリ リット
ル注射用生理食塩水を加えて希釈した。６０ミリグラ
ム、３００ミリグラム、または６００ミリグラムの平均
分子量２０００のポリエチレングリコール２０００（和
光純薬）をそれぞれ３ミリリットルの注射用生理食塩水
に溶解し２％（Ｗ／Ｖ）、１０％（Ｗ／Ｖ）、または２
０％（Ｗ／Ｖ）のポリエチレングリコール溶液を調製し
た。それぞれの溶液１ミリリットルに前記のインスリン
水溶液を１ミリリットルづつ加えてポリエチレングリコ
ール濃度の異なる３種類のインスリン注射液を調製し
た。

【００３７】 実施例１０．インターフェロンアルファ持続性製剤 ３００万国際単位のインターフェロンアルファと５ミリ
グラムのヒト血清アルブミンを含むインターフェロンア
ルファ製剤（武田薬品，ラットにおけるクリアランス：
１２３ml／hr／kg）２バイアルにそれぞれ注射用蒸留水
１ミリリットルを加え、合わせた。このうち１.２ミリ
リットルをとり、ポリエチレングリコール４０００（和
光純薬一級、平均分子量３０００）を０.４５％（Ｗ／
Ｖ）の濃度になるように注射用生理食塩水（扶桑薬品）
に溶解した溶液の０.６ミリリットルを加えて混合し
た。

【００３８】 実施例１１．インターフェロンアルファ持続性製剤 ３００万国際単位のインターフェロンアルファと５ミリ
グラムのヒト血清アルブミンを含むインターフェロンア
ルファ製剤（武田薬品）２バイアルにそれぞれ注射用蒸
留水１ミリリットルを加え、合わせた。このうち１.２
ミリリットルをとり、ポリエチレングリコール２０００
（和光純薬一級、平均分子量２０００）を２０％（Ｗ／
Ｖ）の濃度になるように注射用生理食塩水（扶桑薬品）
に溶解した溶液の０.３ミリリットルおよび注射用生理
食塩水０.３ミリリットルを加えて混合した。

【００３９】 実施例１２．インターフェロンアルファ持続性製剤 ３００万国際単位のインターフェロンアルファと５ミリ
グラムのヒト血清アルブミンを含むインターフェロンア
ルファ製剤（武田薬品）２バイアルにそれぞれ注射用蒸
留水１ミリリットルを加え、合わせた。このうち１.２
ミリリットルをとり、ポリエチレングリコール４０００
（和光純薬一級、平均分子量３０００）を２０％（Ｗ／
Ｖ）の濃度になるように注射用生理食塩水（扶桑薬品）
に溶解した溶液の０.３ミリリットルおよび注射用生理
食塩水０.３ミリリットルを加えて混合した。

【００４０】実施例１３．インスリン持続性製剤 ４００ミリグラムのポリエチレングリコール２０００ま
たは４０００（それぞれ和光一級）と５００ミリグラム
のＤ−マンニトール（和光特級）を１０ミリリットルの
注射用生理食塩水（扶桑薬品）に溶解し、これに２０％
（Ｗ／Ｖ）のヒト血清アルブミンを含有するアルブミン
ニチヤク（日本製薬）を０.１ミリリット ル添加し混合
した。この溶液と豚インスリン（２６.８ユニット／ミ
リグラム： ディオシンス社（オランダ））の１０ミリ
グラムを２ミリリットルの０.１規定 塩酸で溶解したも
のを混合した。得られた２種類の溶液には沈殿は見られ
ず、澄明な溶液が得られた。凍結乾燥装置ライオバック
ＧＴ−３（リーボールドヘラエウス社、ドイツ）を用い
て自体公知の方法で２種の該混合物を凍結乾燥した。

【００４１】実施例１４．インスリン持続性製剤 豚インスリン（２６.８ユニット／ミリグラム：ディオ
シンス社（オランダ））の４.５ミリグラムを０.５ミリ
リットルの０.１規定の塩酸に溶解し、さらに２.５ミリ
リットル注射用生理食塩水を加えて希釈した。６００ミ
リグラムの平均分子量２０００のポリエチレングリコー
ル２０００（和光純薬）を３ミリリットルの注射用生理
食塩水に溶解し２０％（Ｗ／Ｖ）のポリエチレングリコ
ール溶液を調製した。豚インスリン溶液１ミリリットル
にポリエチレングリコール溶液０. ５ミリリットル、注
射用生理食塩水０.５ミリリットルを加えてインスリン
注射 液を調製した。

【００４２】実施例１５．Ｇ−ＣＳＦ持続性製剤 ６００ミリグラムの平均分子量２０００のポリエチレン
グリコール２０００（和光純薬）を３ミリリットルの注
射用生理食塩水に溶解し２０％（Ｗ／Ｖ）のポリエチレ
ングリコール溶液を調製した。Ｇ−ＣＳＦを含む製剤で
あるフィルグラスティム（Filgrastim）（アムジェン
社、アメリカ）の２３マイクロリットルに、注射用生理
食塩水１.７２７ミリリットルとこのポリエチレングリ
コール溶液０.３５ミリリットルを加えてＧ−ＣＳＦ注
射液を調製した。なお、Ｇ−ＣＳＦのラットにおけるク
リアランスは体重１キログラムあたり５３.１〜７９.８
ミリリットル／時間と報告されている（タナカヒデジ
他、ザ・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー・アンド
・エクスペリメンタル・セラピューティックス、第２５
５巻、７２４ページ〜７２９ページ、１９９０年）。

【００４３】実施例１６．ＳＯＤ持続性製剤 ４００ユニット（２００マイクログラムに相当）のセラ
チア由来スーパーオキサイドディスミュターゼ（ＳＯ
Ｄ）（特開昭５７−２９２８５号および特開昭５８−１
６６８５号公報）を含む０.７ミリリットルの生理食塩
水にポリエチレングリコール（平均分子量３０００のポ
リエチレングリコール４０００：和光純薬）の生理食塩
水溶液（１０％(ｗ／ｖ)）０.７ミリリットルを加えて
完全に混和した。

【００４４】実施例１７．ヒルジン持続性製剤 １００ＡＴＵ（約８マイクログラムに相当）のヒルジン
（ペニンスララボラトリー社、米国）を含む溶液に注射
用生理食塩水を加えて全量１ミリリットルとした。この
溶液を含むガラス製バイアル瓶にポリエチレングリコー
ル（平均分子量３０００のポリエチレングリコール４０
００：和光純薬）の生理食塩水溶液（１０％(ｗ／ｖ)）
１ミリリットルを加えて完全に混和した。

【００４５】実施例１８．ＩＬ−２持続性製剤 １ミリリットルのインターリューキン２（ＩＬ−２；１
０マイクログラムを含有）を（特開昭６１−７８７９９
号公報記載）の製造法により製造し、特開昭６０−１１
５５２８号公報）の精製法で精製した。Ｎ末端はメチオ
ニンが付いているものといないもの混合物）に０.５ミ
リリットルの生理食塩水を添加した。この溶液の１ミリ
リットルを含むガラス精バイアル瓶にポリエチレングリ
コール（平均分子量３０００のポリエチレングリコール
４０００：和光純薬）の生理食塩水溶液（１０％(ｗ／
ｖ)）１ミリリットルを加えて完全に混和した。

【００４６】 実施例１９．酢酸リュープロレリン持続性製剤 ７５０マイクログラムのＬＨ−ＲＨアナログである酢酸
リュープロレリン（米国特許第４００８２０９号）を
１.５ミリリットルの１／３０モルの燐酸緩衝液（pＨ
６）に溶解した。この溶液の１ミリリットルを含むガラ
ス製バイアル瓶にポリエチレングリコール（平均分子量
３０００のポリエチレングリコール４０００：和光純
薬）の生理食塩水溶液（１０％(ｗ／ｖ)）１ミリリット
ルを加えて完全に混和した。

【００４７】実施例２０．ＰＴＨ持続性製剤 ４５０マイクログラムの副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）
（バッケム社、スイス）を１.５ミリリットルの注射用
生理食塩水に溶解した。この溶液１ミリリットルを含む
ガラス製バイアル瓶にポリエチレングリコール（平均分
子量３０００のポリエチレングリコール４０００：和光
純薬）の生理食塩水溶液（１０％(ｗ／ｖ)）１ミリリッ
トルを加えて完全に混和した。

【００４８】実施例２１．ＴＲＨ持続性製剤 １.４６４ミリグラムの甲状腺刺激ホルモン放出ホルモ
ン（thyrotropin−releasing hormone：ＴＲＨ）酒石酸
塩と５０ミリグラムのＤ−ソルビトールを含有するヒル
トニン注（武田薬品）の１ミリリットルをガラス製バイ
アル瓶（容量約５ミリリットル）に入れ、ポリエチレン
グリコール（平均分子量３０００のポリエチレングリコ
ール４０００：和光純薬）の生理食塩水溶液（１０％
(ｗ／ｖ)）１ミリリットルを加えて完全に混和した。

【００４９】 実施例２２．ＦＧＦムテイン持続性製剤 ＴＧＰ−５８０（リコンビナントヒト塩基性ＦＧＦムテ
インＣＳ２３：ＥＰ公開２８１、８２２号公報）溶液
（０.９６ミリグラム蛋白質／ミリリットル）の０.３６
ミリリットルに注射用生理食塩水１.１４ミリリット
ル、ポリエチレングリコール（平均分子量３０００のポ
リエチレングリコール４０００：和光純薬）の生理食塩
水溶液（１０％(ｗ／ｖ)）１.５ミリリットル、さらに
ヒト血清アルブミンを２０％含有するアルブミンニチヤ
ク（日本製薬）を６マイクロリットル加えて完全に混和
した。

【００５０】実施例２３．ＮＧＦ持続性製剤 神経細胞成長因子（ＮＧＦ）（バイオメディカルテクノ
ロジー社、米国）１０マイクログラムを含む生理食塩水
０.７ミリリットルにヒト血清アルブミンを２０％含有
するアルブミンニチヤク（日本製薬）を４マイクロリッ
トル添加し、さらに注射用生理食塩水１.４ミリリット
ル（扶桑薬品）を加え全量を２.１ミリリットルにし
た。また、この溶液にポリエチレングリコール（平均分
子量３０００のポリエチレングリコール４０００：和光
純薬）の生理食塩水溶液（１０％(ｗ／ｖ)）２.１ミリ
リットルを加えて完全に混和した。

【００５１】実施例２４．ＥＧＦ持続性製剤 上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）（ケミコンインターナショ
ナル社、米国）１０マイクログラムを含む生理食塩水
０.７ミリリットルにヒト血清アルブミンを２０％含有
するアルブミンニチヤク（日本製薬）を４マイクロリッ
トル添加し、さらに注射用生理食塩水１.４ミリリット
ル（扶桑薬品）を加え全量を２.１ミリリットルにし
た。また、この溶液にポリエチレングリコール（平均分
子量３０００のポリエチレングリコール４０００：和光
純薬）の生理食塩水溶液（１０％(ｗ／v)）２.１ミリリ
ットルを加えて完全に混和した。

【００５２】 実施例２５．インターフェロンベータ持続性製剤 インターフェロンベータ（ペーゼル社、ドイツ）１０マ
イクログラムを含む生理食塩水０.７ミリリットルにヒ
ト血清アルブミンを２０％含有するアルブミンニチヤク
（日本製薬）を４マイクロリットル添加し、さらに注射
用生理食塩水１.４ミリリットル（扶桑薬品）を加え全
量を２.１ミリリットルにした。また、この溶液にポリ
エチレングリコール（平均分子量３０００のポリエチレ
ングリコール４０００：和光純薬）の生理食塩水溶液
（１０％(ｗ／ｖ)）２.１ミリリットルを加えて完全に
混和した。

【００５３】 実施例２６．インターフェロンガンマ持続性製剤 インターフェロンガンマ（ジェンザイム社、米国）１０
マイクログラムを含む生理食塩水０.７ミリリットルに
ヒト血清アルブミンを２０％含有するアルブミンニチヤ
ク（日本製薬）を４マイクロリットル添加し、さらに注
射用生理食塩水１.４ミリリットル（扶桑薬品）を加え
全量を２.１ミリリットルにした。また、この溶液にポ
リエチレングリコール（平均分子量３０００のポリエチ
レングリコール４０００：和光純薬）の生理食塩水溶液
（１０％(ｗ／ｖ)）２.１ミリリットルを加えて完全に
混和した。

【００５４】実施例２７．ＴＧＦ−β持続性製剤 形質転換成長因子（ＴＧＦ−β）（和光純薬工業(株)
製）１マイクログラムを含む生理食塩水０.７ミリリッ
トルにヒト血清アルブミンを２０％含有するアルブミン
ニチヤク（日本製薬）を４マイクロリットル添加し、さ
らに注射用生理食塩水１.４ミリリットル（扶桑薬品）
を加え全量を２.１ミリリットルにした。また、この溶
液にポリエチレングリコール（平均分子量３０００のポ
リエチレングリコール４０００：和光純薬）の生理食塩
水溶液（１０％(ｗ／ｖ)）２.１ミリリットルを加えて
完全に混和した。

【００５５】 実施例２８．副甲状腺ホルモン持続性製剤 副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）（バッケム社、スイス）１
０マイクログラムを含む生理食塩水０.７ミリリットル
にヒト血清アルブミンを２０％含有するアルブミンニチ
ヤク（日本製薬）を４マイクロリットル添加し、さらに
注射用生理食塩水１.４ミリリットル（扶桑薬品）を加
え全量を２.１ミリリットルにした。また、この溶液に
ポリエチレングリコール（平均分子量３０００のポリエ
チレングリコール４０００：和光純薬）の生理食塩水溶
液（１０％(ｗ／ｖ)）２.１ミリリットルを加えて完全
に混和した。

【００５６】実施例２９．ＴＮＦ−α持続性製剤 腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）（和光純薬工業(株)製）４
００ユニットとヒト血清アルブミン０.１ミリグラムを
含むpＨ７.４のりん酸緩衝液０.１ミリリットルに注射
用生理食塩水０.６ミリリットル（扶桑薬品）を加えヒ
ト血清アルブミンを２０％含有するアルブミンニチヤク
（日本製薬）を４マイクロリットル添加し、さらに注射
用生理食塩水１.４ミリリットル（扶桑薬品）を加え全
量を２.１ミリリットルにした。また、この溶液にポリ
エチレングリコール（平均分子量３０００のポリエチレ
ングリコール４０００：和光純薬）の生理食塩水溶液
（１０％(ｗ／ｖ)）２.１ミリリットルを加えて完全に
混和した。

【００５７】実施例３０．成長ホルモン持続性製剤 成長ホルモン（ＵＣＢバイオプロダクッ社、ベルギー）
１０マイクログラムを含む生理食塩水０.７ミリリット
ルにヒト血清アルブミンを２０％含有するアルブミンニ
チヤク（日本製薬）を４マイクロリットル添加し、さら
に注射用生理食塩水１.４ミリリットル（扶桑薬品）を
加え全量を２.１ミリリットルにした。また、この溶液
にポリエチレングリコール（平均分子量３０００のポリ
エチレングリコール４０００：和光純薬）の生理食塩水
溶液（１０％(ｗ／ｖ)）２.１ミリリットルを加えて完
全に混和した。

【００５８】実施例３１．カルシトニン持続性製剤 カルシトニン（ＵＣＢバイオプロダクッ社、ベルギー）
１０マイクログラムを含む生理食塩水０.７ミリリット
ルにヒト血清アルブミンを２０％含有するアルブミンニ
チヤク（日本製薬）を４マイクロリットル添加し、さら
に注射用生理食塩水１.４ミリリットル（扶桑薬品）を
加え全量を２.１ミリリットルにした。また、この溶液
にポリエチレングリコール（平均分子量３０００のポリ
エチレングリコール４０００：和光純薬）の生理食塩水
溶液（１０％(ｗ／ｖ)）２.１ミリリットルを加えて完
全に混和した。

【００５９】実施例３２．ＴＰＡ持続性製剤 組織プラスミノーゲンアクチベーター（ＴＰＡ）（バイ
オスコット社、米国）１０マイクログラムを含む生理食
塩水０.７ミリリットルにヒト血清アルブミンを２０％
含有するアルブミンニチヤク（日本製薬）を４マイクロ
リットル添加し、さらに注射用生理食塩水１.４ミリリ
ットル（扶桑薬品）を加え全量を２.１ミリリットルに
した。また、この溶液にポリエチレングリコール（平均
分子量３０００のポリエチレングリコール４０００：和
光純薬）の生理食塩水溶液（１０％(ｗ／ｖ)）２.１ミ
リリットルを加えて完全に混和した。

【００６０】実施例３３．ＩＬ−３持続性製剤 インターリューキン３（ＩＬ−３；Ｒ＆Ｄシステムズ
社、米国）１０００ユニットを含む生理食塩水０.７ミ
リリットルにヒト血清アルブミンを２０％含有するアル
ブミンニチヤク（日本製薬）を４マイクロリットル添加
し、さらに注射用生理食塩水１.４ミリリットル（扶桑
薬品）を加え全量を２.１ミリリットルにした。また、
この溶液にポリエチレングリコール（平均分子量３００
０のポリエチレングリコール４０００：和光純薬）の生
理食塩水溶液（１０％(ｗ／ｖ)）２.１ミリリットルを
加えて完全に混和した。

【００６１】 実施例３４．インターフェロンアルファ持続性製剤 ３００万国際単位のインターフェロンアルファと５ミリ
グラムのヒト血清アルブミンを含むインターフェロンア
ルファ製剤（武田薬品、ラットにおけるクリアランス：
１２３ml／hr／kg）１０バイアルにそれぞれ注射用蒸留
水１ミリリットルを加えた。これに分子量１８０万のヒ
アルロン酸ナトリウム塩（ジェンザイム社、米国）を
１.２％(ｗ／ｖ)になるように注射用生理食塩水に溶解
した溶液１０ミリリットルを加え、静かに混和した。こ
の溶液に常法に従い凍結乾燥し、得られた粉末を５５℃
に加熱溶融したポリエチレングリコール４００（平均分
子量３０００：和光一級）の１０グラム中に添加して素
早く分散した。５℃に冷却した２００ミリリットルの蒸
留水中にホモジナイザー（ポリトロン：キネマティカ
社）で高速撹拌しながら溶液を滴下することにより微粒
子を作製した。続いて速やかに篩過することにより微粒
子を回収し、凍結乾燥操作をおこなった。

【００６２】 実施例３５．インターフェロンアルファ持続性製剤 ３００万国際単位のインターフェロンアルファと５ミリ
グラムのヒト血清アルブミンを含むインターフェロンア
ルファ製剤（武田薬品、ラットにおけるクリアランス：
１２３ml／hr／kg）１０バイアルにそれぞれ注射用蒸留
水１ミリリットルを加えた。これに分子量１８０万のヒ
アルロン酸ナトリウム塩（ジェンザイム社、米国）を
１.２％(ｗ／ｖ)になるように注射用生理食塩水に溶解
した溶液１０ミリリットルを加え、静かに混和した。こ
の溶液に常法に従い凍結乾燥し、得られた粉末を５５℃
に加熱溶融したポリエチレングリコール４００（平均分
子量３０００：和光一級）の１０グラム中に添加して素
早く分散した。続いてスプレードライヤー（ＧＳ−３
１：ヤマト科学）を用いてこの溶液から微粒子を作製
し、さらに凍結乾燥操作をおこなった。

【００６３】実験例１ 下記配合割合にて注射剤を調製し、実験に使用した。 比較製剤１：豚インスリン（２６．８ユニット／ミリグ
ラム：ディオシンス社(オランダ))の１０ミリグラムを
５ミリリットルの０.１規定塩酸で溶解した。この溶液
０.７ミリリットルに注射用生理食塩水０.７ミリリット
ルを加えた。 比較製剤２：注射用生理食塩水 ２ ミリリットル ８週齢の雄性ＳＤ系ラット背部皮下に、２００マイクロ
グラム／ラットの薬用量で実施例１の製剤または比較製
剤１の注射液を投与した。対照として比較製剤２の生理
食塩水注射液を同様に投与した。投与前および一定時間
毎に約０.４ミリリットルづつ採血し血清を分離採取し
た。血清中のグルコース濃度をグルコースＣテストワコ
ー（和光純薬）定量した。〔図１〕に血清中グルコース
濃度の時間推移を示す。比較製剤２の生理食塩水注射液
投与群では血清中グルコース濃度はほとんど変動しなか
った。比較製剤１のインスリン溶液投与群では血清中グ
ルコース濃度は投与後３０分から低下しているが、投与
後１２０分目から上昇を始めていた。一方、実施例１の
製剤のポリエチレングリコール２０００を添加したイン
スリン溶液投与群では投与後３０分目から血清中グルコ
ース濃度は低下し投与後６時間目でもほぼ同じ低い値で
あった。なお、インスリンのラットにおける体重１キロ
グラムあたりのクリアランスは１４１６ミリリットル／
時間と報告されている（ハルバン他、メタボリズム、第
２８巻、１０９７ページ〜１１０４ページ（１９７９
年））。

【００６４】実験例２ 比較製剤３：豚インスリン(２６.８ユニット／ミリグラ
ム：ディオシンス社(オランダ))の１０ミリグラムを５
ミリリットルの０.１規定塩酸で溶解した。この 溶液
０.７ミリリットルと平均分子量４００のポリエチレン
グリコール４００（和光純薬）を１０％（Ｗ／Ｖ）の濃
度で溶解させた注射用生理食塩水０.７ミリリ ットルを
加え、混合した。さらに、これにクエン酸水和物１７ミ
リグラム、クエン酸ナトリウム１７ミリグラム、マンニ
トール２８ミリグラムを加えて溶解させた。本製剤の１
ミリリットルをガラス製バイアルに移し、公知の凍結乾
燥操作を行なった（凍結乾燥装置：ライオバックＧＴ−
３、リーボールド社）。実施例２から実施例７で得られ
た平均分子量２０００あるいは３０００のポリエチレン
グリコールを配合したインスリン持続性製剤ではスポン
ジケーキ状の一様な凍結乾燥物が得られたのに比較し
て、比較製剤３のポリエチレングリコール４００を配合
したインスリン製剤では常温で液体のポリエチレングリ
コール４００のために凍結乾燥物に濡れが見られた。こ
のことは不安定なペプチドの製剤化の方法として汎用さ
れる凍結乾燥をおこなう際には配合剤として平均分子量
２０００あるいは３０００のポリエチレングリコールが
ポリエチレングリコール４００よりも優れていることを
示している。

【００６５】実験例３ 比較製剤４：豚インスリン（２６.８ユニット／ミリグ
ラム：ディオシンス社（オランダ））の１０ミリグラム
を５ミリリットルの０.１規定塩酸で溶解した。この溶
液０.７ミリリットルに平均分子量４００のポリエチレ
ングリコール４０ ０（和光純薬）を４.２ミリグラム溶
解させた注射用生理食塩水０.７ミリリットルを加え、
混合した。 比較製剤５：豚インスリン(２６.８ユニット／ミリグラ
ム：ディオシンス社(オランダ))の１０ミリグラムを５
ミリリットルの０.１規定塩酸で溶解した。この 溶液
０.７ミリリットルに注射用生理食塩水０.７ミリリット
ルを加えた。 比較製剤６： 注射用生理食塩水 ２ ミリリットル ８週齢の雄性ＳＤ系ラット背部皮下に、２００マイクロ
グラム／ラットの薬用量で実施例８の製剤，比較製剤４
または比較製剤５の注射液を投与した。対照として比較
製剤６の生理食塩水注射液を同様に投与した。投与前お
よび一定時間毎に約０.４ミリリットルづつ採血し血清
を分離採取した。血清中のグルコース濃度をグルコース
Ｃテストワコー（和光純薬）で定量した。〔図２〕に血
清中グルコース濃度の時間推移を示す。比較製剤６の生
理食塩水注射液投与群では血清中グルコース濃度はほと
んど変動しなかった。比較製剤５のインスリン溶液投与
群では血清中グルコース濃度は投与後３０分から低下し
ているが、投与後１２０分目から上昇を始めていた。比
較製剤４のポリエチレングリコール４００を含むインス
リン溶液投与群では血清中グルコース濃度は投与後３０
分から低下しているが、投与後２４０分目から上昇を始
めていた。一方、実施例８の製剤のポリエチレングリコ
ール２０００を添加したインスリン溶液投与群では投与
後３０分目から血清中グルコース濃度は低下し投与後６
時間目でもほぼ同じ低い値であった。このことから添加
するポリエチレングリコールの分子量は大きいもののほ
うがより持続効果が得られることが判明した。

【００６６】実験例４ 比較製剤７：豚インスリン（２６.８ユニット／ミリグ
ラム：ディオシンス社（オランダ））の１２ミリグラム
を１ミリリットルの０.１規定の塩酸に溶解し、さらに
５ミリリットル注射用生理食塩水を加えて希釈した。こ
のインスリン水溶液１ミリリットルに注射用生理食塩水
１ミリリットルを加えインスリン注射液を調製した。８
週齢の雄性ＳＤ系ラット背部皮下に、２００マイクログ
ラム／ラットの薬用量で実施例９の製剤および比較製剤
７の注射液を投与した。投与前および一定時間毎に約
０.４ミリリットルづつ採血し血清を分離採取した。血
清中のグルコース濃度をグルコースＣテストワコー（和
光純薬）定量した。〔図３〕に血清中グルコース濃度の
時間推移を示す。比較製剤７のポリエチレングリコール
２０００を含まないインスリン溶液投与群では血清中グ
ルコース濃度は一旦低下しているが、投与後１８０分目
から上昇を始め３６０分目ではほぼ正常値に復してい
た。一方、ポリエチレングリコール２０００を含むイン
スリン溶液投与群では血清中グルコース濃度は一旦低下
しているが、ポリエチレングリコールの濃度が高くなる
ほど血糖値の回復が遅れる傾向があり、２％（Ｗ／Ｖ）
のポリエチレングリコール水溶液で２倍希釈したインス
リン注射液投与群では投与後２４０分目から血糖値が回
復し始めていた。濃度１０％（Ｗ／Ｖ）のポリエチレン
グリコール２０００水溶液で２倍希釈したインスリン注
射液投与群ではさらに血糖値が低下しており、投与後２
４０分目からの血糖値の回復も弱かった。しかし、使用
したポリエチレングリコール２０００の濃度を２０％
（Ｗ／Ｖ）に上げても大きな薬効増強はみられなかっ
た。このことから高くても約５％（Ｗ／Ｖ）のポリエチ
レングリコールが共存することによりインスリンの持続
効果が得られることが判明した。

【００６７】実験例５ 比較製剤８：３００万国際単位のインターフェロンアル
ファと５ミリグラムのヒト血清アルブミンを含むインタ
ーフェロンアルファ製剤（武田薬品）２バイアルにそれ
ぞれ注射用蒸留水１ミリリットルを加え、合わせた。こ
のうち１.２ミリリットルをとり、注射用生理食塩水
（扶桑薬品）０.６ミリリットルを加えて混合した。８
週齢の雄性ＳＤ系ラット背部皮下に、０.３ミリリット
ル／ラットの薬用量で実施例１０の製剤または比較製剤
８の注射液を投与した。投与後、一定時間毎に約０.４
ミリリットルづつ採血し血清を分離採取した。血清中の
インターフェロンアルファ濃度は ELISA 法で定量し
た。〔図４〕にその結果を示す。インターフェロンアル
ファを単独で投与した群では投与後１時間目から、急速
に血液中濃度が減少していた。一方、平均分子量３００
０のポリエチレングリコールと混合して投与した群では
投与後１時間目および２時間目ではインターフェロンア
ルファ単独投与群よりも低い血液中濃度であったが、投
与後４時間目および６時間目ではインターフェロンアル
ファ単独投与群に比較して高い血液中濃度を維持してい
た。このことはインターフェロンアルファと平均分子量
３０００のポリエチレングリコールを混合して投与する
ことにより、血液中濃度のピークを低くして望ましくな
い副作用の発現を抑制しながら、高い血液中濃度を持続
させることが可能なことを示している。なお、インター
フェロンアルファのラットにおける体重１キログラムあ
たりのクリアランスは１２３ミリリットル／時間であっ
た。

【００６８】実験例６ 比較製剤９：３００万国際単位のインターフェロンアル
ファと５ミリグラムのヒト血清アルブミンを含むインタ
ーフェロンアルファ製剤（武田薬品）２バイアルにそれ
ぞれ注射用蒸留水１ミリリットルを加え、合わせた。こ
のうち１.２ミリリットルをとり、注射用生理食塩水
（扶桑薬品）０.６ミリリットルを加えて混合した。８
週齢の雄性ＳＤ系ラット背部皮下に、０.３ミリリット
ル／ラットの薬用量で実施例１１の製剤、実施例１２の
製剤または比較製剤９の注射液をそれぞれ投与した。投
与後、一定時間毎に約０．４ミリリットルづつ採血し血
清を分離採取した。血清中のインターフェロンアルファ
濃度はＥＬＩＳＡ法で定量した。〔図５〕にその結果を
示す。インターフェロンアルファを単独で投与した群で
は投与後１時間目から、急速に血液中濃度が減少してい
た。一方、平均分子量２０００または３０００のポリエ
チレングリコールと混合して投与した群では投与後１時
間目および２時間目ではインターフェロンアルファ単独
投与群よりも低いかあるいはほぼ同じ血液中濃度であっ
たが、投与後４時間目および６時間目ではインターフェ
ロンアルファ単独投与群に比較して高い血液中濃度を維
持していた。このことはインターフェロンアルファと平
均分子量２０００または３０００のポリエチレングリコ
ールを混合して投与することにより、血液中濃度のピー
クを低くして望ましくない副作用の発現を抑制しなが
ら、高い血液中濃度を持続させることが可能なことを示
している。

【００６９】実験例７ 比較製剤１０：４００ミリグラムのポリエチレングリコ
ール６０００（和光一級 平均分子量７５００）と５０
０ミリグラムのＤ−マンニトール（和光特級）を１０ミ
リリットルの注射用生理食塩水（扶桑薬品）に溶解し、
これに２０％（Ｗ／Ｖ）のヒト血清アルブミンを含有す
るアルブミンニチヤク（日本製薬）を０.１ミリリット
ル添加 し混合した。この溶液と豚インスリン（２６.８
ユニット／ミリグラム：ディオ シンス社（オラン
ダ））の１０ミリグラムを２ミリリットルの０.１規定
塩酸で 溶解したものを混合した。得られた溶液には沈
殿は見られず、澄明な溶液が得られた。凍結乾燥装置ラ
イオバックＧＴ−３（リーボールドヘラエウス社、ドイ
ツ）を用いて自体公知な方法で該混合物を凍結乾燥し
た。実施例１３で得られた２種の凍結乾燥物あるいは比
較製剤１０にそれぞれ１０ミリリットルの注射用蒸留水
（扶桑薬品）と２ミリリットルの０.１規定塩酸の混液
を加え溶解したところ、ポリエ チレングリコール６０
００を用いた群においてのみ、乳白色の白濁がみられ
た。このことからポリエチレングリコール６０００以上
の平均分子量のポリエチレングリコールはペプチドに変
性をきたすため、凍結乾燥可能な注射用医薬組成物とし
て本発明において使用することはできない。

【００７０】実験例８ 比較製剤１１：豚インスリン（２６.８ユニット／ミリ
グラム：ディオシンス社（オランダ））の４.５ミリグ
ラムを０.５ミリリットルの０.１規定の塩酸に溶解し、
さらに２.５ミリリットル注射用生理食塩水を加えて希
釈した。６００ミリグラムの平均分子量１５００のポリ
エチレングリコール１５４０（和光純薬）を３ミリリッ
トルの注射用生理食塩水に溶解し２０％（Ｗ／Ｖ）のポ
リエチレングリコール溶液を調製した。豚インスリン溶
液１ミリリットルにポリエチレングリコール溶液０.５
ミリリットル、注射用生理食塩水０.５ミリリットルを
加えてインスリン注射液を調製した。 比較製剤１２：豚インスリン（２６.８ユニット／ミリ
グラム：ディオシンス社（オランダ））の４.５ミリグ
ラムを０.５ミリリットルの０.１規定の塩酸に溶解し、
さらに２.５ミリリットル注射用生理食塩水を加えて希
釈した。このインスリン溶液１ミリリットルに注射用生
理食塩水１ミリリットルを加えてインスリン注射液を調
製した。１１〜１２週齢の雄性ＳＤ系ラット背部皮下
に、１５０マイクログラム／ラットの薬用量で実施例１
４の製剤または比較製剤１１の注射液を投与した。対照
として比較製剤１２の注射液を投与した。投与前および
一定時間毎に約０.４ミリリットルづつ採血し血清を分
離採取した。血清中のグルコース濃度をグルコースＣテ
ストワコー（和光純薬）で定量した。〔図６〕に血清中
グルコース濃度の時間推移を示す。比較製剤１２のイン
スリン溶液投与群では血清中グルコース濃度は投与後２
時間目まで低下しているが、その後上昇し、投与後５時
間目にはほぼ投与前の値に復していた。比較製剤１１の
ポリエチレングリコール１５４０を含むインスリン溶液
投与群では血清中グルコース濃度は比較製剤１２投与群
とほぼ同じ血糖値の経時変化を示し、差はみられなかっ
た。一方、実施例１４の製剤のポリエチレングリコール
２０００を添加したインスリン溶液投与群では投与後３
時間目まで血清中グルコース濃度の低下が持続し、投与
後５時間目でも比較製剤１１または比較製剤１２投与群
の血糖値の約半分の低い値であった。このことから添加
するポリエチレングリコールの平均分子量が１５００の
ポリエチレングリコール１５４０では持続効果が得られ
ず、平均分子量２０００のポリエチレングリコール２０
００では充分な持続効果が得られることが判明した。

【００７１】実験例９ 比較製剤１３：Ｇ−ＣＳＦを含む製剤であるフィルグラ
スティム（Filgrastim）（アムジェン社、アメリカ）の
２３マイクロリットルに、注射用生理食塩水２.０７７
ミリリットルを加えてＧ−ＣＳＦ注射液を調製した。 比較製剤１４：６００ミリグラムの平均分子量２０００
のポリエチレングリコール２０００（和光純薬）を３ミ
リリットルの注射用生理食塩水に溶解し２０％（Ｗ／
Ｖ）のポリエチレングリコール溶液を調製した。注射用
生理食塩水１.７５ミリリットルとこのポリエチレング
リコール溶液０.３５ミリリットルを加えて注射液を調
製した。８週齢の雄性ＳＤ系ラット背部皮下にヒトＧ−
ＣＳＦを含む実施例１５の製剤、比較製剤１３、比較製
剤１４の各注射液を０.３ミリリットルづつそれぞれ投
与した。投与後７時間目に約０.４ミリリットルづつ採
血し（抗凝固剤としてＥＤＴＡ ２Ｎa を使用）、末梢
白血球数、赤血球数、血小板数はミクロセルカウンター
ＣＣ−１８０Ａ型（東亜医用電子）を用いて測定した。
末梢好中球数、リンパ球数、単球数、好酸球数はギムザ
染色を施した血液塗抹標本を鏡検することにより白血球
２００個を分類し、それぞれの細胞の出現頻度を白血球
数に乗じて算出した。結果は以下に示す（各群４匹のラ
ットの平均値）： 血液１立法ミリメートルあたり 末梢好中球数（×１００個） 実施例１５の製剤 １０７.０ 比較製剤１３． ８４.０ 比較製剤１４． ５２.５ この結果より、ラットにおけるクリアランスが体重１キ
ログラム当たり５３.０〜７９.８ミリリットル／時間で
あるＧ−ＣＳＦに平均分子量２０００のポリエチレング
リコールを添加することにより、薬理効果が増強されて
いることが判明した。一旦、増加した末梢好中球は通常
の生理的メカニズムにより末梢血から消失していくこと
が知られており、ポリエチレングリコール添加による末
梢好中球数増加効果が持続することは明らかである。

【００７２】

【発明の効果】本発明の注射用組成物は、主薬である水
溶性ペプチドの生体内における薬理作用を持続させる。
そのため、注射による投与回数を減らすことが可能にな
る。このことは、医療行為による患者の苦痛を軽減し、
かつ医療従事者の負担をも軽減できるという特徴があ
る。

【００７３】

【図面の簡単な説明】

【図１】は、実験例１で得られた、実施例１の製剤
（△）、比較製剤１（○）または比較製剤２（○を黒く
塗りつぶした印）を投与後の血清中グルコース濃度の時
間推移を示したものである。

【図２】は、実験例３で得られた、実施例８の製剤
（○）、比較製剤４（□）、比較製剤５（○を黒く塗り
つぶした印）または比較製剤６（△）を投与後の血清中
グルコース濃度の時間推移を示したものである。

【図３】は、実験例４で得られた、実施例９のインスリ
ン溶液をポリエチレングリコール２０００の濃度が２％
（Ｗ／Ｖ）の溶液で２倍希釈したもの（○を黒く塗りつ
ぶしたもの）、１０％（Ｗ／Ｖ）の溶液で２倍希釈した
したもの（□）または２０％（Ｗ／Ｖ）の溶液で２倍希
釈したもの（△）を投与後の血清中グルコース濃度の時
間推移を示したものである。

【図４】は、実験例５で得られた、比較製剤８（○を黒
く塗りつぶした印）または実施例１０の製剤（○）を投
与後の血清中インターフェロンアルファ濃度の時間推移
を示したものである。

【図５】は、実験例６で得られた、比較製剤９（○を黒
く塗りつぶした印）、実施例１１の製剤（○）または実
施例１２の製剤（□）を投与後の血清中インターフェロ
ンアルファ濃度の時間推移を示したものである。

【図６】は、実験例８で得られた、実施例１４の製剤
（○）、比較製剤１１（○を黒く塗りつぶした印）また
は比較製剤１２（□）を投与後の血清中グルコース濃度
の時間推移を示したものである。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】ラットにおけるクリアランスが体重１キロ
   グラムあたり３０ミリリットル／時間以上である水溶性
   ペプチドと常温でワックス様固体の平均分子量２０００
   〜６０００のポリエチレングリコールを配合してなる水
   溶性注射用医薬組成物。
2. 【請求項２】さらに、生体内に注入可能な実質的に薬理
   活性を持たない水溶性蛋白を配合してなる請求項１記載
   の医薬組成物。
3. 【請求項３】さらに、酸性ムコ多糖類を配合してなる請
   求項１または２記載の医薬組成物。