JPH05239039A - テクネチウムまたはレニウムで物質を標識する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 テクネチウムまたはレニウム同位元素で物質
を標識する方法において、 ａ） 標識すべき物質を式Ｉ 【化１】 〔式中、Ｒは−ＮＨ₂、−Ｎ＝Ｃ＝Ｓ、 【化２】 であり、Ｘは（Ｃ₁〜Ｃ₆）−アルキレン、（Ｃ₆〜
Ｃ₁₂）−アリーレンまたは（Ｃ₁〜Ｃ ₆）−アルク−（Ｃ
₆〜Ｃ₁₂）−アリーレンである〕の大環状錯化剤と反応
させ、得られた化合物を標識するか、またはｂ）式Ｉの
化合物の錯化剤をまず標識し、ついで標識すべき物質と
反応させることからなる方法およびその目的で用いられ
るキット。 【効果】 得られた錯体は中性のpHでの高い安定性を有
し、本発明の方法は、蛋白質、糖、脂肪酸、ホルモンお
よびポリマー、とくに抗体およびそれらのフラグメント
の標識に使用することができ、たとえば腫瘍関連抗原の
検出に用いられる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、物質を錯化剤の補助によりとく
に放射性のテクネチウムまたはレニウム同位元素で標識
する方法、およびこれらの標識物質の使用に関する。

【０００２】放射性核種の工業的応用の可能性はきわめ
て多様である。たとえば、連続操作生産プラントにおけ
る混合物の試験、希釈分析による重量もしくは容量の決
定、流速の測定および滞留時間の記録等に及んでいる。

【０００３】しかしながら、通常、放射性核種の単なる
混合では不十分であって、たとえばある系の特定の成分
の「モニタリング」に際しては、放射性核種は検討すべ
き成分中の少なくとも一つの化合物に物理的にまたはさ
らに好ましくは化学的にカップリングさせねばならず、
またこれは可能であれば、関係する化合物の物理的また
は化学的性質に影響することなく、行われなければなら
ない。

【０００４】免疫シンチグラフィー、すなわち放射能に
よって標識された抗体もしくはそのフラグメントまたは
遺伝子操作で得られた免疫反応性蛋白質の注射による患
者の病的変化の描出のための非侵襲的方法は、とくに悪
性疾患の診断において、その臨床的重要性が益々高まっ
ている。

【０００５】とくに、テクネチウム−９９ｍは、その好
ましい物理的性質（粒子線放射がなく、γ−エネルギ
ー：１４０keV、半減期：６時間）およびそれに伴う放
射線への被爆が少ないことから、核医学診断において最
も重要な放射性核種となっている。

【０００６】レニウム同位元素、Ｒｅ−１８６およびＲ
ｅ−１８８は、β−放射核種である。これらは、エネル
ギーに富んだβ−照射は細胞毒性を有することから、腫
瘍の治療に使用できる。腫瘍中への選択的濃縮も、たと
えば腫瘍特異的モノクローナル抗体への接合によって実
施できる。レニウムの酸化還元および配位の体系はテク
ネチウムの場合にきわめて類似している。

【０００７】核種製造装置から得られるテクネチウム−
９９ｍは、最初は過テクネチウム酸塩（pertechnetat
e）として存在し、この型でたとえば甲状腺や脳のシン
チグラフィーに適している。テクネチウム−９９ｍを用
いた他の臓器のシンチグラフィーは、一方ではテクネチ
ウムを結合することができ、他方では高い選択性によっ
て標的臓器における放射性核種を濃厚化できる特異的
「輸送物質」の補助により実施される。臓器特異的「輸
送物質」のテクネチウム−９９ｍによる標識には、核種
製造装置から溶出される過テクネチウム酸塩をまず、低
酸化状態に変換しなければならない。この還元状態で
は、テクネチウムは臓器特異的物質と、多かれ少なかれ
安定な化合物を形成する。骨のシンチグラフィーには、
たとえば、Ｔｃ−９９ｍ−リン酸誘導体とくに有機リン
酸誘導体が使用される。すなわち、３,３−ジホスホノ
−１,２−プロパンジカルボン酸のナトリウム塩が、Ｅ
Ｐ−Ａ ０,００２,４８５に記載された標識単位中に臓
器特異的「輸送物質」として存在する。ＥＰ−Ａ ０,１
０８,２５３には、ＲＥＳ、とくに肝のシンチグラフィ
ーによる描出のための、Ｔｃ−９９ｍ−トリおよびテト
ラホスホン酸が記載されている。ジエチレントリアミン
ペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）とのＴｃ−９９ｍの錯体は、腎
疾患または脳の病的過程の診断に使用されている。

【０００８】テクネチウム−９９ｍによる特異的物質の
標識化および臨床的なルーチンの要求に適した試験キッ
トの製造については、特別の方法が開発され、報告され
ている。生物学的に興味のあるマクロ分子、とくにポル
フィリン、デキストラン、シトクロームおよびミオグロ
ビン用の標識キットの製造には、標識すべき物質を、ｐ
−アミノ安息香酸および塩酸塩化錫溶液とともに凍結乾
燥する方法が報告されている（G.D. Zanelli, D. Ellis
on, M.P. Barrowcliffe, Nucl. Med. Commun.８，１９
９〜２０６, １９８７）。このキットの再構築および標
識に際しては、Ｔｃ−９９ｍ発生装置の溶出液を予め適
当な緩衝液、たとえばクエン酸−食塩緩衝液pH９.５で
希釈して添加する。しかしながら、酸感受性物質にはこ
の方法は不適当である。

【０００９】他の方法（E.K.J. Pauwels, R.I.J. Feits
ma, WO ８６／０３０１０）では、過テクネチウム酸塩
をまず、強塩酸溶液中、１４０℃に４時間加熱してＴｃ
−９９ｍに還元し、アミノ基を含有する化合物たとえば
ジメチルホルムアミドに結合させる。難溶性の結晶性物
質として沈殿した、反応性のＴｃ−９９ｍ標識中間体を
標識すべき化合物と、緩衝液たとえば炭酸ナトリウム溶
液中、室温で１時間インキュベートして反応させる。こ
の方法では、明らかに錫を用いないで操作できるが、そ
の複雑な工程のため、ルーチンの使用には不適当であ
る。

【００１０】蛋白質、とくに抗体の標識には、２つの異
なる方法が知られている。直接法では、還元されたテク
ネチウム−９９ｍが、蛋白質のドナー基（アミノ、アミ
ド、チオール等）によって結合される。

【００１１】このような方法は、ＥＰ−Ａ ０,００５,
６３８およびＵＳ−Ａ ４,４７８,８１５に記載されて
いる。これらの方法では、ジスルフィド橋の同時還元的
切断と添加Ｔｃ−９９ｍ過テクネチウム酸塩の還元のた
めに錫（II）塩が過剰に用いられる。一般的に、−Ｓ−
Ｓ−結合の切断には長いインキュベーション時間（２４
時間）が必要で、Ｆ(ａｂ′)₂フラグメントは部分的に
切断されてＦ(ａｂ)フラグメントを与える。最近の文献
報告（たとえば、J. Nucl. Med. ２７, ６８５〜６９３
および１３１５〜１３２０，１９８６；また Int. J. N
ucl. Med. Biol.１２, ３〜８，１９８５）には、その
２つのフラグメントの割合は「錫との反応」に依存し、
Ｔｃ−９９ｍ標識後の２成分の比には目につくような変
化はもはやなく、主要な成分はＴｃ−９９ｍ標識Ｆ(ａ
ｂ′)であることが示されている。いずれの場合も、少
なくとも３０分の反応時間にもかかわらず過テクネチウ
ム酸塩の定量的な反応は達成されなかったので、標識Ｆ
(ａｂ′)フラグメントは精製されなければならなかっ
た。

【００１２】ヒト血漿蛋白質をＴｃ−９９ｍで標識する
ための、迅速な化学的方法（D.W. Wong, F. Mishin, T.
Lee, J. Nucl. Med. ２０，９６７〜９７２，１９７
９）では、過テクネチウム酸塩はまず、酸性溶液中錫
（II）イオンを用いて還元し、還元されたテクネチウム
をついで蛋白質と反応させる。

【００１３】二官能性錯化剤の補助により、物質の放射
性同位元素による安定な標識が達成できる。

【００１４】米国特許第４,４７９,９３０号には、Ｉｎ
−１１１およびＧａ−６７のみでなくＴｃ−９９ｍに対
する錯化剤として、ＥＴＰＡおよびＥＤＴＡに言及され
ている。ＥＰ−Ａ ０,０３５,７６５には、テクネチウ
ム−９９ｍの蛋白質への錯化の場合の錯化剤として、デ
フェロキサミンの使用が述べられている。国際特許出願
WO ８５／３０６３には、抗体中の部分還元ジスルフィ
ド橋を、前もって過テクネチウム酸塩とナトリウムアジ
ドの反応によって調整されねばならないテトラクロロニ
トリドテクネチウム酸のナトリウム塩と反応させる。Ｅ
Ｐ−Ａ ０,１９４,８５３では、還元によって生成され
た抗体フラグメント中の遊離チオール基が同様に、キレ
ート錯体としての〔（７−マレイミドヘプチル）イミノ
−ビス（エチレンニトリロ）〕四酢酸の結合に用いられ
る。錯体の抗体へのカップリングは、錯体化合物のマレ
イミド残基中の二重結合とＳＨ基の反応によって行わ
れ、一方、放射性金属イオンはニトリロ二酢酸残基によ
って錯化される。

【００１５】テクネチウム−９９ｍを診断剤として広範
に使用可能にするためには、この核種を、検査すべき臓
器に選択的に輸送することが必要である。一方、患者の
不必要な照射被爆を避けるために、テクネチウム−９９
ｍは、他の臓器または臓器系からは急速に消失するかま
たはまったく取り込まれないことが必要である。この目
的では、現在までテクネチウム−９９ｍで直接標識でき
て、高い臓器特異性を有する物質が主に使用されてき
た。他にも、明らかな高い臓器特異性を有する物質は多
いが、直接標識することができない。これらには、蛋白
質（フィブリノーゲン、ヒト血清アルブミン）、酵素
（ストレプトキナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ）、糖
（デキストラン、グルコース）あるいはポリマーがあ
る。これらにはまた、低分子量物質、たとえば心臓の高
いエネルギーの要求に応えて心筋に濃縮される脂肪酸が
包含される。これらの物質を標識させるためには、テク
ネチウム−９９ｍに強固に結合できる錯化剤にカップリ
ングさせる。

【００１６】テクネチウムおよびレニウム同位元素を錯
化するための既知の適当な錯化剤には、大環状アミン、
とくにcyclamがある。テクネチウム−cyclam錯体の錯化
収率は、適当な条件下には９９％である。テクネチウム
−アミン錯体の詳細については、D.E. Troutner, J. Si
mon, A.R. Ketring, W.A. Volkert, R.A. Holmes, J.Nu
cl. Med. ２１(１９８０)， ４４３またはS.A. Zuckma
n, G.M. Freeman, D.E. Troutner, W.A. Volkert, R.A.
Holmes, D.G. van der Keer, E.K. Barefield, lnorg.
Ch. ２０(１９８１)，３３８６またはJ. Simon, D. Tr
outner, W.A. Volkert, R.A. Holmes, Radiochem. Radi
onal. Lett. ４７(１９８１）IIIに記載されている。１
−窒素ならびに６−窒素の両者が置換された置換cyclam
も知られている〔A.R. Ketring, D.E. Troutnerら、In
t. J. Nucl. Med. Biol. １１(１９８４)、１１３また
はJ. Simon, Diss. Abstr. Int. Ｂ４２(１９８１), ６
４５またはM. Struden, T.A. Kaden, Helv. Chim. Acta
６９(１９８６)，２０１またはE. Kumura, R. Machid
a, Kodama, J. Am. Chem. Soc. １０６(１９８４),５４
９７〕。

【００１７】アミンリガンドおよび他のリガンドを蛋白
質に接合させる試みは〔FritzbergらJ. Nucl. Med. ２
７(１９８６)，９５７またはTolmanら、 J. Nucl. Med.
２５(１９８４)，２０またはArnoら、 Int. J. Nucl. Me
d. Biol. １２(１９８６)４２５参照〕すべて、in vivo
における高い安定性の要求をまったくまたは部分的にし
か満足しなかった。

【００１８】ＥＰ−Ａ ０,３０４,７８０には、安定性
が改良された特定のＮ−およびＣ−置換大環状アミン誘
導体が記載されている。しかしながらその欠点は、標識
すべき物質（たとえば蛋白質）に無害なpH範囲でも、錯
体の安定性は十分大きくないことである。強い塩基性pH
範囲でのみ、大環状キレート剤とも完全な錯体形成が達
成できる。

【００１９】したがって、本発明の目的は中性のpH範
囲、すなわち９未満のpHで、程度の高い錯体の形成を可
能にする、テクネチウムまたはレニウムによる物質の標
識方法を提供する。さらに、本発明の目的は、in vivo
条件、すなわち中性のpH範囲で高い安定性を有する、テ
クネチウムまたはレニウムに対するキレート剤を提供す
ることにある。

【００２０】本発明は、ａ）標識すべき物質を式Ｉ

【化３】 〔式中、Ｒは−ＮＨ₂、−Ｎ＝Ｃ＝Ｓ、

【化４】 であり、Ｘは（Ｃ₁〜Ｃ₆）−アルキレン、（Ｃ₆〜
Ｃ₁₂）−アリーレンまたは（Ｃ₁〜Ｃ ₆）−アルク−（Ｃ
₆〜Ｃ₁₂）−アリーレン、とくに（Ｃ₁〜Ｃ₄）−アルキ
レン、フェニレン、好ましくは１,４−フェニレンまた
は（Ｃ₁〜Ｃ₄）−アルク−１,４−フェニレンである〕
の大環状錯化剤と反応させ、得られた化合物を９未満の
pHにおいて、過テクネチウム酸塩−９９もしくは−９９
ｍまたは過レニウム酸塩−１８６（perrhenate−１８
６）もしくは−１８８および還元剤で処理することによ
ってＴｃ−９９、Ｔｃ−９９ｍ、Ｒｅ−１８６またはＲ
ｅ−１８８で標識するか、または ｂ） 式Ｉの化合物を適当な過酸化化合物および還元剤
と９未満のpHで反応させることにより、まずＴｃ−９
９、Ｔｃ−９９ｍ、Ｒｅ−１８６またはＲｅ−１８８錯
体を製造し、ついでこの錯体を標識すべき物質と反応さ
せることからなる、テクネチウムまたはレニウム同位元
素で物質を標識する方法によって達成される。

【００２１】式Ｉのキレート剤または錯体の、標識すべ
き物質への結合は、ラジカルＲをかいして起こる。この
場合の方法では、共有結合の形成である。

【００２２】一般式Ｉの化合物は、ＥＰ−Ａ ０,３０
４,７８０に明らかに包含されている。しかしながら、
その時点ではそれらが中性のpHで、安定な錯体を形成す
る能力を有することは、まだ明らかにされていなかっ
た。実施例４によれば、pH１１で錯体が形成されている
が、使用されたＴｃ−９９ｍのわずか１０％が結合する
にすぎない。

【００２３】しかしながら、本発明によって選ばれた式
Ｉの化合物は、中性のメジウム中でも高い錯体安定性を
有する。すなわち、最初に導入されたＴｃまたはＲｅ同
位元素の９０％以上、好ましくは９５％以上が結合す
る。したがって、pHは９未満、好ましくは８未満（そし
てpH６.５以上）でなければならない。

【００２４】Cyclam（１,４,８,１１−テトラアザシク
ロテトラデカン）については、Ｔｃ−９９ｍの完全な錯
体形成は強塩基性条件下、すなわち、たとえば抗体には
不適当なpH範囲でのみ可能であることが知られている。
しかしながら、診断試験キットは臨床的に取扱い可能な
形でのみ存在するので、錯化剤がすでに標的特異的蛋白
質（たとえば、抗体もしくはそのフラグメントまたは遺
伝子操作免疫反応性蛋白質）に凍結乾燥された型で結合
して提供され、診療所では放射性核種（および必要に応
じて還元剤）だけを添加すればいいようにすると、錯体
形成は、標識される物質に無害なpH範囲において可能な
ことが望ましかった。たとえば、モノクローナル抗体
は、pH８での錯体形成では、免疫反応性およびアフィニ
ティーの有意な低下を生じることなく残存する。

【００２５】本発明の方法に使用される化合物は、この
ような処置をはじめて可能にするものである。ＥＰ−Ａ
０,３０４,７８０の化合物の、塩基性のpH範囲におい
てさえも低い安定性を考えると、上述のとくに選ばれた
化合物が、高い安定性にさらに重要な中性のpH範囲でも
この作用を示すことは、まったく驚くべきことであっ
た。

【００２６】本発明の方法においては、式Ｉの化合物
は、標識すべき物質に、官能基Ｒの補助によって結合さ
れる。接合体を所望により適当に精製したのち（蛋白質
もしくはポリマーの場合は限外濾過もしくは透析、また
ステロイドもしくは脂質のような低分子量物質の場合は
カラムクロマトグラフィーによる）、過テクネチウム酸
塩の形のテクネチウム−９９ｍまたは過レニウム酸塩の
形のレニウム−１８６もしくは１８８および、過テクネ
チウム酸塩もしくは過レニウム酸塩を錯体形成に必要な
酸化状態に還元するための適当な還元剤を、任意の所望
の順序にもしくは同時に加える。標識された基質は所望
により再び精製する。

【００２７】別法として、まず式Ｉの化合物に対するテ
クネチウムまたはレニウム錯体を生成させ、ついでこれ
を物質と反応させて接合体を得ることができる。この場
合、錯体形成と還元は上述のように進行する。錯体形成
反応は中性のpH範囲で行われる。とくに、９未満のpH、
好ましくは８未満（そしてpH６.５以上）で行われる。

【００２８】式Ｉのタイプの化合物の製造はＥＰ−Ａ
０,３０４,７８０によって公知である。

【００２９】過テクネチウム酸塩または過レニウム酸塩
の還元は、文献公知の方法により、好ましくは錫（II）
化合物で実施することができる。とくに好ましくは、還
元はＥＰ−Ａ ０,３０４,７８０に提案されている「標
識過程」により、錯体安定化錫（II）塩を用いて行われ
る。この方法では、錫（II）化合物をまず錯化剤、好ま
しくはリン化合物たとえばホスホネートまたはピロホス
フェートで処理し、これによりとくに錫化合物が生理的
pH範囲内の溶液に溶存することが保証される。この錯体
安定化錫(II)塩溶液は、ついで標識すべき物質に添加
し、続いて過テクネチウム酸塩または過レニウム酸塩溶
液を加えるか、または標識すべき物質と過テクネチウム
酸塩または過レニウム酸塩溶液の混合物に加えることが
できる。

【００３０】標識するのに適当な物質（担体物質または
臓器特異性物質）は、たとえば蛋白質（−ＮＨ、−ＮＨ
₂またはＣＯＯ基）、酵素（−ＮＨ₂、−ＯＨ、−Ｐ＝Ｏ
基）、糖（ＯＨ基）、脂肪酸、ホルモンまたはポリマー
である。抗体またはそれらのフラグメントの標識化がと
くに好ましく、モノクローナル抗体（フラグメント）
〔たとえばＦ(ａｂ′)₂またはＦ(ａｂ)フラグメント〕
または遺伝子操作で得られた免疫反応性蛋白質の標識化
がさらに好ましい。

【００３１】本発明はさらに、２種の分離された凍結乾
燥成分、すなわち一方は腫瘍関連抗原に対する抗体もし
くはそのＦ(ａｂ′)₂フラグメントを緩衝剤と混合して
含有し、その抗体もしくはそのフラグメントは式Ｉの大
環状化合物と結合していて、他方はテクネチウムもしく
はレニウムの還元およびその抗体成分への結合に必要な
還元剤を含有してなる、腫瘍検出用の試験キットに関す
る。

【００３２】以下に本発明を実施例によって例示する。

【００３３】実施例１ １−（ｐ−イソチオシアネートフェニル）−２,５,９,
１２−テトラアザシクロテトラデカン塩酸塩（Ｒ＝−Ｎ
＝Ｃ＝Ｓ）の製造 １a） ２,５,９,１２−テトラアザ−１３−（ｐ−ニト
ロフェニル）シクロテトラデカノンの合成

【化５】 ２５ｇの１,４,８,１１−テトラアザウンデカン（stre
m. Kehl, Germany）および３４.５ｇのｐ−ニコチナム
酸エチルエステル（Aldrich, Steinheim, Germany）を
湿気を避けながら、３リットルの無水メタノールに溶解
し、この混合物を沸騰石を加えて還流しながら１日８時
間加熱し、夜間は室温に放置して４週間反応させる。溶
媒を真空中で留去する。残留物を４００mlの水と撹拌
し、濾過し、水洗する。

【００３４】濾液を合わせて、２００mlのジエチルエー
テルで１回、１５０mlのメチレンクロリドで５回抽出す
る。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮乾固す
る。

【００３５】このようにして得られた固体（９.２ｇ）
を、使用前にメタノールで完全に洗浄したシリカゲル６
０のカラムによりクロマトグラフィーに付す。使用した
溶出液は、初期はメタノール、後期はメタノールからメ
タノール：濃アンモニア９：１の勾配とする。分画を集
め、これらを薄層クロマトグラフィーに付す。

【００３６】シリカゲルプレート上、メタノール：濃ア
ンモニア８：３混合物での、生成物の移動度は、Ｒｆ＝
０.７である。

【００３７】適当な分画を濃縮し、生成物は注意深く真
空中で乾燥し、残留メタノールを除去する。残留シリカ
ゲルの除去には、水またはアルコール溶液から再結晶で
きる。

【００３８】生成物は、凍結乾燥型のほぼ無色の、通常
はわずかに黄色をおびた羽毛状の固体として得られる。
収量は４.２ｇである。通常、カラムクロマトグラフィ
ーの他の分画からも、クロマトグラフィーを反復するこ
とにより、さらに生成物が得られる。分析は、¹Ｈ−Ｎ
ＭＲ、マススペクトル、ＴＬＣおよびＩＲによって実施
する。

【００３９】１b） ２,５,９,１２−テトラアザ−１３
−（ｐ−ニトロフェニル）シクロテトラデカノンの、
２,５,９,１２−テトラアザ−１３−（ｐ−アミノフェ
ニル）シクロテトラデカノンへの還元

【化６】 ３ｇの２,５,９,１２−テトラアザ−１３−（ｐ−ニト
ロフェニル）シクロテトラデカノンを、湿気を避けなが
ら４０mlの乾燥メタノールに溶解する。この混合物に２
００mgのパラジウムをカーボンに５％に分散（Aldrich,
Steinheim, Germany）して加える。装置をきわめて丹
念に窒素で洗浄したのち、激しく撹拌し空気を排除しな
がら、わずかに水素の陽圧を加えた。全部で（触媒の飽
和を含めて）９００mlの水素が吸収される。反応完了
後、混合物を数回濾過補材（たとえばCorlite^R）を通し
て濾過し、濾液を濃縮乾固し、残留物を真空乾燥する。

【００４０】生成物は通常、さらに精製を要しない純粋
な型で得られる。夾雑生成物がある場合は、続いて１
a）の場合と同様なカラムクロマトグラフィーを実施で
きる。シリカゲル上メタノール：濃アンモニア８：３を
用いたＴＬＣでの生成物のＲｆは０.５５である。収率
＞理論量の９８％、同定は¹Ｈ−ＮＭＲ、ＴＬＣ、ＭＳ
およびＩＲによる。

【００４１】１c） ２,５,９,１２−テトラアザ−１３
−（ｐ−アミノフェニル）シクロテトラデカノンの１−
（ｐ−アミノフェニル）−２,５,９,１２−テトラアザ
シクロテトラデカン（Ｒ＝ＮＨ₂）への還元

【化７】 ラクタム基の還元は、慣用のアミド還元法により、水素
化物を用いて実施できる。さまざまな水素化物の配合に
より、最良の結果が得られる。ボラン−ＴＨＦによる還
元を例として示すが、Lawessonの試薬およびＮａＢ
Ｈ₄、ならびに本技術分野の熟練者にはよく知られた他
の試薬も使用できる。この反応の収率は一般に定量的で
はない。しかしながら、非還元ラクタムはクロマトグラ
フィーによって回収できる。

【００４２】１ｇの２,５,９,１２−テトラアザ−１３
−（ｐ−アミノフェニル）シクロテトラデカノンを、ナ
トリウム上で乾燥したテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）６
０ml中に懸濁（一部は溶解）し、ＢＨ₃／ＴＨＦの１Ｎ
溶液８mlを加えたのち、還流下に２週間加熱した。過剰
のボランをメタノールで分解し、この溶液を濃縮する。
メタノールに３回溶解し、溶媒をそれぞれ濃縮し、残留
物を乾燥エタノールに取り、湿気を避けながら塩酸ガス
を通じる。１時間通じたのち（容器は氷浴で冷却）、混
合物を１０時間還流下に加熱し、ついで再び氷冷し、も
う一度塩酸ガスを飽和する。反応容器を密閉して、−１
８℃に１０時間以上冷却する。沈殿を濾過し、乾燥エタ
ノールで洗浄し凍結乾燥する。母液から、さらに粗製の
生成物を得ることができる。

【００４３】前もってアンモニアで中和した粗生成物に
ついて、１a）に記載したカラムクロマトグラフィーを
実施する。この場合の生成物はカラム中に残り、アンモ
ニア濃度をメタノール：濃アンモニア１：１まで増大さ
せていくと、出発原料の溶出に続いて溶出する。薄層ク
ロマトグラフィーにおけるＲｆは０.１（シリカゲル上
メタノール：濃アンモニア８：３）である。通常、純粋
な型の生成物を得るには、反復して数回のカラムクロマ
トグラフィーが必要である。

【００４４】生成物の同定は¹Ｈ−ＮＭＲ（１４−ＣＨ₂
および１−（以前は１３−）ＣＨシグナルの明瞭なシフ
ト）およびＩＲによる。収量：１００mg（還元法によっ
て異なる）。出発化合物はカラムクロマトグラフィーの
適当な分画から高純度で回収できる。

【００４５】１d） １−（ｐ−アミノフェニル）−２,
５,９,１２−テトラアザシクロテトラデカン（II、Ｒ＝
ＮＨ₂）のチオホスゲンとの反応による、１−（ｐ−イ
ソチオシアネートフェニル）−２,５,９,１２−テトラ
アザシクロテトラデカン塩酸塩（Ｒ＝−Ｎ＝Ｃ＝Ｓ）の
製造

【化８】 実施例１c)からの生成物２０mgを５mlの乾燥メチレンク
ロリドに部分溶解し、湿気を避けながら、９μｌのチオ
ホスゲンと１００mgの固体炭酸ナトリウムで処理した。
湿気を避けながら室温で４時間撹拌したのち、混合物を
濾過し、濾液を真空中で乾燥する。式ＩにおいてＲ＝−
Ｎ＝Ｃ＝Ｓである化合物が得られる。

【００４６】生成物は、¹Ｈ−ＮＭＲ（芳香族二重タブ
レットの消失、脂肪族シグナルのブロードニング）、Ｉ
Ｒおよびマススペクトルによって特徴づけられる。メチ
レンクロリドのような有機溶媒に易溶である。室温で、
とくに水性メジウム中において、徐々に反応して不溶性
のオリゴマーを生成する。

【００４７】実施例２ １−（ｐ−マレイミドフェニル）−２,５,９,１２−テ
トラアザシクロテトラデカン（Ｒ＝マレイミド）の合成

【化９】 実施例１c）からの生成物２９mgを、アセトン：メタノ
ールの５：１無水混合物１mlに部分溶解し、湿気を避け
ながら室温で激しく撹拌する。この混合物に、乾燥アセ
トン１００μｌ中１２mgの無水マレイン酸を加える。溶
液を濃縮乾固する。生成物を、１mlの無水酢酸中７mgの
無水酢酸ナトリウムと（湿気を避けながら）２時間５０
℃で撹拌し、ついで再び濃縮する。残留物を２mlの水に
取り、７０℃で２時間撹拌する。冷却すると、生成物が
沈殿する。これを濾過し、水洗し、凍結乾燥する。

【００４８】収率は理論量の４０％。¹Ｈ−ＮＭＲ、マ
ススペクトルおよびＩＲによって特徴づけられる。

【００４９】実施例３ １−（ｐ−アミノフェニル）−２,５,９,１２−テトラ
アザシクロテトラデカン（Ｒ＝ＮＨ₂）とＴｃ−９９ｍ
の錯体の形成 置換cyclam５.１mgを０.９％食塩溶液０.５mlに溶解す
る。この溶液０.１ml（１mg）を採取し、０.９％食塩溶
液０.８mlで希釈し、５３μｇのＳｎ²⁺を錫（II）クエ
ン酸塩の型で加え、この混合物をＭｏ−９９／Ｔｃ−９
９ｍ発生装置から溶出させたＴｃ−９９ｍ過テクネチウ
ム酸塩０.１ml（３２０ＭＢｑ）で処理する。反応溶液
を室温に１０分間放置する。

【００５０】放射化学的純度は、薄層クロマトグラフィ
ーおよび濾過試験によって調べた。薄層クロマトグラフ
ィー： 方法１： Gelman ITLC SG／メチルエチルケトンまたは
メタノール：水＝４：１ 方法２： Whatman １／メチルエチルケトン 濾過試験：正確に活性濃度がわかっている溶液約１mlを
フィルター（０.２２μm孔径）を通して濾過し、濾液中
の活性濃度を測定する。

【００５１】薄層クロマトグラフィー試験では、過テク
ネチウム塩酸はまったく検出されなかった。適用時点
で、全活性が残存した。ニンヒドリン染色では、不活性
物質もＲｆは０であることを示した。

【００５２】還元、コロイド状テクネチウムの形成を排
除するために、濾過試験を実施した。使用された活性の
９８％が濾液中に見出され、濾過性のコロイド状テクネ
チウムは導入されていなかった。

【００５３】このように、分析試験により、所望のＴｃ
−９９ｍ錯体が完全に形成されたことを示している。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 15/22 7731−4Ｈ Ｇ０１Ｎ 33/534 8310−2Ｊ (72)発明者 ルートヴイヒ・クールマン ドイツ連邦共和国デー−6093フレールスハ イム・アム・マイン．ベルリーナーシユト ラーセ57 (72)発明者 ミヒヤエル・マーガーシユテート ドイツ連邦共和国デー−6073エーゲルスバ ハ．テーオドール−ホイス−シユトラーセ 14 (72)発明者 アレクサンダー・シユヴアルツ ドイツ連邦共和国デー−6093フレールスハ イム・アム・マイン．ヴイーゼンリング61 (72)発明者 アクセル・シユタインシユトレーサー ドイツ連邦共和国デー−6237リーダーバ ハ．ツム・モルゲングラーベン26 (72)発明者 アクセル・ヴアルヒ ドイツ連邦共和国デー−6000フランクフル ト・アム・マイン．ハンス−ザクス−シユ トラーセ５ (72)発明者 マテイーアス・ヴイースナー ドイツ連邦共和国デー−6500マインツ．イ ム・ミユンヒフエルト８

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 テクネチウムまたはレニウム同位元素で
   物質を標識する方法において、 ａ） 標識すべき物質を式Ｉ 【化１】 〔式中、 Ｒは−ＮＨ₂、−Ｎ＝Ｃ＝Ｓ、 【化２】 であり、 Ｘは（Ｃ₁〜Ｃ₆）−アルキレン、（Ｃ₆〜Ｃ₁₂）−アリ
   ーレンまたは（Ｃ₁〜Ｃ ₆）−アルク−（Ｃ₆〜Ｃ₁₂）−
   アリーレンである〕の大環状錯化剤と反応させ、得られ
   た化合物を９未満のpHにおいて、過テクネチウム酸塩−
   ９９もしくは−９９ｍまたは過レニウム酸塩−１８６も
   しくは−１８８および還元剤で処理することによってＴ
   ｃ−９９、Ｔｃ−９９ｍ、Ｒｅ−１８６またはＲｅ−１
   ８８で標識するか、または ｂ） 式Ｉの化合物を適当な過酸化化合物および還元剤
   と９未満のpHで反応させることにより、まずＴｃ−９
   ９、Ｔｃ−９９ｍ、Ｒｅ−１８６またはＲｅ−１８８錯
   体を製造し、ついでこの錯体を標識すべき物質と反応さ
   せることからなる方法。
2. 【請求項２】 Ｘは（Ｃ₁〜Ｃ₄）−アルキレン、フェニ
   レン、とくに１,４−フェニレンまたは（Ｃ₁〜Ｃ₄）−
   アルク−１,４−フェニレンである請求項１記載の方
   法。
3. 【請求項３】 錯体形成は、使用したＴｃまたはＲｅに
   対して９０％以上の程度で起こる請求項１または２記載
   の方法。
4. 【請求項４】 標識すべき物質には、蛋白質、糖、脂肪
   酸、ホルモンおよびポリマーの群、とくに抗体およびそ
   れらのフラグメントが包含される請求項１〜３記載の方
   法。
5. 【請求項５】 標識すべき物質は、モノクローナル抗体
   またはそのフラグメントである請求項４記載の方法。
6. 【請求項６】 標識すべき物質は、反応性基Ｒと化学的
   結合を形成する反応性基を含有する請求項１〜５記載の
   方法。
7. 【請求項７】 使用される還元剤は錫（II）化合物、と
   くに錯体−安定化錫（II）塩である請求項１〜６記載の
   方法。
8. 【請求項８】 ２種の分離された凍結乾燥成分、すなわ
   ち一方は腫瘍関連抗原に対する抗体もしくはそのフラグ
   メントを緩衝剤と混合して含有し、その抗体もしくはそ
   のフラグメントは式Ｉの化合物と結合している成分、お
   よび他方はテクネチウムもしくはレニウムの還元および
   その抗体成分への結合に必要な還元剤を含有する成分か
   らなる、腫瘍検出用のキット。