JPH05255109A - 抗菌剤とこの抗菌剤を用いて物品を処理する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 ラクトフェリン類の分解物および／またはラ
クトフェリン関連抗菌性ペプチドの抗菌性が更に増強さ
れた抗菌剤を提供する。 【構成】 （Ａ）ラクトフェリン類の分解物、ラクトフ
ェリン関連抗菌性ペプチド、またはこれらの任意の混合
物からなる群より選択された化合物と、（Ｂ）カゼイン
分解物とを有効成分とする抗菌剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】この発明は、抗菌剤と、この抗菌
剤を用いて物品を処理する方法に関するものである。さ
らに詳しくは、この発明は、ラクトフェリン類の分解物
および／またはラクトフェリン関連抗菌性ペプチドの抗
菌性が更に増強された抗菌剤と、この抗菌剤を用いて物
品を処理する方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】ラクトフェリンは、生体内では、涙、唾
液、末梢血、乳汁等に含まれている天然の鉄結合蛋白質
であり、大腸菌、カンジダ菌、クロストリジウム菌等の
有害微生物に対して抗菌作用を示すことが知られている
［ジャ−ナル・オブ・ペディアトリクス（Journal of P
ediatrics ）、第９４巻、１頁：１９７９年］。また、
ブドウ球菌及び腸球菌に対して、０．５〜３０ｍｇ／ｍ
ｌの濃度で抗作用を有することが知られている［ノネッ
ケとスミス；ジャ−ナル・オブ・デアリ−・サイエンス
（Nonnecke,B.J. & Smith,K.L.;Journal of Dairy Scie
nce ）６７巻、６０６頁：１９８４年］。

【０００３】一方、従来より種々の微生物に対して抗菌
作用を有するペプチドについては多数の発明、例えばグ
ラム陽性菌およびグラム陰性菌に有効なホスホノトリペ
プチド（特開昭５７−１０６６８９号公報）、ホスホノ
ジペプチド誘導体（特開昭５８−１３５９４号公報）、
環状ペプチド誘導体（特開昭５８−２１３７４４号公
報）、抗菌及び抗ウイルス作用を示すペプチド（特開昭
５９−５１２４７号公報）、酵母に有効なポリペプチド
（特開昭６０−１３０５９９号公報）、グラム陽性菌に
有効な糖ペプチド誘導体（特開昭６０−１７２９９８号
公報、特開昭６１−２５１６９９号公報、特開昭６３−
４４５９８号公報）、グラム陽性菌に有効なオリゴペプ
チド（特開昭６２−２２７９８号公報）、ペプチド系抗
生物質（特開昭６２−５１６９７号公報、特開昭６３−
１７８９７号公報）その他北米産カブトガニの血球から
抽出した抗菌性ペプチド（特開平２−５３７９９号公
報）、蜜蜂の血リンパから単離した抗菌性ペプチド（特
表平２−５０００８４号公報）等が知られている。

【０００４】この発明の発明者等は、望ましくない副作
用等（例えば、抗原性等）がなく、耐熱性があり、かつ
強い抗菌作用を有する物質を自然界から安価に単離する
ことを企図し、ラクトフェリン類を酸または酵素により
加水分解した分解物が未分解のラクトフェリン類よりも
強い耐熱性および抗菌性を有することを見出し、すでに
特許出願を行った（特願平３−１７１７３６号）。

【０００５】更にこの発明の発明者等は、望ましくない
副作用等（例えば、抗原性等）がなく、耐熱性があり、
かつ強い抗菌作用を有するラクトフェリン関連抗菌性ペ
プチドとして、アミノ酸残基が２０残基である抗菌性ペ
プチド（特願平３−１８６２６０号）、アミノ酸残基が
１１残基である抗菌性ペプチド（特願平３−４８１９６
号）、アミノ酸残基が６残基である抗菌性ペプチド（特
願平３−９４４９２号）、アミノ酸残基が５残基である
抗菌性ペプチド（特願平３−９４４９３号）、アミノ酸
残基が３〜６残基である抗菌性ペプチド（特願平３−９
４４９４号）を発明し、すでに特許出願を行なった。

【０００６】なお、従来からラクトフェリンの抗菌性を
増強する研究が種々行われてきており、かかる生理活性
増強補助剤としてはリゾチ−ム、ＩｇＡおよびグリコペ
プチドが知られている。例えば、ラクトフェリンとリゾ
チ−ムとの共存により相乗的に抗菌作用を増強する方法
［特開昭６２−２４９９３１号公報］、ラクトフェリン
と分泌型ＩｇＡとの共存により相乗的に抗菌作用を増強
する方法［ステフェンス等；イムノロジ−（Stephens,
S.,et al;Immunology）；４１巻、５９７頁：１９８０
年］等が報告されている。更に、スピック等は［エ−・
エフ・ウイリアムスおよびジェ−・ディ−・バウム（A.
F.Williams & J.D.Baum ）編、「ヒュ−マン・ミルクバ
ンキング」（Human Milk Banking）、ネッスル・ヌ−ト
リション・ワ−クショップ・シリ−ズ、第５巻、（Nest
le Nutrition Workshop Series Volume 5 ）、１３３
頁、レ−ベン・プレス・ブック社（Raven Press Books,
Ltd.）、１９８４年］に、ラクトフェリンには細菌が粘
膜表面に付着するのを防止する作用があり、この作用は
リゾチ−ムまたはグリコペプチドの存在で強化されるこ
とを報告している。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記の
ラクトフェリン類の分解物、あるいはラクトフェリン関
連抗菌性ペプチドの抗菌活性を増強する方法、特に多成
分系の製品、物品（例えば、牛乳等）に上記のラクトフ
ェリン類の分解物またはラクトフェリン関連抗菌性ペプ
チドを使用する際に、その抗菌活性を増強する方法につ
いては知られていない。

【０００８】この発明は、この発明の発明者等が既に発
明した上記のラクトフェリン類の分解物および／または
ラクトフェリン関連抗菌性ペプチドを、特に多成分系の
製品、物品（例えば、牛乳等）に使用する際に、ラクト
フェリン類の分解物および／またはラクトフェリン関連
抗菌性ペプチドの抗菌性が更に増強された抗菌剤を提供
すること、およびこの抗菌剤を用いて物品を処理する方
法を提供することを目的としている。

【０００９】

【課題を解決するための手段】この発明の発明者らは上
記の課題について鋭意研究を重ねた結果、ラクトフェリ
ン類の分解物および／またはラクトフェリン関連抗菌性
ペプチドと、特定の化合物とを組み合わせることによっ
て、ラクトフェリン類の分解物および／またはラクトフ
ェリン関連抗菌性ペプチドを単独使用した場合に比し、
抗菌性を増大させ得ることを発見し、この発明を完成し
た。

【００１０】すなわちこの発明は、（Ａ）ラクトフェリ
ン類の分解物、ラクトフェリン関連抗菌性ペプチド、ま
たはこれらの任意の混合物からなる群より選択された化
合物と、（Ｂ）カゼイン分解物とを有効成分とする抗菌
剤を提供する。さらにこの発明は、（Ａ）ラクトフェリ
ン類の分解物、ラクトフェリン関連抗菌性ペプチド、ま
たはこれらの任意の混合物からなる群より選択された化
合物と、（Ｂ）カゼイン分解物とを有効成分とする抗菌
剤を用いて物品を処理する方法を提供する。

【００１１】次にこの発明について詳しく説明する。こ
の発明においてラクトフェリン類とは、市販のラクトフ
ェリン、哺乳類（例えば人、牛、羊、山羊、馬等）の初
乳、移行乳、常乳、末期乳等、またはこれらの乳の処理
物である脱脂乳、ホエ−等から常法（例えば、イオン交
換クロマトグラフィ−）により分離したラクトフェリ
ン、それらを塩酸、クエン酸等により脱鉄したアポラク
トフェリン、アポラクトフェリンを鉄、銅、亜鉛、マン
ガン等の金属でキレ−トさせた金属飽和または部分飽和
ラクトフェリン、もしくはこれらの混合物であり、市販
品を使用し、或いは公知の方法により調製して使用する
ことができる。

【００１２】この発明において使用するラクトフェリン
の分解物は、例えば上記のラクトフェリン類を酸または
酵素で加水分解する、特願平３−１７１７３６号の発明
に記載された方法によって得ることができる。即ち酸に
より加水分解を行う場合は、ラクトフェリン類を水溶液
とし、これに無機酸または有機酸を添加し、所定温度に
所定時間加熱して加水分解する。酵素により加水分解を
行う場合は、ラクトフェリン類を水溶液とし、使用する
酵素の至適ｐＨに調整し、これにペプシン、トリプシン
等の酵素を加え、所定温度に所定時間保持して加水分解
する。加水分解後は酵素を常法により失活させる。酸ま
たは酵素による加水分解で得られた分解物は、抗菌性を
有するペプチドを含有する、種々の分子量を有する分解
物の混合物である。上記加水分解による分解度は、６〜
２０％の範囲が望ましい。なお、上記分解度は、ケルダ
−ル法により試料の全窒素を、またホルモ−ル滴定法に
より試料のホルモ−ル態窒素を測定し、これらの値から
次式により算出した。

【００１３】 分解度＝（ホルモ−ル態窒素量／全窒素量）×１００ 上記、酸または酵素によって加水分解して得られた反応
液（ラクトフェリン類分解物の溶液）は、常法により冷
却し、必要に応じて常法により中和、脱塩、脱色し、更
に必要に応じて常法により分画し、得られた溶液をその
まま、または濃縮した液状で、或いは濃縮後乾燥した粉
末状で、カゼイン分解物と混合する。

【００１４】この発明において使用するラクトフェリン
関連抗菌性ペプチドは、ラクトフェリン類の分解物から
分離手段によって得られる抗菌性を有するペプチド、ラ
クトフェリン類の分解物から分離手段によって得られる
抗菌性を有するペプチドと同一の化学構造（アミノ酸配
列）を有するペプチド、ラクトフェリン類の分解物から
分離手段によって得られる抗菌性を有するペプチドと同
一の化学構造（アミノ酸配列）を有するペプチドの誘導
体、およびこれらの任意の混合物からなる群より選択さ
れた化合物である。これらのラクトフェリン関連抗菌性
ペプチドは、例えば、特願平３−１８６２６０、特願平
３−４８１９６号、特願平３−９４４９２号、特願平３
−９４４９３号、特願平３−９４４９４号の各発明に記
載された方法、即ちラクトフェリン類を酸または酵素を
用いて加水分解し、分解物混合物から液体クロマトグラ
フィ−等の分離手段によって抗菌性を有するペプチドを
含む画分を得る方法、或いは上記のようにして得た抗菌
性を有するペプチドのアミノ酸配列を公知の方法（例え
ば、気相シ−クェンサ−を用いる方法等）によって決定
し、上記のアミノ酸配列のペプチドを含むペプチドを公
知の方法（例えば、ペプチド自動合成装置を用いる方
法）によって合成して目的とするペプチドを得る方法等
によって調製することができる。これらのラクトフェリ
ン関連抗菌性ペプチドは、例えば下記のアミノ酸配列を
有する以下のペプチドである：配列番号１、２、および
２７のアミノ酸配列を有する抗菌性ペプチド（特願平３
−４８１９６号発明）；配列番号３、４、５および６の
アミノ酸配列を有する抗菌性ペプチド（特願平３−９４
４９２号発明）；配列番号７、８、９および３１のアミ
ノ酸配列を有する抗菌性ペプチド（特願平３−９４４９
３号発明）；配列番号１０、１１、１２、１３、１４、
１５、１６、１７、１８、１９、２０および２１のアミ
ノ酸配列を有する抗菌性ペプチド（特願平３−９４４９
４号発明）；配列番号２２、２３、２４、２５、２６、
２８、２９および３０のアミノ酸配列を有する抗菌性ペ
プチド（特願平３−１８６２６０号発明）。

【００１５】これらの抗菌性ペプチドは、溶液をそのま
ま、または濃縮した液状で、或いは濃縮後乾燥した粉末
状で、カゼイン分解物と混合する。ラクトフェリン類の
分解物、ラクトフェリン関連抗菌性ペプチド、またはこ
れらの任意の混合物の中の何れと、カゼイン分解物とを
組み合わせるかは、使用目的によって適宜選択すること
ができる。また、それらの混合割合は、各々の成分の種
類によって、或いは使用目的によって適宜選択すること
ができる。上記の混合は、前記のように液状で、または
粉末状で混合することができ、この場合適宜公知の希釈
剤、賦形剤を添加してもよい。

【００１６】カゼイン分解物市販品を使用することがで
き、或いは公知の方法によって調製し使用してもよい。
例えば、常法により牛乳等のカゼインを蛋白質分解酵
素、酸、或いはアルカリによって加水分解した分解物の
混合物、或いは分解物から特定の成分を分画した物であ
る。特に、数平均分子量が３８０程度で分子量分布が７
５以上、約１００００以下のペプチド（およびアミノ
酸）の混合物の使用が好ましい。

【００１７】この発明の抗菌剤は、各種の細菌、酵母、
カビに対して強い抗菌性を有し、医薬品としてのみなら
ず、食品、飼料、化粧品等のように人または動物の体内
に取り入れられ、或いは体表面に適用される製品、その
他一般に細菌の増殖を防止または抑制することが望まれ
るあらゆる製品に配合して使用することができ、またこ
の発明の抗菌剤でそれらの製品或いは原料素材を処理す
ることができる。即ちこの発明の抗菌剤は、そのまま人
または動物に投与することができ、或いは食品（例え
ば、チュウインガム等）、医薬品（例えば、目薬、乳房
炎治療剤、下痢防止剤、水虫薬等）、医薬部外品（例え
ば、口中洗浄剤、制汗剤、養毛剤等）、各種化粧品（例
えば、整髪料、クリ−ム、乳液等）、各種歯磨用品（例
えば、歯磨、歯ブラシ等）、各種生理用品、各種ベビ−
用品（例えば、オムツ等）、各種高齢者用品（例えば、
入れ歯固定剤、オムツ等）、各種洗剤（例えば、石鹸、
薬用石鹸、シャンプ−、リンス、洗濯用洗剤、キッチン
用洗剤、住宅用洗剤等）、各種除菌用品（例えば、キッ
チン用除菌ペ−パ−、トイレット用除菌ペ−パ−等）、
飼料（例えば、ペットフ−ド等）、それらの原料となる
素材、その他一般に微生物の増殖の防止、抑制が望まれ
るあらゆる物品に添加、配合、噴霧、付着、被覆、含浸
等を行なってもよく、またその他一般に微生物の増殖の
防止、抑制が望まれるあらゆる物品の処理に用いること
ができる。

【００１８】次に試験例を示してこの発明をさらに詳し
く説明する。 試験例 １．試料の調製 (1) 抗菌性ペプチド（粉末） 実施例３記載の方法により調製して使用した。

【００１９】(2) カゼイン分解物：参考例１記載の方法
により調製して使用した。 ２．試験方法 (1) ブドウ球菌の前培養液の調製 ブドウ球菌（Staphylococcus aureus JCM-2151）の保存
スラントから１白金耳を採取し、標準寒天培地（日本製
薬社製）に塗沫して３７℃で１６時間培養し、標準寒天
培地の表面に育成したコロニ−を白金耳でかき取り、１
％ペプトン（ディフコ社製）培地に３７℃で数時間培養
し、３×１０⁸ ／ｍｌの菌濃度に増殖した対数期の菌液
を前培養液とした。

【００２０】(2) 基本培地（牛乳培地）の調製 市販の牛乳に、上記試料を加え、精製水で牛乳の濃度を
１／２に希釈し、１１５℃で１５分間滅菌し、基本培地
とした。 (3) 試験培地および対照培地の調製 (3-1) 試験培地の調製 前記１記載の試料の調製の(1) で調製した抗菌性ペプチ
ドの水溶液、および(2) のカゼイン分解物の水溶液を滅
菌フィルタ−（アドバンテック社製）で除菌し、基本培
地に添加してそれぞれ表１に示した最終濃度に調整し、
試験培地を調製した。

【００２１】(3-2) 対照培地１の調製 市販の牛乳を精製水で２倍に希釈し、１１５℃で１５分
間滅菌して、対照培地１とした。 (3-3) 対照培地２の調製 前記１記載の試料の調製の(3) のカゼイン分解物の水溶
液を滅菌フィルタ−（アドバンテック社製）で除菌し、
のち基本培地に添加して試験培地の濃度と同じに調整
し、対照培地２を調製した。

【００２２】(4) 抗菌効果試験 (4-1) 生存率試験 上記(1) で調製したブドウ球菌の前培養液２０μｌを、
上記(3-1) で調製した試験培地２ｍｌに添加し、３７℃
で１時間培養し、培養液から２００μｌを採取し、１％
ペプトン水溶液で１０ⁿ 倍に希釈した後、普通寒天培地
プレ−ト上に１１０μｌ塗布し、３７℃で２４時間培養
して菌数（試験菌数）を測定した。

【００２３】別に対照１として、上記(1) で調製したブ
ドウ球菌の前培養液２０μｌを、上記(3-2) で調製した
対照培地１の２ｍｌに添加し、上記試験菌数の測定の場
合と同様にして菌数（対照菌数１）を測定した。更に対
照２として、上記(1) で調製したブドウ球菌の前培養液
２０μｌを、上記(3-3) で調製した対照培地２の２ｍｌ
に添加し、上記試験菌数の測定の場合と同様にして菌数
（対照菌数２）を測定した。

【００２４】生存率は次式で計算した。 生存率１＝（試験菌数／対照菌数１）×１００ 生存率２＝（対照菌数２／対照菌数１）×１００ （注：後記の各表において、生存率２は抗菌性ペプチド
の濃度が０の行に表示される） ３．試験結果 試験結果は表１に示すとおりである。表１から明らかな
ように、カゼイン分解物が抗菌性ペプチドの殺菌効果を
増強することが確認された。また、カゼイン分解物を添
加し、抗菌性ペプチドを添加しなかった場合、殺菌効果
は全く認められなかった。したがって、上記の殺菌効果
の増強は抗菌性ペプチドとカゼイン分解物との相乗効果
であることは明らかである。なお、上記の抗菌性ペプチ
ド以外の抗菌性ペプチド、およびラクトフェリン分解物
についても同様の試験を行なったが、この場合もカゼイ
ン分解物により殺菌効果が増強されることが認められ
た。

【００２５】

【表１】

【００２６】参考例１（カゼイン分解物の調製） ２０ｇの酸カゼイン（メルク社製）を５％の最終濃度で
５０℃の水に膨潤させ、１規定の水酸化ナトリウム水溶
液を加えてｐＨ８．５に調整し、酸カゼインを溶解し
た。８０℃で５〜１０分間殺菌し、５０℃に冷却し、パ
ンクレアチンＦ（天野製薬社製）の水懸濁液を、基質に
対して酵素量５％の割合で添加した。５０℃で１０時間
加水分解し、８５℃に１０分間保持して酵素を失活さ
せ、冷却し、濾過して不溶解物を除去し、濾液を凍結乾
燥し、カゼイン分解物約１６ｇを得た。

【００２７】次に実施例を示してこの発明を更に具体的
かつ詳細に説明するが、この発明は以下の実施例に限定
されるものではない。

【００２８】

【実施例】

実施例１ 牛乳から分離したままの市販のラクトフェリン（ベルギ
−のオレオフィナ社製）５０ｇを精製水９５０ｇに溶解
し、得られた溶液に１規定の塩酸を添加してｐＨを２に
調整し、１２０℃で１５分間加熱し、冷却して、ラクト
フェリン分解物溶液（ラクトフェリン分解物濃度：５
％）約１０００ｇを得た。このラクトフェリン分解物の
分解度は９％であった。

【００２９】上記のラクトフェリン分解物溶液を減圧濃
縮し、凍結乾燥し、ラクトフェリン分解物の粉末約４９
ｇを得た。このラクトフェリン分解物粉末１０ｇにカゼ
イン分解物（参考例１記載の方法により調製したもの）
２．５ｇを均一混合し、抗菌剤を調製した。 実施例２ 牛乳から分離したままの市販のラクトフェリン（ベルギ
−のオレオフィナ社製）１ｋｇを精製水９ｋｇに溶解
し、２モル濃度のクエン酸を添加してｐＨを２．５に調
整し、市販の豚ペプシン（１：１０，０００。和光純薬
工業社製）３０ｇを添加して均一に混合し、３７℃に１
８０分間保持し、８５℃で１０分間加熱して酵素を失活
させ、のち冷却し、ラクトフェリン分解物溶液（ラクト
フェリン分解物濃度：１０％）約１０ｋｇを得た。この
ラクトフェリン分解物の分解度は１１．３％であった。

【００３０】上記のラクトフェリン分解物溶液を減圧濃
縮し、凍結乾燥して、ラクトフェリン分解物の粉末約９
６０ｇを得た。このラクトフェリン分解物粉末１００ｇ
にカゼイン分解物（参考例１記載の方法により調製した
もの）２５ｇを均一混合して、抗菌剤を調製した。 実施例３ 市販の牛ラクトフェリン（シグマ社製）５０ｍｇを精製
水０．９ｍｌに溶解し、０．１規程の塩酸でｐＨを２．
５に調整し、のち市販の豚ペプシン（シグマ社製）１ｍ
ｇを添加し、３７℃で６時間加水分解した。次いで０．
１規程の水酸化ナトリウムでｐＨを７．０に調整し、８
０℃で１０分間加熱して酵素を失活させ、室温に冷却
し、１５，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、透明な
上清を得た。この上清１００μｌをＴＳＫゲルＯＤＳ−
１２０Ｔ（東ソ−社製）を用いた高速液体クロマトグラ
フィ−にかけ、０．８ｍｌ／分の流速で試料注入後１０
分間０．０５％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）を含む２０
％アセトニトリルで溶出し、のち３０分間０．０５％Ｔ
ＦＡを含む２０〜６０％のアセトニトリルのグラジエン
トで溶出し、２４〜２５分の間に溶出する画分を集め、
真空乾燥した。この乾燥物を２％（Ｗ／Ｖ）の濃度で精
製水に溶解し、再度ＴＳＫゲルＯＤＳ−１２０Ｔ（東ソ
−社製）を用いた高速液体クロマトグラフィ−にかけ、
０．８ｍｌ／分の流速で試料注入後１０分間０．０５％
ＴＦＡを含む２４％アセトニトリルで溶出し、のち３０
分間０．０５％ＴＦＡを含む２４〜３２％のアセトニト
リルのグラジエントで溶出し、３３．５〜３５．５分の
間に溶出する画分を集めた。上記の操作を２５回反復
し、真空乾燥し、抗菌性ペプチド約１．５ｍｇを得た。

【００３１】上記の抗菌性ペプチドを６Ｎ塩酸で加水分
解し、アミノ酸分析計を用いて常法によりアミノ酸組成
を分析した。同一の試料を気相シ−クェンサ−（アプラ
イド・バイオシステムズ社製）を用いて２５回のエドマ
ン分解を行ない、２５個のアミノ酸残基の配列を決定し
た。またＤＴＮＢ（５，５−ジチオ−ビス（２−ニトロ
ベンゾイック・アシド））を用いたジスルフィド結合分
析法［アナリティカル・バイオケミストリ−（Analytic
al Biochemistry ）、第６７巻、第４９３頁、１９７５
年］によりジスルフィド結合が存在することを確認し
た。

【００３２】その結果、このペプチドは、２５個のアミ
ノ酸残基からなり、３番目と２０番目のシステイン残基
がジスルフィド結合し、３番目のシステイン残基からＮ
−末端側に２個のアミノ酸残基が、２０番目のシステイ
ン残基からＣ−末端側に５個のアミノ酸が、それぞれ結
合した、配列番号２６のアミノ酸配列を有していること
が確認された。

【００３３】上記の抗菌性ペプチド粉末１００ｍｇにカ
ゼイン分解物（参考例１記載の方法により調製したも
の）３００ｍｇを均一混合して、抗菌剤を調製した。 実施例４ ペプチド自動合成装置（ファルマシアＬＫＢバイオテク
ノロジ−社製。ＬＫＢＢｉｏｌｙｎｘ４１７０）を用
い、シェパ−ド等［ジャ−ナル・オブ・ケミカル・ソサ
イエティ−・パ−キンＩ（Journal of Chemical Societ
y PerkinＩ）、第５３８頁、１９８１年］による固相ペ
プチド合成法に基づいて抗菌性ペプチドを次のようにし
て合成した。

【００３４】アミン官能基を９−フルオレニルメトキシ
カルボニル基で保護したアミノ酸に、Ｎ，Ｎ−ジシクロ
ヘキシルカルボジイミドを添加して所望のアミノ酸の無
水物を生成させ、このFmoc−アミノ酸無水物を合成に用
いた。ペプチド鎖を製造するためにＣ−末端のリジン残
基に相当するFmoc−リジン無水物を、そのカルボキシル
基を介し、ジメチルアミノピリジンを触媒としてウルト
ロシンＡ樹脂（ファルマシアＬＫＢバイオテクノロジ−
社製）に固定する。次いでこの樹脂をピペリジンを含む
ジメチルホルムアミドで洗浄し、Ｃ−末端アミノ酸のア
ミン官能基の保護基を除去する。のちアミノ酸配列のＣ
−末端から２番目に相当するFmoc−リジン無水物を前記
Ｃ−末端アミノ酸残基を介して樹脂に固定されたリジン
の脱保護アミン官能基にカップリングさせた。以下同様
にして順次メチオニン、アルギニン、トリプトファン、
グルタミン、トリプトファン、アルギニン、アルギニ
ン、スレオニン、およびリジンを固定した。全部のアミ
ノ酸のカップリングが終了し、所望のアミノ酸配列のペ
プチド鎖が形成された後、９４％ＴＦＡ、５％フェノ−
ル、および１％エタンジオ−ルからなる溶媒でアセトア
ミドメチル以外の保護基の除去およびペプチドの脱離を
行ない、高速液体クロマトグラフイ−によりペプチドを
精製し、この溶液を濃縮し、乾燥して、ペプチド粉末を
得た。

【００３５】ここに得られたペプチドについてアミノ酸
分析計を用いて常法によりアミノ酸組成を分析し、配列
番号２７のアミノ酸配列を有することを確認した。上記
の合成によって調製した抗菌性ペプチド粉末１００ｍｇ
にカゼイン分解物（参考例１記載の方法により調製した
もの）２００ｍｇを均一混合し、抗菌剤を調製した。 実施例５ 常法により次の組成の点眼薬（水溶液）を製造した。

【００３６】 ホウ酸 １．６０（％） 実施例４の抗菌剤 ０．０３ メチルセルロ−ス ０．５０ 実施例６ 常法により次の組成のチュ−インガムを製造した。

【００３７】 ガムベ−ス ２５．００（％） 炭酸カルシウム ２．００ 香料 １．００ 実施例２の抗菌剤 ０．１０ ソルビト−ル粉末 ７１．９０ 実施例７ 常法により次の組成の歯磨を製造した。

【００３８】 第二リン酸カルシウム・２水和物 ３６．８０（％） ソルビト−ル ４５．００ グリセリン １５．００ カルボオキシメチルセルロ−ス・ナトリウム １．５０ ソルビタン脂肪酸エステル ０．５０ サッカリンナトリウム １．００ 実施例１の抗菌剤 ０．２０ 実施例８ 常法により次の組成の皮膚洗浄液を製造した。この皮膚
洗浄液は、使用時には水で５０倍に希釈して使用する。

【００３９】 塩化ナトリウム ８．００（％） 実施例３の抗菌剤 ０．７０ 精製水 ９１．３０

【００４０】

【発明の効果】この発明によって奏せられる効果は次の
とおりである。 (1) 広範囲の微生物に対し優れた抗菌作用を有する抗菌
剤が提供される。 (2) 食品および医薬品に使用して、極めて安全な抗菌剤
が提供される。 (3) この発明の抗菌剤は、少量で抗菌効果を呈するの
で、食品等の物品の処理に使用した場合にも風味への影
響がほとんどない。

【００４１】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド （上記配列において、Xaa はCys を除く任意のアミノ酸
残基を示す） 配列番号：２ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド （上記配列において、Xaa はCys を除く任意のアミノ酸
残基を示す） 配列番号：３ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド （上記配列において、Xaa はCys を除く任意のアミノ酸
残基を示す） 配列番号：４ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド （上記配列において、Xaa はCys を除く任意のアミノ酸
残基を示す） 配列番号：５ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド （上記配列において、Xaa はCys を除く任意のアミノ酸
残基を示す） 配列番号：６ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド （上記配列において、Xaa はCys を除く任意のアミノ酸
残基を示す） 配列番号：７ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド （上記配列において、Xaa はCys を除く任意のアミノ酸
残基を示す） 配列番号：８ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド （上記配列において、Xaa はCys を除く任意のアミノ酸
残基を示す） 配列番号：９ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド （上記配列において、Xaa はCys を除く任意のアミノ酸
残基を示す） 配列番号：１０ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 配列番号：１１ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 配列番号：１２ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 配列番号：１３ 配列の長さ：３ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 配列番号：１４ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 配列番号：１５ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 配列番号：１６ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 配列番号：１７ 配列の長さ：３ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 配列番号：１８ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 配列番号：１９ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 配列番号：２０ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 配列番号：２１ 配列の長さ：３ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 配列番号：２２ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 下記配列において、２番の Cysと１９番の Cysがジスル
フィド結合している。 配列： Lys Cys Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro 1 5 10 15 Ser Ile Thr Cys Val 20 配列番号：２３ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 下記配列においてCys*は、ジスルフィド結合の形成を防
止するため、チオ−ル基を化学的に修飾したシステイン
を示す。

【００４２】 配列： Lys Cys* Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro 1 5 10 15 Ser Ile Thr Cys* Val 20 配列番号：２４ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 下記配列において、２番の Cysと１９番の Cysがジスル
フィド結合している。

【００４３】 配列： Lys Cys Phe Gln Trp Gln Arg Asn Met Arg Lys Val Arg Gly Pro 1 5 10 15 Pro Val Ser Cys Ile 20 配列番号：２５ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 下記配列においてCys*は、ジスルフィド結合の形成を防
止するため、チオ−ル基を化学的に修飾したシステイン
を示す。

【００４４】 配列： Lys Cys* Phe Gln Trp Gln Arg Asn Met Arg Lys Val Arg Gly Pro 1 5 10 15 Pro Val Ser Cys* Ile 20 配列番号：２６ 配列の長さ：２５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 下記配列において、３番の Cysと２０番の Cysがジスル
フィド結合している。

【００４５】 配列： Phe Lys Cys Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala 1 5 10 15 Pro Ser Ile Thr Cys Val Arg Arg Ala Phe 20 25 配列番号：２７ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 配列番号：２８ 配列の長さ：３８ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 下記配列において、１６番の Cysと３３番の Cysとがジ
スルフィド結合している。

【００４６】 配列： Lys Asn Val Arg Trp Cys Thr Ile Ser Gln Pro Glu Trp Phe Lys 1 5 10 15 Cys Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro Ser 20 25 30 Ile Thr Cys Val Arg Arg Ala Phe 35 配列番号：２９ 配列の長さ：３２ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 下記配列において、１０番の Cysと２７番の Cysとがジ
スルフィド結合している。

【００４７】 配列： Thr Ile Ser Gln Pro Glu Trp Phe Lys Cys Arg Arg Trp Gln Trp 1 5 10 15 Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro Ser Ile Thr Cys Val Arg Arg 20 25 30 Ala Phe 配列番号：３０ 配列の長さ：４７ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド 下記配列において、配列の長さ３６であって９番、２６
番、及び３５番に Cysを有するペプチドの、９番の Cys
と２６番のCysとがジスルフィド結合し、上記配列の長
さ３６のペプチドの３５番の Cysが、配列の長さ１１で
あって１０番に Cysを有するペプチドの１０番の Cysと
がジスルフィド結合している。

【００４８】 配列： Val Ser Gln Pro Glu Ala Thr Lys Cys Phe Gln Trp Gln Arg Asn 1 5 10 15 Met Arg Lys Val Arg Gly Pro Pro Val Ser Cys Ile Lys Arg Asp 20 25 30 Ser Pro Ile Gln Cys Ile 35 Gly Arg Arg Arg Arg Ser Val Gln Trp Cys Ala 1 5 10 配列番号：３１ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド （上記配列において、 Xaaは Cysを除く任意のアミノ酸
残基を示す）

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 高瀬 光徳 埼玉県大宮市南中丸138−10 (72)発明者 ウェイン ベラミ− 神奈川県座間市東原３−22−６ ヴィラさ がみ野ウェストＣ−５ (72)発明者 山内 恒治 神奈川県鎌倉市玉縄４−２−２ ガ−デン ハイツ鎌倉玉縄405 (72)発明者 若林 裕之 神奈川県横浜市旭区南希望ヶ丘118 森永 希望ヶ丘寮 (72)発明者 時田 由紀子 神奈川県相模原市旭町３−６ フラットス ト−ン相模201号

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 （Ａ）ラクトフェリン類の分解物、ラク
   トフェリン関連抗菌性ペプチド、またはこれらの任意の
   混合物からなる群より選択された化合物と、（Ｂ）カゼ
   イン分解物とを有効成分とする抗菌剤。
2. 【請求項２】 （Ａ）ラクトフェリン類の分解物、ラク
   トフェリン関連抗菌性ペプチド、またはこれらの任意の
   混合物からなる群より選択された化合物と、（Ｂ）カゼ
   イン分解物とを有効成分とする抗菌剤を用いて物品を処
   理する方法。