JPH05271094A

JPH05271094A - カルボキシメチル化キチン誘導体を用いる癌転移抑制剤

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Publication number: JPH05271094A
Application number: JP4068674A
Authority: JP
Inventors: Naoyuki Nishikawa; 尚之西川; Masayoshi Kojima; 政芳小島; Mitsunori Ono; 光則小野; Hiroyuki Komazawa; 宏幸駒澤; Ikuo Saiki; 育夫済木; Ichiro Azuma; 市郎東
Original assignee: Fuji Photo Film Co Ltd
Current assignee: Fujifilm Holdings Corp
Priority date: 1992-03-26
Filing date: 1992-03-26
Publication date: 1993-10-19

Abstract

(57)【要約】（修正有）【目的】 Arg-Gly-Aspのトリペプチドを必須単位とし
て有するカルボキシメチル化キチン誘導体またはその薬
理学的に許容される塩を含む癌転移抑制剤を提供する。【構成】側鎖にアミド結合、エステル結合、エーテル
結合、ウレタン結合のいずれかを介して、一般式［１］
で表される接着性ペプチドを結合して有するカルボキシ
メチル化キチン誘導体またはその薬理学的に許容される
塩を有効成分として含有してなる癌転移抑制剤。［R¹］-［CO］-(［X］-Arg-Gly-Asp-［Y］)n-［Z］-［R²］［１］〔式中、［］は［］内の基が存在してもしなくても
よいことを表す。存在する場合、ＸおよびＹはそれぞれ
Ser、Gly、Ｖａｌ、Asn、Asp、proから選択されるアミ
ノ酸残基またはこれらから構成されるペプチド残基を示
し、Ｚは−Ｏ−または−ＮＨ−を示す。Ｒ¹、Ｒ²のいず
れか一方は、水素、あるいはＣ_１〜９−（置換）アルキ
ル基、Ｃ_６〜９−（置換）アリール基を表し、他方は、
Ｃ_１〜９−（置換）アルキレン基またＣ_６〜９−（置
換）アリーレン基を表す。ｎは１〜５の整数を示す。〕

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、Ａｒｇ-Ｇｌｙ-Ａｓｐ
のトリペプチドを必須単位として有するカルボキシメチ
ル化キチン誘導体（以下、「ＣＭ−キチン誘導体」と略
す。）およびその薬理学的に許容される塩を有効成分と
する癌転移抑制剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】フィブロネクチンは細胞−細胞外基質の
接着に関与するタンパク質であり、血小板凝集やガン転
移にも関与していると考えられている。これらの相互作
用は一連の細胞表面のレセプターにより仲介されてい
る。フィブロネクチンは分子量約２５万の巨大分子であ
るにもかかわらず、これらのレセプターは、その中のAr
g-Gly-Asp配列を特異的に認識することが明らかにさ
れ、レセプターとの相互作用に重要なものであることが
報告されている（ネイチャー(Nature)、第309巻、30
頁、1984年）。このArg-Gly-Asp配列はビトロネクチン
等の他の接着性蛋白質にも存在しており、上記コア配列
を介して、被接着細胞のレセプターと接合し、その情報
を接着細胞に伝達する。また、ヘパリン、コラーゲン、
フィブリン等の生体高分子との結合能も有し、細胞と間
質結合組織との接着、細胞の分化、増殖に関与している
とも考えられている。このように細胞接着活性蛋白質は
種々の生物活性を有するため、医薬、医用材料への応用
が検討されている。例えば、Arg-Gly-Asp配列を有する
種々の鎖状および環状のオリゴペプチドを用いて血小板
凝集を阻害する方法（高分子学会予稿集(Polymer Prepr
ints, Japan)、第38巻、3149頁、1989年、特開平2-1747
97号）、Arg-Gly-Asp配列を有するペプチドを細胞移動
抑制剤として用いる方法（特開平2-4716号）、Arg-Gly-
Aspを固定化したPMMA膜を細胞接着膜として用いる方法
(高分子学会予稿集(Polymer Preprints,Japan) 、第37
巻、705頁、1988年）等が報告されている。また、ポリ
マーにArg-Gly-Aspを必須構成単位とするペプチドを共
有結合させ動物細胞培養基体、生体複合人工臓器用基体
として用いる方法（特開平1-309682号、特開平1-305960
号）、Arg-Gly-Asp-Ser配列を有するポリペプチドを体
外血液用血小板保護剤として用いる方法も開示されてい
る（特開昭64-6217号）。さらに細胞接着活性蛋白質は
癌転移に関係する物質としても注目されている。癌転移
の一連の段階では、癌細胞は種々の宿主細胞や生体高分
子と接触する。このときフィブロネクチンのような細胞
接着分子が存在すると細胞は多細胞塊を形成し、癌細胞
の増殖や生存をより容易にする。ところが上記細胞接着
活性蛋白質が存在すると、該蛋白質に含まれる、フィブ
ロネクチンの接着コアであるトリペプチド Arg-Gly-Asp
が癌細胞上のレセプターと接合することにより、逆に癌
転移阻害活性を示すことが報告されている（サイエンス
（Science)、第238巻、４６７頁、１９８６年）。さら
に、この配列を有するオリゴペプチドあるいはその繰り
返し構造を有するポリペプチドを用いてより効率的に癌
転移を抑制する方法も開示されている(Int.J.Biol.Macr
omol.、第11巻、23頁、1989年；同誌、第11巻、226頁、
1989年；Jpn.J.Cancer Res.、第60巻、722頁、1989
年）。一方、キチンはＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン
がβ−（１→４）結合した多糖で、甲殻類や昆虫類の外
骨格の主成分である。下等動物や無脊髄動物に広く分布
し生体の支持や防護の役割を担っており、植物界のセル
ロースに相当する。キチンは最後のバイオマスとも呼ば
れ近年その誘導体の研究が盛んに行われており、特に溶
媒に可溶なキチン誘導体に関する研究が多く報告されて
いる。Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン単位のＣ−６位
の水酸基をカルボキシメチル化したカルボキシメチルキ
チン（ＣＭ−キチン）は水溶性であり、各種キチン誘導
体の出発物質としても重要な化合物である。そして、Ｃ
Ｍ−キチンのＣ−６位あるいはＣ−３位の水酸基を硫酸
化したＣＭ−キチン誘導体が硫酸化カルボキシメチルキ
チン（ＳＣＭ−キチン）である。これらのキチンおよび
その誘導体については、キチン・キトサン研究会編“キ
チン・キトサンの応用”（技報堂、１９９０年）、キチ
ン・キトサン研究会編“最後のバイオマスキチン・キ
トサン”（技報堂、１９８８年）、キチン・キトサン実
験マニュアル（技報堂、１９９１年）に詳しく記載され
ている。また、癌の湿潤過程において、細胞外マトリッ
クスや基底膜の重要な構成成分のひとつであるヘパラン
硫酸が癌転移性メラノーマ細胞から産出されるヘパラナ
ーゼにより分解され、この酵素的分解はヘパリンにより
阻害されることが報告されている（Science、第２２０
巻、６１１頁、１９８４年；J. Biol. Chem.、第５９
巻、２２８３頁、１９８４年）。そして、抗凝結作用を
持たないヘパリンおよびヘパリン誘導体が癌転移を抑制
することが見いだされており（GANN Monograph of Can
cer Res.、第２０巻、１４７頁、１９７７年；Bioche
m.、第２５巻、５３２２頁、１９８６年）、さらにヘパ
リン様の構造を有しているＳＣＭ−キチンが癌転移を抑
制することも知られている（Jpn. J. of Cancer Res.、
第８０巻、８６６頁、１９８９年；Cancer Res.、第５
０巻、３６３１頁、１９９０年；Cancer Res.、第５１
巻、２２頁、１９９１年）。上述のように、Arg-Gly-As
pトリペプチド、ＳＣＭキチン誘導体等の癌転移抑制作
用は報告されているが、ＣＭ−キチンの誘導体であって
Arg-Gly-Aspを必須単位とするオリゴペプチドあるいは
その繰返し構造を有するポリペプチドを導入した化合物
の癌転移抑制剤への応用は全く知られていない。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】上述のように、フィブ
ロネクチン等の細胞接着活性蛋白質あるいはそのペプチ
ド断片は様々な生物活性を有しており、その関連物質を
医薬として応用する技術の開発が望まれていた。特に、
接着コア配列の癌転移抑制作用は医薬として応用価値が
高いと考えられる。しかし、上記接着コア配列のトリペ
プチド自体では生体内で種々の代謝作用を受けたり早期
に体外に排出されやすく、血中での濃度を安定に維持す
ることができず、従って所望の癌転移抑制効果を得るこ
とが困難であった。そこで本発明者らは、天然多糖類が
多様な性状、機能を有し、生体との間で示す相互作用も
低分子や他のポリマーとは非常に異なっていることに着
目し、接着コア配列の持つ生物活性を充分に保持し、合
成も容易で且つ生体に重大な副作用を示さない新規な化
合物を求めて鋭意研究を行なった結果、Arg-Gly-Aspの
トリペプチドを必須単位として有する新規なＣＭ−キチ
ン誘導体とその薬理学的に許容される塩を見出し、本研
究を完成したものである。従って本発明の目的は、レセ
プターに対する結合能が増強され、血液中で安定性が高
く、しかもより簡便な手法で生産可能な、Arg-Gly-Asp
のトリペプチドを必須単位として有する、新規なＣＭ−
キチン誘導体およびその薬理学的に許容される塩を含有
する医薬組成物を提供することである。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明の医薬組成物は、
側鎖にアルギニン残基−グリシン残基−アスパラギン酸
残基からなるペプチド配列を有するＣＭ−キチン誘導体
またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含
有してなる癌転移抑制剤である。上記トリペプチド配列
は、他のアミノ酸を含むペプチド配列の一部として存在
してもよく、またＣＭ−キチン誘導体に、アルキレン
基、アリーレン基等の、化合物の生理活性に影響を与え
ない有機基を介して結合されてもよい。さらに、化合物
の製造を考慮して、アミド結合、エステル結合、エーテ
ル結合、ウレタン結合等を介して結合されていてもよ
い。また、上記トリペプチド配列を含む基の非結合末端
は、アルキル基、アリール基等を有していてもよい。特
に好ましい実施態様においては、本発明の癌転移抑制剤
は、カルボキシメチル化キチン誘導体の側鎖にアミド結
合、エステル結合、エーテル結合、ウレタン結合のいず
れかを介して結合した、下記一般式［１］で表される接
着性ペプチドを必須単位として有するペプチド配列担持
カルボキシメチル化キチン誘導体またはその薬理学的に
許容される塩を有効成分として含有することを特徴とす
る。［R¹］-［CO］-(［X］-Arg-Gly-Asp-［Y］)n-［Z］-［R²］［１］式中、Argはアルギニン、Glyはグリシン、Aspはアスパ
ラギン酸残基を示す。［］は［］内の基が存在して
もよくあるいは存在しなくてもよいことを表し、存在す
る場合は、Ｘ、Ｙはそれぞれセリン(Ｓｅｒ)、グリシン
（Ｇｌｙ）、バリン（Ｖａｌ）、アスパラギン（Ａｓ
ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、プロリン（Ｐｒｏ）
から選択されるアミノ酸残基またはこれらのアミノ酸残
基から構成されるペプチド残基を示し、Ｚは−Ｏ−また
は−ＮＨ−を示す。Ｒ¹、Ｒ²のいずれか一方は、水素、
あるいは置換基を有していてもよくまた不飽和結合を含
んでいてもよい、炭素数が１〜９の直鎖もしくは分岐の
アルキル基または炭素数が６〜９のアリール基を表し、
他方は、置換基を有していてもよくまた不飽和結合を含
んでいてもよい、炭素数が１〜９の直鎖もしくは分岐の
アルキレン基、または炭素数が６〜９のアリーレン基を
表す。ｎは１〜５の整数を示す。アルキル基およびアル
キレン基の置換基としては、カルボニル基、カルボキシ
ル基、アミノ基、ヒドロキシル基、スルホ基、ハロゲン
原子、アリール基、ニトロ基、シアノ基等が挙げられ、
同一鎖に２つ以上有していてもよい。不飽和結合は２重
結合、３重結合のいずれでもよい。本発明のペプチド配
列担持ＣＭ−キチン誘導体に使用される好ましいＣＭ−
キチン誘導体としては、硫酸化カルボキシメチルキチン
（ＳＣＭ−キチン）、カルボキシル化ＣＭ−キチン及び
ＣＭ−キチンが挙げられる。本発明に使用されるペプチ
ド配列担持ＣＭ−キチン誘導体の分子量は好ましくは２
０万以下、特に３０００〜１０万の範囲で、室温で水溶
性であることが好ましい。カルボキシル化キチンのカル
ボキシル化剤としては、無水コハク酸、無水マレイン
酸、無水フタル酸、無水イタコン酸、無水シトラコン
酸、ピロメリット酸無水物、トリメリット酸無水物等が
挙げられる。本発明に係る細胞接着性ペプチドに用いら
れるアミノ酸はＬ体、Ｄ体どちらでもよいが、好ましく
はＬ体である。本発明のペプチド配列担持ＣＭ−キチン
誘導体の塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸
塩、リン酸塩、ホウ酸塩等の無機酸との塩や、酢酸塩、
トリフルオロ酢酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸
塩、乳酸塩、酒石酸塩等の有機酸との塩が挙げられ、こ
のような塩への変換は慣用手段で行うことができる。ペ
プチドの合成方法は特に限定されないが、液相法、固相
法および自動合成装置による合成方法が挙げられる。こ
れらの合成方法の詳細については、生化学実験講座”タ
ンパク質の化学IV” ｐ２０７−４９５（日本生化学会
編、東京化学同人）、”続生化学実験講座タンパク質の
化学（下）”（日本生化学会編、東京化学同人）、泉屋
ら編”ペプチド合成の基礎と実験”（丸善）に記載され
ている。また、市販されている合成ペプチドを利用する
ことも可能である。ＣＭ−キチン誘導体と接着性ペプチ
ドとを結合するために用いられる方法としては、臭化シ
アン、酸アジド、水溶性カルボジイミド等を利用したア
ミド結合合成方法が挙げられる。本発明のペプチド配列
担持ＣＭ−キチン誘導体は、細胞接着性蛋白質のコア配
列Ａｒｇ-Ｇｌｙ-Ａｓｐを有し、該コア配列を介して細
胞接着性蛋白質と同様の機序で細胞に接着する。そのた
め、細胞接着性蛋白のアゴニストまたはアンタゴニスト
として種々の生物活性を示し、免疫調整作用、創傷治癒
作用、毛細血管中で起る癌細胞による血小板凝集抑制作
用、神経疾患治癒作用などの広範な生物活性が認められ
ている。従って、本発明のペプチド配列担持ＣＭ−キチ
ン誘導体は、その少なくとも一種を、場合により慣用の
担体または医薬用助剤とともに、癌転移抑制剤としての
みならず、創傷治癒剤、免疫調整剤、血小板凝集粘着抑
制剤として患者に投与することが可能である。その投与
量は、０．２μｇ／ｋｇ〜４００ｍｇ／ｋｇの範囲で、
症状、年齢、体重等に基いて決定される。本発明のキチ
ン誘導体は、ペプチド系医薬に一般に使用されている投
与方法、即ち非経口投与方法、例えば静脈内投与、筋肉
内投与、皮下投与等によって投与するのが好ましい。そ
のような注射用製剤を製造する場合、本発明のキチン誘
導体を例えば、後記実施例で示すようにＰＢＳまたは生
理食塩水に溶解して注射用製剤としてもよく、あるいは
０．１Ｎ程度の酢酸水等に溶解した後、凍結乾燥製剤と
してもよい。このような製剤にはグリシンやアルブミン
等の慣用の安定剤を添加してもよい。さらに本発明のキ
チン誘導体またはその塩は、例えばリポソーム中に包容
したマイクロカプセル剤あるいはミクロスフェア状、ハ
イドロゲル状とすれば経口投与することも可能であり、
また座剤、舌下錠、点鼻スプレー剤等の形にすれば消化
菅以外の粘膜からも吸収させることも可能である。

【０００５】［実施例］以下、実施例により本発明を更
に説明するが本発明はこれに限定されるものではない。
なお、アミノ酸、各種保護基および脱保護試薬等は通常
用いられている略号を使って表した。保護基および脱保
護試薬等の表記に用いた主な略号は以下の通りである。 Bzl:ベンジル基 t-Boc:ｔ−ブトキシカルボニル基 Z:ベンジルオキシカルボニル基 Pac:フェナシル基 Ac: アセチル基 TFA:トリフルオロ酢酸 HOBt: １−ヒドロキシベンゾトリアゾール DCC:ジシクロヘキシルカルボジイミド DCウレア：ジシクロヘキシル尿素 AcOEt:酢酸エチル

【０００６】製造例１接着性ペプチドの固相法に
よる合成 Merrifield方式によるペプチド合成装置を用いて合成を
行った。α−アミノ基の保護にはＢｏｃ基を用い、樹脂
から切出した後、分取用ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグ
ラフィー）で精製し、単一ピークを示す接着性合成ペプ
チドを得た。

【０００７】表１接着性合成ペプチド ───────────────────────────────── 名称構造式略号収率 ───────────────────────────────── ペプチド−１ H-Arg-Gly-Asp-OH RGD ３７％ペプチド−２ H-(Arg-Gly-Asp)₂-OH (RGD)₂ ２８％ペプチド−３ H-(Arg-Gly-Asp)₃-OH (RGD)₃ １９％ペプチド−４ H-(Arg-Gly-Asp)₅-OH (RGD)₅ １１％ ─────────────────────────────────

【０００８】製造例２接着性ペプチドＲＧＤの液
相法による合成文献(Chem. Pharm. Bull., 24, 3025 (1976))に記載の
方法により、国産化学(株)から購入したBoc-Asp(OBzl)
32.3g、トリエチルアミン 14ml 、臭化ベンジル 17.1
g、酢酸エチル 200ml の混合物を３時間加熱還流した。
反応液を室温になるまで放冷した後に、1N 炭酸水素ナ
トリウム水溶液、飽和食塩水各200mlで洗浄し、無水硫
酸ナトリウムで乾燥した。硫酸ナトリウムをろ過して除
き、ろ液を減圧濃縮して無色油状物を得た。この反応混
合物をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出液ヘキサ
ン／酢酸エチル９５：５）で精製し、Boc-Asp(OBzl)-O
Bzl 36g を得た。ジクロロメタン 20mlに溶解し、トリ
フルオロ酢酸20mlを加えて室温で30分間撹拌しTFA-Asp
(OBzl)-OBzlを定量的に得た。TFA-Asp(OBzl)-OBzl 8.5
gをジクロロメタンに溶解して、Boc-Gly 無水物6.7g、
ジメチルアミノピリジン（DMAP）2.5gを加え室温で６時
間撹拌した。反応液を水で洗い無水硫酸ナトリウムで乾
燥した。硫酸ナトリウムをろ過して除き、ろ液を減圧濃
縮した。残留物をジクロロメタン 20mlに溶解し、トリ
フルオロ酢酸20mlを加えて室温で30分間撹拌した。溶媒
を減圧留去した後にクロロホルム100mlを加え、1N 炭酸
水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水各100mlで数回洗浄
し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。硫酸ナトリウムを
ろ過して除き、ろ液を減圧濃縮してGly-Asp(OBzl)-OBzl
を得た。これを、精製すること無しにBoc-Arg(Z)₂( 国
産化学(株)から購入) 10.83g、ＤＣＣ 4.54g、ＨＯＢ
ｔ 2.76g、ＤＭＦ80mlを加えて一昼夜撹拌し、ＤＣウ
レアを除去した後に溶媒を減圧留去し、クロロホルム10
0mlを加え、1N 炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水
各200mlで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。硫
酸ナトリウムをろ過して除き、ろ液を減圧濃縮した。残
留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液ク
ロロホルム・酢酸エチル６：４）により精製して、白
色粉末としてBoc-Arg(Z)₂-Gly-Asp(OBzl)-OBzl 13.2g
を得た。FAB-MASS (M+H）⁺ 894。 Boc-Arg(Z)₂-Gly-Asp(OBzl)-OBzl 1.34gを塩化メチレ
ン10mlに溶解し、トリフルオロ酢酸10mlを加えて室温で
30分間撹拌した。溶媒を減圧留去した。残留物に酢酸エ
チルを加え５％パラジウム炭素100mgを加え加水素分解
を行い（室温、８時間）、反応液をろ過して濃縮した後
にイオン交換処理を行ってペプチド-１ H-Arg-Gly-Asp
-OHを定量的に得た。

【０００９】Boc-Asp(OBzl)-OPacの調製 Boc-Asp(OBzl) 16.2g(50mmol)、トリエチルアミン(Et
₃N) 5.05g(50mmol)をＤＭＦ 50mlに溶解させて撹拌
し、フェナシルブロマイド 9.95g(50mmol)のＤＭＦ溶
液 50mlを氷冷下で滴下した。室温に戻し、４時間撹拌
してＤＭＦを減圧留去させた後、残留物を酢酸エチル(A
cOEt)に溶解させ10%クエン酸水溶液で洗浄した。続いて
有機層を10%炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、有機
層を硫酸ナトリウムで乾燥させた後ろ過し、ろ液を減圧
下で濃縮した。残留物をAcOEt-ヘキサン系で再結晶して
Boc-Asp(OBzl)-0Pac 18.0g(41mmol 、収率 82%) を無色
パウダーとして得た。

【００１０】製造例３細胞接着性ペプチドＲＧＤＳの
合成文献(Chem. Pharm. Bull., 24, 3025 (1976))に記載の
方法により、国産化学(株)から購入したBoc-Ser(Bzl) 2
9.5g、トリエチルアミン 14ml 、臭化ベンジル 17.1g、
酢酸エチル 200ml の混合物を３時間加熱還流した。反
応液を室温になるまで放冷した後に、1N 炭酸水素ナト
リウム水溶液、飽和食塩水各200mlで洗浄し、無水硫酸
ナトリウムで乾燥した。硫酸ナトリウムをろ過して除
き、ろ液を減圧濃縮して無色油状物を得た。この反応混
合物をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出液ヘキサ
ン／酢酸エチル 40:1）で精製し、Boc-Ser(Bzl)-OBzl 3
6gを得た。次に、Boc-Ser(Bzl)-OBzl 7.71 gを塩化メチ
レン20mlに溶解し、トリフルオロ酢酸20mlを加えて室温
で30分間撹拌した。溶媒を減圧留去した後にクロロホル
ム100mlを加え、1N炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食
塩水各100mlで数回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥
した。硫酸ナトリウムをろ過して除き、ろ液を減圧濃縮
して無色油状物を得た。これとBoc-Asp(OBzl)(国産化学
(株)から購入) 6.47g 、ジシクロヘキシルカルボジイミ
ド（ＤＣＣ） 4.54g、ヒドロキシベンゾトリアゾール
（ＨＯＢｔ） 2.76g、ＤＭＦ80mlの混合物を０℃で３時
間、さらに室温で12時間撹拌した。ＤＣウレアを除去し
た後に溶媒を減圧留去し、クロロホルム100mlを加え、1
N炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水各200mlで洗浄
し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。硫酸ナトリウムを
ろ過して除き、ろ液を減圧濃縮し、ジクロロメタン 20
ml、トリフルオロ酢酸20mlを加えて室温で30分間撹拌し
た。溶媒を減圧留去した後にクロロホルム100mlを加
え、1N 炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水各100ml
で数回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。硫酸ナ
トリウムをろ過して除き、ろ液を減圧濃縮してAsp(OBz
l)-Ser(Bzl)-OBzl を得た。さらに、Boc-Gly(国産化学
(株)から購入)3.50g、ＤＣＣ 4.54g、ＨＯＢｔ 2.76
g、ＤＭＦ 80mlを加えて０℃で３時間、さらに室温で1
2時間撹拌した。ＤＣウレアを除去した後に溶媒を減圧
留去し、クロロホルム100mlを加え、1N炭酸水素ナトリ
ウム水溶液、飽和食塩水各200mlで洗浄し、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥した。硫酸ナトリウムをろ過して除き、
ろ液を減圧濃縮し、ジクロロメタン 20ml、トリフルオ
ロ酢酸20mlを加えて室温で30分間撹拌した。溶媒を減圧
留去した後にクロロホルム100mlを加え、1N 炭酸水素ナ
トリウム水溶液、飽和食塩水各100mlで数回洗浄し、無
水硫酸ナトリウムで乾燥した。硫酸ナトリウムをろ過し
て除き、ろ液を減圧濃縮してGly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-O
Bzl を得た。これを、精製すること無しにBoc-Arg(Z)
₂(国産化学(株)から購入) 10.83g、ＤＣＣ 4.54g、Ｈ
ＯＢｔ 2.76g、ＤＭＦ80mlを加えて一昼夜撹拌し、Ｄ
Ｃウレアを除去した後に溶媒を減圧留去し、クロロホル
ム100mlを加え、1N 炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食
塩水各200mlで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し
た。硫酸ナトリウムをろ過して除き、ろ液を減圧濃縮し
た。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶
出液クロロホルム・メタノール９９：１）により精製
して、白色粉末としてBoc-Arg(Z)₂-Gly-Asp(OBzl)-Ser
(Bzl)-OBzl 14.4g を得た。FAB-MASS(M+H）⁺1071。 Boc-Arg(Z)₂-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl 1.03gを塩
化メチレン10mlに溶解し、トリフルオロ酢酸10mlを加え
て室温で30分間撹拌した後、溶媒を減圧留去した。残留
物に酢酸エチルを加え５％パラジウム炭素100mgを加え
加水素分解を行い（室温、８時間）、反応液をろ過して
濃縮した後にイオン交換処理を行いペプチド−５ H-Ar
g-Gly-Asp-Ser-OHを定量的に得た。

【００１１】製造例４ペプチド−６ H-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-OHの固相法
による合成Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ方式によるペプチド合成装置を用
いて合成を行った。α−アミノ基の保護にはＢｏｃ基を
用い、樹脂から切出した後、分取用ＨＰＬＣ（高速液体
クロマトグラフィー）で精製し、単一ピークを示す接着
性合成ペプチドを得た。収率２５％。

【００１２】製造例５ペプチド−２の液相法による合成 Boc-Asp(OBzl)-OPac 15.4g(35mmol)をジクロロメタン(C
H₂Cl₂) 50mlに溶解し、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）50
mlを氷冷下で加え、室温に戻して30分間撹拌した。溶媒
を減圧留去して、エーテル(Et₂O)で結晶化させAsp(OBz
l)-OPacのＴＦＡ塩を17.1g得た。次に、Boc-Gly 7.88g
(45mmol)、N-メチルモルホリン(NMM)4.55g(45mmol)をＴ
ＨＦ 30mlに溶解し撹拌させた。−１０℃でギ酸クロロ
ホルメート(IBCF)のＴＨＦ溶液 10mlを加え撹拌した。
５分後、Asp(OBzl)-OPacＴＦＡ塩 13.6g(30mmol)を加え
た後、ＮＭＭ 3.03g(30mmol)のＴＨＦ溶液 10mlを加え
た。４時間反応させた後、溶媒を減圧留去して、残留物
をAcOEtに溶解させ10%クエン酸水溶液で洗浄した。続い
て、有機層を５%炭酸水素ナトリウム水溶液、蒸留水で
洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた後ろ過
し、ろ液を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロ
マトガラフィー（溶離液 AcOEt/ヘキサン=1/1)で精製
してBoc-Gly-Asp(OBzl)-OPac 13.6g(27mmol 、収率 91
%) を得た。Boc-Gly-Asp(OBzl)-OPac 13.6g(27mmol)をC
H₂Cl₂ 50mlに溶解し、氷冷下でトリフルオロ酢酸（ＴＦ
Ａ）50mlを加え、室温に戻して１時間撹拌した。溶媒を
減圧留去して、ジエチルエーテル(Et₂O)で結晶化させGl
y-Asp(OBzl)-OPacのＴＦＡ塩を定量的に得た。次に、Bo
c-Arg(Mts) 20.5g(45mmol)、N-メチルモルホリン(NMM)
4.55g(45mmol)をＴＨＦ 30mlに溶解し撹拌した。−１
０℃でギ酸クロロホルメート(IBCF)のＴＨＦ溶液 10ml
を加え撹拌した。５分後、Gly-Asp(OBzl)-OPacＴＦＡ塩
14.8g(29mmol)を加えた後、ＮＭＭ 3.03g(30mmol)のＴ
ＨＦ溶液 10mlを加えた。一昼夜反応させた後、溶媒を
減圧留去して、残留物をAcOEtに溶解させ、10% クエン
酸水溶液で洗浄した。続いて有機層を５%炭酸水素ナト
リウム水溶液、食塩水で洗浄し、有機層を硫酸ナトリウ
ムで乾燥させた後ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。残
留物をシリカゲルクロマトガラフィー（溶離液 AcOEt)
で精製してBoc-Arg(Mts)-Gly-Asp(OBzl)-OPac 17.1g(21
mmol、収率 71%)を得た。Boc-Arg(Mts)-Gly-Asp(OBzl)-
OPac 5.0g(6.0mmol)を90%酢酸水溶液 132mlに溶解して
撹拌し、氷冷下で亜鉛粉末 11.7gを加え、室温で１．５
時間反応させた。その後溶媒を減圧留去させ、残留物に
10%クエン酸水溶液を加え、クロロホルム(CHCl₃)で抽出
した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた後ろ過し、
ろ液を減圧下で濃縮した。残留物をAcOEt-ヘキサン系で
再結晶してBoc-Arg(Mts)-Gly-Asp(OBzl) 2.56g(3.6mmo
l、収率 60%) を無色パウダーとして得た。次に、Boc-A
rg(Mts)-Gly-Asp(OBzl) 2.56g(3.6mmol)をＴＨＦ 50ml
に溶解し、Arg(Mts)-Gly-Asp(OBzl)-OPac塩酸塩 2.77g
(3.6mmol)、ジフェニルホスホリルアジド（ＤＰＰＡ）
0.99g(3.6mmol)、トリエチルアミン 0.36g(3.6mmol)を
加え、一昼夜反応させた。その後溶媒を減圧留去して、
残留物をAcOEtに溶解させ10% クエン酸水溶液で洗浄し
た。続いて有機層を５%炭酸水素ナトリウム水溶液、食
塩水で洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた後
ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。残留物を再結晶（Ac
OEt/ヘキサン）してBoc-Arg(Mts)-Gly-Asp(OBzl)-Arg(M
ts)-Gly-Asp(OBzl)-OPac 4.5g(3.13mmol、収率 87%) を
得た。Boc-Arg(Mts)-Gly-Asp(OBzl)-Arg(Mts)-Gly-Asp
(OBzl)-OPac 4.3g(3.0mmol)を90%酢酸水溶液 100mlに溶
解し撹拌させ、氷冷下で亜鉛粉末 9.75gを加え、室温で
１．５時間反応させた。そして、溶媒を減圧留去させ、
残留物をに10%クエン酸水溶液を加え、クロロホルム(CH
Cl₃)で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた
後、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。残留物をAcOEt-
ヘキサン系で再結晶してBoc-Arg(Mts)-Gly-Asp(OBzl)-A
rg(Mts)-Gly-Asp(OBzl) 3.55g (2.7mmol、収率 90%)を
無色パウダーとして得た。次に、Boc-Arg(Mts)-Gly-Asp
(OBzl)-Arg(Mts)-Gly-Asp(OBzl) 3.55g(2.7mmol)を1M-
トリフルオロメタンスルホン酸、チオアニソール、m-ク
レゾール、トリフルオロ酢酸溶液 100mlに溶解し室温
で１時間撹拌した。反応液をEt₂Oに注ぎ結晶化させArg-
Gly-Asp-Arg-Gly-Asp 1.48g(2.2mmol、収率 81%）を得
た。

【００１３】合成例１ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳ（化合
物１）の合成粘度９ｃｐｓ（１％溶液、２０℃）、エーテル化度０．
７８のＣＭ−キチン、脱アセチル化度０．５のＣＭ
−キチン（焼津水産化学工業製）０．３０ｇをｐＨ７．
４リン酸バッファーに溶解し、０℃に保ちながら水溶性
カルボジイミド〔１−エチル−３−３−（ジメチルアミ
ノプロピル）−カルボジイミド〕１２８ｍｇの２．６ｍ
ｌリン酸バッファー溶液を加えて、１．５時間反応させ
た。次いで、８ｍｌのリン酸バッファーに溶解した接着
性ペプチドＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ（ＲＧＤ
Ｓ）（国産化学工業製）４００ｍｇを添加し４℃で一晩
反応させた。反応溶液を、Ｖｉｓｋｉｎｇｔｕｂｅに
入れイオン交換水、ついで純水に対して透析し低分子量
成分を除いて精製、凍結乾燥した。収量０．２４ｇ構造の確認はＩＲおよびアミノ酸分析により行った。Ｃ
Ｍ−キチンＲＧＤＳの構造式を以下に示す。

【化１】アミノ酸分析(nmol/10μg) Arg:Gly:Asp:Ser＝ 2.06：2.14:1.99:1.88 ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６
５２ｃｍ^-1

【００１４】合成例２スクシニル化ＣＭ−キチン−Ｒ
ＧＤＳ（化合物２）の合成合成例１のＣＭ−キチン２０．０ｇを１％トリエチルア
ミン溶液１００ｍｌに溶解し、これに無水コハク酸３
４.０ｇ、４−ジメチルアミノピリジン２．００ｇを加
え室温で一昼夜撹拌した。反応終了後溶液を大過剰のア
セトンに投入してスクシニル化ＣＭ−キチンを再沈殿さ
せた。沈殿を集め更に大量のメタノールで洗浄した後エ
ーテルで洗浄し真空乾燥させた。収量２２．４０ｇ。
スクシニル化ＣＭ−キチン０．３０ｇをｐＨ７．４リン
酸バッファーに溶解し、０℃に保ちながら水溶性カルボ
ジイミド（１−エチル−３−３−（ジメチルアミノプロ
ピル）−カルボジイミド）１２８ｍｇの２．６ｍｌリン
酸バッファー溶液を加えて、１．５時間反応させた。次
いで、８ｍｌのリン酸バッファーに溶解したＲＧＤＳ４
００ｍｇを添加し４℃で一晩反応させた。反応溶液を、
Ｖｉｓｋｉｎｇｔｕｂｅに入れ、イオン交換水、次い
で純水に対して透析し低分子量成分を除いて精製し、そ
の後凍結乾燥した。収量０．２６ｇ構造の確認はＩＲおよびアミノ酸分析により行った。ス
クシニル化ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳの構造式を以下に示
す。

【化２】アミノ酸分析(nmol/10μg) Arg:Gly:Asp:Ser＝ 2.36:2.13：2.39:2.00 ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６
５２ｃｍ^-1

【００１５】合成例３マレイル化ＣＭ−キチン−ＲＧ
ＤＳ（化合物３）の合成合成例１のＣＭ−キチン２０．００ｇと３６.６ｇの無
水マレイン酸を合成例２と同様に反応させ、マレイル化
ＣＭ−キチン２１．６０ｇを得た。マレイル化ＣＭ−キ
チン０．３０ｇをｐＨ７．４リン酸バッファーに溶解
し、合成例２と同様にしてＲＧＤＳフラグメントを共有
結合させた。収量０．３３ｇ構造の確認はＩＲおよびアミノ酸分析により行った。マ
レイル化ＣＭ−キチンＲＧＤＳの構造式を以下に示す。

【化３】アミノ酸分析(nmol/10μg) Arg:Gly:Asp:Ser＝ 3.13:2.78:2.72:2.57 ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６
４８ｃｍ^-1

【００１６】合成例４フタロイル化ＣＭ−キチン−Ｒ
ＧＤＳ（化合物４）の合成合成例１のＣＭ−キチン２０．０ｇと５０.０ｇの無水
フタル酸を合成例２と同様に反応させフタロイル化ＣＭ
−キチン２２．３１ｇを得た。フタロイル化ＣＭ−キチ
ン０．３０ｇをｐＨ７．４リン酸バッファーに溶解し、
合成例２と同様にしてＲＧＤＳフラグメントを共有結合
させた。収量０．４４ｇ構造の確認はＩＲおよびアミノ酸分析により行なった。
フタロイル化ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳの構造式を以下に
示す。

【化４】アミノ酸分析(nmol/10μg) Arg:Gly:Asp:Ser＝ 2.30：2.22:1.89:1.76 ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６
５２ｃｍ^-1

【００１７】合成例５イタコニル化ＣＭ−キチン−Ｒ
ＧＤＳ（化合物５）の合成合成例１のＣＭ−キチン２０．００ｇと３８.０ｇの無
水イタコン酸を合成例２と同様に反応させイタコニル化
ＣＭ−キチン２１．４５ｇを得た。イタコニル化ＣＭ−
キチン０．３０ｇをｐＨ７．４リン酸バッファーに溶解
し、合成例２と同様にしてＲＧＤＳフラグメントを共有
結合させた。収量０．３６ｇ構造の確認はＩＲおよびアミノ酸分析により行った。イ
タコニル化ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳの構造式を以下に示
す。

【化５】アミノ酸分析(nmol/10μg) Arg:Gly:Asp:Ser＝ 3.17:3.25:3.10:2.88 ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６
５０ｃｍ^-1

【００１８】合成例６トリメリチル化ＣＭ−キチン−
ＲＧＤＳ（化合物６）の合成合成例１のＣＭ−キチン２０．００ｇと６４.９ｇのト
リメリト酸無水物を合成例２と同様に反応させトリメリ
チル化ＣＭ−キチン２３．７４ｇを得た。トリメリチル
化ＣＭ−キチン０．３０ｇをｐＨ７．４リン酸バッファ
ーに溶解し、合成例２と同様にしてＲＧＤＳフラグメン
トを共有結合させた。収量０．３７ｇ構造の確認はＩＲおよびアミノ酸分析により行った。ト
リメリチル化ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳの構造式を以下に
示す。

【化６】アミノ酸分析(nmol/10μg) Arg:Gly:Asp:Ser＝ 2.62：2.79:2.55:2.27 ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６
５６ｃｍ^-1

【００１９】合成例７ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤ
Ｓ（化合物７）の合成接着性ペプチドフラグメントとしてＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｇ
ｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ（ＧＲＧＤＳ）（国産化学工業
製）４６０ｍｇを用い、合成例１と同様にしてＣＭ−キ
チン−ＧＲＧＤＳを合成した。収量０．３６ｇ構造の確認はＩＲおよびアミノ酸分析により行った。Ｃ
Ｍ−キチン−ＧＲＧＤＳの構造式を以下に示す。

【化７】アミノ酸分析(nmol/10μg) Arg:Gly:Asp:Ser＝ 1.53：3.21:1.34:1.11 ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６
５４ｃｍ^-1

【００２０】合成例８スクシニル化ＣＭ−キチン−Ｇ
ＲＧＤＳ（化合物８）の合成接着性ペプチドフラグメントとしてＧＲＧＤＳ４６０ｍ
ｇを用い、合成例２と同様にしてスクシニル化ＣＭ−キ
チン−ＧＲＧＤＳを合成した。収量０．３９ｇ構造の確認はＩＲおよびアミノ酸分析により行った。ス
クシニル化ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳの構造式を以下に
示す。

【化８】アミノ酸分析(nmol/10μg) Arg:Gly:Asp:Ser＝ 3.64：7.06:3.57:3.30 ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６
４８ｃｍ^-1

【００２１】合成例９スクシニル化ＣＭ−キチン−Ｒ
ＧＤ（化合物９）の合成接着性ペプチドフラグメントとしてＲＧＤ４６０ｍｇを
用い、合成例３と同様にしてスクシニル化ＣＭ−キチン
−ＲＧＤを合成した。収量０．３４ｇ構造の確認はＩＲおよびアミノ酸分析により行った。ス
クシニル化ＣＭ−キチン−ＲＧＤの構造式を以下に示
す。

【化９】アミノ酸分析(nmol/10μg) Arg:Gly:Asp:Ser＝ 4.46:4.55:4.49 ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６
５０ｃｍ^-1

【００２２】合成例１０スクシニル化ＣＭ−キチン−
（ＲＧＤ)₂（化合物１０）の合成接着性ペプチドフラグメントとして（ＲＧＤ)₂４６０ｍ
ｇを用い、合成例４と同様にしてスクシニル化ＣＭ−キ
チン−（ＲＧＤ)₂を合成した。収量０．３１ｇ構造の確認はＩＲおよびアミノ酸分析により行った。ス
クシニル化ＣＭ−キチン−（ＲＧＤ)₂の構造式を以下に
示す。

【化１０】アミノ酸分析(nmol/10μg) Arg:Gly:Asp＝ 6.05：5.59:5.90 ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６
５４ｃｍ^-1

【００２３】合成例１１スクシニル化ＣＭ−キチン−
（ＲＧＤ)₃（化合物１１）の合成接着性ペプチドフラグメントとして（ＲＧＤ)₃４６０ｍ
ｇを用い、合成例５と同様にしてスクシニル化ＣＭ−キ
チン−（ＲＧＤ)₃を合成した。収量０．３３ｇ構造の確認はＩＲおよびアミノ酸分析により行った。ス
クシニル化ＣＭ−キチン−（ＲＧＤ)₃の構造式を以下に
示す。

【化１１】アミノ酸分析(nmol/10μg) Arg:Gly:Asp＝ 6.69:6.51:6.23 ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６
４８ｃｍ^-1

【００２４】合成例１２スクシニル化ＣＭ−キチン−
（ＲＧＤ)₅（化合物１２）の合成接着性ペプチドフラグメントとして（ＲＧＤ)₅４６０ｍ
ｇを用い、合成例６と同様にしてスクシニル化ＣＭ−キ
チン−（ＲＧＤ)₅を合成した。収量０．２８ｇ構造の確認はＩＲおよびアミノ酸分析により行った。ス
クシニル化ＣＭ−キチン−（ＲＧＤ)₅の構造式を以下に
示す。

【化１２】アミノ酸分析(nmol/10μg) Arg:Gly:Asp:＝ 23.0:21.1:20.3 ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６
５６ｃｍ^-1 スルホン酸の伸縮振動１２５０、８００ｃｍ^-1

【００２５】合成例１３硫酸化ＣＭ−キチン−ＲＧＤ
Ｓ（化合物１３）の合成以下に示すエーテル化度および脱アセチル化度を持つＣ
Ｍ−キチンを戸倉らの方法（Jpn. J. Cancer Res.,80,8
66-872(1989),Cancer Res.,50,3631-3637(1990))に従い
硫酸化し、表１に示すようなエーテル化度、硫酸化度を
持つ硫酸化ＣＭ−キチンを得た。

【００２６】表１ ────────────────────────────── サンプルエーテル化度硫酸化度脱アセチル化度 ────────────────────────────── 化合物13-１ 0.9 0.5 0.5 13-２ 0.7 0.2 ０ 13-３ 0.4 0.6 ０ 13-４ 0.6 1.7 ０ ────────────────────────────── 次に、合成例１と同様にしてＲＧＤＳフラグメントを共
有結合させ、以下に示すような硫酸化ＣＭ−キチン−Ｒ
ＧＤＳを得た。構造の確認はＩＲおよびアミノ酸分析に
より行った。硫酸化ＣＭ−キチンの構造を以下に示す。
また各硫酸化ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳのアミノ酸分析値
を表２に示す。

【化１３】

【化１４】表２アミノ酸分析^*1 ───────────────────────────── サンプル Arg: Gly : Asp : Ser (nmol/10μg) ───────────────────────────── 化合物13-1 2.89: 3.14: 3.19: 3.38 13-2 3.93: 4.27: 4.37: 3.81 13-3 2.34: 2.30: 2.12: 1.42 13-4 4.30: 4.22: 3.43: 1.85 ───────────────────────────── *1: アミノ酸分析加水分解条件 6N-HCl、10時間、110
℃ ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６
５０ｃｍ^-1 スルホン酸の伸縮振動１２５０、８００ｃｍ^-1

【００２７】合成例１４硫酸化ＣＭ−キチン−ＧＲＧ
ＤＳ（化合物１４）の合成接着性ペプチドフラグメントＧＲＧＤＳ４６０ｍｇと
合成例１３の硫酸化ＣＭ−キチンとを合成例１同様にし
て共有結合させ、硫酸化ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳを合
成した。収量０．３５ｇ構造の確認はＩＲおよびアミノ酸分析により行った。硫
酸化ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳの構造式を以下に示す。

【化１５】アミノ酸分析(nmol/10μg) Arg:Gly:Asp:Ser＝ 2.51：2.21:2.42:2.11 ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６
５５ｃｍ^-1

【００２８】合成例１５硫酸化スクシニル化ＣＭ−キ
チン−ＲＧＤＳ（化合物１５）の合成合成例２のスクシニル化ＣＭ−キチンを合成例１３と同
じ方法で硫酸化し、合成例２と同様にしてＲＧＤＳフラ
グメントを共有結合させた。収量０．３７ｇ構造の確認はＩＲおよびアミノ酸分析により行った。硫
酸化スクシニル化ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳの構造式を以
下に示す。

【化１６】アミノ酸分析(nmol/10μg) Arg:Gly:Asp:Ser＝ 2.61：2.77:2.59:2.22 ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６
５４ｃｍ^-1

【００２９】合成例１６硫酸化スクシニル化ＣＭ−キ
チン−GRGDS （化合物１６）の合成合成例２のスクシニル化ＣＭ−キチンを合成例１３と同
じ方法で硫酸化し、合成例７と同様にしてＧＲＧＤＳフ
ラグメントを共有結合させた。収量０．３１ｇ構造の確認はＩＲおよびアミノ酸分析により行った。硫
酸化スクシニル化ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳの構造式を
以下に示す。

【化１７】アミノ酸分析(nmol/10μg) Arg:Gly:Asp:Ser＝ 3.84：7.50:3.68:3.26 ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６
５２ｃｍ^-1

【００３０】合成例１７ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳＧ−
ＮＨ₂（化合物１７）の合成接着性ペプチドフラグメントとしてカルボキシル末端を
アミド化したArg-Gly-Asp-Ser-Gly-NH₂(ＲＧＤＳＧ−Ｎ
Ｈ₂)４６０ｍｇを用い、合成例１と同様にしてＣＭ−キ
チン−ＲＧＤＳＧ−ＮＨ₂を合成した。収量０．３６
ｇ構造の確認はＩＲおよびアミノ酸分析により行った。Ｃ
Ｍ−キチン−ＲＧＤＳＧ−ＮＨ₂の構造式を以下に示
す。

【化１８】アミノ酸分析(nmol/10μg) Arg:Gly:Asp:Ser＝ 1.82：3.82:1.84:1.61 ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６
５８ｃｍ^-1

【００３１】合成例１８ＣＭ−キチン−ＲＧＤＳ（化
合物１８）の合成接着性ペプチドフラグメントとしてＲＧＤＳ１．５ｇ
を用い、合成例１と同様にしてＣＭ−キチン−ＲＧＤＳ
を合成した。収量０．３２ｇ構造の確認はＩＲおよびアミノ酸分析により行った。Ｃ
Ｍ−キチン−ＲＧＤＳの構造式を以下に示す。

【化１９】アミノ酸分析(nmol/10μg) Arg:Gly:Asp:Ser＝ 4.10：4.27:3.98:3.78 ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６５
５ｃｍ^-1

【００３２】合成例１９ＣＭ−キチン−ＧＲＧＤＳＰ
（化合物１９）の合成接着性ペプチドフラグメント−６（製造例３）Ｇｌｙ
−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ（ＧＲＧＤ
ＳＰ）４８０ｍｇを用い、合成例１と同様にしてＣＭ−
キチン−ＧＲＧＤＳＰを合成した。収量０．３５ｇ構造の確認はＩＲおよびアミノ酸分析により行った。Ｃ
Ｍ−キチンＧＲＧＤＳＰの構造式を以下に示す。

【化２０】アミノ酸分析(nmol/50μg) Arg:Gly:Asp:Ser:Pro＝ 1.53：3.21:1.34:1.11:1.33 ＩＲ：アミドカルボニル（Ｃ＝Ｏ）の伸縮振動１６
５７ｃｍ^-1

【００３３】試験例１（実験的肺転移）本発明の化合物類の癌転移阻止作用について検討した。
ＲＧＤＳ担持ＣＭ−キチン誘導体（化合物１〜１０）を
各々１０００μgと、非常に転移性の強い癌細胞としてB
16-BL6 メラノーマ細胞をそれぞれPBS0.2 ml中で混合
後、その0.2 mlを１群５匹のC57BL/6の雌マウスに静脈
注射した。注射された混合物０．２ml中にはB16-BL6 細
胞が５×１０⁴個含まれていた。投与１４日後にマウス
の肺コロニー数を数えて対照のPBS投与群と比較し、転
移抑制率を以下の式により算出した。転移抑制率（％）=(1-(試料投与群の肺コロニー数／PBS
投与群の肺コロニー数))×100 結果を表３に示す。表３ ──────────────────────── 試料転移抑制率（範囲） ──────────────────────── 化合物１ 98% (100-93%) 化合物２ 77% (85-68%) 化合物３ 73% (88-66%) 化合物４ 65% (83-42%) 化合物５ 56% (67-44%) 化合物６ 88% (92-75%) 化合物７ 68% (83-51%) 化合物８ 47% (52-40%) 化合物９ 66% (73-38%) 化合物10 80% (91-70%) 化合物11 66% (78-53%) 化合物12 80% (89-66%) 化合物13-1 54% (64-27%) 化合物13-2 50% (86-16%) 化合物13-3 52% (82-23%) 化合物13-4 23% (42- 6%) 化合物14 50% (72-44%) 化合物15 68% (76-60%) 化合物16 73% (80-63%) 化合物17 56% (65-39%) 化合物18 49% (67-40%) 化合物19 51% (73-37%) 比較試料 RGDS(Arg-Gly-Asp-Ser) 8% (38-(-32)%) ────────────────────────

【００３４】また、本発明の化合物群をB16-BL 6細胞と
混合せずに、B16-BL 6細胞を投与した５分後にマウスに
静脈投与しても、やはり高い転移抑制効果が得られた。
この結果は、本発明の化合物を静脈注射等の適当な方法
で投与して、癌の転移抑制効果が得られることを示して
いる。尚、本発明の化合物群について、マウスを用いて
毒性試験を行ったところ、毒性は全く認められなかっ
た。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者駒澤宏幸神奈川県南足柄市中沼210番地富士写真フイルム株式会社内 (72)発明者済木育夫北海道札幌市厚別区厚別北３条西５丁目12 −６ (72)発明者東市郎北海道札幌市南区真駒内上町５丁目３−２

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】側鎖にアルギニン残基−グリシン残基−
アスパラギン酸残基からなるペプチド配列を有するカル
ボキシメチル化キチン誘導体またはその薬理学的に許容
される塩を有効成分として含有してなる癌転移抑制剤。
【請求項２】側鎖に、アミド結合、エステル結合、エ
ーテル結合、ウレタン結合のいずれかを介して下記一般
式［１］で表される接着性ペプチドが結合されたカルボ
キシメチル化キチン誘導体またはその薬理学的に許容さ
れる塩を有効成分として含有してなる請求項１記載の癌
転移抑制剤。［R¹］-［CO］-(［X］-Arg-Gly-Asp-［Y］)n-［Z］-［R²］［１］式中、Argはアルギニン、Glyはグリシン、Aspはアスパ
ラギン酸残基を示す。［］は［］内の基が存在して
もしなくてもよいことを表す。存在する場合、Ｘおよび
Ｙはそれぞれセリン(Ｓｅｒ)、グリシン（Ｇｌｙ）、バ
リン（Ｖａｌ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アスパラギ
ン酸（Ａｓｐ）、プロリン（Ｐｒｏ）から選択されるア
ミノ酸残基またはこれらのアミノ酸残基から構成される
ペプチド残基を示し、Ｚは−Ｏ−または−ＮＨ−を示
す。Ｒ¹、Ｒ²のいずれか一方は、水素、あるいは置換基
を有していてもよくまた不飽和結合を含んでいてもよ
い、炭素数が１〜９の直鎖もしくは分岐のアルキル基ま
たは炭素数が６〜９のアリール基を表し、他方は、置換
基を有していてもよくまた不飽和結合を含んでいてもよ
い、炭素数が１〜９の直鎖もしくは分岐のアルキレン基
または炭素数が６〜９のアリーレン基を表す。ｎは１〜
５の整数を示す。
【請求項３】分子量が約３，０００〜１００，０００
の範囲であるカルボキシメチル化キチン誘導体またはそ
の薬理学的に許容される塩を有効成分として含有してな
る請求項１または２記載の癌転移抑制剤。