JPH07309774A

JPH07309774A - 抗真菌剤

Info

Publication number: JPH07309774A
Application number: JP6126882A
Authority: JP
Inventors: Seiichi Shimamura; 誠一島村; Mitsunori Takase; 光徳高瀬; Koji Yamauchi; 恒治山内; Hiroyuki Wakabayashi; 裕之若林
Original assignee: Morinaga Milk Industry Co Ltd
Current assignee: Morinaga Milk Industry Co Ltd
Priority date: 1994-05-17
Filing date: 1994-05-17
Publication date: 1995-11-28

Abstract

(57)【要約】【構成】配列番号１から配列番号３１のいずれかに記
載のアミノ酸配列を有するペプチド、薬学的に許容され
るこれらペプチドの誘導体、薬学的に許容されるこれら
ペプチドの塩類、またはこれらの２種以上の混合物を有
効成分とする抗真菌剤。【効果】副作用が少なく、耐熱性があり、水に可溶性
で、水溶液中で安定なため、薬剤として安定であり、ペ
プチドは抗菌作用を有するので、製剤化に当り防腐剤を
使用する必要がない。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】この発明は、抗真菌剤に関するも
のである。さらに詳しくは、この発明は特定のアミノ酸
配列を有するラクトフェリン由来のペプチド類を有効成
分とし、副作用のない新規な抗真菌剤に関するものであ
る。

【０００２】

【従来の技術】ペプチドを有効成分とする抗真菌剤とし
ては、ε−ポリ−リシン（特開平５−２４６８８３号公
報）、オ−レオバシデイウム由来のペプチド（特開平５
−２７９３８４号公報）等が知られている。しかしなが
ら、これらのペプチドは、本発明のペプチドとは全く異
なる別個のペプチドである。

【０００３】一方、真菌に限らず種々の微生物に対して
抗菌作用を有するペプチドについては、多数の発明が開
示されている。例えば、グラム陽性菌およびグラム陰性
菌に有効なホスホノトリペプチド（特開昭５７−１０６
６８９号公報）、ホスホノジペプチド誘導体（特開昭５
８−１３５９４号公報）、環状ペプチド誘導体（特開昭
５８−２１３７４４号公報）、抗菌および抗ウイルス作
用を示すペプチド（特開昭５９−５１２４７号公報）、
酵母に有効なポリペプチド（特開昭６０−１３０５９９
号公報）、グラム陽性菌に有効な糖ペプチド誘導体（特
開昭６０−１７２９９８号公報、特開昭６１−２５１６
９９号公報および特開昭６３−４４５９８号公報）、グ
ラム陽性菌に有効なオリゴペプチド（特開昭６２−２２
７９８号公報）、ペプチド系抗生物質（特開昭６２−５
１６９７号公報および特開昭６３−１７８９７号公
報）、その他北米産カブトガニの血球から抽出した抗菌
性ペプチド（特開平２−５３７９９号公報）、蜜蜂の血
リンパから単離した抗菌性ペプチド（特表平２−５００
０８４号公報）、ロイヤルゼリーから単離した抗菌ペプ
チド（特開平２−２６８１９８号公報）等がある。

【０００４】ラクトフェリンは、乳汁および唾液、涙、
粘膜分泌液等のヒトを含む哺乳動物の体液に存在する鉄
結合性タンパク質であり、大腸菌、カンジダ菌、クロス
トリジウム菌等の有害微生物に対して抗菌作用を示すこ
とが知られている［ジャーナル・オブ・ペディアトリク
ス(Journal of Pediatrics) 、第９４巻、第１ページ、
１９７９年］。また、ブドウ球菌および腸球菌に対し
て、０．５〜３０ｍｇ／ｍｌの濃度で抗菌作用を有する
ことが知られている［ジャーナル・オブ・デイリー・サ
イエンス(Journal of Dairy Science)、第６７巻、第６
０６ページ、１９８４年］。

【０００５】この発明の発明者らは、ラクトフェリンの
抗菌性に着目し、哺乳類のラクトフェリン、アポラクト
フェリン、および／または金属飽和ラクトフェリン（以
下、これらをラクトフェリン類と記載することがある）
を酸または酵素により加水分解した物質が、望ましくな
い副作用（例えば抗原性）等がなく、しかも未分解のラ
クトフェリン類よりも強い耐熱性および抗菌性を有する
ことを見い出し、既に特許出願を行った（特開平５−３
２００６８号公報）。

【０００６】また、この発明の発明者らは、ラクトフェ
リンの分解物から強い抗菌活性を有するペプチドを単
離、若しくはそれらのペプチドと同一のアミノ酸配列を
有するペプチドまたはそれらのペプチドの誘導体を合成
し、２０個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特
開平５−９２９９４号公報）、１１個のアミノ酸残基か
らなる抗菌性ペプチド（特開平５−７８３９２号公
報）、６個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特
開平５−１４８２９７号公報）、５個のアミノ酸残基か
らなる抗菌性ペプチド（特開平５−１４９８２９６号公
報）、３〜６個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド
（特開平５−１４８２９５号公報）を、それぞれ既に特
許出願した。

【０００７】さらに、乳汁の生理活性ペプチドには、成
長ホルモン、細胞分化増殖因子等の他に、カルシウム吸
収促進ペプチド（フードケミカル、第１１巻、第３３ペ
ージ、１９８８年）、オピオイドペプチド［ホッペ・ザ
イラーズ・ツァイトシュリフト・フュアー・フィジオロ
ギッシェ・ヘミー(Hoppe-Seyler's Zeitschrift furPhy
siologische Chemie)、第３６０巻、第１２１１ペー
ジ、１９７９年およびザ・ジャーナル・オブ・バイオロ
ジカルケミストリー(The Journal of BiologicalChemis
try) 、第２５４巻、第２４４６ページ、１９７９
年］、アンジオテンシン転換酵素阻害ペプチド（フード
ケミカル、第１１巻、第３９ページ、１９８８年）、胃
酸分泌抑制作用を有するペプチド（特開平５−２６２７
９３号公報）等が知られている。

【０００８】この発明の発明者らも、ラクトフェリン類
を酸または酵素により加水分解した物質と同一のアミノ
酸配列を有するペプチドまたはこれらペプチドの誘導体
に脳の保護作用（特願平４−３２７７３８号公報）、ラ
クトフェリン加水分解物に上皮細胞増殖因子による繊維
芽細胞増殖を促進する作用（特開平６−４８９５５号公
報）および神経成長因子産生促進作用（特開平５−２３
５５７号公報）があることを見い出し、それぞれ既に特
許出願した。また、ラクトフェリンがヘパリンに結合す
る性質を利用して乳からラクトフェリンを分離精製する
方法（特開昭６３−２５５２９９号公報）も開示されて
いる。

【０００９】しかしながら、これらのラクトフェリン由
来のペプチドに、抗真菌作用を有することは知られてお
らず、文献にも記載されていない。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】前記従来技術から明ら
かなように、副作用が少ない抗真菌剤が待望されていた
が、未だに優れた物質は、知られていないのが現状であ
った。

【００１１】この発明の発明者らは、副作用が少なく、
安全な抗真菌作用を有する物質を検索していたが、ラク
トフェリンを加水分解して得られるペプチドに、この効
果があることを見い出し、この発明を完成した。

【００１２】この発明は、以上のとおりの事情に鑑みて
なされたものであり、副作用が少なく、少量で有効な抗
真菌剤を提供することを目的としている。

【００１３】

【課題を解決するための手段】この発明は、前記の課題
を解決するものとして、配列番号１から配列番号３１の
いずれかに記載のアミノ酸配列を有するペプチド、薬学
的に許容されるこれらペプチドの誘導体、薬学的に許容
されるこれらペプチドの塩類（以下、これらをまとめて
ペプチド類と記載することがある）または、これらの２
種以上の混合物を有効成分とする抗真菌剤を提供する。

【００１４】以下、この発明の構成および好ましい態様
について詳しく説明する。

【００１５】この発明の抗真菌剤の有効成分であるペプ
チド類をラクトフェリン類から製造する場合、出発物質
として使用するラクトフェリン類は、市販のラクトフェ
リン、哺乳類（例えば、ヒト、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウ
マ）の初乳、移行乳、常乳、末期乳等、またはこれらの
乳の処理物である脱脂乳、ホエー等から常法（例えば、
イオン交換クロマトグラフィー）により分離したラクト
フェリン、それらを塩酸、クエン酸等により脱鉄したア
ポラクトフェリン、アポラクトフェリンを鉄、銅、亜
鉛、マンガン等の金属でキレートした金属飽和または部
分飽和ラクトフェリンであり、市販品または公知の方法
により製造した調製品を使用することもできる。

【００１６】この発明において使用するペプチド類は、
ラクトフェリン類の分解物から分離手段によって得られ
るペプチド、このペプチドと同一のアミノ酸配列、相同
なアミノ酸配列を有するペプチド、これらのペプチドの
誘導体、これらのペプチドの薬学的に許容される塩類ま
たはこれらの任意の混合物であり、公知の方法により化
学的に合成することもできる。これらのペプチド類は、
例えば、前記特開平５−９２９９４号公報、特開平５−
７８３９２号公報、特開平５−１４８２９７号公報、特
開平５−１４９８２９６号公報および特開平５−１４８
２９５号公報の各発明に記載された方法によって得るこ
とができる。

【００１７】前記の方法によって得られるペプチドは次
のアミノ酸配列を有するペプチド、その誘導体または塩
類を望ましい態様として例示できる。例えば、配列番号
１、２及び２７のアミノ酸配列を有するペプチド、その
塩類またはその誘導体（特開平５−７８３９２号公
報）、配列番号３、４、５および６のアミノ酸配列を有
するペプチド、その塩類またはその誘導体（特開平５−
１４８２９７号公報）、配列番号７、８、９及び３１の
アミノ酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘
導体（特開平５−１４９８２９６号公報）、配列番号１
０乃至２１のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類
またはその誘導体（特開平５−１４８２９５号公報）、
配列番号２２から２６、２８、２９および３０のアミノ
酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘導体
（特開平５−９２９９４号公報）である。

【００１８】前記ペプチドの薬学的に許容される塩類と
しては、塩酸塩、リン酸塩、硫酸塩、クエン酸塩、乳酸
塩、酒石酸塩等の酸付加塩を例示でき、誘導体として
は、カルボキシル基をアミド化またはアミノ基をアシル
化した誘導体を例示することができる。

【００１９】この発明の抗真菌剤は、公知の方法により
軟膏剤、液剤等に加工することができる。

【００２０】この発明の抗真菌剤は、噴霧、塗布、貼着
等の投与方法により、真菌症に侵された患部に対して外
用的に投与することができる。

【００２１】この発明の抗真菌剤は、年齢、症状等によ
り異なるが、１cm²の皮膚当たり少なくとも０．６４ｍ
ｇ／日の割合で外用的に投与できる。

【００２２】次に試験例を示してこの発明を詳しく説明
する。

【００２３】試験例１この試験は、ペプチド類の抗真菌効果を調べるために行
った。１）試験動物 SPF Hartley 系モルモット（雌性、３３０〜４３０ｇ：
日本エスエルシ−社から購入）を、無作為に４群（１群
５匹）に分けて使用した。これらのモルモットは、温度
２４±２℃、湿度５５±７％の飼育室で、固形飼料（オ
リエンタル酵母工業社製、ＲＣ−４）及び水を自由に摂
取させて試験した。

【００２４】２）使用菌株接種菌には、真菌の一種で白癬菌であるトリコフィトン
・メンタグロファイテス（Trichophyton mentagrophyte
s ）TIMM1189（帝京大学医真菌研究センタ−から入手）
を使用した。

【００２５】３）接種菌液の調製上記菌株を改変1/10ＳＤＡ（バクトペプトン 0.2% 、グ
ルコ−ス 0.1% 、KH₂PO₄0.1%、MgSO₄0.1%、寒天 1.6%
、pH5.2 ）斜面培地に27℃、２週間培養した後、菌の
生育した斜面部を0.05% Tween80 添加滅菌生理食塩水で
覆い、振盪により分生子を遊離させた。これを滅菌ガ−
ゼで瀘過して菌糸塊を除去した。得られた菌浮遊液中の
分生子の数を、光学顕微鏡を用いて血球計算盤により計
数し、２×10⁷分生子／mlの濃度に調整し、これを接種
菌液とした。

【００２６】４）使用薬剤本発明軟膏剤としては、実施例１と同一の方法により製
造した外用抗真菌剤（参考例１と同一の方法により製造
したペプチドを１０％含有。）を用いた。対照基剤とし
ては、実施例１においてペプチド無添加のクリ−ム剤を
用いた。対照薬剤としては、１％ビフォナゾ−ル（Bifo
nazole）クリ−ム剤（バイエル薬品社製。マイコスポ−
ルクリ−ム）を用いた。

【００２７】５）試験方法ｉ）感染方法モルモットの背部の毛を電気バリカンで刈り取った後、
適当な間隔で左右計２箇所の部位を選び、ここにガムテ
−プを張付けては勢いよく剥がすという操作を３〜４回
繰り返した。これにより局所部位の抜毛を行うと伴に、
皮膚角質層上部を剥離させた。残った毛は毛抜きを用い
て完全に除去し、直径２cmの抜毛部位を得た。これらの
抜毛部位に接種菌液を１部位当り0.05mlずつ擦り込む方
法によって菌接種を行った。

【００２８】ii）治療実験法全感染部位に、発赤が明らかに認められる時点（感染処
理後５日目）に治療を開始し、薬剤を１部位当り１日用
量0.2gずつ、軟膏用ヘラを用いて、１日１回局所に塗布
して、１４日間連日投与した。この方法により行った実
験の条件と内容は次の通りである。

【００２９】感染処理済モルモット２０匹を使用し、各
投与群５匹として、治療無処置対照群、対照基剤群、本
発明軟膏剤群、及び対照薬剤群の４群で実験を行った。

【００３０】iii)培養試験法最終治療日の３日後に、すべてのモルモットをドライア
イス麻酔下で屠殺後、各感染部位の全体の皮膚を円形に
切り取った。次に、該皮膚を消毒用アルコ−ルで拭き、
１％オスバン（0.01％塩化ベンザルコニウム）液に浸し
た後、滅菌水で消毒剤を洗い落とし、皮膚を１０個の小
片に刻んだ。各小片をサイクロヘキシミド（cyclohexim
ide ）500 μg/ml、クロラムフェニコ−ル（chloramphe
nicol ）100 μg/ml、及びシソマイシン（sisomicin ）
50μg/mlを含むＰＹＧ寒天（バクトペプトン 1.0% 、酵
母エキス 0.5% 、グルコ−ス 4.0% 、寒天 1.5% ）平板
上に載せ、27℃、１０日間培養した。皮膚小片の周囲に
トリコフィトン・メンタグロファイテスのコロニ−が発
育したものを培養陽性と判定した。

【００３１】６）試験結果この試験の結果は、表１に示すとおりである。表１から
明らかなように、参考例１と同一の方法により製造した
ペプチドを含む本発明軟膏剤群は、１０感染部位中７部
位が陰性であった。一方、対照薬剤群は、１０感染部位
中４部位までしか陰性にならなかった。この試験結果か
ら、該ペプチドには白癬を治癒させる効果のあることが
認められた。また感染部位をさらに１０等分にした小片
当りの陽性率においても、対照薬剤以上に該ペプチドが
白癬菌を陰性化する効果のあることが明らかとなった。

【００３２】この試験結果から、参考例１と同一の方法
により製造したペプチドは真菌症を治癒する効果がある
ことが認められた。また、本発明軟膏剤の使用による、
皮膚のアレルギ−反応等の好ましくない副作用も認めら
れなかった。尚、他のペプチド類についても同様の試験
を行ったがほぼ同様の結果が得られた。

【００３３】

【表１】試験例２この試験は、ペプチド類の急性毒性を調べるために行っ
た。１）使用動物６週齢のＣＤ（ＳＤ）系のラット（日本ＳＬＣから購
入）の両性を用い、雄及び雌を無作為にそれぞれ４群
（１群５匹）に分けて使用した。

【００３４】２）試験方法体重１ｋｇ当り１０００、２０００および４０００ｍｇ
の割合で参考例１と同一の方法で製造した配列番号２６
のペプチドを注射用水（大塚製薬社製）に溶解し、体重
１００ｇ当たり４ｍｌの割合で金属製玉付き針を用いて
単回強制経口投与し、急性毒性を試験した。

【００３５】３）試験結果この試験の結果は、表２に示すとおりである。表２から
明らかなように、このペプチドを１０００ｍｇ／ｋｇ体
重および２０００ｍｇ／ｋｇ体重の割合で投与した群に
死亡例は認められなかった。従って、このペプチドのＬ
Ｄ₅₀は、２０００ｍｇ／ｋｇ体重以上であり、毒性は極
めて低いことが判明した。尚、他のペプチド類について
も同様の試験を行ったがほぼ同様の結果が得られた。

【００３６】

【表２】試験例３この試験は、ペプチド類の有効量を調べるために行っ
た。１）試験方法試験例１で用いた本発明軟膏剤（実施例１と同一の方法
により製造した外用抗真菌剤）のペプチド含有量を下記
のとおり変更することによって、ペプチドの投与量を変
更したことを除き、試験例１と同一の方法により試験を
行い、抗真菌効果を示す有効投与量を決定した。

【００３７】２）実験群無処置；治療無処置対照本発明軟膏剤１；実施例１の方法により製造した０．１
％ペプチド含有外用抗真菌剤（本実験系に従うとペプチ
ド投与量は0.064mg ／cm²／日となる。）本発明軟膏剤２；実施例１の方法により製造した１．０
％ペプチド含有外用抗真菌剤（本実験系に従うとペプチ
ド投与量は0.64mg／cm²／日となる。）本発明軟膏剤３；実施例１の方法により製造した５．０
％ペプチド含有外用抗真菌剤（本実験系に従うとペプチ
ド投与量は3.2mg ／cm²／日となる。

【００３８】３）試験結果この試験の結果は、表３に示すとおりである。表３から
明らかなように、参考例１と同一の方法により製造した
ペプチドを0.64mg／cm²／日投与した群は、１０感染部
位中２部位が陰性であった。また、該ペプチドを3.2mg
／cm²／日投与した群は、１０感染部位中４部位まで陰
性になった。この試験結果から、0.64mg／cm²／日以上
の投与量により、該ペプチドには白癬を治癒する効果の
あることが認められた。また、該ペプチドを0.064mg ／
cm²／日投与した群は、治療無処置対照群と比較して、
感染部位を１０等分にした小片当りの陽性率において、
白癬菌を一部陰性化する効果があったものの、感染部位
全体を治癒するまでには至らなかった。尚、他のペプチ
ド類についても同様の試験を行ったがほぼ同様の結果が
得られた。

【００３９】

【表３】参考例１市販のウシ・ラクトフェリン（シグマ社製）５０ｍｇを
精製水０．９ｍｌに溶解し、０．１規定の塩酸でｐＨを
２．５に調整し、のち市販のブタペプシン（シグマ社
製）１ｍｇを添加し、３７℃で６時間加水分解した。次
いで０．１規定の水酸化ナトリウムでｐＨを７．０に調
整し、８０℃で１０分間加熱して酵素を失活させ、室温
に冷却し、１５，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、
透明な上清を得た。この上清１００μｌをＴＳＫゲルＯ
ＤＳ−１２０Ｔ（東ソ−社製）を用いた高速液体クロマ
トグラフィ−にかけ、０．８ｍｌ／分の流速で試料注入
後１０分間０．０５％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）を含
む２０％アセトニトリルで溶出し、のち３０分間０．０
５％ＴＦＡを含む２０〜６０％のアセトニトリルのグラ
ジエントで溶出し、２４〜２５分の間に溶出する画分を
集め、真空乾燥した。この乾燥物を２％（Ｗ／Ｖ）の濃
度で精製水に溶解し、再度ＴＳＫゲルＯＤＳ−１２０Ｔ
（東ソ−社製）を用いた高速液体クロマトグラフィ−に
かけ、０．８ｍｌ／分の流速で試料注入後１０分間０．
０５％ＴＦＡを含む２４％アセトニトリルで溶出し、の
ち３０分間０．０５％ＴＦＡを含む２４〜３２％のアセ
トニトリルのグラジエントで溶出し、３３．５〜３５．
５分の間に溶出する画分を集めた。上記の操作を２５回
反復し、真空乾燥し、ペプチド約１．５ｍｇを得た。

【００４０】上記のペプチドを６Ｎ塩酸で加水分解し、
アミノ酸分析計を用いて常法によりアミノ酸組成を分析
した。同一の試料を気相シ−クェンサ−（アプライド・
バイオシステムズ社製）を用いて２５回のエドマン分解
を行ない、２５個のアミノ酸残基の配列を決定した。ま
たＤＴＮＢ［５，５−ジチオ−ビス（２−ニトロベンゾ
イック・アシド）］を用いたジスルフィド結合分析法
［アナリティカル・バイオケミストリ−（Analytical B
iochemistry ）、第６７巻、第４９３頁、１９７５年］
によりジスルフィド結合が存在することを確認した。

【００４１】その結果、このペプチドは、２５個のアミ
ノ酸残基からなり、３番目と２０番目のシステイン残基
がジスルフィド結合し、３番目のシステイン残基からＮ
−末端側に２個のアミノ酸残基が、２０番目のシステイ
ン残基からＣ−末端側に５個のアミノ酸がそれぞれ結合
した、配列番号２６に記載のアミノ酸配列を有している
ことが確認された。

【００４２】参考例２ペプチド自動合成装置（ファルマシアＬＫＢバイオテク
ノロジ−社製。ＬＫＢＢｉｏｌｙｎｘ４１７０）を用
い、シェパ−ド等による固相ペプチド合成法［ジャ−ナ
ル・オブ・ケミカル・ソサイエティ−・パ−キンＩ（Jo
urnal of Chemical Society Perkin Ｉ）、第５３８
頁、１９８１年］に基づいてペプチドを次のようにして
合成した。

【００４３】アミン官能基を９−フルオレニルメトキシ
カルボニル基で保護したアミノ酸［以下Fmoc−アミノ酸
またはFmoc−固有のアミノ酸の名称（例えば、Fmoc−ア
スパラギン）と記載することがある］に、Ｎ，Ｎ−ジシ
クロヘキシルカルボジイミドを添加して所望のアミノ酸
の無水物を生成させ、このFmoc−アミノ酸無水物を合成
に用いた。ペプチド鎖を製造するためにＣ−末端のアス
パラギン残基に相当するFmoc−アスパラギン無水物を、
そのカルボキシル基を介し、ジメチルアミノピリジンを
触媒としてウルトロシンＡ樹脂（ファルマシアＬＫＢバ
イオテクノロジ−社製）に固定する。次いでこの樹脂を
ピペリジンを含むジメチルホルムアミドで洗浄し、Ｃ−
末端アミノ酸のアミン官能基の保護基を除去する。のち
アミノ酸配列のＣ−末端から２番目に相当するFmoc−ア
ルギニン無水物を前記Ｃ−末端アミノ酸残基を介して樹
脂に固定されたアルギニンの脱保護アミン官能基にカッ
プリングさせた。以下同様にして順次グルタミン、トリ
プトファン、グルタミン、およびフェニルアラニンを固
定した。全部のアミノ酸のカップリングが終了し、所望
のアミノ酸配列のペプチド鎖が形成された後、９４％Ｔ
ＦＡ、５％フェノ−ル、および１％エタンジオ−ルから
なる溶媒でアセトアミドメチル以外の保護基の除去およ
びペプチドの脱離を行ない、高速液体クロマトグラフイ
−によりペプチドを精製し、この溶液を濃縮し、乾燥し
て、ペプチド粉末を得た。

【００４４】前記のペプチドについてアミノ酸分析計を
用いて常法によりアミノ酸組成を分析し、配列番号１０
に記載のアミノ酸配列を有することを確認した。

【００４５】

【実施例】次に実施例を示してこの発明をさらに詳細か
つ具体的に説明するが、この発明は以下の例に限定され
るものではない。

【００４６】実施例１参考例１と同一の方法により製造したペプチドを１０
ｇ、パラオキシ安息香酸メチルを０．１ｇ、パラオキシ
安息香酸プロピルを０．１ｇ、プロピレングリコールを
１２ｇ、及び精製水２７．８ｇを加温しながら攪拌溶解
した。別に予め、白色ワセリンを２５ｇ、ステアリルア
ルコールを２０ｇ、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６
０を４ｇ、及びモノステアリン酸グリセリン１ｇを加温
しながら攪拌混合した溶液を前記溶液に加え、ホモミキ
サーを用いて乳化し、Ｏ／Ｗ型クリーム剤を得た。これ
を常法により１０ｇずつアルミチューブに充填し、外用
抗真菌剤を製造した。

【００４７】実施例２白色ワセリンを４０ｇ、セタノールを１０ｇ、サラセミ
ツロウを５ｇ、セスキオレイン酸ソルビタンを５ｇ、及
びラウロマクロゴール０．５ｇを加温しながら攪拌混合
した。別に予め、参考例２と同一の方法により製造した
ペプチドを５ｇ、パラオキシ安息香酸メチルを０．１
ｇ、パラオキシ安息香酸プロピルを０．１ｇ、及び精製
水３４．３ｇを加温しながら攪拌溶解した溶液を前記溶
液に加え、ホモミキサーを用いて乳化し、Ｗ／Ｏ型クリ
ーム剤を得た。これを常法により１０ｇずつアルミチュ
ーブに充填し、外用抗真菌剤を製造した。

【００４８】

【発明の効果】以上詳しく説明したとおり、この発明
は、ペプチド類を有効成分とする抗真菌剤に係るもので
あり、この発明によって奏せられる効果は次のとおりで
ある。（１）副作用が少ない。（２）耐熱性があり、水に可溶性で、水溶液中で安定な
ため、薬剤として安定である。（３）ペプチドは抗菌作用を有するので、製剤化に当り
防腐剤を使用する必要がない。（４）動物細胞に対しては細胞毒性を示さず、真菌細胞
に対してのみ細胞毒性を示す。（５）ペプチドであるので体内で速やかに代謝される。

【００４９】

【配列表】

配列番号：１配列の長さ：１１配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。配列： Lys R01 R01 R01 R01 Gln R01 R01 Met Lys Lys 1 5 10

【００５０】配列番号：２配列の長さ：１１配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。配列： Lys R01 R01 R01 R01 Gln R01 R01 Met Arg Lys 1 5 10

【００５１】配列番号：３配列の長さ：６配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。配列： Arg R01 R01 R01 R01 Arg 1 5

【００５２】配列番号：４配列の長さ：６配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。配列： Lys R01 R01 R01 R01 Arg 1 5

【００５３】配列番号：５配列の長さ：６配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。配列： Lys R01 R01 R01 R01 Lys 1 5

【００５４】配列番号：６配列の長さ：６配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。配列： Arg R01 R01 R01 R01 Lys 1 5

【００５５】配列番号：７配列の長さ：５配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。配列： Arg R01 R01 R01 Arg 1 5

【００５６】配列番号：８配列の長さ：５配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。配列： Lys R01 R01 R01 Arg 1 5

【００５７】配列番号：９配列の長さ：５配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。配列： Arg R01 R01 R01 Lys 1 5

【００５８】配列番号：１０配列の長さ：６配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。配列： Phe Gln Trp Gln Arg Asn 1 5

【００５９】配列番号：１１配列の長さ：５配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。配列： Phe Gln Trp Gln Arg 1 5

【００６０】配列番号：１２配列の長さ：４配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。配列： Gln Trp Gln Arg 1

【００６１】配列番号：１３配列の長さ：３配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。配列： Trp Gln Arg 1

【００６２】配列番号：１４配列の長さ：５配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。配列： Arg Arg Trp Gln Trp 1 5

【００６３】配列番号：１５配列の長さ：４配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。配列： Arg Arg Trp Gln 1

【００６４】配列番号：１６配列の長さ：４配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。配列： Trp Gln Trp Arg 1

【００６５】配列番号：１７配列の長さ：３配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。配列： Gln Trp Arg 1

【００６６】配列番号：１８配列の長さ：６配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。配列： Leu Arg Trp Gln Asn Asp 1 5

【００６７】配列番号：１９配列の長さ：５配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。配列： Leu Arg Trp Gln Asn 1 5

【００６８】配列番号：２０配列の長さ：４配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。配列： Leu Arg Trp Gln 1

【００６９】配列番号：２１配列の長さ：３配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。配列： Arg Trp Gln 1

【００７０】配列番号：２２配列の長さ：２０配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、２番
の Cysと１９番の Cysがジスルフィド結合している。配列： Lys Cys Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro 1 5 10 15 Ser Ile Thr Cys Val 20

【００７１】配列番号：２３配列の長さ：２０配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列においてCys*
は、ジスルフィド結合の形成を防止するため、チオ−ル
基を化学的に修飾したシステインを示す。配列： Lys Cys* Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro 1 5 10 15 Ser Ile Thr Cys* Val 20

【００７２】配列番号：２４配列の長さ：２０配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、２番
の Cysと１９番の Cysがジスルフィド結合している。配列： Lys Cys Phe Gln Trp Gln Arg Asn Met Arg Lys Val Arg Gly Pro 1 5 10 15 Pro Val Ser Cys Ile 20

【００７３】配列番号：２５配列の長さ：２０配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列においてCys*
は、ジスルフィド結合の形成を防止するため、チオ−ル
基を化学的に修飾したシステインを示す。配列： Lys Cys* Phe Gln Trp Gln Arg Asn Met Arg Lys Val Arg Gly Pro 1 5 10 15 Pro Val Ser Cys* Ile 20

【００７４】配列番号：２６配列の長さ：２５配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、３番
の Cysと２０番の Cysがジスルフィド結合している。配列： Phe Lys Cys Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala 1 5 10 15 Pro Ser Ile Thr Cys Val Arg Arg Ala Phe 20 25

【００７５】配列番号：２７配列の長さ：１１配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。配列： Lys Thr Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys 1 5 10

【００７６】配列番号：２８配列の長さ：３８配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、１６
番の Cysと３３番の Cysとがジスルフィド結合してい
る。配列： Lys Asn Val Arg Trp Cys Thr Ile Ser Gln Pro Glu Trp Phe Lys 1 5 10 15 Cys Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro Ser 20 25 30 Ile Thr Cys Val Arg Arg Ala Phe 35

【００７７】配列番号：２９配列の長さ：３２配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、１０
番の Cysと２７番の Cysとがジスルフィド結合してい
る。配列： Thr Ile Ser Gln Pro Glu Trp Phe Lys Cys Arg Arg Trp Gln Trp 1 5 10 15 Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro Ser Ile Thr Cys Val Arg Arg 20 25 30 Ala Phe

【００７８】配列番号：３０配列の長さ：４７配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、配列
の長さ３６であって９番、２６番、及び３５番に Cysを
有するペプチドの、９番の Cysと２６番の Cysとがジス
ルフィド結合し、上記配列の長さ３６のペプチドの３５
番の Cysが、配列の長さ１１であって１０番にCysを有
するペプチドの１０番の Cysとがジスルフィド結合して
いる。配列： Val Ser Gln Pro Glu Ala Thr Lys Cys Phe Gln Trp Gln Arg Asn 1 5 10 15 Met Arg Lys Val Arg Gly Pro Pro Val Ser Cys Ile Lys Arg Asp 20 25 30 Ser Pro Ile Gln Cys Ile 35 Gly Arg Arg Arg Arg Ser Val Gln Trp Cys Ala 1 5 10

【００７９】配列番号：３１配列の長さ：５配列の型：アミノ酸トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
は Cysを除く任意のアミノ酸残基を示す。配列： Lys R01 R01 R01 Lys 1 5

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ０７Ｋ 7/06 ＺＮＡ 8318−4Ｈ 7/08 8318−4Ｈ 14/79 8318−4Ｈ // Ａ６１Ｋ 38/16 (72)発明者若林裕之神奈川県座間市東原５−１−83 森永乳業株式会社栄養科学研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列番号１から配列番号３１のいずれか
に記載のアミノ酸配列を有するペプチド、薬学的に許容
されるこれらペプチドの誘導体、薬学的に許容されるこ
れらペプチドの塩類、またはこれらの２種以上の混合物
を有効成分とする抗真菌剤。